Name: Bakteriyel enfeksiyon ve atma Drosophila melanogaster içinde sözlü (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-05-31T14:45:00.000+00:00
Duration: 9 min 32 s
Description: Keşfedin Drosophila melanogaster'de bakteriyel enfeksiyon ve atma yöntemlerini. Bu teknik, bağırsak immünitesini ve bakteri yükünü ölçerek konak-patojen etkileşimlerini araştırmaya yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Dokunulmazlık, enfeksiyon ve evrim (http://ciie.bio.ed.ac.uk; Hibe Başvuru no. 095831) için bu iş merkezi için Wellcome Trust stratejik bir ödülü tarafından desteklenmiştir. PFV Branco Weiss arkadaş grubu (https://brancoweissfellowship.org/) ve bir Başkan'ın bursu (Biyolojik Bilimler, University of Edinburgh) tarafından desteklenmiştir JASJ NERC E3 DTP doktora öğrencilik tarafından desteklenmiştir.

1. korumak sinekler
<ol><li>23 mL plastik şişeleri taze yapılmış Lewis orta 7 mL içeren sinekli korumak (başvuru31; modifiye 1 L üç kez distile H2O, 6.1 g agar, 93.6 g kahverengi şeker, 68 g Mısır, 18.7 g Instant Maya, 15 mL Tegosept anti-mantar ajan) İnkübatörler içinde 25 ± 1 ° C s açık: koyu bir 12 h:12 ~ %60 nem ile döngüsü. Emici olmayan Pamuk yün ile şişeleri takın.</li>
	<li>Her 14 gün sonra 20-30 yetişkin yeni bir gıda şişe için anlık, Kuru Maya yumurta döşeme-gerçekleşmesi izin vermek 2-3 gün için yüzeye eklendi aktarabilirsiniz. Bu süre sonunda yumurta gıda yüzeyinde görünür olduğundan emin olun. Yetişkin sinekler kaldırın. Not: Bu tek nesil nüfus yaş eşlemeli şişeleri sinekler tutar.</li>
	<li>Yumurta geliştirmek için bırakın. Not: 25 ° c, Yetişkin sinekler eclose için pupa gün 11 başlatın ve 12-14 gün içinde devam.</li>
</ol>2. deneysel sinekler hazırlayın
<ol><li>Maya Yapıştır formaya (mix Kuru Maya ile ile (1 L Üçlü distile H2O, 30 g agar, 33 g sükroz, 330 mL elma suyu, 7 mL Tegosept anti-mantar ajan) 75 mL elma-agar plaka üzerinde üst nesil yumurta bir nüfus/embriyo koleksiyonu kafeste toplamak «««su) bir fıstık ezmesi gibi tutarlılık. Suya batırılmış Pamuk yün nem sağlamak için kafes ekleyin. Not: larva yetiştirme yoğunluk farklılıkları kaynaklanan efektleri semptomlarıdır önlemek için bu farklı şişeleri deneysel sinekli benzer yoğunlukları yetiştirilen önemlidir. Yukarıda adım etkileri semptomlarıdır önlemek için gerçekleştirilir.</li>
	<li>12 h:12 h 25 ° C'de 24 h için kuluçkaya yumurta atarken oluştu kadar açık: koyu döngüsü. 24 saat sonra çok az yumurta varsa, daha uzun bir habituation süre sağlar. Elma-ağar kaplamalar değiştirin ve yumurta döşeme-daha fazla 24 h için gerçekleşmesi izin.</li>
	<li>Yumurta yüklü apple-ağar kaplamalar nüfus kafes al. Ağar'ın yüzeyindeki kalan Maya Yapıştır ve herhangi bir ölü sinekler çıkarmak.</li>
	<li>1 fosfat tamponlu tuz çözeltisi (PBS) x 20 ml agar daldırın ve yavaşça ince fırça ile elma agar yumurtadan çıkarmak. PBS içinde askıya iken, 50 mL santrifüj tüpü yumurta transferi, yumurta altına lavabo diye 5 min için bırak. Not: Çoğu yumurta agar dış kenarındaki bulunur.</li>
	<li>Alt p1000 süzülmüş pipet ucu 4 mm kesim tarafından kaldırmak ve pipet ucu 1 mL 50 mL santrifüj tüpü alttan alınan çözeltisi, çizmek için kullanın. Bu 1.5 mL microcentrifuge tüp aktarmak ve yerleşmek izin vermek. Not: yumurta pipetting zaman ek serbest dalgıç nazik bir yayın daha verimli olur.</li>
	<li>Alt p20 süzülmüş pipet ucu 4 mm kesim tarafından kaldırın. Pipet istenen bir ses ayarına ve microcentrifuge tüp alttan çizin. Not: uygulama ile 5 µL hacmi yaklaşık 100 yumurta içerir.</li>
	<li>Toplanan yumurtalar yemek üzerine dağıtmak ve gerekli süreyi için geliştirmek için bırakın.</li>
</ol>3. bakteri kültürü
<ol><li>P. entomophila ve P. aeruginosa kültürler büyümeye, Luria-Bertani (LB) suyu 10 mL 30 ° C'de donmuş bir bakteri stokunun 100 µL ile aşılamak (P. entomophila) ve 37 ° C (P. aeruginosa), anılan sıraya göre. 150 devir / dakikada gecede sallamak. Bakteriyel kültür doygunluk faz ulaştığından emin olmak.</li>
	<li>Sinekler aşı için kullanılan bakteri veya üssel faz ve hızlı bir şekilde çoğaltmak, gecede kültür yeni bir alt kültür istenen bir birimin, ertesi sabah aşılamak sağlamak için. Ön inoculum alt kültür kültür toplam hacminin % 10 olduğundan emin olun. Not: Oral enfeksiyon yüksek gerektirir. Bu nedenle böylece yeterli aşılama kültür istenilen doz ve deneysel boyut için üretilen bakteriyel kültürünün önemli bir birim genişletme gereklidir. Ne kadar alt kültür denklem MsVs kullanarak gerekli bulaşıcı dozlarda üretmek için gerekli hesaplamak burada bir kültür gösterir M MıVı, = optik yoğunluk temsil 600 nm (OD600) değeri ve V ölçülen'ın onun birim. Alt simge mektupları kültür bir alt kültür (s) veya bir bulaşıcı doz (i) olarak kullanılan için başvurun.</li>
	<li>Öyle ki alt kültür'ın yüzey (en az) sadece şişeye'nın yamaç başlangıç yukarıda düşüyor bu alt kültür bir birim bir 2 L konik şişesi içinde büyümek. Bakterilerin büyümesini dublör gibi bu işareti yukarıda doldurmayın.</li>
	<li>Bu alt kültür bakterilerde OD her 30 dk ölçerek üstel büyüme aşamasında olduğundan emin olun. Not: Bu nerede alt kültür 0.6-0.8 arasında bir OD600 ulaşır 3-5 h sonra oluşur.</li>
	<li>Bu alt kültür eşit miktarda santrifüj tüpleri arasında 50 mL dökün ve alt kültür 2500 x g 4 ° C'de bakteri cips için 15 dakika, spin. Pelleted bir zamanlar çıkarın ve sonra tekrar yukarıdaki koşulların bakteri büyük çoğunluğu kaldırılmasını onaylamak için süpernatant spin. Not: Bu bir Pelet ihmal edilebilir boyutta (1 mm içinde yükseklik küçüktür) doğrular.</li>
	<li>Onları yeniden 5 mL alt kültür süpernatant alınması ve bu çözümler tek 50 mL tüp içinde yeniden birleştirme tarafından ayrı tüpler bakteriyel granül birleştirin. 2500 x g 4 ° C'de bakteri cips için 15 dk için konsantre bu kültür spin.</li>
	<li>Süpernatant kaldırmak ve son bakteri Pelet %5 sükroz su çözümde yeniden askıya alma. OD kontrol edin ve istenen bulaşıcı doz için ayarlayın (OD600 = P. entomophila8 ve OD600 için 100 = 25 P. aeruginosa16,28), granül % 5'yeniden askıya sükroz su çözüm gerekli birim. Not: % 5 sükroz su solüsyonu eklenmesi gereken miktarda adım 3.2.1 denklemi kullanılarak hesaplanabilir (MsVs MıVı=).</li>
</ol>4. sözlü olarak sinekler bulaşmasını
<ol><li>Oral enfeksiyon emin olmak için (1 L üç kez distile H2O, 20 g agar, 84 g kahverengi şeker, 7 mL Tegosept anti-mantar ajan) standart agar şişeleri için sinekler aktararak sinekler için 2-4 h bakteri maruz önce açlıktan.</li>
	<li>Sinekler aç iken enfeksiyon tüpleri hazırlayın. Pseudomonas enfeksiyon şişe standart şeker agar pipetting 500 µL tarafından 7 mL örnek tüp kapağı yapmak ve kurumaya bırakın. Kapak filtre kağıdı bir disk yerleştirin ve doğrudan filtre disk üzerine bakteriyel kültürünün 100 µL pipet. Denetim enfeksiyonlar için bakteri kültürü %5 sükroz su çözüm filtre kağıt üzerinde aynı hacmi ile değiştirin.</li>
	<li>Tek sinekler için örnek tüp eklenir ve 18-24 h için bırakılır.</li>
	<li>Oral enfeksiyon onaylayın, ilk yüzey sterilize-sinekler hemen bakteriyel maruz kaldıktan sonra 100 µL % 70 etanol için 20-30 s. yerleştirerek etanol kaldırmak ve 100 Ekle Üçlü µL 20-30 s için su kaldırmadan önce distile su. 1 x PBS 100 µL ekleyin ve anında lunaparkçı.</li>
	<li>Homogenate bir 96-şey plaka üst satır için aktarmak ve her şey 1 x PBS 90 µL ekleyin.</li>
	<li>Seri olarak bir CFU aralığı değerleri ayırmak için bu örnek oranında seyreltin. Homogenate 10 µL üst kuyuda alıp bu de ekleyin. Bu ikinci şey, 10 µL üçüncü için de, aktarma işlemi tekrarlayın vb., gerektiği kadar çok seri dilutions için. Not: Bu önemli yeni pipet keyif dilutions her kümesi için kullanılır.</li>
	<li>Bütün damlacıklar ayrı kalır emin olmak için 5 µL damlacıkları bir LB besin agar tabakta seri dilutions plaka.</li>
	<li>LB ağar kaplamalar gecede 30 ° C ve 37 ° C de P. entomophila ve P. aeruginosa, sırasıyla kuluçkaya ve görünür CFUs saymak. Not: Drosophila gut mikroplar ayrı anaerobik büyüme koşulları gerektirirken, Seçmeli Orta, Pseudomonas yalıtım Orta (PIM) Örneğin, sadece Pseudomonas CFUs dikkate alınır emin olmak için kullanılabilir.</li>
	<li>CFUs sayısını sinek başı nerede 10-60 CFUs açıkça görülebilir koloniler seri seyreltme mevcut sayısını sayarak hesaplayın. Sonra sinek başı bakteri sayısını hesaplamak için mevcut seyreltme faktörle çarpmak.</li>
	<li>İstatistiksel çözümleme gerçekleştirme. Gerektiğinde, bir normal dağılım için sinek başı CFUs dönüşümü. Günlük-dönüştürme tarafından bunu. Dönüşüm sonra Genelleştirilmiş Doğrusal modeller (GLMs)30,31,32 nasıl tedavi grupları (R33gibi yaygın olarak bulunan istatistiksel yazılım paketlerini kullanarak) sinek başı CFUs içinde farklı sınamak için kullanın. Not: Kalan sinek homogenate gen ekspresyonu kantitatif Ters transkripsiyon PCR (RT-qPCR) analizi ile ölçmek için kullanılabilir. Homogenate RNA izolasyon reaktif 50 µL içinde düzeltmek, RNA ayıklamak ve RT-qPCR tarafından belirli bir bağışıklık gen titreleri ölçmek ( Örneğin, bkz: Gupta ve Vale16 detaylı bir iletişim kuralı için). Belirli bir bağışıklık gen transkript ifade bir temizlik gen (Örneğin, rp49) transkript düzeyleri için normalleştirilmiş ve bir kat 2−ΔΔCt yöntemi31kullanarak denetim sinekler göre değiştikçe ifade, 32,33,34.</li>
</ol>5. kayıt yaşayanlar enfeksiyon takip
<ol><li>4.2. adımda açıklandığı gibi sözlü olarak sinekler bulaştırmak.</li>
	<li>Enfekte aktarmak veya standart Lewis şişeleri ve koyu bir kuluçka 12 h:12 h 25 ° C'de tutmak içine onların anılan sıraya göre enfeksiyon tüpleri üzerinden kontrol sinekler döngüsü (veya koşulları istenilen). Onlar ölene uçar tutun.</li>
	<li>Ölü ya da diri sinekler her şişe her gün veya gerektiği gibi sık sık olarak saymak.</li>
	<li>Sinekler için yeni şişeleri getting şaşırıp kalmış içinde gıda sinekler önlemek için her 5 günde aktarın.</li>
	<li>Kaplan-Meier (KM) hayatta kalma eğrileri olarak bu veri mevcut veya ± SE orantılı hayatta kalma araziler demek. Analiz etmek için çeşitli faktörler ve/veya ilgili ilişkileri bir diğeriyle etkisini kullanın istatistik paketi (örneğin, paket R33"hayatta kalma") sağkalım Analizi Cox orantılı tehlikeler modeli35gibi çalıştırmak için.</li>
</ol>6. ölçüm bakteri yükü
<ol><li>İstenen saat noktada, tek bir virüslü sinek bir steril 1.5 mL microcentrifuge tüp aktarın.</li>
	<li>Yüzey 4.4 adımda anlatıldığı gibi sinekler sterilize et.</li>
	<li>Anında homojenize ve açıklanan adımları 4.5-4,10 protokolü kullanarak bakteriyel yük ölçmek.</li>
</ol>7. ölçü bakteri dökülme
<ol><li>Dahili yük dökülme ölçmek.</li>
	<li>Enfeksiyon sonra 1.5 mL microcentrifuge tüpler ~ 50 µL Lewis orta 24 h için içeren tek sinek aktarın.</li>
	<li>Dahili yük ölçümü için sinekler kaldırmak (bkz. Adım 6) ve 1 x PBS 100 µL tüplerini vortexing ağır için 3 tarafından yıkayın s.</li>
	<li>Bu yıkama CFUs LB besin agar 4.6-4,8 adımlarda açıklandığı gibi aynı iletişim kuralını kullanarak üzerine kaplama tarafından ölçmek.</li>
	<li>Enfeksiyon sonra 1.5 mL microcentrifuge tüpler ~ 50 µL Lewis orta 24 h için içeren tek sinek aktarın.</li>
	<li>Sinekler ~ 50 µL Lewis orta daha fazla 24 h yıkama için içeren yeni microcentrifuge Tüpler 1 x PBS 100 µL kirlenmiş tüplerini vortexing ağır için 3 tarafından transfer s.</li>
	<li>Bu yıkama CFUs tarafından açıklanan adımları 4.6-4,8 aynı iletişim kuralını kullanarak LB besin agar üzerine kaplama ölçmek.</li>
	<li>7.2 ve 7.3 ve kayıt uçmak ölüm her aktarma, adımları yineleyin.</li>
</ol>

<ol><li>Hoffmann, J. A. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/14603309">The immune response of Drosophila.</a> Nature. 426 (6962), 33-38 (2003).</li>
<li>Buchon, N., Silverman, N., Cherry, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunity+in+Drosophila+melanogaster+-+from+microbial+recognition+to+whole-organism+physiology%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Immunity in Drosophila melanogaster - from microbial recognition to whole-organism physiology.</a> Nat Rev Immunol. 14 (12), 796-810 (2014).</li>
<li>Bergman, P., Seyedoleslami Esfahani, S., Engström, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+as+a+Model+for+Human+Diseases-Focus+on+Innate+Immunity+in+Barrier+Epithelia%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Top+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Drosophila as a Model for Human Diseases-Focus on Innate Immunity in Barrier Epithelia.</a> Curr Top Dev Biol. 121, 29-81 (2017).</li>
<li>Apidianakis, Y., Rahme, L. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+melanogaster+as+a+model+host+for+studying+Pseudomonas+aeruginosa+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Drosophila melanogaster as a model host for studying Pseudomonas aeruginosa infection.</a> Nat Protoc. 4 (9), 1285-1294 (2009).</li>
<li>Khalil, S., Jacobson, E., Chambers, M. C., Lazzaro, B. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+Bacterial+Infection+and+Immune+Defense+Phenotypes+in+Drosophila+Melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22JoVE+J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Systemic Bacterial Infection and Immune Defense Phenotypes in Drosophila Melanogaster.</a> JoVE J Vis Exp. (99), e52613-e52613 (2015).</li>
<li>Neyen, C., Bretscher, A. J., Binggeli, O., Lemaitre, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+to+study+Drosophila+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+San+Diego+Calif%22%5BJournal%5D)">Methods to study Drosophila immunity.</a> Methods San Diego Calif. 68 (1), 116-128 (2014).</li>
<li>Nehme, N. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Model+of+Bacterial+Intestinal+Infections+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+Pathog%22%5BJournal%5D)">A Model of Bacterial Intestinal Infections in Drosophila melanogaster.</a> PLOS Pathog. 3 (11), e173(2007).</li>
<li>Bou Sleiman, M. S., Osman, D., Massouras, A., Hoffmann, A. A., Lemaitre, B., Deplancke, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic%2C+molecular+and+physiological+basis+of+variation+in+Drosophila+gut+immunocompetence%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Genetic, molecular and physiological basis of variation in Drosophila gut immunocompetence.</a> Nat Commun. 6, 7829(2015).</li>
<li>Buchon, N., Broderick, N. A., Lemaitre, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gut+homeostasis+in+a+microbial+world%3A+insights+from+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Gut homeostasis in a microbial world: insights from Drosophila melanogaster.</a> Nat Rev Microbiol. 11 (9), 615-626 (2013).</li>
<li>Kuraishi, T., Hori, A., Kurata, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Host-microbe+interactions+in+the+gut+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Physiol%22%5BJournal%5D)">Host-microbe interactions in the gut of Drosophila melanogaster.</a> Front Physiol. 4, (2013).</li>
<li>Ha, E. -M., Oh, C. -T., Bae, Y. S., Lee, W. -J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Direct+Role+for+Dual+Oxidase+in+Drosophila+Gut+Immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">A Direct Role for Dual Oxidase in Drosophila Gut Immunity.</a> Science. 310 (5749), 847-850 (2005).</li>
<li>Limmer, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pseudomonas+aeruginosa+RhlR+is+required+to+neutralize+the+cellular+immune+response+in+a+Drosophila+melanogaster+oral+infection+model%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Pseudomonas aeruginosa RhlR is required to neutralize the cellular immune response in a Drosophila melanogaster oral infection model.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 108 (42), 17378-17383 (2011).</li>
<li>Apidianakis, Y., Pitsouli, C., Perrimon, N., Rahme, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synergy+between+bacterial+infection+and+genetic+predisposition+in+intestinal+dysplasia%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Synergy between bacterial infection and genetic predisposition in intestinal dysplasia.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 106 (49), 20883-20888 (2009).</li>
<li>Vodovar, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+host+defense+after+oral+infection+by+an+entomopathogenic+Pseudomonas+species%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Drosophila host defense after oral infection by an entomopathogenic Pseudomonas species.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 102 (32), 11414-11419 (2005).</li>
<li>Chugani, S. A., Whiteley, M., Lee, K. M., D'Argenio, D., Manoil, C., Greenberg, E. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((QscR%2C+a+modulator+of+quorum-sensing+signal+synthesis+and+virulence+in+Pseudomonas+aeruginosa%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">QscR, a modulator of quorum-sensing signal synthesis and virulence in Pseudomonas aeruginosa.</a> Proc Natl Acad Sci. 98 (5), 2752-2757 (2001).</li>
<li>Gupta, V., Vasanthakrishnan, R. B., Siva-Jothy, J., Monteith, K. M., Brown, S. P., Vale, P. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+route+of+infection+determines+Wolbachia+antibacterial+protection+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+R+Soc+B%22%5BJournal%5D)">The route of infection determines Wolbachia antibacterial protection in Drosophila.</a> Proc R Soc B. 284 (1856), 20170809(2017).</li>
<li>Martins, N. E., Faria, V. G., Teixeira, L., Magalhães, S., Sucena, É <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Host+Adaptation+Is+Contingent+upon+the+Infection+Route+Taken+by+Pathogens%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Host Adaptation Is Contingent upon the Infection Route Taken by Pathogens.</a> PLoS Pathog. 9 (9), (2013).</li>
<li>Chambers, M. C., Jacobson, E., Khalil, S., Lazzaro, B. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thorax+Injury+Lowers+Resistance+to+Infection+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Thorax Injury Lowers Resistance to Infection in Drosophila melanogaster.</a> Infect Immun. 82 (10), 4380-4389 (2014).</li>
<li>Gupta, V., Stewart, C., Rund, S. S., Monteith, K., Vale, P. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Costs+and+benefits+of+sublethal+Drosophila+C+virus+infection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Evol+Biol%22%5BJournal%5D)">Costs and benefits of sublethal Drosophila C virus infection.</a> J Evol Biol. , (2017).</li>
<li>Ferreira, ÁG., Naylor, H., Esteves, S. S., Pais, I. S., Martins, N. E., Teixeira, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Toll-Dorsal+Pathway+Is+Required+for+Resistance+to+Viral+Oral+Infection+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">The Toll-Dorsal Pathway Is Required for Resistance to Viral Oral Infection in Drosophila.</a> PLoS Pathog. 10 (12), (2014).</li>
<li>Buchon, N., Broderick, N. A., Poidevin, M., Pradervand, S., Lemaitre, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+Intestinal+Response+to+Bacterial+Infection%3A+Activation+of+Host+Defense+and+Stem+Cell+Proliferation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Host+Microbe%22%5BJournal%5D)">Drosophila Intestinal Response to Bacterial Infection: Activation of Host Defense and Stem Cell Proliferation.</a> Cell Host Microbe. 5 (2), 200-211 (2009).</li>
<li>Wayland, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spotting+the+differences%3A+Probing+host%2Fmicrobiota+interactions+with+a+dedicated+software+tool+for+the+analysis+of+faecal+outputs+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J+Insect+Physiol%22%5BJournal%5D)">Spotting the differences: Probing host/microbiota interactions with a dedicated software tool for the analysis of faecal outputs in Drosophila.</a> J Insect Physiol. 69, 126-135 (2014).</li>
<li>Hori, A., Kurata, S., Kuraishi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unexpected+role+of+the+IMD+pathway+in+Drosophila+gut+defense+against+Staphylococcus+aureus%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">Unexpected role of the IMD pathway in Drosophila gut defense against Staphylococcus aureus.</a> Biochem Biophys Res Commun. 495 (1), 395-400 (2018).</li>
<li>Ren, C., Webster, P., Finkel, S. E., Tower, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+Internal+and+External+Bacterial+Load+during+Drosophila+Aging+without+Life-Span+Trade-Off%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metab%22%5BJournal%5D)">Increased Internal and External Bacterial Load during Drosophila Aging without Life-Span Trade-Off.</a> Cell Metab. 6 (2), 144-152 (2007).</li>
<li>Ezenwa, V. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Host+behaviour-parasite+feedback%3A+an+essential+link+between+animal+behaviour+and+disease+ecology%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+R+Soc+B%22%5BJournal%5D)">Host behaviour-parasite feedback: an essential link between animal behaviour and disease ecology.</a> Proc R Soc B. 283 (1828), 20153078(2016).</li>
<li>McCallum, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Breaking+beta%3A+deconstructing+the+parasite+transmission+function%5BTitle%5D)+AND+%22Phil+Trans+R+Soc+B%22%5BJournal%5D)">Breaking beta: deconstructing the parasite transmission function.</a> Phil Trans R Soc B. 372 (1719), 20160084(2017).</li>
<li>Vale, P. F., Choisy, M., Little, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Host+nutrition+alters+the+variance+in+parasite+transmission+potential%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Lett%22%5BJournal%5D)">Host nutrition alters the variance in parasite transmission potential.</a> Biol Lett. 9 (2), 20121145(2013).</li>
<li>Mulcahy, H., Sibley, C. D., Surette, M. G., Lewenza, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+melanogaster+as+an+Animal+Model+for+the+Study+of+Pseudomonas+aeruginosa+Biofilm+Infections+In+Vivo%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Drosophila melanogaster as an Animal Model for the Study of Pseudomonas aeruginosa Biofilm Infections In Vivo.</a> PLoS Pathog. 7 (10), e1002299(2011).</li>
<li>Kuraishi, T., Binggeli, O., Opota, O., Buchon, N., Lemaitre, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+evidence+for+a+protective+role+of+the+peritrophic+matrix+against+intestinal+bacterial+infection+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Genetic evidence for a protective role of the peritrophic matrix against intestinal bacterial infection in Drosophila melanogaster.</a> Proc Natl Acad Sci. 108 (38), 15966-15971 (2011).</li>
<li>Myllymäki, H., Valanne, S., Rämet, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Drosophila+Imd+Signaling+Pathway%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">The Drosophila Imd Signaling Pathway.</a> J Immunol. 192 (8), 3455-3462 (2014).</li>
<li>Lewis, E. A new standard food medium. Cold Spring Harb Protoc. 2014 (9), pdb.rec081414(2014).</li>
<li>Bolker, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generalized+linear+mixed+models%3A+a+practical+guide+for+ecology+and+evolution%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Ecol+Evol%22%5BJournal%5D)">Generalized linear mixed models: a practical guide for ecology and evolution.</a> Trends Ecol Evol. 24 (3), 127-135 (2009).</li>
<li>R Core Team. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22R%3A+A+Language+and+Environment+for+Statistical+Computing%22">R: A Language and Environment for Statistical Computing</a>. , R Foundation for Statistical Computing. Vienna, Austria. (2015).</li>
<li>Schmittgen, T. D., Livak, K. J. <a target="_blank" href="https://www.semanticscholar.org/paper/Analyzing-real-time-PCR-data-by-the-comparative-CT-Schmittgen-Livak/4580ba914fe16fae7d733b96e37a282bed953437">Analyzing real-time PCR data by the comparative CT method.</a> Nat Protoc. 3 (6), 1101-1108 (2008).</li>
<li>Kalbfleisch, J. D., Prentice, R. L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKalbfleisch%2C+JD+%22The+Statistical+Analysis+of+Failure+Time+Data%22">The Statistical Analysis of Failure Time Data</a>. , 2nd Edition, Wiley-Blackwell. Hoboken, N.J. (2002).</li>
<li>Nuhanen, B. Drosophila melanogaster, drawing.SVG. , Available from:
 <a target="_blank" href="https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Drosophila-drawing.svg">https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Drosophila-drawing.svg</a> (2007).</li>
<li>Accountalive. Example of a survival curve estimated by Kaplan-Meier method including 95% confidence limits. , Available from:
 <a target="_blank" href="https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Kaplan-Meier-sample-plot.svg">https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Kaplan-Meier-sample-plot.svg</a> (2011).</li>
<li>Susi, H., Vale, P. F., Laine, A. -L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Host+Genotype+and+Coinfection+Modify+the+Relationship+of+within+and+between+Host+Transmission%5BTitle%5D)+AND+%22Am+Nat%22%5BJournal%5D)">Host Genotype and Coinfection Modify the Relationship of within and between Host Transmission.</a> Am Nat. 186 (2), 252-263 (2015).</li>
<li>Fellous, S., Duncan, A. B., Quillery, E., Vale, P. F., Kaltz, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+influence+on+disease+spread+following+arrival+of+infected+carriers%5BTitle%5D)+AND+%22Ecol+Lett%22%5BJournal%5D)">Genetic influence on disease spread following arrival of infected carriers.</a> Ecol Lett. 15 (3), 186-192 (2012).</li>
</ol>

Biz güvenilir bir şekilde sözlü olarak D. melanogaster bakteriyel patojenler ile hastalık için bir iletişim kuralı mevcut. Biz P. aeruginosa ve P. entomophilaodaklanmak, ama bu protokolü kolayca diğer bakteriyel türler Örneğin, Serratia marcescens7. enfeksiyonu etkinleştirmek için adapte edilebilir Bu iletişim kuralının temel yönlerini bakteriyel türler arasında değişir. Buna göre en verimli bulaşıcı doz, karşılık gelen virülans ve ana genotip duyarlılık tüm kabul ve ideal olarak test pilot çalışmalar. Optik yoğunlukları çeşitli bakteri kültürleri uçmaktadır teşhir ve onların bulaşıcı doz ve hayatta kalma ölçme yeni bakteriyel türler veya sinek hatları ile çalışırken uygun bir başlangıç noktası olabilir.
İletişim kuralı adımları gibi açlık besleme önce sinek ve yeniden askıya bakteriyel granül %5 sükroz çözümde oral enfeksiyon sıradan ve pozlama7,8, sırasında bakteriyel enfeksiyon güvenilirliğini artırmak 9 , 10. ancak, pozlama sırasında sinekler aslında bakteri kültürü bir yüzey üzerinde yaşamak unutmamak önemlidir. Bu kültür üzerinde yürüme sürecinde, bakteri sinek 's yüzeyi, özellikle manikür veya çevresinde kıllar24teslim olmak. Epicuticular bu bakteri, başarılı bir enterik enfeksiyon yansıtmıyor ama hala sinek homojenizasyon ve kaplama tarafından algılanan. Yanlış pozitif olasılığını azaltmak için o yüzeye esastır sinekler % 70 etanol için 1 dakikaya kadar daldırma yoluyla sterilize.
Oral enfeksiyon bakteri dökülme oranları dikkate alınarak, esastır. Bir ana bilgisayar ortamına bültenleri patojenler sayısı genellikle ölçmek zordur ve dahili yük kez enfeksiyon ve bu nedenle iletim26,27şiddeti için bir proxy olarak kabul edilir. Bakteri dökülme yanında ölçüm bakteri yükü incelenmesi hastalığın şiddeti ve yaymak38bu iki önemli bileşenleri arasında ilişki sağlar. Yöntemi sunulan bir sınırlama sinekler iç bakteri yükünü raporlaması yıkıcı örnekleme gerektirmesidir. Bu zor uzunlamasına eğilimleri patojen büyüme ve izni aynı birey içinde araştırmak yapar. Ancak, ortalama mikrop yükü her kohort boyuna patojen dynamics verilen herhangi içinde yansıtır varsayımı altında enfeksiyon farklı aşamalarında bireylerin destructively örnekleme kohortlardan tarafından bu sınırlamayı aşmak mümkündür bireysel. Bakteri dökülme aynı kısıtlamalarla acı değil ve biz nasıl dökülme kesitsel bir örnek veya boyuna nasıl dökülme içinde tek bir zaman içerisinde değişen araştırmak için sayısal örnekleri sunuyoruz.
Birçok ev sahibi ve patojen özelliği ortaklaşa hastalık25,26,39iletimi için bireyin eğilimi belirlemek. Bu özellikler büyük olasılıkla önemi ana bilgisayar-patojen sistemleri arasında değişir, dökülme büyük olasılıkla önemli bir belirleyici fekal-oral iletim iken. Bakteri dökülme ölçmek için yetenek bu varsayımı test etme olanağı açar. Ana bilgisayar-patojen dynamics sinek satırlarının istenen bir panel ile karakterize, Denemecileri sözlü olarak bireyler bulaştırmak ve bulaşmamış, duyarlı ev sahibi bulaşıcı kendi dönemlerinde koyun. 'Alıcı' Bu sinekler sonra doğrudan iletim ölçmenin bir yolu olarak çeşitli zaman noktalarda iç bakteriyel yük denetlesinler.

Meyve sineği (sirke sineği olarak da bilinir) D. melanogaster, kapsamlı bir model organizma enfeksiyon ve patojenler1,2çeşitli karşı bağışıklık için kullanılmıştır. Bu eser enfeksiyon fizyolojik sonuçlarını temel anlayışlar teklif etti ve ayrıca konak immün yanıt parasitoid, bakteriyel, fungal ve viral enfeksiyonlara karşı temel moleküler yolları çözülüyor öncü oldu. Bu bilgi sadece doğuştan gelen bağışıklık yanıtı böcek ve diğer omurgasızlar anlamak yararlı değil, ama çünkü birçok bağışıklık mekanizmaları örümceklerle böcekler ve memeliler arasında korunmuş, Drosophila de keşif mahmuzlu vardır büyük bağışıklık mekanizmaları memelilerde, insanlar3dahil.
Çoğu çalışma Drosophila enfeksiyon ve Dokunulmazlık patojenler doğrudan böcek gövdesine iğneleyici veya enjeksiyon4,5,6tarafından teslim aşılama yöntemleri kullanarak sistemik enfeksiyonlar odaklanmıştır. Bu yöntemler içinde kontrollü bir bulaşıcı doz teslimini bırakmak açık ve sistemik enfeksiyonlar çalışmalarına büyük bir vücut tarafından desteklenen avantajdır. Ancak, birçok doğal olarak meydana gelen bakteriyel patojenler D. melanogaster , organik madde nerede gut immunocompetence konak savunma7,8', önemli bir rol oynamaktadır çürüyen besleme yoluyla iktisap 9 , 10 , 11 , 12 , 13 , 14 , 15. sistemik enfeksiyonlar istihdam deneyler bu savunma yan yol ve, bu nedenle, nasıl doğal patojenlere karşı savunma böcekler mount tamamen farklı bir resim sağlar. Bu çalışmanın amacı, ekoloji ve evrim enfeksiyon, hakkında tahminler test etmek doğal patojenler kullanımı ve yolları enfeksiyonunun önemli16,17nerede olduğunu özellikle uygundur. Son çalışmaları önemli ölçüde patojenler tarafından izlenen yolu hastalığı sonucu18,19etkilemesi vurgulanmış bulunmaktadır, farklı bağışıklık yolları20,21aydınlığa çıkartıyor, koruyucu etkisini belirlemek için Endosymbionts16miras ve hatta oyun ana savunma17gelişiminde önemli bir rol olabilir.
Sözlü yolları enfeksiyonu istihdam için bir başka neden bu varyasyon incelenmesi patojen iletimde bakteri dışkı atılımı oral enfeksiyon22,23, takip sırasında shedding ölçerek sağlanmıştır 24. hastalık iletim ana bilgisayar heterojenlik kaynaklarının anlama doğal nüfus25,26yılında zorlu, ancak iletim, patojen, altında kontrollü laboratuvar dökülme gibi bileşenleri ölçme koşulları yararlı alternatif yaklaşım27sağlamaktadır. Besleme sinekler bakteri ve ölçüm bakteriyel altında kontrollü deneysel koşullar genetik ve çevresel bağlamlarda çeşitli dökülme, iletim ana bilgisayarları arasında varyasyon kaynakları tanımlamak mümkündür.
Burada, biz sözlü olarak D. melanogaster bakteriyel patojenler ile hastalık için bir iletişim kuralı tanımlamak ve bakteriyel büyüme miktarının ve dökülme için bu (Şekil 1) izler. Biz bu protokol üzerinde iki Pseudomonas bakterileri tarif: zehirli bir fırsatçı patojen P. aeruginosa (PA14) suşu ve doğal patojen P. entomophilasinek daha az öldürücü bir tür. Psödomonadlar böcekler, nematod, bitkiler ve omurgalı, hastalık bir geniş ana bilgisayar aralığıyla ortak Ayagin Gram-negatif bakteriler ve çoğu ortamlarda4,6'. Drosophila P. aeruginosa ve P. entomophila tarafından enterik enfeksiyon patolojisi bağırsak epiteli12,13,14,-15sonuçları, 28. Biz bu iki bakteriyel patojenler üzerinde odaklanmak iken, yöntem tanımlamak burada prensip olarak küçük değişiklikler ile ilgi herhangi bir bakteriyel pathogen uygulanabilir. Sözlü pozlama, biz sonrası enfeksiyon hayatta kalma ölçmek ve bireysel sinek içinde mikrop yükü ölçmek ve birimleri (CFUs) oluşturan colony ifade ortamına uygun mikroplar döken. Çünkü bağırsak immunocompetence epitel bariyer ve humoral yanıt bir arada gelen sonuçlar, son olarak, aynı zamanda sinek satırları nerede bu savunma kesintiye yaşama ölçeriz. Özellikle, Drosocrystallin (Dcy) mutantlar daha önce gösterilmiştir sözlü bakteriyel enfeksiyon nedeniyle tükenmiş peritrophic matris29gut daha duyarlı olmak. Ayrıca hayatta kalma yolu ile IMD yolu30gram-negatif bakteri karşı antimikrobiyal peptidler üreten engellemiştir bir çeşni (Rel) mutant ölçüyoruz.

<table><tbody><tr><td>Şişeler</td><td>Sarstedt Ltd.</td><td>58.490</td><td>Polistiren düz tabanlı tüp 75mm x 23.5mm, 23ml</td></tr><tr><td>Agar</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A7002</td><td>Agar, kül %2.0-4.5</td></tr> <tr><td>Esmer şeker</td><td>Bidvest</td><td>66032</td><td>Açık kahverengi yumuşak şeker</td></tr><tr><td>Mısır</td><td>Güvercin Çiftliği</td><td></td><td>Organik mısır unu</td></tr><tr><td>Fermipan mayası</td><td>Bidvest</td><td>96360</td><td>Kuru, anlık maya</td></tr><tr><td>Metil-4-hidroksibenzoat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H5501</td><td>>=%99,0, kristalin</td></tr><tr><td>Sükroz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>84097</td><td>Sükroz BioUltra, moleküler biyoloji için, >=%99,5 (HPLC)</td></tr><tr><td>Petri kapları</td><td>Fisher Scientific UK Ltd.</td><td>15788517</td><td>X600 Petri Kabı 90 X 16.2MM Steril Üçlü Havalandırmalı</td></tr><tr><td>Falcon tüpleri (50ml)</td><td>Greiner Bio-one Inc</td><td>210261</td><td>Santrifüj tüpü, 50ml, etekli etekli, torbalı, steril</td></tr><tr><td>Eppendorf tüpü (0.5ml)</td><td>Sarstedt Ltd.</td><td>72.699</td><td>Sarstedt Mikro Tüp Konik Tabanlı İtme Kapağı 0.5ml Standart</td></tr><tr><td>Nötr Eppendorf tüp (1.5ml)</td><td>Sarstedt Ltd.</td><td>72.690.001</td><td>Sarstedt Mikro Tüp Konik Tabanlı İtme Kapağı 1.5ml Standart Nötr</td></tr><tr><td>Etanol</td><td>VWR International Ltd.</td><td>20821.33</td><td>ETANOL MUTLAK ANALAR NP ACS/R.PE - Analitik Sınıf</td></tr><tr><td>2 L Konik Şişe</td><td>VWR International Ltd.</td><td>214-0038</td><td>Dar boyunlu, 2 L Erlenmeyer şişesi</td></tr><tr><td>Steril filtre kağıdı</td><td>Fisher Scientific UK Ltd.</td><td>1001-020</td><td>Düz daire ve çarşaflar; Parçacık Tutma: 11um'dan büyük; Filtrasyon hızı: 150 herzberg; Hava akışı: 10.5s / 100mL / in2; Orta gözeneklilik; Pürüzsüz yüzey; 1. Sınıf; Tür: daire; Dia: 20mm</td></tr><tr><td>Bijou numune kabı</td><td>Fisher Scientific UK Ltd.</td><td>129A</td><td>7ml polistiren numune kabı</td></tr><tr><td>Pseudomonas izolasyon agar</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>17208</td><td>agar 13.6 g/L, magnezyum klorür 1.4 g/L, hayvan dokusunun peptik sindirimi 20g/L, potasyum sülfat 10g/L, triklosan 0.025g/L</td></tr><tr><td>LB et suyu, Miller</td><td>Fisher Scientific UK Ltd. içerir.</td><td>BP1426</td><td>litre başına 10 g tripton, 5 g maya özü, 10 g sodyum klorür içerir</td></tr><tr><td>Büyük Embriyo Toplama Kafesleri</td><td>Bilimsel Laboratuvar Malzemeleri Ltd.</td><td>59-101</td><td>Flystuff - 100mm petri kabına</td></tr><tr><td>uyar TRI reaktif çözeltisi</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>AM9738</td><td></td></tr><tr><td>96 kuyulu mikroplaka</td><td>Bilimsel Laboratuvar Malzemeleri Ltd.</td><td>353072</td><td>Falcon 96 Kuyu Berrak Düz Tabanlı TC ile İşlem Görmüş Polistiren Hücre Kültürü Kapaklı Mikroplaka Steril</td></tr><tr><td>Havaneli</td><td>Fisher Scientific UK Ltd</td><td>12649595</td><td>Havaneli, Önceden Sterilize Edilmiş; Axygen; Doku öğütücü; Mavi; İnert polipropilen yapı; 1.5 ve 2.0 mL santrifüj tüplerine uyar; Ayrı ayrı sarılmış; 100/PK</td></tr><tr><td>Gliserol</td><td>Bilimsel Laboratuvar Malzemeleri Ltd.</td><td>CHE2068</td><td>Gliserol AR% 99,5 2,5 L</td></tr><tr><td>Pamuk yünü - emici olmayan</td><td>Cowens Ltd</td><td>ABL</td><td>Emici Olmayan Büyük miktar 20 torba x 500</td></tr><tr><td>Pamuk yünü emici</td><td>Cowens Ltd</td><td>ABS</td><td>BP küçük miktar 20 torba x 500</td></tr><tr><td>Vortex</td><td>Fisherbrand</td><td></td><td>Whirlimixer 75W 50-6-Hz 220-240V</td></tr><tr><td>Orbital inkübatör</td><td>Gallenkamp</td><td>INR-200-010V</td><td>220 V, 50 Hz, 5 A. Nominal sıcaklık: 70&�C. Çalkalama frekansı: 0...400 rpm.</td></tr><tr><td>Absorbans Mikroplaka Okuyucu</td><td>Biotek Instruments Ltd</td><td></td><td>ELx808 & ticaret; Absorbans Mikroplaka Okuyucu</td></tr><tr><td>Gen 5 Mikroplaka Okuyucu ve Görüntüleyici Yazılımı</td><td>Absorbans Mikroplaka Okuyucu Santrifüj için</td><td>Biotek Instruments Ltd</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Allegra</td><td></td><td>X-12R Tezgah Üstü Santrifüj 392304 Allegra X-12R Masaüstü Santrifüj, buzdolabına dayanıklı 50Hz 230V</td></tr><tr><td>Step One Plus Gerçek Zamanlı qPCR Sistemi</td><td>Thermofisher Scientific</td><td>4376600</td><td>Uygulamalı biyosistemler Step One Plus gerçek zamanlı qPCR sistemi</td></tr><tr><td>Step One Yazılımı 2.3</td><td>Thermofisher Scientific</td><td></td><td>Stepone ve SteponePlus gerçek zamanlı qPCR sistemleri için</td></tr><tr><td>R İstatistiksel Yazılım</td><td>https://cran.r-project.org/</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>10 & L pipet uçları</td><td>Greiner Bio-one Inc</td><td>741015</td><td>Easlyload gilson tarzı. Dereceli, şeffaf, yedek, 960 adet</td></tr><tr><td>200 & L pipet uçları</td><td>Greiner Bio-one Inc</td><td>741065</td><td>Easlyload gilson tarzı. Dereceli, şeffaf, yedek, 960 adet</td></tr><tr><td>1000 & L pipet uçları</td><td>Greiner Bio-one Inc</td><td>741045</td><td>Easlyload gilson tarzı. Dereceli, şeffaf, yedek, 960 adet</td></tr><tr><td>20 & L filtreli pipet uçları</td><td>Greiner Bio-one Inc</td><td>774288</td><td>Filtre ucu gilson tarzı. Şeffaf, raf mavisi, tek paketlenmiş, R/Dnase içermez, 96 adet</td></tr><tr><td>200 ve mikrodan oluşan 10 raf; L filtreli pipet uçları</td><td>Greiner Bio-one Inc</td><td>739288</td><td>Filtre ucu gilson tarzı. Şeffaf, raf mavisi, tek paketlenmiş, R / Dnase içermez, 96 adet</td></tr><tr><td>1000 ve mikro'luk 10 raf; L filtreli pipet uçları</td><td>Greiner Bio-one Inc</td><td>740288</td><td>Filtre ucu gilson tarzı. Şeffaf, raf mavisi, tek paketlenmiş, R / Dnase içermez, 60 adet 10 raf</td></tr></tbody></table>

bakteriyel enfeksiyon ve atma drosophila melanogaster içinde sözlü

Oral Bacterial Infection and Shedding in Drosophila melanogaster

Meyve sineği Drosophila melanogaster enfeksiyon ve doğuştan gelen bağışıklık en gelişmiş modeli sistemlerinden biridir. Çoğu iş sistemik enfeksiyonlar üzerinde odaklanmıştır iken, gut immunocompetence sözlü olarak sinekler bulaştırmak için yöntemler gerektirir patojenlere mekanizmaları ilgi son bir artış olmuştur. Burada sözlü olarak bireysel sinekler bir fırsatçı bakteriyel patojen (Pseudomonas aeruginosa) ve D. melanogaster (Pseudomonas entomophila) doğal bir bakteriyel patojen ortaya çıkarmak için bir iletişim kuralı mevcut. Erkek ve dişi sinekler bu patojenler için ortaya çıkarmak için sağlam bir yöntem sağlamak amacıyla bu iletişim kuralı hedefidir. Biz hayatta kalma fenotipleri, mikrop yükler ve dökülme, bakteriyel gösteren temsilcisi sonuçları hangi heterojenite patojen iletim çalışmanın ilgilidir sağlar. Son olarak, biz bunu teyit (bağırsak epitel koruyucu peritrophic matrisinde eksik) Dcy mutantlar ve zevkle (fonksiyonel bağışıklık yetersizliği (IMD) yolu eksik) mutantlar, oral enfeksiyon bakteri artan duyarlılık göstermek. Bu iletişim kuralı, bu nedenle, bağırsak enfeksiyonu sonuçları ve bakteriyel iletim varyasyon bir çeşitli genetik ve çevresel kaynakları çalışma genişletilmiş enfeksiyonu ağız yolu kullanmanın sinekler bulaştırmak için sağlam bir yöntem açıklanır.

Burada, açıklayıcı deney sonuçlarından nerede D. melanogaster sözlü olarak P. aeruginosa veya P. entomophilaile enfekte oldu mevcut. Şekil 2 bir 12 saat veya 24 saat pozlama süre OD600 bakteri kültürleri aşağıdaki sinekler başarılı oral enfeksiyon gösterir 25 ile 100 = P. aeruginosa (Şekil 2A) ve P. entomophila (Şekil 2B için C), anılan sıraya göre. Şekil 2B P. entomophila, zaman sinekler fazla optik yoğunluk bakteri kültürleri maruz artış tarafından bakteri yükü olarak gösterilen daha yoğun bir kültür kullanmanın önemini göstermektedir. Erkek ve dişi Oregon R (örer) sinekler P. aeruginosa enfeksiyon aynı oranda (Şekil 3) temizleyin ve P. aeruginosa CFUs (Şekil 4A) aynı sayıda döken. P. entomophila ile ancak bulaştığında, erkek ve dişi örer sinekler (Şekil 4B) zaman içerisinde değişen bir şekilde bakteri döken cinsinden farklı. Kadın ve erkek P. aeruginosa (Şekil 5A) ve P. entomophila (Şekil 5B) farklı oranlarda ölür. Ayrıca (Bu bağırsak epitel koruyucu peritrophic matrisinde eksikliği) Dcy mutantlar ve (Bu bir işlevsel IMD bağışıklık yol eksikliği) Relish mutantlar azalmış hayatta kalma P. entomophila ve P. aeruginosa takip göstermek görmek oral enfeksiyon (Şekil 5C).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57676/57676fig1.jpg"> Resim 1: Hayatta kalma, dökülme ve iç bakteri yükü Drosophila melanogasterağız enfeksiyonu takip ölçmek için protokolleri şematik bakış. D. melanogasterağız enfeksiyonu takip 3 potansiyel deneyler görülmektedir. 'Yaşam' tek sinek şişeleri için aktarmak ve onların virüslü ömrü kayıt ölçmek. 'Tek sinek 1.5 mL microcentrifuge tüpler 50 µL Lewis orta Cap ile aktararak akıtan' ölçmek. Tüp içinde 24 saat sonra sinek ve girdap tüp 100 µL 1 x PBS ile kaldırın. Kaldırmak ve bu çözüm LB besin agar bakteri dökülme hesaplamak için üzerinde plakası. Aynı sinek boyuna, 24 saat sonra kap ortamda Lewis ile taze tüpler sinekler aktarılması ve yıkama ve şimdi kirlenmiş boru kaplama dökülme ölçmek. Bir sinek 's 'dahili yük' bir virüslü sinek, yüzey bu sterilize alarak ve sonunda homogenate LB besin agar üzerinde kaplama önce homojenizasyon ölçülebilir. Sonra dökülme hesaplamak için ölçülen bu yapılabilir nasıl 'dahili yük' ve dökülme ilişkili. Bu şekilde kullanılan sinek illüstrasyon aslında B. Nuhanen36tarafından çizilmiştir. Yazarlar bu Wikimedia Commons37alınan örnek Kaplan-Meier eğrisi eşlik edecek değiştirdiniz. Tüm diğer resimler orijinal. <a href="/files/ftp_upload/57676/57676fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57676/57676fig2.jpg"> Şekil 2: bulaşıcı doz oral enfeksiyon takip bakteri. (A) erkek ve dişi Oregon-R bulaşıcı doz uçar P. aeruginosa kültür maruz takiben (OD600 = 25) 12 h için. Ortalama ve SE 3 kadın ve 3 erkek hesaplanır. (B) bulaşıcı bir dört P. entomophila kültürlerin maruz takip outcrossed vahşi tipi kadın doz (OD600 = 100, 75, 50 ve 25) veya % 5 sükroz çözüm 24 h için kontrol. İstatistiksel farkı (F3,76 18.567, p = &lt; 0.001) maruz kalma tedaviler arasında bulaşıcı doz barlar yukarıda farklı harfler tarafından gösterilir. Anlamına gelir 5 sinekler OD600 üzerinden hesaplanan = 0 doz ve 18-20 diğer dozlarda için. (C) erkek ve dişi Oregon-R bulaşıcı doz P. entomophila kültür maruz takiben uçar (OD600 = 100) 24 h için. Ortalama ve SE 20 ve 20 erkek hesaplanır. <a href="/files/ftp_upload/57676/57676fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57676/57676fig3.jpg"> Şekil 3: İç P. aeruginosa yük oral enfeksiyon sonra sinek içinde. Erkek ve dişi Oregon-R ortalama ± SE bakteriyel yük uçar P. aeruginosa ile oral enfeksiyon takip (OD600 = 25) 168 h sonrası enfeksiyon e kadar. Ortalama ve SE her zaman noktasının 3 bireyler hesaplanır. Bir sinek 's iç bakteri yükü önemli ölçüde zaman içerisinde değişen (p &lt; 0.001). <a href="/files/ftp_upload/57676/57676fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57676/57676fig4.jpg"> Şekil 4: oral enfeksiyon sonrasında dökülme bakteriyel. (A) P. aeruginosa döken Şekil 3, en fazla 120 h sonrası enfeksiyon için kullanılan aynı sinekler tarafından. Ortalama ve SE 3 kadın ve 3 erkek hesaplanır. (B) P. entomophila erkek ve dişi Oregon-R tarafından döken uçar P. entomophila ağız mantar enfeksiyonu takip (OD600 = 100) en çok 120 h sonrası enfeksiyon. Ortalama ve SE 34 ve 38 erkek hesaplanır. P. aeruginosa ve P. entomophilaiçin bir sinek barakanın CFUs sayısını önemli ölçüde zaman içinde değiştirir (p &lt; 0.001). <a href="/files/ftp_upload/57676/57676fig4large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57676/57676fig5.jpg"> Şekil 5: oral enfeksiyon bakteri takip sinekler yaşama. Kaplan-Meier (KM) hayatta kalma eğrileri (A) Oregon-R erkek ve dişi sinekler P. aeruginosa ile oral enfeksiyon takip (OD600 = 25) veya % 5 sükroz çözüm kontrol. KM sağkalım eğrisi tedavi grubu başına 20 Sineklerin Tanrısı 4 tüpleri üzerinden hesaplanır. (B) P. entomophila ile oral enfeksiyon sonra örer erkek ve dişi sinekler (OD600 = 100). KM sağkalım eğrisi 4 tek kontrol sinekler ve kadın ve erkek için 34 virüslü sinekler üzerinden hesaplanır. (C) bağışıklık mutantlar: Dcy (Drosocrystallin-peritrophic matris mutant) ve Rel (Relish IMD mutant), maruz P. entomophila (Pe), P. aeruginosa (Pa14) veya kontrol % 5 sükroz çözümü için. Tüm enfekte grupları önemli ölçüde denetim sinekler daha hızlı ölmek (p &lt; 0.001). <a href="/files/ftp_upload/57676/57676fig5large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>

Bu iletişim kuralı sözlü olarak ortaya çıkarmak ve bakteriyel patojenler ile meyve sineği Drosophila melanogaster bulaştırmak ve bağırsak enfeksiyonu takip bulaşıcı bakteri döken sayısını ölçmek için yöntemler açıklanır. Daha fazla sinek hayatta kalma sözlü bakteriyel enfeksiyonu takip bağışıklık mutantlar etkisini açıklar.

Bakteriyel enfeksiyon ve atma Drosophila melanogaster içinde sözlü

The fruit fly Drosophila melanogaster is one of the best developed model systems of infection and innate immunity. While most work has focused on systemic ...

Bu yöntem, bireylerin farklı enfeksiyon köklerine nasıl tepki verdiği gibi enfeksiyon ve bağışıklık alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin en önemli avantajı, enfeksiyona karşı konak savunmasında önemli bir rol oynayan ve esas olarak beslenme yoluyla elde edilen bağırsak immünyopraketinin incelenmesine olanak sağlamasıdır. Bu yöntem, Drosophila dışındaki türlerde kullanılma potansiyeline sahiptir ve virüsler gibi diğer patojenleri de incelemek için kullanılabilir.Genel olarak, bu yönteme yeni olan bireyler, bu mikrobiyoloji protokolleri sırasında gerekli deneysel titizlik nedeniyle mücadele edeceklerdir. Sinekleri, yedi mililitre taze yapılmış Lewis ortamı içeren 23 mililitrelik plastik şişelerde tutun. Şişeleri tıkamak için emici olmayan pamuk yünü kullanın.Bağıl nem oranı yaklaşık %12 olan 12-12 aydınlık-karanlık döngüsü altında 60 santigrat derecede tutunHer 14 günde bir, 20 ila 30 yetişkini yeni bir gıda şişesine aktarın ve yüzeye bir tutam kuru maya ekleyin. İki ila üç gün sonra, yeterli yumurta bırakılmışsa yetişkin sinekleri atın. Yumurta toplamak için bir popülasyon kafesi hazırlayın.İlk olarak, nem sağlamak için suya batırılmış pamuk yünü ekleyin. Daha sonra bir alt tabaka için, elma agar ve bir maya ezmesi ile doldurulmuş 75 mililitrelik bir plaka kullanın. Son olarak, yetişkinleri bir popülasyon kafesine yükleyin.24 saatlik aralıklarla plakayı değiştirin ve yumurta olup olmadığını kontrol edin. Yeterli yumurta bırakıldıktan sonra, plakadaki ölü sinekleri ve kalan maya hamurunu toplanan plakadan çıkarın. Daha sonra agarı 20 mililitre PBS'ye batırın ve ince bir boya fırçası kullanarak yumurtaları nazikçe yerinden çıkarın.PBS'deki yumurtaları 50 mililitrelik bir tüpe aktarın. Ardından yumurtaların yaklaşık beş dakika içinde dibe çökmesine izin verin. Daha sonra, bir p1000 ucunun ucunu yaklaşık 4 milimetre kısaltın, ardından çözeltideki yumurtaları aspire etmek için kullanın.Pistonun bir çırpıda serbest bırakılması, onları çekmek için etkilidir. Daha sonra PBS'deki yumurtaları 1,5 mililitrelik bir tüpe aktarın ve yumurtaların yerleşmesine izin verin. Şimdi filtrelenmiş bir p20 ucundan dört milimetre kesin ve ardından bir alikot yumurtayı geliştirmek için bir şişe yiyeceğe aktarmak için kullanın.P.entomophila ve P.aeruginosa kültürlerini büyütmek için, 10 mililitre LB suyunu 100 mikrolitre donmuş et suyu ile aşılayın ve gece boyunca 150 rpm çalkalama ile inkübe edin. Daha sonra, kültürü iki litrelik konik bir şişeye aktarın ve şişenin duvarlarının eğiminin başlangıcına kadar LB ile doldurun. Alt kültür üstel büyüme aşamasına ulaştığında, eşit hacimleri çift sayıda 50 mililitrelik tüplere aktarın, ardından döndürün.Sonra süpernatantları toplayın ve tekrar döndürün. Şimdi, her bir paleti beş mililitre süpernatan içinde yeniden süspanse ederek tüm tüplerdeki bakteri peletlerini birleştirin ve ardından süspansiyonları tek bir 50 mililitre tüpte yeniden birleştirin. Daha sonra başka bir dönüşten sonra, bakterileri% 5 sükroz çözeltisi içinde yeniden süspanse edin.Şimdi, süspansiyonun OD'sini güvenilir bir şekilde ölçmek için bu süspansiyonun bir örneğini 100 kat seyreltin ve süspansiyonun nihai konsantrasyonunu istenen bulaşıcı doza göre ayarlayın. Oral enfeksiyondan iki ila dört saat önce, sinekleri yiyecek içermeyen standart agar şişelerine aktarın. Bu arada, her sinek için bir enfeksiyon şişesi hazırlayın.İlk olarak, yedi mililitrelik bir numune tüpünün kapağını 500 mikrolitre standart şeker agar ile doldurun ve katılaşmasına izin verin. Daha sonra, agar içine bir filtre kağıdı diski yapıştırın, ardından 100 mikrolitre bakteri kültürünü doğrudan filtre diskine pipetleyin. Kontroller için %5 sükroz suyu kullanın.Açlık döneminden sonra, tek sinekleri hazırlanan tüplere aktarın. Sinekleri 18 ila 24 saat kuluçkaya yatırdıktan sonra, sinekleri yüzey sterilize edin. Bireyleri 100 mikrolitre% 70 etanol içeren bir tüpe yükleyin.20 ila 30 saniye sonra etanolü çıkarın ve 100 mikrolitre üçlü damıtılmış su ile değiştirin. 20 ila 30 saniye sonra suyu çıkarın. Sonra 100 mikrolitre PBS ekleyin ve sineği homojenize edin.Homojenatı 96 oyuklu bir plakanın üst sırasına aktarın ve aşağıdaki her oyuğa 90 mikrolitre 1x PBS ekleyin. Daha sonra 10 mikrolitrelik alikot kullanarak, bir dizi CFU değerini ayırt etmek için bu numuneyi seri olarak seyreltin. Daha sonra, seri seyreltmeleri beş mikrolitrelik damlacıklar halinde bir LB besleyici agar plakası üzerine yerleştirin.Damlacıkları, plaka üzerinde gizlice yerleştirilecek şekilde konumlandırın. Ardından plakayı gece boyunca inkübe edin. Ertesi gün, 10 ila 60 açıkça görülebilen koloni üreten seyreltmeden CFU'ların sayısını hesaplayın.Bakteri yükünü ölçmek için, enfekte olmuş tek bir sineği steril 1.5 mililitrelik bir mikrosantrifüj tüpüne aktarın. Daha sonra daha önce tarif edildiği gibi, sinekleri yüzey sterilize edin, ardından homojenize edin ve bir CFU analizi yapın. Bakteri dökülmesini ölçmek için, tek sinekleri yaklaşık 50 mikrolitre Lewis ortamı içeren 1,5 mililitrelik tüplere aktarın.Tüpü her 24 saatte bir değiştirin. Üç tüp 24 saat boyunca doldurulduktan sonra sinekleri atın. Her transferden sonra, tüpte bulunan bakterileri ölçün.Tüp içeriğini bir girdap kullanarak 100 mikrolitre PBS ile karıştırın. Daha sonra seri seyreltmeleri kaplayarak karışımdaki CFU'ları ölçün. Tarif protokolü kullanılarak, oral bakteriyel enfeksiyonun etkisi mortalite ve bakteri dökülmesi yoluyla araştırıldı.Dökülme, aynı sineklerde ve iç bakteri yükünün yanı sıra tek zaman noktalarında uzunlamasına ölçüldü. D. melanogaster oral yoldan P.aeruginosa veya P. entomophila ile enfekte oldu. Başarılı oral enfeksiyon, bakteri kültürlerine 12 veya 24 saatlik bir maruz kalma süresinden sonra meydana geldi.Daha konsantre P.entomophila kültürü kullanmak gerekliydi. Erkek ve dişi Oregon R sinekleri P.aeruginosa enfeksiyonunu aynı oranda temizledi ve aynı sayıda P.aeruginosa CFU'sunu döktü. Bununla birlikte, P.entomophila ile enfekte olduğunda, erkek ve dişi Oregon R sinekleri, zamana bağlı olarak dökülen bakteri sayısında farklılık göstermiştir.Erkekler ve dişiler P.aeruginosa ve P.entomophila'dan farklı oranlarda öldü. Karşılaştırıldığında, bağırsak epitelinde koruyucu peritrofik matristen yoksun olan mutant sinekler, fonksiyonel bir IMD bağışıklık yolu olmayan mutantlar gibi daha hızlı ölür. Bu videoyu izledikten sonra, Drosophila'yı bakterilerle oral yoldan nasıl enfekte edeceğinizi ve ortaya çıkan patolojinin yaşam süresi ve bakteri dökülmesi gibi temel yönlerini nasıl ölçeceğinizi iyi anlamalısınız.Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik, uygun şekilde yapılırsa, iki günlük bir süre boyunca yaklaşık altı ila sekiz saat arasında yapılabilir. Bu prosedürü takiben, enfeksiyonun bağışıklık gen ekspresyonunu nasıl değiştirdiği gibi ek soruları yanıtlamak için qRT-PCR gibi diğer yöntemler gerçekleştirilebilir. Unutmayın, bakteriyel patojenlerle çalışmak son derece tehlikeli olabilir ve bu prosedürleri gerçekleştirirken her zaman uygun kişisel koruyucu ekipman giymek ve laminer akış başlığı içinde çalışmak gibi önlemler alınmalıdır.

oral-bacterial-infection-and-shedding-in-drosophila-melanogaster

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Drosophila Wolbachia Bakteriyel Enfeksiyon

Drosophila hemocytes gelişmekte olan embriyonun bütünlüğü içinde dağılırlar . Bu protokol, floresan etiketli hemocytes embriyoları kullanılarak bu göçler montaj ve görüntü nasıl gösteriyor.

Uygulamalarda Canlı Görüntüleme Drosophila melanogaster Embriyonik Hemocyte Göçler

Kaynak: Siva-Jothy, J. A. ve diğerleri. Drosophila melanogaster'de Ağız Bakteriyel Enfeksiyonu ve Dökülme. J. Vis. Deneyim. (2018)Video, Drosophila melanogaster'ın ağızdan patojenik bakterilerle enfeksiyonunu gösteriyor. Bu program, enfeksiyon şişelerinin hazırlanmasını ve aç sineklerin bakarak bakteri alımını mümkün kılmasını içerir. Bu işlem, bağırsak kolonizasyonunu yakalar, ardından yüzey sterilizasyonu ve sineklerin homojenizasyonunu içerir. Son olarak, seri seyreltme ve koloni sayımı...

Drosophila melanogaster'in Patojenik Bakterilerle Ağız Enfeksiyonu

Kaynak: Siva-Jothy, J. A. ve diğerleri, Drosophila melanogaster'de Oral Bakteriyel Enfeksiyon ve Dökülme. J. Vis. Exp. (2018)Bu video, enfekte bir sineği birden fazla gıda içeren tüp üzerinden aktararak, dökülen bakterileri geri kazanarak ve seri seyreltme ve kaplama yoluyla canlı kolonilerin nicelendirilmesiyle Drosophila'da bakteri sarkmasını izleme prosedürünü göstermektedir.

Drosophila'da enfeksiyon bulaşma potansiyelini değerlendirmek için bakteriyel söküntü nicelendirilmesi

Kaynak: Hiroyasu, A., D ve diğerleri, Drosophila melanogaster larvalarından hemositlerin çıkarılması ve mikrobiyal enfeksiyon ve analizi. J. Vis. Exp. (2018)Bu video, Drosophila larvalarında bakteriyel enfeksiyonun oluşturulması için bir mikrobakteri damlasına yerleştirilip tungsten iğneyle delinerek uygulanır. Larvalar, daha sonra oluklu, besin açısından zengin bir agar plakasında kuluçka edilip konakçı-patojen etkileşimleri incelenir.

Drosophila larvalarında bakteriyel enfeksiyonun kurulması

Bu video, patojenik bir bakteriyi doğrudan vücut boşluğuna sokarak Drosophila'yı enfekte etme tekniğini göstermektedir. Bu yöntem, epitel bariyerlerini ve diğer pasif savunma mekanizmalarını atlayarak sistemik enfeksiyonun indüksiyonuna izin verir. Enfeksiyon üzerine, ortaya çıkan bağışıklık tepkisi, sinek ölümlerinin izlenmesi ve aşağı akış tahlillerinin yapılması ile değerlendirilir.

Sineklerde Sistemik Bakteriyel Enfeksiyonu Tanıtmak İçin Septik Bir İğne Ucu Tekniği

Bu videoda, E. coli'yi  Drosophila melanogaster'in göğüs kafesine enjekte ettikten sonra E. coli bakteri yükünü ölçmek için bir teknik gösteriyoruz.

E. coli Enfeksiyonunu Takiben Drosophila melanogaster'de E. coli Bakteri Yükünün Ölçülmesi

Drosophila melanogaster, doğuştan gelen bağışıklık sistemlerini ve enfeksiyon ve hastalığın fizyolojik sonuçlarını incelemek için olağanüstü bir model organizmadır. Bu protokol, D. melanogaster'e sağlam ve kantitatif olarak tekrarlanabilir bakteriyel enfeksiyonların nasıl sağlanacağını ve daha sonra enfeksiyon şiddetinin nasıl ölçüleceğini ve konak immün yanıtının nasıl ölçüleceğini açıklar.

Sistemik Bakteriyel Enfeksiyon ve Bağışıklık Savunma FENOTİPİ içinde<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Aksenik ve gnotobiyotik koşullarda Drosophila melanogaster yetiştirme için bir yöntem sunulmuştur. Fly embriyolar, sodyum hipoklorit dechorionated steril diyet aseptik transfer ve kapalı kaplarda yetiştirilir. Bakteri ile diyet ve embriyolar aşılamak gnotobiyotik dernekler yol açar ve bakteriyel varlığı tüm vücut Drosophila homojenatları kaplama ile teyit edilir.

Meyve Fly Yetiştirme<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Aksenik ve gnotobiyotik Koşullarında

Bu yöntem, patojen işgali üç boyutlu (3D) modelleri ile böcek hücreye görselleştirmek gösterilmiştir. Hemocytes Drosophila larvaları üzerinden viral veya bakteriyel patojenler, ex vivo veya vivo içindeile bulaşmış. Virüslü hemocytes daha sonra sabit ve görüntüleme için bir confocal mikroskop ve sonraki 3D hücresel yeniden yapılanma ile lekeli.

Hemocytes mikrobiyal enfeksiyon ve çözümleme çekme--dan Drosophila melanogaster larva

Drosophila melanogaster yetişkin sinekleri, konakçı antimikrobiyal doğuştan gelen immün yanıtların ve mikrobiyal enfeksiyon stratejilerinin altında yatan moleküler mekanizmaları araştırmak için model organizmalar olarak yaygın olarak kullanılmaktadır. D. melanogaster larva aşamasını ek veya alternatif bir model sistem olarak tanıtmak için, bir larva enjeksiyon tekniği tanımlanmıştır.

Drosophila melanogaster Larva Enjeksiyon Protokolü

Keşfedin Drosophila melanogaster'de bakteriyel enfeksiyon ve atma yöntemlerini. Bu teknik, bağırsak immünitesini ve bakteri yükünü ölçerek konak-patojen etkileşimlerini araştırmaya yardımcı olur.

Bakteriyel enfeksiyon ve atma Drosophila melanogaster içinde sözlü

Daha fazla video keşfet