Name: Bir fare modeli Metabolik sendromu ile ilgili kalp yetmezliği ile korunmuş ejeksiyon fraksiyonu atriyal Cardiomyocytes izolasyonu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-07-26T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 31 s
Description: Öğrenin, metabolik sendromla ilişkili kalp yetmezliği olan sıçanlardan atriyal kardiyomiyosit izolasyonu için optimize edilmiş Langendorff yöntemini. Bu teknik, yüksek verimli canlı hücre elde ederek uyarılma-kasılma eşleşmesi çalışmalarını mümkün kılar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu araştırma DZHK (Almanca merkezi kardiyovasküler araştırma, DB), tarafından desteklenmiştir (Else-Kröner-Fresenius Stiftung, F.H.), EKFS ve BMBF (Alman Milli Eğitim Bakanlığı ve araştırma), hem de klinik bilim adamı programı finanse BIH Charité tarafından Charité tarafından - Universitätsmedizin Berlin ve Berlin Sağlığı Enstitüsü (F.H.).

<ol><li>Alberti, K. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Harmonizing+the+metabolic+syndrome%3A+a+joint+interim+statement+of+the+International+Diabetes+Federation+Task+Force+on+Epidemiology+and+Prevention%3B+National+Heart%2C+Lung%2C+and+Blood+Institute%3B+American+Heart+Association%3B+World+Heart+Federation%3B+International+Atherosclerosis+Society%3B+and+International+Association+for+the+Study+of+Obesity%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Harmonizing the metabolic syndrome: a joint interim statement of the International Diabetes Federation Task Force on Epidemiology and Prevention; National Heart, Lung, and Blood Institute; American Heart Association; World Heart Federation; International Atherosclerosis Society; and International Association for the Study of Obesity.</a> Circulation. 120 (16), 1640-1645 (2009).</li>
<li>International Diabetes Federation Task Force on Epidemiology and Prevention. IDF Consensus Worldwide Definition of the Metabolic Syndrome. , Available from:
 <a target="_blank" href="https://www.idf.org/e-library/consensus-statements/60-idfconsensus-worldwide-definitionof-the-metabolic-syndrome.html">https://www.idf.org/e-library/consensus-statements/60-idfconsensus-worldwide-definitionof-the-metabolic-syndrome.html</a> (2006).</li>
<li>Melenovsky, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Left+atrial+remodeling+and+function+in+advanced+heart+failure+with+preserved+or+reduced+ejection+fraction%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%3A+Heart+Failure%22%5BJournal%5D)">Left atrial remodeling and function in advanced heart failure with preserved or reduced ejection fraction.</a> Circulation: Heart Failure. 8 (2), 295-303 (2015).</li>
<li>Goette, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((EHRA%2FHRS%2FAPHRS%2FSOLAECE+expert+consensus+on+atrial+cardiomyopathies%3A+definition%2C+characterization%2C+and+clinical+implication%5BTitle%5D)+AND+%22EP+Europace%22%5BJournal%5D)">EHRA/HRS/APHRS/SOLAECE expert consensus on atrial cardiomyopathies: definition, characterization, and clinical implication.</a> EP Europace. 18 (10), 1455-1490 (2016).</li>
<li>Schotten, U., Verheule, S., Kirchhof, P., Goette, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathophysiological+mechanisms+of+atrial+fibrillation%3A+a+translational+appraisal%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Reviews%22%5BJournal%5D)">Pathophysiological mechanisms of atrial fibrillation: a translational appraisal.</a> Physiological Reviews. 91 (1), 265-325 (2011).</li>
<li>Hohendanner, F., DeSantiago, J., Heinzel, F. R., Blatter, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dyssynchronous+calcium+removal+in+heart+failure-induced+atrial+remodeling%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">Dyssynchronous calcium removal in heart failure-induced atrial remodeling.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 311 (6), H1352-H1359 (2016).</li>
<li>Hohendanner, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inositol-1%2C4%2C5-trisphosphate+induced+Ca2%2B+release+and+excitation-contraction+coupling+in+atrial+myocytes+from+normal+and+failing+hearts%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Inositol-1,4,5-trisphosphate induced Ca2+ release and excitation-contraction coupling in atrial myocytes from normal and failing hearts.</a> The Journal of Physiology. 593 (6), 1459-1477 (2015).</li>
<li>Tada, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+mineralocorticoid+receptor+on+experimental+cerebral+aneurysms+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Hypertension%22%5BJournal%5D)">Role of mineralocorticoid receptor on experimental cerebral aneurysms in rats.</a> Hypertension. 54 (3), 552-557 (2009).</li>
<li>Iwasaki, Y. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atrial+fibrillation+promotion+with+long-term+repetitive+obstructive+sleep+apnea+in+a+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+College+of+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Atrial fibrillation promotion with long-term repetitive obstructive sleep apnea in a rat model.</a> Journal of the American College of Cardiology. 64 (19), 2013-2023 (2014).</li>
<li>Field, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atrial+natriuretic+factor-SV40+T+antigen+transgenes+produce+tumors+and+cardiac+arrhythmias+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Atrial natriuretic factor-SV40 T antigen transgenes produce tumors and cardiac arrhythmias in mice.</a> Science. 239 (4843), 1029-1033 (1988).</li>
<li>Claycomb, W. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HL-1+cells%3A+a+cardiac+muscle+cell+line+that+contracts+and+retains+phenotypic+characteristics+of+the+adult+cardiomyocyte%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">HL-1 cells: a cardiac muscle cell line that contracts and retains phenotypic characteristics of the adult cardiomyocyte.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 95 (6), 2979-2984 (1998).</li>
<li>Sartiani, L., Bochet, P., Cerbai, E., Mugelli, A., Fischmeister, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+expression+of+the+hyperpolarization-activated%2C+non-selective+cation+current+I%28f%29+in+immortalized+HL-1+cardiomyocytes%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Functional expression of the hyperpolarization-activated, non-selective cation current I(f) in immortalized HL-1 cardiomyocytes.</a> The Journal of Physiology. 545 (Pt 1), 81-92 (2002).</li>
<li>Louch, W. E., Sheehan, K. A., Wolska, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+in+cardiomyocyte+isolation%2C+culture%2C+and+gene+transfer%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Molecular+and+Cellular+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Methods in cardiomyocyte isolation, culture, and gene transfer.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 51 (3), 288-298 (2011).</li>
<li>Gunduz, D., Hamm, C. W., Aslam, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+Isolation+of+High+Quality+Cardiomyocytes%2C+Endothelial+Cells%2C+and+Fibroblasts+from+an+Adult+Rat+Heart%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Simultaneous Isolation of High Quality Cardiomyocytes, Endothelial Cells, and Fibroblasts from an Adult Rat Heart.</a> Journal of Visualized Experiments. (123), e55601(2017).</li>
<li>Li, D., Wu, J., Bai, Y., Zhao, X., Liu, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+culture+of+adult+mouse+cardiomyocytes+for+cell+signaling+and+in+vitro+cardiac+hypertrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Isolation and culture of adult mouse cardiomyocytes for cell signaling and in vitro cardiac hypertrophy.</a> Journal of Visualized Experiments. (87), e51357(2014).</li>
<li>Graham, E. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation%2C+culture%2C+and+functional+characterization+of+adult+mouse+cardiomyoctyes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Isolation, culture, and functional characterization of adult mouse cardiomyoctyes.</a> Journal of Visualized Experiments. (79), e50289(2013).</li>
<li>Roth, G. M., Bader, D. M., Pfaltzgraff, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+physiological+analysis+of+mouse+cardiomyocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Isolation and physiological analysis of mouse cardiomyocytes.</a> Journal of Visualized Experiments. (91), e51109(2014).</li>
<li>Thum, T., Borlak, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+cultivation+of+Ca2%2B+tolerant+cardiomyocytes+from+the+adult+rat%3A+improvements+and+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Xenobiotica%22%5BJournal%5D)">Isolation and cultivation of Ca2+ tolerant cardiomyocytes from the adult rat: improvements and applications.</a> Xenobiotica. 30 (11), 1063-1077 (2000).</li>
<li>Egorova, M. V., Afanas'ev, S. A., Popov, S. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+method+for+isolation+of+cardiomyocytes+from+adult+rat+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Bulletin+of+Experimental+Biology+and+Medicine%22%5BJournal%5D)">A simple method for isolation of cardiomyocytes from adult rat heart.</a> Bulletin of Experimental Biology and Medicine. 140 (3), 370-373 (2005).</li>
<li>Kohncke, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+Kv+channel+recordings+in+murine+atrial+and+ventricular+cardiomyocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Isolation and Kv channel recordings in murine atrial and ventricular cardiomyocytes.</a> Journal of Visualized Experiments. (73), e50145(2013).</li>
<li>Wagner, E., Brandenburg, S., Kohl, T., Lehnart, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+tubular+membrane+networks+in+cardiac+myocytes+from+atria+and+ventricles%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Analysis of tubular membrane networks in cardiac myocytes from atria and ventricles.</a> Journal of Visualized Experiments. (92), e51823(2014).</li>
<li>Hohendanner, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+mechanisms+of+metabolic+syndrome-related+atrial+decompensation+in+a+rat+model+of+HFpEF%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Molecular+and+Cellular+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Cellular mechanisms of metabolic syndrome-related atrial decompensation in a rat model of HFpEF.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 115, 10-19 (2017).</li>
<li>Seluanov, A., Vaidya, A., Gorbunova, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishing+primary+adult+fibroblast+cultures+from+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Establishing primary adult fibroblast cultures from rodents.</a> Journal of Visualized Experiments. (44), e2033(2010).</li>
<li>Bootman, M. D., Higazi, D. R., Coombes, S., Roderick, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcium+signalling+during+excitation-contraction+coupling+in+mammalian+atrial+myocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cell+Science%22%5BJournal%5D)">Calcium signalling during excitation-contraction coupling in mammalian atrial myocytes.</a> Journal of Cell Science. 119 (Pt 19), 3915-3925 (2006).</li>
<li>Smyrnias, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+the+T-tubule+system+in+adult+rat+ventricular+and+atrial+myocytes%2C+and+its+role+in+excitation-contraction+coupling+and+inotropic+stimulation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Calcium%22%5BJournal%5D)">Comparison of the T-tubule system in adult rat ventricular and atrial myocytes, and its role in excitation-contraction coupling and inotropic stimulation.</a> Cell Calcium. 47 (3), 210-223 (2010).</li>
<li>Pritchett, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diastolic+dysfunction+and+left+atrial+volume%3A+a+population-based+study%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+College+of+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Diastolic dysfunction and left atrial volume: a population-based study.</a> Journal of the American College of Cardiology. 45 (1), 87-92 (2005).</li>
<li>Linz, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cathepsin+A+mediates+susceptibility+to+atrial+tachyarrhythmia+and+impairment+of+atrial+emptying+function+in+Zucker+diabetic+fatty+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Research%22%5BJournal%5D)">Cathepsin A mediates susceptibility to atrial tachyarrhythmia and impairment of atrial emptying function in Zucker diabetic fatty rats.</a> Cardiovascular Research. 110 (3), 371-380 (2016).</li>
<li>Ackers-Johnson, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Simplified%2C+Langendorff-Free+Method+for+Concomitant+Isolation+of+Viable+Cardiac+Myocytes+and+Nonmyocytes+From+the+Adult+Mouse+Heart%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">A Simplified, Langendorff-Free Method for Concomitant Isolation of Viable Cardiac Myocytes and Nonmyocytes From the Adult Mouse Heart.</a> Circulation Research. 119 (8), 909-920 (2016).</li>
<li>Ramanathan, T., Skinner, H. <a target="_blank" href="https://academic.oup.com/bjaed/article-abstract/5/2/61/422091">Coronary blood flow.</a> Continuing Education in Anaesthesia Critical Care & Pain. 5 (2), 61-64 (2005).</li>
<li>Bond, M. D., Van Wart, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+the+individual+collagenases+from+Clostridium+histolyticum%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Characterization of the individual collagenases from Clostridium histolyticum.</a> Biochemistry. 23 (13), 3085-3091 (1984).</li>
<li>Deel, E. D., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28485491">In vitro model to study the effects of matrix stiffening on Ca(2+) handling and myofilament function in isolated adult rat cardiomyocytes.</a> The Journal of Physiology. 595 (14), 4597-4610 (2017).</li>
<li>Wuensch, E., Heidrich, H. G. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/14058277">[On the Quantitative Determination of Collagenase].</a> Hoppe-Seyler's Zeitschrift für physiologische Chemie. 333, 149-151 (1963).</li>
<li>Conceicao, G., Heinonen, I., Lourenco, A. P., Duncker, D. J., Falcao-Pires, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+heart+failure+with+preserved+ejection+fraction%5BTitle%5D)+AND+%22Netherlands+Heart+Journal%22%5BJournal%5D)">Animal models of heart failure with preserved ejection fraction.</a> Netherlands Heart Journal. 24 (4), 275-286 (2016).</li>
<li>Horgan, S., Watson, C., Glezeva, N., Baugh, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+models+of+diastolic+dysfunction+and+heart+failure+with+preserved+ejection+fraction%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cardiac+Failure%22%5BJournal%5D)">Murine models of diastolic dysfunction and heart failure with preserved ejection fraction.</a> Journal of Cardiac Failure. 20 (12), 984-995 (2014).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Burada, ilk tek hücreli ACMs atriyal remodeling22işaretlenmiş gösteren MetS ile ilgili HFpEF bir fare modeli yalıtım için bir protokol açıklanan. Aşırı yağ dokusu aort, giderek daha zor cannulation yanı sıra cerrahi hazırlık yapabilir gibi benzersiz olarak zor bir işlemdir. Sorun giderme kılavuzu Tablo 2 adresleri yalıtım yordam en yaygın sorunların sağlanan.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>Soru...

MetS tip-2 diyabet ve kalp-damar hastalıkları için risk faktörlerinin bir küme tanımlar ve artan bir arteryel kan basıncı içerir (trigliserid yükseltilmiş ve alçaltılmış yüksek yoğunluklu lipoprotein kolesterol) dislipidemi, artan açlık glikoz ve merkezi obezite1. MetS dünya çapında yaygınlık % 25-30 ve sürekli yükselen2olduğu tahmin edilmektedir. HFpEF hànzú bir klinik sendrom genellikle MetS ile ilgili olduğunu. HFpEF ve onun önceki aşamaları (yani, hipertansif kalp hastalığı) sırasında kalp remodeling da kulakçık3/ remodeling tarafından eşlik eder. İndirimli contractile işlevi ve sol atriyum yapısal değişiklikler artmış mortalite, atriyal fibrilasyon ve yeni başlangıçlı kalp yetmezliği4ile ilişkili bulunmuştur. Atriyal remodeling iyon kanal işlevi, Ca2 + homeostazı, atriyal yapısı, fibroblast harekete geçirmek ve doku fibrozu5değişiklikler karakterizedir. Atriyal MetS ile ilgili HFpEF ve onun altında yatan patolojik mekanizmaları hala kötü anlaşılır ve bir daha da derinlemesine araştırma gereken remodeling için yorum yaptı. Hayvan modelleri var olmak a değerli alet ve atriyal kardiyomiyopatiler6,7,8,9alanında birçok gelişmeler yol kanıtlanmıştır.
Çalışmalar izole tek hücreli cardiomyocytes ile teyit ve in vivo bulgular tamamlayıcı için sık sık kullanılır. Bir izolasyon ve potansiyel sonraki hücre kültürü, yollar, iyonik kanal akımları ve uyarma-kasılma-kaplin sinyal soruşturma için izin verir. Fizyolojik koşullar altında cardiomyocytes çoğalırlar değil. Füzyon bir atrial natriuretic faktör transkripsiyon düzenleyici dizisi ve bir simian virüs 40 büyük T antijen transgenik farelerde arasında AT-110adlı ilk ölümsüzleştirdi ACMs yol açtı. AT-1 hücreleri daha da geliştirilmesi sadece seri olarak passaged edemem ama aynı zamanda kendiliğinden sözleşme11HL-1 hücrelere doğuran. Ancak, daha az organize ultrastructure myofibrils11ve bir hyperpolarization harekete geçirmek içe geçerli12geliştirme yüksek bir olay gibi taze izole hücrelere kıyasla yapısal ve işlevsel farklılıklar göstermektedir. Ventrikül cardiomyocytes (VCM) sıçanlar ve fareler modelleri çeşitli yalıtım iyi kurulmuş13,14,15,16,17,18 ' dir , 19. genel olarak eksize kalp Langendorff aparatı monte ve retrogradely bir Ca2 +ile derin-collagenases ve proteaz gibi sindirim enzimleri içeren boş arabellek. Kalsiyum o zaman fizyolojik şartlarda kademeli bir şekilde yeniden ortaya çıkar. Ancak, kullanışlılığı hastalık modelleri atriyal remodeling ile sınırlı olmasına rağmen ACMs yalıtım için adanmış protokolleri kullanılabilir20,21, artan fibrozis ve basınç ilgili farklar nedeniyle.
Bu makalede, bir protokol atriyal remodeling (yani, özellikle ZFS1 fare modeli MetS ile ilgili HFpEF için)22göstermek hayvanlardan atriyal tek hücreli cardiomyocytes yalıtım için hayata geçirdik. Varolan yalıtım protokolleri en iyi duruma getirilmiş ve kontrol ve morfolojik ve fonksiyonel olarak sağlam cardiomyocytes daha yüksek verimleri için önde gelen kardiyak boşluklar, intraluminal basınç değiştirmek için basit, özel yapım bir aygıt tarafından tamamlanmaktadır. Aşağıdaki iletişim kuralı bir adım adım kılavuz ile araştırmacı, özel yapım donanımları, bir liste-in eriyik yanı sıra kapsamlı sorun giderme kılavuzu ayrıntılı bir açıklamasını sağlar.

<table><tbody><tr><td>ZSF-1 Obez sıçan</td><td>Charles River Laboratories, Inc.</td><td></td><td>21 haftalık</td></tr><tr><td>İnce İris Makası</td><td>Güzel Bilim Araçları GmbH</td><td>14094-11</td><td></td></tr><tr><td>Cerrahi Makas</td><td>Güzel Bilim Araçları GmbH</td><td>14001-18</td><td></td></tr><tr><td>Mikro Pansuman Forseps (kavisli, tırtıklı)</td><td>Aesculap, Inc.</td><td>BD312R</td><td></td></tr><tr><td>Doku Forseps (düz, 1 x 2 diş)</td><td>Aesculap, Inc.</td><td>BD537R</td><td></td></tr><tr><td>Bağlama Forseps (açılı)</td><td>Aesculap, Inc.</td><td>MA624R</td><td></td></tr><tr><td>Kemirgen ve Küçük Hayvan Giyotin</td><td>Kent Scientific Corp.</td><td>DCAP</td><td></td></tr><tr><td>Düşük Maliyetli İndüksiyon Odası 3.0 L</td><td>Kent Scientific Corp.</td><td>SOMNO-0730&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Kelebek Kanatlı İnfüzyon Seti 21 g</td><td>Hospira, Inc.</td><td></td><td></td>181106101</tr><tr><td>Abbocath 16 G</td><td>Hospira, Inc.</td><td>0G7149702</td><td></td></tr><tr><td>Microlance Hipodermik İğne</td><td>Becton Dickinson GmbH</td><td>301300</td><td>kanül yapmak için iğneyi değiştirin</td></tr><tr><td>Braun Orijinal Perfüzör Şırınga 50 ml</td><td>B. Braun Melsungen AG</td><td>8728810F</td><td></td></tr><tr><td>Braun Enjekte Solo Şırınga 10 ml</td><td>B. Braun Melsungen AG</td><td>2057926</td><td></td></tr><tr><td>Beher 50ml</td><td>Duran Group (DWK Life Sciences GmbH)</td><td>21 106 17</td><td></td></tr><tr><td>Duroplan petri kabı (100 x 20 mm)</td><td>Duran Group (DWK Life Sciences GmbH)</td><td>21 755 48</td><td></td></tr><tr><td>Seraflex Sütür USP 3/0</td><td>SERAG-WIESSNER GmbH & Co. KG</td><td>IC208000</td><td></td></tr><tr><td>VWR tek kullanımlık Kare Kantarlı Tekneler 100ml</td><td>VWR, Inc.</td><td>10803-148</td><td></td></tr><tr><td>Strafor yüzey</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sodyum klorür</td><td>Sigma-Aldrich, Inc.</td><td>71380</td><td></td></tr><tr><td>Potasyum klorür</td><td>Sigma-Aldrich, Inc.</td><td>P4504</td><td></td></tr><tr><td>Potasyum fosfat monobazik</td><td>Sigma-Aldrich, Inc.</td><td>P5379</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum fosfat dibazik</td><td>Sigma-Aldrich, Inc.</td><td>S0876</td><td></td></tr><tr><td>Magnezyum sülfat heptahidrat</td><td>Sigma-Aldrich, Inc.</td><td></td><td></td>230391</tr><tr><td>Magnezyum klorür</td><td>Sigma-Aldrich, Inc.</td><td>M8266</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma-Aldrich, Inc.</td><td>H3375</td><td></td></tr><tr><td>Taurin</td><td>Sigma-Aldrich, Inc.</td><td>T0625</td><td></td></tr><tr><td>Glikoz</td><td>Sigma-Aldrich, Inc.</td><td>G7528</td><td></td></tr><tr><td>2,3-Bütandion monoksim</td><td>Sigma-Aldrich, Inc.</td><td>B0753</td><td></td></tr><tr><td>Kalsiyum klorür çözeltisi (1 M)</td><td>Sigma-Aldrich, Inc.</td><td>21115</td><td></td></tr><tr><td>Sığır Serumu Albümin</td><td>Sigma-Aldrich, Inc.</td><td>A9647</td><td></td></tr><tr><td>Liberaz</td><td>Roche (Sigma-Aldrich, Inc.)</td><td>LIBTM-RO</td><td></td></tr><tr><td>Heparin</td><td>Rotexmedica GmbH</td><td>3862357</td><td></td></tr><tr><td>Forene (Isoflurane)</td><td>Abbvie Deutschland GmbH & Co. KG</td><td>10182054</td><td></td></tr><tr><td>Engelbreth-Holm-Swarm murin sarkomu bazal membranından Laminin</td><td>Sigma-Aldrich, Inc.</td><td>L2020</td><td></td></tr><tr><td>WillCo cam tabanlı çanak 500&mikro; l 0.005mm</td><td>WillCo Wells BV</td><td>HBST-3522</td><td></td></tr><tr><td>Fluo4 Canlandırıcı</td><td>(Thermo Fisher Scientific, Inc.)</td><td>F14201</td><td>5 ve mikro; RT</td></tr><tr><td>Di-8-ANNEPS</td><td>Invitrogen'de (Thermo Fisher Scientific, Inc.)</td> 20 dakika boyunca M<td>D3167</td><td>10 ve mikro; 37 ° C'de 45 dakika M; C&nbsp;</td></tr><tr><td>Mitotracker KIRMIZI FM</td><td>Canlandırıcı (Thermo Fisher Scientific, Inc.)</td><td>M22425</td><td>20nM, 37 ° C'de 30 dakika; C</td></tr><tr><td>Ceketli reaksiyon kabı 500 ml</td><td>Gebr. Rettberg GmbH</td><td>107024414</td><td></td></tr><tr><td>Ceketli reaksiyon kabı 1000 ml</td><td>Gebr. Rettberg GmbH</td><td>107025414</td><td></td></tr><tr><td>Ceketli baloncuk tutucu</td><td>Gebr. Rettberg GmbH</td><td>134720001</td><td></td></tr><tr><td>ED ısıtmalı daldırma sirkülatörü</td><td>Julabo GmbH</td><td>9116000</td><td></td></tr><tr><td>Reglo Digital MS-2/6 peristaltik pompa</td><td>Ismatec (Cole-Parmer Gmbh)</td><td>ISM 831</td><td></td></tr><tr><td>Voltcraft Termometre 302 K/J</td><td>Conrad Electronic SE</td><td>030300546</td><td></td></tr><tr><td>Boru</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>LSM 700 mikroskop</td><td>Carl Zeiss, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ZEN 2.3 görüntüleme yazılımı</td><td>Carl Zeiss, Inc.</td><td>410135-1011-240&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Tek kanallı ısıtıcı kontrol cihazı TC-324B</td><td>Warner Instruments, LLC</td><td>64-2400</td><td></td></tr><tr><td>8 kanallı perfüzyon sistemi</td><td>Warner Instruments, LLC</td><td>64-0185</td><td></td></tr><tr><td>8 kanallı Çok Hatlı Hat İçi Çözüm Isıtıcıları</td><td>Warner Instruments, LLC</td><td>64-0105</td><td></td></tr></tbody></table>

bir fare modeli metabolik sendromu ile ilgili kalp yetmezliği ile korunmuş ejeksiyon fraksiyonu atriyal cardiomyocytes izolasyonu

Isolation of Atrial Cardiomyocytes from a Rat Model of Metabolic Syndrome-related Heart Failure with Preserved Ejection Fraction

Bu makalede, biz bir en iyi duruma getirilmiş, Langendorff tabanlı tek hücreli atriyal cardiomyocytes (ACMs) bir fare modeli Metabolik sendromu (MetS) yalıtım için açıklayınız-kalp yetmezliği korunmuş ejeksiyon fraksiyonu (HFpEF) ile ilgili. MetS ile ilgili HFpEF yaygınlığı artıyor ve atriyal remodeling mortalite bağımsız bir tahmin olarak atriyal kardiyomiyopatiler atriyal remodeling ve atriyal fibrilasyon ile ilgili klinik olarak son derece ilgilidir. Çalışmalar izole tek hücreli cardiomyocytes ile teyit ve in vivo bulgular tamamlayıcı için sık sık kullanılır. Dolaşım gemi rarefication ve interstisyel doku fibrozu ACMs başarılı tek hücreli yalıtım bu hastalığın hayvan modeller için potansiyel olarak kısıtlayıcı bir faktör poz.
Biz bu sorunu bir aygıtı el ile yalıtım işlem sırasında kalp boşlukları intraluminal basınç düzenleyen yetenekli istihdam ederek önemli ölçüde morfolojik ve fonksiyonel olarak sağlam ACMs verimini artırma ele sahip. Alınan hücreler, hücre kültürü ve fonksiyonel kalsiyum görüntüleme (yani, uyarma-kasılma-kaplin) gibi farklı deneyler çeşitli kullanılabilir.
Araştırmacı bir adım adım protokolüyle, listesini en iyi duruma getirilmiş çözümler, gerekli ekipman ve kapsamlı sorun giderme Rehberi hazırlamak için ayrıntılı yönergeler sağlar. Yordamın ilk uygulama oldukça zor olabilir, başarılı bir uyum okuyucu MetS ile ilgili HFpEF deneyler geniş bir yelpazede, fare modeli state-of--art ACM izolasyonların gerçekleştirmek izin verir.

21 haftalıkken 60-90 oranında kalsiyum yeniden uyarlaması (adım 5.4-5,7), (adım 6.1 açıklandığı gibi tahmini) uygun ACMs ZSF-1 obez sıçanlarından emir bu Yöntem (Şekil 4A) tarafından ayrılmış olabilir. Rat, farklı bir ve daha fazla hànzú fenotip VCMs24,25ile karşılaştırıldığında ACMs karakterizedir. Şekil 4B korunmuş membranlar ve sarcomere yapısı, işlevsel olarak ayrılma...

Burada, biz bir en iyi duruma getirilmiş, Langendorff tabanlı bir fare modeli Metabolik sendromu ile ilgili kalp yetmezliği ile korunmuş ejeksiyon fraksiyonu tek hücreli atriyal cardiomyocytes yalıtım için açıklayınız. El ile düzenleme intraluminal basınç kalp boşlukları, işlevsel olarak sağlam miyositler uyarma-kasılma-kaplin çalışmaları için uygun verim için uygulanır.

Bir fare modeli Metabolik sendromu ile ilgili kalp yetmezliği ile korunmuş ejeksiyon fraksiyonu atriyal Cardiomyocytes izolasyonu

In this article, we describe an optimized, Langendorff-based procedure for the isolation of single-cell atrial cardiomyocytes (ACMs) from a rat model of ...

Bu yöntem, bireysel kardiyomiyosit fonksiyonu alanındaki temel soruları yanıtlamaya yardımcı olabilir ve uyarma-kasılma-eşleşme çalışmasına izin verir. Bu tekniğin temel avantajı, atriyal kardiyomiyopatili kalplerden yüksek miktarda canlı atriyal kardiyomiyosit veriminin izole edilebilmesi ve sonraki deneyler için kullanılabilmesidir. Langendorff cihazının üzerine uzun, keskin ucu çıkarılmış bir kanül yerleştirerek başlayın ve akışı başlatın.Isıtma modülünü açın ve iğnenin ucundaki perfüzyon tamponu perfüzyon için istenen sıcaklığı koruyacak şekilde ayarlayın. Sıcaklık kalibrasyonu tamamlandıktan sonra, kanülü buz gibi soğuk kanülasyon tamponu ile doldurulmuş 10 ml'lik bir şırıngaya aktarın. Aortun hızlı bir şekilde daha sonra kanülasyonu için kanülün üzerine hazır hazırlanmış iki çift el üstü düğüm yerleştirin.Kalbin tabanını forseps ile sıkıştırarak ve hayvanın kuyruğuna doğru yavaşça aşağı çekerek ötenazi yapılmış, heparinize edilmiş sıçandan kalbi çıkarın. Kalbi çekmeye devam ederken aortu kesin ve aortun 5 mm uzunluğunda bir bölümünü kalbe bağlı bırakın. Kalbi hızlı bir şekilde 50 ml'lik bir beherde 50 ml buz gibi soğuk kanülasyon tamponuna aktarın.Kalbin soğuması ve kasılmala

isolation-atrial-cardiomyocytes-from-rat-model-metabolic-syndrome

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Bu hücre içi Ca için kullanılabilecek insan atriyal miyosit izolasyonunu...

Ca aynı anda Ölçümler İnsan Atriyal miyositlerin izolasyonu<sup&gt; 2 +</sup&gt; Geçici ve Membran Akımlar

Kalp hastalıklarının hücre temelinde Mevcut bilgi çok hayvan modelleri üzerinde yapılan çalışmalara dayanmaktadır. Burada açıklamak ve insan ventrikülün küçük cerrahi örneklerinden tek bir canlı kardiyomiyositlerin elde etmek için yeni bir yöntem doğrulamak. İnsan ventriküler miyositler elektrofizyolojik çalışmalar ve uyuşturucu testi için kullanılabilir.

Taze Cerrahi Örneklerden İzolasyon ve İnsan Ventriküler kardiyomiyositlerin Fonksiyonel Karakterizasyonu

Bir fare kalpten farklı kardiyak hücre tiplerinin izolasyonu için çeşitli protokoller geliştirilmiş ve açıklanmıştır. Burada, yüksek kaliteli ana kardiyak hücre tiplerinin (kardiyomiyosit, endotel hücreleri ve fibroblastların) tek bir preparasyondan izole edilmesini sağlayan deneysel maliyetleri düşüren optimize edilmiş bir protokol tarif edilmiştir.

Bir Yetişkin Sıçan Kalpten Yüksek Kalitede Kardiyomiyosit, Endotel Hücresi ve Fibroblastların Eşzamanlı İzolasyonu

Bu protokol, bir öbek sindirim yaklaşımı kullanarak yetişkin fare kalbi tek atriyal kardiyomiyositler izole etmek için kullanılır. Bu yaklaşım, yama kelepçe çalışmalarında atriyal miyosit elektrofizyolojisini karakterize etmek için kullanılabilecek sağ veya sol atriyal miyositleri izole etmek için kullanılır.

Yetişkin fareler atriyal Miyoksit izolasyonu

Sunulan vibratome kesilmiş miyokardiyal dilimlerden insan ve hayvan ventriküler kardiyomiyosit izolasyon için bir protokoldür. Kalsiyuma dayanıklı hücrelerin yüksek verimi (200 hücre/mg'a kadar) az miktarda dokudan (&lt;50 mg) elde edilebilir. Protokol soğuk iskemiye maruz kalan miyokardiyum için 36 saate kadar geçerlidir.

Vibratome-Cut Miyokardiyal Dilimlerden İnsan Ventriküler Kardiyomiyositlerin İzolasyon

Miyositlerin ve miyosit olmayanların tek bir yetişkin fare kalbinin hem atria hem de ventriküllerinden eşzamanlı izolasyonu için bir yöntem açıklanmaktadır. Bu protokol, yüksek oranda uygulanabilir kardiyak miyositlerin ve miyosit olmayanların tutarlı verimini sağlar ve fenotipleme ve in vitro analiz için en uygun hücreye özgü kültür koşullarını detaylandırmaz.

Yetişkin Fare Kalbinden Atriyal Miyositler, Ventrikül Miyositleri ve Miyosit Olmayanların Eşzamanlı İzolasyonu ve Kültürü

Antegrad perfüzyon tekniği ile yüksek kaliteli bireysel fare kalp hücrelerini izole etmek için basit bire yöntemi geliştirdik. Bu yöntem Langendorff içermez ve kardiyak fibroblastlar veya progenitörler gibi ventrikül ve atriyal miyositleri veya interstisyel hücreleri izole etmek için yararlıdır.

Farelerden Kardiyomiyosit İzolasyonu için Antegrad Perfüzyon Yöntemi

Fare modelleri, aritmogenezin temel mekanizmalarının incelenmesine izin verir. Bu amaçla, yama-kelepçe ölçümleri yapmak için yüksek kaliteli kardiyomiyositler gereklidir. Burada, kalsiyum geçicilerinin ve L-tipi kalsiyum akımının eşzamanlı ölçümlerine izin veren retrograd enzim bazlı Langendorff perfüzyonu yoluyla murin atriyal ve ventriküler miyositleri izole etmek için bir yöntem tanımlanmıştır.

Ca2+ geçici ve L-tipi kalsiyum akımının eşzamanlı ölçümleri için yüksek kaliteli murin atriyal ve ventriküler miyositlerin izolasyonu

Bu protokol, yetişkin farelerden atriyal ve ventrikül miyositlerinin eşzamanlı izolasyonu için aort kanülasyonunun derinliğini de içeren Langendorff yönteminin modifikasyonlarını açıklar.

Yetişkin Farelerden Atriyal ve Ventrikül Miyositlerinin Eşzamanlı İzolasyonu için Langendorff Yönteminin Modifikasyonları

Kardiyolojide hücresel ve moleküler fonksiyonel deneyler için altın standart kardiyomiyositlerdir. Bu makalede, fare kardiyomiyositlerini izole etmek için Langendorff dışı tekniğe yapılan uyarlamalar açıklanmaktadır.

Fare kardiyomiyositlerini sürekli olarak izole etmek için basit ve etkili bir yöntem

Öğrenin, metabolik sendromla ilişkili kalp yetmezliği olan sıçanlardan atriyal kardiyomiyosit izolasyonu için optimize edilmiş Langendorff yöntemini. Bu teknik, yüksek verimli canlı hücre elde ederek uyarılma-kasılma eşleşmesi çalışmalarını mümkün kılar.

Bir fare modeli Metabolik sendromu ile ilgili kalp yetmezliği ile korunmuş ejeksiyon fraksiyonu atriyal Cardiomyocytes izolasyonu (Video) | JoVE Journal

Bir fare modeli Metabolik sendromu ile ilgili kalp yetmezliği ile korunmuş ejeksiyon fraksiyonu atriyal Cardiomyocytes izolasyonu

Daha fazla video keşfet