Name: Mikrodiseksiyon birincil böbrek doku parçaları ve roman iskele-Alerjik yapı teknolojisi ile birleşme (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-03-27T13:30:00.000+00:00
Duration: 9 min
Description: Öğrenin mikrodiseksiyon yöntemiyle fare böbreklerinden kortiko-medüller segmentleri izole etmeyi. Bu teknik, doku mühendisliği uygulamalarında sağlam böbrek mimarisini koruyarak son evre böbrek hastalığı tedavilerine katkı sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

NIH kurumsal doktora sonrası eğitim desteği, NIH-HL-007260

Tüm hayvan cerrahi işlemler aşağıda açıklanan kurumsal hayvan bakım ve Komitesi (IACUC), tıbbi University of South Carolina herhangi bir hayvan ameliyat öncesinde kullanın veya herhangi bir hayvan doku kullanımı tarafından kabul edildi.
1. fare nefrektomi
<ol><li>Don bir ameliyat maskesi ve kabarık kapağı bulaşma riskini en aza indirmek için. Kısırlık cerrahi alan kurulum sırasında korumak.<ol>
<li>Delikli sigara cerrahi perdeler ameliyat masasında yerleştirin.</li>
		<li>Autoclaved aletleri steril örtüler üzerine Çantayı aç. Nefrektomi için gerekli aletleri 3 küçük hemostats dahil, iyi Forseps ile dişler, diş ve düz Iris makas olmadan iyi forseps.</li>
		<li>Başka bir delikli sigara cerrahi örtüsü ameliyat masasının ortasına yerleştirin.</li>
		<li>5 mL, Dulbecco'nın fosfat tamponlu tuz (DPBS) kalsiyum ve magnezyum, % 1 penisilin/streptomisin bir 15 mL steril konik tüp ile takıma hazırlayın. Bu çözüm buz ameliyat masasının yanındaki yerleştirin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Bir 8-12 haftalık C57BL/6 fare (erkek veya kadın) hayvan konut kompleksi edinin.</li>
	<li>Bir anestezi indüksiyon odası içinde fareyi getirin ve inhale % 3,5 isoflurane ile teşvik. Bakım anestezi için % 2 isoflurane kullanarak fare, bir burun konisi yerleştirin.<ol>
<li>Anestezi pedal refleks (firma ayak tutam) değerlendirilmesi tarafından düzenli olarak cerrahi işlem boyunca yeterli derinliği için monitör.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Tüm saç saç dökücü krem kullanarak ventral gövde kaldırmak. Bu alan tüm saç karından kaldırıldığından emin olmak için distile su ile durulayın.</li>
	<li>Fare steril ameliyat masasının en iyi sigara delikli örtü altında sırtüstü pozisyonda aktarın. Sadece fare karın örten örtüsü içinde 2 x 2 cm2 fenestrasyon kesip.</li>
	<li>Povidone-iyot steril gazlı bez veya pamuk topları kullanarak karın % 70 etanol tarafından takip uygulanır.</li>
	<li>Diş ve iris ile iyi forseps kullanarak makas, 3-4 cm dikey karın cilt kesi orta hat, orta hat solundaki 0.5 cm paralel yapmak Not: Sağ böbrek kaldırmaya çalışan, bu bir kesik orta hat sağındaki 0.5 cm olacaktır.<ol>
<li>Diş olmadan iyi Forseps ile karın zarını kavramak ve karın boşluğuna girmek için Iris makasla deşmek. Hemostats üst ve AST yan kenarları deri ve gerginlik yanal yerleştirin ve pozlama geliştirmek için karın zarını için geçerlidir.</li>
		<li>Bağırsak içeriği ince sol böbrek ortaya çıkarmak için karın sağ tarafına kayması. Yavaşça dışarı karın yükseltmek için böbrek çekiş yerleştirin.</li>
		<li>Bir hemostat sol böbrek hilusu arasında yerleştirin. Iris makas Üreter ve böbrek damarlarının transect için kullanın.</li>
		<li>Sol böbrek % 1'yer penisilin/streptomisin DPBS çözüm buz üzerinde.</li>
		<li>Steril doku kültürü hood için böbrek içeren tüp aktarın. Böbrek 15 mL konik tüp sizden bir 60 mm petri kabına (şekil 1) aktarın. Durulama iki kez 5 mL DPBS kalsiyum ve magnezyum ile kullanma. 5 ml DPBS 60 mm tabak içinde askıya böbrek tutun.<ol>
<li>Bir ek 60 mm petri kabına 5 mL mikrodiseksiyon iletişim kuralı sırasında kullanılmak üzere DPBS ile hazırlayın.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Fareyi Torakotomi ve böbrek, ihale takip kan kaybı tarafından onaylanmış bir IACUC hayvan protokole göre ötenazi.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. fare böbrek mikrodiseksiyon böbrek Segment yalıtım için
<ol><li>Steril eldiven, cerrahi maske, dahil olmak üzere iletişim kuralı, bu kısmı için steril tekniği kullanmaya devam etmek ve kabarık bulaşma riskini en aza indirmek için.<ol>
<li>De sadece sol alanları ve aletler için steril bir alanınız için mikroskop sağ stereo mikroskop platformda yer steril perdeler. Mikroskop odak kolları plastik yapışkan levhalar yerleştirin ve % 70 etanol ile sprey. Sahne ışığı çift boynu ışığı açın.</li>
		<li>(İyi forseps olmadan diş, neşter kolu, #15 neşter bıçak, iki düz hemostats, iki 30½ içi boş-geçişli iğneler ölçmek) açık steril aletler steril örtüler üzerine. Yer #15 bıçak neşteri üzerine baş ve bir hemostat her iğne adaptör/iğne diseksiyon aletleri daha sonra kullanmak, şekil 1' de gösterildiği gibi oluşturmak için hub ekleyin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>60 mm petri yemekler, bir böbrek DPBS ve doku kültürü hood mikroskop alanına gelen diğer tek DPBS içeren taşımak.<ol>
<li>Amaç altında 60 mm petri kabına yerleştirin ve böbrek ortaya çıkarmak için kapağı kaldırın. DPBS içeren çanak tarafına daha sonra kullanmak için steril alanına bırakın.</li>
		<li>Sadece ön veya arka yüzey böbrek görünümünde (Yani, böbrek, büyük düz yüz çanak alt dokunmadan diğer yüzü) çanak taşımak. Yordamı bu kısmı için 3.2-4 x zoom. Sigara dominant el kullanarak, diş olmadan iyi forseps işlemek ve böbrek böbrek inferior ve superior yakın çanak karşı pin için kullanın.</li>
		<li>Sigara dominant el böbrek yıkmaya tutmak. Dominant el ile yarı saydam fibröz kapsül katman maruz yüzeyden kaldırmak için #15 bıçak kullanın. Böbrek kapsülü kalanı kaldırmak için maruz yüzeyinden en yüzeysel 0,5 mm tıraş.</li>
		<li>#15 bıçak doku decapsulated bölgeden yaklaşık 2 mm3 ' te boyutu bir ters piramit incelemek için kullanın. Sadece DPBS içeren 60 mm yemek almak ve doku piramit temiz tabak yerleştirin. Böbrek kalanını atmak.</li>
		<li>1.5-2.0 x diseksiyon kalanında büyütmeyi azaltma. Doku parçaları veya iğne ipuçları çapı eşit olana iki hemostat iğneli aracı kesme aletleri kullanarak, doku parçası giderek daha küçük parçalar halinde dilim. Bir böbrek doku 2 mm3 ' te boyutu 50'den fazla segmentleri bir kez tamamen disseke üretecektir.</li>
		<li>Böbrek kesimleri ile 60 mm çanak için doku kültürü hood taşıyın. DPBS 1000 µL pipet ile kaldırın. 5 mL DMEM, % 10 Fetal sığır Serum (FBS) ve % 1 penisilin/streptomisin ile desteklenmiş ekleyin.</li>
		<li>Kültür için bir kuluçka makinesi veya cep içine implant 37 ° C'de 3 gün hemen oluşturur.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. böbrek Segment hücresel yapı imalat
<ol><li>Kültür normal insan dermal fibroblastlar (NHDF) ve insan yağ mikrovasküler endotel hücreleri (HAMEC) 7.2 x 105 fibroblastlar ve 1.8 x 10 istenen yapı başına5 endotel hücre elde etmek birkaç hafta için. Doku kültürü başlık, fibroblastlar endotel hücreleri (4: çubuk şeklinde kuyu 1) daha önce Czajka tarafından açıklandığı gibi önceden iskele-Alerjik damar endotel fibroblast yapıları (SPEC) oluşturmak için özel kalıplar uygun oranını tohum ve ark 19.</li>
	<li>Steril bir hemostat, 30½ G iğne ve yassı ucuyla steril bir spatula elde edilir.<ol>
<li>Medya çoğunluğu renal kesimleri değil Aspire edin ve böbrek parçalarını kaldırmak için dikkatli olmak, içeren 60 mm plaka kaldırmak.</li>
		<li>Segmentleri implantasyonu görselleştirmek için cerrahi büyüteçler donatmak.</li>
		<li>Spatula yavaşça boyunca 10-15 parçaları elde etmek için spatula çok uç eşit olarak yayılmış için 60 mm çanak alt sonu kazı. Spatula ucu nerede SPEC seribaşı iyi dudak mümkün olduğunca yakın yerleştirin.</li>
		<li>Bir hemostat-30½ G iğne aleti diğer elinde her bireysel segmenti spatula ucundan kuyu kenarına taşımak için kullanın. Yavaşça her kesimi de biraz daha önce numaralı seribaşı hücresel süspansiyon batık kadar iğne ucu kullanarak içine aşağı taşıyın.</li>
		<li>Kültür böbrek segment-SPEC 2:1:1 oran FGM-2/EGM-2/DMEM orta (2.5 mL cilt toplam). Kültür medya her 24 h 3 gün boyunca değiştirin. 72 h kalıpları yapıları kaldırmak ve tamir veya flash-işleme için dondurma.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Jha, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+kidney+disease%3A+global+dimension+and+perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Chronic kidney disease: global dimension and perspectives.</a> Lancet. 382 (9888), London, England. 260-272 (2013).</li>
<li>2016 USRDS Annual Data Report: Epidemiology of Kidney Disease in the United States. U.S.R.D. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.usrds.org/2016/download/v2_ESRD_16.pdf">https://www.usrds.org/2016/download/v2_ESRD_16.pdf</a> (2016).</li>
<li>Hart, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((OPTN%2FSRTR+2015+Annual+Data+Report%3A+Kidney%5BTitle%5D)+AND+%22American+journal+of+transplantation+%3A+official+journal+of+the+American+Society+of+Transplantation+and+the+American+Society+of+Transplant+Surgeons%22%5BJournal%5D)">OPTN/SRTR 2015 Annual Data Report: Kidney.</a> American journal of transplantation : official journal of the American Society of Transplantation and the American Society of Transplant Surgeons. 17, Suppl 1 21-116 (2017).</li>
<li>de Vries, E. F., Rabelink, T. J., van den Hout, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modelling+the+Cost-Effectiveness+of+Delaying+End-Stage+Renal+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nephron%22%5BJournal%5D)">Modelling the Cost-Effectiveness of Delaying End-Stage Renal Disease.</a> Nephron. 133 (2), 89-97 (2016).</li>
<li>Lefebvre, P., Duh, M. S., Mody, S. H., Bookhart, B., Piech, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+economic+impact+of+epoetin+alfa+therapy+on+delaying+time+to+dialysis+in+elderly+patients+with+chronic+kidney+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Disease+management+%3A+DM%22%5BJournal%5D)">The economic impact of epoetin alfa therapy on delaying time to dialysis in elderly patients with chronic kidney disease.</a> Disease management : DM. 10 (1), 37-45 (2007).</li>
<li>Mennini, F. S., Russo, S., Marcellusi, A., Quintaliani, G., Fouque, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Economic+effects+of+treatment+of+chronic+kidney+disease+with+low-protein+diet%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+renal+nutrition+%3A+the+official+journal+of+the+Council+on+Renal+Nutrition+of+the+National+Kidney+Foundation%22%5BJournal%5D)">Economic effects of treatment of chronic kidney disease with low-protein diet.</a> Journal of renal nutrition : the official journal of the Council on Renal Nutrition of the National Kidney Foundation. 24 (5), 313-321 (2014).</li>
<li>Moon, K. H., Ko, I. K., Yoo, J. J., Atala, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kidney+diseases+and+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Kidney diseases and tissue engineering.</a> Methods. 99, San Diego, Calif. 112-119 (2016).</li>
<li>Wobma, H., Vunjak-Novakovic, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+Engineering+and+Regenerative+Medicine+2015%3A+A+Year+in+Review%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+engineering.+Part+B%2C+Reviews%22%5BJournal%5D)">Tissue Engineering and Regenerative Medicine 2015: A Year in Review.</a> Tissue engineering. Part B, Reviews. 22 (2), 101-113 (2016).</li>
<li>Langer, R., Vacanti, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+pediatric+surgery%22%5BJournal%5D)">Advances in tissue engineering.</a> Journal of pediatric surgery. 51 (1), 8-12 (2016).</li>
<li>Jakab, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+engineering+by+self-assembly+and+bio-printing+of+living+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biofabrication%22%5BJournal%5D)">Tissue engineering by self-assembly and bio-printing of living cells.</a> Biofabrication. 2 (2), 022001(2010).</li>
<li>Fisher, M. B., Mauck, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+engineering+and+regenerative+medicine%3A+recent+innovations+and+the+transition+to+translation%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+engineering.+Part+B%2C+Reviews%22%5BJournal%5D)">Tissue engineering and regenerative medicine: recent innovations and the transition to translation.</a> Tissue engineering. Part B, Reviews. 19 (1), 1-13 (2013).</li>
<li>Stewart, D. E., Garcia, V. C., Rosendale, J. D., Klassen, D. K., Carrico, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnosing+the+Decades-Long+Rise+in+the+Deceased+Donor+Kidney+Discard+Rate+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Diagnosing the Decades-Long Rise in the Deceased Donor Kidney Discard Rate in the United States.</a> Transplantation. 101 (3), 575-587 (2017).</li>
<li>Mohan, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+weekend+effect+alters+the+procurement+and+discard+rates+of+deceased+donor+kidneys+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+international%22%5BJournal%5D)">The weekend effect alters the procurement and discard rates of deceased donor kidneys in the United States.</a> Kidney international. 90 (1), 157-163 (2016).</li>
<li>Orlando, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Discarded+human+kidneys+as+a+source+of+ECM+scaffold+for+kidney+regeneration+technologies%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Discarded human kidneys as a source of ECM scaffold for kidney regeneration technologies.</a> Biomaterials. 34 (24), 5915-5925 (2013).</li>
<li>Katari, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Renal+bioengineering+with+scaffolds+generated+from+human+kidneys%5BTitle%5D)+AND+%22Nephron.+Experimental+nephrology%22%5BJournal%5D)">Renal bioengineering with scaffolds generated from human kidneys.</a> Nephron. Experimental nephrology. 126 (2), 119(2014).</li>
<li>Kim, S. S., Park, H. J., Han, J., Choi, C. Y., Kim, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Renal+tissue+reconstitution+by+the+implantation+of+renal+segments+on+biodegradable+polymer+scaffolds%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnology+letters%22%5BJournal%5D)">Renal tissue reconstitution by the implantation of renal segments on biodegradable polymer scaffolds.</a> Biotechnology letters. 25 (18), 1505-1508 (2003).</li>
<li>Guimaraes-Souza, N. K., Yamaleyeva, L. M., AbouShwareb, T., Atala, A., Yoo, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+reconstitution+of+human+kidney+structures+for+renal+cell+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nephrology%2C+dialysis%2C+transplantation+%3A+official+publication+of+the+European+Dialysis+and+Transplant+Association+-+European+Renal+Association%22%5BJournal%5D)">In vitro reconstitution of human kidney structures for renal cell therapy.</a> Nephrology, dialysis, transplantation : official publication of the European Dialysis and Transplant Association - European Renal Association. 27 (8), 3082-3090 (2012).</li>
<li>Kelley, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tubular+cell-enriched+subpopulation+of+primary+renal+cells+improves+survival+and+augments+kidney+function+in+rodent+model+of+chronic+kidney+disease%5BTitle%5D)+AND+%22American+journal+of+physiology.+Renal+physiology%22%5BJournal%5D)">Tubular cell-enriched subpopulation of primary renal cells improves survival and augments kidney function in rodent model of chronic kidney disease.</a> American journal of physiology. Renal physiology. 299 (5), 1026-1039 (2010).</li>
<li>Czajka, C. A., Drake, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-assembly+of+prevascular+tissues+from+endothelial+and+fibroblast+cells+under+scaffold-free%2C+nonadherent+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+engineering.+Part+A%22%5BJournal%5D)">Self-assembly of prevascular tissues from endothelial and fibroblast cells under scaffold-free, nonadherent conditions.</a> Tissue engineering. Part A. 21 (1-2), 277-287 (2015).</li>
<li>Rhett, J. M., Wang, H., Bainbridge, H., Song, L., Yost, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Connexin-Based+Therapeutics+and+Tissue+Engineering+Approaches+to+the+Amelioration+of+Chronic+Pancreatitis+and+Type+I+Diabetes%3A+Construction+and+Characterization+of+a+Novel+Prevascularized+Bioartificial+Pancreas%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+diabetes+research%22%5BJournal%5D)">Connexin-Based Therapeutics and Tissue Engineering Approaches to the Amelioration of Chronic Pancreatitis and Type I Diabetes: Construction and Characterization of a Novel Prevascularized Bioartificial Pancreas.</a> Journal of diabetes research. 2016, 7262680(2016).</li>
<li>Al-Awqati, Q., Oliver, J. A. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/11849378">Stem cells in the kidney.</a> Kidney international. 61 (2), 387-395 (2002).</li>
<li>Aboushwareb, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Erythropoietin+producing+cells+for+potential+cell+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22World+journal+of+urology%22%5BJournal%5D)">Erythropoietin producing cells for potential cell therapy.</a> World journal of urology. 26 (4), 295-300 (2008).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Böbrek doku yapıları hücrelerin ve Biyomalzeme kullanılan ve birçok durumda, her iki türü ile ilgili olarak değişkenlik yaşayan mühendis için kullanılan bir yöntem modası geçmiş ya da iyi edebiyat7karakterize. Çok kök hücre yaklaşımlar kullanıyorsanız veya böbrek mimarisinin izolasyon bireysel bileşenlerine recapitulating, yapay olarak hücresel kullanılamaz hale gelen 26 farklı farklı hücre tipleri ile tüm organ yeniden olasılığı sırasında 21düşünmeye ezici. Bu büyük olasıl...

Kronik böbrek hastalığı (CKD) geçerli büyük halk sağlığı sorunları dünya çapında1biridir. Amerika Birleşik Devletleri'nde CKD yaygınlığı % 14'den fazla 600.000 Amerikalılar en şiddetli, son aşama böbrek hastalığı (ESRD)2acı ile toplam nüfusun bitti. Mevcut tedavi seçenekleri bu ESRD ile diyaliz ve böbrek nakli dahil. Her ne kadar yaklaşık 25.000 hastalar böbrek nakli her yıl geçmesi, her yıl o bir hayat kurtarıcı organ ve o alıcı nakli3bekleyen arasında büyük bir eşitsizlik önde gelen hastaların önemli bir sayı eklenir. Uzun ömürlü ve yaşam kalitesini ciddi olumsuz etkileri yanı sıra, diyaliz şaşırtıcı bir mali yük ile ilişkilidir. 2014 yılında Medicare iddiaları ödenen üzerinde 30 milyar dolar ESRD hastalar2için buldu. Bir sınırlı organ tedarik ve hastaların diyaliz gerektiren hiçbir belirgin düşüş trendi, diyaliz için alternatif çözümler belirleme araştırma çabalarına yönelik ve nakli şimdiye kadar önemlidir. Diyaliz ihtiyacını bile nispeten kısa bir gecikme diyaliz ile ilgili maliyeti4,5,6ertelenmesi ise kalite-düzeltilir ömrü yıl ve verimlilik bir hastanın sayısını önemli ölçüde artırır.
Böyle ESRD, fonksiyonel doku kaybı için çözümler şu anda doku Mühendisliği ve rejeneratif tıp laboratuvarları, iskele tabanlı organoid imalat bütün organ mühendislik kullanmaya kadar yaygın olarak çeşitli yaklaşımlarla incelendiği organ yapıları hücresel implantasyon7,8,9,10,11decellularized. Marjinal veya gözardı edilen böbrek böbrek karmaşık yapıları recapitulating kısmen soruşturma. Aslında, neredeyse böbrek nakli için tedarik % 20'si çeşitli nedenlerle12,13için atılır. Bu sözde Greftler fonksiyonel böbrek dokusundan kullanılmaktadır ve bir veya daha fazla doku mühendislik yapıları dahil. Önceki çalışmalar atılan bu organlar, böbrekler doku mühendislik amaçlı14,15ekstra hücresel matris için kullanan çalışma fizibilite göstermiştir. Ancak, az sağlıklı böbrekler birincil nephronal dokudan doku Mühendisliği amacıyla16,17,18için kullandık.
Bir yöntem daha önce Kim vd tarafından açıklanan dan sonra üzerinde Poliglikolik asit (PGA) İskele yapı imalat16numaralı seribaşı sağlıklı sıçan böbrek, böbrek "parçaları" yalıtım içerir. Ancak, tam diseksiyon metodoloji ile ilgili çok az bilgi verilir ve kesimleri iyi kıyma ve filtrasyon bileşiminden elde edilmiştir. Benzer şekilde sağlam nephronal mimarisi ile ayrık böbrek segmentleri oluşturur, ancak yerine mikrodiseksiyon teknikleri üzerinde dayanır bu iletişim kuralı bir değişiklik açıklar. Nephrectomies sonra böbrekler nerede renal kapsül kaldırılır ve doku daha fazla disseke diseksiyon mikroskop aktarıldığı yaşam yetişkin fareler üzerinde gerçekleşir. Küçük 30½ G iğneler kesme aletleri kullanılır ve ayrıca diseksiyon içinde yardım kılavuzları gibi iğne çapı böbrek kesimleri hedef çapı eşittir. İzole, bu durumda fare, böbrek kesimleri canlılığı kültür korumak ve İskele-Alerjik endotel-fibroblast Hücresel yapıları19ile birleştirmek. Bu yapıları daha önce bir biyo-yapay pankreas20de dahil olmak üzere diğer organlara Mühendisi için kullanılmaktadır.

<table><tbody><tr><td>Fenestre Olmayan Steril Sahra</td><td>Otobüsü Hastanesi Tek Kullanımlık Malzemeler</td><td>696</td><td></td></tr><tr><td>Fenestre Steril Sahra</td><td>Otobüsü Hastane Tek Kullanımlık Malzemeler</td><td>697</td><td></td></tr><tr><td>Halsted Sivrisinek Forseps 5 Kavisli</td><td>Miltex</td><td>Mil-7-4</td> <td>El yazması "Hemostat"</td></tr><tr><td>Ekstra İnce Graefe Forseps, Dişli Kavisli</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>11155-10</td><td>Dişli ince forseps</td></tr><tr><td>Ekstra İnce Graefe Forseps, Tırtıklı (dişsiz)</td><td>İnce Bilim Araçları</td><td>11152-10</td><td>Dişsiz ince forseps</td></tr><tr><td>İnce Makas - Tungsten Karbür</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>14568-09</td><td>İris Makas</td></tr><tr><td>Betadine Pompalı Cerrahi Fırçalama, Povidon-iyot %7,5</td> <td>Purdue Products LP</td><td>67618-151-17</td><td></td></tr><tr><td>Steril Pamuklu Gazlı Bez Ped (4" x 4")</td><td>Fisher Healthcare</td><td>22-415-469</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco'nun Fosfat Tamponlu Çözeltisi</td><td>Corning</td><td>21-030-CV</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin / Streptomisin Çözeltisi, 100X</td><td>Corning</td><td>30-002-Cl</td><td></td></tr><tr><td>İzofluran, USP</td><td>Üretici: Piramal, Distribütör: McKesson</td><td>2254845</td><td></td></tr><tr><td>Nair Tüy Dökücü</td><td>Nair</td><td>22600-23307</td> Metin <td>içinde Tüy Dökücü Krem</td></tr><tr><td>200 Proof Ethanol</td><td>Decon Laboratories</td><td>2705</td><td>%70 Etanol Çözeltisine Seyreltilmiş</td></tr><tr><td>BioLite 60mm Doku Kültürü Kabı</td><td>Themo-Scientific</td><td>130181</td><td></td></tr><tr><td>Press'n Seal</td><td>Glad</td><td>12587-70441</td><td>Stereoskop</td></tr><tr><td>SZX16 Stereo Mikroskop</td><td>Olympus'a</td> <td>UygulandıSZX16</td><td></td></tr><tr><td>Fiber Optik Aydınlatıcı</td><td>Cole Parmer</td><td>41720-20</td><td></td></tr><tr><td>Kendinden Destekli Çift Işıklı Boru, 23" L Deveboynu Cole</td><td>Parmer</td><td>EW-41720-60</td><td></td></tr><tr><td>Neşter Sapı #3</td><td>Miltex</td><td>Mil-4-7</td><td></td></tr><tr><td>Steril Kaburga Sırtlı Karbon Çelik Bıçak, Bıçak Boyutu 15</td><td>Bard-Parker</td><td>371115</td><td></td></tr><tr><td>31 1/2 Ölçer İğne</td><td>ThermoFisher Bilimsel</td><td>14-826F</td><td>Becton Dickinson 305106</td></tr><tr><td>Dulbecco'nun Modifiye Kartal Orta</td><td>Corning</td><td>10-017-CV</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Seçim% 100 Sığır Serumu</td><td>Atlas Biyolojikler</td><td>FS-0500-AD</td><td></td></tr><tr><td>Normal İnsan Dermal Fibroblastları</td><td>Lonza</td><td>CC-2511</td><td></td></tr><tr><td>İnsan Yağ Mikrovasküler Endotel Hücreleri</td><td>Sciencell Araştırma Laboratuvarları</td><td>7200</td><td></td></tr><tr><td>Cerrahi Büyüteçler (2.5x)</td><td>Orascoptic</td><td>(N/A) Özel Sipariş</td><td></td></tr><tr><td>FGM-2 (FGM-2 SingleQuots Eklenmiş Fibroblast Bazal Ortam)</td><td>Lonza</td><td>CC-3131, CC-4126</td><td></td></tr><tr><td>EGM-2 (EGM-2 SingleQuots Eklenmiş Endotelyal Bazal Ortam)</td><td>Lonza</td><td>CC-3156, CC-4176</td><td></td></tr><tr><td>Memeli Hücreleri için Canlı/Ölü Canlılık/Sitotoksisite Kiti</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>L3224</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Sitokeratin-18 Antikoru</td><td>Abcam</td><td>ab668</td><td></td></tr><tr><td>Keçi anti-Fare IgG, Alexa Fluor 633</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A-21052</td><td></td></tr><tr><td>Keçi anti-Tavşan IgG, Alexa Fluor 546</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A-11010</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Von Willebrand Faktör Antikoru</td><td>Abcam</td><td>ab6994</td><td></td></tr><tr><td>Albümin, Floresein izotiyosiyanat Eşlenik</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A9771-50MG</td><td></td></tr><tr><td>Hoescht 33342</td><td>BD Pharmingen</td><td>561908</td><td></td></tr><tr><td>Arka Plan Buster</td><td>Innovex Biosciences</td><td>NB306</td><td></td></tr></tbody></table>

mikrodiseksiyon birincil böbrek doku parçaları ve roman iskele-alerjik yapı teknolojisi ile birleşme

Microdissection of Primary Renal Tissue Segments and Incorporation with Novel Scaffold-free Construct Technology

Böbrek nakli şimdi son aşama böbrek hastalığı için genel kullanıma uygun bir tedavi yöntemidir. Ancak, bekleme listesi ve sadece dörtte biri ekimi ulaşmak bu hastaların yaklaşık 96.000 kişi ile alternatifler organları başarısız olanlar için korkunç bir ihtiyaç yoktur. Diyaliz bu maruz kalırsa genel olarak sağlık maliyetleri ile birlikte zararlı sonuçlarını azaltmak için etkin soruşturma organ nakli için alternatif çözümler arayışı içinde devam ediyor. İmplante edilebilir doku Mühendisliği böbrek hücresel kayıp böbrek işlevleri yerine bir tür uygun yaklaşım yapılarıdır. İlk kez açıklanan, burada yaşayan corticomedullary yalıtım için fare böbrekler mikrodiseksiyon böbrek kesimleri. Bu kesimler bir kez implante ana damarlara ile hızlı bağlantı sağlayan iskele-Alerjik endotel-fibroblast yapıları içinde hızlı birleşme yeteneğine sahiptirler. Yetişkin fare böbrek böbrek kesimleri çapı 200-300 µm elde etmek için stereoscope mikrodiseksiyon ardından yaşam bağışçılardan tedarik. Birden fazla böbrek yapıları kullanarak tek bir böbrek hasat birincil böbrek kesimleri fabrikasyon. Bu yöntem aksi takdirde iptal edilecek organların fonksiyonel böbrek dokusundan kurtarmak bir işlem gösterilmektedir.

Açıklanan protokol piramit 2 mm3 bölüm böbrek dokusunun başına yaklaşık 50 böbrek kesimleri üretir. İşlenmiş ve yansıma böbrek kesimleri (bkz. Şekil 2) farklı oranlarda borulu ve glomerular bileşenleri var. Sağlam kesimleri bir tahlil için üç gün boyunca farklı kesimleri bir kez her 24 h canlılığı belirlemede tabi tutuldu. Yeşil-floresan calcein-AM ile hücre içi Esteraz etkinliğini, canlı hücreler gösterge mevcuttur. Kırmızı-floresan etidyum homodi...

Böbrek yapıları doku Mühendisliği zararlı etkileri diyaliz ve organ sıkıntısı için bir çözüm sağlar. Burada, bir protokol mikro tarif yalıtım kortiko-medüller segmentleri için fare böbrekler incelemek. Bu segmentler oluşturan böbrek organoids iskele-Alerjik Hücresel yapıları implante edilir.

Mikrodiseksiyon birincil böbrek doku parçaları ve roman iskele-Alerjik yapı teknolojisi ile birleşme

Kidney transplantation is now a mainstream therapy for end-stage renal disease. However, with approximately 96,000 people on the waiting list and only ...

Bu mikroskobik diseksiyon prosedürünün genel amacı, doku mühendisliği uygulamaları için sağlam böbrek mimarisine sahip canlı böbrek dokusunun ayrı segmentlerini izole etmektir. Bu yöntem, doku mühendisliği alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir: İzole edilmiş birincil organ dokusunun tüm segmentleri steril olarak toplanabilir ve kültürde canlı tutulabilir mi? Bu tekniğin ana avantajı, 26'dan fazla farklı hücre tipine sahip karmaşık bir organı yeniden oluşturmak için hücre dizilerini kullanmak yerine, segmentlerin sağlam böbrek mimarisi içermesidir.Bu tekniğin etkileri, son dönem böbrek hastalığının tedavisine kadar uzanır, çünkü bu yapılar filtrasyonu iyileştirir ve hastaların diyalizden uzak kalmasına yardımcı olabilir. Ameliyat sırasında, kontaminasyon riskini en aza indirmek için maske ve başlık da dahil olmak üzere uygun cerrahi ekipman giyin. Aynı şekilde, steriliteyi korumak için her türlü çabayı gösterin.Ameliyat masasını örtüp hazırlıklara başlayın. Ardından, otoklavlanmış alet paketini steril örtülerin üzerine açın. Üç küçük kanama durdurucu, dişli ince forseps, dişsiz ince forseps ve düz iris makası içermelidirler.Ameliyat masasının ortasını ikinci bi

microdissection-primary-renal-tissue-segments-incorporation-with

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Bu protokol, Sprague Dawley sıçan böbreklerinin, deterjanların vaskülatür yoluyla antegrad perfüzyonu yoluyla hücreden arındırılmasını tanımlar ve insan böbrek epitel hücreleri ile yeniden popülasyon için şablon görevi gören aselüler renal hücre dışı matrisler üretir. Büyümeyi izlemek için resazurin perfüzyon testinin yeniden hücreselleştirilmesi ve kullanımı, özel olarak tasarlanmış perfüzyon biyoreaktörleri içinde gerçekleştirilir.

Epitel Hücre Repopulation ve Böbrek Doku Kalkınma Kemirgen Ekstrasellüler Matriks iskelelerinin hazırlanması

İn vivo dokunun mimari özelliklerine, bileşenlerine ve mekanik özelliklerine benzeyen üç boyutlu yapıları tasarlamak için yenilikçi bir biyofabrikasyon tekniği geliştirilmiştir. Bu teknik, çok çeşitli dokuların in vivo mimarilerini yeniden üreten, ayrıntılı uzamsal özellikleri aktaran yeni geliştirilmiş bir kurban malzemesi olan BSA kauçuğuna sahiptir.

Üç boyutlu Biyomimetik Teknoloji: Roman Biorubber Kollajen Hidrojeller içinde Mikro ve Makro ölçekli Mimarileri Tanımlı oluşturur

Bu protokol ana odak verimli bir şekilde uygun birincil glomeruli kültürlerin çeşitli aşağı akım uygulamaları kullanmak için en az kirletici maddeleri ile izole etmektir. İzole glomeruli bileşeni hücre tipleri arasındaki yapısal ilişkileri korumak ve kültürlü ex vivo kısa bir süre için olabilir.

Yetişkin sıçan böbrek üzerinden olduğu gibi Glomeruli yalıtmak için verimli bir eleme yöntemi

Bu çalışma, organ gelişimini incelemek için iki yöntem, kültürlü embriyonik organ ve organoidlerin vaskülarizasyonuna olanak sağlayan kuş embriyolarından koryoallantoik membran (CAM) üzerine geliştirilmiş bir ksinotransplantasyon kurulumu ve yeni bir sabit z-yönü yüksek çözünürlüklü zaman atlamalı konfokal görüntüleme sağlayan modifiye deneysel koşulları ile organ kültürü yöntemi.

Vaskülarizasyon, Uzatılmış Gelişim ve Geliştirilmiş Mikroskopi Görüntüleme için Renal Organoid ve Organotipik Kültürün Optimizasyonu

Glomerulus, proksimal tübül, kalın yükselen uzuv, toplama kanalı ve interstiyum dahil olmak üzere insan böbreğinin alt segmentlerinin lazer mikroseksiyonu için bir protokol açıklıyoruz. RNA daha sonra elde edilen bölmelerden izole edilir ve her alt segmentteki transkriptomik imzadaki değişiklikleri belirlemek için RNA dizilimi gerçekleştirilir.

İnsan Böbrek Dokusunda Bölgesel TranskriptomikLeri Ortaya Çıkarmak İçin Lazer Mikrodispeksiyon Uygulaması

Bu protokol, hücreden sönmemiş sıçan böbrekleri kullanarak bir iskele geliştirmek için bir yöntem sunar. Protokol, biyoyararlanıcılığı doğrulamak için hücreden arındırma ve yeniden hücreleştirme süreçlerini içerir. Desellülerizasyon Triton X-100 ve sodyum dodecyl sülfat kullanılarak gerçekleştirilir.

Sıçanlarda Hücreden Sönmemiş Böbrek İskelelerinin Hazırlanması

Rekonstrüktif cerrahi için doku mühendisliği implantları, karmaşık ve pahalı iskele bileşenleri içeren zahmetli ex vivo kültürleme nedeniyle nadiren klinik öncesi çalışmaların ötesine geçer. Burada, otolog mikrogreftler içeren erişilebilir kollajen bazlı tübüler iskele ile üriner diversiyon için tasarlanmış tek aşamalı bir prosedür sunuyoruz.

Minipiglerde Tek Aşamalı Doku Mühendisliği Ürotelyal Tüpler için Cerrahi Model

Burada, mikrofizyolojik bir sistemde kollajen ve kollajen-agaroz matrisleri kullanarak 3D hücre kültürlerinin uygulanması için talimatları detaylandıran protokoller sunuyoruz. Bu protokoller, renal proksimal tübül ve renal hücreli karsinom sferoidlerinin ko-kültürünü destekleyerek in vivo koşulları simüle eder ve böbrek kanseri hücre etkileşimlerinin ileri düzeyde araştırılmasını sağlar.

Böbrek Kanseri İlerlemesini Modellemek için Renal Sağlıklı ve Tümör Epitelinin Mikroakışkan Ko-kültürü

Burada, hücre dışı bir matris (3D-HRTEC) üzerinde tek tabakalar ve üç boyutlu kültürler geliştirmek için böbrek korteksinden insan renal tübüler epitel hücrelerinin (HRTEC) birincil kültürlerini elde etmek için protokolleri açıklıyoruz.

İnsan Renal Tübüler Epitel Hücre Primer Kültürlerinin Tek Tabakalı ve Üç Boyutlu Koşullarda Geliştirilmesi

Primer renal proksimal tübül epitel hücrelerini izole etmek ve kültürlemek için tüm insan böbreklerinin işlenmesi ve bu hücrelerin renal proksimal tübülü özetlemek için üç boyutlu, mikroakışkan, mikrofizyolojik bir platformda uygulanması için optimize edilmiş bir protokol sunuyoruz.

Primer İnsan Proksimal Tübül Epitel Hücrelerinin İzolasyonu ve Renal Proksimal Tübülün Mikrofizyolojik Modelinin Oluşturulmasında Kullanımı

Öğrenin mikrodiseksiyon yöntemiyle fare böbreklerinden kortiko-medüller segmentleri izole etmeyi. Bu teknik, doku mühendisliği uygulamalarında sağlam böbrek mimarisini koruyarak son evre böbrek hastalığı tedavilerine katkı sağlar.

Mikrodiseksiyon birincil böbrek doku parçaları ve roman iskele-Alerjik yapı teknolojisi ile birleşme

Daha fazla video keşfet