Yağ dokusundan elde edilen Stromal vasküler kesir için potansiyel kıkırdak rejenerasyon üreten klinik protokol

Osteoartrit yaşlı nüfus arasında en sık görülen zayıflatıcı bozukluklardan biridir. Şu anda, osteoartrit altta yatan nedenleri için kesin bir tedavi yoktur. Bu klinik protokol doku gibi kıkırdak rejenerasyon tarafından umut verici, minimal invaziv ve insan diz osteoartrit alternatif tedavi için yenilikçi bir prosedür açıklar.

Osteoartrit yaşlı nüfus arasında en sık görülen zayıflatıcı bozukluklardan biridir. Şu anda, osteoartrit altını çizen nedenleri için kesin bir tedavi yoktur. Bu klinik protokol, kıkırdak benzeri doku yenileyerek insan diz osteoartriti umut verici, minimal invaziv ve alternatif tedavi için yenilikçi bir prosedürdür.

Hastayı biyolojik tehlike sınıfı A başlığı olan bir ameliyathaneye getirin ve onu bir supine pozisyonuna yerleştirin. Hastanın karın bölgesini %5 betadine-povidine iyot ile temizleyin ve steril tekniği kullanarak hastayı örtünerek karın temiz bölgesini liposuction için teşhir edin. Göbekten yaklaşık beş santimetre infero-laterally, biri solda, diğeri göbek sağ tarafında olmak üzere iki bölge anestezi yapılır.

Epidermal düzeyde her site enjekte ederek beş mililitreşyon şırınga bir 25-gauge 1.5 inç iğne ile epinefrin olmadan% 2 lidokain iki mililitre kullanma. Beş mililitre tumescent solüsyon ve 10 mililitre şırınga ve iğne 25-gauge 1.5 inç kullanılarak yapılacak kesi bölgesini anesthetize edin. Deri altı seviyesinin derinliğini yükseltmek için deri çimdikleyerek göbek altında yaklaşık beş santimetre 0.5 santimetre iki kesi ler olun.

11 numaralı bıçak kullanarak, yükseltilmiş cildin deri altı seviyesine kadar nüfuz etmesini sağlar, ancak karın duvarından geçmez. 20 santimetre 60-gauge kanül kullanarak, tumescent çözeltisi 700 ila 800 mililitre liposuctioned olacak tüm alt karın bölgesinin subkutan seviyesini anestezik. Tumescent solüsyonu ile tüm alt karın infiltrasyon bitirdikten sonra, manuel liposuction veya özel olarak tasarlanmış 3.0 milimetre kanül bir santrifüj kiti bağlı 60 mililitre veya 30 mililitreşşile bağlı bir 3.0 milimetre kanül bağlayarak bir liposuction cihazı hazırlamak.

Kapalı bir sistem şırınga kendimiz tarafından geliştirilen ve vakum destekli liposuction için bir vakum makinesine bağlı sterilite tutmak amacıyla FDA CDRH tarafından onaylanmış. Tumescent solüsyonu hariç 100 ila 110 gram yağ dokusu elde etmek için liposuction gerçekleştirin. Liposuction yapılırken, yağ dokusu tumescent solüsyon ile birlikte elde edilecek ancak ayrılıp çıkarılmalıdır.

Önce tumescent çözeltisini yer çekimine göre ayırmak için, santrifüj kitindeki yağ dokusu 60 mililitrelik şırıngaya aktarılabilir ve şırıngayı yere yerleyebilir. Örneğin, şırınganın açılış kısmı en alttadır. 5-6 dakika bekletilerek yağ dokusu ve tumescent solüsyonu ayrılacaktır.

Şırınga nın altındaki sıvıyı şırınga nın üstüne bastırarak çıkarın. Yukarıdaki adımları 9-11 diz başına 100 gram ile 110 gram yağ dokusu lipid aspire toplam kadar gerçekleştirin birikmiştir. Tumescent çözeltisini yer çekimi ile ayırdıktan ve her 60 mililitrelik centrifuge kiti steril kapalı sistem başına 50 gram ile 55 gram lipid aspire ilerlerken, iki santrifüj kitini bir santrifüj kap kovasına yerleştirin ve 1600 G'de beş dakika boyunca döndürün, lipid aspiresini yoğuşturun ve sıvıyı yağ dokusundan ayırın.

Bu süreç daha fazla lipid aspire yoğunlaştırır ve bazı durumlarda yağ yağı üretebilir. Titrememeye dikkat edin, santrifüj kitinin altındaki emniyet kapağını ve fişi çıkarın. Santrifüj kitinin pistonunun üzerine yavaşça iterek alttaki sıvıyı çıkarın.

Ayrı 60 mililitre şırınga, kollajenaz 10 miligram çözün, bağ dokusu için özel beş miligram kollajenaz, ve normal tuzlu 50 mililitre ile yağ dokusu için özel kollajenaz beş miligram. Mix yaklaşık 25-30 çözünmüş kollajenaz ile yoğunlaştırılmış lipid aspire mililitre, bağ dokusu için özel kollajenaz beş miligram, ve bir e-bir oranda yağ dokusu için özgü kollajenaz beş miligram, hacim hacim, özel bir konektör kullanarak bir santrifüj kiti 60 mililitreşşü bağlayarak. Iyice 60 mililitrelik şırınga ve santrifüj kiti arasında bir çubuk veya bir itici kullanarak içeriği iterek hazırlık aspire ve kollajenaz yoğunlaşmak için karıştırın.

Lipid aspire ve kollajenaz karışımını 60 mililitreşile geri aktarın. Bıçaklar içeren doku homogenizer ile karışımı içeren her 60 mililitreşübağlayın. Homogenizer diğer ucuna boş bir 60 mililitreşşü bağlayın.

Karışımı diğer 60 mililitrelik şırıngaya homogenizer ile dört ila altı kez itin, bu da lipid aspiresinin kesilmesi ve kıymalanmasıyla sonuçlanır. Homojenleştirilmiş lipid aspireve kollajen karışımı nı özel bir konektör aracılığıyla 60 mililitrelik santrifüj kitine aktarın. Santrifüj kitlerini, önceden 37 derecede ısıtılmış bir kuvöze yerleştirilecek bir kapta yerleştirin.

45 rpm dönerken 37 santigrat derece santigrat iki santrifüj kitleri inkübül. Kuluçka 40 dakika sonra, steril bir şekilde kuvözden konteyner çıkarın. Sonra santrifüj kitleri çıkarın ve bir santrifüj makinesine yerleştirin.

Yağ dokusu ndan elde edilen SVF'yi ayırmak için karışımları 800 G'de beş dakika santrifüj edin. Santrifüj sonra, supernatant, kollajenaz ve sindirilmiş yağ dokusu içeren her santrifüj kiti piston üstüne şırınga kapağı kaldırarak kaldırılır ve bir şırınga kilidi bağlantısı ile açılan piston üzerinde 30 mililitrelik şırınga yerleştirerek. 30 mililitrelik şırınganın 30 mililitrelik şırınganın namlu kısmına yavaşça bastırarak 30 mililitrelik şırınganın içine doldurun.

30 mililitrelik şırınga namlusu santrifüj kitinin dibinin son 3-4 mililitresine kadar bastırın ve sadece son 3-4 mililitre yağ dokusundan elde edilen SVF'yi bırak. Supernatant atılır. 30 mililitrelik şırıngayı pistonun üst kısmından çıkarın ve şırıngayı D5LR olarak da bilinen %5 dekstroz laktroz halka çözeltisi ile doldurun.

Piston açıklığının üstüne D5LR ile doldurulmuş 30 mililitrelik şırınga takarak, ditpoz dokusundan elde edilen SVF'yi içeren santrifüj kitlerini 55 mililitreye kadar D5LR ile doldurun. Daha sonra 30 mililitrelik şırıngayı çıkarın, piston açıklığını kaplayın ve santrifüj kitlerini yaklaşık dört dakika boyunca 300 G'de tekrar santrifüj edin. Toplam dört yıkama için 17 ile 21 numaralı adımları tekrarlayın.

Dördüncü santrifüjden sonra, enjeksiyon için son SVF'yi elde etmek için, santrifüj kitini sallayıp çevirmeden güvenlik kapağını ve fişi çıkarın. Özel olarak tasarlanmış bir konektör kullanarak santrifüj kiti alt açıklığA 20 mililitrelik şırınga takın. Santrifüj kitinin altına yerleşen hücreleri sarsmak için 20 mililitrelik şırınganın daldırıcısını birkaç kez ileri geri çekin.

Diğer hücreler ve dokuile birlikte hem AST hem de ECM içeren SVF'nin istenilen toplam hacmini çıkarın. Genellikle diz eklem enjeksiyonları için her santrifüj kiti yaklaşık üç ila dört mililitre. 30 mililitre otolog kan ve 2.5 mililitre antikoagülan sitrat dekstroz solüsyonu yaptık.

Sonra çekilen kan 60 mililitrelik santrifüj varil kitlerine nakledildi. Daha sonra 730 yerçekimi beş dakika için santrifüj edildi. Ve supernatant kaldırıldı ve yeni bir 60 mililitre centrifuge varil kiti içine koymak.

Supernatant 1350 yerçekimi dört dakika santrifüj edildi, PRP 4.4 mililitre elde. Hastanın dizini %5 betadin ile temizleyin ve steril bir şekilde örtün. Tibial ve femoral kemikler arasındaki eklem boşluğu için diz ön palpate.

Seyreltilmiş lidokain ile enjeksiyon bölgesi yüzeysel anestezik, bir mililitre 1% lidokain normal tuzlu dört mililitre ile seyreltilmiş, deriden sadece eklem kapsülü dışında. Sonra seyreltilmiş ropivacaine ile eklem kapsülü içinde anestezi, bir mililitre 0.75%ropivacaine normal tuzlu üç mililitre ile seyreltilmiş. İki mililitre HA'yı, şırınga konektörüne kadar 20 mililitrelik bir şırıngada bulunan 6-8 mililitreSVF'ye karıştırın.

Şırınga konektörüne bir şırınga kullanarak, önceden hazırlanmış ve beş mililitrelik bir şırıngada hazır olan üç ila dört mililitre otolog PRP'ye 0,4 mililitre kalsiyum klorür ekleyin. 5 mililitrelik bir şırıngada 3,5 ila 4,5 mililitre PRP kalsiyum klorür ile 8 ila 10 mililitre HA-SVF karışımını şırınga konektörüne kadar bir şırınga ile 20 mililitrelik bir şırıngaile birleştirin. Hemen karışımı enjekte, yaklaşık 12-15 mililitre, yavaş yavaş diz ön tibial-femoral eklem içine, kullanarak 38 milimetre 18-gauge iğne ile veya ultrason rehberlik olmadan.

Enjeksiyondan sonra, 4x4 pamuk gazlı bez katlayarak ve katlanmış 4x4 gazlı bez üzerine bantlar yerleştirerek basınç ile enjeksiyon yeri bandaj. Hastaya hücre ekine izin vermek için 60 dakika hareketsiz kalmasını emredin. Hastaya klinikten taburcu olduktan sonra en az bir hafta aktiviteyi sınırlandırmasını emret.

Üç hafta boyunca kalsiyum klorür tarafından aktive PRP üç ek enjeksiyonları için kliniğe dönün. Evre üç OA'lı hasta protokol bölümünde açıklandığı gibi tedavi gördü. ASV-ECM karışım enjeksiyonunun ikinci haftasından sonra hastanın ağrısı ve ROM'u düzeldi.

16. haftaya kadar hastanın ağrısı ve ROM'u 16. Evre üç OA'lı başka bir hasta protokol bölümünde açıklandığı gibi tedavi gördü. ASV-ECM karışım enjeksiyonunun ikinci haftasından sonra hastanın ağrısı ve ROM'u düzeldi.

18. haftaya kadar ağrı ve ROM önemli ölçüde iyileşti 80%Tekrarlanan MRI 18 hafta dan sonra alınan kıkırdak benzeri doku yüksekliği diz ön-medial tarafında bir artış gösterdi. Evre üç OA'lı üçüncü hasta protokol bölümünde açıklandığı gibi tedavi gördü. ASV-ECM karışım enjeksiyonunun ikinci haftasından sonra hastanın ağrısı ve ROM'u yaklaşık %50 Oranında iyileşerek 22.haftada, ağrı ve ROM'da 22.

Şu anda Hiçbir küratif tedavi OA tedavisi için kullanılabilir. Ancak, ASC'ler ve homojen ECM ile kök hücre tedavisinin perkütan enjeksiyonu, HA ve kalsiyum klorür ile aktive edilen benzer PRP ile birlikte diz OA tedavisinde mevcut tedavi tedavisine alternatif olabilir.