Name: Antikanser antikor etkinliğinin Antineoplastic uyuşturucu tarafından kullanılmasının muhtemelen: antikor-uyuşturucu Synergism kombinasyon Dizin denklem kullanılarak tespiti (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-01-19T13:30:00.000+00:00
Duration: 15 min 4 s
Description: Öğrenin antikanser antikor ve antineoplastik ilaçlar arasındaki sinerjik etkileri Chou-Talalay kombinasyon indeksi denklemi kullanarak klinik öncesi modellerde nasıl değerlendireceğinizi. Bu yöntem kanser tedavisinde kombinasyon terapilerinin etkinliğini optimize etmeye yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Hibe desteği: Fondation de projesi de L 'Université de Nantes, les Bagouz' à Manon, La Ligue contre le kanser Comite de Loire-Atlantique, comité du Morbihan ve Comite de Vendée, une gül dökün S.A.R.A.H, L'Etoile de Martin ve la Société Française de Lutte contre les Kanser et les leucémies de L'Enfant et de L'adolescent (SFCE). M.B. ve J.F. La Ligue Contre Le kanser tarafından desteklenir. Yazarlar UTE tesisin yapısı Fédérative de Recherche François Bonamy, teşekkür ederim. Yazarlar onun teknik yardım almak için Ayrıca Dr. S. IMR5 hücreler sağlamak için Suzin (INSERM, Paris) ve Bayan H. Estéphan teşekkür ederiz.

Hayvan barınma ve deneysel bir işlem (anlaşmaları #C44-278 ve #APAFIS 03479.01) Fransız hükümeti tarafından kabul edildi. Hayvan bakımı ve yordamlar yönergesi AB 2010/63/AB ve Fransız hukuku altında #2013-118 bilimsel amaçlarla kullanılan hayvanların korunması üzerinde gerçekleştirilmiştir.
1. ilaç etkileşimi arasında mAb 8B6 ve Topotecan In Vitro değerlendirilmesi
<ol><li>96-şey numune hazırlama Dikkat: kurumun sağlık ve Güvenlik Komitesi danışmak ve laboratuvar emniyetle ilgili yerel yönetmelik kurallara uyun. Herhangi bir ortam, hücre hatları veya reaktifleri ile çalışmaya başlamadan önce malzeme ve güvenlik bilgi formu bilgileri gözden geçirin. Laminar akış mahallede iş ve uygun steril tekniği kullanabilirsiniz. Hücreleri işlemek için kullanılan tüm çözümleri/ekipman steril olmalıdır. Not: Aşağıdaki protokol yapışık hücreleri kullanılmak üzere tasarlanmıştır. Değişiklik nonadherent hücre süspansiyon büyüyen yöntemi uygulamak için gerekli; Bu protokol quadruplicate deneysel her koşul için kullanır.<ol>
<li>Bir T75 şişesi IMR5 hücreleri büyümek.</li>
		<li>İlk gün (gün 0), hücre confluency kontrol etmek için mikroskop altında hücre kültürü gözlemlemek. Şişeye hücre ortamından Aspire edin, fosfat tamponlu tuz çözeltisi (PBS) 5 mL ile yıkayın ve 3 mL %0,05 ethylenediaminetetraacetic asit (EDTA) eklemek / PBS çözüm. Şişeye kuluçka makinesi 3 dk (37 ° C, % 5 CO2) için geri dönün.</li>
		<li>Hücre kültürü hücre dekolmanı için mikroskop altında incelemek. Not: gerekirse, tümör hücre türüne bağlı olarak ek bir 3-5 dk da kuluçka şişeye dönün.</li>
		<li>Tam hücre orta 10 mL şişe için ekleyin ve hücre süspansiyon steril 15 mL konik tüp aktarın. Hücreler için 300 x gde 5 dk santrifüj kapasitesi. Bir hemasitometre kullanarak hücreleri saymak.</li>
		<li>Kaldırmak ve süpernatant atın. Hücre Pelet tam büyüme aracı olarak resuspend. 1 x 105 hücre/mL nihai bir konsantrasyon elde etmek için orta ses düzeyini ayarlayın.</li>
		<li>Hücre süspansiyon, 100 µL olan bir 96-şey kültür plaka 104 hücreleri her, ile tohum 84 kuyu. Şekil 2' de gösterilen deneysel düzen izleyin.</li>
		<li>Hücreleri hücre kuluçka (37 ° C, % 5 CO2) 18 h için kuluçkaya.</li>
	</ol></li>
	<li>Uyuşturucu eriyik hazırlığı Not: uyuşturucu/mAb Sensitizasyonu çalışmaları için zamanlama, uzunluğu ve belirli uyuşturucu/mAb söz konusu uyacak şekilde konsantrasyon tedavi değiştirin. İlk toplama 3 x son konsantrasyonu olduğunu unutmayın.<ol>
<li>Ertesi sabah (1. gün) tam büyüme orta kullanarak aşağıdaki uyuşturucu çözümleri hazırlayın.<ol>
<li>
mAb eriyik hazırlığı
			<ol>
<li>240 µg/mL mAb konsantrasyon ile bir antikor çalışma çözümü elde etmek için tam büyüme ortamının 500 µL mAb sulandırmak.</li>
				<li>Beş iki kat seri dilutions Şekil 2' de gösterildiği gibi gerçekleştirin.</li>
			</ol>
</li>
			<li>
Topotecan eriyik hazırlığı
			<ol>
<li>Seyreltik olarak yukarıda, 120 son bir konsantrasyon ile uyuşturucu çalışan bir çözüm elde etmek için tam büyüme ortamının 500 µL ilaç nM.</li>
				<li>Beş iki kat seri dilutions Şekil 2' de gösterildiği gibi gerçekleştirin.</li>
			</ol>
</li>
			<li>
Antikor ve uyuşturucu eriyik hazırlığı
			<ol>
<li>120 nM uyuşturucu ve 240 µg/mL mAb (çalışma çözüm) bir çözüm elde etmek için tam büyüme ortamının 500 µL uyuşturucu ve mAb çözümlerinde sulandırmak.</li>
				<li>Beş iki kat seri dilutions Şekil 2' de gösterildiği gibi gerçekleştirin.</li>
			</ol>
</li>
		</ol>
</li>
		<li>Son konsantrasyonu gelmesi, deneysel düzen ( Şekil 2) belirtildiği gibi ilgili kuyu, her ilaç çözümünün 50 µL aktarın. Not: tam büyüme ortamının 50 µL Şekil 2' de gösterildiği gibi işlenmemiş hücre kuyu aktarın.</li>
		<li>Kuluçka (37 ° C, % 5 CO2) 72 h için hücreleri kuluçkaya.</li>
	</ol></li>
	<li>MTT tahlil
	<ol>
<li>10 µL MTT reaktif çözüm her kuyunun içine ekleyin.</li>
		<li>4 h için 37 ° C'de kuluçkaya.</li>
		<li>Bir çok kanallı pipet kullanarak lysis çözüm (0.01 M HCl % 10 SDS) 100 µL her kuyunun içine ekleyin ve pipetting tarafından iyice karıştırın.</li>
		<li>4 h içinde oksijen odası (% 95 nem) için 37 ° C'de kuluçkaya.</li>
		<li>570 absorbans okumak nm (bir570) ve 620 nm (bir620) bir spektrofotometre kullanarak. Not: her örnek yeniden absorbans okumadan önce pipetting tarafından Mix; absorbans 620 nm spesifik olmayan arka plan değerleri düzeltme sağlar.</li>
		<li>Düzeltilmiş absorbans hesaplamak: absorbans düzeltilmiş bir570-620=.</li>
		<li>Hücre canlılığı aşağıdaki gibi hesaplar: hücre canlılığı = 100 x (ortalama düzeltilmiş absorbans örnek / ortalama düzeltilmiş absorbans kontrol).</li>
		<li>Aşağıdaki denklemi kullanarak kesir etkilenen değerleri (Fa) hesaplamak: 1 - (ortalama düzeltilmiş absorbans örnek / ortalama düzeltilmiş absorbans kontrol).</li>
	</ol></li>
	<li>İlaç etkileşimi analitik simülasyon yazılımı tek ve ilaç kombinasyonu araştırmaları
	<ol>
<li>Başlangıç penceresini açmak için simülasyon yazılımı çalıştırın.</li>
		<li>Ana penceresini açmak için Yeni bir deneme düğmesini tıklatın.</li>
		<li>Deney adı penceresinde yazın. Not: Bir tarih tarihi penceresinde eklenebilir.</li>
		<li>Yeni tek ilaç butonuna tıklayın.</li>
		<li>Adı Ve soyadı penceresinde yazın.</li>
		<li>Kısaltmayı Abbrev penceresinde yazın.</li>
		<li>İlaç konsantrasyonu birimi birimleri penceresinde yazın.</li>
		<li>Veri noktası 1 doz ve SK değeri, Entertuşuna basın girin.</li>
		<li>Tüm veri noktalarını girilen kadar bu adımı yineleyin.</li>
		<li>Tamamlandı butonuna tıklayın.</li>
		<li>MAb veri noktaları girmek için aynı adımları izleyin. Not: uyuşturucu tarafından kullanılanla aynı toplama ünitesi kullanın.</li>
		<li>Yeni uyuşturucu açılan butonuna tıklayın.</li>
		<li>Uyuşturucu ve mAbseçin.</li>
		<li>Sabit oranını seçin ve Tamam' ı tıklatın.</li>
		<li>Adı Ve soyadı penceresinde yazın.</li>
		<li>Kısaltmayı Abbrev penceresinde yazın.</li>
		<li>Uyuşturucu/mAb oranı oranı penceresinde yazın.</li>
		<li>Veri noktası 1 doz girin ve Entertuşuna basın. Not: Program mAb ve açılan doz otomatik olarak hesaplar.</li>
		<li>Veri noktası 1 SK değerini girin ve Entertuşuna basın.</li>
		<li>Tüm veri noktalarını girilen kadar bu adımı yineleyin.</li>
		<li>Tamamlandı düğmesini ve ardından Rapor oluştur düğmesini tıklayın.</li>
		<li>Uyuşturucu ve mAb seçin ve sonra Tamam' ı tıklatın.</li>
		<li>Açılan seçin ve sonra Tamam' ı tıklatın.</li>
		<li>Üstbilgi, CI tablosuve Özet Tabloseçin. O zaman, Tamam' ı tıklatın.</li>
		<li>Analiz dosyasının dosya adını ve raporu oluşturmak için Kaydet ' i tıklatın. Not: OKtıkladıktan sonra rapor otomatik olarak bilgisayarın varsayılan web tarayıcınızda açılır.</li>
		<li>Raporu yazdırmak için Yazdır web tarayıcının Dosya menüsünden seçin. Rapor Başlık, tarih, dosya adı, açıklama Not, parametreleri (m, Dm ve r), ED50 tedavinin veya kombinasyonu ve CI tablo ED50, ED her birleşimi için kullanılan her iki aracı içeren bir Özet Tablo bölümü içerir 75, ED90ve ED95. Not: CI değeri < 1 gösterir synergism, CI değeri = 1 gösterir additivity ve CI değeri > 1 husumet gösterir.</li>
	</ol></li>
</ol>2. insan Nöroblastom Xenografts Nonobese diyabetik NOD Scid Gamma farelerde (NSG fareler) nesil
Not: hücre kültürü herhangi bir kirlenme hariç. Membran matris bir jel 5 ° C üzerindeki formlar, Bütün cultureware veya membran matris reaktif temas geliyor medya prechilled/buz-soğuk olmalıdır. Membran matris buz üzerinde tüm işlemi sırasında tutmak.
<ol><li>
IMR5 hücre süspansiyon hazırlanması
	<ol>
<li>Membran matris reaktif gecede kullanmadan önce 4 ° C buzdolabında buz şişede batış tarafından çözülme.</li>
		<li>0 gün, kültürlü IMR5 hücreler yukarıda ayrıntılı olarak hasat.</li>
		<li>Hücreleri bir 15 mL konik tüp ve 5 min için 300 x g , santrifüj aktarın.</li>
		<li>Süpernatant atmak. Hücreler 2 yıkama x ile buz gibi PBS, 15 mL ve 5 x 107 hücre/mL buz gibi PBS bir hücre süspansiyon hazırlamak. Not: gerekirse, hücre süspansiyon 1.5 mL microcentrifuge tüp aktarın.</li>
		<li>Membran matris şişe girdap. Not: Membran matris reaktif çözdürülen ve dağınık.</li>
		<li>Bir membran matris reaktif hacmi ve hücre süspansiyon 2, 5 x 107 hücreleri /mL elde etmek için pipetting karıştırın.</li>
		<li>Hücre süspansiyon buz üzerinde tutun.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Fareler hazırlanması Not: Altı-yedi hafta yaşlı fareler olmalıdır.<ol>
<li>Fareler altında belirli bir patojen bırakma durumu korumak.</li>
		<li>Fareler geldikten sonra bir üç - beş günlük iklimlendirme süre izin.</li>
		<li>Enjeksiyonu nerede olacak kanadını aşı günü, tıraş (2.3.6 bkz. adım).</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Tümör hücre enjeksiyon hazırlanması Not: buz gibi membran matris hücre süspansiyon aseptik prosedürü boyunca devam et.<ol>
<li>Hücreleri karıştırın ve dikkatle 21 G iğne ile monte edilmiş bir 1 mL şırınga içine hücre süspansiyon çizin.</li>
		<li>Emin olmak için şırıngada hava hava kabarcığı yok olduğundan emin olun.</li>
		<li>Fare antiseptik bir çözüm ile aşı alanı dezenfekte.</li>
		<li>Yavaşça fare cilt parmaklar, enjeksiyon yerinde arasında kanatta sıkmak.</li>
		<li>İğneyi tam olarak cilt kapağı içine yerleştirin. İğne koymayın içine derin doku Subkutan Enjeksiyon emin olmak için.</li>
		<li>IMR5 hücre süspansiyon (yani, 2. 5 x 106 hücreler), 100 µL Subkutan Fareler alt sağ kanat enjekte.</li>
		<li>Kaçağı önlemek ve iğne çekmek için şırınga döndürün.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Vücut ağırlığı değişiklikler ve tümör büyüme izleme
	<ol>
<li>Uzunluğu (A) ve (B) bir kumpas ile tümör genişliği ölçmek.</li>
		<li>Tümör birimin 0.5 x (A x B2) formülü kullanarak hesaplar.</li>
		<li>Tümör ~ 50-60 mm3ortalama hacmi ulaştığında tedavi başlatmak.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. ilaç ve antikor yönetim farelerde
<ol><li>
İntravenöz mAb 8B6 İdaresi
	<ol>
<li>Dikkatle mAb çözüm ile 25 G iğne ile monte 1 mL şırıngaya doldur.</li>
		<li>A ısı lamba kuyruk ven genişletmek 10 dakika altında fareyi getirin.</li>
		<li>Bir kemirgen restrainer fare dizginlemek.</li>
		<li>Fare antiseptik bir çözüm ile aşı alanı dezenfekte.</li>
		<li>İğneyi paralel olarak kuyruk ven, delici 2-4 mm iğne yüzünü yukarı doğru eğimi (Şekil 3A) tutarken lümen içine yerleştirin.</li>
		<li>100 µL antikor Çözüm intravenöz enjekte (IV).</li>
		<li>Enjeksiyon sona erdiğinde, yavaşça kanama önlemek için enjeksiyon yeri basınç.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Topotecan, mayi yönetimi
	<ol>
<li>25 G iğne ile monte edilmiş bir 1 mL şırınga uyuşturucu çözüm çizmek.</li>
		<li>Fare ile posterior sona biraz yüksek bir sırtüstü pozisyonda tutun.</li>
		<li>Fare antiseptik bir çözüm ile aşı alanı dezenfekte.</li>
		<li>Fare karın orta hat bulun ve zihinsel karın bölgeleri bölmek. Enjeksiyon yeri sağ veya sol alt çeyreğinde (Şekil 3B) bulun.</li>
		<li>İğneyi karın (5 mm derin) sağ veya sol alt kadranda ~ 10 ° açıyla yerleştirin.</li>
		<li>Uyuşturucu çözeltinin 100 µL intraperitoneally enjekte (IP).</li>
		<li>Aşı site dezenfekte.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Chou, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Theoretical+basis%2C+experimental+design%2C+and+computerized+simulation+of+synergism+and+antagonism+in+drug+combination+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacological+Reviews%22%5BJournal%5D)">Theoretical basis, experimental design, and computerized simulation of synergism and antagonism in drug combination studies.</a> Pharmacological Reviews. 58 (3), 621-681 (2006).</li>
<li>Bayat Mokhtari, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combination+therapy+in+combating+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Combination therapy in combating cancer.</a> Oncotarget. 8 (23), 38022-38043 (2017).</li>
<li>Zahreddine, H., Borden, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+and+insights+into+drug+resistance+in+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Mechanisms and insights into drug resistance in cancer.</a> Frontiers in Pharmacology. 4, 28(2013).</li>
<li>Martin, T. P., Baguley, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Re%3A+%22Postoperative+validation+of+bone-anchored+implants+in+the+single-sided+deafness+population.%22+Snapp+et+al.+Otol+Neurotol+2012%3A+33%3B291-6%5BTitle%5D)+AND+%22Otol+Neurotol%22%5BJournal%5D)">Re: "Postoperative validation of bone-anchored implants in the single-sided deafness population." Snapp et al. Otol Neurotol 2012: 33;291-6.</a> Otol Neurotol. 34 (4), 777-778 (2013).</li>
<li>Choi, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensitization+of+lung+cancer+cells+by+altered+dimerization+of+HSP27%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Sensitization of lung cancer cells by altered dimerization of HSP27.</a> Oncotarget. 8 (62), 105372-105382 (2017).</li>
<li>Weiner, L. M., Surana, R., Wang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monoclonal+antibodies%3A+versatile+platforms+for+cancer+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Immunology%22%5BJournal%5D)">Monoclonal antibodies: versatile platforms for cancer immunotherapy.</a> Nature Reviews Immunology. 10 (5), 317-327 (2010).</li>
<li>Mellor, J. D., Brown, M. P., Irving, H. R., Zalcberg, J. R., Dobrovic, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+critical+review+of+the+role+of+Fc+gamma+receptor+polymorphisms+in+the+response+to+monoclonal+antibodies+in+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Hematology+%26+Oncology%22%5BJournal%5D)">A critical review of the role of Fc gamma receptor polymorphisms in the response to monoclonal antibodies in cancer.</a> Journal of Hematology & Oncology. 6, 1(2013).</li>
<li>Kowalczyk, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+GD2-specific+14G2a+monoclonal+antibody+induces+apoptosis+and+enhances+cytotoxicity+of+chemotherapeutic+drugs+in+IMR-32+human+neuroblastoma+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Letters%22%5BJournal%5D)">The GD2-specific 14G2a monoclonal antibody induces apoptosis and enhances cytotoxicity of chemotherapeutic drugs in IMR-32 human neuroblastoma cells.</a> Cancer Letters. 281 (2), 171-182 (2009).</li>
<li>Retter, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+a+proapoptotic+antiganglioside+GM2+monoclonal+antibody+and+evaluation+of+its+therapeutic+effect+on+melanoma+and+small+cell+lung+carcinoma+xenografts%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Characterization of a proapoptotic antiganglioside GM2 monoclonal antibody and evaluation of its therapeutic effect on melanoma and small cell lung carcinoma xenografts.</a> Cancer Research. 65 (14), 6425-6434 (2005).</li>
<li>Nakamura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apoptosis+induction+of+human+lung+cancer+cell+line+in+multicellular+heterospheroids+with+humanized+antiganglioside+GM2+monoclonal+antibody%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Apoptosis induction of human lung cancer cell line in multicellular heterospheroids with humanized antiganglioside GM2 monoclonal antibody.</a> Cancer Research. 59 (20), 5323-5330 (1999).</li>
<li>Cochonneau, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+cycle+arrest+and+apoptosis+induced+by+O-acetyl-GD2-specific+monoclonal+antibody+8B6+inhibits+tumor+growth+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Letters%22%5BJournal%5D)">Cell cycle arrest and apoptosis induced by O-acetyl-GD2-specific monoclonal antibody 8B6 inhibits tumor growth in vitro and in vivo.</a> Cancer Letters. 333 (2), 194-204 (2013).</li>
<li>Chou, T. C., Martin, N. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aChou%2C+TC+%22CompuSyn+for+drug+combinations%3A+PC+software+and+user%E2%80%99s+guide%3A+a+computer+program+for+quantitation+of+synergism+and+antagonism+in+drug+combinations%2C+and+the+determination+of+IC50+and+ED50+and+LD50+values%22">CompuSyn for drug combinations: PC software and user’s guide: a computer program for quantitation of synergism and antagonism in drug combinations, and the determination of IC50 and ED50 and LD50 values</a>. , ComboSyn Inc. Paramus, NJ. (2005).</li>
<li>Alvarez-Rueda, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+monoclonal+antibody+to+O-acetyl-GD2+ganglioside+and+not+to+GD2+shows+potent+anti-tumor+activity+without+peripheral+nervous+system+cross-reactivity%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A monoclonal antibody to O-acetyl-GD2 ganglioside and not to GD2 shows potent anti-tumor activity without peripheral nervous system cross-reactivity.</a> PLoS One. 6 (9), e25220(2011).</li>
<li>Faraj, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroblastoma+chemotherapy+can+be+augmented+by+immunotargeting+O-acetyl-GD2+tumor-associated+ganglioside%5BTitle%5D)+AND+%22Oncoimmunology%22%5BJournal%5D)">Neuroblastoma chemotherapy can be augmented by immunotargeting O-acetyl-GD2 tumor-associated ganglioside.</a> Oncoimmunology. 7 (1), e1373232(2017).</li>
<li>Ishikawa, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+functional+human+blood+and+immune+systems+in+NOD%2FSCID%2FIL2+receptor+%7Bgamma%7D+chain%28null%29+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Development of functional human blood and immune systems in NOD/SCID/IL2 receptor {gamma} chain(null) mice.</a> Blood. 106 (5), 1565-1573 (2005).</li>
<li>Ullman-Cullere, M. H., Foltz, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Body+condition+scoring%3A+a+rapid+and+accurate+method+for+assessing+health+status+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animal+Science%22%5BJournal%5D)">Body condition scoring: a rapid and accurate method for assessing health status in mice.</a> Laboratory Animal Science. 49 (3), 319-323 (1999).</li>
<li>Teicher, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assays+for+in+vitro+and+in+vivo+synergy%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Assays for in vitro and in vivo synergy.</a> Methods in Molecular Medicine. 85, 297-321 (2003).</li>
<li>White, D. B., Slocum, H. K., Brun, Y., Wrzosek, C., Greco, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+nonlinear+mixture+response+surface+paradigm+for+the+study+of+synergism%3A+a+three+drug+example%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Drug+Metabolism%22%5BJournal%5D)">A new nonlinear mixture response surface paradigm for the study of synergism: a three drug example.</a> Current Drug Metabolism. 4 (5), 399-409 (2003).</li>
<li>Mosmann, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+colorimetric+assay+for+cellular+growth+and+survival%3A+application+to+proliferation+and+cytotoxicity+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunological+Methods%22%5BJournal%5D)">Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxicity assays.</a> Journal of Immunological Methods. 65 (1-2), 55-63 (1983).</li>
<li>Huyck, L., Ampe, C., Van Troys, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+XTT+cell+proliferation+assay+applied+to+cell+layers+embedded+in+three-dimensional+matrix%5BTitle%5D)+AND+%22Assay+and+Drug+Development+Technologies%22%5BJournal%5D)">The XTT cell proliferation assay applied to cell layers embedded in three-dimensional matrix.</a> Assay and Drug Development Technologies. 10 (4), 382-392 (2012).</li>
<li>Thompson, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synergy+of+topotecan+in+combination+with+vincristine+for+treatment+of+pediatric+solid+tumor+xenografts%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Synergy of topotecan in combination with vincristine for treatment of pediatric solid tumor xenografts.</a> Clinical Cancer Research. 5 (11), 3617-3631 (1999).</li>
<li>Tan, M., Fang, H. B., Tian, G. L., Houghton, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+design+and+sample+size+determination+for+testing+synergism+in+drug+combination+studies+based+on+uniform+measures%5BTitle%5D)+AND+%22Statistic+in+Medicine%22%5BJournal%5D)">Experimental design and sample size determination for testing synergism in drug combination studies based on uniform measures.</a> Statistic in Medicine. 22 (13), 2091-2100 (2003).</li>
<li>Tang, X. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Implications+of+EPHB6%2C+EFNB2%2C+and+EFNB3+expressions+in+human+neuroblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Proceding+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Implications of EPHB6, EFNB2, and EFNB3 expressions in human neuroblastoma.</a> Proceding of the National Academy of Sciences of the United States of America. 97 (20), 10936-10941 (2000).</li>
<li>Mehta, R. R., Graves, J. M., Hart, G. D., Shilkaitis, A., Das Gupta, T. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+and+metastasis+of+human+breast+carcinomas+with+Matrigel+in+athymic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Breast+Cancer+Research+and+Treatment%22%5BJournal%5D)">Growth and metastasis of human breast carcinomas with Matrigel in athymic mice.</a> Breast Cancer Research and Treatment. 25 (1), 65-71 (1993).</li>
<li>Mullen, P., Ritchie, A., Langdon, S. P., Miller, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+Matrigel+on+the+tumorigenicity+of+human+breast+and+ovarian+carcinoma+cell+lines%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Cancer%22%5BJournal%5D)">Effect of Matrigel on the tumorigenicity of human breast and ovarian carcinoma cell lines.</a> International Journal of Cancer. 67 (6), 816-820 (1996).</li>
<li>Feng, C., Tang, S., Wang, J., Liu, Y., Yang, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Topotecan+plus+cyclophosphamide+as+maintenance+chemotherapy+for+children+with+high-risk+neuroblastoma+in+complete+remission%3A+short-term+curative+effects+and+toxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Nan+Fang+Yi+Ke+Da+Xue+Xue+Bao%22%5BJournal%5D)">Topotecan plus cyclophosphamide as maintenance chemotherapy for children with high-risk neuroblastoma in complete remission: short-term curative effects and toxicity.</a> Nan Fang Yi Ke Da Xue Xue Bao. 33 (8), 1107-1110 (2013).</li>
<li>Cheung, N. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ganglioside+GD2+specific+monoclonal+antibody+3F8%3A+a+phase+I+study+in+patients+with+neuroblastoma+and+malignant+melanoma%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clininical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Ganglioside GD2 specific monoclonal antibody 3F8: a phase I study in patients with neuroblastoma and malignant melanoma.</a> Journal of Clininical Oncology. 5 (9), 1430-1440 (1987).</li>
<li>Nair, A. B., Jacob, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+practice+guide+for+dose+conversion+between+animals+and+human%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Basic+Clinical+Pharmacy%22%5BJournal%5D)">A simple practice guide for dose conversion between animals and human.</a> Journal of Basic Clinical Pharmacy. 7 (2), 27-31 (2016).</li>
<li>Dayde, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+burden+influences+exposure+and+response+to+rituximab%3A+pharmacokinetic-pharmacodynamic+modeling+using+a+syngeneic+bioluminescent+murine+model+expressing+human+CD20%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Tumor burden influences exposure and response to rituximab: pharmacokinetic-pharmacodynamic modeling using a syngeneic bioluminescent murine model expressing human CD20.</a> Blood. 113 (16), 3765-3772 (2009).</li>
<li>Racki, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NOD-scid+IL2rgamma%28null%29+mouse+model+of+human+skin+transplantation+and+allograft+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">NOD-scid IL2rgamma(null) mouse model of human skin transplantation and allograft rejection.</a> Transplantation. 89 (5), 527-536 (2010).</li>
<li>Sherif, A., Winerdal, M., Winqvist, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+Responses+to+Neoadjuvant+Chemotherapy+in+Muscle+Invasive+Bladder+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Bladder+Cancer%22%5BJournal%5D)">Immune Responses to Neoadjuvant Chemotherapy in Muscle Invasive Bladder Cancer.</a> Bladder Cancer. 4 (1), 1-7 (2018).</li>
</ol>

S.Fa., J.F. ve SB anti-O-asetil-GD2 terapötik antikorlar klinik uygulama kapsayan patent bekleyen mucitler olarak atanır.

İlaç etkileşimleri etkisini tahmin etmek için üç yöntem kullanılabilir:1isobologram metodoloji17, doğrusal olmayan karışımı modeli18ve kasanın içindekiler. Uygulama kullanıcı dostu bilgisayar programı kullanılabilirlik tarafından Basitleştirilmiş kombinasyonu Dizin analiz en sık kullanılır. Bu amaçla, ilk doz-etki tepki bir ÇMT tahlil19gerçekleştirerek tek başına veya birlikte, kullanılan her aracısının karakterize. Bu metodol...

Çok sayıda farklı kanser tedavisinde geleneksel yaklaşım üzerinde tedavinin dayanıyordu. Hala birçok durumda kullanılır olsa bile, bu yöntem kombine tedaviler2için gözle ilgili için önde gelen çeşitli engeller tanıştım. Özellikle, kanser hücrelerinin alternatif hayatta kalma mekanizmaları3hastalar4terapötik başarısızlıkla sonuçlanan, inducing tarafından tek bir ilaç ile tedavi ederken direnç geliştirmek daha yatkındır. Ayrıca, tedavinin içinde uyuşturucu genellikle yüksek bir doz idare. Bu durum genellikle dayanılmaz ve doktorlar tedavi2durdurmak için kuvvet güçlü doz bağımlı yan etkileri oluşumu içinde sonuçlanır. Bu nedenlerden dolayı antikanser molekülleri şimdi birliğidir tedavinin için tercih etti.
İdeal uyuşturucu kombinasyonları Bu sinerji tümör hücreleri, normal hücrelere karşı artan toksisite olmadan karşı hareket olacaktır. Synergism tedavi edici etkiye ayrı ayrı hareket her bireysel uyuşturucu toplamından daha büyük üreten iki veya daha fazla ilaç etkileşimi gösterir. Bu tür etkileşimler geliştirilmiş klinik tedavi etkinliğinin2' de neden olabilir. Tedavi direnci sınırlar, etkinliğini artırır ve ayrıca toksisite2azaltabilir. Aslında, her ilaç dozu farklı yollar hedefleyerek yan etkileri azaltmak için azaltılabilir. Buna ek olarak, bir moleküller de kanser hücrelerinin karşı duyarlılığı bir ajan olarak hizmet edebilir. İkinci ilacın etkisi duyarlilasmis hücreleri üzerinde gelişmiş ve daha az dozlarda kullanılan5olabilir.
Kombine tedavi iki veya daha fazla kemoterapötik ilaçlar ve/veya monoklonal antikorlar6gibi destekte içerebilir. Bu mAbs özellikle faiz ve immünolojik yollar dahil antikor bağımlı sitotoksisite (CCDA), hücre-aracılı ile tümör hücreleri öldürmek mümkün olan bir hücre yüzey antijeni ifade hücreleri hedef hücreleri bağışıklık efektör katılımı ile 7ve tamamlayıcı bağımlı sitotoksisite (CDC)6. Onlar da üzerinden apoptosis8,9,10,11tarafından aracılı immünolojik olmayan bir mekanizma hareket edebilir. Bu durumda, indüksiyon işleminin programlı hücre ölümü kanser hücrelerinin duyarlı, işlevlerine zayıflatmak ve ilişkili kemoterapötik ilaç daha düşük bir doz daha verimli hale getirmek. Bu nedenle, proapoptotic mAb kombinasyonu rejimlerinin antineoplastic ilaçlarla tasarlamak için iyi adaylar bulunmaktadır.
Uyuşturucu synergism değerlendirmek için farklı matematiksel modeller tarif var; Bunlardan biri üzerinde birlikte Dizin Yöntem1temel alır. Bu yöntem Chou1tarafından geliştirilen medyan-etkisi ilkesine dayanır. Medyan-etkisi denklem uyuşturucu doz ve uyuşturucu etkisi aşağıdaki gibi karşılıklı olarak ilişkilendirir.
<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/58291/58291eq1.jpg">
D ilaç doz işte; DM medyan-etkisi doz ise; SK doz tarafından etkilenen kesir olduğunu; m 1doz-etki arsa şeklini belirten bir üstür. Medyan-etkisi doz doz Dx engeller ya da "x" yüzde hücre öldürür bir ilacın hesaplamak için kullanılır. CI değer o zaman1aşağıdaki gibi uyuşturucu kombinasyon katkı etkisini değerlendirmek için hesaplanır.
<img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/58291/58291eq2.jpg" style="font-size: 14px;">
Bir katkı etkisi ve CI değeri 1 CI değeri gösterir &lt; 1 CI değeri ise bir sinerjik etkisi gösterir &gt; 1 husumet1gösterir. Bu yöntemin uygulama daha fazla bir bilgisayar programı, CompuSyn, synergism ve düşmanlık tüm dozda belirleyen kullanılabilirliğini tarafından yönetilir veya etkisi düzeylerini otomatik olarak12simüle.
Bizim grup mAb 8B6 özel O-asetil-GD2 gangliosid (OAcGD2) Nöroblastom antijen13 için geliştirilmiş ve daha fazla bu mAb hücre ölümü apoptozis11özniteliklerle ikna etmek mümkün olduğunu gösterdi. MAb 8B6 antineoplastic Ajan topotecan hücrelere Nöroblastom duyarlı olup olmadığını sınamak için yukarıda belirtilen yöntem Chou1tarafından geliştirilen uyarlanmış. İlk olarak, mAb 8B6 ve topotecan etkili doz 50 (ED50) değerlerini belirleriz. Daha sonra equipotent oranları ED50 değerlere göre iki bileşiklerin Nöroblastom hücrelerle yukarıda belirtilen simülasyon yazılımı kullanarak CI değerlerini belirlemek için sunulur. Bu yöntem synergism mAb 8B6 ve topotecan içinde vitroarasında göstermek için bize izin verir. Sonra biz daha fazla etki gücüne ve bu kombinasyon rejimi içinde vivogüvenliğini değerlendirmek için bir protokol tanımlamak. Bu iletişim kuralı, güçlü ve güvenli antikanser mAb ve kemoterapötik ajan kombinasyonuna preklinik çalışmalarda seçmek için kolayca uygulanabilir. Bu çalışmada şematik gösterimi Şekil 1' de verilmiştir.

<table><tbody><tr><td>Hücre Proliferasyon kiti (MTT)</td><td>Roche</td><td>11-465-007-001</td><td></td></tr><tr><td>CompuSyn yazılımı</td><td>ComboSyn</td><td></td><td>Combosyn http://www.combosyn.com adresinden ücretsiz olarak indirilebilir</td></tr>. <tr><td>Elektrikli tıraş makinesi</td><td>Bioseb</td><td>BIO-1556</td><td></td></tr><tr><td>Fetal buzağı serumu</td><td>Eurobio</td><td>CVFSVFF00-01</td><td>RPMI 1640 Firefox'ta %10 ısıyla inaktive edilmiş fetal buzağı serumu</td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td>Mozilla Corporation</td><td></td><td>Firefox, http://www.mozilla.org/en-US/firefox/</td></tr> <tr><td>Heat lamp</td> Verre& adresinden ücretsiz olarak indirilebilir<td>. Kuvars</td><td>4003/1R</td><td></td></tr><tr><td>İnsan nöroblastomu IMR-5 hücre hattı</td><td>Accegen Biotechnology</td><td>ABC-TC0450</td><td>IMR-5, insan nöroblastom hücre hattı IMR32 5459762'nin bir klonudur. IMR-5 hücreleri, Dr. Santos Susin (U.872, Paris, Fransa)</td></tr> <tr><td>L-glutamin</td><td>Gibco</td><td>25030-024</td><td>2 mM tarafından RPMI 1640</td></tr><tr><td>Lizis çözeltisinde</td> cömertçe sağlandı;<td>Roche&nbsp;</td><td>11-465-007-001</td><td></td></tr><tr><td>mAb 8B6</td><td>Nantes Üniversitesi</td> N<td>/A</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>Corning</td><td>354248</td><td></td></tr><tr><td>Multiskan FC</td><td>Thermofischer Scientific&nbsp;</td><td>N08625</td><td></td></tr><tr><td>İğne 21G 1 & frak12; &nbsp;</td><td>BD Microlance</td><td>304432</td><td></td></tr><tr><td>İğne 25G 1</td><td>Terumo</td><td>NN-2525R</td><td></td></tr><tr><td>NSG fareleri</td><td>Charles River Laboratories</td><td>5557</td><td></td></tr><tr><td>Nunc MicroWell 96 kuyulu mikroplakalar</td><td>Thermofisher</td><td>167008</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>VWR</td><td>L182-10</td><td></td></tr><tr><td>PBS, %0,05 EDTA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E9884</td><td></td></tr><tr><td>çalışan PC windows 7</td><td>Microsoft</td><td></td><td>Windows 7 http://www.microsoft.com/en-gb/software-download/windows7 şu adresten satın alınabilir</td></tr>: <tr><td>Penisilin-Streptomisin</td><td>Gibco</td><td>15140-122</td><td>RPMI'de 100 birim / mL penisilin ve 100 mg / mL streptomisin 1640</td></tr><tr><td>Reaktif rezervuarı</td><td>Thermofischer Scientific</td><td>8094</td><td></td></tr><tr><td>Kemirgen tutucu</td><td>Bioseb</td><td>TV-150-SM</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640</td><td>Gibco</td><td>31870-025</td><td></td></tr><tr><td>Şırınga 1 mL</td><td>Henke Sass Wolf</td><td>5010.200V0</td><td></td></tr><tr><td>Topotecan</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T2705</td><td></td></tr></tbody></table>

antikanser antikor etkinliğinin antineoplastic uyuşturucu tarafından kullanılmasının muhtemelen: antikor-uyuşturucu synergism kombinasyon dizin denklem kullanılarak tespiti

Potentiation of Anticancer Antibody Efficacy by Antineoplastic Drugs: Detection of Antibody-drug Synergism Using the Combination Index Equation

Düşman monoklonal antikor (mAb) kemoterapötik ajanlar tarafından kullanılmasının muhtemelen kansere karşı etkili ve daha güvenli tedavi tasarlamak için değerli bir strateji kabul ettiğiniz anlamına gelir. Burada preklinik adım da rasyonel bir arada tanımlamak için bir protokol sağlar. İlk olarak, Chou ve Talalay1kombinasyonu Dizin denklemi kullanır synergism antikanser mAb ve sitotoksik ilaçlar arasında değerlendirmek için bir hücre tabanlı tahlil açıklar. Bu ölçüm, tümör hücre uyuşturucu ve antikor-kombinasyon dizin (CI) değerlerini hesaplamak için bir otomatik bilgisayar Analizi tarafından takip bir ÇMT tahlil kullanarak duyarlılığı içerir. CI değerlerini < 1 belirtmek synergism test mAbs ve sitotoksik ajanlar1arasında. Vitro bulgular vivoteyit için daha fazla kombinasyon rejimi etkinliğini xenograft tümör modelindeki değerlendirmek için bir yöntem açıklar. Bu modelde, kombine rejimi önemli ölçüde önemli bir genişletilmiş hayatta kalma tek ajan denetimleri ile karşılaştırıldığında sonuç tümör büyüme geciktirir. Önemlisi, in vivo deneyler kombinasyon rejimi iyi tolere edilir ortaya koymaktadır. Bu iletişim kuralı preklinik modelleri kombinasyonlarda antikanser ilaç etkili değerlendirilmesi ve klinik deneylere değerlendirmek için rasyonel birleşimini tanımlaması sağlar.

Temsilcisi sonuçları ve rakamlar daha önce yayımlanmış çalışma14izinle adapte olmuşlardır.
Anti-OAcGD2 mAb 8B6 sinerjik inhibitör etkileri Topotecan Nöroblastom hücre satırı büyüme geliştirir:
İlaç ve synergism topotecan ve mAb 8B6, uyuşturucu ve insan IMR5 Nöroblastom hücreleri ilk olarak ölçüldü bir ÇMT tahlil kullanarak antik...

Bu iletişim kuralı, antikanser bir antikor ve antineoplastic ilaçlar içinde Preklinik modelleri arasında synergism Chou ve Talalay birlikte Dizin denklemi kullanarak değerlendirmek açıklar.

Antikanser antikor etkinliğinin Antineoplastic uyuşturucu tarafından kullanılmasının muhtemelen: antikor-uyuşturucu Synergism kombinasyon Dizin denklem kullanılarak tespiti

Potentiation of hostile monoclonal antibodies (mAb) by chemotherapeutic agents constitutes a valuable strategy for designing effective and safer therapy ...

Kemoterapi ile birlikte immünoterapi kanserde etkili tedavi geliştirmek için yenilikçi bir yaklaşım temsil eder. Ana hedefleri sinerjik elde etmektir, terapötik etkileri, doz ve toksisite azaltma, ve en aza indirmek veya ilaç direnci indüksiyon geciktirmek için. Ancak, pratik ve etik nedenlerle, hastalarda sinerji belirlemek mümkün değildir. Bu nedenle, klinik çalışmalarda doğrudan kombinasyon öncesinde, Prenicaptor kombinasyon çalışmaları, in vitro, ve / veya hayvanlarda, klinik çalışmalar için mantığı elde etmek için yapılmalıdır. Uyuşturucular arasındaki sinerji ölçmek için basit bir sağlam yöntem, bu videoda gösterildiği gibi, Shouan Talale tarafından geliştirilen kombinasyon indeks denklemine dayanmaktadır. Bu yöntemi kullanarak, ve bilgisayarlı simülasyon, burada kanıt, Monoklonal Antikor arasındaki sinerji 8B6, Hangi O-Asetil-GD2 Ganglioside nöroblastom antijen ve nöroblastom hücreleri üzerinde kemoterapötik ilaç Topotecan için özeldir. Kısaca, insan IMO'daki her bir bileşiğin 50 değeri, 5 nöroblastom hücre hattının etkin dozu belirlendikten sonra, bu hücreler iki bileşiğin eşit oranları ile entübe edildi ve kombinasyon indeksi değerleri otomatik bilgisayar simülasyonu kullanılarak hesaplandı. Daha sonra bu sonuçları Vivo'da, Bir IMO,5 tümör knenograflı modelde doğruladık. IMR-5 hücrelerini Bir T75 şişesinde büyüttük, mikroskop altında gözlemledik, hücre birliğini kontrol etmek için. Şişeden hücre ortasını asperate, 5 mL PBS ile yıkayın. %0,05 EDTA/PBS çözeltisi 3 mL ekleyin. Şişeyi 3 dakika lığına kuvöze geri verin. Hücre ayırma için mikroskop altında hücre kültürünü inceleyin. Şişeye 10 mL'lik tam hücre lisi ekleyin ve hücre süspansiyonuna steril, 15 mL konik tüpe aktarın. Hemositometre kullanarak 300 g.Count hücrelerinde beş dakika santrifüj. Supernatant'ı çıkarın ve atın. Tam Büyüme Medium.Adjust 100, 000 hücreleri / mL.Seed 84 kuyu, 96 iyi kültür plaka 10, 000 hücreleri her, hücre süspansiyon 100 mikrolitre nihai konsantrasyon elde etmek için orta hacim ayarlayın hücreleri askıya alın. Hücre Incubator.Dilute monoklonal antikor içinde 18 saat boyunca inkübate hücreleri 500 mikrolitre Komple Büyüme Orta monoklonal antikor monoklonal bir çalışma çözümü elde etmek için bir monoklonal antikor konsantrasyonu ile bir antikor çalışma solüsyonu elde etmek için 240 mL.Perform 5 iki kat seri sanrılar protokolde belirtildiği gibi. Nihai konsantrasyon 120 nanomolar ile bir ilaç çalışma çözümü elde etmek için Komple Büyüme Orta 500 mikrolitre ilaç seyreltin. Protokolde belirtildiği gibi 5, iki kat seri sanrılar gerçekleştirin. İlacın artı monoklonal anibodies çözeltileri aynı şekilde seyreltin. Son konsantrasyona ulaşmak için, bu deneysel düzende gösterildiği gibi ilgili kuyularda her ilaç çözeltisinin 50 mikrolitre transfer. Hücreleri 72 saat kuluçkaya yatırın. Her kuyuya 10 mikrolitre MTT reaktif çözeltisi ekleyin. 4 saat boyunca 37 derecede kuluçkaya yat. Çok kanallı pipet kullanarak her kuyuya 100 mikrolitre liken çözeltisi ekleyin ve pipetleme ile iyice karıştırın. Nemlendirilmiş bir odada 4 saat boyunca 37 derecede kuluçkaya yat. Bir spektrofotometre kullanarak 570 ve 620 nanometre emiciler kurtulun. Hücrenin canlılığını aşağıdaki gibi hesaplayın. Aşağıdaki denklemi kullanarak etkilenen kesir değerlerini hesaplayın. Simülasyon yazılımı çalıştırın, ana pencereyi elde etmek için yeni deneme düğmesine tıklayın. Deneyin adını yazın. Yeni tek ilaç tıklayın. Adı yazın. Kısaltmayı yazın. İlaç toplama birimini yazın. Veri 1 doz ve FA değerini girin. Enter.Tüm veri noktaları girilene kadar bu adımı yineleyin' e basın. Bitti'yi tıklatın.Monoklonal antikor veri noktalarıgirmek için aynı adımları izleyin. Tıklayın Yeni İlaç Combo.Select ilaç ve monoklonal antikorlar. Sabit Oran'ı seçin.Tamam'ı tıklatın. Adı yazın. Kısaltmayı yazın. İlacın monoklonal antikor oranını yazın. Veri 1 doz girin. Enter.The program abasın otomatik olarak Monoklonal Antikor 8B6 ve açılan dozlarını hesaplar. Veri 1 FA değerini girin.Enter.Tüm veri noktaları girilene kadar bu adımı yineleyin' e basın. Tamamlandı.Sonra Raporu Oluştur'u tıklatın.İlaç ve monoklonal antikor seçin ve ardından Tamam'ı tıklatın. Combo'yu seçin ve ardından Tamam'ı tıklatın. Üstbilgi, CI Tablosu ve Özet Tablo'yu seçin ve ardından Tamam'ı tıklatın. Dosya adını ve çözümlemesi yazın ve raporu oluşturmak için kaydet'i tıklatın. Rapor, kişinin varsayılan web tarayıcısında otomatik olarak açılır. Rapor, başlık, tarih, son ad, açıklama notu, m, Dm ve r parametreleri, monoterapi veya kombinasyon olarak kullanılan ajan için etkili doz 50 ve etkili doz50, 75, 90 ve 95.A kombinasyon indeks değeri 1'den daha az olan kombinasyon indeks tablosunu içeren bir özet tablo bölümü içerir. Bir değer bir değere eşittir, katkıyı gösterir. 1'den büyük bir değer düşmanlığı gösterir. Kullanmadan önce 4 derece C buzdolabında buz şişebatırarak bir gecede çözülme bodrum membran matris. Tüm kültür giyim, ya da medya bodrum membran metrik ile temas eden önceden soğutulmuş olmalıdır. Hasat kültür IMR5. Hücreleri 15 mL konik tüpe ve santrifüje 300 g'da 5 dakika aktarın. Supernatant atın. Hücreleri 15 mL buz gibi PBS ile iki kez yıkayın. Buz gibi PBS'de mL başına 5 milyon hücre için bir hücre süspansiyonu hazırlayın. Hücre süspansiyonuna 1,5 mL mikrotüp aktarın. Döner bazik membran matris şişe. ML başına 2,5 milyon hücre hücre süspansiyon elde etmek için pipetleme ile karışık bodrum membran matris reaktifi 1 hacim ekleyin.Buz üzerinde hücre süspansiyon tutun. Enjeksiyonun yapılacağı yerin kanadını tıraş edin. Hücreleri karıştırın ve hücre süspansiyonuna 21 g iğneyle monte edilmiş 1 mL şırınganın içine dikkatlice çizin. Şırıngada hava kabarcığı olmadığından emin ol. Farelerin aşı alanını antiseptik bir solüsyonla dezenfekte edin. Yavaşça enjeksiyon yerinde parmakları arasında yan fare deri sıkmak. İğneyi tam olarak deri kıvrımına takın. Subkutan enjeksiyonu sigortalamak için iğneyi dokunun derinliklerine yerleştirmeyin. 100 mikrolitre IMR5 hücre süspansiyonuna deri altı enjekte edin. Sıvı yayılmasını önlemek için şırıngayı döndürün ve iğneyi geri çekin. Vücut ağırlığı ve tümör büyümesi için fareleri izleyin. Tümörün uzunluğunu ve genişliğini kalibre ile ölçün. Bu formülü kullanarak tümör hacmini hesaplayın. Tümörler ortalama 50-60 mm hacmine ulaştığında tedaviye başlayın

potentiation-anticancer-antibody-efficacy-antineoplastic-drugs

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kanser Araştırmaları

(1) hücre içi bakteriyel bir patojeni hedefleyen ökaryotik hücre penetran antimikrobiyalleri aynı anda tanımlamak ve (2) ökaryotik hücre sitotoksisitesini değerlendirmek için yüksek verimli, gerçek zamanlı bir test geliştirilmiştir. Daha sonra aynı teknolojideki bir varyasyon, kolay, yüksek çözünürlüklü, doz yanıtı ve iki ve üç boyutlu sinerji çalışmalarını mümkün kılmak için dijital dağıtım teknolojisi ile birleştirildi.

Yüksek Verimli, gerçek zamanlı, Hücre içi Antimikrobiyal Aktiviteleri Çift okuma Test ve Ökaryotik Hücre Sitotoksisite

Sinerjik uyuşturucu zor ve zaman alıcı ampirik olarak tanımlamak oluşur. Burada, belirlenmesi ve sinerjik küçük moleküller doğrulama yöntemi açıklanmaktadır.

Sinerjik uyuşturucu kombinasyonları örtüşme2 yöntemi tarafından yüksek üretilen iş tanımlaması

Bu protokol için Loewe additivity tabanlı ilaç etkileşimi ölçümleri yapmak ikili ve üçlü ilaç kombinasyonlarını anlatan.

Ölçü sinerji arasında pek çok uyuşturucu için köşegen yöntemi

Antimikrobiyal sinerji test birlikte kullanılan iki veya daha fazla antibiyotik etkisini değerlendirmek için kullanılır ve genellikle iki yöntemden birini kullanarak gerçekleştirilir: Dama Tahtası dizi ya da zaman-kill tahlil. Burada, otomatik bir, mürekkep püskürtmeli yazıcı destekli Dama Tahtası dizi sinerji teknik ve bir klasik saat-kill sinerji çalışma mevcut.

Antimikrobiyal sinerji mürekkep püskürtmeli yazıcı yoluyla tarafından test otomatik Dama Tahtası dizi ve el ile zaman-kill yöntem

Model organizmalarda büyük genetik ekranlar negatif genetik etkileşimlerin tanımlanmasına yol açmıştır. Burada, kanserde sentetik ölümcül etkileşimleri hedefleyen ilaç kombinasyonlarını tanımlamak için model organizmalardaki genetik ekranlardan elde edilen verileri kullanarak bir veri entegrasyonu iş akışını açıklıyoruz.

Sentetik Ölümcül Etkileşimleri Hedefleyen İlaç Kombinasyonlarını Tanımlamak için Veri Entegrasyonu İş Akışı

Kanser dokularına benzer ancak 96 kuyulu ve 384 kuyu plakalı in vitro yüksek verimli tahlil sistemleri için uygun olmayan, hasta kaynaklı tümör organoidleri (PDO) kullanan antikanser ilaçları değerlendirmek için son derece hassas bir in vitro yüksek verimli tahlil sistemi geliştirilmiştir.

Hasta Kaynaklı Tümör Organoidleri Kullanılarak Yüksek Verimli In Vitro Tahlil

Bu protokol, terapötik bir anti-HER-2 antikoru varlığında doğal öldürücü hücre aracılı meme kanseri hücresi öldürmeyi modüle eden bileşikleri tanımlamak için otomatik, görüntü tabanlı yüksek verimli bir teknik sunar.

Antikor Bağımlı Hücresel Sitotoksisiteyi Modifiye Eden Bileşiklerin Tanımlanması için Yüksek İçerikli Tarama Testi

Burada, antitümör antikorların önemli bir kanser hücresi öldürme mekanizması olan ADCC mekanizmasını modüle eden bileşikleri tanımlamak için bir yöntem sunuyoruz. NK hücrelerinin sitotoksik etkisi, Trastuzumab varlığında meme kanseri hücre sferoidlerinde ölçülür. Görüntü analizi, sferoidlerdeki canlı ve ölü öldürücü ve hedef hücreleri tanımlar.

Bir Tümör Sferoid Modelinde Antikora Bağımlı Hücresel Sitotoksisitenin Ölçülmesi: İlaç Keşfi Uygulaması

Burada, bir ADCC biyo-tahlil kiti kullanarak antikora bağımlı, hücre aracılı sitotoksisite (ADCC) testi için bir protokol sunuyoruz. Bu yöntem, ADCC mekanizmasını aydınlatmak ve kanser immünoterapisinde antikorların terapötik potansiyelini değerlendirmek için değerli bir araç sunmaktadır.

Antikora Bağımlı Hücre Aracılı Sitotoksisite Raportörü Biyotahlil Kullanılarak Kanser Hücrelerinde Antikora Bağımlı, Hücre Aracılı Sitotoksisitenin Değerlendirilmesi

Tümör ilerlemesini ve metastazı değerlendirmek için yeşil floresan protein eksprese eden pankreas kanseri hücrelerini (PANC-1 GFP) Ortotopik olarak Balb-c Ola Hsd-Fox1nu farelerinin pankreasına implante etmek için bir prosedür burada sunulmaktadır.

Pankreas Kanseri Floresan Ortotopik Fare Modeli

Öğrenin antikanser antikor ve antineoplastik ilaçlar arasındaki sinerjik etkileri Chou-Talalay kombinasyon indeksi denklemi kullanarak klinik öncesi modellerde nasıl değerlendireceğinizi. Bu yöntem kanser tedavisinde kombinasyon terapilerinin etkinliğini optimize etmeye yardımcı olur.

Antikanser antikor etkinliğinin Antineoplastic uyuşturucu tarafından kullanılmasının muhtemelen: antikor-uyuşturucu Synergism kombinasyon Dizin denklem kullanılarak tespiti (Video) | JoVE Journal

Antikanser antikor etkinliğinin Antineoplastic uyuşturucu tarafından kullanılmasının muhtemelen: antikor-uyuşturucu Synergism kombinasyon Dizin denklem kullanılarak tespiti

Daha fazla video keşfet