Name: Multipl Miyelom kemik iliği Xenografts NOG farelerde Multimodal kollarındaki ve pozitronik emisyon tomografi/Hesaplamalı tomografi görüntüleme (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 32 s
Description: Keşfedin, mTOR inhibitörlerinin multipl miyelom tümörleri üzerindeki etkilerini NOG farelerinde kemik iliği ksenograft modeli kullanarak biyolüminesans ve PET/CT görüntüleme ile değerlendirmeyi.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu eser VA hak grant1I01BX001532 gelen Amerika Birleşik Devletleri Bakanlığı gazileri işleri Biyomedikal Laboratuvarı araştırma tarafından desteklenen ve geliştirme hizmeti (uymuyor) PF ve ak VA klinik bilim R & D hizmet (destek kabul eder. Liyakat Ödülü I01CX001388) ve VA rehabilitasyon R & D hizmet (Merit Ödülü I01RX002604). Daha fazla destek bir UCLA öğretim tohum hibe JK için geldi. Bu içeriği mutlaka bize Department of Veterans Affairs veya ABD hükümeti görüşlerini temsil etmemektedir.

Aşağıda açıklanan tüm hayvan yordamlar kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi (IACUC) büyük Los Angeles VA sağlık sisteminin tarafından kabul edildi ve patojen ücretsiz ve steril koşullarda gerçekleştirilmiştir.
1. hazırlanması 8226 hücrelerinin (8226-LUC) Luciferase ifade
<ol><li>İnsan MM hücre kültürünü 8226, % 10 fetal Sığır serum (FBS) ve % 1 penisilin-streptomisin % 95 hava ve %5 karbondioksit (CO2) içeren bir oksijen atmosferde 37 ° C'de ile takıma RPMI-1640 ortamda korumak.</li>
	<li>İstikrarlı LUC ifade muhabir 8226 hücreler üretmek transfecting 1 x 10 tarafından açıklanan6 8226 hücrelerinin bir seçim hygromycin (100-350 mg/mL) ile daha önce takip luciferase muhabir vektör ile6.</li>
	<li>Koşullarda orta kadar stabil transfected 8226 hücre kültürünü kurulması oluşturulan her geçen gün değişen standart steril kodlamayla için 2-3 hafta, hücreleri korumak.</li>
	<li>Transfected 1 x 106 hücreler/100 µL fosfat tamponlu tuz (PBS) in vitro luciferase faaliyette luciferase substrat, D-biyoluminesans ekleyerek onaylamak (150 µg/mL çalışma çözüm prewarmed kültür ortamında) ve ölçme bir tüp veya luminometer6kullanarak 96-şey plaka hücrelerde biyolüminesans.</li>
</ol>2. Orthotopic Xenograft modeli
<ol><li>NOG fareler (4-6 hafta yaşlı, erkek veya kadın) bir uygun hayvan bakımı tesiste steril/patojen-Alerjik koşullarda korumak.</li>
	<li>8226 LUC transfected hücreleri denemenin gün NOG fareler (~ 5 x 106 hücreler/fare) içine IV enjeksiyon için hazır olun. 3 hücreleri yıkama x buz gibi PBS, onları saymak ve onları buz gibi PBS (eksi antibiyotik ve FBS) içinde 5 x 106 hücreler/200 µL PBS, son bir konsantrasyon resuspend) steril bir test tüpü içinde. Hücreler buz tutmak ve en kısa zamanda (içinde 30-120 dk) fareler zor.</li>
	<li>Fare (ile isoflurane, % 0,5 - 1 L/dak, havada % 1-3) anestezi ve hayvan uzakta karşı karşıya kafa ile bir Isıtma yastık üzerinde sırtüstü pozisyonda yerleştirin. Anesthetization ayak parmak pinching tarafından kontrol. Oftalmik merhem gözler için geçerlidir.</li>
	<li>1 mL insülin şırınga ve 26-G iğne kullanarak 8226-LUC hücrelere fare kuyruğu ven (200 µL/enjeksiyon) yoluyla enjekte. Not: A ısı lamba böylece damar genişletici ve enjeksiyonları etkinliği artan kuyruk ısıtmak için kullanılabilir.</li>
	<li>Hayvan ev onların kafes dönmek ve onlar tamamen iyileşti kadar hayvanları izlemek.</li>
	<li>Engraftment fare iskelet 8226-LUC hücrelerinin (aşağıda açıklanan ve Şekil 1Aile gösterilen) imzalat farelerde BLI ölçerek onaylayın. Not: BM exudates da insan CD45 ifade akış sitometresi (Şekil 1B) kullanarak veya hasat kemik (Şekil 1 c) immünhistokimya boyanabilen.</li>
</ol>3. BLI Vivo içinde ölçümü
Not: Genellikle, ölçülebilir BLI farelerde engrafted tümör gelen ilk 10-20 gün postchallenge arasında görülebilir ancak bu deneysel olarak belirlenecek gerekebilir.
<ol><li>Fare (ile isoflurane, % 0,5 - 1 L/dak, havada % 1-3) anestezi ve ayak parmak pinching tarafından anesthetization düzeyini kontrol edin. Oftalmik merhem gözleri için geçerlidir.</li>
	<li>Hayvan bir IP (200 µL/enjeksiyon), iğne "in vivo-sınıf" D-biyoluminesans substrat (30 mg/mL steril serum fizyolojik içinde seyreltilmiş).</li>
	<li>(BLI etkinlik observable için 45-60 dakikaya kadar farelerde olmasına rağmen) biyoluminesans substrat enjeksiyon takip BLI 5-10 dakika içinde ölçmek, küçük hayvan görüntüleme sistemi (Şekil 2 sırtüstü pozisyonda imzalat hayvan yerleştirerek ). Işıksaçan ve x-ışını analiz seçin ve görüntüleri (Şekil 3).<ol>
<li>Faiz (ROIs) düşsel bilgisayar yazılımı (Şekil 4) kullanarak seçili bölgelerinde ortalama parlaklık (fotonlar/s/cm2/steradian) ölçmek.</li>
		<li>Hayvan ev onun kafes dönmek ve tam olarak (yaklaşık 15-20 dk) kurtarıldı kadar izlemek.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. fare hedefe yönelik tedavi ile tedavi
<ol><li>Temel BLI ölçmek ve hayvanları tedavi gruplara (4-8 fareler/grup) rastgele.</li>
	<li>Fareyi kullanarak beş günlük IP enjeksiyonları dinlenme ve ek beş günlük enjeksiyonları11tarafından 2 gün takip ettim bir rejimi temsirolimus (0.2 - 40 mg/kg fare) bir IP enjeksiyon (200 µL/enjeksiyon) ile tedavi.</li>
	<li>Luciferase aktivite (fotonlar/s/cm2/steradian) ölçmek Bölüm 3 ve arsa BLI değişim zaman içinde açıklandığı gibi haftada 2 x. Tümör değişimler BLI fareler (Şekil 5B) seri görüntü olarak sunulabilir. Not: Aşağıdaki belirtilerle (genellikle 45-60 gün içinde ilk Challenge) mevcut kadar günlük hayvanların izleme gerçekleştirilmesi önerilir: kilo kaybı (ağırlık implantasyon öncesinde göre % 10'den fazla kayıp) ve/veya hind Kol felci, hangi zamanda servikal çıkığı tarafından takip CO2 odası kullanarak onlar euthanized.</li>
</ol>5. PET/BT Analizi 18F-FDG ölçmek tümör metabolizmasında değiştirir.
<ol><li>Ev onların kafes hayvanlarda onların yiyecek için 24 saat önce 18F-FDG aşırı non-spesifik alımını önlemek için deney kaldırarak hızlı.</li>
	<li>18FDG PET F radiolabeled sondalar (50-100 steril serum fizyolojik içinde µCi/enjeksiyon) deneme günü hazır olun. Saat ve 18F-FDG soruşturma faaliyetleri ile bir doz Kalibratör kaydedin. Not: 18F nispeten kısa yarılanma (~ 2 h) olduğundan, dikkatli bir hazırlık ve planlama Bu sondalar kullanım için oluşturulmalıdır.</li>
	<li>Hayvanla (isoflurane, % 0,5 - 1 L/dak, havada % 1-3) anestezi ve uzağa bakan kafa ile bir Isıtma yastık üzerinde sırtüstü pozisyonda yerleştirin. Anesthetization ayak parmak pinching tarafından kontrol. Oftalmik merhem gözleri için geçerlidir.</li>
	<li>Sonda ile korumalı 1 mL insülin şırınga ve 26-G iğne kullanarak kuyruk ven (100 µL/enjeksiyon) enjekte. Not: A ısı lamba böylece damar genişletici ve enjeksiyonları etkinliği artan kuyruk ısıtmak için kullanılabilir.</li>
	<li>İğne/şırıngada bir doz Kalibratör kalan radyoaktivite ölçmek ve etkinlik ve zamanı not edin. Not: Fare kuluçka, doz ve zamanlama standardizasyon veri tekrarlanabilirlik ve karşılaştırılabilir sağlamak için önemlidir.</li>
	<li>Anestezi altında ve sonda alımı (~ 45-90 dk) bütün döneminde bir ısıtma yastığını kullanarak 37 ° C'de fareler korumak. Not: Fareler durgun ve 37 ° C de sonda non-spesifik alımını önlemek için kalır önemlidir.</li>
	<li>Aralıklarla benzer etiketleme kez farelerde sağlamak için yaklaşık 20 - 30 dk 18F-FDG sonda enjeksiyonlari bocalama. Not: Uygun iş akışı ve sonda enjeksiyonları zamanlaması en uygun ve tekrarlanabilir görüntüleme koşullarında neden olur.</li>
	<li>18F-FDG etkinliği bir PET/CT küçük hayvan görüntüleme sistemi seçilen bölgelerde ilgi engrafted tümörler (Şekil 6) karşılık gelen ölçü birimi. Not: Başlangıçta, 10dk statik evde beslenen hayvan poz ve 2-min CT pozlama tavsiye edilir, ancak tam pozlama süreleri deneysel olarak belirlenecek gerekebilir.</li>
	<li>Hayvanlar için ev onların kafes dönmek ve onları tamamen iyileşti kadar izlemek. Arka plan seviyelere sonda bozunmaları ise 24 h için özel bir dönüş Oda farelerde ev. Not: 18F kısa yarılanma nedeniyle, taze bir sonda kullanarak birden çok ölçüleri haftada 2 x olarak sık sık yapılabilir.</li>
</ol>

<ol><li>Raab, M. S., Podar, K., Breitkreutz, I., Richardson, P. G., Anderson, K. C. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19541364">Multiple Myeloma.</a> The Lancet. 374 (9686), 324-339 (2009).</li>
<li>Galson, D. L., Silbermann, R., Roodman, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+Multiple+Myeloma+Bone+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22BoneKEy+Reports%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of Multiple Myeloma Bone Disease.</a> BoneKEy Reports. 1, 135(2012).</li>
<li>Anderson, K. C., Carrasco, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+of+Myeloma%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis of Myeloma.</a> Annual Review of Pathology. 6, 249-274 (2011).</li>
<li>Reagan, M. R., Rosen, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Navigating+the+Bone+Marrow+Niche%3A+Translational+Insights+and+Cancer-Driven+Dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Rheumatology%22%5BJournal%5D)">Navigating the Bone Marrow Niche: Translational Insights and Cancer-Driven Dysfunction.</a> Nature Reviews Rheumatology. 12 (3), 154-168 (2016).</li>
<li>Frost, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mammalian+Target+of+Rapamycin+Inhibitors+Induce+Tumor+Cell+Apoptosis+in+Vivo+Primarily+by+Inhibiting+Vegf+Expression+and+Angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Oncology%22%5BJournal%5D)">Mammalian Target of Rapamycin Inhibitors Induce Tumor Cell Apoptosis in Vivo Primarily by Inhibiting Vegf Expression and Angiogenesis.</a> Journal of Oncology. 2013, 897025(2013).</li>
<li>Mysore, V. S., Szablowski, J., Dervan, P. B., Frost, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+DNA-Binding+Molecule+Targeting+the+Adaptive+Hypoxic+Response+in+Multiple+Myeloma+Has+Potent+Antitumor+Activity%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">A DNA-Binding Molecule Targeting the Adaptive Hypoxic Response in Multiple Myeloma Has Potent Antitumor Activity.</a> Molecular Cancer Research. 14 (3), 253-266 (2016).</li>
<li>Podar, K., Chauhan, D., Anderson, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone+Marrow+Microenvironment+and+the+Identification+of+New+Targets+for+Myeloma+Therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia%22%5BJournal%5D)">Bone Marrow Microenvironment and the Identification of New Targets for Myeloma Therapy.</a> Leukemia. 23 (1), 10-24 (2009).</li>
<li>Campbell, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laglambda-1%3A+A+Clinically+Relevant+Drug+Resistant+Human+Multiple+Myeloma+Tumor+Murine+Model+That+Enables+Rapid+Evaluation+of+Treatments+for+Multiple+Myeloma%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Oncology%22%5BJournal%5D)">Laglambda-1: A Clinically Relevant Drug Resistant Human Multiple Myeloma Tumor Murine Model That Enables Rapid Evaluation of Treatments for Multiple Myeloma.</a> International Journal of Oncology. 28 (6), 1409-1417 (2006).</li>
<li>Miyakawa, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+a+New+Model+of+Human+Multiple+Myeloma+Using+Nod%2FScid%2FGammac%28Null%29+%28Nog%29+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+and+Biophysical+Research+Communications%22%5BJournal%5D)">Establishment of a New Model of Human Multiple Myeloma Using Nod/Scid/Gammac(Null) (Nog) Mice.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 313 (2), 258-262 (2004).</li>
<li>Ito, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nod%2FScid%2FGamma%28C%29%28Null%29+Mouse%3A+An+Excellent+Recipient+Mouse+Model+for+Engraftment+of+Human+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Nod/Scid/Gamma(C)(Null) Mouse: An Excellent Recipient Mouse Model for Engraftment of Human Cells.</a> Blood. 100 (9), 3175-3182 (2002).</li>
<li>Frost, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+Vivo+Antitumor+Effects+of+the+Mtor+Inhibitor+Cci-779+against+Human+Multiple+Myeloma+Cells+in+a+Xenograft+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">In Vivo Antitumor Effects of the Mtor Inhibitor Cci-779 against Human Multiple Myeloma Cells in a Xenograft Model.</a> Blood. 104 (13), 4181-4187 (2004).</li>
<li>Asosingh, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+the+Hypoxic+Bone+Marrow+Microenvironment+in+5t2mm+Murine+Myeloma+Tumor+Progression%5BTitle%5D)+AND+%22Haematologica%22%5BJournal%5D)">Role of the Hypoxic Bone Marrow Microenvironment in 5t2mm Murine Myeloma Tumor Progression.</a> Haematologica. 90 (6), 810-817 (2005).</li>
<li>Storti, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoxia-Inducible+Factor+%28Hif%29-1alpha+Suppression+in+Myeloma+Cells+Blocks+Tumoral+Growth+in+Vivo+Inhibiting+Angiogenesis+and+Bone+Destruction%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia%22%5BJournal%5D)">Hypoxia-Inducible Factor (Hif)-1alpha Suppression in Myeloma Cells Blocks Tumoral Growth in Vivo Inhibiting Angiogenesis and Bone Destruction.</a> Leukemia. 27 (8), 1697-1706 (2013).</li>
<li>Fryer, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+a+Novel+Mouse+Model+of+Multiple+Myeloma+and+Its+Use+in+Preclinical+Therapeutic+Assessment%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Characterization of a Novel Mouse Model of Multiple Myeloma and Its Use in Preclinical Therapeutic Assessment.</a> PLoS One. 8 (2), e57641(2013).</li>
<li>Gould, S. J., Subramani, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Firefly+Luciferase+as+a+Tool+in+Molecular+and+Cell+Biology%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Firefly Luciferase as a Tool in Molecular and Cell Biology.</a> Analytical Biochemistry. 175 (1), 5-13 (1988).</li>
<li>Czernin, J., Phelps, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Positron+Emission+Tomography+Scanning%3A+Current+and+Future+Applications%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+Medicine%22%5BJournal%5D)">Positron Emission Tomography Scanning: Current and Future Applications.</a> Annual Review Medicine. 53, 89-112 (2002).</li>
<li>Pandey, M. K., Bhattacharyya, F., Belanger, A. P., Wang, S. Y., DeGrado, T. R. <a target="_blank" href="https://www.ahajournals.org/doi/abs/10.1161/circ.122.suppl_21.A12657">Pet Imaging of Fatty Acid Oxidation and Glucose Uptake in Heart and Skeletal Muscle of Rats: Effects of Cpt-1 Inhibition.</a> Circulation. 122 (21), (2010).</li>
<li>Wang, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+in+Vivo+Molecular+Imaging+Probe+%2818%29F-Annexin+B1+for+Apoptosis+Detection+by+Pet%2FCt%3A+Preparation+and+Preliminary+Evaluation%5BTitle%5D)+AND+%22Apoptosis%22%5BJournal%5D)">An in Vivo Molecular Imaging Probe (18)F-Annexin B1 for Apoptosis Detection by Pet/Ct: Preparation and Preliminary Evaluation.</a> Apoptosis. 18 (2), 238-247 (2013).</li>
</ol>

Yazar Kevin Francis Perkin-Elmer bir çalışandır.

Preklinik xenograft modelleri MM6,9,11,12,13çeşitli rağmen BM microenvironment içinde tümör/BM etkileşimleri çalışma yeteneği zor kalır 14. iskelet NOG farelerin 8226-LUC tümör hücrelerinin hızlı ve tekrarlanabilir engraftment için burada açıklanan teknikler sağlar.
Bu iletişim kuralı kritik adımlarda lucifer...

MM malign plazma B-hücreleri BM sızmak ve kemik yıkımı, anemi, böbrek bozukluğu ve enfeksiyon neden oluşur tedavisi olmayan bir hastalıktır. MM ve iskelet2dahil etmek için en sık kanser % 10 - % 15'tüm hematolojik maligniteler1 yapar. Oncogenic dönüşümün lenfoid doku germinal merkezleri sonunda BM3' e homing önce kurulan uzun ömürlü plazma hücrelerinin MM gelişimi kaynaklanmaktadır. BM tarafından son derece heterojen nişler karakterizedir; farklı ve kritik hücresel bileşenleri, düşük pO2 (hipoksi), geniş vaskülarizasyon, karmaşık ekstraselüler matrisler ve tüm bunlar MM tumorgenesis4' e katkıda bulunur, sitokin ve büyüme faktörü ağları da dahil olmak üzere. Böylece, kesinlikle BM engrafted tümörler ile karakterize Dissemine bir MM xenograft model geliştirilmesi MM patoloji vivo içinde5,6eğitim için çok güçlü ve klinik bir araç olacaktır. Ancak, çok sayıda teknik engellerin en xenograft modelleri, yapım onları uygulamak zor ve pahalı etkinliğini sınırlayabilirsiniz. Bu yetenek doğrudan gözlemlemek ve gerek kalmadan değişiklikleri tümör büyüme/hayatta kalma ölçmek için tutarlı ve tekrarlanabilir tümör engraftment tümör gelişimi ve sınırlamalar uzun bir zaman içinde BM niş ile ilgili sorunları içerir Fareler deney7,8ders sırasında kurban.
Bu iletişim kuralı başlangıçta Miyakawa vd tarafından geliştirilen bir değiştirilmiş xenograft modeli kullanır 9içinde bir intravenöz (IV) meydan okuma miyelom hücreleri ile sonuçlanır, "yaygın" tutarlı ve tekrarlanarak NOD/SCID/IL-2γ(null) BM (takoz) fareler10' engraft tümörler. Situ görselleştirme bu tümörlerin 8226 insan MM hücre kültürünü istikrarlı transfection LUC alleli ile elde edilir ve bu engrafted tümör hücreleri6tarafından üretilen seri olarak BLI değişimler ölçme. Önemlisi, bu model çeşitli diğer LUC ifade insan MM hücre satırları (Örneğin, U266 ve OPM2) yararlanmak için özellikle NOG fareler iskeleti engraft için benzer bir eğilimi ile genişletilebilir. Tümör yanında farelerin kollarındaki düşsel tanımlaması (örneğin 18F-FDG) proton probları PET/CT birlikte tarafından alımını ölçerek takip edilir, bu biyokimyasal ek karakterizasyonu kritik için sağlar yolları (yani, metabolizma, hipoksi değişimler ve Apoptozis indüksiyon) tümör/BM microenvironment içinde. Bu model büyük gücü radiolabeled, kollarındaki ve floresan problar ve MM ilerleme ve patoloji içinde vivoeğitim için kullanılan işaretleri geniş kullanılabilirlik tarafından vurgulanabilir.

<table><tbody><tr><td>8226 insan miyelom hücre hattı</td><td>ATCC</td><td>CCL-155</td><td></td></tr><tr><td>NOD. Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ Fareler (NOG)</td><td>Jackson Labs</td><td>5557</td><td></td></tr><tr><td>VivoGlo Luciferin substratı</td><td>Promega</td><td>P1041</td><td></td></tr><tr><td>Hypoxyprobe-1Kit</td><td></td><td>HPL HP1-100</td><td></td></tr><tr><td>PE-CD45 (klon H130)</td><td>BD Biosciences</td><td>555483</td> BM eksüda tavşan anti-insan CD45 (klon D3F8Q) içindeki <td>insan CD45+ tümör hücrelerini tanımlamak için akış sitometrisi için kullanılır</td></tr>.<tr><td></td><td> Teknoloji</td><td>70527</td><td>Eksize edilmiş kemiğin İmmünohistokimyası için kullanılan birincil antikor</td></tr><tr><td>Keçi Anti-tavşan IgG (HRP konjuge)</td><td>ABCAM</td><td>ab205718</td><td>Eksize edilen kemiğin İmmünohistokimyası için kullanılan İkincil antikor</td></tr><tr><td>Çift Lusiferaz Raportör Test Sistemi</td><td>Promega</td><td>E1910</td><td></td></tr><tr><td>pGL4.5 Lusiferaz Raportör Vektör</td><td>Promega</td><td>E1310</td><td></td></tr><tr><td>IVIS Lumina XRMS In Vivo Görüntüleme Sistemi</td><td>Perkin Elmer</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sofie G8 PET/CT Görüntüleme Sistemi</td><td>Perkin Elmer</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

multipl miyelom kemik iliği xenografts nog farelerde multimodal kollarındaki ve pozitronik emisyon tomografi/hesaplamalı tomografi görüntüleme

Multimodal Bioluminescent and Positronic-emission Tomography/Computational Tomography Imaging of Multiple Myeloma Bone Marrow Xenografts in NOG Mice

Multipl Miyelom (MM) tümörler kemik iliği (BM) engraft ve onların hayatta kalma ve ilerleme içinde bu microenvironment var karmaşık moleküler ve hücresel etkileşimlerin üzerine bağlıdır. Henüz BM microenvironment potansiyel olarak birçok vitro ve ex vivo deneysel model fizyolojik alaka sınırlayan kolayca çoğaltılmış vitro, olamaz. Hangi luciferase (LUC) xenograft modelinde kullanarak bu sorunları üstesinden gelebilir-transfected 8226 MM hücreleri özellikle fare iskeleti engraft. Bu fareler uygun substrat verildiğinde, D-biyoluminesans, tümör büyüme ve hayatta kalma tedavisinin etkileri tümörleri içinde vivotarafından üretilen kollarındaki görüntüleri (BLI) değişiklikleri ölçerek analiz edilebilir. Bu BLI veri metabolik işaretçisi 2 kullanarak pozitronik emisyon tomografi/Hesaplamalı tomografi (PET/CT) analizi ile kombine-deoksi - 2-(18F) fluoro-D-glukoz (18F-FDG) tümör metabolizma zaman içinde değişiklikleri izlemek için kullanılır. Tümör/BM microenvironment içinde birden çok invaziv olmayan ölçümler için görüntüleme bu platformlar sağlar.

Skuamöz MM tümörler kolayca edildi (% 100 başarı oranı) oluşan, ancak ilk pilot çalışmalarda 8226-LUC hücreleri IV enjeksiyonu NOD/SCID fareler içine BM-engrafted MM, geliştirmek tümörler değil. Buna ek olarak, IV zorluklar NOG fareler içine 8226 hücrelerle (15-25 gün içinde) tümör iskelet (ve karaciğer ve dalak gibi sigara-İskelet dokusunda tek nadiren oluşan tümörler) oluşturulur. Tümör iskelet içinde görsel olarak fiziksel olarak hayvanlar inceleyerek onaylanamadı beri başarılı tümör e...

Burada kollarındaki kullandığımız, x-ışını nasıl inhibe mTOR etkinlik çalışmaya ve pozitron emisyon tomografi/bilgisayarlı tomografi Imaging etkileri myeloma kemik iliği engrafted tümörler bir xenograft modeli. Bu myeloma kemik iliği engrafted tümör vivo içindehedefleme terapiler Anti-miyelom etkisini fizyolojik ilgili, non-invaziv ve multimodal analizleri için sağlar.

Multipl Miyelom kemik iliği Xenografts NOG farelerde Multimodal kollarındaki ve pozitronik emisyon tomografi/Hesaplamalı tomografi görüntüleme

Multiple myeloma (MM) tumors engraft in the bone marrow (BM) and their survival and progression are dependent upon complex molecular and cellular ...

Bu yöntem kemik iliği mikro-çevre nin rolü ve engrafted miyelom tümörlerinin sağkalımı ile ilgili anahtar soruları cevaplamak için kullanılabilir. Bu işlemin en büyük avantajı, uzunlamasına anti-ilaç çalışmalarına uygulanabilmekte ve birden fazla biyokimyasal yolu invaziv olmayan bir şekilde tarayıp kullanabilmektedir. Deney günü ilk 8226 Luciferase transfacted hücreleri üç kez buz gibi PBS 200 RCF beş dakika için santimetreve taze buz soğuk PBS içinde pelet resuspend on beş kez altı hücreleri fare başına 200 mikrolitre buz soğuk PBS başına altıncı hücrelere.Sonraki anestezi keşide dört ila altı haftalık NOG fare ayak çimdik yanıt eksikliği onaylamak ve hayvanın gözlerine oftalmik merhem uygulayın. Hücreleri 26 ölçü iğnesi ile donatılmış bir mililitrelik insülin şırıngasına yükleyin. Fareyi kafesine geri döndürmeden önce, tüm hücre hacmini hayvanın kuyruk damarına enjekte edin ve tamamen iyileşene kadar izleyin.On ila yirmi gün sonrası meydan okuma, steril tuzlu intraperitonealy in vivo grade D-luciferin substrat 200 mikrolitre ile her engrafted hayvan enjekte. Anestezili hayvanları enjeksiyondan sonraki 5 ila 10 dakika içinde küçük bir hayvan görüntüleme sistemine yerleştirin. İlg

multimodal-bioluminescent-positronic-emission-tomographycomputational

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kanser Araştırmaları

Lusiferaz modifiye insan beyin tümörü xenografts atimik farelerde tümör büyümesi ve biyoparlaklık görüntüleme kullanarak tedaviye yanıt daha sonraki izleme ile intrakranyal kurulmuş olabilir. Sağkalım analizi ile birlikte, biyoparlaklık izleme, beyin tümörlerinin tedavisi için düşünülen tedavilerin klinik öncesi test için önemli bir araştırma aracı.

Biyoparlaklık Görüntüleme kullanarak Tümör Büyüme ve Terapi yanıt sonraki Analizi ile İntrakranial Beyin Tümörü Xenografts kurulması

Kemik metastazı deneysel bir fare modeli lusiferaz meme tümör hücreleri ifade intrakardiyak teslim edildikten sonra kurulmuştur. Biyoparlaklık ve mikro BT görüntüleme ile tümör gelişimi ve osteolitik lezyon sonuçlandı boyuna takip edildi.

Biyoparlaklık ve Micro CT Görüntüleme Tümör Metastazlari ve osteolitik Lezyonlar İzleme

Hipoksi indüklenebilir faktör-1α aktivite Biyoparlaklık görüntüleme, bir meme kanseri beyin metastazı fare modeli intrakranial tümör hipoksi gelişimini izlemek için uygulanır.

Meme Kanseri Beyin metastaz tümör Hipoksi Dynamics in vivo Biyoparlaklık Görüntüleme Fare Modeli

Diffüz floresans tomografi preklinik için yüksek boyunca nispeten düşük maliyetli ve potansiyel bir yaklaşım...

Kanser BİYOMARKÖRLERİN Yerelleştirme Küçük Hayvanlarda Bilgisayarlı Tomografi eşliğinde Zaman alanı Diffüz Floresans Tomografi

Biz çıplak farelerin ve sonraki seri beyinlerine insan glioblastoma multiforme hücrelerinin hassas, stereotaktik implantasyon için tümleşik bir yöntem...

Stereotaktik intrakranial implantasyon ve<em&gt; In vivo</emGlioblastoma Multiforme bir Mouse Model Sistemde Tümör Xenografts arasında&gt; Bioluminescent Görüntüleme

Bu videoda, fare modellerinde floresan protein etiketli glioblastoma ksenogreftlerinin in vivo görüntülenmesi için floresan moleküler tomografi veya FMT'yi açıklıyoruz. Teknik, anti-tümör terapötiklerinin moleküler düzeyde etkilerini aydınlatmak için yararlıdır.

Floresan Moleküler Tomografi: Fare Modelinde Floresan Protein Etiketli Glioblastoma Ksenogreftlerinin İn Vivo Görüntülenmesi İçin Bir Görüntüleme Tekniği

Kaynak: Clark, A.J., et al. Glioblastoma için İmmün Yetmezliği Olan Bir Hayvan Modelinin Biyolüminesans Görüntülemesi. J. Vis. Uzm. (2016)Bu video, tümör büyümesini non-invaziv olarak ölçmek için lusiferaz eksprese eden tümör hücreleri ve lusiferin kullanarak, immün yetmezliği olan bir fare modelinde glioblastoma ilerlemesini izlemek için biyolüminesans görüntülemeyi göstermektedir.

Glioblastoma için İmmünkompetan Bir Fare Modelinin Biyolüminesans Görüntülemesi

Otolog ve allojenik kemik greft implantasyonu önemli kraniofasial kemik kaybını tedavi yaklaşımları kabul teşkil. Oysa neovaskülarizasyon, hücre farklılaşması ve kemik oluşumu arasındaki etkileşime greft bileşiminin etkisi belirsizdir. Biz greft yakınlık anjiyogenez-osteogenesis bağımlılığın aydınlatmak için amaçlandığı multimodal görüntüleme protokol mevcut.

Bilgisayarlı Tomografi ve Osteogenezi-anjiyogenez bağlamalar Optik Görüntüleme Kranial Kemik Otogreftlerin ve allogreft Entegrasyon değerlendirmek için

Burada, biyolojik ilgili sitelerdeki kanser için güvenilir preklinik modelleri oluşturmak için bir protokol ultrason destekli enjeksiyon Nöroblastom (NB) ve Ewing sarkomu (ES) hücre yararlanmak için (hücre satırları ve hasta kaynaklı tümör hücreleri kurulu) mevcut araştırma.

Ultrason kullanımı doku Yönetmen: hücresel implantasyon biyolojik ilgili metastatik tümör Xenografts kurulması için güdümlü

Bu çalışma, yeşil floresan protein ve biyolüminesans sinyallerinin yanı sıra kantitatif moleküler algılama tekniğinin entegrasyonu ile tümör yüklemesini doğru bir şekilde değerlendirmek için gelişmiş bir protokol hazırlaştır.

Ortotopik Meme Kanseri Modeli Kullanarak Üçlü Negatif Meme Kanseri Eğitimi

İntravital mikroskopi bulgularının translasyonu, dokuya sığ derinlik penetrasyonu ile karşı karşıyadır. Burada, intravital mikroskopi bulgularının klinik translasyonunu potansiyel olarak kolaylaştıran, doğrudan uzamsal korelasyon için intravital mikroskopi ve klinik olarak uygulanabilir görüntüleme modalitelerinin (örneğin, BT, MRI) birlikte kaydedilmesini sağlayan bir dorsal pencere odası fare modelini açıklıyoruz.

Translasyonel Kanser Araştırmalarında Kombine İntravital Mikroskopi ve Manyetik Rezonans Görüntüleme için Dorsal Deri Kıvrımlı Pencere Odası Tümör Fare Modeli

Keşfedin, mTOR inhibitörlerinin multipl miyelom tümörleri üzerindeki etkilerini NOG farelerinde kemik iliği ksenograft modeli kullanarak biyolüminesans ve PET/CT görüntüleme ile değerlendirmeyi.

Multipl Miyelom kemik iliği Xenografts NOG farelerde Multimodal kollarındaki ve pozitronik emisyon tomografi/Hesaplamalı tomografi görüntüleme (Video) | JoVE Journal

Multipl Miyelom kemik iliği Xenografts NOG farelerde Multimodal kollarındaki ve pozitronik emisyon tomografi/Hesaplamalı tomografi görüntüleme

Daha fazla video keşfet