Kollarındaki ve floresan Orthotopic Syngeneic fare modeli androjen bağlı ve kısırlaştırma dayanıklı prostat kanseri

Bu iletişim kuralı, prostat kanseri hücreleri, sonraki kastrasyon içi Prostatik enjeksiyon göstermek için hedeftir. Orthotopic önceden klinik androjen bağlı ve kısırlaştırma dayanıklı prostat kanseri hastalığı klinik tümör microenvironment ve immün bir ana bilgisayar bağlamında incelemek için kritik modellerdir.

Bu prosedürün genel amacı, hem androjene bağımlı hem de kastrasyona dirençli prostat kanserini modelleyebilen sinjeneik ortotopik tümörlerin oluşumunu indüklemek için murin kanseri hücrelerinin intra-prostat enjeksiyonunu gerçekleştirmektir. Bu yöntem, prostat kanseri gelişimini neyin tetiklediği ve bu tümörleri ortadan kaldırmada hangi tedavilerin en iyi sonucu verdiği gibi prostat kanseri alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajları, ortotopik tümörlerin genetik olarak daha karmaşık olması, klinik olarak temsili bir tümör mikroçevresinde gelişmesi ve enjeksiyondan önce genetik olarak değiştirilebilmesidir.

Bu tekniğin etkileri, ortotopik tümörler tedavilere insan hastalarda gözlemlenene benzer şekilde yanıt verdiğinden, insan prostat kanserinin tedavisine doğru uzanır. Ayak parmağını çimdiklemeye yanıt verilmediğini onayladıktan sonra, farenin gözlerine merhem sürün ve hayvanın karnındaki tüm kürkü tıraş edin. Steril yapışmayan pedler ve ardından steril alkollü mendiller kullanarak açıkta kalan cildi üç tur cerrahi ovma ile sterilize edin.

Cilt kuruduğunda, fareyi sırtüstü pozisyonda, doğrudan temiz bir cerrahi mikroskobun amacının altında bir ısıtma yastığı üzerinde temiz bir yüzeye yerleştirin. Ve hayvanı, karın üzerinde küçük bir delik açılmış steril bir örtü ile örtün. Dış deride ve iç karın kaslarında, penis ve preputial bezlerden daha üst olan karın orta hattı boyunca bir santimetrelik bir kesi yapın.

Tipik olarak arka, lateral ve mesanenin biraz üstünde olan bilateral seminal veziküllerden ve bağlı ön prostat loblarından birini bulun Bir asistandan MIC-CAP Matrigel kanser hücresi solüsyonunu nazik pipetleme ile karıştırmasını ve 30 mikrolitre hücreyi 50 mikrolitrelik bir şırıngaya bağlı 28 gauge bir iğneye yavaşça aspire etmesini isteyin. Daha sonra, Graefe Doku Forsepslerini kullanarak, vezikülü delmeden doku üzerinde gerginlik oluşturmak için bir seminal vezikülün ucunu nazikçe kaldırın ve iğnenin eğimini ön prostat lobunun uzun eksenine paralel olarak dikkatlice yerleştirin. Tüm hücre hacmini loba yavaşça enjekte edin, ardından sızıntıyı önlemek için iğneyi yavaşça geri çekin.

Başarılı bir enjeksiyon, ön prostat lobunun büyütülmesiyle ortaya çıkacaktır. Matrigel'in lob içinde kısmen katılaşmasına izin vermek için seminal vezikülü ve enjekte edilen prostat lobunu farenin dışında yaklaşık 30 saniye dikkatli ve istikrarlı bir şekilde tutun. Ortotopik olmayan tümör gelişimini önlemek için karın içine herhangi bir hücre çözeltisi sızıntısını toplamak için steril bir polyester uçlu aplikatör kullanın.

Doğru bir intra-protez enjeksiyonu, ortotopik olmayan tümör gelişimi için kritik öneme sahiptir. Seminal vezikülün delinmemesi için ekstra özen gösterilmesi, kanser hücresi süspansiyonunun yavaşça enjekte edilmesi ve herhangi bir hücre sızıntısının toplanması bu işlemin başarısını artıracaktır. Şimdi, seminal vezikülü ve enjekte edilen lobu, lob üzerine baskı yapmadan nazikçe karın bölgesine geri koyun ve dışsallaştırılmış dokuları değiştirin.

5-0 vicryl emilebilir ters kesme iğneli sütürler kullanılarak, iç karın kas sistemi sürekli dikişlerle kapatıldıktan sonra 4-0 naylon monofilament emilmeyen ters kesici iğneli dikişler kullanılarak dış karın cildi kesintili dikişlerle kapatılmalıdır. Ardından, ameliyat sonrası analjezi uygulayın ve fareyi, tam iyileşmeye kadar izleme ile bir ısıtma yastığının yarısına kadar yatak takımı olmayan bir kafese yerleştirin. Ateşböceği lusiferaz ve mCherry ekspresyonu için Myc-CaP hücrelerinin stabil transfeksiyonu, prostat tümörlerini non-invaziv, in vivo biyolüminesans ve floresan takip etmesini sağlar.

Burada, intraprostat enjeksiyonundan 30. günde karın bölgesinden diseke edilen temsili tümörler gösterilmiştir. Uygun teknikle, tümör hacmi ve ağırlığı nispeten küçük bir standart hata ile kaydedilebilir, ancak küçük ve büyük tümör kitleleri arasında bir miktar değişkenlik beklenir. İntraprostatik olarak enjekte edilen murin kanseri hücreleri, tümör infiltre eden CD3 pozitif T hücrelerinin veya ilgilenilen diğer immün hücrelerin varlığı için immünohistokimya ile de analiz edilebilir.

Dahası, bu model, büyük primer tümör kitlesi hemorajik abdominal asitlere ve/veya azalmış ambulasyon tımarına ve/veya piloereksiyona neden olduğu için objektif bir sağkalım son noktası sağlar. İntraprostat enjeksiyonundan üç gün sonra kastrasyon, sağlam tümör regresyonu ve ardından kastrasyona dirençli prostat kanserini temsil eden yaklaşık 30 gün sonra nihai tümör nüksü ile sonuçlanır. Kastrasyona dirençli prostat kanseri tümörlerinin diseksiyonu ve histolojik analizi, tümörlerin yüksek androjen reseptör seviyelerini sürdürmesi ve nöroendokrin belirteç sinaptofizin için negatif olması nedeniyle nöroendokrin farklılaşma göstermez.

Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik uygun şekilde uygulanırsa 20 ila 30 dakika içinde tamamlanabilir. Bu prosedürü denerken, ameliyat öncesi ve sonrası analjezik uygulamayı ve tüm ameliyatları steril teknik kullanarak ve bir cerrahi asistanın yardımıyla gerçekleştirmeyi unutmamak önemlidir. Bu prosedürü takiben, immünoterapilere ve diğer deneysel terapötalara verilen yanıtlar hakkında ek soruları yanıtlamak için immünohistokimya, akış sitometrisi ve tümör hacmi ve ağırlığının değerlendirilmesi ve hayvan sağkalımı gibi diğer yöntemler uygulanabilir.

Bu videoyu izledikten sonra, nihai cerrahi kastrasyon ve tümör regresyonu ve nüks analizi için prostat kanseri hücrelerinin farelerin ön prostat lobuna nasıl enjekte edileceğini iyi anlamış olmalısınız. Kanser hücreleri ile çalışmanın son derece tehlikeli olabileceğini ve bu işlemi gerçekleştirirken her zaman doğru kişisel koruyucu ekipmanların giyilmesi gibi önlemlerin alınması gerektiğini unutmayın.