Name: Dil hücre dışı matriks ve dil Skuamöz Hücre Karsinomu Vitro sulandırma imalatı (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-06-20T12:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 15 s
Description: Keşfedin dil hücre dışı matriks hazırlama ve dil skuamöz hücre karsinomu için 3-D in vitro model oluşturma yöntemini. Mini biyoreaktör kullanımı ve dehülerizasyon teknikleriyle klinik tümör histopatolojisini taklit eden bu yaklaşım, oral kanser araştırmalarında değerli bir araç sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar, Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı Çin (31371390), devlet yüksek teknoloji geliştirme projesi (2014AA020702) programı ve programın Guangdong bilim ve teknoloji (2016B030231001) araştırma hibe destek kabul etmiş oluyorsunuz.

Tüm hayvan iş hayvan refahı Yasası, kurumsal yönergelere uygun olarak gerçekleştirilen ve kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi, Sun Yat-Sen'in Üniversitesi tarafından onaylanmıştır.
1. TEM hazırlanması
<ol><li>Fareler tarafından servikal çıkığı yürütmek ve steril cerrahi makas ve cımbız kullanarak dilleri kaldırın.</li>
	<li>Tongues yılında % 75 etanol 3 min için bırakın, sonra her dil bir 1,5 mL koymak Eppendorf (EP) tüp ile 1 mL 10 mM steril fosfat tamponlu çözüm (PBS). Not: PBS konsantrasyonu aşağıdaki adımlarda bu adımda konsantrasyon olarak aynıdır.</li>
	<li>Lizis donma çözülme tarafından hücre:-80 ° c için 1 h EP tüpler dilleri donma ve 3 kür için dilleri için 45 dakika oda sıcaklığında erimek.</li>
	<li>Cerrahi sütür cerrahi iğne kullanarak bir parça üzerine her dil yüklemek ve steril folyo küçük bir parça ile dikiş sonu sarın. % 75 etanol steril koşullarda içeren bir 3,5 cm veya 6 cm kültür tabağına işlemi. Not: Uygun da cerrahi sütür her parçası yaklaşık 20 cm uzunluğunda ve 0,3 cm2 hakkında (1 cm × 0,3 cm) folyo her parçasının uygun boyutudur. Dil folyo yüklü olmalıdır.</li>
	<li>Her dil 3 mL steril PBS ile 30 s. gerçekleştir steril koşullarda bu işlem için bir 3,5 cm veya 6 cm kültür tabak içinde yıkayın.</li>
	<li>Dilleri Ultrasaf Su ile yıkamak: ampicilin geniş ağız şişe içine steril Ultrasaf Su 250 mL ile 90 µg/mL nihai bir konsantrasyon için ekleyin. Dilleri içeren bir heyecan bar şişe içine koymak. Şişe kapağı şişe dışında kalan dikiş parçası ile sıkın. Bu işlemi steril koşullarda gerçekleştirmek. Not: en fazla 5 dilleri dikiş twining söz konusu aynı şişe içine koyabilirsiniz. Folyo şişe dil kapalı kaymasını önlemek için dikiş sonu altındadır. Dilleri şişe içinde kalan dikiş uzunluğunu ayarlayarak şişenin alttan 2 cm yüksekliğinde yerleştirilmelidir. Bu Not için adımları 1.8, 1.10, 1.12 ve 1,16 da.</li>
	<li>Manyetik karıştırıcı 12 h için şişe koymak.</li>
	<li>Dilleri NaCl ile yıkayın: ampicilin geniş ağız şişe içine steril 1 250 mL ile eklemek M NaCl 90 µg/mL nihai bir konsantrasyon için. Dilleri ve heyecan bar şişe içine taşıyın. Şişe kapağı şişe dışında kalan dikiş parçası ile sıkın. Bu işlemi steril koşullarda gerçekleştirmek.</li>
	<li>Manyetik karıştırıcı 24 h için şişe koymak.</li>
	<li>Hücre lizis Triton X-100 tarafından: 90 µg/mL 250 mL steril % 2 ile son bir konsantrasyon geniş ağız şişe içine ampicilin eklemek PBS Triton X-100. Dilleri ve heyecan bar şişe içine taşıyın. Şişe kapağı şişe dışında kalan dikiş parçası ile sıkın. Bu işlemi steril koşullarda gerçekleştirmek.</li>
	<li>Manyetik karıştırıcı 48 h için şişe koymak.</li>
	<li>Dilleri CaCl2/MgCl2yıkama: ampicilin geniş ağız şişe içine steril 5 mM CaCl2/MgCl2 250 mL ile 90 µg/mL nihai bir konsantrasyon için ekleyin. Dilleri ve heyecan bar şişe içine taşıyın. Şişe kapağı şişe dışında kalan dikiş parçası ile sıkın. Bu işlemi steril koşullarda gerçekleştirmek.</li>
	<li>Manyetik karıştırıcı 24 h için şişe koymak.</li>
	<li>DNaz tarafından sindirim: Hank'in 1 mL dengeli tuz solüsyonu (HBSS) her EP tüp için ekleyin. DNaz HBSS sırasıyla 300 son bir konsantrasyon için eklemek µM. taşımak her dil tüp dışında dikiş parçası ile her EP tüpün içine. Bu işlemi steril koşullarda gerçekleştirmek. Not: yukarıdaki adımı şişelerde içinde kalır dikiş parçası da bu adımda EP tüp içinde kalır emin olun ve önceki adımları şişelerde dışında kalır dikiş parçası da bu adımda EP tüp dışında kalır emin olun.</li>
	<li>EP tüpler için 24 h 37 ° C'de dilleri kuluçkaya.</li>
	<li>Dilleri PBS ile yıkayın: ampicilin geniş ağız şişe içine steril PBS 250 mL ile 90 µg/mL nihai bir konsantrasyon için ekleyin. Dilleri ve heyecan bar şişe içine taşıyın. Şişe kapağı şişe dışında kalan dikiş parçası ile sıkın. Bu işlemi steril koşullarda gerçekleştirmek.</li>
	<li>Manyetik karıştırıcı 24 h için şişe koymak.</li>
	<li>Hazırlanan TEM 4 ° C'de steril PBS kadar kullanmak saklayın.</li>
</ol>2. TSCC üç boyutlu (3D) sulandırma
<ol><li>
Statik TSCC modeli İnşaat
	<ol>
<li>Tohum 1.0 x 106 tek TSCC hücreler (Cal27) 3.5 cm kültür çanak içine. Dulbecco'nın 3 mL kartal orta/F12 (DF12) içeren % 10 fetal Sığır serum (FBS), 90 µg/mL ampicilin ve 90 µg/mL sefaloridin modifiye ekleyin.</li>
		<li>Cal27 hücreleri 37 ° C'de 2-3 gün için kültür. Hücreleri en az % 60 cover emin olun alan çanak alt.</li>
		<li>TEM Cal27 monolayer kültür tabağına üzerine yükleyin.</li>
		<li>Çanak 28 gün boyunca bir CO2 kuluçka 37 ° C'de koyun.</li>
		<li>Kültür Orta hücre kültür işlemi sırasında her gün yenileyin. Kuluçka CO2 konsantrasyonu % 5 var.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Karıştırılmış TSCC modeli İnşaat
	<ol>
<li>
Kendi yaptığınız karıştırılmış minibioreactor hazırlanması
		<ol>
<li>Dalgıç 10 mL şırınga dan çıkar.</li>
			<li>Çubuk daha düşük terminal bir delik (1 cm çapında) kazmak ve delik bir heyecan bar yük.</li>
			<li>Bir delik (çapı 0.5 cm) geniş ağız şişe Plastik şişe kapağı merkezinde kazmak ve piston kolu ile kap koymak.</li>
			<li>50 mL santrifüj tüpü yarısı kesilmiş ve şişe kapağı dış tarafında kaynak.</li>
			<li>Eşyaları için çubuk çubuk eşyaları için bağlı balıkçılık satırlar ile sarma tarafından iliştirin. Not: en fazla 4 eşyaları bir çubuk için eklenebilir.</li>
			<li>Otoklav kullanmadan önce kendi kendine yapılan karmaşık. Not: değil basınçlı kap plastik geniş ağız şişe var. Yeni bir steril plastik geniş ağız şişe hücre kültürü çalışmalarının ise kullanın.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Dinamik hücre kültürü
	<ol>
<li>Tohum 1.0 x 106 tek Cal27 hücrelerde kendi kendine yapılan minibioreactor. %10 FBS, 90 µg/mL ampicilin ve 90 µg/mL sefaloridin içeren DF12 orta 150 mL ekleyin.</li>
		<li>TEM çubuk bağlı eşyaları kullanarak minibioreactor üzerine yükleyin.</li>
		<li>Şişe kapağı sıkın ve minibioreactor bir manyetik karıştırıcı tarih koymak. CO2 kuluçka 37 ° C'de 200 devirde minibioreactor 7-14 gün için etkinleştirin. Not: CO2 kuluçka CO2 konsantrasyonu % 5 olduğunu.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Elfring, T., Boliek, C. A., Winget, M., Paulsen, C., Seikaly, H., Rieger, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+relationship+between+lingual+and+hypoglossal+nerve+function+and+quality+of+life+in+head+and+neck+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Oral+Rehabil%22%5BJournal%5D)">The relationship between lingual and hypoglossal nerve function and quality of life in head and neck cancer.</a> J. Oral Rehabil. 41, 133-140 (2014).</li>
<li>Patel, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increasing+incidence+of+oral+tongue+squamous+cell+carcinoma+in+young+white+women%2C+Age+18+to+44+Years%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Oncol%22%5BJournal%5D)">Increasing incidence of oral tongue squamous cell carcinoma in young white women, Age 18 to 44 Years.</a> J. Clin. Oncol. 29, 1488-1494 (2011).</li>
<li>Zhao, L., Huang, L., Yu, S., Zheng, J., Wang, H., Zhang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decellularized+tongue+tissue+as+an+in+vitro.+model+for+studying+tongue+cancer+and+tongue+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomaterialia%22%5BJournal%5D)">Decellularized tongue tissue as an in vitro. model for studying tongue cancer and tongue regeneration.</a> Acta Biomaterialia. 58, 122-135 (2017).</li>
<li>Ng, S. L., Narayanan, K., Gao, S., Wan, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lineage+restricted+progenitors+for+the+repopulation+of+decellularized+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Lineage restricted progenitors for the repopulation of decellularized heart.</a> Biomaterials. 32, 7571-7580 (2011).</li>
<li>Ott, H. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perfusion-decellularized+matrix%3A+using+nature%27s+platform+to+engineer+a+bioartificial+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">Perfusion-decellularized matrix: using nature's platform to engineer a bioartificial heart.</a> Nat. Med. 14, 213-221 (2008).</li>
<li>Remlinger, N. T., Wearden, P. D., Gilbert, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Procedure+for+decellularization+of+porcine+heart+by+retrograde+coronary+perfusion%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Procedure for decellularization of porcine heart by retrograde coronary perfusion.</a> J. Vis. Exp. (6), e50059(2012).</li>
<li>Wainwright, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+cardiac+extracellular+matrix+from+an+intact+porcine+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng.+Part+C-ME%22%5BJournal%5D)">Preparation of cardiac extracellular matrix from an intact porcine heart.</a> Tissue Eng. Part C-ME. 16, 525-532 (2010).</li>
<li>Baptista, P. M., Siddiqui, M. M., Lozier, G., Rodriguez, S. R., Atala, A., Soker, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+whole+organ+decellularization+for+the+generation+of+a+vascularized+liver+organoid%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">The use of whole organ decellularization for the generation of a vascularized liver organoid.</a> Hepatology. 53, 604-617 (2011).</li>
<li>Shupe, T., Williams, M., Brown, A., Willenberg, B., Petersen, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Method+for+the+decellularization+of+intact+rat+liver%5BTitle%5D)+AND+%22Organogenesis%22%5BJournal%5D)">Method for the decellularization of intact rat liver.</a> Organogenesis. 6, 134-136 (2010).</li>
<li>Soto-Gutierrez, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+whole-organ+regenerative+medicine+approach+for+liver+replacement%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng.+Part+C-ME%22%5BJournal%5D)">A whole-organ regenerative medicine approach for liver replacement.</a> Tissue Eng. Part C-ME. 17, 677-686 (2011).</li>
<li>Uygun, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organ+reengineering+through+development+of+a+transplantable+recellularized+liver+graft+using+decellularized+liver+matrix%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">Organ reengineering through development of a transplantable recellularized liver graft using decellularized liver matrix.</a> Nat. Med. 16, 814-820 (2010).</li>
<li>Bonvillain, R. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+nonhuman+primate+model+of+lung+regeneration%3A+detergent-mediated+decellularization+and+initial+in+vitro+recellularization+with+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng.+Pt+A%22%5BJournal%5D)">A nonhuman primate model of lung regeneration: detergent-mediated decellularization and initial in vitro recellularization with mesenchymal stem cells.</a> Tissue Eng. Pt A. 18, 2437-2452 (2012).</li>
<li>Daly, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Initial+binding+and+recellularization+of+decellularized+mouse+lung+scaffolds+with+bone+marrow-derived+mesenchymal+stromal+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng.+Pt+A%22%5BJournal%5D)">Initial binding and recellularization of decellularized mouse lung scaffolds with bone marrow-derived mesenchymal stromal cells.</a> Tissue Eng. Pt A. 18, 1-16 (2012).</li>
<li>Ott, H. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regeneration+and+orthotopic+transplantation+of+a+bioartificial+lung%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">Regeneration and orthotopic transplantation of a bioartificial lung.</a> Nat. Med. 16, 927-933 (2010).</li>
<li>Petersen, T. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-engineered+lungs+for+in+vivo+implantation%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Tissue-engineered lungs for in vivo implantation.</a> Science. 329, 538-541 (2010).</li>
<li>Price, A. P., England, K. A., Matson, A. M., Blazar, B. R., Panoskaltsis-Mortari, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+decellularized+lung+bioreactor+system+for+bioengineering+the+lung%3A+the+matrix+reloaded%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng.+Pt+A%22%5BJournal%5D)">Development of a decellularized lung bioreactor system for bioengineering the lung: the matrix reloaded.</a> Tissue Eng. Pt A. 16, 2581-2591 (2010).</li>
<li>Wallis, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+assessment+of+detergent-based+protocols+for+mouse+lung+de-cellularization+and+re-cellularization%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng.+Part+C-ME%22%5BJournal%5D)">Comparative assessment of detergent-based protocols for mouse lung de-cellularization and re-cellularization.</a> Tissue Eng. Part C-ME. 18, 420-432 (2012).</li>
<li>Ross, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryonic+stem+cells+proliferate+and+differentiate+when+seeded+into+kidney+scaffolds%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Soc.+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Embryonic stem cells proliferate and differentiate when seeded into kidney scaffolds.</a> J. Am. Soc. Nephrol. 20, 2338-2347 (2009).</li>
<li>Song, J. J., Guyette, J. P., Gilpin, S., Gonzalez, G., Vacanti, J. P., Ott, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regeneration+and+experimental+orthotopic+transplantation+of+a+bioengineered+kidney%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">Regeneration and experimental orthotopic transplantation of a bioengineered kidney.</a> Nat. Med. 19, 646-651 (2013).</li>
<li>Sullivan, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decellularization+methods+of+porcine+kidneys+for+whole+organ+engineering+using+a+high-throughput+system%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Decellularization methods of porcine kidneys for whole organ engineering using a high-throughput system.</a> Biomaterials. 33, 7756-7764 (2012).</li>
<li>Soto-Gutierrez, A., Wertheim, J. A., Ott, H. C., Gilbert, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perspectives+on+whole-organ+assembly%3A+moving+toward+transplantation+on+demand%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Perspectives on whole-organ assembly: moving toward transplantation on demand.</a> J. Clin. Invest. 122, 3817-3823 (2012).</li>
<li>Song, J. J., Ott, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organ+engineering+based+on+decellularized+matrix+scaffolds%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Mol.+Med%22%5BJournal%5D)">Organ engineering based on decellularized matrix scaffolds.</a> Trends Mol. Med. 17, 424-432 (2011).</li>
<li>Badylak, S. F., Taylor, D., Uygun, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole-organ+tissue+engineering%3A+decellularization+and+recellularization+of+three-dimensional+matrix+scaffolds%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Biomed.+Eng%22%5BJournal%5D)">Whole-organ tissue engineering: decellularization and recellularization of three-dimensional matrix scaffolds.</a> Annu. Rev. Biomed. Eng. 13, 27-53 (2011).</li>
<li>Shamis, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organ-specific+scaffolds+for+in+vitro+expansion%2C+differentiation%2C+and+organization+of+primary+lung+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng.+Part+C-ME%22%5BJournal%5D)">Organ-specific scaffolds for in vitro expansion, differentiation, and organization of primary lung cells.</a> Tissue Eng. Part C-ME. 17, 861-870 (2011).</li>
<li>Nakayama, K. H., Batchelder, C. A., Lee, C. I., Tarantal, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decellularized+rhesus+monkey+kidney+as+a+three-dimensional+scaffold+for+renal+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng.+Pt+A%22%5BJournal%5D)">Decellularized rhesus monkey kidney as a three-dimensional scaffold for renal tissue engineering.</a> Tissue Eng. Pt A. 16, 2207-2216 (2010).</li>
<li>Cortiella, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+acellular+natural+lung+matrix+on+murine+embryonic+stem+cell+differentiation+and+tissue+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng.+Pt+A%22%5BJournal%5D)">Influence of acellular natural lung matrix on murine embryonic stem cell differentiation and tissue formation.</a> Tissue Eng. Pt A. 16, 2565-2580 (2010).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Decellularized ECM imalat için köklü bir protokol dokularda hücresel bileşenleri kaldırma sırasında yerel ECM kompozisyon tutmak gerekir neredeyse tamamen21. Perfüzyon konvektif taşıma ile hücresel malzemeleri kaldırmak için damarlara aracılığıyla gerektiren şu anda bildirilen decellularization protokolleri rağmen mekanik ajitasyon burada, geleneksel basit ve ucuz Yöntem22 bilinen kabul edilmiştir , 23 , 24</su...

Dil deglutition, eklem ve tatma gibi çeşitli önemli işlevleri vardır. Böylece, dil işlev bozukluğu hastaların yaşam kalitesi1üzerinde büyük etkisi vardır. Oral kavite içinde en yaygın malignite dil Skuamöz Hücre alkol veya sigara tütün2insan genellikle oluşan Karsinomu (TSCC), olduğunu.
Son yıllarda, TSCC üzerinde temel araştırma az bir gelişme sağlanmıştır. Verimli vitro araştırma eksikliği en büyük sorunlardan biri kalır modelleri. Böylece, hücre dışı matriks (ECM) olası bir çözüm olarak ortaya çıktı. ECM son derece organize matris bileşenlerden oluşan bir karmaşık ağ çerçeve olduğu bir ECM benzeri yapıda ve kompozisyon sahip İskele malzemeleri kanser araştırmaları için yetkili gerekir. Decellularized ECM mükemmel niş için hangi ECM en önemli avantajı için çıkıyor aynı kökenli vitro, hücrelerden sağlar.
ECM doku deterjanlar ve enzimler kullanarak decellularization aracılığıyla gelen kaldırılmakta olan hücresel bileşenleri ile muhafaza edilebilir. Kolajen, fibronektin ve laminin decellularized matris içinde de dahil olmak üzere çeşitli ECM bileşenleri yerel doku gibi microenvironment kültürlü hücreler için hayatta kalma, yayılması ve hücreleri3farklılaşma teşvik sağlar. Ayrıca, ECM hücresel bileşenleri yokluğu ile en az düzeye immünojenisite nakli için azaltılabilir.
Şimdiye kadar decellularized ECM imalat yöntemleri farklı doku ve organlarında, kalp4,5,6,7, karaciğer8,gibi9,10 denendi ,11, akciğer12,13,14,15,16,17ve böbrek18,19 , 20. ancak, ilgili hiçbir araştırma olmak buldu en iyi bildiğimiz kadarıyla dilinde benzer iş.
Bu çalışmada, decellularized dil hücre dışı matriks (TEM) verimli ve uygun fiyatla rezervasyon yaptırın fiziksel, kimyasal ve enzimatik tedavi bir dizi tarafından fabrikasyon. Sonra TEM TSCC vitro, özetlemek için TSCC davranış ve Kalkınma için uygun bir simülasyon gösterilen kullanıldı. TEM iyi biyouyumluluk hücreleri TEM TSCC araştırma3' te büyük potansiyeli olabilir gösterir doku özel niş Kılavuzu yeteneği vardır. Burada gösterilen iletişim kuralı Patogenez ya da TSCC klinik tedaviler üzerinde eğitim araştırmacılar için bir seçim sağlar.

<table><tbody><tr><td>C57-BL / 6J fareler</td><td>Sun Yat-sen Üniversitesi Laboratuvar Hayvanları Merkezi</td> Etanol Guangzhou Kimyasal Reaktif Fabrikası <td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td>HB15-GR-2.5L</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum klorür</td><td>Sangon Biotech</td><td>A501218</td><td></td></tr><tr><td>Potasyum klorür</td><td>Sangon Biotech</td><td>A100395</td><td></td></tr><tr><td>Dibazik Sodyum Fosfat</td><td>Guangzhou Kimyasal Reaktif Fabrikası</td><td>BE14-GR-500G</td><td></td></tr><tr><td>Potasyum Fosfat Monobazik&nbsp;</td><td>Sangon Biotech</td><td>A501211</td><td></td></tr><tr><td>1.5 mL EP tüp</td><td>Axygen</td><td>MCT-150-A</td><td></td></tr><tr><td>Ultra düşük sıcaklıklı dondurucu ve nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>3,5 cm hücre kültürü kabı</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>153066</td><td></td></tr><tr><td>6 cm hücre kültürü kabı</td><td>Greiner</td><td>628160</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>V900502</td><td></td></tr><tr><td>Kalsiyum klorür</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>746495</td><td></td></tr><tr><td>Magnezyum klorür</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>449164</td><td></td></tr><tr><td>DNase</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D5025</td><td></td></tr><tr><td>Magnezyum sülfat</td><td>Sangon Biotech</td><td>A601988</td><td></td></tr><tr><td>Glikoz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>158968</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum bikarbonat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S5761</td><td></td></tr><tr><td>Ampisilin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9393</td><td></td></tr><tr><td>Kanamisin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>PHR1487</td><td></td></tr><tr><td>Cerrahi sütür</td><td>Şanghay Jinhuan</td><td></td><td></td></tr><tr><td>250 mL geniş ağızlı şişe</td><td>SHUNIU</td><td>1407</td><td></td></tr><tr><td>Manyetik karıştırıcı</td><td>AS</td><td>ONE 1-4602-32</td><td></td></tr><tr><td>CO2 inkübatör</td><td>SHEL LAB</td><td>SCO5A</td><td></td></tr><tr><td>10 mL şırınga</td><td>Hunan Pingan</td><td></td><td></td></tr><tr><td>50 mL santrifüj tüpü</td><td>Greiner</td><td>227270</td><td></td></tr><tr><td>Cal27 hücresi</td><td>Çin Bilim Akademisi, Şangay Hücre Bankası</td><td></td><td>Dil skuamöz hücreli karsinom hücre hattı</td></tr><tr><td>U2OS hücresi</td><td>Çin Bilim Akademisi, Şanghay Hücre Bankası</td><td></td><td>İnsan osteosarkomu hücre hattı</td></tr><tr><td>DMEM/F12</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D0547</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum piruvat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P5280</td><td></td></tr><tr><td>Hepes serbest asit</td><td>BBI</td><td></td><td></td>A600264</tr><tr><td>FBS</td><td>Hyclone</td><td>SH30084.03</td><td></td></tr><tr><td>4 & derece; C buzdolabı</td><td>Haier</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Su arıtma cihazı</td><td>ELGA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hemositometre</td><td>BLAU</td><td>717805</td><td></td></tr></tbody></table>

dil hücre dışı matriks ve dil skuamöz hücre karsinomu vitro sulandırma imalatı

Fabrication of Tongue Extracellular Matrix and Reconstitution of Tongue Squamous Cell Carcinoma In Vitro

Dil Skuamöz Hücre Karsinomu (TSCC) vitroiçin etkili ve gerçekçi bir model oluşturmak için yöntemleri TSCC İnşaat için fonksiyonel iskele sağlayan decellularized üretmek dil hücre dışı matriks (TEM) oluşturulmuştur. TEM vitro niş hücre büyümesi, farklılaşma ve hücre geçiş sağlar. Yerel hücre dışı matriks (ECM) ve biyokimyasal besteleri decellularized matris içinde muhafaza microstructures doku özel niş hücreleri demirleme için sağlar. TEM imalatı deoksiribonükleaz (DNaz) sindirim bir ciddi organik veya inorganik Önarıtma ile eşlik tarafından gerçekleştirilebilir. Bu iletişim kuralı kullanımı kolay ve decellularization için yüksek verimlilik sağlar. TEM inşaat TSCC modeli sağlayan olumlu cytocompatibility TSCC hücrelerin çalkalanmış mı statik kültür koşullarda gösterdi. Kendini yetiştirmiş bir biyoreaktör Ayrıca hücre kültürü için kalıcı karıştırılmış koşul için kullanıldı. Yeniden oluşturulan TSCC TEM kullanarak özellikleri ve klinik TSCC histopatoloji, benzer özellikleri TSCC araştırma potansiyeli düşündüren gösterdi.

Bu iletişim kuralı TEM hazırlanması için verimli ve uygun olduğu ortaya çıkıyor. TEM anadili kurcalayarak kıyasla mükemmel decellularization gösterdi. Decellularization etkinliğini hematoksilen-(Şekil 1A-B) boyama eozin tarafından (o) doğrulandı. Sonuçları boyama o nükleer TEM (Şekil 1B) boyama tam ortadan kalkması saptandı. Ayrıca, önceki işten DNA içerik miktar DNA TEM3n...

Bir yöntem etkili decellularization ile dil hücre dışı matriks (TEM) hazırlanması için burada gösterilir. TEM fonksiyonel iskele dil Skuamöz Hücre Karsinomu (TSCC) manken çalkalanmış mı statik kültür koşullar altında yeniden inşası için kullanılabilir.

Dil hücre dışı matriks ve dil Skuamöz Hücre Karsinomu Vitro sulandırma imalatı

In order to construct an effective and realistic model for tongue squamous cell carcinoma (TSCC) in vitro, the methods were created to produce ...

Bu yöntem, ağız kanseri araştırma alanında, in vitro olarak uygun bir T-yardımcı modelinin nasıl oluşturulacağı gibi temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, rekonstrükte edilmiş TSCC'nin klinik TSCC histopatolojisine güçlü bir benzerlik gösteren tümör özelliklerini ifade etmesidir. Bu yöntem için ilk fikrimiz vardı, 2 boyutlu kültürlenmiş TSCC hücrelerinin TSCC'nin doğal fenotipini düzgün bir şekilde sergilemediğini fark ettiğimizde.Ayrıca, kanser sağkalımından kaçınma ve farklılaşma için ekstraselüler matriksin önemini fark ettik. Bu yöntemin görsel gösterimi kritiktir, çünkü dil hücre dışı matrisin ve bir mini biyoreaktör kullanılarak 3 boyutlu kültürün hazırlanması sadece kelimelerle öğrenilmesi zordur ve açıklama için en iyisi olduğu gibi. Dilleri metin protokolüne göre ötenazi uygulanmış farelerden izole ettikten sonra, dokuyu üç dakika boyunca% 75 etanole batırın.Daha sonra her bir dili, bir mililitre 10 miliMolar steril PBS ile 1.5 mililitrelik bir mikrosantrifüj tüpüne aktarın. Hücre lizizini gerçekleştirmek için dilleri eksi 80 santigrat derecede bir saat dondurun. Daha sonra dokuyu oda sıcaklığında 45 dakika çözdürün.Donma/çözülme işl

fabrication-tongue-extracellular-matrix-reconstitution-tongue

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kanser Araştırmaları

Etiketli hücreleri çok foton mikroskobu ile dil içinde ağız kanseri ve tümör invazyonu niceliksel olarak izlenmesi bir fare modeli üreten yer alan tekniklerin kapsamlı bir bakış sunulmaktadır. Bu sistem, anti-invaziv bileşiklerin moleküler değerlendirme ve ilaç etkinliği için faydalı bir platform olarak hizmet verebilir.

Oral Skuamöz Hücre Karsinomu Ortotopik Fare Modeli Tümör Hücre Invasion Multi-foton Görüntüleme

Bu videoda, bir murin dilinden epitel hücrelerinin izolasyonunu anlatıyoruz. Bu hücreler, hücre kolonilerine yol açmak için daha fazla kültürlenebilir.

Murin Dil Epitel Hücrelerinin İzolasyonu ve Kültürü: Dil Epitel Hücrelerini Fare Modelinden İzole Etme ve Kültür Prosedürü

Bu video, alınan dilin bir dizi fiziksel, kimyasal ve enzimatik işleme maruz bırakılmasını içeren hücre dışı matris kullanılarak murin dili hücre dışı matrisinin hazırlanmasını göstermektedir. Elde edilen TEM iskelesi, hücresel bileşenleri uzaklaştırarak doğal hücre dışı matris bileşimini korur.

Fare Modelinden Hücre Dışı Matriks Üretimi: Murin Dilinden Decellularize Dil Hücre Dışı Matriks Hazırlamak İçin Etkili Bir Prosedür

Doku mühendisliği fibroblast türevli doğal matris epitel hücre çoğalmasını ve farklılaşmasını destekleyen bir stromal alt-tabakayı üretmek için gelişmekte olan bir araçtır. Burada tümör hücre biyolojisi farklı stromal hücre tiplerinin etkisini değerlendirmek için bu yöntemi uygulayarak bir protokol sunulmuştur.

Kanser Hücre Invasion Uygulama ile Tümör Stromal mikroçevresinin Doku Mühendisliği

Bu yazının üretimi, karakterizasyonu ve normal birincil insan özofagus fibroblast ve de-cellularized domuz iskele içinde ekilmiş skuamöz epitel hücrelerinden hazırlanan bir dokuya işlenmiş 3D özofagus yapı potansiyel kullanımlarını açıklar. Sonuçlar normal insan yemek borusunda benzer olgun tabakalı epitel oluşumunu göstermektedir.

3D Doku mühendisliği İnsan Özofagus Mukozal Modeli Üretimi, Karakterizasyonu ve Potansiyel Kullanımları

Neoplazi anlayışı için baş ve boyun kanseri hastalarında mutasyona uğramış spesifik genler ile murine modellerinin geliştirilmesi gereklidir. Burada, belirli genomik değişikliklerile murine HNC hücre hatları oluşturmak için adeno-ilişkili bir virüs-Cas9 sistemi kullanarak primer minür dil hücrelerinin in vitro dönüşümü için bir protokol salıyoruz.

Adeno-Associated Virus-Cas9 Sistemi Kullanılarak Genetiği Değiştirilmiş Bir Murine Baş ve Boyun Kanseri Hücre Hattı In Vitro Kurulması

Embriyonik ve yetişkin fare dillerinin epitel ve mezenkim/bağ dokusundan çok miktarda yüksek kaliteli tek hücreyi ayrıştırmak için genelleştirilmiş bir protokol geliştirdik.

Embriyonik Gün 12.5 ve 8 Haftalık Farelerin Dil Epitel ve Mezenkim/Bağ Dokusundan Hücre Ayrışması

Protokol, yetişkin farelerin arka tat papillasından izole edilmiş tat kök hücrelerinden elde edilen dil organoidlerini kültleme ve işleme için bir yöntem sunar.

Yetişkin Fare Tadı Kök Hücrelerinden Elde Edilen Lingual Organoidlerin Üretimi ve Kültürü

Bu protokol, kimyasal karsinogenez yoluyla indüklenen normal, preneoplastik ve skuamöz hücreli karsinom lezyonlarını temsil eden murin oral-özofagus 3D organoidlerini üretmek ve karakterize etmek için anahtar adımları açıklamaktadır.

3D Organoidlerde Oral-Özofagus Skuamöz Hücreli Karsinomun Modellenmesi

Ağız boşluğunda kurulan ağız skuamöz hücreli karsinom tümörlerinin cerrahi olarak rezeksiyon edilmesinin benzersiz bir yöntemi burada gösterilmiştir.

Oral Skuamöz Hücreli Karsinomun Farenin Preklinik Modelleri İçin Translasyonel Olarak İlgili Tümör Rezeksiyon Modeli

Keşfedin dil hücre dışı matriks hazırlama ve dil skuamöz hücre karsinomu için 3-D in vitro model oluşturma yöntemini. Mini biyoreaktör kullanımı ve dehülerizasyon teknikleriyle klinik tümör histopatolojisini taklit eden bu yaklaşım, oral kanser araştırmalarında değerli bir araç sunar.

Dil hücre dışı matriks ve dil Skuamöz Hücre Karsinomu Vitro sulandırma imalatı

Daha fazla video keşfet