Name: Demir içeriği tesislerinde ölçme kolorimetrik yöntemi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-09-07T13:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 12 s
Description: Keşfedin bitki dokularında demir içeriğini Prusya Mavisi kolorimetrik yöntemiyle hassas şekilde ölçme tekniğini. Bu güvenilir protokol, biyoloji araştırmacılarına demir kirliliğinden kaçınarak doğru sonuçlar elde etme imkanı sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu eser İsrail Bakanlığı Bilim, teknoloji ve uzay tarafından Tarım (#16-16-0003) İsrail Bakanlığı baş bilim bir hibe tarafından desteklenmiştir.

1. malzeme ve büyüme koşullarına bitki
<ol><li>5 cm x 5 cm pot başına tohum bir tütün (çeşidinde Samsun) tohum ile standart pot ortam dolu. Tencere tepsiye yerleştirin. 23 ° c sabit bir sıcaklıkta büyüme oda uzun günün koşulları (16/8 h ışık/karanlık) altında bitkilerde büyümek Su drenaj pot kadar musluk suyu ile sulama.</li>
	<li>50±5 gün sonra deneme için uygun konsantrasyonlarda göre sulama Fe tedaviler başlatın. Örneğin, demir konsantrasyonları 0 6 mm, bir çözünür Fe şelatör (Fe EDDHA) tarafından desteklenen bir dizi kullanılır. Uygun bir çözüm bitkilerle iki günde 6-8 gün boyunca (kurutma önlemek için) sulamak.</li>
</ol>2. demir ölçüm için yaprakları hazırlanması
Notlar: kullanılacak tüm malzemeler olmalısın demir içermeyen. demir bulaşma riskini azaltmak için Harç ve havaneli iki kez %4 HCl çözeltisi ile temiz ve filtre kağıdı ile kullanmadan önce her zaman kuru. Herhangi bir malzeme yeniden kullanılırsa iki kez % 4 HCl çözüm ile temiz ve filtre kağıdı ile kuru.
<ol><li>Kök yaprakları elle, eldiven (herhangi bir metal donanım kullanmayın) kullanarak bağlantısını kesin. 10 g (taze ağırlık) yaprakların her örnek için kullanın. Her yaprak bir sprey şişesinde kullanarak Çift Kişilik distile su (DDW) ile temizleyin. Bu adım Fe kirlenmesini önlemek önemlidir.</li>
	<li>Bir kağıt havlu yapraklarda kuru ve bir torbaya koydu. Kağıt poşet 80 ° c sabit bir ısıda bir fırında 2-3 günlüğüne aktarın.</li>
	<li>Ne zaman kuru toz bir harç ve havaneli ve steril 15 mL Plastik tüpler için transfer kullanarak için yaprakları ezmek.</li>
</ol>3. yanan yapraklar Ash
Notlar: Demir çözünürlük artırmak için (0) yakın düşük pH çözüm HCL kullanımı içindir. Taş yünü gazlar yanma sırasında şişe kaçan önlemek için kullanılır.
<ol><li>Bir yeni, mühürlü 20 mL mercek şişe kapağı olmadan tartın. Değerini not alın veya sıfır Dara düğmesini kullanarak ayarlayın. Ezilmiş kurutulmuş yaprakları (örnek) için şişe ekleyin.</li>
	<li>Örnek ve konteyner tartmak ve değerini not alın. Şişeyi taş yünü ile kapatın.</li>
	<li>3 ek şişeleri örnekleri eklemeden tartmak ve değerlerine dikkat edin. Bu tüpleri denetimleri örnek ağırlık herhangi bir artışa yol açmıştır taş yünü miktarını değerlendirmek için kullanılır.</li>
	<li>Örnek ve kontrol tüpleri bir fırına koyun ve sıcaklık aşağıdakileri kullanarak yazmaya başlamak: oda sıcaklığında, 425 ° C ve son olarak, 425° C hızlı artış 4 saat boyunca. Bu zamana kadar kuru yapraklar kül kapatmış.</li>
	<li>Yaklaşık 100 ° C aşağı örnekleri soğumaya bırakın ama altındaki bu sıcaklık nem önlemek için aşağıdaki iki adımı için hangi örnek son ağırlığı etkileyebilecek değil. Ağır eldiven kullanarak, örnekleri harici şişe tutan cımbızla fırın kaldırın.</li>
	<li>Şişeleri düz bir yüzeye yerleştirin, taş yünü kaldırmak ve şişeleri ile kendi özgün kapakları kapatın.</li>
	<li>(Bkz: 3.3) 3 kontrol tüpleri tartmak ve onların ortalama ağırlık kazancı hesaplamak. Kilo alımı eşitse veya üstünde kül ağırlığının % 1 (bkz. Adım 4.2), ölçüm hata tahmini olarak bu değeri kullanırsınız.</li>
</ol>4. demir ölçüm için külleri hazırlanması
Notlar: İlk örnekteki son demir konsantrasyonu eklenen HCl hacimce bölünmüş külleri ağırlığı hesaplanır.
<ol><li>1 M HCl çözüm hazırlamak (%4 HCl) DDW (içinde bir plastik ya da cam şişesi) 87,5 mL % 37 HCl hisse senedi bir çözüm 12,5 mL ekleyerek.</li>
	<li>15 mL plastik tüp tartmak ve değerini not alın veya değeri sıfır Dara düğmesini kullanarak ayarlayabilirsiniz. Külleri aktarmak Tüp, tartmak ve değerini not alın. Bu kül ağırlığıdır.</li>
	<li>1 M HCl 5 mL küle ekleyin. Külleri 22 µm ile filtre ve bir ek 5 mL 1 M HCL ile aynı filtre ekleyin.</li>
	<li>Son hacim 10 mL olmalıdır. Çözümün bir parçası filtrede kaybolur unutmayın. Not: Örnekleri Fe ölçüm FAAS veya Prusya Mavisi yöntemi için hazırsınız.</li>
	<li>Bir kalibrasyon eğrisi Fe konsantrasyon ile ölçülen atomik spektrometresi tarafından ve Prusya mavi yöntemi tarafından yapmak (bkz. Şekil 4) her bitki türü için. Daha sonra Fe konsantrasyon yalnız Prusya mavi yöntemle ölçülebilir.</li>
</ol>5. Fe konsantrasyon FAAS tarafından ölçme
<ol><li>4 mL her örnek FAAS tarafından ölçüm için kaldırın.</li>
	<li>FAAS ölçüm külleri ağırlık tarafından elde edilen sonuçlar bölme. (Külleri 10 mL çözündürüldükten çünkü) sonuç değeri tarafından 0,01 bölün. Demir konsantrasyonu gram kül (ppm) başına elde edilen değerdir.</li>
</ol>6. çözüm boyama Prusya Mavisi hazırlanması
<ol><li>%4 hazırlamak 4 g K4Fe(CN)6 100 ml DDW, girdap ekleyerek Prusya mavi çözüm (diğer birimleri ve/veya konsantrasyonları farklı talepleri için kullanılabilir). Bu daha önce raporlanmış (% 20)14 eskisinden Bu çalışmada, Prusya mavi çözüm daha az konsantre olması gerekmektedir.</li>
	<li>Çözüm kadar kullanmak 4 ° C'de karanlıkta bırakın. Çözüm bu koşullar 6 ay boyunca stabildir.</li>
</ol>7. FAAS sonuçları kullanarak Prusya Mavisi yöntemi için bir kalibrasyon eğrisi oluşturma
Not: aşağıdaki formülü kullanarak küller içinde demir konsantrasyonu hesaplayın <img alt="Equation" src="/files/ftp_upload/57408/57408eq1.jpg">Denklem 1 C: konsantrasyon, V: numune hacmi, W: kül ağırlığı (g).
<ol><li>Prusya mavi çözüm ve 1 M HCl mL 0,50 0,50 mL karıştırın. Bu boş çözüm olarak görev yapacak.</li>
	<li>0.5 mL örnek mix (%4 külleri HCl, madde 3 te açıklandığı gibi) ve pipetting tarafından Prusya mavi çözüm (adım 6.1) 0.5 mL. En az 1 dakika ama 5 dakika bekleyin. 5 dakika sonra sedimantasyon örneklerde ortaya çıkar.</li>
	<li>Karışımı bir küvet için aktarmak ve 715, OD ölçmek bir spektrofotometre kullanarak nm. Değerini not alın.</li>
	<li>Aşırı doz değeri (adım 7.3) kül ağırlığını örnek tarafından (adım 3.2) bölün. Sonuç OD gram kül temsil eder.</li>
	<li>FAAS ölçümleri (Y ekseni) ve OD değerleri elde edilen demir konsantrasyonları arasındaki doğrusal regresyon Arsa (X ekseni). 5.2 ve 7.4 adımlarda elde edilen sonuçları kullanın. Regresyon formül, Y hesaplamak = bir + BX'tir, burada Y gösterir demir konsantrasyonu, absorbans kesiştiği temsil eder, b absorbans yamaç ve X temsil eder OD.</li>
</ol>8. diğer örneklerde aynı bitki türünden demir düzeylerini belirlemek için Prusya Mavisi yöntemini kullanarak
Notlar: bir kalibrasyon eğrisi zaten bu bitki türü için kurulan bu yana, demir konsantrasyonu aynı bitki türünden herhangi bir yeni örneklerinde doğrudan doğrusal regresyon formül kullanılarak hesaplanabilir.
<ol><li>3 ve 4, izlemek merdiven 7.1 7.4 bölümlerdeki adımları gerçekleştirin.</li>
	<li>Doğrusal regresyon (adım 7.5) elde edilen formülü kullanarak çözümde demir konsantrasyonu hesaplayın.</li>
</ol>

<ol><li>Kobayashi, T., Nishizawa, N. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Iron+uptake%2C+translocation%2C+and+regulation+in+higher+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Plant+Biology%22%5BJournal%5D)">Iron uptake, translocation, and regulation in higher plants.</a> Annual Review of Plant Biology. 63 (1), 131-152 (2012).</li>
<li>Bradley, J. M., Le Brun, N. E., Moore, G. R. <a target="_blank" href="https://link.springer.com/article/10.1007/s00775-016-1336-0">Ferritins: Furnishing proteins with iron.</a> Journal of Biological Inorganic Chemistry. 21 (1), 13-28 (2012).</li>
<li>Zielińska-Dawidziak, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plant+ferritin+-+a+source+of+iron+to+prevent+its+deficiency%5BTitle%5D)+AND+%22Nutrients%22%5BJournal%5D)">Plant ferritin - a source of iron to prevent its deficiency.</a> Nutrients. 7 (2), 1184-1201 (2015).</li>
<li>Johnson, D. C., Dean, D. R., Smith, A. D., Johnson, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure%2C+function%2C+and+formation+of+biological+iron-sulfur+clusters%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Structure, function, and formation of biological iron-sulfur clusters.</a> Annual Review of Biochemistry. 74 (1), 247-281 (2015).</li>
<li>Guo, H., Barnard, A. S. <a target="_blank" href="http://pubs.rsc.org/en/content/articlelanding/2013/ta/c2ta00523a">Naturally occurring iron oxide nanoparticles: morphology, surface chemistry and environmental stability.</a> Journal of Materials Chemistry A. 1 (1), 27-42 (2013).</li>
<li>Hem, J. D., Cropper, W. H. <a target="_blank" href="https://pubs.usgs.gov/wsp/1459a/report.pdf">Chemistry of iron in natural water.</a> Report US Geological Survey. , 1-31 (1962).</li>
<li>Rout, G. R., Sahoo, S. <a target="_blank" href="http://www.agrsci.jp/ras/article/view/12">Role of iron in plant growth and metabolism.</a> Reviews in Agricultural Science. 3, 1-24 (2015).</li>
<li>Speretto, R. A., Ricachenevsky, F. K., Stein, R. J., de Abreu Waldow, V., Fett, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Iron+stress+in+plants+Dealing+with+deprivation+and+overload%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Stress%22%5BJournal%5D)">Iron stress in plants Dealing with deprivation and overload.</a> Plant Stress. 4, 57-69 (2010).</li>
<li>Tautkus, S., Steponeniene, L., Kazlauskas, R. <a target="_blank" href="https://www.shd.org.rs/JSCS/Vol69/No5/V69-No5-10.pdf">Determination of iron in natural and mineral waters by flame atomic absorption spectrometry.</a> Journal of the Serbian Chemical Society. 69 (5), 393-402 (2006).</li>
<li>Braunschweig, J., Bosch, J., Heister, K., Kuebeck, C., Meckenstock, R. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reevaluation+of+colorimetric+iron+determination+methods+commonly+used+in+geomicrobiology%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Microbiological+Methods%22%5BJournal%5D)">Reevaluation of colorimetric iron determination methods commonly used in geomicrobiology.</a> Journal of Microbiological Methods. 89 (1), 41-48 (2012).</li>
<li>PerkinElmer. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Atomic+Spectroscopy+-+Guide+to+Selecting+the+Appropriate+Technique+and+System%22">Atomic Spectroscopy - Guide to Selecting the Appropriate Technique and System</a>. 16, (2011).</li>
<li>Wachasunder, S. D., Nafade, A. <a target="_blank" href="https://www.tandfonline.com/doi/abs/10.1080/00207230108711348">Precision and accuracy control in the determination of heavy metals by atomic absorption spectrometry.</a> Science. 58, 517-528 (2001).</li>
<li>Woods, J. T., Mellon, M. G. <a target="_blank" href="https://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/i560096a013">Thiocyanate method for iron. A spectrophotometric study.</a> Industrial & Engineering Chemistry Analytical Edition. 13 (8), 551-554 (1941).</li>
<li>Perls, M. <a target="_blank" href="https://link.springer.com/article/10.1007%2FBF01878983">Nachweis von Eisenoxyd in gewissen Pigmenten.</a> Virchows Archiv Fur Pathologische Anatomie Und Physiologie Und Fur Klinische Medizin. 39 (1), 42-48 (1867).</li>
<li>Connorton, J. M., Jones, E. R., Rodriguez-Ramiro, I., Fairweather-Tait, S., Uauy, C., Balk, J. <a target="_blank" href="https://www.biorxiv.org/content/early/2017/04/28/131888">Altering expression of a vacuolar iron transporter doubles iron content in white wheat flour.</a> bioRxiv. , 1-25 (2017).</li>
<li>de la Fuente, V., Rufo, L., Rodríguez, N., Franco, A., Amils, R. <a target="_blank" href="https://link.springer.com/article/10.1007/s11104-017-3251-8">Comparison of iron localization in wild plants and hydroponic cultures of Imperata cylindrica (L.) P. Beauv.</a> Plant Soil. 418 (1-2), 25-35 (2017).</li>
<li>Hsiao, P. Y., Cheng, C. P., Koh, K. W., Chan, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Arabidopsis+defensin+gene%2C+AtPDF1.1%2C+mediates+defence+against+Pectobacterium+carotovorum+subsp.+carotovorum+via+an+iron-withholding+defence+system%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Reports%22%5BJournal%5D)">The Arabidopsis defensin gene, AtPDF1.1, mediates defence against Pectobacterium carotovorum subsp. carotovorum via an iron-withholding defence system.</a> Science Reports. 7 (1), 1-14 (2017).</li>
<li>Johnson, D. B., Kanao, T., Hedrich, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Redox+transformations+of+iron+at+extremely+low+pH%3A+Fundamental+and+applied+aspects%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Redox transformations of iron at extremely low pH: Fundamental and applied aspects.</a> Frontiers in Microbiology. 3, 1-13 (2012).</li>
<li>Stumm, W., Lee, G. F. <a target="_blank" href="https://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/ie50614a030">Oxygenation of ferrous iron.</a> Industrial & Engineering Chemistry. 53 (2), 143-146 (1961).</li>
<li>Jones, A. M., Griffin, P. J., Collins, R. N., Waite, T. D. <a target="_blank" href="https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0016703714005663">Ferrous iron oxidation under acidic conditions - The effect of ferric oxide surfaces.</a> Geochimica et Cosmochimica Acta. 145, 1-12 (2014).</li>
<li>Hawkesworth, C. J., Kemp, A. I. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+of+the+continental+crust%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Evolution of the continental crust.</a> Nature. 443 (7113), (2006).</li>
<li>Thompson, L. M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aThompson%2C+LM+%22Soils+and+soil+fertility%22">Soils and soil fertility</a>. Louis, M., Troeh, F. R., Thompson, L. M. , (1973).</li>
<li>Krueger, B. J., Grassian, V. H., Cowin, J. P., Laskin, A. <a target="_blank" href="https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1352231004006442">Heterogeneous chemistry of individual mineral dust particles from different dust source regions: The importance of particle mineralogy.</a> Atmospheric Environment. 38 (36), 6253-6261 (2004).</li>
<li>Bewick, V., Cheek, L., Ball, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Statistics+review+7%3A+Correlation+and+regression%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Critical+Care%22%5BJournal%5D)">Statistics review 7: Correlation and regression.</a> Journal of Critical Care. 7 (6), 451-459 (2003).</li>
<li>Asuero, A. G., Sayago, A., González, A. G. <a target="_blank" href="https://www.tandfonline.com/doi/abs/10.1080/10408340500526766">The correlation coefficient: An overview.</a> Critical Reviews in Analytical Chemistry. 36 (1), 41-59 (2006).</li>
<li>JoVE Science Education Database. Analytical Chemistry. Calibration Curves. , Journal of Visualized Experiments. Cambridge, MA. Available from:
 <a target="_blank" href="https://www.jove.com/science-education/10188/calibration-curves">https://www.jove.com/science-education/10188/calibration-curves</a> (2018).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Bitki dokularında demir ölçüm sulama veya diğer çevresel koşullar etkilerini değerlendirmek için çok önemlidir. Burada, diğer bitki türleri ve dokuları ile kolayca adapte edilebilir tütün yaprakları Fe içerik ölçüm için bir kolay ve doğru kolorimetrik yöntemi açıklanmıştır.
Koşullar kolorimetrik yöntemi için optimize, biz düşük pH Orta (pH < 1.0) demir çözünürlük sağlamak için kullanılır. Yanma süreci demir her türlü serbest bırakmak için ve hiçbir kirletici örnekleri mevcut sonuçları değiştir...

Demir (Fe) tüm canlılar içinde önemli bir mikro besin olduğunu. Bitkiler, solunum, fotosentez ve klorofil sentezi gibi temel süreçleri onun katılımı nedeniyle bir önemli mikro besin1 biridir. Özgür demir iyonları yüksek birikimi hücreleri serbest radikallerin oksidatif strese neden serbest bırakmak önde gelen tepkiler nedeniyle bitki için zararlıdır. Bitki hücre içinde demir homeostazı korumak için iyonlar boşluklar içinde saklanır ve ferritins, protein kafes demir homeostazı2 ' doğrudan ilgili ve demir tüm canlılar içinde asıl depolama yapısı içinde münzevi. Aynı zamanda, demir eksikliği anemisi bitki Fe biofortification için artan bir ihtiyaç sonuçlanan insan nüfusunun önemli bir bölümünü etkiler. Bitki ferritin benzersiz özellikleri nedeniyle, bu sorun yetersiz beslenme3savaşmak için bir umut verici strateji Gıda Zenginleştirme ferritin-demir ile sunmaktadır.
Demir iyonları esas olarak bulunan iki oksidasyon durumu vardır, yani demir çelik (divalent Fe2 + veya demir (II)) ve demir (değerlikli Fe3 + veya demir (III)) formları. Demir, demir kümeleri4gibi çeşitli diğer formları da hücrelerde bulunur. Fe demir oksit hücre ve doğal olarak formlar hematites (Fe2O3) ve içinde ferryhidrites olarak depolanır ((Fe3 +)2O3•0.5 H2O) fizyolojik şartlarda5altında. Bu tepkiler, özellikle ferrik formu, kurulan ve hidroksitler çok düşük çözünürlük var. Demir tutma sonuç olarak çözüm pH tarafından etkilenir ve büyük ölçüde bir katı pH 56yukarıdaki durumda.
Yoksul çözünürlük ve yüksek reaktivite Fe göz önüne alındığında, onun transfer bitki doku ve organları arasında uygun şelat molekülleri ile ilişkilendirilmiş olması gerekir. Ayrıca, onun redoks durumlar arasında demir çelik ve demir formlar1 kontrol altına alınmalı. Yaprakları içinde demir yaklaşık % 80'i içinde biyosentezi cytochromes, klorofil ve diğer heme moleküller elektron taşıma sistemi önemli rolleri nedeniyle fotosentetik hücrelerde bulunur ve Fe-S oluşumunda7kümeleri. Hücre içinde aşırı demir söz konusu olduğunda, metal ferritin molekülleri8' depolandığı çarpıtması içine fazla translocated.
Demir bitki dokularda çeşitli yöntemler, dahil alev Atomik Absorpsiyon spektroskopisi9 (FAAS) veya Renkölçer deneyleri10, ikincisi çok daha hassas olmak eski tarafından ölçülebilir. FAAS tek tek öğeleri elektromanyetik emisyon temelinde bir örnek elemental kompozisyonu belirlemek sağlar son derece hassas bir tekniktir. FAAS metal iyonları atomik Amerika'ya örnek, alev ısı tarafından verilen bir iyon zemin durumuna geri döndüğünde iyon uyarma ve belirli bir dalga boyu emisyon yol dönüştürür. Farklı iyonları emisyonları monokromatör tarafından ayrılmış ve bir emme sensör11tarafından algılandı. FAAS böylece doğrudan demir konsantrasyonları ölçmek için hizmet vermektedir. Ancak, biyolojik dokularında demir görüntülenmesi için diğer teknikleri kullanılabilir. İndüktif Eşleşmiş Plazma kütle spektroskopisi (ICP-MS)12 demir ve diğer eser elementler ölçmek için çok hassas bir tekniktir ancak ekipman, FAAS ve ICP-MS, için hem de eksikliği sık karşılaşılan bir sorundur. Öte yandan, demir ölçüm thiocyanate colorimetry13 tarafından hassas yoksun ve örnekleri arasında küçük farklılıklar algılamak başarısız olur. Prusya14,15,16,boyama17 potasyum demir ferrocyanide (K4Fe(CN)6) Fe katyonlar, üreten ile reaksiyon dayalı bir dolaylı Yöntem mavidir bir güçlü mavi renk ve hayvan ve bitki dokusu histolojik bölümlerini nitel demir algılama için kullanılır.
Metalik (sıfır-valent) demir Yerkabuğu içinde nadirdir. Demir ortamında hakim complexed iyonik formu çoğunlukla demir demir nispeten daha anoksik ortamlarda bol olmak ve aerobik Siteler'de predominating ferrik demir ile çevresinde, oksijen miktarına göre belirlenir. Demir demir oksidasyonu sorumlu ajanlar kez anoksik ve asidik ortamda18farklı olsa da bu ikinci formu aynı zamanda son derece asidik ortamlarda, hakimdir. Ne zaman demir %4 oranında çözündürüldükten bir aerobik ortamda (pH 0) HCl, seyreltilmiş demir büyük bir kısmını var demir (Fe3 +)19,20biçimi olarak.
Fe iyonları ile K4Fe(CN)6 arasında reaksiyonlar aşağıdaki gibidir:
Fe3 +: FeCl3 + K4Fe(CN)6 KFe(III)Fe(II)(CN)6¯ + 3KCl =
Fe2 +: 4 FeCl2 + 2 K4Fe(CN)6 Fe4(Fe(CN)6)2 + 8 = KCl
Bu da çalışmanın, Prusya mavi boyama çözüm demir düzeyleri ölçmek için yararlı olabilir olup olmadığını sordu.
Başlangıçta, sulu çözüm Fe'de konsantrasyon ve Prusya mavi boyama arasındaki korelasyon doğrulanmadı. Fe (olarak FeCl2, FeCl3 veya ikisinin bir 1:1 karışımı) konsantrasyon sulu çözümler hem atomik Spektroskopi ve absorbans (OD) tarafından Prusya Mavisi eklenmesinden sonra ölçüldü. Şekil 1 her yöntemi ile elde edilen ölçümler için doğrusal regresyon eğrileri gösterir. Prusya mavi Yöntem Nicel analiz çözümde demir konsantrasyonunun kullanılabilir sonucuna vardı.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57408/57408fig1.jpg"> Şekil 1: Fe konsantrasyonu arasında doğrusal regresyon ölçülen FAAS ve ışık absorbans tarafından (OD, 715 nm) Prusya mavi yöntemiyle elde edilen. Mavi kareler ve çizgi Fe2 + çözüm temsil, Fe3 + çözüm ve siyah kareler kırmızı kareler ve çizgi temsil ve satır temsil Fe2 + ve Fe3 +arasında 1:1 karışımı. Aşağıdaki regresyon elde edilmiştir: [Fe2 +] 3 + 123 x OD = r = 0.996, R2 = 0.989; [Fe3 +] 1 + 292 x OD = r 0.999, R2 = 0.997; = ve [Fe2 + / 3 +] 11 + 146 x OD = r 0.983, R2 = 0.956 =. Fe2 + donör FeCl2 ve Fe3 + donör FeCl3oldu. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57408/57408fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
Renkölçer Prusya mavi yöntemi kantitatif demir bitki doku analizi için uyarlamak için tütün yaprağı külleri demir içeriği alev emme atomik Spektroskopi ve Prusya mavi boyama tarafından ölçüldü. İyi korelasyon sonuçlarından tarafından iki teknik arasında yapıldı.

<table><tbody><tr><td>Pussian Blue Millex Şırınga Filtre Ünitesi için Potasyum Hekzasiyanoferrat (II)</td> <td>Fisher Chemical</td><td>14459-95-1</td><td>Reaktifi</td></tr><tr><td>, Flakon Havalandırması 0.22 & mu; m</td><td>Millec</td><td>SLGP033RS</td><td>Külleri filtrelemek için kullanılan filtre +% 4 HCl</td></tr><tr><td>Çözeltisi Sintilasyon Şişeleri</td><td>Fisherbrand</td><td>03-337-4</td><td>Yakma işlemi sırasında kuru toz bitki materyalini tutmak için kullanılır.</td></tr><tr><td>Tek Kullanımlık Şırınga 10 ml</td><td>Medi-Plus</td><td>1931</td><td>Filtrasyon sırasında kullanılan şırınga</td></tr><tr><td>Hidroklorik asit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>231-595-7</td><td>Külleri seyreltmek ve malzemeleri temizlemek için %4'lük HCl çözeltisinde kullanılır</td></tr><tr><td>Tütün, Nicotiana tabacum cv. Samsun NN</td><td>Prof. Simon Barak'tan temin edilmiştir ve Zaccai Laboratuvarı'nda</td> <td>rutin olarak kullanılmaktadır.Barak S, Nejidat A, Heimer Y, Volokita M. Tütün fidelerinde glikolat oksidaz geninin transkripsiyonel ve transkripsiyon sonrası regülasyonu. Bitki Moleküler Biyolojisi. 2001 Mart 1; 45(4):399-407.</td><td>Bu protokolde kullanılan tütün çeşidi</td></tr><tr><td>Cam Yünü (Taş Yünü)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>659997-17-3</td><td>Fırında numune yakma işleminde kullanılır.</td></tr></tbody></table>

demir içeriği tesislerinde ölçme kolorimetrik yöntemi

A Colorimetric Method for Measuring Iron Content in Plants

Demir, yaşayan organizmalar, en önemli mikro basic süreçler, solunum ve fotosentez gibi ilgilenmektedir. Demir içeriği tesislerinde kuru ağırlığının yaklaşık % 0,009 tutarında tüm organizmalarda oldukça düşüktür. Bugüne kadar bitki dokularında demir konsantrasyonu ölçmek için en doğru yöntem alev emme atomik Spektroskopi biridir. Bununla birlikte, bu yaklaşım pahalı ve zaman alıcı ve özel ekipman değil sık bitki laboratuvarlarında bulunan gerekir. Bu nedenle, rutin olarak kullanılan basit, henüz doğru yöntemi gereklidir. Renkölçer Prusya Mavisi yöntemi düzenli olarak nitel demir hayvan ve bitki histolojik bölümlerde boyama için kullanılır. Bu çalışmada, Prusya Mavisi yöntemi için nicel ölçümler demir tütün yaprakları uyarlanmış. Biz bu yöntemi kullanarak atomik Spektroskopi ve Prusya Mavisi demir içeriği aynı örnekte ölçmek ve bir doğrusal regresyon bulundu boyama doğruluğunu doğrulanmış (R2 0.988 =) iki prosedür arasındaki. Prusya Mavisi yöntemi kantitatif demir ölçüm bitki dokularında için kesin, basit ve ucuz olduğu sonucuna varıldı. Ancak, burada sunulan doğrusal regresyon örnek ve reaktif arasındaki potansiyel etkileşimler nedeniyle diğer bitki türleri için uygun olmayabilir. Bir regresyon eğrisi kurulması böylece farklı bitki türü için gereklidir.

Bu iletişim kuralı doğru şekilde işlenirken, Prusya mavi ve atomik Spektroskopi yöntemlerle elde edilen sonuçlar arasında mükemmel ilişki almalıyız. Bu nedenle, Prusya mavi yöntemi kolayca demir konsantrasyonu bitki örneklerinde, doğru bir ölçüm elde etmek için aşağıdaki deneyde yansıtıldığı gibi kullanılabilir.
Tütün bitkiler iletişim kuralında tanımlandığı gibi büyüdü ve farklı demir konsantrasyonları içeren su ile sulanan (0,...

Biz demir içeriği bitki dokularında Renkölçer Prusya Mavisi yöntemini kullanarak ölçmek için basit ve güvenilir bir iletişim kuralı mevcut.

Demir içeriği tesislerinde ölçme kolorimetrik yöntemi

Iron, one of the most important micronutrients in living organisms, is involved in basic processes, such as respiration and photosynthesis. Iron content ...

Sadece tıbbi olarak, biyoloji alanındaki önemli bir soruyu cevaplamaya yardımcı olabilir. Biyoloji çekirdek örneklerinde demiri nasıl kolayca ölçebileceğimiz gibi. Bu tekniğin ana girişimi, üretilmesinin kolay ve çok hassas bir kolorimetrik teknik olmasıdır.Bu tekniği tercih ederken demir bulaşmasından kaçınmalısınız. Bu yöntemin görsel gösterimi, farklı adımlarını anlamanıza yardımcı olacaktır. Bu işleme başlamak için, beş santimetreye beş santimetrelik kapları standart tencere ortamıyla doldurarak hazırlayın.Her tencereye bir tütün tohumu ekin. Bitkileri, 23 santigrat derecelik uzun gün koşullarında sabit bir sıcaklıkta olan bir büyüme odasına aktarın. Saksıdan su akana kadar musluk suyu ile sulama yapın ve bitkileri yaklaşık 50 gün boyunca büyütün.Bu süreden sonra, sulamada deney için uygun konsantrasyonlarda demir işlemlerine başlayın. Bitkileri altı ila sekiz gün boyunca her iki günde bir bu solüsyonla sulayın. Ardından, herhangi bir metal ekipman kullanmamaya dikkat ederek yaprakları gövdeden elinizle ayırın.Çift damıtılmış suyla doldurulmuş bir sprey şişesi kullanarak her yaprağı temizleyin. Yaprakları bir kağıt havlu üzerinde kurulayın ve ardından bir kağıt torbaya aktarın. Yaprak dolgulu poşetleri iki ila üç gün boyunca 80 santigrat derece sabit bir sıcaklığa ayarlanmış bir fırına koyun.Harcı ve havaneli %4'lük bir hidroklorik asit çözeltisi ile iki kez temizleyin. Ve kuruması için bir filtre kağıdı kullanın. Havan ve havaneli kullanarak kuru yaprakları toz haline getirin.Daha sonra tozu steril 15 mililitrelik plastik tüplere aktarın. İlk olarak, kapağı olmayan yeni, kapalı 20 mililitrelik bir parıldama şişesini tartın. Ya ağırlığı not edin ya da tartıya darasını alın.Sonra ezilmiş yaprakları ekleyin. Numuneyi şişede tartın ve ağırlığı not edin. Şişeyi kapatmak için taş yünü kullanın.Kontrol olarak kullanmak için numune eklemeden üç ek şişeyi tartın ve her bir ağırlığı not edin. Ardından, numuneyi ve kontrol şişelerini bir fırına aktarın. Yaprakları metin protokolünde belirtildiği gibi yakın.Bundan sonra, numuneleri yaklaşık 100 santigrat dereceye kadar soğumaya bırakın. Ağır eldivenler ve cımbız kullanarak, şişeyi dışarıda tuttuğunuzdan emin olarak numuneleri fırından çıkarın. Şişeleri düz bir yüzeye yerleştirin.Taş yününü çıkarın ve şişeleri orijinal kapaklarıyla kapatın. Ardından, üç kontrol şişesini tartın ve ortalama kilo alımlarını hesaplayın. Ağırlık kazancı kül ağırlığının %1'ine eşit veya üzerindeyse, bu değeri ölçüm hatasının tahmini olarak kullanın.15 mililitrelik bir plastik tüp tartın. Ya ağırlığı kaydedin ya da tartıya darasını alın. Sonra külleri tüpe aktarın.Kül ağırlığı olan bu değeri kaydedin. Daha sonra, küllere bir molar hidroklorik asit çözeltisinden beş mililitre ekleyin. Külleri 22 mikrometrelik bir filtreden süzün.Daha sonra, aynı filtreden bir molar hidroklorik asit çözeltisinden beş mililitre daha ekleyin ve bu da 10 mililitrelik bir nihai numune hacmine yol açar. Bundan sonra, atomik spektroskopi ile ölçüm için her numuneden dört mililitre çıkarın. Ve metin protokolünde belirtildiği gibi kül gramı başına demir konsantrasyonunu belirleyin.Başlamak için, Prusya mavisi çözeltisini hazırlamak için 100 mililitre çift damıtılmış suya dört gram potasyum ferrosiyanür ekleyin. Karıştırmak için girdap yapın ve kullanıma hazır olana kadar 4 santigrat derecede saklayın. Kullanıma hazır olduğunda, boş çözelti olarak işlev görmek için 50 mililitre Prusya mavisi çözeltisini 50 mililitre bir molar hidroklorik asit ile karıştırın.Ardından, daha önce elde edilmiş bir numunenin 0,5 mililitresini 0,5 mililitre Prusya mavisi çözeltisiyle karıştırmak için bir pipet kullanın. Bu karışımı en az bir dakika, ancak beş dakikadan az bir süre dinlendirin. Bu karışımı bir küvete aktarın ve 715 nanometredeki optik yoğunluğu ölçmek için bir spektrofotometre kullanın.Ardından, kül gramı başına optik yoğunluğu belirleyin ve metin protokolünde belirtildiği gibi demir konsantrasyonları arasındaki doğrusal regresyonu çizin. 21 tütün yaprağı örneğinden elde edilen temsili sonuçlar, sulama suyundaki demir konsantrasyonunun yapraktaki demir içeriğini büyük ölçüde etkilediğini göstermektedir. 21 temsili numunenin tümünün spektrumları daha sonra Prusya mavisi yöntemiyle test edilir.Burada görüldüğü gibi, 715 nanometredeki absorbans, farklı konsantrasyonlarda demir iki ve demir üç içeren çözeltileri ölçerken en uygun dalga boyudur. Atomik spektroskopi ile elde edilen demir konsantrasyonu değerlerinin Prusya mavisi yöntemiyle elde edilen absorbans değerlerine karşı çizilmesiyle elde edilen doğrusal bir regresyon eğrisi, aynı bitki türünden yeni numunelerin analiz edilmesini sağlar. HCL ile çalışmanın son derece tehlikeli olabileceğini unutmayın.Ve bu işlem yapılırken her zaman göz koruması gibi önlemler alınmalıdır. Doğrusal regresyonda, sonuçların gerçekçi bir aralıkta olduğunu doğrulamak önemlidir. Geliştirildikten sonra, bu teknik biyoloji araştırmacısının gıda üretimi veya biyoremediasyon için ek bitkileri keşfetmesine yardımcı olabilir.

a-colorimetric-method-for-measuring-iron-content-in-plants

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Biyokimya

Bu videoda, fare karaciğer dokusundaki hem olmayan demir içeriğini belirlemek için kolorimetrik tabanlı bir yöntemi açıklıyoruz. Batofenantrolin sülfonat, ferrik demiri şelatlanabilir demirli demire dönüştüren bir indirgeyici ajanın varlığında kromojenik substrat olarak kullanılır.

Bathofenantrolin Sülfonat Bazlı Kolorimetrik Test: Fare Karaciğer Dokusunda Heme Olmayan Demirin Kantitasyonu İçin Basit ve Hızlı Bir Yöntem

Bu video, karmaşık gıda kaynaklarında demir biyoyararlanımını değerlendirmek için bir in vitro tekniği göstermektedir. Teknik, farklılaşmış Caco-2 hücreleri tarafından demir alımı ile birlikte insan sindiriminin simülasyonunu birleştirir. Hücre içi ferritin oluşumu, hücresel demir alımı için bir belirteç görevi görür.

Caco-2 Hücre Biyo-Testi: Karmaşık Gıda Kaynaklarında Demir Biyoyararlanımını Ölçmek için İn Vitro Bir Yöntem

Bu video, bitki dokularında bulunan sindirilebilir karbonhidratları ölçme yöntemini açıklar. Bu, beslenme ekolojisini, bitki-otobur etkileşimlerini ve besin ağı dinamiklerini incelemek için çeşitli bitki dokularından veri toplamaya yardımcı olur.

Bitki Dokularında Yapısal Olmayan Karbonhidratların Miktar Tayini için Kolorimetrik Test

Bir laboratuvar ölçekli dikey akış yoluyla sütununda bir Prekambriyen demirli deniz upwelling sistemini simüle. Amaç O 2 ve Fe (II) ve nasıl jeokimyasal profillerini anlamaya siyanobakteriler üretmek O 2 olarak gelişmeye oldu. Sonuçlar, fotosentetik üretilen O 2, Fe (II) oksitlenmeye karşı Kemoklin kurulmasını göstermektedir.

Prekambriyen Deniz upwelling Sistemi Fotosentetik Bakteri Büyüme Keşfet bakımından zengin bir Demir (II) Laboratuar Simülasyonu

Bu demir redoks speksiyon yöntemi kapiller elektroforez-endüktif plazma kütle spektrometresi ile birleştirilmiş plazma kütle spektrometresi ve numune istifleme ile tek bir vadede kısa analiz ile birlikte dayanmaktadır. Bu yöntem, çeşitli doku lar ve biyosıvı örnekleri arasında demir redoks türleri için hızlı bir şekilde analiz eder ve düşük niceleme limitleri sağlar.

Demir Redoks Türlerinin Nicelleştirilmesi İçin Kapiller Elektroforez-Endüktif Birleştirilmiş Plazma Kütle Spektrometresi (CE-ICP-MS) Kurulumu (Fe(II), Fe(III))

Bu makalede, fare gebeliğinde demir taşıma çalışmaları için transferrine bağlı radyoaktif olmayan izotopik demirin nasıl hazırlanacağı ve uygulanacağı gösterilmektedir. Fetoplasental bölmelerde izotopik demirin miktarının belirlenmesi yaklaşımı da açıklanmaktadır.

Radyoaktif Olmayan Demir İzotopları Kullanarak Fare Plasentası In Vivo Boyunca Demir Taşımacılığının Ölçülmesi

Burada, hayvan dokularındaki heme olmayan demir içeriğinin ölçümü için, çoğu laboratuvarda kolayca uygulanabilen basit, köklü bir kolorimetrik test kullanılarak bir protokol sağlanmaktadır.

Batofenantropin Bazlı Kolorimetrik Tahlil Kullanılarak Doku Non-Heme Demir İçeriğinin Ölçülmesi

Demir (Fe) biyoyararlanımı için Caco-2 hücre biyotahlili, gıdalardan, gıda ürünlerinden, takviyelerden, yemeklerden ve hatta diyet rejimlerinden Fe biyoyararlanımını değerlendirmek için uygun maliyetli ve çok yönlü bir yaklaşımı temsil eder. İnsan çalışmalarına tamamen doğrulanmış, Fe biyoyararlanımı çalışmaları için en son teknolojiyi temsil eder.

Gıda Demir Biyoyararlanımının Ölçümü için Caco-2 Hücre Biyotahlili

Yeni bileşiklerin demiri şelatlama yeteneğini hızlı ve ucuz bir şekilde doğrulayabilen bir floresan tahlili tarif ediyoruz. Tahlil, bileşiklerin, zayıf demir şelatlama floresan probu Calcein'in demir bağlama aktivitesini aşma yeteneğini ölçer ve şelasyon meydana geldiğinde floresanda ölçülebilir bir artışa neden olur.

Yeni bileşiklerin demiri şelatlama yeteneğini doğrulamak için ölçülebilir ve ucuz hücresiz floresan yöntemi 

Bu protokol, dokularda, özellikle beyinde demir birikiminin dağılımını ve miktarını değerlendirmek için yöntemler sunar. Protokol, numune hazırlama, Perls/DAB boyama, görüntü yakalama ve veri analizi prosedürlerini detaylandırır.

5xFAD Farelerin Beyinlerinde Demir Birikiminin Perls/DAB Boyama ile Değerlendirilmesi

Bu çalışma, çevresel numunelerde, biyolojik numunelerde ve yiyecek ve içeceklerde Fe, Cr, As ve F'yi tespit etmek için bir E-Eye-Enable POCT cihazı tasarlama ve geliştirme protokolünü tartışmıştır. Yaklaşık 2000 numune test edildi ve sonuçlar altın standart tekniğe uygun.

Çevresel, Biyolojik ve Gıda Numunelerinde Fe, Cr, F ve As'ın Yerinde Miktar Tayini için TD-DFT Kılavuzlu Gelişmiş E-Göz Algılama Tekniği

Keşfedin bitki dokularında demir içeriğini Prusya Mavisi kolorimetrik yöntemiyle hassas şekilde ölçme tekniğini. Bu güvenilir protokol, biyoloji araştırmacılarına demir kirliliğinden kaçınarak doğru sonuçlar elde etme imkanı sunar.

Demir içeriği tesislerinde ölçme kolorimetrik yöntemi

Daha fazla video keşfet