Name: Adacık nakli için Mouse omentumun için bir yöntemi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 25 s
Description: Öğrenin diyabetik farelerde adacık nakli için omentum yöntemini. Hidrojel ile desteklenen bu teknik, tip 1 diyabet tedavisinde adacık fonksiyonunu artırarak yeni terapötik yaklaşımlar sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bazı yazarlar bu eserin kısmen ulusal anahtar R & D Çin programı (2017YFC1103704), Sanming proje tıp Shenzhen (SZSM201412020), yüksek düzey tıbbi disiplin inşaat, Shenzhen (2016031638) için fon gelen hibe tarafından desteklenen edildi Shenzhen Vakfı Bilim ve teknoloji (JCJY20160229204849975, GJHZ20170314171357556, JCYJ20160425110110658), Shenzhen Vakfı Sağlık ve aile planlaması Komisyonu (SZXJ2017021).

Bu çalışmada kullanılan tüm fareler tıbbi hayvan merkezi Guangdong eyaleti elde edilmiştir. Hayvanlar kullanımı hayvan refah ilkelerine uygun olarak etik İnceleme Komitesi, Shenzhen ikinci halk Hastanesi tarafından kabul edildi.
1. adacık nakli için omentumun
Not: Bu protokol gerçekleştirmek 2 kişilik gerektirir.
<ol><li>Tablo 1' de listelenen cerrahi malzemeleri bir araya getirin. Perdeler ve tek kullanımlık gibi steril malzemeler ile cerrahi alanındaki aseptik alan hazırlamak ve cerrahi aseptik koşullarını korumak. Tüm cerrahi aletler sterilize. Steril önlük giymek.</li>
	<li>Stereomicroscope altında 200 µL pipet ucu kullanarak adacıkları seç. Her fare 450-500 adacık eşdeğer (IEQ) tansplant ücret alacaksınız. Her hayvan için yeterli adacıkları tek nakli için CMRL-1066 orta 100 µL ile steril 1,5 mL ek-üst tüp içine koyun. Not: Adacıkları nakli günü izole, ama onları kurtarmaya yalıtım işlem için izin verecek bir gün önce yalıtmak daha iyi.</li>
	<li>Buzda adacıkları ile ek alıcı tüpler nakli için hazır kadar tutun.</li>
	<li>Membran matris hidrojel çözülme ve -20 ° C dondurucudan çıkardıktan sonra buz üzerinde tutun. Hidrojel sıvı 4 ° c ile 10 ° C ve daha yüksek sıcaklıklarda katılaşır.</li>
	<li>Tartmak ve tüm diyabetik alıcı fare etiket. 60 mg/kg Fentobarbital sodyum intraperitoneally enjekte et. Test bir ayak çimdik yönetmek anestezi derinliği. Bir ek 10 mg/kg Fentobarbital sodyum hayvan için çimdik tepki vermek. Eğer hiçbir anestezi ameliyat için doğru seviyesidir refleks, geri çekilin.</li>
	<li>% 70 etanol kullanarak Karin cerrahi ücreti temizle. Saç sitesinden bir razer bıçak ile tıraş ve Iodophor ile alanı dezenfekte. Veteriner merhem kuruluk anestezi iken altında önlemek için gözlere yönetmek.</li>
	<li>Oftalmik makas sol tarafa bağırsak karın orta çizgi boyunca karın bir kesi 4-5 cm. hareket ile açmak için kullanın ve cerrahisi prosedürü sırasında aşırı su kaybı önlemek için tuz batırılmış gazlı bezle kapak.</li>
	<li>Pamuk temizleme bezi tam olarak görme alanı mide ortaya çıkarmak ve (mide yer alan) omentumun bulmak için kullanın. Omentumun distend için iyi forseps iki çift kullanın. Yırtılma gelen hasarı önlemek için dikkat ediniz.</li>
	<li>Hidrojel tamamen bu noktada çözdürülen. 30 adacıkları ile tüp spin 200 g ve Kaldır süpernatant x s. Hidrojel 50 µL Aspire edin, adacıkları içeren tüp ekleyin ve karışımı yavaşça kabarcıklar oluşumunu önleme resuspend. Buz üzerine boruları işlem sırasında tutmak.</li>
	<li>Forseps iki çift omentumun kenarları al ve yavaşça bir oluk adacık nakli ile sıvı hacmi çok küçük kapasiteli bağırsak ve mide duvar arasında forma yükseltmek için kullanın.</li>
	<li>İkinci kişi yordamda yardımcı olmak ve resuspended adacık-hidrojel karışımı (tüp tüm içeriğini) 200 µL pipet ucu ile Aspire, oluk içine içeriği teslim izin.</li>
	<li>Karışım iyi oluk içine yavaşça yükselterek veya omentumun kenarlarını düşürücü konumlandırıldığından emin olun. Tam karışımı hidrojel önce 3 dakika içinde konumlandırma vücut ısısı bir etkisi olarak dönüşür. Hidrojel kurmasından sonra omentumun greft kapsayacak şekilde katlayın. Not: hidrojel katılaşır gibi omentumun çevreleyen gastrik duvar için uygun olacaktır.</li>
	<li>Sonra hidrojel tamamen katılaşmış, pamuk temizleme bezi bağırsak nakli sitenin dokunmak dikkat çekici geri karın boşluğuna, yeniden konumlandırmak için kullanın.</li>
	<li>Sefalosporin 20 µL ekleyin (5 ~ 10 mg) enfeksiyonu önlemek için karın boşluğuna sonra 4-0 dikiş karın kapatmak için kullanın.</li>
	<li>Fareyi onun kafes dönmek ve her fare alıcı için tüm adımları yineleyin. Fareler sıcak tutmak ve onlar tamamen sternal recumbency korumak için yeterli kendine gelmek kadar görsel olarak izleme. Tamamen iyileştin mi kadar fareler diğer hayvanlardan ayrı tutun.</li>
	<li>50 µL sülfadiyazin sodyum (0,05 mg/mL) ameliyat sonrası profilaksi olarak bir hafta boyunca her gün enjekte. Yönetmek bölgelerelidokain + buprenorfin, yani uygulamak 1-3 damla % 0.25 bölgelerelidokain topikal önce yerleştirme yara klip kesi yerinde. Yönetmek Buprenorphine(0.03 mg/ml with sterile 0.9% saline, 0.05-0.10 mg/kg) mayi (IP) yolu ile.</li>
	<li>Sigara açlık kan şekeri düzeyini bir kan şekeri ölçüm cihazı kullanarak kuyruk-damar kan örneği üzerinden ölçmek nakilden sonra günde bir kez. Omentumun için dikim zaman adacık nakli gecikmiş bir işlevi vardır ve tamamen normal kan şekeri düzeyi 2-3 hafta boyunca ulaşamadığı.</li>
	<li>Histoloji için omental greft nakli sonrasında deney sonunda fare kaldırın. Histolojik protokolleri göre doku düzeltmek. Greft immunostaining veya ayirt çalışmaları için analiz edilebilir.</li>
</ol>2. alternatif yöntem nakli için omentumun için
Not: oda sıcaklığında kullanılan bir alternatif fibrin-Trombin hidrojel membran matris hidrojel için yerine olabilir. 2 bileşenlerden bir fibrin mühürleyen protein çözüm (50 U/mL Trombin ve 10 mg/mL Fibrinojen) oluşur. Bileşenler karışık zaman onlar adacıkları yerinde tutan bir kan pıhtısı oluşturur.
<ol><li>Fibrin thombin hidrojel bileşik oda sıcaklığında kullanın. Adım 1.2 olduğu gibi her fare nakli başına 450-500 adacık eşdeğerleri (IEQ) alacaksınız. CMRL-1066 orta 100 µL ile steril 1,5 mL ek-üst tüp adacıkları yerleştirin. Hemen 10 cm uzunluğunda için steril bir PE50 boru içine adacıkları nakli önce Aspire ve yavaşça santrifüj kapasitesi (30 s 200 x g) gevşek Pelet oluşturmak için.</li>
	<li>Hayvan yayılmış omentumun ile (adımları 1.5-1.8) belirtildiği gibi hazırlayın. Hidrojel bileşenleri (10 µL/her) mix ve omentumun yerleştirin. (Şekil 3D)</li>
	<li>Hemen adacıkları boru hidrojel üzerine gelen sınırdışı. Hidrojel adacıkları etrafında pıhtı oluşturur. (Şekil 3E)</li>
	<li>Omentumun hidrojel ve bir kese şeklinde adacıkları üzerinde kat. (Şekil 3F) 1,13 1,18 adımlara devam edin.</li>
</ol>

<ol><li>Guariguata, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+estimates+of+diabetes+prevalence+for+2013+and+projections+for+2035%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes+research+and+clinical+practice%22%5BJournal%5D)">Global estimates of diabetes prevalence for 2013 and projections for 2035.</a> Diabetes research and clinical practice. 103 (2), 137-149 (2014).</li>
<li>Bellin, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potent+Induction+Immunotherapy+Promotes+Long-Term+Insulin+Independence+After+Islet+Transplantation+in+Type+1+Diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Potent Induction Immunotherapy Promotes Long-Term Insulin Independence After Islet Transplantation in Type 1 Diabetes.</a> American Journal of Transplantation. 12 (6), 1576-1583 (2012).</li>
<li>Moberg, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+tissue+factor+by+pancreatic+islet+cells+as+a+trigger+of+detrimental+thrombotic+reactions+in+clinical+islet+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22The+lancet%22%5BJournal%5D)">Production of tissue factor by pancreatic islet cells as a trigger of detrimental thrombotic reactions in clinical islet transplantation.</a> The lancet. 360 (9350), 2039-2045 (2002).</li>
<li>Nilsson, B., Ekdahl, K. N., Korsgren, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Control+of+instant+blood-mediated+inflammatory+reaction+to+improve+islets+of+Langerhans+engraftment%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Organ+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Control of instant blood-mediated inflammatory reaction to improve islets of Langerhans engraftment.</a> Current Opinion in Organ Transplantation. 16 (6), 620-626 (2011).</li>
<li>Bellin, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Similar+islet+function+in+islet+allotransplant+and+autotransplant+recipients%2C+despite+lower+islet+mass+in+autotransplants%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Similar islet function in islet allotransplant and autotransplant recipients, despite lower islet mass in autotransplants.</a> Transplantation. 91 (3), 367-372 (2011).</li>
<li>Bruni, A., Gala-Lopez, B., Pepper, A. R., Abualhassan, N. S., Shapiro, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Islet+cell+transplantation+for+the+treatment+of+type+1+diabetes%3A+recent+advances+and+future+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%2C+metabolic+syndrome+and+obesity%3A+targets+and+therapy%22%5BJournal%5D)">Islet cell transplantation for the treatment of type 1 diabetes: recent advances and future challenges.</a> Diabetes, metabolic syndrome and obesity: targets and therapy. 7, 211(2014).</li>
<li>Shapiro, A. J., Pokrywczynska, M., Ricordi, C. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/27834384">Clinical pancreatic islet transplantation.</a> Nature reviews Endocrinology. 13 (5), 268-277 (2017).</li>
<li>Cantarelli, E., Piemonti, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alternative+transplantation+sites+for+pancreatic+islet+grafts%5BTitle%5D)+AND+%22Current+diabetes+reports%22%5BJournal%5D)">Alternative transplantation sites for pancreatic islet grafts.</a> Current diabetes reports. 11 (5), 364(2011).</li>
<li>Cantarelli, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+animal+models+for+preclinical+islet+transplantation%3A+no+model+fits+all+%28research+purposes%29%5BTitle%5D)+AND+%22Islets%22%5BJournal%5D)">Murine animal models for preclinical islet transplantation: no model fits all (research purposes).</a> Islets. 5 (2), 79-86 (2013).</li>
<li>Beli, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Erratum+to%3A+CX3CR1+deficiency+accelerates+the+development+of+retinopathy+in+a+rodent+model+of+type+1+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Med+%28Berl%29%22%5BJournal%5D)">Erratum to: CX3CR1 deficiency accelerates the development of retinopathy in a rodent model of type 1 diabetes.</a> J Mol Med (Berl). 95 (5), 565-566 (2017).</li>
<li>Hafner, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regional+Patterns+of+Retinal+Oxygen+Saturation+and+Microvascular+Hemodynamic+Parameters+Preceding+Retinopathy+in+Patients+With+Type+II+Diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Regional Patterns of Retinal Oxygen Saturation and Microvascular Hemodynamic Parameters Preceding Retinopathy in Patients With Type II Diabetes.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 58 (12), 5541-5547 (2017).</li>
<li>Schmidt, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pancreatic+islets+find+a+new+transplant+home+in+the+omentum%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Pancreatic islets find a new transplant home in the omentum.</a> Nature Biotechnology. 35 (1), 82017(2017).</li>
<li>Voigt, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevalence+and+Progression+Rate+of+Diabetic+Retinopathy+in+Type+2+Diabetes+Patients+in+Correlation+with+the+Duration+of+Diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Clin+Endocrinol+Diabetes%22%5BJournal%5D)">Prevalence and Progression Rate of Diabetic Retinopathy in Type 2 Diabetes Patients in Correlation with the Duration of Diabetes.</a> Exp Clin Endocrinol Diabetes. , (2017).</li>
<li>Baidal, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioengineering+of+an+Intraabdominal+Endocrine+Pancreas%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Bioengineering of an Intraabdominal Endocrine Pancreas.</a> New England Journal of Medicine. 376 (19), 1887-1889 (2017).</li>
<li>Espes, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+restoration+of+vascularity+and+oxygenation+in+mouse+and+human+islets+transplanted+to+omentum+may+contribute+to+their+superior+function+compared+to+intraportally+transplanted+islets%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Rapid restoration of vascularity and oxygenation in mouse and human islets transplanted to omentum may contribute to their superior function compared to intraportally transplanted islets.</a> American Journal of Transplantation. , (2016).</li>
<li>Berman, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioengineering+the+endocrine+pancreas%3A+intraomental+islet+transplantation+within+a+biologic+resorbable+scaffold%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Bioengineering the endocrine pancreas: intraomental islet transplantation within a biologic resorbable scaffold.</a> Diabetes. 65 (5), 1350-1361 (2016).</li>
<li>Delaune, V., Berney, T., Lacotte, S., Toso, C. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28109023">Intraportal islet transplantation: the impact of the liver micro-environment.</a> Transplant International. 30 (3), 227-238 (2017).</li>
<li>Espes, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+restoration+of+vascularity+and+oxygenation+in+mouse+and+human+islets+transplanted+to+omentum+may+contribute+to+their+superior+function+compared+to+intraportally+transplanted+islets%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Rapid restoration of vascularity and oxygenation in mouse and human islets transplanted to omentum may contribute to their superior function compared to intraportally transplanted islets.</a> American Journal of Transplantation. 16 (11), 3246-3254 (2016).</li>
<li>Hajizadeh-Saffar, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inducible+VEGF+expression+by+human+embryonic+stem+cell-derived+mesenchymal+stromal+cells+reduces+the+minimal+islet+mass+required+to+reverse+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Inducible VEGF expression by human embryonic stem cell-derived mesenchymal stromal cells reduces the minimal islet mass required to reverse diabetes.</a> Scientific Reports. 5, (2015).</li>
</ol>

Yazarlar hiçbir çıkar çatışmaları rapor.

Portal ven yoluyla karaciğere adacık nakli en yaygın olarak kullanılan yöntem adacık nakli, insanlarda, ama hala portal ven trombozu ve karaciğer yağlanma17gibi verimlilik ve güvenlik endişeleri vardır. Son araştırmalar, omentumun karaciğer ama önce klinik çeviri12,14,18,19yapılacak daha fazla araştırma ihtiyacı için uygun bir alternatif olabilir göstermektedir.
<p c...

Uluslararası Diyabet Federasyonu (IDF) göre diyabet Şu anda 592 milyon kişi 20351tarafından öngörülen bir artış ile 382 milyon insanı etkiliyor. Her iki allojeneik ve xenogeneic adacık nakli sistemik immünsupresif tedavi gereklidir. İmmünosupresyon bağışıklık ret greft kaybı2önemli bir nedenidir. Transplante adacık kaybı nedeniyle anında kan aracılı inflamatuar reaksiyon (IBMIR)3,4önemli bir sorun da vardır. Ancak, syngeneic olduğu gibi böyle bir bağışıklık yanıtı yokluğunda bile veya auto-nakli modelleri, adacık hücreleri karaciğer portal ven yoluyla içine nakledilen iltihap nedeniyle ve/veya zayıf kan gibi olumsuz çevre koşulları için kayıp düşük oksijen ve/veya besin5,6ile sağlayın. Sonuç olarak, uzun vadeli metabolik işlevi sağlamak için adacık numaraları daha büyük engraftment7azaltır ilk hücre kaybı için telafi etmek gereklidir.
Adacık engraftment optimize etmek için bir girişim, birkaç alternatif anatomik sitesi deneysel olarak araştırılması gibi klinik olarak, yapılan umut verici ile henüz değil kesin görüntülenen8. Bazı alternatif siteleri kolay ve güvenli erişim sunan ise (Örneğin., cilt, böbrek kapsülü, gastrik submukoza ve gözün ön odası) veya daha büyük adacık kitleler için daha geniş bir yüzey (e.g., periton boşluğu), hayatta kalma ve fizyolojik transplante adacıklar metabolik performans ve hala sınırlı bir endişe9kalır. Adacık engraftment için daha uygun bir site için arama devam ediyor.
Omentumun adacık nakli erken gelişme araştırıldı ve başarılı bir ortam adacıkları10,11,12,13kanıtlamış birçok anatomik siteler arasında yapıldı, 14. Ancak, intraportal adacık infüzyon klinik seçim nedeniyle kısmen yordamı göreli kolaylığı oldu ve6hayvan erken başarı modelleri. Ayrıca, kısmen, negatifleri ilişkili ile bu site, özellikle büyük erken adacık kaybı vardı daha az anlaşılan ve daha az alan olarak deneysel adacık nakli ilk günlerinde sınırlama olgunlaştı. Damar içi adacık infüzyon uzakta olduğunu belirten daha yeni zorlayıcı kanıtlarla omentumun yeniden ortaya çıkan hücre transplantasyonu için potansiyel olarak değerli bir site olarak idealdir.
Omentumun (omental bir kese şeklinde) karaciğer15,16göreli avantaj sunar. İyi bozukluklarına ve kolayca erişilebilir. Greft (gerekirse) ve/veya biyopsi alınmasını sağlar. Tarafından adacıkları deneyimli iskemik dönem karaciğer ile karşılaştırıldığında azalır ve omentumun nispeten intraportally, bir artış nerede portal basınç mümkün değil büyük adacık kitleler komplikasyonlara neden olabilir kabul edebilir.
Bir syngeneic fare modeli nakli C57BL/6 erkek fareler arasında 6 – 8 haftalık 20-25 g. adacık alıcılar ile streptozotocin tek bir enjeksiyon 250 doz ile diyabetik hale vücut ağırlığı ile istihdam çalışmada test protokolü kullanıldı mg/kg IP. Kan şekeri düzeyini fare enjeksiyon sonra 24 mmol / M 48 h büyüktür ve bu düzeyi en az 5 gün için yukarıda hala diyabet indüksiyon başarılı kabul edilebilir.
Syngeneic adacıkları yaş eşlemeli bağış bazı değişikliklerle daha önce yayımlanmış yöntemleri takip pankreas dan izole edildi. Kısacası, collagenase safra kesesi safra kanalını yerine içine enjekte ettiler. Bu enjeksiyon kolaylığı kolaylaştırmak için bir gelişme yapıldı. Collagenase infüzyon kuluçka, doku bozulması, yoğunluk gradient ayırma tarafından izlenen ve el-toplama saf adacıkları elde etmek için. Adacıkları gecede ile % 10 ısı inaktive fetal Sığır serum (FBS) 37 ° C'de T175 şişeler içinde küçük takıma CMRL-1066 ortamda kültürlü % 95 hava - %5 CO2 nakli önce.

<table><tbody><tr><td><güçlü > Ekipman< / güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>5 inç (12-13 cm) Makas</td><td>RWD Life Science&nbsp;</td><td>S12030-11</td><td></td></tr><tr><td>İnce Forseps</td><td>RWD Yaşam Bilimleri</td><td>F11010-13</td><td></td></tr><tr><td>Küçük yara klipsleri</td><td>RWD Yaşam Bilimleri</td><td>R33003-01</td><td></td></tr><tr><td>Acutenaculum</td><td>RWD Yaşam Bilimleri</td><td>F31044-13</td><td></td></tr><tr><td>2 çift doku forseps</td><td>RWD Yaşam Bilimi</td><td>&nbsp; F13023-10</td><td></td></tr><tr><td>4-0 İğneli sütür</td><td>Chenghe, Çin</td><td>17094</td><td></td></tr><tr><td>200 & mu; L Pipet ve uçlar</td><td>Gilson</td><td>PN11</td><td></td></tr><tr><td>Tek Dokunuşla ultra kolay Temel kan şekeri izleme sistemi&nbsp; &nbsp;</td><td>Johnson & Johnson</td><td>33391713</td><td></td></tr><tr><td>tıraş bıçağı</td><td>Philips</td><td>HC1099/15</td><td></td></tr><tr><td><güçlü>Malzeme ve hayvanlar</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pentobarbital Sodyum</td><td>Sigmaaldrich.com</td><td>P3761</td><td>Anestezi için&nbsp;</td></tr><tr><td>Hidrojel&nbsp;</td><td>bdbiosciences.com</td><td>356234</td><td>Bazal Membran Matriks</td></tr><tr><td>Fibrin-Trombin Hidrojel&nbsp;</td><td>Baxter.com</td><td>1501250</td><td>Bileşenler karıştırıldığında pıhtılaşır</td></tr><tr><td>%70 Etanol</td><td>Yingniu medikal, Anhui, Çin</td><td>23170608</td><td></td></tr><tr><td>Iodophor</td><td>Lierkang tıbbi teknolojisi, Shangdong, Çin</td><td>170521</td><td></td></tr><tr><td>Normal salin</td><td>Baxter.com</td><td>2B1324</td><td></td></tr><tr><td>Sefalosporin</td><td>Lukang tıbbi, Shangdong, Çin</td><td>150303</td><td></td></tr><tr><td>Sefazolin</td><td>Baxter.com</td><td>2G3508</td><td></td></tr><tr><td>kayganlaştırıcı göz merhemi</td><td></td> Streptozotosin <td>203964 Sigmaaldrich.com</td> S0130 kollajenaz Tip V Sigmaaldrich.com <td></td></tr><tr><td></td><td></td><td>C9262</td><td></td></tr><tr><td>CMRL-1066 medya</td><td>celltrans, Wenzhou, Çin</td><td>X018D1</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td> histokça Sigmaaldrich.com 10771 <td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td>yoğunluk gradyanı</td></tr><tr><td>PE50 boru</td><td>Braintreesci.com</td><td>PE50 100 FT</td><td>Polietilen .023 "x .038</td></tr><tr><td>Calcein</td><td>Sigmaaldrich.com</td><td>C1359</td><td></td></tr><tr><td>Propidium iyodür</td><td>Sigmaaldrich.com</td><td>P4864</td><td></td></tr><tr><td>optimum kesme sıcaklığı bileşiği (OCT)</td> <td>Tissue-Tek; Miles, Naperville, IL</td><td>4583</td><td>gömme orta</td></tr><tr><td>insülin antikoru</td><td>Hücre Sinyal Teknolojisi, Danvers, MA 01923</td><td>8138S</td><td></td></tr><tr><td>hematoksilen boyama ortamı</td><td>Hücre Sinyalizasyon Teknolojisi, Danvers, MA 01923</td><td>14166S</td><td></td></tr><tr><td>eozin boyama ortamı</td><td>Beyotime Biotech, Çin</td><td>C0109</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Thermo Fisher Scientific Inc.&nbsp;</td><td>D1306</td><td></td></tr><tr><td>C57Bl / 6</td><td>Guangdong Eyaleti Fare Tıbbi Hayvan Merkezi</td> <td>/</td><td></td></tr> <tr><td>Fetal Sığır Serumu</td><td>GE Sağlık Yaşam Bilimleri</td><td>SH30084</td><td></td></tr><tr><td>T175 şişeleri</td><td>Falcon</td><td>353112</td><td></td></tr><tr><td>1.5 mL Geçmeli tüpler</td><td>Axygen</td><td>MCT-150-C</td><td></td></tr></tbody></table>

adacık nakli için mouse omentumun için bir yöntemi

A Method for Islet Transplantation to the Omentum in Mouse

Adacık nakli tip 1 diyabet için potansiyel bir tedavi olmak için teklif edildi. Son esaslı bir kanıt bulmadığınız intravasküler adacık infüzyon ideal çok uzak olduğunu gösterir ve bu nedenle, omentumun yeniden ortaya çıkan adacık nakli için potansiyel olarak değerli bir site olarak. Bu deney yalıtım kaliteli adacıkları ve diyabetik alıcılara adacıkları implantasyonu gerektirir. Nakli için omentumun daha iyi görsel olarak göstermiş olabilir cerrahi adımları gerektirir. Burada, bu yordam için ayrıntılı adımlar sunulmaktadır. Karışımı diyabetik farelerin kese omental yerleştirmeden önce hidrojel ile izole adacıkları karıştırma için iki yöntem burada açıklanmıştır. Farklı hydrogels farklı koşulları için kullanılır. Kan şekeri düzeyleri diyabetik fare alıcıların omentumun syngeneic adacıklar 35 gün için takip. Bazı hayvanlar IMMUNO-histochemical analizi yapmak için 14 gün sonra kurban edildi. Bu önceden klinik nakli yaklaşım klinik nakli için çeviri kadar önde gelen ön veriler olarak kullanılabilir.

Pankreas Post-digestive durumunu Şekil 1Aile gösterilir. Arıtılmış adacıkları Şekil 1Badımında gösterilir. Dithizone boyama ve canlılığı adacıkları test Şekil 2' de gösterilmiştir. Adacık nakli ana adımları omentumun için Şekil 3' te gösterilmektedir. Kan şekeri düzeyleri alıcılarının omental nakli sonra Şekil 4' te gösterilmiştir. Greft his...

Bir mouse adacıkları omental nakli için bir yöntem tanıttı. İzole adacıkları hidrojel ile karıştırılır ve karışımı bir diyabetik fare omental kese yerleştirilir. Daha sonra kan şekeri izlenir ve IMMUNO-histochemical çözümleme yapılır.

Adacık nakli için Mouse omentumun için bir yöntemi

Islet transplantation has been proposed to be a potential treatment for type 1 diabetes. Recent compelling evidence indicates that intravascular islet ...

Bu yöntem, omentuma adacık nakli gibi adacık transplantasyonu alanında anahtar soruların cevapılmasına yardımcı olabilir. Omentum adacık transplantasyonu için potansiyel bir değer alanı olarak yeniden ortaya çıktığı için bu tekniğin etkileri tip I diyabet tedavisine kadar uzanır. Bu tekniğin en büyük avantajı izole izaletlerin hidrojel ile karıştırılması ve karışımın diyabetik farenin omentum kesesine yerleştirilmesidir.Perde ve tek kullanımlık gibi steril malzeme ile cerrahi alanda bir aseptik alan hazırlayarak başlayın. Sterilize cerrahi aletleri aseptik alana yerleştirin. 200 mikrolitrelik pipet ucu kullanarak stereo-mikroskop altında donör adacıkları seçin.Her hayvan için 450 ila 500 adacık toplayın ve 100 mikrolitre CMRL 10 66 orta ile steril 1,5 mililitrelik bir üst tüpe aktarın. Tüpü nakle hazır olana kadar buza yerleştirin. Adacıklar hasat edildikten sonra, buz üzerinde bodrum membran matris hidrogel çözülür.Tüm diyabetik alıcı fareleri tartın ve etiketle. Kurumsal olarak onaylanmış bir protokole göre ilk fareyi anestezi ettikten sonra, bir ayak ucutu uygulayarak anestezinin derinliğini test edin. Çekilme refleksi yoksa ameliyat için anestezi düzeyi doğrudur.Anestezi altında kuruluk önlemek için gözlere veteriner merhem uygulayın. Karın karınını %70 etanolle temizle. Sonra ameliyat yerinden saç tıraş.Steril bir perde ile hayvan kapağı ve bir iyot scrub ile alanı dezenfekte. Karın orta hattı boyunca 4-5 santimetre lik bir kesi oluşturmak için oftalmik makas kullandıktan sonra, sol tarafa bağırsakları hareket ettirin ve ameliyat sırasında dehidratasyon önlemek için tuzlu gazlı bez ile kaplayın. Sonra tam mide maruz bırakmak ve mide nin altında omentum bulmak için pamuklu bezler kullanın.Bu noktada, hidrojel tamamen çözülmüş olmalıdır. Adacıkları içeren tüpü 200 kez g'de 30 saniye döndürün. Döndükten sonra, supernatant çıkarın.Sonra hidrojel 50 mikrolitre aspire adacıklar içeren tüp ekleyin ve yavaşça kabarcıkların oluşumunu kaçınarak karıştırın. Sonraki omentum kenarları almak ve yavaşça mide duvarı ve bağırsaklar arasında bir oluk oluşturmak için yükseltmek için forseps iki çift kullanın. Ameliyatın bu noktasında, 200 mikrolitrelik pipet ucu ile yeniden askıda adacık hidrojel karışımı aspire etmek ve oluk içine teslim etmek için ikinci bir kişi gereklidir.Karışımın omentumun kenarlarını hafifçe yükselterek veya alçaltarak olukta iyi konumlandırdığından emin olun. Hidrojel katılaşmadan önce karışımın konumlandırılma larını üç dakika içinde tamamlayın. Hidrojel setleri sonra, greft kapsayacak şekilde omentum katlayın.Hidrojel katılarken omentum çevredeki mide duvarına yapışır. Hidrojel tamamen katılaştırıldığında, karın boşluğundaki bağırsakları yeniden konumlandırmak için pamuklu bezler kullanın ve nakil bölgesine dokunmamaya özen tinler. Sonraki enfeksiyonu önlemek için karın boşluğuna uygun bir antibiyotik 200 mikrolitre dağıtmak.Sonra karın kapatmak için 4 O sütükullanın. Farelerde omentum siteleri küçük ve değerlendirmek için yorucu olduğu için genellikle bu yönteme yeni bireyler mücadele edecek. Fareyi harici recumbency tamamen kazanana kadar ısıtılmış bir kurtarma kafesi içine yerleştirin.Ertesi gün ve ondan sonraki her gün bir hafta boyunca, ameliyat sonrası profilaksi olarak antibiyotik enjekte edin. Ayrıca, nakilden sonra günde bir kez kan şekeri ölçer kullanarak kuyruk damar kan örneğinden açlık sızma kan şekeri seviyesini ölçün. Omentuma nakledilirken, adacık greftinin gecikmiş bir işlevi olabilir ve 2-3 hafta boyunca tamamen normal kan şekeri seviyesine ulaşamayabilir.Greftli doku nakilden 14 gün sonra ötenazi lifareden alındı. Burada greft DAPI boyama sonra çekirdekleri kümesi olarak görülebilir. Aşılı dokunun işlevselliği anti-insülin antikorları ile boyama immünoresans ile ortaya çıkar.H&E boyama omentum adipositler ile çevrili aşılı dokuları gösterir. Bir kez hakim, bu teknik düzgün yapılırsa bir saat içinde yapılabilir. Bu yordamı çalışırken, çok fare omentum kırılgan olduğunu hatırlamak önemlidir.Bu prosedürü takiben, farklı liselerde kullanılan gibi diğer yöntemler, vascuolization ve performans adacık yayılması gibi belirli sorulara cevap verecek tüm MB performans. Bu gelişmeden sonra, bu teknik, araştırmacıların birden fazla alıntıda tip I diyabet tedavisini keşfetmelerinin ve transplantasyonlarının önünü açmıştır. Bu videoyu izledikten sonra, fare omentum adacıklar nakli için iyi bir anlayışa sahip olmalıdır.

a-method-for-islet-transplantation-to-the-omentum-in-mouse

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Protokolü, temiz ve kolay bir adacık veya hücreleri farelerin böbrek kapsülü altında sunmak için geliştirildi. Hücreler, böbrek kapsül altında hücrelerinin nakli için kullanılan son tüp pelet içine yoğunlaşmıştır. Bu tekniğin kolaylığı hücreleri ve fare stresi azaltır.

Diyabetik Fare Böbrek Kapsül içine, Pankreas Islets Nakli

Izole adacık transplantasyonu tip 1 şeker hastalığı için potansiyel bir tedavi olarak öne sürülmüştür. Burada, fare pancreata adacıkları izole, ve böbrek subkapsüler alan nakli için bir yöntem açıklanmaktadır.

Murin Islet İzolasyon ve subkapsüler Böbrek Nakli Bir Yöntem

Bu videoda, insan adacık greftlerinin in vivo olarak revaskülarizasyonunu izlemek için insan pankreas adacıklarının farenin gözünün ön odasına aşılanması protokolü açıklanmaktadır. Ayrıca, greftin kapsüllenmesini ve vaskülarizasyonunu teşvik etmede alıcı ve donör hücrelerin katkısının anlaşılmasına yardımcı olur.

Pankreas Adacıklarının Aşılanması: İn Vivo Görüntüleme için Pankreas Adacıklarını Fare Gözünün Ön Odasına İmplante Etme Yöntemi

Bu videoda, pankreas adacık hücrelerini hepatik portal ven içine infüze etmek için bir prosedürü ve ardından kanamayı başarılı bir şekilde önlemek için jel köpük uygulamasını açıklıyoruz. Postoperatif kanama, adacık nakli sırasında sık görülen yüksek mortalite nedenidir.

Adacık Transplantasyonunda Murin Modeli: Pankreas Adacıklarının Portal Ven İçine İnfüzyonu ve Postoperatif Kanamanın Önlenmesi İçin Cerrahi Bir Yöntem

Bu protokol, murine iz izolasyonunu ve bir desellularize iskele üzerine tohumlamayı gösterir. İskele destekli adacıklar streptozotosin (STZ) ile indüklenen diyabetik farelerin epididimal yağ yastığı içine nakledildi. Isletler nakil alanından kurtuldu ve hiperglisemik durumu tersine çevirdi.

Diyabetik Farenin Epididimal Yağ Tabağında Iskelelerin İskele Destekli Nakli

Pankreas adacık nakli normoglycemia tip 1 diyabet için bir yoludur. Bu makale nakli tekniği normal glikoz düzeyleri diyabetik farelerde korumak için intraportal rota üzerinden üzerinde duruluyor.

İntraportal fare modeli pankreas adacıkları nakli

Burada, bir protokol adacık nakli örnek tarafından resimli hidrojel tabanlı hücre tedavisinin içinde vivo doğrulama için mevcut. (hOMING) implantasyon doldurma h Omental matris adacık hücre hidrojel karışımı kan damarları engraftment uygun metabolik ortamında en üst düzeye çıkarmak için yakın omental katmanlar arasında implantasyonu sağlar.

İçi Omental adacık nakli kullanarak h Omental matris adacık doldurma (posta)

Bu protokolde inguinal subkutan beyaz yağ dokusuna murine adacık izolasyonu ve transplantasyon yöntemi tanımlanmıştır. İzole syngeneic murine adacıkları bir murine alıcı içine bir bodrum membran hidrojel kullanılarak nakledilir. Alıcıların kan şekeri düzeyi izlenir ve adacık greftlerinin histoloji analizi yapılır.

Inguinal Subkutan Beyaz Yağ Dokusu (ISWAT) Transplantasyon Modeli Murine Adacıkları

Bu yağ kaplı adacık nakli yöntemi, intraperitoneal boşlukta engrafe adacıkların tespiti için uygundur. Özellikle, biyobağlayıcı ajanların kullanılmasını veya dikiş atılmasını gerektirmez.

Epididim Beyaz Yağ Dokusu Kullanılarak Yağ Kaplı Adacık Nakli

Burada, farelerde klinik olarak ilgili ancak teknik olarak zorlayıcı bir cerrahi prosedür olan intraportal adacık transplantasyonunun başarılı bir şekilde gerçekleştirilmesi için rafine cerrahi prosedürler sunulmaktadır.

Farelerde İntrahepatik Adacık Transplantasyonu Sırasında İnfüzyon Sonrası Portal Ven Kanamasının En Aza İndirgenmesi

Bu protokolde, farelerde başarılı bir ortotopik karaciğer transplantasyonu (OLT) modelinin uygulanmasını tartışıyoruz. Ek olarak, bir farede başarılı OLT'den sonra allogreft açıklığını daha fazla analiz etmek için adjuvanlar, özellikle mikrobilgisayarlı tomografi (mikroBT) taramaları kullanılarak tartışılmaktadır.

Mikrobilgisayarlı Tomografi Anjiyografi Kullanan Farelerde Başarılı Ortotopik Karaciğer Nakli

Öğrenin diyabetik farelerde adacık nakli için omentum yöntemini. Hidrojel ile desteklenen bu teknik, tip 1 diyabet tedavisinde adacık fonksiyonunu artırarak yeni terapötik yaklaşımlar sunar.

Adacık nakli için Mouse omentumun için bir yöntemi

Daha fazla video keşfet