Adacık nakli için Mouse omentumun için bir yöntemi

Bu yöntem, omentuma adacık nakli gibi adacık transplantasyonu alanında anahtar soruların cevapılmasına yardımcı olabilir. Omentum adacık transplantasyonu için potansiyel bir değer alanı olarak yeniden ortaya çıktığı için bu tekniğin etkileri tip I diyabet tedavisine kadar uzanır. Bu tekniğin en büyük avantajı izole izaletlerin hidrojel ile karıştırılması ve karışımın diyabetik farenin omentum kesesine yerleştirilmesidir.

Perde ve tek kullanımlık gibi steril malzeme ile cerrahi alanda bir aseptik alan hazırlayarak başlayın. Sterilize cerrahi aletleri aseptik alana yerleştirin. 200 mikrolitrelik pipet ucu kullanarak stereo-mikroskop altında donör adacıkları seçin.

Her hayvan için 450 ila 500 adacık toplayın ve 100 mikrolitre CMRL 10 66 orta ile steril 1,5 mililitrelik bir üst tüpe aktarın. Tüpü nakle hazır olana kadar buza yerleştirin. Adacıklar hasat edildikten sonra, buz üzerinde bodrum membran matris hidrogel çözülür.

Tüm diyabetik alıcı fareleri tartın ve etiketle. Kurumsal olarak onaylanmış bir protokole göre ilk fareyi anestezi ettikten sonra, bir ayak ucutu uygulayarak anestezinin derinliğini test edin. Çekilme refleksi yoksa ameliyat için anestezi düzeyi doğrudur.

Anestezi altında kuruluk önlemek için gözlere veteriner merhem uygulayın. Karın karınını %70 etanolle temizle. Sonra ameliyat yerinden saç tıraş.

Steril bir perde ile hayvan kapağı ve bir iyot scrub ile alanı dezenfekte. Karın orta hattı boyunca 4-5 santimetre lik bir kesi oluşturmak için oftalmik makas kullandıktan sonra, sol tarafa bağırsakları hareket ettirin ve ameliyat sırasında dehidratasyon önlemek için tuzlu gazlı bez ile kaplayın. Sonra tam mide maruz bırakmak ve mide nin altında omentum bulmak için pamuklu bezler kullanın.

Bu noktada, hidrojel tamamen çözülmüş olmalıdır. Adacıkları içeren tüpü 200 kez g'de 30 saniye döndürün. Döndükten sonra, supernatant çıkarın.

Sonra hidrojel 50 mikrolitre aspire adacıklar içeren tüp ekleyin ve yavaşça kabarcıkların oluşumunu kaçınarak karıştırın. Sonraki omentum kenarları almak ve yavaşça mide duvarı ve bağırsaklar arasında bir oluk oluşturmak için yükseltmek için forseps iki çift kullanın. Ameliyatın bu noktasında, 200 mikrolitrelik pipet ucu ile yeniden askıda adacık hidrojel karışımı aspire etmek ve oluk içine teslim etmek için ikinci bir kişi gereklidir.

Karışımın omentumun kenarlarını hafifçe yükselterek veya alçaltarak olukta iyi konumlandırdığından emin olun. Hidrojel katılaşmadan önce karışımın konumlandırılma larını üç dakika içinde tamamlayın. Hidrojel setleri sonra, greft kapsayacak şekilde omentum katlayın.

Hidrojel katılarken omentum çevredeki mide duvarına yapışır. Hidrojel tamamen katılaştırıldığında, karın boşluğundaki bağırsakları yeniden konumlandırmak için pamuklu bezler kullanın ve nakil bölgesine dokunmamaya özen tinler. Sonraki enfeksiyonu önlemek için karın boşluğuna uygun bir antibiyotik 200 mikrolitre dağıtmak.

Sonra karın kapatmak için 4 O sütükullanın. Farelerde omentum siteleri küçük ve değerlendirmek için yorucu olduğu için genellikle bu yönteme yeni bireyler mücadele edecek. Fareyi harici recumbency tamamen kazanana kadar ısıtılmış bir kurtarma kafesi içine yerleştirin.

Ertesi gün ve ondan sonraki her gün bir hafta boyunca, ameliyat sonrası profilaksi olarak antibiyotik enjekte edin. Ayrıca, nakilden sonra günde bir kez kan şekeri ölçer kullanarak kuyruk damar kan örneğinden açlık sızma kan şekeri seviyesini ölçün. Omentuma nakledilirken, adacık greftinin gecikmiş bir işlevi olabilir ve 2-3 hafta boyunca tamamen normal kan şekeri seviyesine ulaşamayabilir.

Greftli doku nakilden 14 gün sonra ötenazi lifareden alındı. Burada greft DAPI boyama sonra çekirdekleri kümesi olarak görülebilir. Aşılı dokunun işlevselliği anti-insülin antikorları ile boyama immünoresans ile ortaya çıkar.

H&E boyama omentum adipositler ile çevrili aşılı dokuları gösterir. Bir kez hakim, bu teknik düzgün yapılırsa bir saat içinde yapılabilir. Bu yordamı çalışırken, çok fare omentum kırılgan olduğunu hatırlamak önemlidir.

Bu prosedürü takiben, farklı liselerde kullanılan gibi diğer yöntemler, vascuolization ve performans adacık yayılması gibi belirli sorulara cevap verecek tüm MB performans. Bu gelişmeden sonra, bu teknik, araştırmacıların birden fazla alıntıda tip I diyabet tedavisini keşfetmelerinin ve transplantasyonlarının önünü açmıştır. Bu videoyu izledikten sonra, fare omentum adacıklar nakli için iyi bir anlayışa sahip olmalıdır.