Name: Fare Distal kolostomi, C57BL/6 farelerde saptırma kolit roman modeli (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-07-12T13:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 20 s
Description: Öğrenin, C57BL/6 farelerde distal kolostomi yöntemiyle saptırma koliti modelini oluşturmayı. Bu teknik, genetiği değiştirilmiş hayvanlar kullanmadan bağışıklık sistemi ve mikrobiyom etkileşimlerini incelemeyi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Tüm yöntem tanımlamak burada hayvan hastalıklarıyla ilgili hükümet yetkilisi (Landesamt für Landwirtschaft, Lebensmittelsicherheit und Fischerei Mecklenburg-Vorpommern, (LALLF M-V)) tarafından onaylanmış olması.
1. ameliyat öncesi bakım ve hayvan hazırlanması
<ol><li>Hayvan tesisi vardıklarında, hayvanlar (C57Bl/6) benzer boyutta gruplara ayırmak, her grup birlikte kafes ve gruplar deneyler sabit tutmak. Not: hayvanlar aynı cinsiyetten kullanın. Açıklanan sonuçlar erkek fare ile elde edilmiştir. Not: erkek hayvanlar, böylece bir hiyerarşi kurulan olduklarında 7 hafta-in yaş birlikte başlayan kafes grupları kullanılıyorsa, böylece deneyler sırasında saldırgan davranış riskini en aza.</li>
	<li>En az bir hafta önce ameliyat, yüksek bir enerji geçiş (> 14 MJ/kg) ve yüksek protein (> % 20) tüm temel eser elementler ve vitamin içeren yem (ayrıntılı bilgi için bkz: malzeme listesi). Not: tüm fareler tartmak en az 25 g ameliyat yapıldığında sizi temin ederim.</li>
	<li>Anestezi ve analjezi ketamin (87 mg/kg ı.p.) ve xylazine hidroklorür (13 mg/kg ı.p.) mayi enjeksiyonu ile ikna etmek. Mekanik stimülasyon, örneğin ayak adım, motor yanıt olmadan fare tahammül kadar bekleyin.</li>
	<li>Narcotized fareyi bantları istikrarlı işlemi sırasında konumlandırma ve ezici bir vücut ısı kaybı kaçınarak güvence altına alınması operasyon masasında konumlandırılmış bir ısı altlık üzerine sırtüstü pozisyonda güvenli. Not: Isı temelini yüzey sıcaklığı 36 ° c ile 40 ° C arasında olmalıdır; Ameliyathane sıcaklık 21 ° c olmalıdır</li>
</ol>2. distal kolostomi işlemi
<ol><li>Karın saç tıraş. Ameliyat başlamadan önce dezenfekte işlemi alanını kullanarak üç kez alkol % 70 ve bir iodophor. Aseptik koşullar için güvence altına almak için operasyon alanı asmak.</li>
	<li>Karın kasları ve linea boyunca karın zarını incising tarafından 15-mm medyan laparatomi gerçekleştirmek alba, böylece kan kaybını en aza.</li>
	<li>İki DeBakey atravmatik forseps kullanın, dikkatle çekum, terminal ileum ve artan ve enine kolon periton boşluğundan çek. Not: kesinlikle mezenterik yapıları için yaralanma önlemek için bağırsak mekanik işleme sınırlamak için dikkatli olun.</li>
	<li>Cecal pole, artan kolon ve ince bağırsak (Şekil 1a ve 1b) tanımlayın. Not: Doğru artan kolon kolostomi doğru yerleşimini temel tanımlamasıdır. İleocecal bölge anatomisi belirsiz olduğu durumlarda Peyer's yamalar varlığı bağırsağın tanımlar ve iki nokta üst üste kurulan dışkı varlığını karakterize.</li>
	<li>Gelecekteki kolostomi konumunu belirlemek için bir cetvel kullanın. Bu 20 mm distal ileocecal Vana distal kolostomi için yer almalıdır.</li>
	<li>Sağ üst kadranda Karın duvarındaki bir ikinci 3 mm kesi yapmak. Önceden tanımlanan iki nokta üst üste segment döngü bozmaya değil dikkatli olmak bir döngü oluşturmak için bu kesi yoluyla çek.</li>
	<li>Dikkatli bir 22'lik esnek IV Kanül mesocolon üzerinden geçmek. Mezenterik damar yapıları zarar vermemesi için dikkat ediniz.</li>
	<li>Bağırsak periton boşluğuna dönün.</li>
	<li>Basit dikiş ve tekrar emilebilen dikiş (Örneğin, polyglactin 910 veya polyfil 4-0 1/2 c) kullanarak cilt esnek tüp her iki ucunu düzeltmek.</li>
	<li>Laparotomi kapatmadan önce sıvı resüsitasyon mayi iğne 0,5 mL % 0,9 serum kullanarak gerçekleştirin.</li>
	<li>Karın zarını ve kas katmanı Tekrar Emilebilen dikiş (Örneğin, polyglactin 910 veya polyfil 4-0 1/2 c) kullanarak sürekli dikiş ile kapatın. Cilt Tekrar Emilebilen dikiş (örneğin, polyglactin 910 veya polyfil 4-0 1/2 c) kullanarak sürekli dikiş ile kapatın.</li>
	<li>Exteriorized kolon döngü iyi makas kullanarak bir alt toplam transeksiyon gerçekleştirerek açın. Bıçaklanmasından tüm yaralanma kaçının. İki nokta üst üste tamamen transect değil.</li>
	<li>Karın zarını için üç tek tam-kalınlık dikiş kullanarak her kolostomi açılış saptamak ve monofil, absorbe dikiş kullanarak cilt (Örneğin, polydioxanone veya monofil 6-0 3/8s). Fonksiyonel bir bitiş kolostomi olduğunu, afferent döngü ve müköz fistül olan efferent döngünün açıkça bu noktada (Şekil 1 c) ayrılır. Not: Operasyon süresi 20 dakikadan daha az sıvı, ısı kayıpları sınırlamak için olması gerekir.</li>
	<li>Sonra ameliyat, bitirme bir ultrasonik banyo üretici yönergelerine uygun bir dezenfeksiyon aldehit içermeyen çözüm kullanarak aletler dezenfekte.</li>
</ol>3. sahte işlem (Colotomy)
<ol><li>1.1 adımları gerçekleştirin. 2.4.</li>
	<li>Gelecekteki colotomy konumu belirlemek için bir cetvel kullanın. Colotomy ileocecal Vana aynı mesafe kolostomi deneysel grubunda olarak yerleştirilmiş olmalıdır.</li>
	<li>İki nokta üst üste açık en az 2/3 iyi makas kullanarak onun çevresi.</li>
	<li>Yakın colotomy tek bir katman ile tam kalınlıkta bir kullanarak monofil, absorbe dikiş dikiş kesintiye (Örneğin, polydioxanone, monofil 6-0 3/8s). Not: Operasyon süresi 20 dakikadan daha az sıvı ve termal kayıp sınırlayan bir experimented cerrah olmalıdır.</li>
	<li>2.10 adımları gerçekleştirin. , 2.11. ve 2.14.</li>
</ol>4. ameliyat sonrası bakım
<ol><li>Hayvanlar için onların kafes dönmek. 37 ° C (Örneğin, bir kızılötesi lamba ile) iyi bir atmosfer sağlar fare tam olarak uyanık olana. Daha sonra fareler bir sıcaklık ve nem düzenlenir ortamda (21 ° C; % 30 ± % 10 bağıl nem) tutmak. Yiyecek ve içme suyu ücretsiz erişim sağlar. Sıvı alımını kolaylaştırmak için suya batırılmış ek hayvan yemi sağlar.</li>
	<li>0.1 mg/kg vücut ağırlığı buprenorfin enjekte edilerek ameliyat sonrası analjezi başlatmak hayvanlar mekanik stimülasyon yanıtı gösterdiğinizde SC. Solunum depresyon önlemek dikkatli olun.</li>
	<li>İçme suyu ile 1 mg/mL tramadol sürekli analjezi için ameliyat sonrası ilk haftasında ek.</li>
	<li>Hareketlilik nedeniyle azalan sıvı alımı için telafi etmek için azaltılmış, ameliyat sonrası ilk haftasında bir katı iç yastık içinde belgili tanımlık kafes kaynağı.</li>
	<li>İlk hafta, ilk ay kalan sırasında her iki günde ve üçüncü hergün Kleinwort vd içinde açıklanan hastalık şiddeti puanı kullanarak ayın ikinci sırasında günlük sırasında hayvanlar ve skor hayvan davranışları tartmak 6.</li>
</ol>

<ol><li>Glotzer, D. J., Glick, M. E., Goldman, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proctitis+and+colitis+following+diversion+of+the+fecal+stream%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Proctitis and colitis following diversion of the fecal stream.</a> Gastroenterology. 80, 438-441 (1981).</li>
<li>Morson, B., Dawson, I. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMorson%2C+B+%22Gastrointestinal+Pathology%22">Gastrointestinal Pathology</a>. , Blackwell Scientific Publications. London. (1972).</li>
<li>Whelan, R. L., Abramson, D., Kim, D. S., Hashmi, H. F. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/8153859">Diversion colitis. A prospective study.</a> Surg Endosc. 8, 19-24 (1994).</li>
<li>Haas, P. A., Fox, T. A., Szilagy, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endoscopic+examination+of+the+colon+and+rectum+distal+to+a+colostomy%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Endoscopic examination of the colon and rectum distal to a colostomy.</a> Am J Gastroenterol. 85, 850-854 (1990).</li>
<li>Valatas, V., Bamias, G., Kolios, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+colitis+models%3A+Insights+into+the+pathogenesis+of+inflammatory+bowel+disease+and+translational+issues%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Experimental colitis models: Insights into the pathogenesis of inflammatory bowel disease and translational issues.</a> Eur J Pharmacol. 759, 253-264 (2015).</li>
<li>Kleinwort, A., Döring, P., Hackbarth, C., Heidecke, C. D., Schulze, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deviation+of+the+Fecal+Stream+in+Colonic+Bowel+Segments+Results+in+Increased+Numbers+of+Isolated+Lymphoid+Follicles+in+the+Submucosal+Compartment+in+a+Novel+Murine+Model+of+Diversion+Colitis%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Res+Int%22%5BJournal%5D)">Deviation of the Fecal Stream in Colonic Bowel Segments Results in Increased Numbers of Isolated Lymphoid Follicles in the Submucosal Compartment in a Novel Murine Model of Diversion Colitis.</a> Biomed Res Int. 2017, 13(2017).</li>
<li>Tangjarukij, C., Navasumrit, P., Zelikoff, J. T., Ruchirawat, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+pyridoxine+deficiency+and+supplementation+on+hematological+profiles%2C+lymphocyte+function%2C+and+hepatic+cytochrome+P450+in+B6C3F1+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunotoxicol%22%5BJournal%5D)">The effects of pyridoxine deficiency and supplementation on hematological profiles, lymphocyte function, and hepatic cytochrome P450 in B6C3F1 mice.</a> J Immunotoxicol. 6, 147-160 (2009).</li>
<li>Soave, O., Brand, C. D. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/1954740">Coprophagy in animals: a review.</a> Cornell Vet. 81, 357-364 (1991).</li>
<li>Ebino, K. Y., Yoshinaga, K., Suwa, T., Kuwabara, Y., Takahashi, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+prevention+of+coprophagy+on+pregnant+mice--is+coprophagy+beneficial+on+a+balanced+diet%5BTitle%5D)+AND+%22Jikken+Dobutsu%22%5BJournal%5D)">Effects of prevention of coprophagy on pregnant mice--is coprophagy beneficial on a balanced diet.</a> Jikken Dobutsu. 38, 245-252 (1989).</li>
<li>Babickova, J., Tothova, L., Lengyelova, E., Bartonova, A., Hodosy, J., Gardlik, R., Celec, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sex+Differences+in+Experimentally+Induced+Colitis+in+Mice%3A+a+Role+for+Estrogens%5BTitle%5D)+AND+%22Inflammation%22%5BJournal%5D)">Sex Differences in Experimentally Induced Colitis in Mice: a Role for Estrogens.</a> Inflammation. 38, 1996-2006 (2015).</li>
<li>Lee, S. M., Kim, N., Son, H. J., Park, J. H., Nam, R. H., Ham, M. H., Choi, D., Sohn, S. H., Shin, E., Hwang, Y. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Effect+of+Sex+on+the+Azoxymethane%2FDextran+Sulfate+Sodium-treated+Mice+Model+of+Colon+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cancer+Prev%22%5BJournal%5D)">The Effect of Sex on the Azoxymethane/Dextran Sulfate Sodium-treated Mice Model of Colon Cancer.</a> J Cancer Prev. 21, 271-278 (2016).</li>
<li>Angele, M. K., Pratschke, S., Hubbard, W. J., Chaudry, I. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gender+differences+in+sepsis%3A+cardiovascular+and+immunological+aspects%5BTitle%5D)+AND+%22Virulence%22%5BJournal%5D)">Gender differences in sepsis: cardiovascular and immunological aspects.</a> Virulence. 5, 12-19 (2013).</li>
<li>Brown, R. Z. <a target="_blank" href="http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.2307/1943592/abstract">Social Behaviour, reproduction, and population changes in the house mouse (Mus musculus L).</a> Eccological Monographs. 23, 788-795 (1953).</li>
<li>Poole, T. B., Morgan, H. D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differences+in+aggressive+behaviour+betweeen+male+mice+%28Mus+musculus+L.%29+in+colonies+of+different+sizes%5BTitle%5D)+AND+%22Animal+Behaviour%22%5BJournal%5D)">Differences in aggressive behaviour betweeen male mice (Mus musculus L.) in colonies of different sizes.</a> Animal Behaviour. 21, 788-795 (1973).</li>
<li>Pasquarelli, N., Voehringer, P., Henke, J., Ferger, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+a+change+in+housing+conditions+on+body+weight%2C+behavior+and+brain+neurotransmitters+in+male+C57BL%2F6J+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Effect of a change in housing conditions on body weight, behavior and brain neurotransmitters in male C57BL/6J mice.</a> Behav Brain Res. 333, 35-42 (2017).</li>
<li>Langgartner, D., Foertsch, S., Fuchsl, A. M., Reber, S. O. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/27788633">Light and water are not simple conditions: fine tuning of animal housing in male C57BL/6 mice.</a> Stress. 20, 10-18 (2017).</li>
<li>Nicholson, A., Malcolm, R. D., Russ, P. L., Cough, K., Touma, C., Palme, R., Wiles, M. V. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19930822">The response of C57BL/6J and BALB/cJ mice to increased housing density.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 48, 740-753 (2009).</li>
<li>Buchler, G., Wos-Oxley, M. L., Smoczek, A., Zschemisch, N. H., Neumann, D., Pieper, D. H., Hedrich, H. J., Bleich, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strain-specific+colitis+susceptibility+in+IL10-deficient+mice+depends+on+complex+gut+microbiota-host+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Inflamm+Bowel+Dis%22%5BJournal%5D)">Strain-specific colitis susceptibility in IL10-deficient mice depends on complex gut microbiota-host interactions.</a> Inflamm Bowel Dis. 18, 943-954 (2012).</li>
<li>Nakanishi, M., Tazawa, H., Tsuchiya, N., Sugimura, T., Tanaka, T., Nakagama, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+strain+differences+in+inflammatory+responses+of+colonic+mucosa+induced+by+dextran+sulfate+sodium+cause+differential+susceptibility+to+PhIP-induced+large+bowel+carcinogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Sci%22%5BJournal%5D)">Mouse strain differences in inflammatory responses of colonic mucosa induced by dextran sulfate sodium cause differential susceptibility to PhIP-induced large bowel carcinogenesis.</a> Cancer Sci. 98, 1157-1163 (2007).</li>
<li>Mahler, M., Bristol, I. J., Leiter, E. H., Workman, A. E., Birkenmeier, E. H., Elson, C. O., Sundberg, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+susceptibility+of+inbred+mouse+strains+to+dextran+sulfate+sodium-induced+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Differential susceptibility of inbred mouse strains to dextran sulfate sodium-induced colitis.</a> Am J Physiol. 274, 544-551 (1998).</li>
<li>Mekada, K., Abe, K., Murakami, A., Nakamura, S., Nakata, H., Moriwaki, K., Obata, Y., Yoshiki, A. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19448337">Genetic differences among C57BL/6 substrains.</a> Exp Anim. 58, 141-149 (2009).</li>
<li>Sellers, R. S., Clifford, C. B., Treuting, P. M., Brayton, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunological+variation+between+inbred+laboratory+mouse+strains%3A+points+to+consider+in+phenotyping+genetically+immunomodified+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+Pathol%22%5BJournal%5D)">Immunological variation between inbred laboratory mouse strains: points to consider in phenotyping genetically immunomodified mice.</a> Vet Pathol. 49, 32-43 (2012).</li>
<li>Mills, C. D., Kincaid, K., Alt, J. M., Heilman, M. J., Hill, A. M. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10843666">M-1/M-2 macrophages and the Th1/Th2 paradigm.</a> J Immunol. 164, 6166-6173 (2000).</li>
</ol>

Tüm yazarlar onlar rakip hiçbir ilgi alanlarına sahip bildirin.

Bu protokol için güvenilir bir şekilde sunulan DC fare modeli insan DC (Örneğin, iltihaplı barsak segmentleri, crypt kısalma ve indirimleri submukoza içinde lenfoid folikül gelişimi de novo histopatolojik özellikler üretir goblet hücre sayıları). Bu avantaj, kenara bu model çok benzer bir tetikleyici faktör tarafından indüklenen ve en çok etkilenen insanlarda olduğu gibi klinik seyir için hafif önem derecesi Orta olarak sunar.
Tekrarlanabilir sonuçlar ve kabul edilebilir peri...

Son yıllarda klasik iltihabi bağırsak hastalıkları (IBDs; farklı olmayan bulaşıcı kolit varlıkların önemli bir sayı i.e., Crohn hastalığı veya kolit ulcerosa) klinik ve histopathologically insanlarda karakterize. Uygun hayvan modeller kıt olduğundan bu kolit formları gelişimine lider patofizyolojik mekanizmaları tamamen kısmen anlaşılır değil. Saptırma kolit son zamanlarda açıklanan bu varlıklar biridir. Her ne kadar terimi 1980 yılında Glotzer1tarafından icat edildi, benzer bir fenotip ilk açıklaması Morson2tarafından 1972 yılında verildi. Hastalık enterostomy aktarma ile hastaların % %50 91 olarak gelişir ve3,4klinik şiddeti değişir. Amerika Birleşik Devletleri yaklaşık 120.000 kolostomi hastalarda yıllık insidansı göz önüne alındığında, bu hastalık varlık bir önemli sağlık sorunu teşkil etmektedir.
Bu iletişim kuralı geliştirme genel amacı bu kolit tetikleyici içinde insan DC görülen benzer kullanır ve bu birincil histopatolojik özellikler insan hastalık üretir fare bir DC modeli sağlamaktı. Fare kolit modellerin aksine, genetiği değiştirilmiş hayvanlar (Örneğin, 7 Il-transgenik fareler, N-cadherin baskın olumsuz fareler veya TGFβ- / - fareler), kolit indüksiyon bizim modelindeki gerektirmez uygulanması kimyasal maddeler (Örneğin, dextran sülfat sodyum (DSS) - bağlı kolit veya trinitrobenzene sülfonik asit (TNBS) - bağlı kolit) veya belirli hücre popülasyonlarının (olduğu gibi CD45RByüksek aktarım bağışıklık eksik farelerde transferini rahatsız edici kolit model) (bir reklam için bkz:5). Modellerin aksine, bizim DC modelinin sağlam bağışıklık sistemi bağışıklık mekanizması değerlendirilmesi dahil DC geliştirme sağlar. Hariç tutulan barsak bölümüne mukozal inflamasyon sınırlandırılması onun yankısı değerlendirilmesi üzerinde bağırsak bağışıklık diğer bölmeleri bağışıklık homeostazı gastrointestinal sistem diğer bölgelerinde mukozal bağışıklık sağlar (Örneğin , Peyer's yamalar ve mesenteriale lenf bezleri) ve tüm organizmanın bağışıklık homeostazı. Son olarak, bizim model hem yerel microbiome hem de beslenme antijenleri için normal yerel ortamdaki değişikliklerden kaynaklanan yerel inflamatuar uyaranlara kontrol mekanizmaları araştıran için uygun bir araç teşkil etmektedir.

<table><tbody><tr><td>Çalışma malzemesi</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>ısı altlığı, 6 watt</td><td>ThermoLux, Witte + Sutor GmbH</td><td>461265</td><td></td></tr><tr><td>Etanol %70 (metiletilketon ile)</td><td>Greifswald</td><td></td><td></td>Üniversite Hastanesi Eczanesi</tr><tr><td>Ahşap aplikatörler, küçük pamuk başlı tek taraflı, tahta çubuk, 150 mm uzunluk</td><td>Centramed GmbH, Almanya</td><td>8308370</td><td>çalışma alanının dezenfeksiyonu için</td></tr><tr><td>Makas</td><td>Aesculap (BRAUN)</td><td>BC064R</td><td></td></tr><tr><td>Atravmatik DeBakey forseps</td><td>Aesculap (BRAUN)</td><td>OC021R</td><td></td></tr><tr><td>İğne tutucu</td><td>Aesculap (BRAUN)</td><td>BM012R</td><td></td></tr><tr><td>Vasofix Güvenlik i.v. kanül 22G</td><td>Braun Melsungen AG, Almanya</td><td>4268091S-01</td><td></td></tr><tr><td>VICRYL Plus 4-0 menekşe örgülü; V-5 17 m 1/2c; 70 cm</td><td>ETHICON, Inc.</td><td></td><td></td>VCP994H</tr><tr><td>PDS II 6-0 monofil; V-18 13 mm 3/8c; 70 cm</td><td>ETHICON, Inc.</td><td>Z991H</td><td></td></tr><tr><td>BD Plastipak 1 mL (Steril iç kısmı olan iğneli şırıngalar)</td><td>BD Medical</td><td>305501</td><td></td></tr><tr><td>Triacid-N (N-Dodesilpropan-1,3-diamin)</td><td>ANTİSEPTİK, Almanya</td><td>18824-01</td><td>ultrasonik banyoda cerrahi aletlerin dezenfeksiyonu</td></tr><tr><td>İlaçlar</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ketamin %10, 100 mg/mL (ketamin hidroklorür)</td><td>selectavet, Dr. Otto Fischer GmbH</td><td>9089.01.00</td><td>87 mg/kg i.p.</td></tr><tr><td>Xylasel, 20 mg/mL (ksilazin hidroklorür)</td><td>seçici, Dr. Otto Fischer GmbH</td><td>400300.00.00</td><td>13 mg/kg ip</td></tr><tr><td>NaCl %0.9</td> <td>Braun Melsungen AG, Almanya</td><td>6697366.00.00</td><td></td></tr><tr><td>Buprenovet 0.3 mg/mL (buprenorfin)</td><td>Bayer, Almanya</td><td>PZN: 01498870</td><td>0.1 mg/kg s.c.</td></tr><tr><td>Tramal Damlalar, 100 mg / mL (tramadol hidroklorür)</td> <td>Gr&uuml; nenthal GmbH, Almanya</td><td>10116838</td><td>1 mg/mL içme suyu</td></tr><tr><td>Ceftriaxon-saar 2 g (seftriakson)&nbsp;</td><td>Cephasaar GmbH, Almanya</td><td>PZN: 08844252</td><td>25 mg/kg vücut ağırlığı i.p.</td></tr><tr><td>metronidazol 5 mg/mL</td><td>Braun Melsungen AG, Almanya</td><td>PZN: 05543515</td><td>12.5 mg/kg vücut ağırlığı i.p.</em</td></tr><tr><td>>Food</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ssniff M-Z Ereich</td><td>ssniff, Almanya</td><td>&nbsp; V1184-3</td><td></td></tr><tr><td>Katı İçecek Dehyprev Vit BIO, torbalar</td><td>TripleATrading, Hollanda</td><td>SDSHPV-75</td><td></td></tr><tr><td>Ekipman</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Nikon Eclipse Ci-L</td><td>Nikon Instruments Europe BV, Almanya</td><td></td><td>ışık mikroskobu</td></tr><tr><td>VetScan HM 5&nbsp;</td><td>Abaxis, ABD</td><td>770-9000</td><td>50 ve mikro veteriner hematoloji analizörü; l venöz EDTA-kan</td></tr><tr><td>Bandelin SONOREX (Ultrasonik banyo)</td> <td>Bandelin elektroniği, Almanya</td><td>RK 100 H</td><td>cerrahi aletlerin</td></tr> <tr><td>dezenfeksiyonuYazılım</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>NIS-Element BR4 yazılımı</td><td>Nikon Instruments Europe BV, Almanya</td><td></td><td></td></tr><tr><td>GraphPad Prism Sürüm 6</td><td>GraphPad Software, Inc.</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

fare distal kolostomi, c57bl/6 farelerde saptırma kolit roman modeli

Murine Distal Colostomy, A Novel Model of Diversion Colitis in C57BL/6 Mice

Saptırma kolit (DC) hastalarda aktarma enterostomy bir sonucu olarak dışkı akışından hariç barsak segmentleri ile meydana gelen sık bir klinik durumdur. Bu hastalığın etyolojisinde kötü tanımlanmış kalır ama bu klasik iltihabi bağırsak hastalıkları Crohn hastalığı ve ülseratif kolit gibi farklı görünüyor. Bu hastalık gelişimine lider patofizyolojik mekanizmaları çözmeye yönelik araştırma ciddi bir şekilde uygun bir fare modeli eksikliği tarafından engel olmuştur. Bu iletişim kuralı, bağışıklık sisteminin rolü ve microbiome DC geliştirilmesi ile etkileşimi kolaylaştırır DC fare modeli oluşturur. C57BL/6 hayvanlar kullanarak bu modelde, distal kolostomi oluşturma, hariç tutulan barsak segmentleri iltihap orta hafif gelişimi tetikleme ve hallmark lezyonlar insan üreme dışkı akışından distal kolon parçaları hariç tutulur DC ile ılımlı bir sistemik inflamatuar yanıt. Fare modeli aksine, genetik olarak değiştirilmiş fare modelleri C57BL/6 arka plan üzerinde çok sayıda kullanılabilir. Bu hayvanlar modelimiz ile kombinasyonu bireysel sitokinler, kemokinler veya (Örneğin, interlökin (IL) -17; biyoaktif moleküllerin reseptörleri potansiyel rolleri sağlar Il-10, kemokin CXCL13, kemokin reseptörleri CXCR5 ve CCR7 ve sphingosine-1-fosfat reseptör 4) DC patogenezinde değerlendirilmek için. Congenic fare suşları C57BL/6 arka plan üzerinde kullanılabilirliğini büyük ölçüde farklı hücre türleri içinde etyoloji dahil DC rolleri kurmak için transfer deneyler kolaylaştırır. Son olarak, model mukozal bağışıklık etkilenen ve etkilenmeyen barsak segmentleri üzerinde etkileri (Örneğin, yerel microbiome veya yerel anti-inflamatuar terapi modifikasyonu) yerel müdahalelerin değerlendirme imkanı sunmaktadır ve Tarih sistemik bağışıklık homeostazı.

Cerrahi, hem deneysel (kolostomi) ve bunu sham (colotomy) iyi tolere edilir. Cerrahi ve perioperatif yönetimi doğru yapıldığında perioperatif mortalite % 10 fazla olmamalıdır. Ameliyat sonrası ilk haftasında her iki deneysel ve sahte gruplarında önemli kilo kaybı görülür. Sham grubunun hayvanlar onların ağırlık nadir genellikle dördüncü ameliyat sonrası gün doğru ulaşmak ama bir günde daha sonra deney grubu oluşur. Kilo kaybı daha ilk vücut ağırlığının % 21.7 ulaşan deney grubu telaffuz e...

Fare distal kolostomi insan saptırma kolit, ağırlıklı olarak Lenfositik kolit dışkı akışından hariç iki nokta üst üste segmentinde için bir fare modeli sağlar.

Fare Distal kolostomi, C57BL/6 farelerde saptırma kolit roman modeli

Diversion colitis (DC) is a frequent clinical condition occurring in patients with bowel segments excluded from the fecal stream as a result of a ...

Bu protokolün genel amacı, Diversiyon Kolit gelişiminde bağışıklık sisteminin rolünün ve mikrobiyom ile etkileşiminin incelenmesini kolaylaştırmaktır. Bu yöntem, dışkı akışından çıkarılan her iki segmentte de ortaya çıkan ve Diverting Enterostomili hastaların% 90'ını etkileyen Diversiyon Kolit ile ilgili önemli soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, genetiği değiştirilmiş hayvanlara, kimyasal olarak tahriş edici maddelerin kullanılmasına veya koliti indüklemek için belirli hücre popülasyonlarının bağışıklık yetmezliği olan farelere aktarılmasına ihtiyaç duymamasıdır.Hayvan tesisine varışta, fareleri benzer büyüklükteki gruplara bölün. Her grubu bir araya getirin ve deneyler boyunca grupları sabit tutun. Ameliyattan en az bir hafta önce, tüm temel eser elementleri ve vitaminleri içeren yüksek enerjili ve yüksek proteinli bir yeme geçin.Hayvanı metin protokolüne göre uyuşturduktan sonra ameliyata hazırlanmak için, vücut ısısı kaybını önlemek için hayvanı bir ısıtma yastığı üzerinde sırtüstü pozisyonda sabitlemek için bant kullanın. Ardından, farenin motor tepkisi olmadan ayak parmağını sıkıştırma gibi mekanik stimülasyonu tolere edip etmediğini kontrol edin.Ameliyata başlamadan önce, ameliyat alanını %70 alkol ve bir iota 4 kullanarak üç kez dezenfekte edin. Aseptik koşulları garanti etmek için çalışma alanını örtün. Karın kaslarını ve peritonu linea alba boyunca keserek 15 mm'lik orta laparotomi yapın, böylece kan kaybını en aza indirin.Daha sonra, iki debakey atravmatik forseps kullanarak, çekumu, terminal ileumu ve inen ve enine kolonu periton boşluğundan dikkatlice çekin. Mezenterik yapıların yaralanmasını önlemek ve bağırsağın optimal bolluğunu korumak için bağırsağın mekanik manipülasyonunu sınırlamaya dikkat edin. Ardından, çekal kutbunu, yükselen kolonu ve ince bağırsağı tanımlayın.İleoçekal bölgenin anatomisi belirsiz ise, Peyer yamalarının varlığı ince bağırsağı tanımlar ve formların varlığı ature kolonu karakterize eder. Gelecekteki kolostomi konumunu belirlemek için bir cetvel kullanın. Distal kolostomi için ileoçekal valvin 20 mm distaline yerleştirilmelidir.Sağ üst kadranda karın duvarında 3 mm'lik ikinci bir kesi yapın. Ardından, daha önce tanımlanan kolon segmentini bu kesiden çekerek bir ilmek oluşturun ve ilmeği bozmamaya dikkat edin. Mezenterik vasküler yapılara zarar vermemeye dikkat ederek 22 gauge, esnek bir IV kanülü mezokolondan dikkatlice geçirin.Ardından, bağırsağı periton boşluğuna geri koyun. Basit dikişler ve emilebilir bir dikiş kullanarak, esnek tüpün her iki ucunu da cilde sabitleyin. Laparotomiyi kapatmadan önce, 0.5 mL% 0.9 salin intra peritoneal enjeksiyonu kullanarak sıvı resüsitasyonu yapın.Peritonu ve kas tabakasını sürekli emilebilir bir sütür ile kapatın. Ardından, cildi benzer şekilde kapatın. İnce bir makas kullanarak, bir alt toplam transeksiyon gerçekleştirerek dışlanmış kolon halkasını açın.Mezenterdeki tüm yaralanmalardan kaçının ve kolonu tamamen kesmeyin. Monofil emilebilir bir sütür ile, her bir kolostomi açıklığını üç adet tek tam kalınlıkta dikiş kullanarak periton ve cilde sabitleyin. Fonksiyonel bir uç kolostomi olan afferent döngü ve bir mukus fistül olan efferent döngü bu noktada net bir şekilde ayrılır.Bir kolotomi yapmak için, distal kolostomi için gösterildiği gibi çekal kutbu, çıkan kolonu ve ince bağırsağı belirledikten sonra, ileoçekal kapaktan kolostomi ile aynı mesafede konumlandırılması gereken gelecekteki kolotomi pozisyonunu belirlemek için bir cetvel kullanın. İnce makas kullanarak, kolonu çevresinin en az üçte ikisini açın. Monofil emilebilir bir sütür kullanarak, daha önce olduğu gibi sıvı resüsitasyonu ve periton ve cildin kapatılmasını gerçekleştirmeden önce kolotomiyi tam kalınlıkta kesintili bir sütür ile kapatın.Prosedürü takiben, hayvanları kafeslerine geri koyun ve sıcaklık ve nem kontrollü bir ortama geri göndermeden önce tamamen uyanana kadar 37 santigrat derecede bir kızılötesi lambanın altına yerleştirin. Hayvanlar mekanik stimülasyona yanıt gösterdiğinde, vücut ağırlığının kg'ı başına 0.1 mg buprenorfin SC enjekte ederek postoperatif analjeziye başlayın. Solunum depresyonu belirtilerini dikkatlice kontrol edin. Ameliyat sonrası ilk hafta boyunca devam eden analjezi için içme suyunu mL başına 1 mg tramadol ile destekleyin.Hareket kabiliyetinin azalması nedeniyle azalan sıvı alımını telafi etmek için, ameliyat sonrası ilk hafta boyunca kafese katı bir içecek pedi yerleştirin. Son olarak, hayvanları tartın ve ilk hafta boyunca günlük olarak, ilk ayın geri kalanında her iki günde bir ve ikinci ay boyunca her üç günde bir hayvan davranışlarını puanlayın. Cerrahi hem deneysel hem de sahte gruplarda iyi tolere edilir.Deney grubunda kilo kaybı daha belirgindir ve başlangıçtaki vücut ağırlığının %21.7'sine ulaşır. Buna karşılık, sahte hayvanlar başlangıçtaki vücut ağırlıklarının %10,8'ini kaybeder. Ameliyat sonrası ilk 60 gün içinde toplam mortalite kolostomi grubunda %40 civarında, sahte grupta ise yaklaşık %10'dur.Ölümlerin çoğu ameliyat sonrası ilk hafta içinde meydana geldi ve ölüm nedenleri bu şekilde gösterildi. Farelerde distal kolostomi, ağırlıklı olarak lenfositik kolitin gelişmesine neden olur ve insan DC'nin ayırt edici histolojik özelliklerini yeniden üretir.Crypt uzunluğu, dışlanan bağırsak segmentlerinde önemli ölçüde kısalır ve 14 günlük dışkı saptırmasından sonra istatistiksel anlamlılığa ulaşır. Kadeh hücresi taşıyan kript uzunluğu, dışlanan bağırsak segmentlerinde 30 gün sonra azalır.Mutlak goblet hücre sayıları, ameliyat sonrası 14 gün sonra dışlanan bağırsak segmentindeki kriptlerde de önemli ölçüde azalır. DC'nin ayırt edici lezyonu olan mukozada lenfoid foliküllerin gelişimi daha uzun bir dışkı deviasyonu süresi gerektirir. Lenfoid folikül sayısında artış iki hafta gibi kısa bir sürede gözlenebilse de, farklılıklar iki ay sonra belirgin hale gelir.Bu videoyu izledikten sonra, Murin Distal Kolostomisinin nasıl yapıldığını iyi anlamış olmalısınız. Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik uygun şekilde yapılırsa 20 dakikadan daha kısa sürede yapılabilir. Bu model, spesifik hücre popülasyonlarının enflamatuar mediatörlerinin rolünü ve Diversiyon Kolitinin patogenezini ele almak için diğer genetik olarak değiştirilmiş modellerle veya konjenik fare suşlarında transfer deneyleri ile birleştirilebilir.

murine-distal-colostomy-novel-model-diversion-colitis-c57bl6

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Içme suyu uygulanan dekstran sülfat sodyum (DSS), akut kolit kurulmuş bir fare inflamatuar yaralanma modeli. Bu protokol, DSS tedavi ve dokuların hazırlanması için yöntemi özetlemektedir.

Dekstran Sülfat Sodyum (DSS) kullanarak murin Kolit Modelleme

Biz hızla pro-inflamatuar ajan dekstran sülfat sodyum (DSS) üç kür takip ve sürekli insan kolit görülenler ile morfolojik ve moleküler benzerlikleri olan farelerde kolon tümörleri oluşturur genotoksik ajan azoxymethane (AOM) hangi yönetiminde bir protokol göstermek kanserle ilişkili.

Azoxymethane (AOM) ve Dekstran Sülfat Sodyum (DSS) ile Modelleme Kolit-İlişkili Kanser

Bu videoda, fare proksimal kolon halkası veya pcLoop segmenti oluşturmak için cerrahi bir prosedürü ve ardından bağırsak epitel geçirgenliğini incelemek için segmente intraluminal floresan belirteçleri enjeksiyonunu açıklıyoruz.

Fare Proksimal Kolon Döngü Modelinin Oluşturulması: İntraluminal Enjeksiyonu Takiben Serumda Floresan İşaretleyicilerin Saptanmasıyla Proksimal Kolon Halkası Oluşturmak ve Bağırsak Geçirgenliğini Ölçmek İçin Cerrahi Bir Prosedür

Bu video, inflamatuar bir bağırsak hastalığı olan kimyasal kaynaklı bir kolit murin modeli oluşturmak için bir teknik göstermektedir. Farenin yeterli bir süre boyunca bir dekstran sodyum sülfat (DSS) çözeltisi tüketmesine izin verilir. Tüketildikten sonra, DSS kolondaki mukus ve epitel tabakası bariyerine zarar vererek, bağırsak mikroplarının alttaki dokuya girmesine izin verir - burada yerleşik bağışıklık hücreleri tarafından abartılı bir bağışıklık tepkisine aracılık etmek için algılanırlar...

Dekstran Sülfat Sodyum Kaynaklı Kolitin Murin Modelini Oluşturmak İçin Bir Teknik

Citrobacter rodentium enfeksiyonu enterik bakteriyel enfeksiyonlar çalışma yanı sıra farelerde bağışıklık yanıtları ve kolit barındırmak için değerli bir model sunar. Bu protokol bariyer bütünlüğünü, patojen yük ve murin infeksiyöz kolit patojen ve konak katkıların tam karakterizasyonu izin histolojik hasar ölçümü özetliyor.

<em&gt; Citrobacter rodentium</em&gt; Mouse Model: Bulaşıcı Kolit için çalışılması Patojen ve Host Katılımlar

Son birkaç yılda, yeni nesil endoskoplar kemirgen kolit ve kolorektal tümörlerin değerlendirilmesinde önemli bir tanı araştırma yardımcıları olarak ortaya çıkmıştır. Bu farelerde enflamasyonun ve kolorektal tümörleri endoskopik değerlendirme, hem de kolit ve kolorektal tümörleri endoskopik şiddetini belge ondalık tanımlayıcıları kullanan yeni bir skorlama sistemi için bu tarifnamede detaylı bir protokol mevcut.

Bir Geçerliliği Endoskopik Puanlama Sisteminin Kullanılması Kolit ve Kolorektal Tümörlerin Şiddetini Değerlendirmek için Farelerde esnek Kolonoskopi

Segmental adeno-cre enfeksiyonu ile genetik olarak tasarlanmış kolorektal kanserli fare modeli kurulması ve yüksek çözünürlüklü kolonoskopi ile gözlemlenmesi için bir protokol sunulmuştur.

Sporadik Kolorektal Kanserin Genetik Olarak Geliştirilmiş Fare Modeli

Bir kısmi veya tam tıkanma Şiddetli karın ağrısı, bulantı, kusma ve dışkı geçiş engelleme neden olabilir bağırsak bağırsak engelleri vardır. Bağırsak kısmi obsructions farelerde oluşturmak için bu yordamı patolojik hücre büyümesi ve ölüm bağırsak temel mekanizmaları eğitim güvenilirdir.

Bağırsak kısmi tıkanıklık bir fare modeli

Anastomoz kaçağı ya da ameliyat sonrası arıza bir önemli ameliyat sonrası morbidite ve mortalite nedenidir. Bir kolon anastomoz oluşturmak için bizim ameliyat anastomoses şifa mekanizmaları çalışmak için güvenilir ve tekrarlanabilir bir yöntemdir.

Farelerde kolon anastomoz oluşturulması

Sunulan protokol, inflamatuar barsak hastalığı ile ilişkili kolorektal kanserin indüksiyonu takip eden bir farede apandisin (kaekal yama) kolay bir cerrahi olarak çıkarılmasını açıklar. Bu murine apendektomi modeli insan gastrointestinal hastalığın patogenezinde apandisin biyolojik rolünün araştırılmasını sağlar.

Kaekal Patch Kesin Lokalizasyonu ile Kronik Kolit İlişkili Kolorektal Kanser Murine Apendektomi Modeli

Bu çalışmada, intestinal manipülasyon ile oluşturulan postoperatif ileusun bir murin modeli tanımlanmıştır. Gastrointestinal geçiş fonksiyonu, patolojik değişiklikler ve immün hücre aktivasyonu ameliyattan 24 saat sonra değerlendirildi.

Ameliyat Sonrası İleus Murin Modeli

Öğrenin, C57BL/6 farelerde distal kolostomi yöntemiyle saptırma koliti modelini oluşturmayı. Bu teknik, genetiği değiştirilmiş hayvanlar kullanmadan bağışıklık sistemi ve mikrobiyom etkileşimlerini incelemeyi sağlar.

Fare Distal kolostomi, C57BL/6 farelerde saptırma kolit roman modeli

Daha fazla video keşfet