Name: Fare Oropharyngeal aspirasyon modeli Ventilatör ilişkili ve hastane edinilen bakteriyel pnömoni (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-06-28T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 32 s
Description: Öğrenin fare orofarengeal aspirasyon pnömoni modelini kullanarak ventilatör ilişkili bakteriyel pnömoniyi incelemeyi. Bu yöntem, antibiyotik direnci ve yeni tedaviler üzerine çalışmalar için hızlı ve tekrarlanabilir sonuçlar sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu eser Ulusal Enstitüsü, alerji ve enfeksiyon hastalıkları Ulusal Sağlık Enstitüleri [Grant numaraları R01 AI117211, R01 AI130060, R21 AI127954 ve R42 AI106375 BS için] ve ABD Gıda ve İlaç İdaresi [sözleşme tarafından desteklenmiştir HHSF223201710199C BML için].

Hayvanları içeren tüm yordamları araştırmacı kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylanması gerekir.
1. bakteriyel Inoculum hazırlanması
<ol><li>Bakteri kolonileri yalıtmak.<ol>
<li>Çizgi uygun steril agar Orta (Örneğin, Tryptic soya agar), bakteriyel strain (Örneğin, A. baumannii "HUMC1") izole kolonileri oluşturmak için dikkatli olmak.</li>
		<li>Uygun koşullar (Örneğin, bir gecede 37 ° C'de), kuluçkaya.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Gecede kültür büyümek.<ol>
<li>Bir temsilci, steril bir inoculating döngü agar plakalı izole koloni seçin ve uygun steril broth Orta (Örneğin, Tryptic soya suyu) 10 mL aşılamak için kullanabilirsiniz.</li>
		<li>Durağan faz, uygun koşullar (Örneğin, Bacalı kapağı, 50 mL konik şişe geceleme 200 devirde sallayarak ile 37 ° C) ulaşmak örnek sağlar.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Alt kültür büyümek.<ol>
<li>Gecede Kültür 100 μL 10 mL taze steril broth bir pipet kullanarak aktarın.</li>
		<li>Uygun koşullar (Örneğin, 3 h Bacalı kapağı, 50 mL konik şişe için 200 devirde sallayarak ile 37 ° C), üstel/log fazı ulaşmak için izin verir.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Alt kültür yıkayın.<ol>
<li>Alt kültür incubating onun ortamdan kaldırabilirsiniz.</li>
		<li>Bakteri cips 5 min için 4.000 × g, santrifüj kapasitesi.</li>
		<li>Aspire edin ve süpernatant atın.</li>
		<li>10 mL steril fosfat tamponlu tuz (PBS) Pelet ve şiddetle tamamen resuspended kadar girdap ekleyin.</li>
		<li>Adımları yineleyin 1.4.2 - 1.4.4 iki kez, toplam 3 yıkar.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Bakteriyel süspansiyon konsantrasyon ayarlayın.<ol>
<li>600 optik yoğunluk ölçer bir spektrofotometre kullanarak nm (OD600), bakteriyel süspansiyon optik yoğunluğunu ölçmek.</li>
		<li>İnoculum optik yoğunluğu bir OD600 0,5, düşünceye kadar steril PBS denklem Cben× Vben kullanarak bakteriyel süspansiyon Ekle "C" nerede konsantrasyon, Cf× Vf, = "V" ise birim, "ben" ilk, olduğunu ve "f", son. * Cf her zaman 0,5 olmalıdır; Vf çözmek için değişkendir.</li>
		<li>Bakteriyel süspansiyon bir OD600 0,5 düşerse, bakteri cips ve 0,5 OD600 ulaşmak için süpernatant uygun miktarda kaldırmak 5 min için 4.000 × g, santrifüj kapasitesi.</li>
		<li>Seri dilutions steril PBS (Örneğin, 1 × 10-6elde etmek için üç 1: 100 dilutions) gerçekleştirmek ve koloni oluşturan bakteri konsantrasyonu ortaya koymaktadır korelasyon katsayısı belirlemek için steril agar tabağa mL (CFUs/mL) başına birim bir OD600 0,5. Not: Bu korelasyon katsayısının değeri için her tür her zor değişir ve inoculum hazırlık bir enfeksiyon için önce belirlenmelidir.</li>
		<li>Korelasyon katsayısı belirledikten sonra bunu bir inoculum (Örneğin, 2 × 108- 1 × 109 CFUs/mL); istenilen konsantrasyon oluşturmak için kullanın istenen inoculum OD600 0,5 büyükse bakteri cips ve istenen toplama ulaşmak için süpernatant uygun miktarda kaldırmak 5 min için 4.000 × g de bakteriyel süspansiyon santrifüj kapasitesi.</li>
		<li>Bu değerler aynı türden bakteri yalıtır ve farklı genetik kökenden fareler arasında değişir gibi her tür fare her bakteri izole virülans belirlemek için in vivo pilot çalışmalar gerçekleştirmek. Belirli suşları alt inocula öldürücü Ayagin Gram-negatif türleri için farelerde LD100 genellikle 1-5 × 108 CFUs/fare, olmasına rağmen.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Daha önce yayımlanmış8 (isteğe bağlı) isteğe bağlı, kesin inocula olarak ileride kullanmak için aynı aliquots dondur.<ol>
<li>Bakteriyel inoculum 1 L iki 500 mL konik şişeleri ve 5 min için 4.000 × g, santrifüj yukarıda açıklanan transfer olarak hazırlayın.</li>
		<li>450 mL süpernatant konik her şişe üzerinden atmak ve granül kalan süpernatant bakteri resuspend.</li>
		<li>Konsantre bakteriyel inoculum manyetik heyecan çubuğunu içeren bir 250 mL kabı transfer ve sürekli bir heyecan tabak 300 devirde üstüne karıştırın.</li>
		<li>Dikkatle konsantre bakteriyel inoculum (Örneğin, 1 × 1010 CFUs/mL) tam olarak 600 μL aktarım bir 1.6-mL kriyojenik flakon steril H2O tam olarak 300 μL ve 300 içeren bir pipet kullanarak μL steril gliserin; Mix ve-80 ° C'de depolayın Not: Gliserol muhafazası için gerekli deneysel sonuçlar yıkmak ve bu nedenle onu yıkamak gerekli olan aşırı ölüm neden olur.</li>
		<li>Kullanım için hazır olduğunuzda, oda sıcaklığında 10 dakika için örnek çözülme.</li>
		<li>1 mL 50 mL konik şişe aktarmak, 4.000 × g bakteri cips 5 min için de 9 mL steril PBS ve santrifüj ekleyin. Süpernatant Aspire edin ve PBS bulaşıcı inoculum için istenen toplama ulaşmak için uygun bir hacmine CFUs (CFUs/ml hisse senedi toplama donmuş 1 mL ×) önceden belirlenmiş miktar resuspend.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. anesthetizing fareler
<ol><li>Ketamin/Xylazine Not: Anestezi ketamin/xylazine ile fare uyanır önce aşı yordamı tamamlamak için bu tekniği yeni araştırmacı için yeterli zaman sunan uzun bir süre vardır.<ol>
<li>Pharmaceutifcal sınıf PBS, 1 mL olarak 100 mg/mL ketamin hisse senedi çözüm 8,5 mL birleştirerek 10 mL enjekte edilebilir çözeltisi hazırlamak (son konsantrasyonu 10 mg/mL) ve 20 mg/mL Xylazine hisse senedi çözüm 0.5 mL (son konsantrasyonu 10 mg/mL).</li>
		<li>Enjeksiyonla mayi (IP) (Örneğin, bir 25-g fare için 250 μL) 10 μL/g yönetmek.</li>
		<li>Çünkü onların gözleri anestezi sırasında uzun bir süre zarar eğilimli ketamin/Xylazine ile anestezi fareler gözünde oftalmik merhem uygulamak.</li>
		<li>Fareyi bir kafese koyun ve anesteziden uyanana kadar izlemek. Not: sternal recumbency korumak için yeterli kendine geldi kadar hayvan katılımsız bırakılmamalıdır.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Isoflurane Not: Fare hızlı bir şekilde isoflurane kaynaklı anesteziden anestezi bu yöntemi yalnızca aşılama yordam yetkin olduktan sonra kullanılmalıdır yüzden indüksiyon odasından sonra kaldırılmakta uyan.<ol>
<li>Saf fareler ile oksijen akan bir uygun ölçekli indüksiyon odası yerleştirin.</li>
		<li>Odası tamamen kapalı sonra fareyi kullanarak hassas Buharlaştırıcı %4 (v/v) en az 5 min için isoflurane eklemek anestezi; anestezi indüksiyon odasından bir fare kaldırma ve anesteziden uyanmaya ne kadar süreceği ölçerek onaylamak (~ 60 s). Not: anestezi kez değişebilir üzerinde kurumsal yönergeleri dayalı ve bazı hayvanlar tam anestezi olmak için daha--dan 5 dk gerekebilir unutmayın.</li>
		<li>10 dakikaya kadar için anestezi isoflurane konsantrasyonu % 2-3 ayarlayarak korumak; anestezi toplam süresi ise > 15 dk, oftalmik merhem imzalat fareler gözler için geçerlidir.</li>
		<li>Bir kafes içinde fareyi getirin ve anestezi, adım 2.1 olduğu gibi gelen uyanana kadar izlemek.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. aşı/hastalık fareler
<ol><li>İmzalat bir fare askıya alma, onun üst kesici dişler (Örneğin, diş ipi) güçlü, zayıf dizesini tarafından asılı bir yükseklikte sabit bir nesne için yaklaşık iki katı fare Gövde uzunluğu (Örneğin, 20 cm) çalışma yüzeyi (Örneğin yukarıda güvenli Laboratuvar tezgah).</li>
	<li>Fare dil steril, künt uçlu forseps kullanarak onun ağzından yavaşça çekin. Dil bir steril, eldivenli bir parmak fare dili yanlışlıkla kırma önlemek için transfer. Dil mastoidi erişmesine izin vermek ve inoculum tarafa, yutma engelleyen ağız dışında tutun.</li>
	<li>Fare dilini tutarak, 50-μL inoculum (bakteriyel süspansiyon) bir micropipette kullanarak mastoidi yerleştirin; mastoidi oral kavite ve farenks arka ağız kısmına doğru yer alır. Not: Sadece ilk durak micropipette tarihinde pipetting tarafından sıvı sunmak çok önemlidir. Fareyi birkaç saniye ne zaman inoculum içinde mastoidi yerleştirilir nefes; sonunda, yansımalı aspirasyon pnömoni enfeksiyonu neden olan akciğerlere giren sıvı ayırt edici çatırtı gürültü ile gösterilen bakteriyel süspansiyon nefes için fareyi neden olur.</li>
	<li>İnoculum kadar koymamış durumunda normal solunum engellemek, siklikla ağız ve inoculum sonraki soluma yoluyla yansımalı aspirasyon zorlamak için forseps ile çimdik için yeterli geri.</li>
	<li>Aşı sonra dil yayın, fare süspansiyon dizeden kaldırmak, bir kafese koyun ve anestezi, adım 2.1 olduğu gibi gelen uyanana kadar izlemek.</li>
</ol>4. hastalık ilerleme izleme
Not: hayvan acı nedeniyle, çeşitli göstergeler fareler can çekişen olunca belirtmek için kullanılmalıdır; ötenazi önceden onaylanmış bir IACUC protokol uyarınca bu tespiti takip yapılmalıdır; moribundity çeşitli işaretleri vücut ısısı, kilo kaybı, görünüm, yürüyüş ve kan (Örneğin, Istat üzerinden)9,10,11,12denelde edilebilir diğer biyolojik dahil, 13,14,15,16.
<ol><li>Daha önce onaylanmış IACUC Protokolü (Örneğin, servikal çıkığı tarafından takip CO2 ) göre fareler ötenazi.</li>
	<li>Akciğerlere trakea, pulmoner arter ve pulmoner ven yakın akciğerlere keserek euthanized fareden kaldırın.<ol>
<li>Mikroskobu<ol>
<li>Akciğerler (veya bölümünün) bir örnek kalıp içine yerleştirin.</li>
			<li>Örnek kalıp tamamen doku batış en uygun kesme sıcaklık (O.C.T.) karışımla doldurun.</li>
			<li>Örnek-80 ° C'de dondurmak</li>
			<li>Örnek bir patoloji laboratuvar bölümü ve slaytları Mikroskopi için bağlama için gönderin.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Bakteri yükü<ol>
<li>Akciğer dokusu bir analitik dengede tartın.</li>
			<li>Akciğer dokusu 50 mL konik flakon steril PBS (doku büyüklüğüne) 2-5 mL içeren aktarın.</li>
			<li>Akciğer doku doku homogenizer ile homojenize.</li>
			<li>Homogenate seri dilutions yaklaşık 1000 CFUs/beklenen bakteri yükü akciğerlerde dayalı mL, elde etmek için steril PBS gerçekleştirin.<ol>
<li>1 × 109 CFUs/mg bekleniyor, örneğin, üç 1: 100 dilutions gerçekleştirin: PBS ve girdap; 9.9 ml homogenate Transfer 100 μL ilk 1: 100 seyreltme bu. İlk 1: 100 seyreltme 100 μL PBS ve girdap 9.9 mL transfer; ikinci 1: 100 seyreltme bu. İkinci 1: 100 seyreltme 100 μL PBS ve girdap 9.9 mL transfer; Bu üçüncü ve son 1: 100 seyreltme var.</li>
				<li>Akciğerlerde bakteri yükü bilinmiyorsa, beklenen aralığı yakalamak için dilutions gerçekleştirebilirsiniz.</li>
			</ol>
</li>
			<li>Steril agar üzerinde plaka dilution(s).<ol>
<li>Steril Tryptic soya suyu (TSB) agar (TSA) plakalı hazırlamak: birleştirin TSB 30 g, agar 15 g ve 1 litre su, mix ile manyetik karıştırıcı ve ısı ~ 100 ° C'de 5 dakika serin ve basınçlı kap üzerinde sıvı döngüsü için 15 dk. için soğutmak için izin ver sonra izin ver süreyle kaynar kadar ~ 55 ° C, transfer 10 mL taze autoclaved steril Petri yemekler, TSA ve oda sıcaklığına kadar soğumasını bekleyin. Kuru benchtop 2-5 d için üzerinde veya altında bir Biyogüvenlik 10 dakikadır kabine ortaya izin.</li>
				<li>Seyreltme 100 μL steril TSA içeren bir Petri kabına aktarın ve dağıtıcı veya cam boncuk kullanarak TSA yayılmış.</li>
				<li>Gecede 37 ° C'de Petri kabına bir oksijen kuluçka (yani, 37 ° C kuluçka makinesi su ele geçen bir 1-L kabı içeren) saklamak</li>
			</ol>
</li>
			<li>CFUs/mL akciğer homogenate üzerine agar kaplama göre belirler (Örneğin, yukarıda açıklanan üçüncü ve son seyreltme 100 μL ile TSA plaka üzerinde 100 CFUs 100 CFUs/100 μL × 100dil 1 × 100dil #2 × 100dil #3 olurdu = 1 × 109 CFUs/mL).</li>
			<li>CFUs/mg akciğer doku CFUs/mL akciğer homogenate mg akciğer doku/mL homogenate (Eğer yukarıda açıklanan örnek 100 mg 5 mL PBS, sonra 1 × 109 CFUs/mL ÷ 100 mg / 5 mL = 5 × 107 homojenize akciğer dokusunun kullanılanÖrneğin, tarafından bölerek dayalı hesaplamak CFUs/mg).</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Media Centre, W. H. O. World Health Organization. Fact Sheet - Top 10 Causes of Death. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs310/en/">http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs310/en/</a> (2017).</li>
<li>Spellberg, B., Talbot, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recommended+Design+Features+of+Future+Clinical+Trials+of+Antibacterial+Agents+for+Hospital-Acquired+Bacterial+Pneumonia+and+Ventilator-Associated+Bacterial+Pneumonia%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Recommended Design Features of Future Clinical Trials of Antibacterial Agents for Hospital-Acquired Bacterial Pneumonia and Ventilator-Associated Bacterial Pneumonia.</a> Clinical Infectious Diseases. 51 (S1), S150-S170 (2010).</li>
<li>Kalil, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Management+of+Adults+With+Hospital-acquired+and+Ventilator-associated+Pneumonia%3A+2016+Clinical+Practice+Guidelines+by+the+Infectious+Diseases+Society+of+America+and+the+American+Thoracic+Society%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Management of Adults With Hospital-acquired and Ventilator-associated Pneumonia: 2016 Clinical Practice Guidelines by the Infectious Diseases Society of America and the American Thoracic Society.</a> Clinical Infectious Diseases. 63 (5), e61-e111 (2016).</li>
<li>Medina, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+model+of+pneumococcal+pneumonia%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Murine model of pneumococcal pneumonia.</a> Methods in Molecular Biology. , 405-410 (2010).</li>
<li>Azoulay-Dupuis, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+efficacy+of+a+new+fluoroquinolone%2C+sparfloxacin%2C+against+penicillin-susceptible+and+-resistant+and+multiresistant+strains+of+Streptococcus+pneumoniae+in+a+mouse+model+of+pneumonia%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrobial+Agents+and+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">In vivo efficacy of a new fluoroquinolone, sparfloxacin, against penicillin-susceptible and -resistant and multiresistant strains of Streptococcus pneumoniae in a mouse model of pneumonia.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 36 (12), 2698-2703 (1992).</li>
<li>Mizgerd, J. P., Skerrett, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+human+pneumonia%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Lung+Cellular+and+Molecular+Physiology%22%5BJournal%5D)">Animal models of human pneumonia.</a> American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology. 294 (3), L387-L398 (2008).</li>
<li>Rayamajhi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-surgical+intratracheal+instillation+of+mice+with+analysis+of+lungs+and+lung+draining+lymph+nodes+by+flow+cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Non-surgical intratracheal instillation of mice with analysis of lungs and lung draining lymph nodes by flow cytometry.</a> Journal of Visualized Experiments. (51), (2011).</li>
<li>Nielsen, T. B., Bruhn, K. W., Pantapalangkoor, P., Junus, J. L., Spellberg, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryopreservation+of+virulent+Acinetobacter+baumannii+to+reduce+variability+of+in+vivo+studies%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Cryopreservation of virulent Acinetobacter baumannii to reduce variability of in vivo studies.</a> BMC Microbiology. 15, 252(2015).</li>
<li>Trammell, R. A., Toth, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Markers+for+predicting+death+as+an+outcome+for+mice+used+in+infectious+disease+research%5BTitle%5D)+AND+%22Comparative+Medicine%22%5BJournal%5D)">Markers for predicting death as an outcome for mice used in infectious disease research.</a> Comparative Medicine. 61 (6), 492-498 (2011).</li>
<li>Bast, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+murine+model+of+pneumococcal+pneumonia%3A+use+of+temperature+as+a+measure+of+disease+severity+to+compare+the+efficacies+of+moxifloxacin+and+levofloxacin%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrobial+Agents+and+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Novel murine model of pneumococcal pneumonia: use of temperature as a measure of disease severity to compare the efficacies of moxifloxacin and levofloxacin.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 48 (9), 3343-3348 (2004).</li>
<li>Hankenson, F. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Weight+loss+and+reduced+body+temperature+determine+humane+endpoints+in+a+mouse+model+of+ocular+herpesvirus+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Association+for+Laboratory+Animal+Science%22%5BJournal%5D)">Weight loss and reduced body temperature determine humane endpoints in a mouse model of ocular herpesvirus infection.</a> Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 52 (3), 277-285 (2013).</li>
<li>Adamson, T. W., Diaz-Arevalo, D., Gonzalez, T. M., Liu, X., Kalkum, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypothermic+endpoint+for+an+intranasal+invasive+pulmonary+aspergillosis+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Comparative+Medicine%22%5BJournal%5D)">Hypothermic endpoint for an intranasal invasive pulmonary aspergillosis mouse model.</a> Comparative Medicine. 63 (6), 477-481 (2013).</li>
<li>Nielsen, T. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diabetes+Exacerbates+Infection+via+Hyperinflammation+by+Signaling+through+TLR4+and+RAGE%5BTitle%5D)+AND+%22mBio%22%5BJournal%5D)">Diabetes Exacerbates Infection via Hyperinflammation by Signaling through TLR4 and RAGE.</a> mBio. 8 (4), (2017).</li>
<li>Nielsen, T. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monoclonal+Antibody+Protects+Against+Acinetobacter+baumannii+Infection+by+Enhancing+Bacterial+Clearance+and+Evading+Sepsis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Monoclonal Antibody Protects Against Acinetobacter baumannii Infection by Enhancing Bacterial Clearance and Evading Sepsis.</a> Journal of Infectious Diseases. 216 (4), 489-501 (2017).</li>
<li>Cheng, B. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+serotypes+5+and+8+capsular+polysaccharides+in+protection+against+Staphylococcus+aureus+in+murine+models+of+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Vaccine+Immunotherapy%22%5BJournal%5D)">Evaluation of serotypes 5 and 8 capsular polysaccharides in protection against Staphylococcus aureus in murine models of infection.</a> Human Vaccine Immunotherapy. 13 (7), 1609-1614 (2017).</li>
<li>Wong, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+and+Pathophysiological+Overview+of+Acinetobacter+Infections%3A+a+Century+of+Challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Microbiology+Reviews%22%5BJournal%5D)">Clinical and Pathophysiological Overview of Acinetobacter Infections: a Century of Challenges.</a> Clinical Microbiology Reviews. 30 (1), 409-447 (2017).</li>
</ol>

Yazarlar onlar rakip hiçbir mali çıkarları var bildirin.

Emin olmak için fare minyatür insanlar değildir. Fare modellerden elde edilen sonuçlar bağlamda kabul ve daha sonra insanlar, iki tür6arasındaki farklılıklar ve benzerlikler dayalı uygulanabilirliği için yorumlanır. Uygun fare zorlanma olarak seçmek önemlidir bazı diğerlerinden daha; bazı enfeksiyonlara daha yatkındır aynı seçim16patojen zorlanma için geçerlidir.
Enfeksiyonlar titiz ve son derece tekrarlanabilir biçimde gerçekleştirmek için öneml...

Alt solunum yolu enfeksiyonu dünyanın en ölümcül bulaşıcı hastalık ve ölüm gelişmekte olan ülkelerde1' deki en yaygın nedeni var. Genel olarak, bu enfeksiyonların fazla 3.2 milyon ölüm1için hesap. Buna ek olarak, nozokomiyal pnömoni sağlık edinsel enfeksiyonlar en yaygın ve en ölümcül formları arasında ve en antibiyotik dirençli patojenler2,3tarafından kaynaklanır. Tipik topluluk alınan her ikisi için bakteriyel pnömoni ve nozokomiyal pnömoni edinimi oropharyngeal içeriği aspirasyon alveoller içine yoldur. Bu hastalıklar genellikle eğitim için kullanılan fare modelleri burunici aşı4çok hedef kapalı komplikasyonlar ve hastalığı ile uyumsuz sinüzit ve fiziksel travma, gibi belirtiler neden akciğer dışında bakterilerin yatırmak, kullanın modelleri vardı insan ilerlemesinde taklit etmek için tasarlanmış. Diğer modelleri inhalasyon odalar ve daha doğru viral, tüberküloz ve fungal pnömoni taklit ama doğru bir şekilde tipik bakteriyel pnömoni edinmesinin normal rotanın özetlemek değil micromisting cihazlar kullanabilirsiniz.
Fare oropharyngeal aspirasyon pnömoni modeli doğal yol ve patogenezinde bakteriyel pnömoni benzetimi yapmak için yararlı. Aşı tarafından 50 µL imzalat fareler bir pipet kullanarak mastoidi içine bakteriyel süspansiyon yansımalı aspirasyon ensues, hangi içinde zatürreeye sonuçlanır. Bu modeli kullanarak, bir zatürre neden olan patojen ve daha yüksek sadakat manken insanda gözlenen aspirasyon pnömoni enfeksiyonlara daha benzer bu hastalıklarla mücadele için yeni tedaviler patogenezinde inceleyebilirsiniz. Ayrıca, ağız boşluğu5,6ile enfekte benzer modelleri farklı olarak tam inoculum nerede bu off-site inflamasyon ve gastrit gibi enfeksiyonlara neden olabilir bağırsak yerine akciğerlere ulaşır bu model sağlar ve enterit. Son olarak, Laringoskop gerektirir ve trakea7ile inoculates başka bir yayımlanmış modeli, aksine bu model hava yolu bir sonda ile besleme iğneyle engel değil ve enjeksiyon inoculum teslim edilmek üzere gerektirmez. Yerine, aşı üzerinde fare doğal aspirasyon refleks dayanır.

<table><tbody><tr><td>Agar</td><td>BD</td><td>214530</td> TSA Boncukları, Borosilikat Cam Kimble yapmak <td>için TSB ile birleştirin</td></tr><tr><td></td><td></td><td>135003</td><td>Her kullanımdan önce fırınlayarak veya otoklavlayarak sterilize edin</td></tr><tr><td>Beher, 250 mL</td><td>Pyrex</td><td>1003</td><td>Konsantre bakteriyel inokulların hassas bir şekilde ayrılması sırasında kullanılır</td></tr><tr><td>Santrifüj</td><td>Sorvall</td><td>ST 40R 4.000</td><td>kez kapasiteli; 4&deg'de g; Anestezi</td></tr><tr><td>için C Odası</td><td>Kent Scientific Corporation</td><td>VetFlo-0720</td><td>5 fareye kadar</td></tr> barındırır <tr><td>Cryomold, Orta Boy</td><td>Sakura Tissue-Tek</td><td>4566</td><td>Tek kullanımlık vinil numune kalıpları, 15 kez; 15&kez; 5 mm</td></tr><tr><td>Diş İpi</td><td>Oral-B</td><td>37000469537</td><td>Masa yüksekliğinin yaklaşık 6 inç üzerinde sabit direğe bağlayın</td></tr><tr><td>Forseps</td><td>VWR</td><td>82027-440</td><td>Dili farenin ağzından nazikçe çıkarmak için kullanılır</td></tr><tr><td>Akciğer Dokusu için Homojenizatör</td><td>Omni International</td><td>TM125-115</td><td>İlk kullanımdan önce otoklav; numuneler arasında durulayın</td></tr><tr><td>Anestezi için İzofluran</td><td>Abbott 10015516</td><td></td><td>Alternatif ilaç kullanılabilir; prosedürü buna göre değiştirin</td></tr><tr><td>iSTAT Kartuş</td><td>Abbott</td><td>03P79-25</td><td>İhtiyaçlarınıza uygun çeşitli kartuşlar mevcuttur</td></tr><tr><td>Ketamin, 100 mg/mL</td><td>Western Medical Supply</td><td>4165</td><td>PBS'de 1:10'u 1 mg/mL'ye seyreltin ve 1 mg/mL'de Ksilazin ile birleştirin</td></tr><tr><td>Gözler için Merhem</td><td>Akorn</td><td>Gözyaşları Yenilendi</td><td>Dağıtıcının ucuyla göze dokunmaktan kaçının</td></tr><tr><td>Optimum Kesme Sıcaklığı (OCT) Bileşik</td><td>Fisher Scientific</td><td>23-730-571</td><td>Akciğer örneklerini -80 ° C'de dondurmak için kullanılır; Patoloji kesitine hazırlanmak için C</td></tr><tr><td>Petri Kabı</td><td>VWR</td><td>25384-302</td><td>Polistiren, tek kullanımlık, sterilize, 100 kez; 15 mm</td></tr><tr><td>Fosfat Tamponlu Tuzlu Su (PBS)</td><td>Corning</td><td>21-031-CM</td><td>Dulbecco'nun kalsiyum ve magnezyum içermeyen PBS'si</td></tr><tr><td>Pipet Uçları, 200-&mu; L</td><td>VWR</td><td>10017-044</td><td>Kullanmadan önce otoklav</td></tr><tr><td>Pipetleyici, 200-&mu; L</td><td>Gilson</td><td>Pipetman P200</td><td>Kullanmadan önce otoklavlayın ve kalibre edin</td></tr><tr><td>Yayıcı, Bakteri Hücresi</td><td>Bel-Art</td><td>F377360006</td><td>Her kullanımdan önce fırınlayarak veya otoklavlayarak sterilize edin</td></tr><tr><td>Karıştırma Çubuğu, Manyetik, 7,9 mm Çap ve süreler; 38,1 mm Uzunluk</td><td>VWR</td><td>58948-150</td><td>Alıntılama sırasında konsantre bakteri aşılamasını karıştırmak için kullanılır</td></tr><tr><td>Karıştırma Plakası, Manyetik</td><td>Corning</td><td>PC-620D</td><td>Alıntılama sırasında konsantre bakteri inokusunu karıştırmak için kullanılır</td></tr><tr><td>Triptik Soya Suyu (TSB)</td> <td>BD</td><td>211822</td><td>TSA yapmak için Agar ile birleştirin</td></tr><tr>Şişe<td>, Konik, Steril, 50 mL</td><td>Corning</td><td>431720</td><td>Bakteriyel aşı hazırlamak için kullanılır</td></tr><tr><td>Şişe, Konik, Steril, 500 mL</td><td>Corning</td><td>431123</td><td>Dondurulmuş aşı hazırlamak için aşıları konsantre etmek için kullanılır</td></tr><tr><td>Şişe, Kriyojenik, 2.0 mL</td><td>Corning</td><td>430659</td><td>Konsantre bakteriyel inokulun kriyojenik depolanması için kullanılır</td></tr><tr><td>Ksilazin, 20 mg / mL</td><td>Akorn</td><td>AnaSed Enjeksiyonu</td><td>PBS'de 1:20'yi 1 mg / mL'ye seyreltin ve 1 mg / mL'de Ketamin ile birleştirin</td></tr></tbody></table>

fare oropharyngeal aspirasyon modeli ventilatör ilişkili ve hastane edinilen bakteriyel pnömoni

Murine Oropharyngeal Aspiration Model of Ventilator-associated and Hospital-acquired Bacterial Pneumonia

Fare enfeksiyon modelleri hastalık patogenezinde anlama ve etken patojenler ile mücadele için tasarlanmış yeni tedavi etkinliğinin sınamak için kritik öneme sahiptir. Zatürreeye klinikte Hastalar tarafından sunulan en sık görülen enfeksiyonlar arasında yer alıyor ve böylece bir uygun vivo içinde modeli garanti eder. Hedef kapalı komplikasyonlar ve sinüzit, gastrit, enterit, fiziksel travma veya aerosol taklit etmek için sis microparticle gibi belirtiler neden akciğer dışında aşırı organizmalar mevduat burunici aşılama tipik pnömoni modelleri kullanmak viral, tüberküloz veya mantar zatürreden daha normal yayıldı. Bu modeller patogenezinde bakteriyel pnömoni tipik topluluk veya sağlık-edinilen doğru bir şekilde yansıtmıyor. Buna ek olarak, bu fare modeli oropharyngeal aspirasyon pnömoni sağlık edinilen pnömoni damlacık rotasında taklit eder. Bakterilerin 50 µL aşı süspansiyon imzalat farelerin mastoidi içine pnömoni sonuçları yansımalı aspirasyon neden olur. Bu model ile bir zatürre neden olan patojen ve bu hastalıklar ile mücadele için yeni tedaviler patogenezinde inceleyebilirsiniz.

Dikkatli bir şekilde iletişim kuralı takip ederek, tekrarlanabilir ve sağlam verileri kolayca elde edilebilir. Kesinlikle bir özelleştirilmiş inoculum hazırlama protokolüne bir birbirleriyle karşılaştırılmak üzere deneyleri için uygun önemlidir. Düzgün işlemesine fareler enfeksiyon işlemi sırasında önemlidir. İsoflurane yoksun bir anestezi odasına fareler yerleştirdiğinizden emin olun. Fare ile isoflurane önceden dolu bir odaya girdiyseniz paniğe kapılmaz ve muhtemelen deneysel sonuçlar o...

Zatürreeye insan en sık görülen enfeksiyonlar arasında yer alıyor. Hastalığın patogenezinde anlama ve Roman tedavi etkinliğinin sınamak için kritik bir uygun vivo içinde modelidir. Bu fare oropharyngeal aspirasyon pnömoni model ile bir patogenez ve bu ölümcül enfeksiyonlara karşı yeni tedavi inceleyebilirsiniz.

Fare Oropharyngeal aspirasyon modeli Ventilatör ilişkili ve hastane edinilen bakteriyel pnömoni

Murine infection models are critical for understanding disease pathogenesis and testing the efficacy of novel therapeutics designed to combat causative ...

Bu yöntem, ventilatörle ilişkili pnömoni tedavisi ile yeni terapötikler hakkında antibiyotik direnci alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, klinik enfeksiyonu hızlı ve kolay tekrarlanabilir bir şekilde doğru bir şekilde tekrarlamasıdır. Fareleri aşılamak için, ilk anestezi uygulanan hayvanı üst kesici dişlerinden güçlü ince bir ipe asın.Çalışma yüzeyinin üzerinde, farenin vücut uzunluğunun yaklaşık iki katı yükseklikte sabit bir nesneye sabitleyin. Dili nazikçe çıkarmak için steril künt el forseps kullanın ve oral farenkse erişim sağlamak için dili steril, eldivenli parmaklara aktarın. 50 mikrolitre aşıyı oral farenkse yerleştirmek için bir mikro pipetin pistonunu, fare refleksif aspirasyon ile bakteri süspansiyonunu soluyana kadar ilk durağa kadar bastırın.Aşı oral farenkse yerleştirildiğinde fare birkaç saniye nefes almayı durduracak ve sonunda refleksif aspirasyon, akciğerlere giren sıvının belirgin çatırtı sesi ile gösterge olarak bakteriyel süspansiyonun solunmasına neden olacaktır. Daha sonra hayvanı, tamamen yaslanana kadar izleme ile kafesine geri koyun. Uygun deneysel son noktada, akciğer dokusunun çıkarılmasına izin vermek

murine-oropharyngeal-aspiration-model-ventilator-associated-hospital

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Kaynak: Lenhard, A. ve diğerleri. Streptococcus pneumoniae'nin viral eş-enfeksiyon sonrası kolonizerden patojene geçişi için fare modeli, yaşa bağlı hastalığı özetliyor. J. Vis. Exp. (2022)Bu video, grip virüsünün Streptococcus pneumoniae'nin kolonizatordan patojene geçişini tetiklediği bir fare ortak enfeksiyon modelini gösteriyor. Bakteriyel kolonizasyon, viral enfeksiyon ve hastalık ilerlemesiyle ilgili adımları özetler.

Viral Ortak Enfeksiyon Sonrası Streptococcus pneumoniae'nin Patojenik Geçişini İnceleyen Fare Modeli

Kaynak: Nielsen, T. B. ve diğerleri, Ventilatörle ilişkili ve hastanede edinilen bakteriyel zatürrenin Murine Orofaringeal Aspirasyon Modeli. J. Vis. Exp. (2018)Bu video, bakterilerin anestezi altında bir farenin akciğerlerine orofarenks üzerinden aktarılması, akciğer enfeksiyonu ve bağışıklık yanıtı tetiklenmesi prosedürünü gösteriyor.

Bakteriyel akciğer enfeksiyonlarını belirlemek için fare orofaringeal aspirasyon modelinin hazırlanması

Bu video, entübasyon ve bakteri süspansiyonlarının akciğer loblarına yerleştirilmesi yoluyla immünokompetan bir kemirgen modelinde akciğer enfeksiyonunun oluşumunu göstermektedir. Bu model, bağışıklığı yeterli hayvanlarda antibakteriyel etkinlik çalışmalarına olanak tanır.

İmmünkompetan Kemirgen Modellerinde Streptococcus pneumoniae'nin İntrabronşiyal Damlatılması

Pseudomonas aeruginosa bakterisinin intratrakeal enjeksiyonu ile bir fare akciğer hasarı modeli geliştirdik. Bu model pnömoni sırasında akciğer hasarını taklit eder ve klinik olarak önemlidir.

Pseudomonas aeruginosa Kaynaklı Akciğer Hasarı Modeli

Konak-patojen etkileşimlerinin in vitro çalışması spesifik immün yanıtların karakterizasyonuna izin verirken, karmaşık yanıtların etkilerini gözlemlemek için in vivo modeller gereklidir. Candida albicans maruziyetini ve ardından Pseudomonas aeruginosa aracılı akciğer enfeksiyonunu kullanarak, ventilatörle ilişkili pnömoni patojenitesinde yer alan mikrobiyal etkileşimlerin bir fare modelini oluşturduk.

Mikrobiyal Toplulukları incelenmesi<em&gt; İn Vivo</em&gt;: Arası Ana aracılı Etkileşim Modeli<em&gt; Candida albicans</em&gt; Ve<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em&gt; Airways

Çeşitli yöntemler, farelerde bakteriyel pnömoni modelleme için literatürde tarif edilmiştir. Bu yazıda, orofarinksin pipetle bakteriyel inokulum aspirasyonu (yani, inhalasyon) yoluyla zatürree uyarılması için bir non-invaziv, ucuz, hızlı bir yöntem açıklanmaktadır. akciğer doğal bağışıklık yanıtının değerlendirilmesi için aşağı akış yöntemleri de ayrıntılı olarak açıklanmıştır.

Farelerde Deneysel Bakteriyel Pnömoni İndüksiyonunun ve fenotipleme bir Non-invaziv ve Teknik Olmayan yoğun Yöntem

Bu protokol, insanlarda gözlenen asit pnömonisinin patogenezine yakın olan bir farede akut akciğer hasarına neden olur. Maksimum akut ölümcül olmayan düşük pH'lı akciğer hasarı oluşturuyoruz ve çevresel basınç salınımı ile birlikte açık bir trakeostomi kullanarak kemirgen-insan anatomik solunum yapısındaki farklılıkları açıklıyoruz.

Akut Akciğer Hasarı Açık Trakeostomi Gastrik Asit Aspirasyon Fare Modeli Maksimal Akut Ölümcül olmayan Akciğer Hasarı Sonuçlar

İmmün yetmezliği olan kemirgenlerde akciğer enfeksiyonları oluşturmak için bir yöntem tarif edilmiştir. Yeterlilikle, bu yöntem S. pneumoniae, H. influenzae, P. aeruginosa, K. pneumoniae ve A. baumannii birçok izolatı ile stabil enfeksiyonu indüklemek için hızlı ve kolay bir şekilde gerçekleştirilebilir.

Immünkompetan Kemirgenler bir Sağlam Pnömoni Modeli karşı antibakteriyel etkinliğini değerlendirmektir<i&gt; S. pneumoniae</i&gt;<i&gt; H. influenza</i&gt;<i&gt; K. pneumoniae</i&gt;<em&gt; P. aeruginosa</em&gt; ya da<em&gt; A. baumannii</em

Burada, alt solunum yollarında non-invaziv aşılama yolu sağlayarak ikincil bakteriyel pnömoni çalışmalarını iyileştirmek için yöntemler sunmakta ve ardından patojen kurtarma ve transkript analizini sayılmaktadır. Bu işlemler tekrarlanabilir ve kanüller, kılavuz teller veya fiber optik kablolar gibi özel ekipmanlar olmadan gerçekleştirilebilir.

Sekonder Bakteriyel Pnömoni Murine Modelleri için Hassas Patojen Dağıtım ve Kurtarma Sistemi

Bu el yazması, farelerde enfeksiyöz bir pnömoni modelinin oluşturulmasını ve bakteri yetiştirme ve intratrakeal damlatma yöntemleri ile birlikte yaralanma çözünürlüğünün ilgili karakterizasyonunu açıklamaktadır. Bağışıklık ortamını değerlendirmek için yüksek boyutlu akış sitometrisi kullanan yeni bir yaklaşım da açıklanmaktadır.

Pnömoni Çözünürlüğünü Değerlendirmek için Deneysel Model

Bu yazıda, viral enfeksiyon sırasında pnömokokların asemptomatik bir kolonizatörden hastalığa neden olan bir patojene geçişi için yeni bir fare modeli açıklanmaktadır. Bu model, hastalık progresyonunun farklı aşamalarında ve çeşitli konakçılarda polimikrobiyal ve konakçı-patojen etkileşimlerini incelemek için kolayca uyarlanabilir.

Streptococcus pneumoniae'nin Viral Ko-Enfeksiyon Üzerine Kolonizatörden Patojene Geçişi İçin Bir Fare Modeli, Yaşın Şiddetlendirdiği Hastalıkları Özetler

Öğrenin fare orofarengeal aspirasyon pnömoni modelini kullanarak ventilatör ilişkili bakteriyel pnömoniyi incelemeyi. Bu yöntem, antibiyotik direnci ve yeni tedaviler üzerine çalışmalar için hızlı ve tekrarlanabilir sonuçlar sağlar.

Fare Oropharyngeal aspirasyon modeli Ventilatör ilişkili ve hastane edinilen bakteriyel pnömoni

Daha fazla video keşfet