Name: Drosophila sıcaklık değişiklikler uzay ve zaman içinde performansını belirlemek için otomatik yöntemi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-10-12T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 52 s
Description: Öğrenin, Drosophila'nın sıcaklık değişimlerine otomatik yöntemle lokomotor performansını değerlendirmeyi. Programlanabilir sıcaklık kontrollü arena, genotip farklılıklarını ve duyusal uyarıcı etkileşimlerini hızla analiz etmenizi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu eser kısmen tarafından burs davranışsal ve bilişsel sinirbilim programı Groningen Üniversitesi ve Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología (CONACyT) Meksika, yüksek lisans burs verilen Andrea desteklenmiştir Soto Padilla ve Hedderik van Rijn ve Jean-Christophe Billeter saat çalışmanın John Templeton Vakfı Hibe. Biz de Peter Gerrit Bosma FlySteps ait diğer gelişmekte olan onun katılımı için müteşekkir vardır.
Komut dosyaları TemperaturePhases, FlySteps ve FlyStepAnalysis tamamlayıcı bilgiler olarak ve aşağıdaki geçici ve kamuya bağlantısında bulunabilir: https://dataverse.nl/privateurl.XHTML?Token=c70159ad-4D92-443D-8946-974140d2cb78

1. sinek gıda orta hazırlanması
<ol><li>Musluk suyu 1 litre 2 L cam kabı dökün ve bir manyetik heyecan çubuğu ekleyin. Kaynama sıcaklığı ulaşılana kadar kabı 300 ° c manyetik sıcak bir tabak koymak.</li>
	<li>Aşağıdakileri ekleyin ve karıştırın 500 mermi/dak: agar 10 g, 30 g glikoz, 15 g sükroz, 15 gr mısır unu, buğday tohumu 10 g, soya unu, 10 g, pekmez 30 g ve 35 g aktif Kuru Maya.</li>
	<li>Mix şiddetle köpükler, sıcak plaka sıcaklığı 120 ° c aşağı karıştırmaya devam ederken açmak.</li>
	<li>10 dakika sonra daha da aşağı 30 ° C sıcak plaka sıcaklığına çevirmek ve mix soğur 48 ° C'ye kadar karıştırmaya devam Sıcaklık kabı duvarları dokunmadan bir termometre doğrudan gıda ekleyerek ölçmek.</li>
	<li>P-hidroksi-benzoic asit metil ester 2 g 10 mL % 96 etanol dağıtılması ve 5 mL 1 M propiyonik asit de birlikte karışıma ekleyin. 3 dk karıştırmaya devam.</li>
	<li>Sıcak plaka devre dışı bırakmak ve yetiştirme şişeleri ve 6.5 mL Koleksiyonu şişeleri maması içine yiyecek 45 mL dökün.</li>
</ol>2. sinekler hazırlanması
<ol><li>Yer 20 erkek ve 20 erkek sinek gıda orta 45 mL içeren yetiştirme şişelerde uçar. Sinekler yeni şişeler için onları aşağı dokunarak ve sonra onları taze şişe dokunarak tarafından 3-4 gün sonra transfer. Sinekler sonra üç değişiklikleri atmak.<ol>
<li>25 ° c sabit sıcaklık ile 12 saat ışık/12-h karanlık devir altında kuluçka içinde şişe yerleştirin Not: Sinekler yeni nesil eclose 10 gün sonra olacak.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Yeni karbon dioksit yastıkları en fazla 4 dk eclosed sinek anestezi ve onları 2.5 x 9,5 cm sinek yetiştirme şişeleri bir fırça kullanarak sinek gıda orta 6.5 mL ile toplamak.<ol>
<li>Tek bakire sinekler toplamak veya seks tarafından şişe yetiştirme başına 20 Sineklerin Tanrısı gruplara ayırabilirsiniz.</li>
		<li>Şişeleri İnkübatörler içinde 5-7 gün, yeni tüpleri her 2-3 gün ve gün öncesine deneyler üzerinde sinekler yarayan için koyun.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. çerçeve ışık
<ol><li>10 cm uzunluğunda, 4 cm genişlik, 4 cm yükseklik ve 0,5 cm kalınlığında ahşap bir çerçeve yapmak.</li>
	<li>Her kısa kenarlarının, 4 cm uzunluğunda, 4 cm yükseklik ve iç doğru 1,5 cm Genişlik bir kenarlık oluşturmak ahşap çerçeve alanı. İç yüzünü sınır açık bırakın.</li>
	<li>İki delik 0.5 cm çapında bir ahşap çerçeve uzun kenarlarının kesişim ve her kısa kenarları sınırlarında.</li>
	<li>Sıcak beyaz LED şerit içinde her biri kısa kenarları sınırlarında yer 10 cm. Hemen yere yapıştırmak için LED şerit arkası kabuğu. Not: Hangi aydınlatma ihtiyaçlarını bertaraf edilmesi için sıcak beyaz LED şerit için kızılötesi LED yedek olabilir deneyler için şeritler.</li>
	<li>Anahtarlama güç kaynağı ve LED şerit ters sınır onun diğer ucunu kenarlarından birini içinde LED şerit bir ucunu bağlayın.</li>
	<li>Her iki LED şeritler açmanızı doğrulamak için anahtarlama güç kaynağı açın.</li>
	<li>Beyaz bir kağıt parçası ile her sınır açık yan kapağı.</li>
	<li>Her biri uzun kenarları iç aşamaları için başka bir parça tutkal.</li>
</ol>4. ısı kontrollü Arena
<ol><li>Isı kontrollü arena (Şekil 1A ve 1 C) açın. Fan çalışmaya başlar ve alüminyum halka ısınmaya başlar emin olun.</li>
	<li>Isı kontrollü arena sıcaklık sıralarıyla TemperaturePhases komut dosyası çalıştıran denetim bilgisayara bağlanmak için USB kablo kullanın.</li>
	<li>TemperaturePhases komut dosyası kontrol bilgisayarı açın ve sıcaklık sıra (Video 1) düzgün ayarlandığından emin olun.<ol>
<li>Deneysel her aşama süresi 60'a ayarlanır onay "par. doğrulayarak s StimulusDur"60'a eşit s.</li>
		<li>Sayı 1) eşit aşamaları, 2) yinelemeli ON/OFF gösterge kırmızı ışık yayan diyotlar (LED'ler), 3) 2 ° C sıcaklık artışı faz, başına up sayısı istenen ve başlangıç sıcaklığı 4) 16 ° C "Başlat altında olan deneysel hepsi doğru kontrol blok"bölümü. Not: uçar Fly yapay artış hızı ilk deneysel aşamaları (Şekil 2) sırasında önlemek için arenaya 7 dk. 16 ° c için alışmana izin.</li>
		<li>TemperaturePhases komut dosyasını çalıştırın. Yazılım 5 "arenada. belirlenen saniye başlatılır Bekleyin"ve sonra dur.</li>
		<li>Bir sinek sinek arenaya (adım 5.3) şişmiş bir kez deneysel aşamada yayınlamaya başlamak için klavyenin boşluk tuşuna basın. Not: TemperaturePhases kutuyu kontrol geçerli komut dosyasıdır; Ancak, farklı deneyler gereksinimleri için ayarlamak bu aygıtı kullanmak için diğer özel komut dosyaları oluşturma olanağı vardır.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Kameranın üst kısmında arena kameranın USB kablosunu kullanarak kayıt bilgisayara bağlayın.</li>
	<li>Video kayıt programı açın (bkz. Tablo reçetesi) seçerek kayıt bilgisayardaki "dosya | Yeni film yazmak". Kameranın görüntü gösteren bir ekran açılır.<ol>
<li>Kamera görüntüsü arena ve gösterge kırmızı LED bütün kenarları yakalar emin olun.</li>
		<li>Ekranın alt kenarı ışıklar çerçevesinde arena (adım 5,4) etrafında ayarlandıktan sonra kamera görüntü gösterilen ortasında kırmızı düğmeye basarak kaydı başlatın. Not: küçük değişiklikler aydınlatmada izleme doğruluğunu etkileyebilir. Bu ısı kontrollü arena aydınlatma cihazları konumunu düzelterek sabit tutmak için tavsiye edilir.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. sıcaklık Davranışsal deney
<ol><li>Uçmak Arena (Şekil 1 c) hazırlayın.<ol>
<li>Tüm kenarları kaplıdır sağlanması bakır fayans üstüne beyaz iletken teyp bir iplikçik yerleştirin.</li>
		<li>Yer bakır fayans çevresindeki ısıtmalı alüminyum halka. Her zaman aynı konumda yer alıyor böylece yüzük kenarına bakır fayans tam uydu.</li>
		<li>Cam kapak temiz bir mendil ile temiz ve hangi aracılığıyla bir sinek şişmiş içinde bir boşluk bırakarak Alüminyum Masa üstüne yerleştirin. Not: daha önce deneyler, kaygan bir yüzey oluşturmak için siliconizing aracı ile cam kapak kat. Siliconizing temsilci 24 h için başvurun ve kullanmadan önce su ile durulayın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>TemperaturePhases komut dosyası (adım 4.3.3) çalıştırın ve video kayıt programı (adım 4.5) açın.</li>
	<li>Anında bir yetiştirme flakon (adım 2.2.2) uçmak arenaya darbe (Örn., 1 erkek sinek Şekil 3' te).<ol>
<li>Kuluçka makinesi uçar bir şişe al, iki kez yukarıdan aşağıya doğru bir ağız aspiratör ile bir sinek yakalamak ve şişe kapatın ve kuluçka makinesi koy geri gitmek için zorlamak için dokunun.</li>
		<li>Cam kapak ve alüminyum ring (adım 5.1.3) arasında kalan Aralık ile arenada anında yerleştirin.</li>
		<li>Cam kapak ve alüminyum halka arasında sinek sinek arenaya tanıttı olarak alüminyum ring kenarına ulaşıncaya kadar cam kapak iterek kapatın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Simetrik aydınlatma sağlamak için bir yer ışıklar arena etrafında çerçeve.<ol>
<li>İşaretlemek (Örn., kalıcı bir kalem kullanarak) çerçeve ışık Fly çerçeve her zaman aynı konuma yerleştirilir emin olmak için Arena etrafında (Şekil 1 c).</li>
	</ol>
</li>
	<li>Video kayıt programı (adım 4.5.2) ile kayıt işlemini başlatmak ve deneysel aşamaları (adım 4.3.4) yayınlamaya başlamak için Denetim bilgisayar klavye üzerinde boşluk çubuğuna basın.</li>
	<li>Ne de olsa deneysel aşamaları .mp4 veya .avi formatında video kaydetmek yapılır ve ağız aspiratör ile uçmak Arena anında kaldırmak. Not: Deneysel aşama sonuna TemperaturePhases komut dosyası durdurma veya her iki gösterge kırmızı LED devre dışı tarafından belirlenebilir.<ol>
<li>Video kayıt programda ekranın alt kenarı ortasında Dur düğmesine basarak kaydı kes. Basın "dosya | Farklı Kaydet"video kaydetmek için.</li>
	</ol>
</li>
</ol>6. video izleme ve veri analizi
<ol><li>İzleme yazılımı (Video 2) FlySteps videoları izlemek için kullanın.<ol>
<li>"Configuration_file.ini" "FlyTracker" klasörünün içinde açın.</li>
		<li>"Video_folder" videoları konumunu ve belgili tanımlık video içinde "video_files" adını ayarlayın.</li>
		<li>"Arena_settings göre" Fly arenada sınırları belirtin (x, y) Arena kenarında birden çok nokta koordinatlarını piksel.</li>
		<li>Gösterge kırmızı LED "led_settings göre" olarak konumunu belirtin (x, y) LED'lerin merkezinin konumu koordinatlarını piksel.</li>
		<li>Uçmak Arena sınırları konumunu "debug" ayarlayarak "true" "arena_settings" "Kaydet"'i ve terminal komut dosyasını çalıştırma, iade edin. Ekran görüntüsü yakalama video "arena_settings" girilen koordinatlar oluşturduğu mavi kare ile gösterilir. Not: Bu kare izlenmesi gereken alanı çevreleyinceye.</li>
		<li>"Debug" "arena_settings" "false", "Kaydet" düğmesini tıklatın ve ekran terminalde bir kez daha çalıştırın. Not: Bu izleme işlemi başlar. Not: İzleme alanının üzerine ısıtılmış alüminyum halka dışında uçar yürüyerek ulaşabilirsiniz. Bu bir deney, hangi sonra sinek ısıtmalı yüzük dokunmayı kes ve izleme alanı içinde kalan ilk saniye sırasında olur. Not: Deneyci'nın tercihlerine göre diğer izleme yazılımlarıyla videolar izlenebilir.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Kullanım (x, y) faiz sıcaklık Performans ölçüsü hesaplamak için izleme yazılımı tarafından sağlanan her sinek konumunu. Özel komut dosyalarını (Örn., FlyStepsAnalysis ekolarak) kullanılabilir.</li>
	<li>Sıcaklık performans eğrileri tekrarlanan ölçüler (RM) varyans analizi (ANOVA) ve post-hoc istatistiksel yazılım kullanarak birden çok karşılaştırmaları kullanarak farklı sinek grupları karşılaştırın ( Tablo malzemelerigörmek).</li>
</ol>

<ol><li>Abram, P. K., Boivin, G., Moiroux, J., Brodeur, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioural+effects+of+temperature+on+ectothermic+animals+unifying+thermal+physiology+and+behavioural+plasticity%5BTitle%5D)+AND+%22bioRxiv%22%5BJournal%5D)">Behavioural effects of temperature on ectothermic animals unifying thermal physiology and behavioural plasticity.</a> bioRxiv. , (2016).</li>
<li>Rajpurohit, S., Schmidt, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+thermal+behavior+in+smaller+insects%3A+A+case+study+in+Drosophila+melanogaster+demonstrates+effects+of+sex%2C+geographic+origin%2C+and+rearing+temperature+on+adult+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Fly%22%5BJournal%5D)">Measuring thermal behavior in smaller insects: A case study in Drosophila melanogaster demonstrates effects of sex, geographic origin, and rearing temperature on adult behavior.</a> Fly. 10 (4), 149-161 (2016).</li>
<li>Jezovit, J. A., Levine, J. D., Schneider, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phylogeny+environment+and+sexual+communication+across+the+Drosophila+genus%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Experimental+Biology%22%5BJournal%5D)">Phylogeny environment and sexual communication across the Drosophila genus.</a> The Journal of Experimental Biology. 220 (1), 42-52 (2017).</li>
<li>Sinclair, B. J., Williams, C. M., Terblanche, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Variation+in+Thermal+Performance+among+Insect+Populations%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+and+Biochemical+Zoology%22%5BJournal%5D)">Variation in Thermal Performance among Insect Populations.</a> Physiological and Biochemical Zoology. 85 (6), 594-606 (2012).</li>
<li>Gibert, P., Huey, R., Gilchrist, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Locomotor+performance+of+Drosophila+melanogaster%3A+Interactions+among+developmental+and+adult+temperautures%2C+age%2C+and+geography%5BTitle%5D)+AND+%22Evolution%22%5BJournal%5D)">Locomotor performance of Drosophila melanogaster: Interactions among developmental and adult temperautures, age, and geography.</a> Evolution. 55 (1), 205-209 (2001).</li>
<li>Trotta, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thermal+plasticity+in+Drosophila+melanogaster%3A+A+comparison+of+geographic+populations%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Evolutionary+Biology%22%5BJournal%5D)">Thermal plasticity in Drosophila melanogaster: A comparison of geographic populations.</a> BMC Evolutionary Biology. 6, 1-13 (2006).</li>
<li>Klepsatel, P., Gálikova, M., De Maio, N., Huber, C. D., Christian, S., Flatt, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Variation+in+thermal+performance+and+reaction+norms+among+populations+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Evolution%22%5BJournal%5D)">Variation in thermal performance and reaction norms among populations of Drosophila melanogaster.</a> Evolution. 67 (12), 3573-3587 (2013).</li>
<li>Latimer, C. A. L., Wilson, R. S., Chenoweth, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+genetic+variation+for+thermal+performance+curves+within+and+among+natural+populations+of+Drosophila+serrata%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Evolutionary+Biology%22%5BJournal%5D)">Quantitative genetic variation for thermal performance curves within and among natural populations of Drosophila serrata.</a> Journal of Evolutionary Biology. 24, 965-975 (2011).</li>
<li>Chen, J., Nolte, V., Schlotterer, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temperature-related+reaction+norms+of+gene+expression%3A+Regulatory+architecture+and+functional+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Biology+and+Evolution%22%5BJournal%5D)">Temperature-related reaction norms of gene expression: Regulatory architecture and functional implications.</a> Molecular Biology and Evolution. , (2015).</li>
<li>Kellermann, V., Overgaard, J., Hoffmann, A. A., Flojgaard, C., Svenning, J. -C., Loeschcke, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Upper+thermal+limits+of+Drosophila+are+linked+to+species+distributions+and+strongly+constrained+phylogenetically%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Upper thermal limits of Drosophila are linked to species distributions and strongly constrained phylogenetically.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 109 (40), 16228-16233 (2012).</li>
<li>Andersen, J. L., Manenti, T., Sørensen, J. G., Macmillan, H. A., Loeschcke, V., Overgaard, J. <a target="_blank" href="https://besjournals.onlinelibrary.wiley.com/doi/abs/10.1111/1365-2435.12310">How to assess Drosophila cold tolerance: Chill coma temperature and lower lethal temperature are the best predictors of cold distribution limits.</a> Functional Ecology. 29 (1), 55-65 (2015).</li>
<li>Krstevska, B., Hoffmann, A. A. <a target="_blank" href="https://link.springer.com/article/10.1007/BF01989735">The effects of acclimation and rearing conditions on the response of tropical and temperate populations of Drosophila melanogaster and D. simulans to a temperature gradient (Diptera: Drosophilidae).</a> Journal of Insect Behavior. 7 (3), 279-288 (1994).</li>
<li>Frank, D. D., Jouandet, G. C., Kearney, P. J., Macpherson, L. J., Gallio, M. <a target="_blank" href="https://www.nature.com/articles/nature14284">Temperature representation in the Drosophila brain.</a> Nature. 519 (7543), 358-361 (2015).</li>
<li>Gallio, M., Ofstad, T. A., Macpherson, L. J., Wang, J. W., Zuker, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+coding+of+temperature+in+the+Drosophila+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">The coding of temperature in the Drosophila brain.</a> Cell. 144 (4), 614-624 (2011).</li>
<li>Hamada, F. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+internal+thermal+sensor+controlling+temperature+preference+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">An internal thermal sensor controlling temperature preference in Drosophila.</a> Nature. 454 (7201), 217-220 (2008).</li>
<li>Ni, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+gustatory+receptor+paralogue+controls+rapid+warmth+avoidance+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A gustatory receptor paralogue controls rapid warmth avoidance in Drosophila.</a> Nature. 500 (7464), 580-584 (2013).</li>
<li>Liu, W. W., Mazor, O., Wilson, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thermosensory+processing+in+the+Drosophila+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Thermosensory processing in the Drosophila brain.</a> Nature. 519 (7543), 353-357 (2015).</li>
<li>Neely, G. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TrpA1+Regulates+Thermal+Nociception+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Public+Library+of+Science+ONE%22%5BJournal%5D)">TrpA1 Regulates Thermal Nociception in Drosophila.</a> Public Library of Science ONE. 6 (8), e24343(2011).</li>
<li>Zhong, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thermosensory+and+non-thermosensory+isoforms+of+Drosophila+melanogaster+TRPA1+reveal+heat+sensor+domains+of+a+thermoTRP+channel%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Thermosensory and non-thermosensory isoforms of Drosophila melanogaster TRPA1 reveal heat sensor domains of a thermoTRP channel.</a> Cell Reports. 1 (1), 43-55 (2012).</li>
<li>Barbagallo, B., Garrity, P. A. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4508239/">Temperature sensation in Drosophila.</a> Current Opinion in Neurobiology. 34, 8-13 (2015).</li>
<li>Tang, X., Platt, M. D., Lagnese, C. M., Leslie, J. R., Hamada, F. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temperature+integration+at+the+AC+thermosensory+neurons+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Temperature integration at the AC thermosensory neurons in Drosophila.</a> Journal of Neuroscience. 33 (3), 894-901 (2013).</li>
<li>Petavy, G., David, J. R., Gibert, P., Moreteau, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viability+and+rate+of+development+at+different+temperatures+in+Drosophila%3A+A+comparison+of+constant+and+alternating+thermal+regimes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Thermal+Biology%22%5BJournal%5D)">Viability and rate of development at different temperatures in Drosophila: A comparison of constant and alternating thermal regimes.</a> Journal of Thermal Biology. 26 (1), 29-39 (2001).</li>
<li>Diegelmann, S., Zars, M., Zars, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+dissociation+of+acquisition+and+memory+strength+in+the+heat-box+spatial+learning+paradigm+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Learning+%26+Memory%22%5BJournal%5D)">Genetic dissociation of acquisition and memory strength in the heat-box spatial learning paradigm in Drosophila.</a> Learning & Memory. 13 (1), 72-83 (2006).</li>
<li>Zars, M., Zars, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+and+low+temperatures+have+unequal+reinforcing+properties+in+Drosophila+spatial+learning%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Comparative+Physiology+A%3A+Neuroethology%2C+Sensory%2C+Neural%2C+and+Behavioral+Physiology%22%5BJournal%5D)">High and low temperatures have unequal reinforcing properties in Drosophila spatial learning.</a> Journal of Comparative Physiology A: Neuroethology, Sensory, Neural, and Behavioral Physiology. 192 (7), 727-735 (2006).</li>
<li>Zars, T., Wolf, R., Davis, R., Heisenberg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-specific+expression+of+a+type+I+adenylyl+cyclase+rescues+the+rutabaga+mutant+memory+defect%3A+in+search+of+the+engram%5BTitle%5D)+AND+%22Learning+%26+Memory%22%5BJournal%5D)">Tissue-specific expression of a type I adenylyl cyclase rescues the rutabaga mutant memory defect: in search of the engram.</a> Learning & Memory. 7 (1), Cold Spring Harbor, NY. 18-31 (2000).</li>
<li>Jones, M. A., Grotewiel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+as+a+model+for+age-related+impairment+in+locomotor+and+other+behaviors%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Drosophila as a model for age-related impairment in locomotor and other behaviors.</a> Experimental Brain Research. 46 (5), 320-325 (2011).</li>
</ol>

Yazarlar onlar rakip hiçbir mali çıkarları var bildirin.

Burada zaman ve mekan içinde hassas ısı değişiklikleri üreten bir otomatik ısı kontrollü arena (Şekil 1) sunulmuştur. Bu yöntem sadece sıcaklık (Şekil 2 ve Şekil 3) hazır çekim yavaş yavaş artar, aynı zamanda dinamik sıcaklık zorluklar içinde uçmak arena her parçasına sıcak olduğu için bireysel Drosophila pozlama sağlar farklı bir sıcaklık için bağımsız olarak (Şekil 4 ve <str...

Nasıl organizmalar işlev ve1davranır etkiler sürekli bir çevre faktörü sıcaklığıdır. Enlem ve yükseklik farklılıkları türü organizma için onların yanıtları sıcaklık2,3için evrimsel seçimi hangi sonuçlar maruz kalan iklim farklılıkları yol. Organizmaların farklı sıcaklıklarda onların belirli ortamlarda4altında performansı en üst düzeye çıkarmak morfolojik, fizyolojik ve davranışsal uyarlamalar ile yanıt. Örneğin, meyve sineği Drosophila melanogaster, örneğin alınma olasılığını farklı bölgelerde farklı sıcaklık tercihleri, gövde boyutları, gelişimsel süreleri, uzun ömürlü, verimlilik ve yürüyüş performans farklı sıcaklıklarda2 var ,5,6,7. Farklı kökenleri sinekler arasında gözlenen çeşitlilik kısmen genetik varyasyon ve plastik gen ifade8,9tarafından açıklanmıştır. Benzer şekilde, Drosophila türler farklı alanlardan farklı sıcaklık degradeler arasında dağıtmak ve aşırı sıcak ve soğuk testleri10,11,12için direnç farklılıklar gösterir.
Drosophila de son zamanlarda sıcaklık algı13,14,15,16,17genetik ve nöral temeli anlamak için seçim modeli haline geldi. Genel olarak, Yetişkin sinekler anten soğuk ve sıcak periferik sıcaklık sensörleri ve sıcaklık sensörleri beyin13,14,15,16 üzerinden sıcaklık algıladıkları , 17 , 18 , 19 , 20. Gr28b.d16 ya da yüksek ateş21çevre reseptörleri sıcak hava için hızlı, çevre soğuk reseptörleri Brivido14tarafından karakterize edilmektedir. Beyinde, sıcaklık TrpA115ifade nöronlar tarafından işlenir. Mutantlar bu yollar üzerinde davranış çalışmaları sıcaklık nasıl işleneceğini bizim anlayış geliştirmek ve Drosophila farklı bölgelerdeki nüfus arasında değişir mekanizmaları içine anlayışlar verebilir.
Burada hızlı ve hassas sıcaklık değişiklikleri üreten ısı kontrollü bir arena açıklayın. Müfettişler bu değişiklikler için standart ve tekrarlanabilir sıcaklık manipülasyonlar insan müdahalesi olmadan sağlayan önceden programlayabilirsiniz. Sinekler kaydedilir ve onların konumu da bir deney farklı aşamalarında belirlemek için özel yazılımı ile izleniyor. Bu protokol için sunulan ana ölçüm yürüme hızı farklı sıcaklıklarda, bireysel termal adaptasyon5tanımlayabilirsiniz fizyolojik performans ekolojik ilgili dizin olduğu içindir. Sıcaklık reseptör mutantlar ile birlikte, bu teknik, hücresel ve biyokimyasal düzeyde termal adaptasyon mekanizmaları ortaya çıkarmak yardımcı olabilir.

<table><tbody><tr><td>Arduino Due</td><td>Arduino</td><td>A000062</td><td>Yazılımı RUG</td></tr><tr><td>Elektronik Kartı</td><td>Ruijsink Dinamik Mühendislik</td><td>FF-Main-02-2014</td><td></td></tr><tr><td>Güç kaynağı Boost</td><td>XP-Power 48. V 65 W</td><td>ECS65US48</td><td>53 Volt</td></tr><tr><td>Güç kaynağına ayarlayın Fayans Isıtma</td><td>XP-Power 15. V 80 W</td><td>VFT80US15</td><td></td></tr><tr><td>Güç kaynağı Soğutma</td><td>XP-Power 15. V 130 W</td><td>ECS130U515</td><td></td></tr><tr><td>Peltier elemanları</td><td>Marlow Industries</td><td>RC12-4</td><td>2 Elemanlı, kontrollü DC besleme</td></tr><tr><td>Isı emici</td><td>Fisher Technik</td><td>LA 9/150-230V</td><td>Titreşim için ayrılmış</td></tr><tr><td>Sıcaklık sensörleri</td><td>Ölçüm Özellikleri</td><td>MCD_10K3MCD1</td><td>Mikro Termistör Probu</td></tr><tr><td>Bakır blok/fayans</td><td>Ruijsink Dinamik Mühendislik</td><td>FF-CB-01-2014</td><td></td></tr><tr><td>Auminum halkası</td><td>Ruijsink Dinamik Mühendislik</td><td>FF-RoF-02-2015</td><td></td></tr><tr><td>Tesa 4104 beyaz bant 25 x 66 mm</td><td>RS Bileşenleri</td><td>111-2300 &nbsp;</td><td>Beyaz iletken bant</td></tr><tr><td>Kırmızı LED'ler</td><td>Lucky Ligt</td><td>ll-583vc2c-v1-4da</td><td>625 nm, 20 mAmp ve 6 V arasında dalga boyu</td></tr><tr><td>Sıcak beyaz LED şerit</td><td>Ledstripkoning</td><td>HQ-3528-SMD</td><td>Metre başına 60 LED</td></tr><tr><td>Anahtar Güç Kaynağı</td><td>Jenerik</td><td>T-36-12</td><td></td></tr><tr><td>Logitech c920</td><td>Logitech Europe SA</td><td>PN960-001055</td><td></td></tr><tr><td>QuickTime Oynatıcı</td><td>Apple Bilgisayar</td><td></td><td>Kaydı program</td></tr><tr><td>İzleme analiz yazılımı</td><td>R</td><td></td><td>Paketleri: pacman</td></tr><tr><td>İzleme analiz yazılımı</td><td>MATLAB</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Termal Görüntüleme</td><td>FLIR T400sc</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Grafikler ve İstatistik Yazılımı</td><td>Grafik Pedi Prizma</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sigmacote</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>SL2-100ML</td><td>Silikonlaştırıcı ajan</td></tr><tr><td>Sinek yetiştirme şişeleri</td><td>Flystuff</td><td>32-130</td><td>6oz Drosophila stok şişe</td></tr><tr><td>Flypad</td><td>Flystuff</td><td>59-114</td><td></td></tr><tr><td>Sinek yetiştirme şişeleri</td><td>Dominique Dutscher</td><td>789008</td><td>Drosophila tüpleri dar 25x95 mm</td></tr><tr><td>İnkübatör</td><td>Sanyo</td><td>MIR-154</td><td></td></tr><tr><td>Manyetik sıcak plaka</td><td>Heidolph</td><td>505-20000-00</td><td>MR Hei-Standart</td></tr><tr><td>Agar</td><td>Caldic Malzemeler B.V.</td><td>010001.26.0</td><td></td></tr><tr><td>Glikoz</td><td>Gezond & wel</td><td>1019155</td><td>Dekstroz/Druivensuiker</td></tr><tr><td>Sükroz</td><td>Van Gilse</td><td></td><td>Toz şeker</td></tr><tr><td>Mısır unu</td><td>Flystuff</td><td>62-100</td><td></td></tr><tr><td>Buğday tohumu</td><td>Gezond& wel</td><td>1017683</td><td></td></tr><tr><td>Soya unu</td><td>Flystuff</td><td>62-115</td><td></td></tr><tr><td>Pekmez</td><td>Flystuff</td><td>62-117</td><td></td></tr><tr><td>Aktif kuru maya</td><td>Red Star</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tegosept</td><td>Flystuff</td><td>20-258</td><td>100</td></tr></tbody></table>%

drosophila sıcaklık değişiklikler uzay ve zaman içinde performansını belirlemek için otomatik yöntemi

An Automated Method to Determine the Performance of Drosophila in Response to Temperature Changes in Space and Time

Ne tür dağıtmak ve hareket etkiler her yerde bulunan bir çevre faktörü sıcaklığıdır. Drosophila meyve sinekleri farklı türler belirli yanıt-e doğru sıcaklık fizyolojik tolerans ve adaptasyon göre değiştirme hakkına sahiptir. Drosophila sinekler de sinir ectotherms içinde işleme sıcaklık temelini anlamak için temel haline gelmiştir sistem algılama bir sıcaklık sahip. Burada sıcaklık değişen bireysel sinekler yanıt keşfetmek için zamansal ve mekansal kontrolü ile hızlı ve hassas sıcaklık değişikliklerine izin ısı kontrollü bir arena mevcut. Bireysel sinekler arenada yer ve Tekdüzen kademeli sıcaklık tepki normları belirlemek için veya dağınık şekilde dağıtılmış sıcaklıklar artar tercihlerinizi belirlemek için aynı anda gibi hazır çekim sıcaklık sorunlar için maruz. Bireyler hız veya Konum tercihi miktar izin otomatik olarak izlenir. Bu yöntem hızlı bir şekilde yanıt geniş sıcaklık sıcaklık performans eğrileri Drosophila içinde belirlemek için veya diğer böcekler benzer boyutta üzerinden ölçmek için kullanılabilir. Buna ek olarak, bu genetik çalışmalar için sıcaklık tercihleri ve mutantlar veya vahşi-türü sinekler tepkiler ölçmek için kullanılabilir. Bu yöntem termal türleşme ve adaptasyon gibi sinirsel mekanizmalar arkasında sıcaklık işleme temeli ortaya çıkarmak yardımcı olabilir.

Üç bakır taş olan sıcaklık ayrı ayrı programlanabilir bir devre kontrol edilebilir ısı kontrollü arena (Şekil 1A) oluşur. Her bakır döşeme için programlanabilir devre geribildirim veren bir sıcaklık sensörü sahiptir. Her döşeme sıcaklığını artırmak için bir güç kaynağı devre etkinleştirir. Pasif termoelektrik elemanları tarafından bir fan soğutmalı bir soğutucu sürekli soğutma sağlarken istenilen sıcaklık sürdürmek için sürekli ısıtma elemanları hareket. Orta...

Burada zaman ve mekan içinde hızlı ve hassas sıcaklık değişiklikleri üretir programlanabilir bir ısı kontrollü arena kullanarak sıcaklık değiştirme Drosophila lokomotor performansını otomatik olarak belirlemek için bir iletişim kuralı mevcut.

Drosophila sıcaklık değişiklikler uzay ve zaman içinde performansını belirlemek için otomatik yöntemi

Temperature is a ubiquitous environmental factor that affects how species distribute and behave. Different species of Drosophila fruit flies have specific ...

Bu yöntem, sineklerin sıcaklık değişimlerine yanıtı, genotipler arasındaki farklar, diğer duyusal ipuçlarıyla etkileşim veya farklı sıcaklık reseptörlerinin işlevi gibi anahtar soruları yanıtlamamıza yardımcı olabilir. Bu tekniğin en büyük avantajı, zaman ve uzayı kontrol eden ve otomatik bir şekilde birden fazla hızlı ve hassas sıcaklık değişikliğine olanak sağlamasıdır. 20 erkek ve 20 kadın sinekleri 45 mililitre sinek gıda orta içeren bir yetiştirme şişesine yerleştirerek başlayın ve 12 saat ışık altında 25 derece santigrat derece kuluçka içine şişe yerleştirerek, 12 saat karanlık döngüleri.10 gün sonra, karbondioksit pedleri üzerinde en fazla dört dakika için yeni ekaplanan sinekler anestezi. Ve bakire sinekleri toplamak için bir boya fırçası kullanın 2.5 tarafından 9.5 santimetre taze sinek gıda orta 6.5 mililitre içeren şişeleri sinek, şişe başına 20 sinek gruplara cinsiyet ayrılmış. Sonra şişeleri 5-7 gün boyunca kuvöze geri ver.Sıcaklık kontrollü bir arena kurmak için arenayı açın ve kontrol bilgisayarındaki sıcaklık aşamaları komut dosyasını açın. Sıcaklık sırasının düzgün ayarlanıp ayarlıldığını doğrulayın ve her deneme aşamasının süresinin 60 saniyeye ayarlanıp ayarldığını kontrol edin. Başlangıç deneysel bloğu bölümünde, bu ayarları onaylayın: istenilen sayıda faz, gösterge kırmızı ışık yayan diyotların yinelemeli açık/kapalı kurulumu, faz başına iki santigrat derece sıcaklık artışı ve başlangıç sıcaklığı olarak 16 santigrat derece.Ardından, sıcaklık aşamaları komut dosyası çalıştırın. Yazılım beş saniye sonra durdurmak için başlatılması olacaktır. Sıcaklık davranış deneyleri için, arenanın bakır karolarının üstüne beyaz iletken bant iplikçik yerleştirin ve tüm kenarların kapalı olmasını sağlar.Bakır fayans etrafında ısıtmalı alüminyum halka yerleştirin ve cam kapağı silmek için temiz bir doku kullanın. Alüminyum halkaüstüne kapağı yerleştirin, üzerinden bir sinek üfleme olabilir bir boşluk bırakarak ve şişenin altına sinekzorlamak için iki kez bir acclimated sinek şişe dokunun. Bir ağız aspiratör kullanarak, tuzak bir sinek ve kuvöz içine geri koymadan önce şişe kapatın.Cam kapak ve alüminyum halka arasındaki boşluk üzerinden arenaya sinek darbe ve hemen boşluğu kapatmak için cam yonca itin. Simetrik aydınlatma sağlamak ve video kayıt programı ile kayıt başlatmak için arena etrafında ışıklar bir çerçeve yerleştirin. Ardından, deneme aşamalarını çalıştırmaya başlamak için kontrol bilgisayarının boşluk çubuğuna basın.Videoları izlemek için, sinek adımlarını izleme yazılımını açın ve fly tracker klasöründeki yapılandırma dosyasını açın. Video klasöründeki videoların konumunu ve video dosyalarındaki videoların adlarını ayarlayın. Arenanın kenarındaki birden fazla noktanın x/y piksel koordinatlarını temel alan arena ayarlarında sinek arenasının kenarlarını belirtin.LED'lerin merkezinin x/y piksel koordinatlarına göre, pasif kırmızı LED'lerin LED ayarlarındaki konumuna özel. Sinek arenasının kenarlıklarının konumunu kontrol etmek için hata ayıklamayı arena ayarlarında doğru şekilde ayarlayın, kaydet'i tıklatın ve komut dosyasını terminalde çalıştırın. Videonun ekran çekimi, arena ayarlarına giriş yapılan koordinatlardan oluşan mavi bir kareyle görünür.Ardından arena ayarlarındaki hata ayıklama hatasını false olarak değiştirin. Kaydet'i tıklatın ve izleme işlemini başlatmak için terminaldeki ekranı yeniden çalıştırın. Tipik bir sıcaklık davranış deneyinde, 16, 20 veya 24 santigrat dereceye maruz kalan tek sinekler, deneyin başlangıcında beş dakikadan daha yüksek bir hareket gösterirler.Sıcaklık kontrollü arena da dinamik sıcaklık değişiklikleri için farklı genetik arka planlardan sinek davranışsal tepkilerkarşılaştırmak için kullanılabilir. Örneğin, bu deneyde, test edilen türlerin hızları, sıcaklık arttıkça, maksimum performans noktasına ulaşıncaya kadar kendi tepki eğrilerine göre artmıştır, sonra hızları çürüyve sinekler yok oldu. Tek tek sinekler orta ve bir yan kiremit 40 derece santigrat maruz kaldığında, rahat bir 22 santigrat derece diğer yan kiremit ile Wild-tipi sinekler hızla arena boyunca hareket durdu ve rahat bir yerde kalır.Buna karşılık, klasik bellek mutant Dunce sinekler arena keşfetmek tutmak ve rahat bir yerde kontrolleri daha az zaman harcamak. Ayrıca, sıcaklık ve konum kombinasyonları test de dinamik sıcaklık değişiklikleri sırasında farklı sıcaklık reseptörlerinin işlevini anlamak yararlıdır. Bu deneyde de gösterildiği gibi, bireysel d melanogaster mutantların artan sıcaklıklara maruz kalırken, 22 santigrat derecede rahat bir yer de sağlandı.Bu yordamı gerçekleştirirken, mümkün olduğunca çok sinek davranışı yakalamak böylece sırayla ve hızlı bir şekilde adımları gerçekleştirmek için unutmayın. Bu prosedürün yanında negatif geotaxis veya ısı boğma tahlilleri gibi diğer yöntemler sinekler normal hareket veya normal ısı direnci var gibi ek soruları cevaplamak için kullanılabilir. Bu tekniğin etkileri bize sıcaklık algısı veya ağrı bir rol oynadığı nörolojik bozukluklar veya mutasyonlar anlamak için uzanır.Genellikle, her adım tek başına basit olduğu için bu yönteme yeni bireyler mücadele edecek ama tekniğin uygulanması gereken bu yüzden mükemmel koordine edilmesi gerekiyor.

an-automated-method-to-determine-performance-drosophila-response-to

Research

JoVE Journal

Behavior

Davranış

&gt;Drosophila meyve sinekleri, sıcaklıktaki küçük değişiklikleri ayırt edebilir ve bu nedenle uygun termal koşullara sahip ortamları seçebilir. Bu video, Drosophila larvalarının sıcaklık tercihini doğrusal bir termal gradyan üzerinde test eden davranışsal bir testi açıklamaktadır.

Sıcaklık Gradyanı Deneyi: Drosophila Larvalarında Sıcaklık Tercihini Test Etmek İçin Bir Yöntem

Bu videoda, lokomotor aktiviteyi izlemek için kullanılan Drosophila aktivite monitörü (DAM) sistemi açıklanmaktadır. Araştırmacılar, meyve sineklerinde sirkadiyen ritimleri incelemek için DAM'dan toplanan aktivite verilerini kullanıyorlar. Öne çıkan protokol klibi, cihaza sineklerin nasıl yükleneceğini ve sirkadiyen deneyler için etkinlik verilerinin nasıl kaydedileceğini gösterir.

Drosophila Aktivite monitörü (DAM): Sineklerde lokomotor aktiviteyi ölçmek için bir yöntem

Son zamanlarda, sineklerde tercih edilen sıcaklığın gündüz arttığı ve gece boyunca düştüğü drosophila sirkadiyen çıktısı, sıcaklık tercih ritmi (TPR) adlı bir roman belirledik. TPR, başka bir sirkadiyen çıkış olan lokomotor aktiviteden bağımsız olarak düzenlenir. Burada TPR'nin tasarımını ve analizini drosophila.

Drosophila'da Sıcaklık Tercih Davranışının ve Sirkadiyen Ritminin Tasarımı ve Analizi

Burada yüksek verimli tarama sağlayan, Drosophila uçuş performans hızlı ve doğru bir ölçümü için bir yöntem tarif eder.

Uçuş Performans Doğru ve hızlı ölçüm için geliştirilmiş Yöntemi<em&gt; Drosophila</em

Drosophila melanogaster gibi spontan lokomotor aktivite gibi davranışları etkileyen genetik veya çevresel manipülasyonlar okuyan yararlıdır. Burada kızılötesi ışınları ve spontan lokomotor aktivitesini ölçmek için veri analiz yazılımı ile monitör kullanan bir protokol açıklar.

Olarak spontan lokomotor aktivitenin belirlenmesi<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Bu rapor, TriKinetics Drosophila Activity Monitor kullanılarak Drosophila larva aktivitesini ölçmek için bir yöntemi açıklar. Cihaz, 16 adede kadar bireysel hayvanın hareketlerini algılamak için kızılötesi ışınlar kullanır. Veriler, oranlar ve hayvanların tahlil odaları içindeki konumları dahil olmak üzere hareket parametrelerini temsil etmek için analiz edilebilir.

Larvaların Faaliyet Ölçümü<em&gt; Drosophila</em&gt; Activity Monitor

Burada, Drosophila larva sürekli termal degrade kullanarak tercih edilen ortam sıcaklığında belirlemek için bir iletişim kuralı mevcut.

Drosophila larva termal tercihlerini belirlemek için bir sıcaklık gradyanı tahlil

Termal sınırlar organizmaların tolere ettiği ortamları tahmin edebilir, ki bu da hızlı iklim değişikliği karşısında değerli bilgilerdir. Burada açıklanan böceklerde kritik termal minima ve ısı nakavt süresini değerlendirmek için yüksek iş gücü protokolleri vardır. Her iki protokol de iş hacmini en üst düzeye çıkarır ve tahlillerin maliyetini en aza indirir.

Böceklerde Kritik Termal Limitlerin Yüksek İş Gücü Tahlilleri

Bu rapor, bir inkübatör odası içindeki bir hava iletimi ısı stresörüne yanıt olarak bir Drosophila Aktivite Monitörü (DAM2) kullanarak yetişkin Drosophila melanogaster'in devrilme süresini ölçmek için bir yöntemi açıklar. DAM2, bir kızılötesi ışını geçerken bireysel sinek hareketlerini kaydederek aktiviteyi ölçer. Veri analizi, yazarlar tarafından oluşturulan yeni bir yürütülebilir dosya ile kolaylaştırılır.

Drosophila Activity Monitor Sistemini Kullanarak Isı Toleransı Testleri: Veri Analizi için Yürütülebilir Bir Uygulama Kılavuzu

Biz objektif bir ölçü yaygın olarak kullanılan lastik el yanılsama paradigma istihdam nasıl göstermektedir. Bu tedbir köklü crossmodal uyumu görev değiştirerek elde edilir. Bu görev, lastik el yanılsama olduğu gibi vücut temsilleri modülasyon için kritik olan multisensory süreçlerin incelenmesi sağlar.

Kauçuk El Illusion Paradigma bir Amaç Davranış Tedbir Alınması Aracı Olarak Crossmodal Congruency Görev

Öğrenin, Drosophila'nın sıcaklık değişimlerine otomatik yöntemle lokomotor performansını değerlendirmeyi. Programlanabilir sıcaklık kontrollü arena, genotip farklılıklarını ve duyusal uyarıcı etkileşimlerini hızla analiz etmenizi sağlar.

Drosophila sıcaklık değişiklikler uzay ve zaman içinde performansını belirlemek için otomatik yöntemi

Daha fazla video keşfet