Name: Diyabetik Farelerde Kronik Yaralar Oluşturma Protokolü (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-09-25T13:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 55 s
Description: Keşfedin diyabetik farelerde kronik yara oluşturma protokolünü. Oksidatif stres indüksiyonu ve antioksidan enzim inhibitörleri kullanarak insan diyabetik kronik yaralarını taklit eden db/db-/- fare modelini öğrenin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarların hiçbir takdiri yok.

Tüm deneyler federal düzenlemelere uygun olarak tamamlanmıştır ve University of California politikası ve prosedürleri University of California, Riverside IACUC tarafından onaylanmıştır.
1. Hayvan
<ol><li>Diyabetik ve obez B6 kullanın. Kronik yara modeli içinLeprdb/J fareler. Satın alma seçenekleri üreme için heterozigotlar veya doğrudan deneyler için homozigotlar içerir.</li>
	<li>Üreme heterozigot erkek ve dişiler yavru üretmek için. Çöp sadece dörtte biri, istatistiksel olarak, diyabetik ve obez olmak için büyüyecek(db / db-/-).</li>
	<li>Wean ve ev db/db-/- fareler doğumdan 3 hafta sonra çöp arkadaşları ile birlikte. Db/db-/- fareler doğumdan 5 hafta sonra çöp arkadaşlarından ayrı olarak ve diğer db/db-/- fareler ile 5-6 aylık olana kadar ve kronik yara modeli için kullanılabilir. Bu süre zarfında, olgun ve karmaşık bir cilt mikrobiyomu gelişebilir. NOT: DB/db-/- fareler 3-5 haftalık arasında çöp yavrularından kolayca tespit edilebilir. Db/db-/- fareler obezdir, diyabetiktir ve yabani tip ve heterozigot çöplerden çok daha büyük ve yuvarlak tır. Karınları biraz daha pembe ve kalçaları daha büyük görünebilir. Artan ağırlık ameliyattan önce teyit edilmelidir. Ayrıca, leptin reseptöründeki mutasyonu doğrulamak için kandaki yüksek glikoz düzeylerini ölçmek ve fareyi genotip lemek mümkündür.</li>
</ol>2. Vivarium ve Hayvancılık
<ol><li>Db/db-/- geleneksel bir vivarium'daki ev db/db-/- fareler (bariyer/spesifik patojensiz tesis değil) böylece db/db-/- farelerin derisinde mikroflora kurulabilir. Özellikle kronik yaralar muzdarip insanlar modellemek için, patojenlere maruz önlemek için özel önlemler almayın.</li>
	<li>Canlılık içinde enfeksiyonun yayılmasını en aza indirmek için mikro izolatör üstleri ile kafesleri koruyun. Yeni yatak takımları ile haftada iki kez kafesdeğiştirin ve düzenli vivarium chow ile fareler beslemek. Yatak takımlarını ya da yiyeceği otoklavlamayın.</li>
	<li>Oda sıcaklığını 21 ile 24 °C arasında, yılın zamanına bağlı olarak küçük dalgalanmalarla ayarlayın. İklim ve konumu yansıtan nem oranı %19 ile %70 arasında değişmektedir.</li>
</ol>3. Kronik Yaraların Gelişimi İçin Gereksinimler
<ol><li>Kronik yaraların gelişimi için fenotipik obez, diyabetik ve en az 5-6 aylık olan sadece erkek ve dişi fareler kullanın. Bu farelerin ağırlığı 40-80 g arasında, yaklaşık 60 g civarında ortalama arasında olmalıdır.</li>
	<li>Obez olarak kabul edilen ancak 50 g'dan hafif fareler kullanmayın. NOT: Bu protokolde belirtilen tüm fareler aksi belirtilmedikçe burada açıklanan nitelikleri geçerler.</li>
</ol>4. Tüy Dökücü Losyonun Tıraşı ve Uygulaması
NOT: Yaralanmadan önce farenin dorsumüzerindeki istenmeyen tüyleri çıkarın. Ameliyattan bir gün önce anestezi altında olmayan canlı db/db-/- farelerde aşağıdaki işlem yapılır. Stresi ve hayvana zarar vermemek için önlemler alın.
<ol><li>Tıraş<ol>
<li>Fareyi temiz bir yüzeye yerleştirin ve farenin konumunu sabitlemek için farenin kuyruğunun tabanını başparmak ve ikinci parmakla tutun. Fare atlayabilir veya ani hareketler yapabilir; eğer olursa, hızlı bir şekilde yanıt ve yaralanmayı önlemek için makas geri çekin.</li>
		<li>Bir saç makası ile farenin saç tıraş(Şekil 1A, 1B). Bıçağı farenin derisine paralel konumlandırın ve şeffaf bir film pansumanı yerleştirmek için yeterince geniş bir yüzey alanına izin vermek için tüm arkayı boyundan kuyruk kuyruğuna kadar tıraş edin (Bkz. Malzeme Tablosu). En verimli kesim için bıçağı saç büyüme yönüne karşı hafifçe çalıştırın. (Şekil 1B).<ol>
<li>Bıçakla cilde derinden bastırmayın, çünkü morarma veya kesme ile cilde zarar verebilir.</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
	<li>Tüy dökücü losyon uygulaması NOT: Şeffaf sos sıkıca yapışabilir, böylece çok pürüzsüz bir cilt elde etmek için tüy dökücü losyon kullanın.<ol>
<li>Zaten kesilmiş kılları cilde karşı ıslatmak için yeterince basınçla, ıslatılmış bir kağıt mendilin tıraşedilmiş cilde hafifçe bastırarak kimyasal yanıkları önlemek için farenin derisini suyla ıslatın.</li>
		<li>Cilt ıslak iken, hafifçe 15-20 s(Şekil 1C, 1D)için tüy dökücü losyon küçük bir topak ile farenin deri ovmak . Saç kısa kesilmiş olan her yere tamamen losyon yayıldı. Fare daha büyükse daha fazla losyon kullanın.</li>
		<li>Farenin kulaklarına, kuyruğuna veya yüze yakın herhangi bir yere losyon uygulamayın. Losyon kulaklara veya kuyrukta yer alırsa, durulayana kadar ıslak kağıt silme ile silin. Losyon farenin yüzüne çıkarsa, göz, burun ve ağızzarar görmesini önlemek için hemen çalışan musluk veya deiyonize su altında fareyi yıkayın.</li>
		<li>Uygulamadan sonra ek bir 20-45 s için saç ile reaksiyona losyon bırakın.</li>
		<li>Durulamadan önce, çeşitli yerlerdeki(Şekil 1E)losyonu eldivenli bir parmak veya ince bir metal spatula ile deriden hafifçe silerek tüy dökücü reaksiyonun tamamlanıncaya bakın. Siyah saç varlığı olmadan cilt pembe ise reaksiyon tamamlanır. Hızlı bir şekilde saç aslında erken durulama daha durulama önce kaldırılmış ve daha sonra tekrar losyon uygulamak zorunda olup olmadığını kontrol etmek en iyisidir.</li>
	</ol></li>
	<li>Durulama NOT: Epilasyon reaksiyonu tamamlandıktan sonra, tüy dökücü losyonu çıkarmak ve kimyasal yanıkları önlemek için fareyi çalışan musluk veya deiyonize su ile yıkayın.<ol>
<li>Fareyi sol eldivenli ele yerleştirin ve farenin hareket etmesini önlemek için kuyruğun tabanını sol başparmakla avuç içine bastırın. Farenin ısırmasını önlemek için sol parmakların geri kalanını kapatın ve düzdüze.</li>
		<li>Fareyi konumlandırın, böylece yüz/kafa bölgesi su akışından uzak kalır ve ılık su akışı başın arkasına ve sadece arkada düşebilir. Hızlı ama yavaşça losyonu temizlemek için sağ eldivenli el ile farenin arka ovmak.</li>
		<li>Farenin derisi losyondan kurtulduktan sonra, suyun çoğunu emmek için fareyi kağıt havluyla hızlıca silin(Şekil 1F).</li>
	</ol></li>
	<li>Tıraş ve epilasyon sonrası bakım<ol>
<li>Islak kağıt mendil ile kulakve kuyrukta kalabilecek artık tüy dökücü losyonu kontrol edin ve temizleyin.</li>
		<li>Fareyi kendi kafesine geri yerleştirin ve kafesi yaklaşık 30 dakika boyunca bir ısıtma yastığına (40-45 °C) yerleştirin. Fare normal davranışa geri dönmeli, koşuşturmalı ve birkaç dakika içinde kendini damat etmelidir.</li>
		<li>Deneme süresince her fareyi ayrı bir kafeste barındırın. Farelerin derisi artık korunmuyor ve diğer fareler tarafından kolayca çizilip ısırılabiliyor.</li>
		<li>Tüy dökücü losyon, yara iyileşme sürecini etkileyebilecek veya değiştirebilecek hafif tahriş edici etkilere sahip olabileceğinden, fare derisinin sakinleşmesini ve farenin sırtındaki saç eksikliğine uyum sağlaması için ameliyattan önce 18-24 saat bekleyin.</li>
	</ol></li>
	<li>Koyu Pigmentasyon ile Ciltten Saç Çıkarma NOT: Bazı db/db-/- farelerpotansiyel olarak bu yamalar olmadan deriden daha hızlı ve daha güçlü saç geri büyüyen olacak ciltte koyu lekeler olacaktır. (Şekil 2A). Cildin bu koyu alanlar orta geç anajen sahne saç folikülleri ve / veya pigment inkontinans29,30nedeniyle renk koyu görünür.<ol>
<li>Koyu lekeler fark edilirse, tekrar tüy dökücü losyon uygulayın, ancak sadece bu alanlarda, ve adım 4.2 ve 4.3 tekrarlayın(Şekil 2B, 2C). NOT: Cildin koyu lekeleri deney süresince saçları daha hızlı uzatır, bu nedenle gerektiğinde her 3-5 günde bir saçı kısa yayıltın. Yaranın istenilen yerden bir ya da iki yama kabul edilebilir. Farenin arka önemli ölçüde bu koyu yamalar ile kaplı ise, kronik yara modeli için bu fare kullanmayın.</li>
	</ol></li>
</ol>5. Reaktif Kurulumu
NOT: Db/db-/- farelerde kronik yaraların gelişimi katalaz ve glutatyon peroksidaz, 3-amino-1,2,4-triazol (ATZ) ve mercaptosuccinik asit (MSA) için spesifik inhibitörleri ile tedavi ile gerçekleştirilir16 . Aşağıdaki prosedür, farenin ağırlığına göre analjezi ve inhibitörlerin dozve yönetimini ayrıntılarıyla anlatır.
<ol><li>Ağrı kesici Bupreneks intraperitoneally 0.05 mg / kg fare steril PBS enjekte. Ameliyattan yaklaşık 30 dakika önce 60 g fare için 120 μL hacim enjekte edin. Ameliyattan sonra 6 saat daha doz uygulayın. Gerektiğinde ekstra bir doz verilebilir.</li>
	<li>ATZ intraperitoneally 1 g/kg fare steril PBS enjekte. Ameliyattan yaklaşık 20 dk önce 60 g fare için 480 μL hacim enjekte edin. Hacmin yarısını karın sol tarafına, diğer yarısını da sağ tarafa enjekte edin.</li>
	<li>Steril PBS'de 150 mg/kg farede şeffaf pansuman ile yara dokusu arasındaki yaranın üzerine topikal olarak MSA yatırın. Ameliyattan sonra 10 dakika içinde 60 g fare için 60 μL hacim uygulayın.</li>
</ol>6. Cerrahi
NOT: Kronik yara modelinin başarısı steril olmayan durumlara dayanır. Bu fareler mikrop içermez ve geleneksel bir vivarium içinde yer almaktadır. Deride bulunan bakteri mikrobiyomu, anti-oksidan enzimlerin inhibitörleri ile tedavi üzerine kronik yaraların sonraki başlatılması ve gelişimi için çok önemlidir. Bu nedenle, sitenin geleneksel cerrahi öncesi hazırlık kontra-endikedir.
<ol><li>İntraperitoneal Enjeksiyon<ol>
<li>Fareyi kafes rafının eğimli kısmına sabitle ve farenin başını farenin gövdesinden daha aşağıda rahatça sabittesiyle kuyruğu tutun. Bu, iç organları enjeksiyon noktasından mümkün olduğunca uzağa taşımaya çalışmamızı sağlar.</li>
		<li>Mesane veya diğer karın organlarıiçine enjeksiyon önlemek için karın sağ alt kadranda iğne yerleştirin.</li>
		<li>İğneden önce iğneyi aspire edin.</li>
	</ol></li>
	<li>Tedavi ve Anestezi<ol>
<li>Buprenex 30 dk ve ATZ 20 dk ameliyattan önce, Adım 5.1 ve 5.2'de açıklandığı gibi uygulayın.</li>
		<li>Fareyi, Şekil 3A'da yaklaşık 15-20 dakika boyunca gösterildiği gibi sıcak bir ısıtma yastığının üzerine küçük bir plastik kapta yerleştirin.</li>
		<li>Isıyı daha iyi kontrol altına almak için küçük kabın üzerine kağıt mendil veya kağıt havlu yerleştirin. Fare ısındıkça sakinleşmelidir. Şekil 3 B ameliyat için gerekli malzemeleri gösterir.</li>
		<li>Fareyi, açık bir sistem kullanıyorsanız kimyasal kaputtaki isofluran evaporize bağlı kapalı bir kapta yerleştirin.</li>
		<li>Açık bir sistemde, 2-3,5 L/dk akış hızında 1-2 dakika boyunca %5 izofluran uygulayın.<ol>
<li>Fare baygın hale gelen veya artık hareket etmedikten sonra fareyi beyaz bir cerrahi pedin üzerine yerleştirin ve ameliyat sırasında isofluranın sürekli uygulanmasına izin vermek için buharlaştırıcıya sabitlenmiş bir burun konisi ile baş ın üzerine yerleştirin.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Açık bir sistemde, ameliyat sırasında aynı akış hızında % 2-3 isofluran uygulayın ve anestezi derinliğini korumak için isofluran akışına ayarlayın.</li>
		<li>Ameliyat sırasında uygulanan isofluranın konsantrasyonu ve süresini en aza indirin. db/db -/- fareler anesteziye karşı çok hassastır, bu yüzden en iyisi isofluranmaruziyetini minimumda tutmaktır. Fare hala% 5 isoflurane 2 dakika sonra yanıt ise, burun konisi güvenli ve ameliyatbaşlamadan önce 15-30 s için% 3-5 isoflurane uygulayın.<ol>
<li>Yaralanmadan önce uygun anesteziyi onaylayın. Anestezi derinliği güçlü parmak sıkışması gibi fiziksel uyaranlara yanıt eksikliği ile doğrulanır. İnhale anestezi altında farenin süresi 5 dk altında olduğundan gözlere veteriner merhemi uygulanmaz.</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
	<li>Yaralama<ol>
<li>Sprey% 70 etanol veya klinik etanol havlu ile bir kağıt silme ve yara sitenin alanı temizlemek için farenin arka silin. Yatak, gıda veya deriden gelen toz, pansumanın düzgün yapışmasını önleyebildiği için, şeffaf pansuman sıkıca yapışabilsin diye cilt yüzeyini temizleyin(Şekil 4A). Aşırı silmeyin, yoksa deride bulunan bakterileri öldürme riski olacaktır.</li>
		<li>Yara bölgesinin konumunu belirleyin. Yarayı gerçekleştirmek için en iyi yer farenin sırt tarafında, ortalanmış ve daha yüksek pigmentasyon ile cilt yamalar uzak. NOT: Tecrübelerimize göre bu fareler sadece bir yaranın yüküne dayanabilirler.</li>
		<li>7 mm deri biyopsisi zımba, cımbız ve cerrahi makas kullanarak 30-45 s içinde bir yara oluşturun. Biyopsi yumruğuna istenilen yara bölgesine hafifçe bastırın ve yumruğun hafif bir izlenimbırakarak yeterince derine doğru bükün(Şekil 4B). Cımbız ile yumruk merkezi yukarı çekerek ve cerrahi makas(Şekil 4C-4E)ile anahat boyunca keserek özetlenen cilt excise .</li>
		<li>Yarayı şeffaf film pansumanının yarısı (6 cm x 3,5 cm) sıkıca kapatın.</li>
		<li>Fareye %2 izofluran uygulaması durdurun (Şekil 4F).</li>
	</ol></li>
</ol>7. Ameliyat Sonrası Tedavi ve Kurtarma
<ol><li>Ameliyat tan sonra MSA tedavisi yapılır ve Adım 5.3'te açıklandığı gibi şeffaf pansuman uygulanır. MSA'yı pansumanın altındaki yara bölgesine yatırın.</li>
	<li>Kurtarma ile yardımcı olmak için 30 dakika boyunca ısıtma pedi üzerinde küçük bir kap ta fare geri yerleştirin. Fare ısındıktan sonra fareyi kafesine geri koyun. Isoflurane etkisi geçicidir ve fare kısa bir süre sonra hareket olmalıdır.</li>
	<li>Fareler sternal recumbency korumak için yeterli bilinç kazanmış kadar fareler gözetimsiz bırakmayın ve vivarium onları iade etmeyin. NOT: Bu farelerle çalışırken tercih edilen anestezi, hızlı indüksiyonu ve anesteziden sonra ortaya çıkması nedeniyle tam olarak isoflurane'dir.<ol>
<li>Bir farenin diğerinin kronik yarasına müdahale etmesini önlemek için tek tek ameliyat olan ev fareleri. Yukarıda belirtildiği gibi, tamamen iyileşene kadar vivarium'a dönmezler.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Ameliyattan sonra Bupreneks 6 saat ikinci doz uygulayın.</li>
	<li>Ameliyattan sonra ilk 48 saat boyunca fareleri dikkatlice gözlemleyin. NOT: Ameliyat, kronik yara oluşturmak için inhibitörleri ile birleştiğinde, zaten diyabetik ve obez olan hayvan üzerinde çok stresli. Ameliyattan sonraki ilk birkaç gün hayatta olan fareler genellikle deney süresince hayatta kalırlar.</li>
</ol>8. Veri Toplama, Hayatta Kalma Stratejileri, Yaraladıktan Sonra Farelerin Kullanımı ve Ek İpuçları
<ol><li>Veri toplama<ol>
<li>Ameliyattan hemen sonra fotoğraf çek. Biyofilmler yaralanmadan sonra 5-10 gün arasında ve 3 gün kadar erken bir yerde görülür.</li>
		<li>Bakteriler analizin odak noktası ysa, 10-15 s. -80 °C'de kültürden bağımsız sıralama analizi için herhangi bir ortam olmadan kalıb veya kuru için uygun bir dondurucu ortamda, 10-15 s. Için yaranın etrafında hafif basınçla steril bir takas yapın. Bir mikrocentrifuge tüp içine steril bir metal spatula ile ekstrasellüler polimerik maddeler toplamak ve analiz öncesi -80 °C'de saklayın.</li>
		<li>Biyofilm toplama veya fotoğraf çekme işlemlerini sırasında fareye anestezi uygulamayın. Bu işlemler sırasında, fareyi sakinleştirmek ve kaçmasını önlemek için farenin önüne bir parça yiyecek yerleştirin. Çoğu fare yiyeceğin üstüne tırmanır, üzerine oturacak ve hareket etmeyecek.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Fare düzgün hareket etmiyorsa veya pansuman doğru uygulanmazsa ikincil enfeksiyonlar ve istenmeyen kronik yaralar veya ülserler gelişebileceğinden, düzenli olarak farenin ve ventral tarafın yaralarını kontrol edin. Deri ve ıslak yatak takımları arasındaki sürtünme(db/db-/- fareler poliüriktir) kafesler sık sık değiştirilmezse cildi rahatsız edebilir. NOT: Pansumanın altında sıvı birikme, yapıştırıcının yapışkanlığını kaybetmesine ve sıvının sızdırılmasına neden olabilir. Ölü deri hücresi, yatak ve dışkı sonra cilt üzerine sopa ve sertleşmek. Bu kurutulmuş yamalar ve cilt üzerinde agregalar ikincil bir enfeksiyonu önlemek için derhal temizlenmelidir.</li>
	<li>Fareler arka ayakları üzerinde durur veya otursalar, bu fareleri yiyecek ve suya erişimin çok daha düşük olduğu bir kafese taşıyın. Kafesteki yiyecek ve suyun konumu yüksekse, fare ona ulaşmak için arka ayaklarıüzerinde durabilir veya oturabilir. Çoğu fare, ameliyattan önce bunu yapabilseler yeme ve içme sorunu olmaz, ancak bazı farelerin sırtlarına dönme olasılığı vardır. Bu "flippers" onlar yardım ve daha fazla izleme gerekir bu yüzden üzerinde dönüm büyük zorluk olabilir.</li>
	<li>Cilt enkaz, pul gibi cilt ve saç temiz ise 20 güne kadar cilt üzerinde şeffaf pansuman bırakın. Bunlardan herhangi biri ciltte oluşursa, eski pansuman çıkarın ve yeni bir parça uygulayın.<ol>
<li>Pansumançıkarmak için, hafifçe başın arkasında doğrudan deri çimdik, sonra tek bir düzgün hareketle baş pansuman çekin.</li>
		<li>Güvenli bir şekilde pansuman bir parça yerleştirmek için, fare mümkün olduğunca hareketsiz kalmasını sağlamak. Cildin temiz ve pul pul ölü deri hücrelerinden, yatak kalıbından gelen tozlardan ve yiyecek parçalarından arınması önemlidir. Yerleştirin ve daha sonra güvenli hale getirmek için yara etrafında deri içine pansuman basın.</li>
		<li>Farenin önüne bir parça yiyecek yerleştirmek hareketlerini sınırlamıyorsa, fareyi tel kafesin üzerine yerleştirin. Fare kafeste bir ray kavradı ktan sonra, kuyruğu vücuda mümkün olduğunca yakın tutun ve en az güçle çekin. Fare öne doğru çekerken, kolay uygulama için arka gerilecek ve düzleşir; bu noktada güvenli bir şekilde pansuman yerleştirin.</li>
		<li>Asla eski bir sosu tekrar kullanma. Her zaman en büyük yapışma için arka yeni pansuman uygulayın.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarları olduğunu beyan.

Farelerde kronik yaralar oluşturulduktan sonra, model kronikliğin başlatılmasında rol oynayan bozulmuş yara iyileşme süreçlerini incelemek için kullanılabilir. Model aynı zamanda kronik yara gelişimi ve bozulmuş iyileşme tersine çevirebilir ve yara kapatma ve iyileşme yol kimyasalları ve ilaçların geniş bir yelpazede etkinliğini test etmek için kullanılabilir. Kronikliğin başlangıcından sonra farklı zaman noktaları incelenebilir: örneğin, gün 1-5 kroniklik erken başlangıçlı için yara dan sonra ve gün 20 ve tam g...

Yara iyileşmesi, bağışıklık yanıtı ve vasküler dahil ancak bunlarla sınırlı olmamak üzere birçok farklı hücre tipini içeren sıralı ve üst üste gelen evrelerde düzenlenmiş, zamansal ve mekansal olarak düzenlenmiş karmaşık hücresel ve moleküler süreçleri içerir. sistem1. Hemen sonra cilt bir yaralanma sürdürür, faktörler ve kan hücreleri yara bölgesine agrega ve pıhtı oluşturmak için pıhtılaşma kaskad başlatın. Homeostazı sağlandıktan sonra, kan damarları yara bölgesine oksijen, besin, enzim, antikor ve kemotaktik faktörlere izin vermek için genişledi. 2. Aktif trombositler yara kenarındaki keratinositleri uyarmak için çeşitli büyüme faktörleri salgılar ve yaralı bölgeyi yeniden epitelize eder. Yara bölgesine alınan monositler, fagositoz bakteri ve ölü nötrofillerin makrofajlar halinde ayırt edilmesi ve keratinosit proliferatif ve pro-migratory sinyalleri korumak için ek faktörler salgılar. Proliferasyon aşamasında, yeniden epitelizasyon devam ederken, fibroblastlar oluşan yeni granülasyon dokusu, monositler / makrofajlar, lenfositler, ve endotel hücreleri yeniden inşa süreci devam2. Anjiyogenez endotel hücre çoğalması ve göç teşvik ederek uyarılır, yeni damar gelişimi ile sonuçlanan. Hücre dışı matrisin epitelizasyonu ve yeniden biçimlendirilmesi çevreye karşı bir bariyer oluşturur. Yara iyileşir ve granülasyon dokusu bir yara dönüşür gibi, apoptoz ek doku hasarına neden olmadan inflamatuar hücreleri ortadan kaldırır, fibroblastlar, ve endotel hücreleri. Dokunun çekme mukavemeti, kollajen gibi hücre dışı matriksin çeşitli bileşenlerini yeniden şekillendiren fibroblastlar tarafından geliştirilmiştir, böylece yeni oluşan doku neredeyse yaralanmamışderi2 kadar güçlü ve esnektir.
Yara kapanmasına doğru bu son derece uyumlu ilerleme herhangi bir sapma bozulmuş ve / veya kronik yaralara yol açar3. Kronik yaralar artmış oksidatif stres, kronik inflamasyon, hasarlı mikrovaskületür ve yarada anormal kollajen matriks ile karakterizedir4. Oksidatif stres, özellikle yara, yara kapanmasıgeciktirebilir 2,5. Yara iyileşmesinin ilk aşamasında, inflamatuar faz düzensiz hale geldiğinde, konak doku sitotoksik enzimler, serbest oksijen radikalleri bir artış serbest bırakmak inflamatuar hücrelerin sürekli akını5 nedeniyle geniş hasar varsayar ve düzensiz inflamatuar mediatörler, hücre ölümü ile sonuçlanan6,7.
Bu yıkıcı mikroortamda, biyofilm oluşturan bakteriler konak besinlerden yararlanır ve konak dokusunun hasarına katkıda bulunur2. Bu biyofilmlerin kontrol edilmesi ve çıkarılması zordur, çünkü proteinler, DNA, RNA ve polisakkaritlerden oluşan sulu ekstrasellüler polimerik maddeler, içinde barındırılan bakterilerin konvansiyonel antibiyotik tedavilere karşı toleranslı olmasını ve konakçının doğuştan gelen ve adaptif bağışıklık yanıtı2,8,9.
Onlar etkisi ~ 6.5 milyon kişi ve maliyet çünkü kronik yaralar çalışma çok önemlidir ~ ABD'de yılda ~ 40 milyar dolar tek başına10. Diyabetli hastalar enfeksiyon yayılmasını kontrol altına almak için ampütasyon gerektiren kronik yaralar geliştirme riskleri artmıştır. Bu hastalar,diyabetinpatofizyoloji mekanizmasına atfedilen amputasyondan sonraki 5 yıl içinde %50 mortalite riskine sahiptir. Kronik yaraların sonuçları, çözülmemiş ise, amputasyon ve ölüm12dahil çünkü konağın bağışıklık sistemi ve yara iyileşmesi mikrobiyom arasındaki ilişki devam eden araştırma hayati bir konudur.
Kronik yaraların insanlarda nasıl geliştiğini anlamak için önemli bir çaba harcanmış olsa da, kronik yaraların nasıl ve neden oluştuğu hala belirsizdir. Bozulmuş iyileşme mekanizmalarını incelemek için deneyler insanlarda yapmak zordur, ve yara iyileşme uzmanları sadece zaten haftalarca aylarca kronikliğe ulaşmış kronik yaraları olan hastalar bakın. Böylece, uzmanlar kronik2haline gelişmeye yara yol hangi süreçlerin yanlış gitti çalışma yapamıyoruz. İnsan kronik yaralarının karmaşıklığını özetleyen hayvan modellerinin eksikliği vardır. Modelimiz geliştirilene kadar kronik yara çalışmaları için bir model yoktu.
Kronik yara modeli leptin reseptörü mutasyonu olan farelerde geliştirilmiştir (db/db-/-)13. Bu fareler obez, diyabetik, ve iyileşme bozukluğu var ama kronik yaralar geliştirmek yok14. Kan şekeri düzeyleri ortalama 200 mg/dL civarındadır, ancak 400 mg/dL15'ekadar çıkabilir. Yara dokusunda yüksek oksidatif stres (OS) düzeyleri yaralandıktan hemen sonra indüklendiğinde, yara kronikolur 16. DB/db-/- yaralar 20 gün kronik olarak kabul edilir ve 60 gün veya daha fazla açık kalır. Bakteriler tarafından üretilen biyofilm, yaralanmadan üç gün sonra gelişirken görülebilir; olgun bir biyofilm yaralamadan 20 gün sonra görülebilir ve her iki yara kapanana kadar devam eder. Bu farelerde bulduğumuz biyofilm oluşturan bakteriler insan diyabetik kronik yaralarda da bulunur.
Oksidatif stres antioksidan enzimler, katalaz ve glutatyon peroksidaz, hidrojen peroksit yıkmak için kapasitesi ile iki enzimiki inhibitörleri ile yaraların tedavisinde indüklenir. Hidrojen peroksit reaktif bir oksijen türüdür ve proteinlerin, lipidlerin ve DNA'nın oksidasyonu yoluyla hücresel hasara neden olabilir. Katalaz daha az zararlı kimyasallar oksijen ve su içine hidrojen peroksit ayrışması katalizler. 3-Amino-1,2,4-triazole (ATZ) özellikle ve kovalent enzimin aktif merkezine bağlanarak katalaz inhibe,inaktive 17,18,19. ATZ katalaz inhibisyonu yoluyla hem in vitro ve in vivo oksidatif stresetkilerini incelemek için kullanılmıştır20,21,22,23,24. Glutatyon peroksidaz antioksidan yoluyla hidrojen peroksit azaltılması katalizler, glutatyon, ve oksidatif strese karşı hücre koruyan önemli bir enzimdir25. Merkaptosuçinksinik asit (MSA) tiyol ile enzimin selnosistein aktif bölgeye bağlanarak glutatyon peroksidaz inhibe,inaktive 26. MSA in vitro ve in vivo oksidatif stresin etkilerini incelemek için de kullanılmıştır20,27,28.
Kronik yaraların bu yeni modeli, insan diyabetik kronik yaralarda gözlenen aynı özelliklerin birçoğunu paylaştığı için, artmış işletim sistemi ve cilt mikrobiyomlarından kaynaklanan doğal biyofilm oluşumundan kaynaklanan uzun süreli inflamasyon da dahil olmak üzere, çalışmak için güçlü bir modeldir. Yaralardermal-epidermal etkileşim, anormal matriks birikimi, kötü anjiyogenez ve hasarlı vaskülatür bozulmuştur. Kronik yaralar hem erkek hem de dişi farelerde gelişecektir, bu nedenle her iki cins de kronik yaraları incelemek için kullanılabilir. Bu nedenle, kronik yara modeli bu tür yaraların nasıl başladığını temel anlayış ilerlemek için önemli ölçüde katkıda bulunabilir. Bu kronik yara modelinin kullanılması, bozulmuş yara iyileşmesi nin fizyolojisi ve konağın mikrobiyomu sayesinde kronikliğin nasıl başlatılabildiği/elde edildiği ile ilgili temel sorulara yanıt verebilir.

<table><tbody><tr><td>B6. BKS(D)-Leprdb/J&nbsp;</td><td>Jackson Laboratuvarı&nbsp;</td><td>00697</td><td>Homozigotlar ve heterozigotlar mevcut&nbsp;</td></tr><tr><td>Nair Yatıştırıcı Aloe ve Lanolin İçeren Tüy Dökücü Losyon</td><td>Nair</td><td></td><td>kimyasal tüy dökücü</td></tr><tr><td>Buprenex (buprenorfin HCl)</td><td>Henry Stein Hayvan Sağlığı</td><td>059122</td><td>0.3 mg/ml, Sınıf 3</td></tr><tr><td>3-Amino-1,2,4-triazol (ATZ)</td><td>TCI</td><td>A0432</td><td></td></tr><tr><td>Merkaptosüksinik asit (MSA)</td><td>Aldrich</td><td>88460</td><td></td></tr><tr><td>Fosfat tampon çözeltisi (PBS)</td><td></td><td></td><td>otoklav sterilize edildi</td></tr><tr><td>Isofluran</td><td>Henry Schein Hayvan Sağlığı</td><td>029405</td><td>NDC 11695-6776-2</td></tr><tr><td>Oksijen Tankı</td><td></td><td></td><td>, buharlaştırma sistemi ile uyumlu olmalıdır</td></tr><tr><td>İzofluran buharlaştırıcı</td><td>JA Baulch & İştirakler&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Wahl saç kesme makinesi</td><td>Wahl</td><td></td><td>Lityum İyon Pro</td></tr><tr><td>Acu Punch 7mm cilt biyopsisi yumruklar</td><td>Acuderm Inc.</td><td>P750</td><td></td></tr><tr><td>Tegaderm&nbsp;</td><td>3M</td><td>Ref: 1624W</td><td>Şeffaf film sargısı (6 cm x 7 cm)</td></tr><tr><td>Isıtma yastığı</td><td>Conair</td><td></td><td>Nemli Kuru Isıtma Yastığı</td></tr><tr><td>İnsülin şırıngaları</td><td>BD</td><td>329461</td><td>0,35 mm (28G) x 12,7 mm (1/2")</td></tr><tr><td>%70 etanol</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kimwipes</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cımbız</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Keskin cerrahi makas</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>İnce metal spatula</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Boru</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fare burun konisi</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Eldiven</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>küçük plastik kaplar</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

diyabetik farelerde kronik yaralar oluşturma protokolü

Protocol to Create Chronic Wounds in Diabetic Mice

Kronik yaralar, uygun iyileşme ile ilgili bir veya daha fazla karmaşık hücresel ve moleküler süreçlerde kusurlu düzenleme sonucu gelişir. Onlar etkisi ~ 6.5M kişi ve maliyet ~ $ 40B / yıl SADECE ABD'de. Kronik yaraların insanlarda nasıl geliştiğini anlamak için önemli bir çaba harcanmış olsa da, temel sorular cevapsız kalmıştır. Son zamanlarda, insan kronik yaraların birçok özelliği olan diyabetik kronik yaralar için yeni bir fare modeli geliştirdi. Db/db-/- farekullanarak, yaradan hemen sonra yara dokusunda yüksek düzeyde oksidatif stres (OS) üreterek, antioksidan enzimlere özgü inhibitörlerle tek seferlik bir tedavi yöntemi yle kronik yaralar oluşturabilir ve glutatyon peroksidaz. Bu yaralar işletim sistemi yüksek düzeyde, doğal olarak biyofilm geliştirmek, tedaviden sonra 20 gün içinde tamamen kronik hale ve 60 günden fazla açık kalabilir. Bu yeni model insanlarda diyabetik kronik yaraların birçok özelliği vardır ve bu nedenle önemli ölçüde yaraların kronik hale nasıl temel anlayış ilerleyen katkıda bulunabilir. Bu büyük bir atılımdır, çünkü insanlardaki kronik yaralar hastalara önemli ölçüde acı ve sıkıntı yatır ve çözülmemişse ampütasyona neden olur. Ayrıca, bu yaralar çok pahalı ve tedavi etmek için zaman alıcı, ve hastalara kişisel gelir önemli kaybına yol açar. Bizim kronik yara modeli nin kullanımı ile çalışmanın bu alanda gelişmeler önemli ölçüde bu zayıflatıcı durum altında muzdarip milyonlarca sağlık artırabilir. Bu protokolde, akut yaraların kronikleşmesine neden olan ve daha önce yapılmamış olan prosedürü ayrıntılı olarak açıklıyoruz.

Şekil 5, yara kapatmaya doğru ilerleyen inhibitörlerin tedavisi olmayan bir yara ve kronikliğe doğru ilerleyen inhibitörlerin tedavisi ile bir yara örneği dir. Biyofilm ve sıvı birikiminin görülebilmeleri için kronik yaranın üzerine şeffaf pansuman bırakılmıştır.
Kronik yara inisiyasyonu en az 6 saat içinde gerçekleşir ve yara marjı oksidatif stresten gözle görülür şekilde değişir. Bu yara marjının ...

Kronik yaralar, tam kalınlıkta kutanöz bir yaradan sonra yüksek düzeyde oksidatif stres emilerek diyabetik fare modelindeki akut yaralardan gelişir. Yara katalaz ve glutatyon peroksidaz inhibitörleri ile tedavi edilir, cilt mikrobiyom mevcut bakteriler tarafından bozulmuş iyileşme ve biyofilm gelişimi ile sonuçlanan.

Diyabetik Farelerde Kronik Yaralar Oluşturma Protokolü

Chronic wounds develop as a result of defective regulation in one or more complex cellular and molecular processes involved in proper healing. They impact ...

Bu fare modeli yara kronikliği tıbbi alanında sorulara cevap yardımcı olabilir. Bu modelin en büyük avantajı farelerde kronik yaralar insanlarda kronik yaraların birçok yönünü taklit olmasıdır. Başlamak için fareyi temiz bir yüzeye yerleştirin ve kuyruğunun tabanını çimdikleyerek yerinde tutun.Sonra saç makası hazırlamak ve fare herhangi bir ani hareketler yaparsa hızlı bir şekilde onları çekmek için hazır olun. Tüm kuyruk da dahil olmak üzere kuyruk boyun tüm geri tıraş. En verimli kesim için bıçağı saç büyüme yönüne karşı hafifçe çalıştırın.Bu çürük veya kesebilir gibi cilt içine derin makas basın etmeyin. Daha sonra, tüy dökücü losyon uygulaması için cilt hazırlayın. Kimyasal yanıkları önlemek için su yla ıslatılmış kağıt havlu ile cildi nemlendirin.Kesilen saçı cilde karşı ıslayacak kadar basınçla hafifçe bastırın. Daha sonra cilt ıslak iken, 15 ila 20 saniye boyunca tıraş bölgeye tüy dökücü losyon küçük bir topak ovmak. Uygulandıktan sonra, losyon 20 ila 45 saniye cilt ile tepki sağlar.Losyonu durulamadan önce, reaksiyonu kontrol etmek için çeşitli yerlerde ki bazı losyonu hafifçe silin. Cilt pembe ve tüysüz ise, reaksiyon tamamlanır. Sonra, onu yıkamak için farekavrama.Başpar

protocol-to-create-chronic-wounds-in-diabetic-mice

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Biz santral arter ve sinir ve beyin nörovasküler demet bölerek bir tavşan kulağı iskemik yara modeli oluşturmak için minimal invaziv bir teknik geliştirdik. Bir subkutan tünel sonra tüm cilt altı dokuları keser. Bu prosedür, minimal deri bozulmasına neden olmakta ve güvenli bir şekilde, diyabetik hayvanlarda kullanılabilir.

Bir İskemik Yara Model üretmek için Basitleştirilmiş Tekniği

Fizyolojik ve patofizyolojik ortamlarda terapötik bileşiklerini değerlendirmek için de kullanılabilir deri yara iyileşmesinin Bir murin modeli.

Yara Şifa murin Modeli

Yağ kaynaklı kök hücreler (ASCs) kolayca izole ve normal sıçanlar FAT'tan hasat. ASC yaprak hücre sayfalık mühendislik kullanılarak oluşturulabilir ve tam-kalınlık sergilenmesi diyabetik yağlı sıçanlar kusurları maruz kemik ile deri ve suni deri bilayer ile kaplı Zucker içine nakledilmektedir.

Oluşturma ve diyabetik yara iyileşmesi manken bir yağ elde edilen kök hücre (ASC) Sheet nakli

Burada gerçek zamanlı, non-invaziv, kollarındaki Pseudomonas aeruginosabiyofilm yara enfeksiyonları izleme için tüysüz fareler kullanan bir roman diyabetik fare modeli açıklar. Bu yöntem diğer bakteri ve genetiği değiştirilmiş mikroorganizmalar, çoklu türler biyofilmler, dahil olmak üzere enfeksiyon değerlendirmek ve antibiofilm stratejileri etkinliğini test etmek için adapte edilebilir.

Işık tarafa: In Vivo izleme bir diyabetik tüysüz fare modelinde kronik yaralarda Pseudomonas aeruginosa biyofilm enfeksiyonların

Hazırlanan DOX-CL iskelesi, DW'lerde hasarlı dokunun geri kazanılması için gerekli olduğu düşünülen mekanik mukavemet, gözeneklilik, su emme, bozulma oranı, sürekli salınım, anti-bakteriyel, biyouyumluluk ve antienflamatuar özelliklerde ideal bir DW pansumanının önkoşullarını karşıladı.

Diyabetik Yaraların Hızlandırılmış İyileşmesi İçin Doksiksin Yüklü Kollajen-Kitosan Kompozit İskele

Erkek SD sıçanlarda streptozotosin ile indüklenen diyabetik yara modeli şu anda tip I diabetes mellitusta yara iyileşmesini incelemek için en yaygın kullanılan modeldir. Bu protokol, bu modeli oluşturmak için kullanılan yöntemleri açıklar. Ayrıca potansiyel zorlukları sunar ve ele alır ve diyabetik yaraların ilerlemesini ve anjiyojenik özelliklerini inceler.

Tip 1 Diyabetin Sıçan Yara Modelini Oluşturmak İçin Bir Protokol

Dijital bir ısıtma cihazı kullanan farelerde bir yanık yarası iyileşme modeli oluşturmak için aerodinamik bir protokol sunulmuştur. Deri üzerinde oluşturulan satranç tahtası benzeri deney bölgeleri, yara iyileşme testi için daha fazla fonksiyonel analizi kolaylaştırır.

Dijital Isıtma Cihazına Dayalı Farelerin Satranç Tahtası Benzeri Yanık Yara İyileşme Modeli

Yaralar küresel bir sağlık sorununu temsil eder. Bu çalışma, yara ölçümü değişkenliğini en aza indirmek için dijital planimetri kullanan standart bir fotoğraf kabini geliştirdi. Farelerde yaraların 14 gün boyunca izlenmesi, yara alanı ve çevresinde başlangıçta bir artış olduğunu ve ardından kademeli olarak kapandığını ortaya koydu. Bu metodoloji, klinik öncesi modellerde yara kapatma kinetiğinin değerlendirilmesine yardımcı olabilir.

Bir Fare Modelinde Yara Kapanma Kinetiğini Değerlendirmek için Dijital Planimetri

Bu kağıt kadar 12-24 hr koşulları gibi ateş uyarabilir farelerde tüm vücut ısısı için bir protokol açıklar.

Farelerde Uzun Süre Whole Body Hipertermi için protokol

Biz hepatik neo-adacık STZ formasyonu (streptozotosin)-indüklenen helper bağımlı adenoviral vektör (HDAd) ve hiperglisemi ters kullanılarak gen Neurogenin3 transferi (Ngn3) ve Betacellulin (BTC) ile diyabet oluşturulan farelerde. Tarif Bizim metodumuz vivo iletimi ve uzun ömürlü gen ekspresyonu kendi yüksek verimli olan helper-bağımlı adenoviral vektörlerin avantajları alır.

Helper bağımlı adenoviral vektör-Gen Transferi ile Diyabetik Sıçanların Karaciğerinde Neo-Islet Oluşumu

Keşfedin diyabetik farelerde kronik yara oluşturma protokolünü. Oksidatif stres indüksiyonu ve antioksidan enzim inhibitörleri kullanarak insan diyabetik kronik yaralarını taklit eden db/db-/- fare modelini öğrenin.

Diyabetik Farelerde Kronik Yaralar Oluşturma Protokolü

Daha fazla video keşfet