Name: İndüksiyon düşük Serum koşullar altında kalp Progenitor hücreler endotel farklılaşma (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 48 s
Description: Keşfedin kalp progenitör hücrelerinin endotel farklılaşması için optimize edilmiş protokolü. Düşük serum konsantrasyonu ve laminin kaplı substrat kullanarak hücre terapisi ve rejeneratif tıp araştırmalarında uygulanabilir yöntemler geliştirin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar Vera Lorenz deneyler ve personel Biyomedikal bölümü (DBM), üniversite ve Üniversite Hastanesi Basel akış sitometresi tesisinden sırasında ona yardımcı destek için teşekkür ederiz. Bu eser Stay-on parça programından Basel Üniversitesi (için Michika Mochizuki) tarafından desteklenmiştir. Gabriela M. Kuster İsviçre Ulusal Bilim Vakfı (grant sayı 310030_156953) hibe tarafından desteklenmektedir.

Fare kullanımı için hücre izolasyon amaçlı ve bakım ve kullanmak, Laboratuvar hayvanları ve İsviçre hayvan koruma kanunu ile Kılavuzu olduğunu ve Swiss Kanton yetkilileri tarafından kabul edildi.
Not: Ani kalp durması-1+/CD31 yalıtım- SP-TBM'leri fare kalp aslında yapıldı olarak yukarıda açıklanan34 bazı değişikliklerle. Malzemeler ve kullanılan reaktifler için Malzemeler tablobakın. Tüm deneyler için kardiyak SP-TBM'leri fareler izole güçlendirilmiş, pasajlı ve hücre satırı gibi vermez. Pasajlar 7-20 Bu çalışma için kullanılmıştır.
1. doku hazırlık
Not: tüm deneylerin fare kullanma yönergeleri ve yönetmeliklere göre yapılmalıdır. Bu protokol dört fareler kullanır. 100 mm çapında çoğu kültür plakaları P100 açıklanan ve 60 mm çapında çoğu kültür plakaları P60 iletişim kuralı aşağıdaki bölümleri için olarak açıklanmaktadır.
<ol><li>Her fare 200 mg/kg Fentobarbital intraperitoneally enjekte (IP) ve tamamen onun yanıt pinching baştan aşağı kontrol ederek anestezi kadar bekleyin.</li>
	<li>% 70 etanol ile göğüs silin. Cilt ve torasik duvarın göğüs boşluğuna maruz makasla kesme.</li>
	<li>Kalp forseps ile kaldırın ve makas kullanarak tabanında kesti. Soğuk fosfat tamponlu tuz (PBS) (3-5 kalpler P100 başına) ya da bir iki kalpleri P60 başı P100 25 mL (5 mL için P60) ile kalbinde koymak.</li>
	<li>Kan boşluklar (Şekil 1A) dışarı çıkarmak için forseps ile kalp pompa.</li>
	<li>P100 25 mL (5 mL için P60) ile kalbinde yıkama soğuk PBS koymak. Küçük makas kullanarak kulakçık kaldırın. Kalp iki boyuna parçalar halinde kesilmiş ve yine buz gibi PBS (25 mL/P100, 5 mL/P60) yıkayın.</li>
	<li>Parçaları yeni P100 25 mL (5 mL P60 için) soğuk PBS ile aktarın. Parçaları küçük makas (Şekil 1B) kullanarak daha küçük parçalar halinde kesin. 1 mg/mL collagenase B Hank'in dengeli tuz solüsyonu içinde (HBSS) seyreltilmiş bir damla ekleyin ve küçük parçalar steril jilet (Şekil 1 c) ile iyice kıyma.</li>
</ol>2. sindirim
<ol><li>10 mL (P60 için 2.5 mL) 1 mg/mL collagenase B çözümü adım 1.6 yemek için ekleyin.</li>
	<li>Kıyılmış kalp parçalar halinde bir eğik (yaklaşık 30 °) içeren collagenase B çözüm koymak 37 ° C kuluçka (Şekil 1 d) P100 (veya P60).</li>
	<li>En fazla 30 dk kıyılmış kalp adet kuluçkaya; Art arda onları kuluçka (Şekil 1E) sırasında bir Pasteur pipet her 10 min geçen lunaparkçı. Not: Bu, toplam adım 1.3 için kuluçka 30 dk aşmayacak şekilde önemlidir.</li>
</ol>3. filtrasyon
<ol><li>Soğuk HBSS %2 ile desteklenmiş, 10 mL (5 mL P60 için) eklemek FBS kıyılmış ve homojenize kalbi paramparça. Not: HBSS % 2 FBS quenches collagenase B aktivite ile desteklenmiştir.</li>
	<li>Sindirilmemiş doku ve 470 x g , santrifüj (RT) (Şekil 1F, sarı filtreleri) Oda sıcaklığında 5 min için kaldırmak için 100 µm filtresi ile kalp adet filtre.</li>
	<li>Süpernatant atın ve Pelet 5 mL (P60 için 3 mL) kırmızı kan hücre lizis arabellek resuspend ve zaman zaman buz üzerinde sallayarak ile 5 min için Pelet kuluçkaya.</li>
	<li>10 mL (5 mL P60 için) PBS (lizis reaksiyonu önlemek için) eklemek ve kalan cardiomyocytes (Şekil 1F, mavi filtreler) dahil olmak üzere büyük hücreleri dışlamak için 40 µm filtreden örnek filtre.</li>
	<li>Santrifüj tüpü, 470 x g (olmadan fren) RT, 5 min için kapasitesi. Süpernatant atmak ve pelet 1 mL % 10 da dahil olmak üzere DMEM resuspend FBS.</li>
	<li>Bir aliquot bir hemasitometre ile hücreleri saymak. Hücrelerin % 10 da dahil olmak üzere DMEM ile resuspend FBS, 1 x 106 hücre/mL bir son hücre konsantrasyonu amaçlayan. Not: Yaklaşık 5 x 106 cardiomyocyte ve eritrosit tükenmiş hücreleri fare tahmin edilebilir.</li>
	<li>Hücreleri iki tüpler (Şekil 2) içine dağıtmak: Höchst 33342 verapamil ile; boyama için 1,5 mL tüp AEkle tüp B, Höchst 33342 boyama için 18,5 mL ekleyin ve leke ve akış sitometresi tarafından (adım 4.1 ve 4.2) kardiyak SP hücreleri sıralamak için devam edin.</li>
</ol>4. kardiyak SP hücreleri tarafından akış sitometresi sıralanması
Not: Verapamil Höchst sızma tedavisine direnç (MDR) ABC ışınlama aktivitesi engelleyerek engeller. Höchst 33342 yaşayan hücrelerde DNA içeriği ile ilişkili olan gibi hücre döngüsü algılamak için kullanılan bir DNA'ya bağlanıcı boya var. Höchst-33342-ekstrüzyon hücreler her iki emisyon kanal Höchst düşük bölümünde görünür (450 nm, Höchst mavi; 650 nm, Höchst kırmızı), diğer bir deyişle, bir kenara Höchst-adı "yan nüfusları" vererek istinat "ana nüfus",. SP hücreler hücreleri yaratıcı özellikleri ile zenginleştirilmiş ve kökenlerinin dayanıklı ABC taşıyıcılar (MDR1 ve ABCG2 gibi) yüksek bir ifade gösterir. Höchst 33342 iletişim kuralı aşağıdaki bölümleri için Höchst olarak bulunmakta. Işığa duyarlı malzemeler için ideal sonuçları korumak önemlidir.
<ol><li>
Verapamil ile Höchst ile boyama
	<ol>
<li>Verapamil (ile son bir konsantrasyon 83,3 µM) ve Höchst (5 µg/106 hücre son bir konsantrasyon ile) hücre ekleyin. Tüp Aiçin Verapamil ve Höchst tüp Biçin sadece Höchst kullanın. 90 dakika (37 ° C'de) bir su banyosunda kuluçkaya ve tüpler her 20 dk (Şekil 1G) dönmek.</li>
		<li>470 x g RT. atma süpernatant, 5 min için de tüpler santrifüj kapasitesi ve her Pelet HBSS (1 x 106 hücre/mL) resuspend.</li>
		<li>1.5 mL aliquot tek stainings ve tüp B (Şekil 2) negatif kontrol için al: (i) floresein isothiocyanate (FITC)-Birleşik anti-ani kalp durması-1; (II) allophycocyanin (APC)-Birleşik anti-CD31; (III) nonstained hücreleri (negatif kontrol). Not: İzotip denetimleri burada yalıtım Protokolü ayarlamak için kullanılır.</li>
		<li>A ve B kanalları ve 470 x g RT, 5 min için de tek boyama ve negatif kontrol aliquots Höchst ve verapamil yıkama için santrifüj kapasitesi.</li>
		<li>Süpernatant atmak ve granül tüp A ve (III) HBSS 250 µL negatif kontrol resuspend ve sıralama kadar buz karanlıkta tut.</li>
		<li>Tüp B Pelet HBSS 200 µL ve Pelet (ı, II), HBSS 100 µL tek boyama aliquots resuspend. FITC Birleşik anti-ani kalp durması-1 (0.6 µg/107 hücreleri) ve APC Birleşik anti-CD31 (0,25 µg/107 hücreleri) ekleyin. Buz üzerinde 30 dk için granül kuluçkaya ve onları zaman zaman karanlıkta sallamak.</li>
		<li>HBSS 2 mL tüpler için ekleyin. 470 x g RT., 5 min için de tüpler santrifüj kapasitesi</li>
		<li>Süpernatant atın ve 1 mL HBSS ve yukarıda olarak santrifüj ile tüm parçaları resuspend. Supernatants atın. Tek boyama aliquots Pelet HBSS 200 µL içinde resuspend. Tüp B Pelet HBSS (20 x 106 hücre/mL) resuspend.</li>
		<li>Buz üzerinde örnekleri tutmak ve sıralama kadar ışıktan korunan.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Akış sitometresi ile sıralama
	<ol>
<li>Steril 1,5 mL tüpler 500 µL % 2 de dahil olmak üzere HBSS ile sıralama hazırlamak FBS.</li>
		<li>Ölü hücreleri dışlamak için 7-aminoactinomycin D (7-AAD) (0.15 µg/106 hücreleri) 10 dakika buzda hücrelerle leke.</li>
		<li>Aşağıdaki ayarları kullanarak kalp SP sıralamak: 350 nm (UV) uyarma kullanarak Höchst heyecanlandırmak, toplamak 450/50 nm bant geçiren filtresi (Höchst mavi) ve 670/30 nm bant geçiren filtresi (Höchst kırmızı) ile floresan emisyon ve 100 µm meme boyutunu ve basınç kullanın 15 psi.</li>
		<li>5 x 105 olaylar için sıralama örnekleri ve negatif kontrol, verapamil kontrol ve tek boyama için 1 x 105 olayları analiz için kayıt örnekleri. Not: SP olduğunu yaklaşık % 0.5 - kalp %2 (Şekil 1 H) ama olabilir laboratuvarları ve yalıtır arasında değişmektedir. Ani kalp durması-1+/CD31- kesir % 1-11 toplam kalp SP (Şekil 1I) % civarındadır ancak laboratuvarları ve yalıtır arasında değişebilir. Ani kalp durması-1+/CD31- SP-TBM'leri SP-TBM'leri iletişim kuralı aşağıdaki bölümleri için olarak yazılır.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. birincil izole SP-TBM'leri kültürünün
Not: Bu protokol için medya üç farklı türde kullanılmıştır. Onlar orta 1 (Noseda vd.göre) denir 8, Orta 2 ve orta 3 ve are açıklanan kendi kompozisyon ile ilgili Malzemeler tablo .
<ol><li>1-37 ° C kullanmadan önce Orta kadar sıcak ve sakin santrifüj ile 4 ° c 4 ° C ve 470 x g 6 min için sıralama tüpler santrifüj kapasitesi ve orta 1 hücrelerde resuspend.</li>
	<li>Hücreleri orta 1 4 mL ile gaz geçirgen bir P60 yemek koymak. Hücreleri % 70-%80 izdiham gelinceye orta her 3 d değiştirin. Not: Adım 5.2 yaklaşık 2-3 hafta sürebilir.</li>
</ol>6. genişleme ve SP-TBM'leri farklılaşma
<ol><li>
Hücre kültürü
	<ol>
<li>3 x 105 SP-TBM'leri orta 1'bir T75 şişesi 8 ml kültür.</li>
		<li>SP-TBM'leri %5 CO2 37 ° C'de % 70-%80 izdiham kadar her 2-3 d orta değişen kuluçkaya. Not: Cep numarasını kullanılan TBM'leri türünü, katlama zaman ve hücre boyutunu göre değiştirilmesi gerekir.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
SP-TBM büyüme ve canlılığı farklı serum konsantrasyonları altında
	<ol>
<li>Kültür T75 şişeler 8 mL orta 1 ile 2-3 d için SP-TBM'ler. Dikkatli bir şekilde orta Aspire edin ve sıcak (37 ° C) HBSS yavaşça 5 mL ile durulayın.</li>
		<li>Tripsin-EDTA 5 mL 5 min hücre kuluçka için hücrelerle tedavi, orta tripsin etkinliği durdurmak için 1 5 mL ekleyin ve hücre süspansiyon 15 mL tüp aktarın.</li>
		<li>470 x g RT., 5 min için de hücreleri santrifüj kapasitesi</li>
		<li>Orta 1 veya orta 2'yi (lineage indüksiyon orta) ve plaka 2.5 x 105 SP-TBM'leri P60 yemekleri ile farklı serum konsantrasyonları içeren orta 3 mL hücrelerde resuspend.</li>
		<li>Orta Orta 1 veya orta 2 kültür 2 d sonra adım 6.2.4 ölü hücreleri koleksiyonuna bir 15 mL tüp için çanak toplamak.</li>
		<li>Trypsinize olduğu gibi adım 6.2.2 yapışık hücreleri ve hücre süspansiyon adım 6.2.5 15 mL tüp içine toplamak. 840 x g RT., 5 min için de hücreleri santrifüj kapasitesi</li>
		<li>Süpernatant Aspire edin ve hücre sayımı için 1 mL orta 1 veya orta 2 ekleyin. SP-TBM'leri ile trypan mavi (% 0,4) ve Kont trypan mavi pozitif (ölü) ve trypan mavi-negatif () hücrelerin leke. Not: Hücre canlılığı (adım 6.2.7) Toplam cep numarası ile ilgili olarak trypan-mavi negatif hücre sayı olarak verilir.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
İndüksiyon endotel farklılaşma
	<ol>
<li>(6-de) kültür plaka 10 µg/mL laminin (LN) veya fibronektin (FN) ile precoat.<ol>
<li>10 µg/mL LN veya FN ile F12 Orta (veya PBS) içeren bir substrat çözeltisi olun. Her şey için 2 mL substrat çözeltisi ekleyin. 37 ° C'de 30 dk plaka korumak</li>
			<li>Plaka çözümden Aspire edin ve istimal o kadar her şey için PBS 2 mL ekleyin.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Adım 6.1.2 hücrelerden ortamından Aspire edin, yavaşça 5 mL sıcak (37 ° C) HBSS yıka, onları tripsin-EDTA 5 mL 5 min hücre kuluçka için ile tedavi, orta tripsin etkinliği durdurmak için 1 5 mL ekleyin ve hücre süspansiyon 15 mL tüp aktarın.</li>
		<li>470 x g RT. aspiratı süpernatant, 5 min için de hücreleri santrifüj kapasitesi ve Orta 2 hücre sayımı için ekleyin.</li>
		<li>Başına tohum 8 x 104 hücre Orta 2 3 mL ile kaplı plaka üzerinde iyi ve 20-24 h. değişiklik orta için 37 ° C'de orta 3 için 3 mL devam et. Not: Düşük serum konsantrasyonu içeren orta kullanmanızı öneririz — ve takviyeleri olmadan — ilk 20-24 h için. Biz kullanma önerilen < % 60 cep izdiham (yani, adım 6.3.4 cep numarası vardır bağlı olarak hücre boyutu ve büyüme hızı ayarlanabilir).</li>
		<li>21 d için hücreleri kültür ve her 3 d orta değiştirin.</li>
		<li>Onları von Willebrand gibi endotel bir marker ile boyama farklılaşmış hücreler endotel doğası doğrulayın faktörü (vWF) ve performans gösteren floresans mikroskobu.<ol>
<li>PBS 1 mL hücrelerle yıkama ve % 3.7 formaldehit RT. 2 min için hücreleri tamir</li>
			<li>30 dk için %0,1 Triton X GKD2O (veya PBS) içeren hücreleri permeabilize ve % 10 keçi serum RT. 1 h için ile blok</li>
			<li>Anti-von Willebrand faktör antikor (1: 100) 4 ° C'de 48 h hücrelerle kuluçkaya</li>
			<li>3 hücreleri yıkama x ile PBS, 1 mL 10 dk her zaman için. Onları karanlıkta RT, 1 h için Alexa Fluor 546 keçi Anti-tavşan ikincil antikor ile (1:500) kuluçkaya.</li>
			<li>10 dk her, yıkama tekrar 3 x 1 mL PBS ile. Karanlıkta RT, 5 min için 4'6-diamidino-2-phenylindole, dihydrochloride (DAPI; 1:500) ile hücre çekirdeği leke.</li>
			<li>3 hücreleri yıkama x, her, 5 min için PBS 1 mL ile. Hücreleri dağ ve onları 4 ° C'de depolayın Not: Adım 6.1 ve 6,3 kodlamayla koşulları (substrat, orta, tamamlayıcı reaktifler ve FBS konsantrasyon) Şekil 3' te açıklanmıştır.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Tüp oluşumu tahlil
	<ol>
<li>Bir membran matris (Örneğin, Matrigel, bundan böyle matris anılacaktır) hazırlamak plaka.<ol>
<li>4 ° C'de matris gecede çözülme.</li>
			<li>Kat 100 µL buz Matrix ile bir 96-şey plaka. Not: Herhangi bir kabarcıklar matris önlemek önemlidir. Tabakları matrisin jellification önlemek için buz kaplı olması gerek.</li>
			<li>Plaka için 30 dk 37 ° C'de korumak.</li>
		</ol>
</li>
		<li>(Adım 6.3.5 tamamlandıktan sonra) hücreleri ortamından Aspire, yavaşça 5 mL sıcak (37 ° C) HBSS de hücrelerle durulama ve hücre kuluçka 5 min için tripsin-EDTA ile tedavi. Orta tripsin etkinliğini durdurur ve hücre süspansiyon 15 mL tüp aktarmak için 3 ekleyin.</li>
		<li>470 x g RT. aspiratı süpernatant, 5 min için de hücreleri santrifüj kapasitesi, 1 mL orta 3 ve damlalıklı yavaşça ekleyin.</li>
		<li>Hücreleri bir 35 µm hücre süzgeç ile filtre hücreleri toplanır.</li>
		<li>Hücreleri saymak ve 2 x 103 4 x 103 hücreleri orta 3 100 µL her matris kaplı de temel olarak belirler. Plaka 16 h hücre kuluçka 37 ° C'de tutun.</li>
		<li>Alan parlak mikroskop vasıl 2 X büyütme ile fotoğrafını çek. Not: eksik bir trypsinization söz konusu olduğunda en fazla 7-8 dk tripsin-EDTA için pozlama süresi uzatmak.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Beltrami, A. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+cardiac+stem+cells+are+multipotent+and+support+myocardial+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Adult cardiac stem cells are multipotent and support myocardial regeneration.</a> Cell. 114 (6), 763-776 (2003).</li>
<li>Hierlihy, A. M., Seale, P., Lobe, C. G., Rudnicki, M. A., Megeney, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+post-natal+heart+contains+a+myocardial+stem+cell+population%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+Letters%22%5BJournal%5D)">The post-natal heart contains a myocardial stem cell population.</a> FEBS Letters. 530 (1-3), 239-243 (2002).</li>
<li>Sandstedt, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Left+atrium+of+the+human+adult+heart+contains+a+population+of+side+population+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Basic+Research+in+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Left atrium of the human adult heart contains a population of side population cells.</a> Basic Research in Cardiology. 107 (2), 255(2012).</li>
<li>Bolli, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+stem+cells+in+patients+with+ischaemic+cardiomyopathy+%28SCIPIO%29%3A+initial+results+of+a+randomised+phase+1+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Cardiac stem cells in patients with ischaemic cardiomyopathy (SCIPIO): initial results of a randomised phase 1 trial.</a> Lancet. 378 (9806), 1847-1857 (2011).</li>
<li>Makkar, R. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracoronary+cardiosphere-derived+cells+for+heart+regeneration+after+myocardial+infarction+%28CADUCEUS%29%3A+a+prospective%2C+randomised+phase+1+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Intracoronary cardiosphere-derived cells for heart regeneration after myocardial infarction (CADUCEUS): a prospective, randomised phase 1 trial.</a> Lancet. 379 (9819), 895-904 (2012).</li>
<li>Wu, S. M., Chien, K. R., Mummery, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Origins+and+fates+of+cardiovascular+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Origins and fates of cardiovascular progenitor cells.</a> Cell. 132 (4), 537-543 (2008).</li>
<li>Smits, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+cardiomyocyte+progenitor+cells+differentiate+into+functional+mature+cardiomyocytes%3A+an+in+vitro+model+for+studying+human+cardiac+physiology+and+pathophysiology%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Human cardiomyocyte progenitor cells differentiate into functional mature cardiomyocytes: an in vitro model for studying human cardiac physiology and pathophysiology.</a> Nature Protocols. 4 (2), 232-243 (2009).</li>
<li>Noseda, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PDGFRalpha+demarcates+the+cardiogenic+clonogenic+Sca1%2B+stem%2Fprogenitor+cell+in+adult+murine+myocardium%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">PDGFRalpha demarcates the cardiogenic clonogenic Sca1+ stem/progenitor cell in adult murine myocardium.</a> Nature Communications. 6, 6930(2015).</li>
<li>Linke, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cells+in+the+dog+heart+are+self-renewing%2C+clonogenic%2C+and+multipotent+and+regenerate+infarcted+myocardium%2C+improving+cardiac+function%5BTitle%5D)+AND+%22Proceeding+of+the+National+Acadademy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Stem cells in the dog heart are self-renewing, clonogenic, and multipotent and regenerate infarcted myocardium, improving cardiac function.</a> Proceeding of the National Acadademy of Sciences of the United States of America. 102 (25), 8966-8971 (2005).</li>
<li>El-Mounayri, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serum-free+differentiation+of+functional+human+coronary-like+vascular+smooth+muscle+cells+from+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Research%22%5BJournal%5D)">Serum-free differentiation of functional human coronary-like vascular smooth muscle cells from embryonic stem cells.</a> Cardiovascular Research. 98 (1), 125-135 (2013).</li>
<li>Ellison, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+c-kit%28pos%29+cardiac+stem+cells+are+necessary+and+sufficient+for+functional+cardiac+regeneration+and+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Adult c-kit(pos) cardiac stem cells are necessary and sufficient for functional cardiac regeneration and repair.</a> Cell. 154 (4), 827-842 (2013).</li>
<li>Oh, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+progenitor+cells+from+adult+myocardium%3A+homing%2C+differentiation%2C+and+fusion+after+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Proceeding+of+the+National+Acadademy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Cardiac progenitor cells from adult myocardium: homing, differentiation, and fusion after infarction.</a> Proceeding of the National Acadademy of Sciences of the United States of America. 100 (21), 12313-12318 (2003).</li>
<li>Martin, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Persistent+expression+of+the+ATP-binding+cassette+transporter%2C+Abcg2%2C+identifies+cardiac+SP+cells+in+the+developing+and+adult+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Persistent expression of the ATP-binding cassette transporter, Abcg2, identifies cardiac SP cells in the developing and adult heart.</a> Developmental Biology. 265 (1), 262-275 (2004).</li>
<li>Pfister, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD31-+but+Not+CD31%2B+cardiac+side+population+cells+exhibit+functional+cardiomyogenic+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">CD31- but Not CD31+ cardiac side population cells exhibit functional cardiomyogenic differentiation.</a> Circulation Research. 97 (1), 52-61 (2005).</li>
<li>Pelekanos, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comprehensive+transcriptome+and+immunophenotype+analysis+of+renal+and+cardiac+MSC-like+populations+supports+strong+congruence+with+bone+marrow+MSC+despite+maintenance+of+distinct+identities%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Research%22%5BJournal%5D)">Comprehensive transcriptome and immunophenotype analysis of renal and cardiac MSC-like populations supports strong congruence with bone marrow MSC despite maintenance of distinct identities.</a> Stem Cell Research. 8 (1), 58-73 (2012).</li>
<li>Laugwitz, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postnatal+isl1%2B+cardioblasts+enter+fully+differentiated+cardiomyocyte+lineages%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Postnatal isl1+ cardioblasts enter fully differentiated cardiomyocyte lineages.</a> Nature. 433 (7026), 647-653 (2005).</li>
<li>Bu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+ISL1+heart+progenitors+generate+diverse+multipotent+cardiovascular+cell+lineages%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Human ISL1 heart progenitors generate diverse multipotent cardiovascular cell lineages.</a> Nature. 460 (7251), 113-117 (2009).</li>
<li>Smith, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+characterization+of+resident+endogenous+c-Kit%2B+cardiac+stem+cells+from+the+adult+mouse+and+rat+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Isolation and characterization of resident endogenous c-Kit+ cardiac stem cells from the adult mouse and rat heart.</a> Nature Protocols. 9 (7), 1662-1681 (2014).</li>
<li>Matsuura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+cardiac+Sca-1-positive+cells+differentiate+into+beating+cardiomyocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Adult cardiac Sca-1-positive cells differentiate into beating cardiomyocytes.</a> Journal of Biological Chemistry. 279 (12), 11384-11391 (2004).</li>
<li>Liang, S. X., Tan, T. Y., Gaudry, L., Chong, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differentiation+and+migration+of+Sca1%2B%2FCD31-+cardiac+side+population+cells+in+a+murine+myocardial+ischemic+model%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Differentiation and migration of Sca1+/CD31- cardiac side population cells in a murine myocardial ischemic model.</a> International Journal of Cardiology. 138 (1), 40-49 (2010).</li>
<li>Vicinanza, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+cardiac+stem+cells+are+multipotent+and+robustly+myogenic%3A+c-kit+expression+is+necessary+but+not+sufficient+for+their+identification%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+and+Differentiation%22%5BJournal%5D)">Adult cardiac stem cells are multipotent and robustly myogenic: c-kit expression is necessary but not sufficient for their identification.</a> Cell Death and Differentiation. 24 (12), 2101-2116 (2017).</li>
<li>Galli, S. J., Tsai, M., Wershil, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+c-kit+receptor%2C+stem+cell+factor%2C+and+mast+cells.+What+each+is+teaching+us+about+the+others%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">The c-kit receptor, stem cell factor, and mast cells. What each is teaching us about the others.</a> American Journal of Pathology. 142 (4), 965-974 (1993).</li>
<li>Konig, A., Corbacioglu, S., Ballmaier, M., Welte, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Downregulation+of+c-kit+expression+in+human+endothelial+cells+by+inflammatory+stimuli%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Downregulation of c-kit expression in human endothelial cells by inflammatory stimuli.</a> Blood. 90 (1), 148-155 (1997).</li>
<li>Ogawa, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+and+function+of+c-kit+in+hemopoietic+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">Expression and function of c-kit in hemopoietic progenitor cells.</a> Journal of Experimental Medicine. 174 (1), 63-71 (1991).</li>
<li>Bradfute, S. B., Graubert, T. A., Goodell, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Roles+of+Sca-1+in+hematopoietic+stem%2Fprogenitor+cell+function%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Hematology%22%5BJournal%5D)">Roles of Sca-1 in hematopoietic stem/progenitor cell function.</a> Experimental Hematology. 33 (7), 836-843 (2005).</li>
<li>Goodell, M. A., Brose, K., Paradis, G., Conner, A. S., Mulligan, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+functional+properties+of+murine+hematopoietic+stem+cells+that+are+replicating+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">Isolation and functional properties of murine hematopoietic stem cells that are replicating in vivo.</a> Journal of Experimental Medicine. 183 (4), 1797-1806 (1996).</li>
<li>Pfister, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+the+ATP-binding+cassette+transporter+Abcg2+in+the+phenotype+and+function+of+cardiac+side+population+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Role of the ATP-binding cassette transporter Abcg2 in the phenotype and function of cardiac side population cells.</a> Circulation Research. 103 (8), 825-835 (2008).</li>
<li>Messina, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+expansion+of+adult+cardiac+stem+cells+from+human+and+murine+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Isolation and expansion of adult cardiac stem cells from human and murine heart.</a> Circulation Research. 95 (9), 911-921 (2004).</li>
<li>Davis, D. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Validation+of+the+cardiosphere+method+to+culture+cardiac+progenitor+cells+from+myocardial+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Validation of the cardiosphere method to culture cardiac progenitor cells from myocardial tissue.</a> PLoS One. 4 (9), e7195(2009).</li>
<li>Carr, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiosphere-derived+cells+improve+function+in+the+infarcted+rat+heart+for+at+least+16+weeks--an+MRI+study%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Cardiosphere-derived cells improve function in the infarcted rat heart for at least 16 weeks--an MRI study.</a> PLoS One. 6 (10), e25669(2011).</li>
<li>Martens, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rhesus+monkey+cardiosphere-derived+cells+for+myocardial+restoration%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotherapy%22%5BJournal%5D)">Rhesus monkey cardiosphere-derived cells for myocardial restoration.</a> Cytotherapy. 13 (7), 864-872 (2011).</li>
<li>Cheng, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relative+roles+of+CD90+and+c-kit+to+the+regenerative+efficacy+of+cardiosphere-derived+cells+in+humans+and+in+a+mouse+model+of+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Heart+Association%22%5BJournal%5D)">Relative roles of CD90 and c-kit to the regenerative efficacy of cardiosphere-derived cells in humans and in a mouse model of myocardial infarction.</a> Journal of the American Heart Association. 3 (5), e001260(2014).</li>
<li>Mochizuki, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polo-Like+Kinase+2+is+Dynamically+Regulated+to+Coordinate+Proliferation+and+Early+Lineage+Specification+Downstream+of+Yes-Associated+Protein+1+in+Cardiac+Progenitor+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Heart+Association%22%5BJournal%5D)">Polo-Like Kinase 2 is Dynamically Regulated to Coordinate Proliferation and Early Lineage Specification Downstream of Yes-Associated Protein 1 in Cardiac Progenitor Cells.</a> Journal of the American Heart Association. 6 (10), (2017).</li>
<li>Pfister, O., Oikonomopoulos, A., Sereti, K. I., Liao, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+resident+cardiac+progenitor+cells+by+Hoechst+33342+staining%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Isolation of resident cardiac progenitor cells by Hoechst 33342 staining.</a> Methods in Molecular Biology. 660, 53-63 (2010).</li>
<li>Discher, D. E., Mooney, D. J., Zandstra, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+factors%2C+matrices%2C+and+forces+combine+and+control+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Growth factors, matrices, and forces combine and control stem cells.</a> Science. 324 (5935), 1673-1677 (2009).</li>
<li>Plaisance, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiomyocyte+Lineage+Specification+in+Adult+Human+Cardiac+Precursor+Cells+Via+Modulation+of+Enhancer-Associated+Long+Noncoding+RNA+Expression%5BTitle%5D)+AND+%22JACC%3A+Basic+to+Translational+Science%22%5BJournal%5D)">Cardiomyocyte Lineage Specification in Adult Human Cardiac Precursor Cells Via Modulation of Enhancer-Associated Long Noncoding RNA Expression.</a> JACC: Basic to Translational Science. 1 (6), 472-493 (2016).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Bu iletişim kuralı avantajları:
Bu iletişim kuralı bir TBM endotel farklılaşma tekniği sağlar. Bulduğumuz bir düşük serum konsantrasyonu ve düşük hücre yoğunluğu endotel farklılaşma, mademki LN FN bu koşullar altında daha bir daha uygun substrat kanıtladı verimliliğini artırabilirsiniz. Biz TBM'leri iki ayrı türü kullanılır: fare hangi izole ve genişletilmiş bir hücre satırı benzeri şekilde ve fare SP-TBM'leri kullanılan, TBM,. Özellikle, protokol her iki türü için uygulanabilir TBM'leri. mevcut ...

Son yıllarda yapılan çalışmalarda yetişkin memeli kalp1,2,3' te ikamet kardiyak progenitör hücre (TBM) varlığını desteklemek ve TBM'leri Kalp zedelenmesini4sonra, hücre tedavisi için yararlı bir kaynak olabilir 5. Buna ek olarak, genişletilmiş TBM'leri uyuşturucu tarama için verimli bir model sağlayabilir ve modellerinin nadir kardiyomiyopatiler hastalarda veya ilgili hastalık izole zaman hastalık mekanizmaları araştırma6,7.
Yetişkin yürekten izole TBM'leri sahip kök/progenitor hücre özellikleri1,2,3,8 multipotent, oldukları gibi klonojenik progenitör mobilizasyonu yapar, ve kendini yenilemesinin kapasitesine sahiptir. Ancak, birçok farklı (alt) nüfus dahil olmak üzere, farklı yüzey marker profillerini, örneğin, c-kit, ani kalp durması-1 ve diğerleri, sergilenmesi veya farklı yalıtım teknikleri (Tablo 1) tarafından alınan TBM'leri vardır. Bazı kültür ve farklılaşma protokollerine kurulan1,2,8,9,10,11,12oldunuz. 13,14,15,16,17,18. Bu protokoller çoğunlukla büyüme faktörü ve hangi kültürü çalışmalarının amacı göre ayarlanır ve bunun sonuçları ve sonuçları da farklılaşma verimliliği dahil olmak farklılıkları için açabilir serum içerik ile ilgili olarak değişir.
İmleç tabanlı yalıtım teknikleri:
TBM bir belirli yüzey marker ifade1,2,8,9,10,11,12,13 tarihinde bağlı izole olabilir ,14,15,16,17,18. Önceki çalışmalar, c-kit ve ani kalp durması-1 ikamet TBM'leri1,11,14,19,20yalıtmak için en iyi işaretleri olabilir öneririz. Bu işaretleri hiçbiri TBM için gerçekten özel olduğundan, kombinasyonları farklı işaretleri genellikle uygulanır. Örneğin, c-kit21seviyesinin düşük TBM'ler hızlı ise, c-kit Ayrıca mast hücreleri22, endotel hücreleri23ve hematopoetik kök/progenitor hücreler24de dahil olmak üzere diğer hücre tiplerine göre ifade edilir. Ek bir sorun tüm işaretleri tüm türler arasında ifade edilir olmasıdır. Ani kalp durması-1, fare ama insan25içinde ifade için durum böyle. Bu nedenle, yalıtım işaretleri bağımsız iletişim kuralları kullanılarak klinik çalışmalarda ve insan numuneleri kullanılarak çalışmalar içinde görüş-in avantajlı olabilir.
Marker bağımsız yalıtım teknikleri:
TBM tecrit, öncelikle yüzey marker ifade bağımsız olan ama (Ayrıca bkz: Tablo 1) gerektiği gibi belirli işaret-pozitif subfractions ardışık seçime göre rafine birkaç önemli teknikler vardır. (1 yan nüfus (SP) tekniği aslında hematopoetik kök hücre ATP-bağlayıcı kaset (ABC) taşıyıcılar27tarafından sızma DNA boya Höchst 3334226 yeteneği dayanan ilkel bir popülasyondaki karakterize. Kardiyak SP hücreler farklı gruplar tarafından izole ve işaretleri raporları2,8,13,14arasında bazı küçük farklılıklar ile çeşitli ifade etmek için bildirdi. (2) koloni oluşturan birim fibroblast hücreleri (CFU-Fs) başlangıçta belirlediğiniz dayalı mezenkimal stromal hücre (MSC) üzerinde-fenotip gibi. İzole MSCs koloni oluşumu ikna etmek için bulaşık sırası kültürlü. Bu koloni oluşturan-MSC benzeri CFU-Fs yetişkin yürekten ayrılmış olabilir ve kardiyak soy15ayırt etmek yeteneğine sahiptirler. (3) Cardiosphere kaynaklı hücreler (CDC) doku biyopsisi yetiştirilen hücre kümeleri elde tek hücrelerdir veya28,29,30,31explants. Son zamanlarda bu çoğunlukla CD105 gösterildi+/CD90-/c-kit- hücre kesir sergileyen cardiomyogenic ve rejeneratif potansiyel32.
Burada, SP-TBM'leri fareler izole kullanarak, biz bir protokol endotel lineage önceki çalışmada sıçan TBM'leri ve fare SP-TBM'leri33verimli indüksiyon için sağlar. Protokol kültürüne özgü uyarlamalar ve genişleme tekniği ile ilgili hücre yoğunluğu, orta sınıf ve substrat serum içeriğini içerir. Sadece fare SP-TBM'leri uygulanabilir ancak farklı TBM'leri amaç için bir endotel kaydedilmiş bir TBM yükseltecek üzerinden bir kader anahtarı ikna etmek için o içinde görüş-in bu hücreler veya kullanımları için mekanik vitro çalışmalar nakli olmak.

<table><tbody><tr><td><güçlü > Kültür ortamı< / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Iscove'un Modifiye Dulbecco'nun Ortamı (IMDM)</td> <td>ThermoFisher</td> <td># 12440</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco'nun Modifiye Kartal Ortamı (DMEM) / Besin Karışımı F12 Jambon</td><td>Merck</td><td>#D8437</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin-Streptomisin (P / S)</td> <td>ThermoFisher</td> <td># 15140122</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Sığır Serum (FBS)Hiklon</td><td></td><td>#SH30071</td><td>%3.5 (soy indüksiyonu için %0.1)</td></tr><tr><td>L-Glutamin&nbsp;</td><td>ThermoFisher</td><td>#25030</td><td>Nihai konsantrasyon 2 mM</td></tr><tr><td>Glutatyon</td><td>Merck</td><td>#G6013</td><td></td></tr><tr><td>Rekombinant İnsan Epidermal Büyüme Faktörü (EGF)</td><td>Peprotech</td><td>#AF-100-15</td><td></td></tr><tr><td>Rekombinant Temel Fibroblast Büyüme Faktörü (FGF)</td><td>Peprotech</td><td>#AF-100-18B</td><td></td></tr><tr><td>B27 Takviyesi</td><td>ThermoFisher</td><td>#17504044</td><td></td></tr><tr><td>Kardiyotrofin 1&nbsp;</td><td>Peprotech</td><td>#250-25</td><td></td></tr><tr><td>Trombin</td><td>Diagontech AG, İsviçre</td><td>#100-125</td><td></td></tr><tr><td>Hanks'in Dengeli Tuz Çözeltisi (HBSS) CaCl2(-), MgCl2(-)</td><td>ThermoFisher</td><td>#14170</td><td></td></tr><tr><td>%0.05 Tripsin-EDTA</td><td>ThermoFisher</td><td>#25300</td><td></td></tr><tr><td>T75 Şişesi</td><td>Sarstedt</td><td>#83.3911</td><td></td></tr><tr><td>Endotelyal farklılaşma&nbsp; &nbsp; </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Endotel Hücre Büyüme Ortamı (EGM)-2 BulletKit</td><td>Lonza</td><td>#CC-3162</td><td></td></tr><tr><td>Ham'ın F-12K (Kaighn'in) Orta</td><td>ThermoFisher</td><td>#21127</td><td></td></tr><tr><td>Laminin&nbsp;</td><td>Merck</td><td>#L2020</td><td></td></tr><tr><td>Fibronektin&nbsp;</td><td>Merck</td><td>#F4759</td><td>ddH2O</td></tr><tr><td>6 Kuyulu Plaka</td><td>Falcon</td><td>#353046</td><td></td></tr><tr><td>Formaldehit Çözeltisinde</td><td>Seyreltin Merck</td><td>#F1635</td><td>PBS'de Diluite 1:10 (% 3.7 nihai konsantrasyon)</td></tr> <tr><td>Triton X-100</td><td>Merck</td> <td># 93420</td><td>ddH2O</td></tr><tr><td>Normal Keçi Serumu içinde% 0.1 (% 10)</td> <td>ThermoFisher</td><td>#50062Z</td><td></td></tr><tr><td>Anti-von Willebrand Faktör antikoru</td><td>Abcam</td><td>#ab6994</td><td>1:100 in %10 keçi</td></tr><tr><td>serumu Keçi anti-Tavşan IgG, Alexa Fluor 546</td><td>ThermoFisher</td><td>#A11010</td><td>1:500 in %10 keçi serumu</td></tr><tr><td>4 ',6-diamidino-2-fenilindol, dihidroklorür (DAPI)</td><td>ThermoFisher</td><td>#62247</td><td>1:500 içinde ddH2O&nbsp;</td></tr><tr><td>SlowFade Antifade Kiti</td><td>ThermoFisher</td><td>#S2828</td><td></td></tr><tr><td>BX63 geniş alan mikroskobu</td><td>Olympus</td><td></td><td></td></tr><tr><td><güçlü>Tüp oluşumu</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>96 Kuyu Plakası</td><td>Şahin</td> <td># 353072</td><td></td></tr><tr><td>Süzgeç Kapaklı 5 ml Yuvarlak Alt Boru</td><td>Falcon</td> <td># 352235</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel Büyüme Faktörü Azaltılmış</td><td>Corning</td> <td># 354230</td><td></td></tr><tr><td>IX50 geniş alan mikroskobu</td><td>Olympus</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sca-1 + / CD31- kardiyak yan popülasyon izolasyonu34&nbsp; </güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td><güçlü>Reaktifler</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pentobarbital Natrium 50 mg/ml ad usum vet.</td><td>ev hastane eczanesi</td> <td># 9077862</td><td>Çalışma çözeltisi: 200 mg / kg</td></tr><tr><td>Fosfat Tamponlu Salin (PBS) CaCl2 (-), MgCl2 (-)</td> <td>ThermoFisher</td> <td># 20012</td><td></td></tr><tr><td>Hanks'in Dengeli Tuz Çözeltisi (HBSS) CaCl2 (-), MgCl2 (-), fenol kırmızısı (-)</td> <td>ThermoFisher</td> <td># 14175</td><td>HBSS 500 mL +% 2 FBS hazırlayın&nbsp; Kollajenaz B aktivitesini söndürmek için&nbsp;</td></tr><tr><td>Dulbecco'nun Modifiye Eagle's Medium (DMEM) 1g/L D-Glikoz, L-Glutamin, Piruvat</td><td>ThermoFisher</td><td>#331885</td><td>DMEM Hazırlayın +% 10 FBS&nbsp; + 25 mM HEPES + Hoechst stanining</td></tr><tr><td>Penisilin-Streptomisin için P / S&nbsp; (P/S)</td><td>ThermoFisher</td><td>#15140122</td><td></td></tr><tr><td>HEPES 1 M</td><td>ThermoFisher</td><td>#15630080</td><td>Son konsantrasyon 25 mM</td></tr><tr><td>Fetal Sığır Serumu (FBS)</td><td>Hyclone</td><td>#SH30071</td><td></td></tr><tr><td>RBC LysisBuffer (10X)</td><td>BioLegend</td><td>#420301/100mL</td><td>ddH2O'da 1X'e seyreltin ve 0.2 & mikrodan süzün; m filtresi</td></tr><tr><td>Kollajenaz B</td><td>Merck</td> <td># 11088807001</td><td>HBSS'de nihai konsantrasyon 1 mg / mL, 0.2 & mikrodan süzülür; m filtre</td></tr><tr><td>bisBenzimide H33342 Trihidroklorür (Hoechst)</td> <td>Merck</td><td>#B2261</td><td>ddH2O Verapamil-hidroklorür ve nbsp'de 1 mg / mL hazırlayın</td></tr><tr><td>;</td><td>Merck</td><td>#V4629</td><td>Nihai konsantrasyon 83.3 & mikro; M&nbsp;</td></tr><tr><td>APC Sıçan Anti-Fare CD31</td><td>BD Biosciences</td> <td># 551262</td><td>0.25 ve mikro; g / 10 < > 7 hücreleri</td></tr><tr><td>FITC Sıçan Anti-Fare Ly-6A / E (Sca-1)</td> <td>BD Biosciences</td> <td># 557405</td><td>0.6 ve mikro; g / 10 7 hücreleri</td></tr><tr><td>7-Aminoaktinomisin D (7-ADD)</td> <td>ThermoFisher</td><td>#A1310</td><td>0.15 ve mikro; g / 10 < > 6 hücreler</td></tr><tr><td>APC sıçan IgG2a k İzotip Kontrolü</td><td>BD Biosciences</td> <td># 553932</td><td>0.25 ve mikro; g / 107cells</td></tr><tr><td>FITC Sıçan IgG2a k İzotip Kontrolü</td><td>BD Biosciences</td> <td># 554688</td><td>0.6 ve mikro; g/107cells</td></tr><tr><td>Malzeme</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>İğneler 27G</td><td>Terumo</td><td>#NN-2719R</td><td></td></tr><tr><td>İğneler 18G</td><td>Terumo</td><td>#NN-1838S</td><td></td></tr><tr><td>Tek Kullanımlık Şırıngalar 1 mL steril</td><td>CODAN#</td><td>62.1640</td><td></td></tr><tr><td>Transferpipet 3,5 mL</td><td>Sarstedt</td><td>#86.1171.001</td><td></td></tr><tr><td>Hücre Süzgeç 40 ve mikro; m mavi</td><td>BD Biosciences&nbsp;</td><td>#352340</td><td></td></tr><tr><td>Hücre Süzgeci 100 & m sarı</td><td>BD Biosciences</td><td>#352360</td><td></td></tr><tr><td>Lumox Tabağı 50</td><td>Sarstedt</td><td>#94.6077.305</td><td></td></tr><tr><td>Kültür Yemekleri P100</td><td>Corning</td><td>#353003</td><td></td></tr><tr><td>Kültür Yemekleri P60</td><td>Corning</td><td>#353004</td><td></td></tr><tr><td>Mouse</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Line</td><td>Age</strong</td><td>><güçlü > Yetiştirme< / güçlü ></td><td></td></tr> <tr><td>C57BL / 6NRj / erkek</td><td>evde 12 hafta</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>< güçlü > Ürün Adı< / güçlü ></td> <td>< güçlü > Şirket< / güçlü ></td> <td>< güçlü > Katalog No.< / güçlü ></td><td></td></tr> <tr><td>< güçlü > Reaktifler< / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Iscove'un Modifiye Dulbecco'nun Ortamı (IMDM)</td><td>ThermoFisher</td><td>#12440</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco'nun Modifiye Eagle's Medium (DMEM)/Besin Karışımı F12 Jambon</td><td>Merck</td><td>#D8437</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin-Streptomisin&nbsp; (P/S)</td><td>ThermoFisher</td> <td># 15140122</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Sığır Serumu (FBS)</td> <td>Hiklon</td><td>#SH30071</td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamin&nbsp;</td><td>ThermoFisher</td> <td># 25030</td><td></td></tr><tr><td>Glutatyon</td><td>Merck</td><td>#G6013</td><td></td></tr><tr><td>B27 Takviyesi</td><td>ThermoFisher</td> <td># 17504044</td><td></td></tr><tr><td>Rekombinant İnsan Epidermal Büyüme Faktörü (EGF)</td> <td>Peprotech</td><td>#AF-100-15</td><td></td></tr><tr><td>Rekombinant Temel Fibroblast Büyüme Faktörü (FGF)</td> <td>Peprotech</td><td>#AF-100-18B</td><td></td></tr><tr><td>Kardiyotrofin 1 ve nbsp;</td><td>Peprotech</td><td>#250-25</td><td></td></tr><tr><td>Thrombin</td><td>Diagontech AG, İsviçre&nbsp;</td><td># 100-125</td><td></td></tr><tr><td>Endotel Hücre Büyüme Ortamı (EGM) -2 BulletKit</td><td>Lonza</td><td>#CC-3162</td><td></td></tr><tr><td> Ortam bileşimlerine genel bakış. Bu bilgilerden bazıları yukarıda verilenle aynıdır, ancak Ortam 1-3'ün bileşimine göre sıralanmıştır. < / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>< güçlü > Ürün Adı< / güçlü</td> <td>> < güçlü >Orta 1 8 < / güçlü > <</td> <td>güçlü >Orta 2 < / güçlü ></td> <td>< güçlü > Orta 3< / güçlü ></td></tr> <tr><td>< güçlü >Reaktifler< / güçlü ></td> <td>< güçlü > Kültür< / güçlü ></td> <td>< güçlü > Soy indüksiyonu< / güçlü ></td><td>< güçlü > Endotel diff.</td></tr><tr><td>Iscove'un Modifiye Dulbecco's Medium (IMDM)</td><td>35%</td><td>35</td><td></td></tr><tr><td>%Dulbecco'nun Modifiye Eagle's Medium (DMEM)/Besin Karışımı F12 Jambon</td><td>%65%</td><td>65</td><td></td></tr> <tr><td>Penisilin-Streptomisin&nbsp; (P/S)</td><td>%1 %</td><td>1</td><td></td></tr> <tr><td>Fetal Sığır Serumu (FBS)</td><td>%3.5</td> <td>&; % 0.1</td><td></td></tr> <tr><td>L-Glutamin&nbsp;</td><td>2 mM</td><td>2 mM</td><td></td></tr><tr><td>Glutatyon</td><td>0.2 nM</td><td>0.2 nM</td><td></td></tr><tr><td>B27 Takviyesi</td> %<td></td><td></td><td>1.3</td></tr> <tr><td>Rekombinant İnsan Epidermal Büyüme Faktörü (EGF)</td><td>6.5 ng/mL</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Rekombinant Temel Fibroblast Büyüme Faktörü (FGF)</td><td>13 ng/mL</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kardiyotrofin 1&nbsp;</td><td>0.65 ng/mL</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Trombin</td><td>0.0005 U/mL</td><td></td><td>Kite dahil olan tüm gerekli bileşenler</td></tr><tr><td>Endotel Hücre Büyüme Ortamı (EGM)-2 BulletKit</td><td></td><td></td><td>Kite dahil olan tüm gerekli bileşenler</td></tr></tbody></table>

İndüksiyon düşük serum koşullar altında kalp progenitor hücreler endotel farklılaşma

Induction of Endothelial Differentiation in Cardiac Progenitor Cells Under Low Serum Conditions

Kardiyak progenitör hücre (TBM) kalp yeniden oluşturma tamamlandıktan sonra yaralanma için tedavi potansiyeli olabilir. Yetişkin memeli kalbinde, içsel TBM'leri son derece kıt, ama genişletilmiş TBM'leri hücre tedavisi için yararlı olabilir. Yeteneklerini denetimli bir biçimde tanımlanmış ve etkin iletişim kuralları kullanılarak çeşitli kardiyak soy ayırt etmek için onların kullanmak için bir önkoşuldur. Ayrıca, vitro genişleme, üzerine TBM'leri hastalardan izole veya preklinik hastalık modelleri hastalığı mekanizmaları incelenmesi için verimli araştırma araçları sunabilir.
Mevcut çalışmalar farklı işaretleri TBM'leri tanımlamak için kullanın. Ancak, tüm bunların hangi preklinik bazı çalışmalar translasyonel etkisini sınırlar insanlarda, ifade edilir. Ne olursa olsun yalıtım tekniği ve marker ifade tabidir farklılaşma protokolleri için standart genişleme ve TBM astar hücre terapisi amaç için izin verir. Burada biz tarif endotel farklılaşma TBM'leri. fare ve sıçan TBM'leri iki farklı altgrupları kullanarak TBM'leri astar düşük fetal Sığır serum (FBS) konsantrasyon ve düşük hücre yoğunluğu koşullar altında kolaylaştırır, bir daha o laminin olduğunu göstereceğiz fibronektin aşağıdaki protokol altında bu amaçla daha uygun substrat: 2-3 gün içinde takviyeleri de dahil olmak üzere orta multipotency korumak için sonra kültür ve % 3,5 ile FBS, TBM laminin üzerinde numaralı seribaşı < % 60 izdiham ve kültürlü içinde Ek içermeyen orta FBS (% 0,1) düşük konsantrasyonlarda farklılaşma endotel farklılaşma orta önce 20-24 saat ile. TBM türdeş olmayan bir nüfus olduğundan, serum konsantrasyonları ve kuluçka süreleri ilgili TBM subpopulation özelliklerine bağlı olarak ayarlanması gerekebilir. Göz önüne alındığında bu, teknik diğer türleri TBM için de uygulanabilir ve potansiyel ve farklılaşma ve nasıl onlar hastalığı ile ilgili hastalık modellerden izole TBM'leri kullanırken etkilenen mekanizmaları araştırmak için yararlı bir yöntem sağlar.

Fare SP-TBM yalıtım:
Bu çalışmada, biz ise fare TBM'leri sonuçlarından değiştiren ve izni (Şekil 8)33ile önceki bir rapordan eklendi SP fenotip göre izole fare TBM kullanılır.
Hücre çoğalması yüksek ve en düşük hücre yoğunluğu altında ve farklı Serum konsantrasyonları ile:
<p class="jove_content" fo:keep-together.with...

Bu iletişim kuralı bir endotel farklılaşma tekniği kalp progenitör hücreler için açıklar. Bu özellikle serum konsantrasyonu ve hücre tohum yoğunluğu endotel farklılaşma potansiyeli etkilemesi üzerinde duruluyor.

İndüksiyon düşük Serum koşullar altında kalp Progenitor hücreler endotel farklılaşma

Cardiac progenitor cells (CPCs) may have therapeutic potential for cardiac regeneration after injury. In the adult mammalian heart, intrinsic CPCs are ...

Kardiyak progenitor hücrelerinin veya TBM'lerin amplifikasyon üzerine farklılaşması, çoğalan bir aşamadan kararlı bir aşamaya doğru bir faz geçişi gerektirir ve bu protokol CpC'lerde verimli endotel soyu kullanır. Tekniğin en büyük avantajı, çeşitli tekniklere ve farklı türlerden izole edilmiş KBM'ler için geçerli olmasıdır. Bu protokol hücre tedavisi için CpCs terapötik potansiyelini artırmak için kullanılabilir.Ayrıca, farklılaşmanın potansiyellerini ve mekanizmalarını ve bunların kalp hastalığından nasıl etkilendiğini araştırmak için de kullanılabilir. CpC'ler şekil, boyut ve potens açısından farklılık gösteren homojen bir hücre popülasyonudur. Bu nedenle, protokol kullanılan CpCs belirli alt nüfusa göre ayarlanmalıdır.Fareyi anestezi ettikten sonra göğsünü %70 etanol ile silin. Makas kullanarak, torasik boşluğu ortaya çıkarmak için deri ve göğüs duvarı kesti. Kalbi kaldırmak için forseps kullanın ve sonra tabanında kesmek için makas kullanın.Kalbi beş mililitre soğuk PBS içeren bir P60 kültür yemeğine aktarın ve sonra kalbi pompalamak ve kanı boşluklardan çıkarmak için çerofma kullanın. Kalbi beş mililitre soğuk PBS içeren bir P60 kabına yerleştirin ve yıkayın. Atria kaldırmak için küçük makas kullanın, iki uzunlamasına parçalar halinde kalp kesmek, ve buz soğuk PBS beş mililitre onları yıkayın.Küçük makas kullanarak, daha küçük bölümlerhalinde kalp parçaları kesti. Mililitre başına bir miligram konsantrasyonda kollajenaz B içeren hank dengeli tuz çözeltisi bir damla ekleyin ve iyice küçük kalp parçaları kıyma için steril bir jilet kullanın. Sonra, çanak kollajenaz B çözeltisi 2,5 mililitre ekleyin.37 derece santigrat bir kuvöz de 30 derecelik bir açıyla çanak yerleştirin. Kuluçka sırasında her 10 dakikada bir Pasteur pipetinden geçerken, kıyılmış kalp parçalarının en fazla 30 dakika kuluçkaya yatmasına izin verin. İlk olarak, kıyılmış ve homojenize kalp parçaları% 2 FBS ile desteklenen soğuk HBSS beş mililitre ekleyin.100 mikrometrefiltre kullanarak, sindirilmemiş doku kaldırmak için kalp parçaları filtre. Santrifüj 470 kez G ve oda sıcaklığında beş dakika. Supernatant atın ve kırmızı kan hücresi lisis tampon beş mililitre pelet yeniden askıya.Ara sıra sallayarak beş dakika boyunca buz üzerinde kuluçka. Bundan sonra, 10 mililitre PBS ekleyin ve artık kardiyomiyositler de dahil olmak üzere daha büyük hücreleri dışlamak için numuneyi 40 mikrometrelik bir filtreden filtreleyin. 470 kez G ve oda sıcaklığında beş dakika ara vermeden santrifüj.Daha sonra, dmem hücreleri yeniden askıya 10% FBS ile desteklenmektedir, mililitre başına bir milyon hücrenin son hücre konsantrasyonu amaçlayan. Hücreleri boyama ve sıralama için iki tüpe dağıtın, bir tüpe hücre çözeltisinin 1,5 mililitresini ve ikinci tüpe 3,5 mililitre ekleyerek. Hoechst çözeltisi ekleyin ve boya eşit dağıtmak sağlamak ve hücrelerin pıhtılaşmasını önlemek için ara sıra çevirme ile 90 dakika boyunca 37 santigrat derece kuluçka.Yan popülasyon ana nüfusun dışında Hoechst düşük alt sol köşesinde görünür. FACS arsa içinde verapamil ortadan kaybolmak için yan nüfus ister negatif kontrol dayalı tespit edilebilir. Orta 1 ila 37 santigrat derece ısıtın ve santrifüjü 4 santigrat dereceye kadar soğutun.Sıralama tüplerini 470 kez G'de ve dört santigrat derecede altı dakika santrifüj edin. Daha sonra, orta bir hücreleri yeniden askıya alın. Hücreleri, dört mililitre orta litre içeren gaz geçirilebilir bir P60 kabına aktarın.Hücreler her şişede orta bir sekiz mililitre kullanarak T75 şişelerinde iki ila üç gün boyunca hücreler 70 ve %80 Kültür SP-CpC'leri arasında bir araya gelene kadar her üç günde bir ortamı değiştirin. Daha sonra, dikkatle orta aspire ve yavaşça sıcak HBSS beş mililitre ile şişe durulayın. Hücreleri 5 mililitre tripsin EDTA ile %5 karbondioksit le 37 santigrat derecede beş dakika tedavi edin.Daha sonra, tripsin aktivitesini durdurmak için orta bir beş mililitre ekleyin ve 15 mililitrelik bir tüp hücre süspansiyon aktarın. Oda sıcaklığında beş dakika 470 kez G santrifüj. Ardından, orta bir veya orta iki deki hücreleri yeniden askıya alın.P60 tabaklarda hücreleri kaplayın, tabak başına 250, 000 SP-CPC'yi farklı serum konsantrasyonları içeren üç mililitre lik orta ile kaplayın. Culturing iki gün sonra, ölü hücreleri toplamak için 15 mililitrelik tüp içine her çanak orta toplamak. Daha önce açıklandığı gibi yapışık hücreleri trypsinize ve toplanan orta içeren 15 mililitrelik tüp içine hücre süspansiyon toplamak.Oda sıcaklığında beş dakika boyunca 840 kez G'de santrifüj, sonra supernatant aspire ve hücre sayma için orta bir veya orta iki ya bir mililitre ekleyin. SP-CPC'leri trypan mavisi ile lekelendirin ve canlı ve ölü hücreleri sayın. İlk olarak, hazırlanan hücrelerden orta aspire ve sıcak HBSS beş mililitre ile yavaşça durulayın.Hücre kuluçka makinesinde beş dakika boyunca beş mililitre tripsin EDTA ile hücreleri tedavi edin. Sonra, trippsin aktivitesini durdurmak için orta bir beş mililitre ekleyin. Hücre süspansiyonuna oda sıcaklığında beş dakika boyunca 470 kez G'de 15 mililitrelik bir tüp ve santrifüj aktarın.Supernatant aspirate ve hücre sayımı için orta iki ekleyin. Sonra, tohum 80, 000 hücreleri orta iki üç mililitre ile önceden kaplanmış altı iyi kültür plakası her kuyuiçine. Plakayı 20 ila 24 saat boyunca 37 derecede tutun ve her kuyudaki orta yı üç mililitreye değiştirin.Kültür 21 gün boyunca plaka, her üç günde bir orta değişiyor. Bundan sonra, bir endotel belirteci ile hücreleri leke ve diferansiye hücrelerin endotel doğasını doğrulamak için floresan mikroskopi gerçekleştirmek. İlk olarak, hazırlanan hücrelerden orta aspire ve sıcak HBSS beş mililitre ile yavaşça durulayın.Hücre inkübatörbeş dakika için tripsin EDTA iki mililitre ile hücreleri tedavi, sonra trippsin aktivitesini durdurmak için orta üç üç mililitre ekleyin. Hücre süspansiyonuna oda sıcaklığında beş dakika boyunca 470 kez G'de 15 mililitrelik bir tüp ve santrifüj aktarın. Supernatant aspirate ve orta üç bir mililitre ekleyin, karıştırmak için yavaşça pipetting.Hücreleri ve tohumları 2, 000 ile 4 arasında say, orta üç mikrolitredeki 100 mikrolitredeki hücreleri 96 kuyulu bir plakanın iyi kaplanmış her matrisine kadar sayın. Plakayı 16 saat boyunca 37 derecede kuluçkaya yatırın. Bundan sonra, hücrelerin resmini çekmek için iki kat büyütme parlak alan mikroskobu kullanın.Bu çalışmada kardiyak progenitor hücrelerin endotel soy bağlılığının kolaylaştırılması için uygun koşullar araştırılmıştır. Hücre birleşimi %60 veya altında olduğunda %3.5 FBS ile tedavi edilen örneklerde anlamlı bir fark görülmez. Bu birleşmedeki hücreler %0.1 FBS ile tedavi edildiğinde, fibronektin ile karşılaştırıldığında laminada hücre çoğalmalarında azalma gösterirler, ancak hücre ölümünde artış göstermezler.Buna karşılık, yüksek bir kesişme hücrelerinin iki durum arasında hücre çoğalması veya hücre ölümü arasında anlamlı bir fark göstermez. Hücre şeklindeki değişiklikler, endotel farklılaşmasının başarılı olacağı uygun kültür koşullarının bir göstergesi gibi görüner. Endotel diferansiyasyon ortamında 7-14 gün içinde, başarılı kültürlerin farklı morfolojisi olan daha büyük hücreler içerdiği görülmektedir.İlginçtir, bu hücreler farklılaşma aşamasının sonuna doğru kayboldu ve yüksek yoğunluklu kültürlerde daha düşük sayılarda ve daha sonraki zaman noktalarında görünme eğilimindeydi. Tüp oluşumu düşük yoğunlukta kaplanmış hücrelerde sürekli olarak başarılı olur ve laminin üzerinde ayırt edilir, yüksek yoğunluklu kaplanmış hücrelerde çoğunlukla başarısız olduğu görülür. Hücre yoğunluğuna bakılmaksızın fibronektin üzerinde kültürlenmiş hücrelerde tüp oluşumu çoğunlukla başarısız olmakla birlikte, düşük yoğunlukta farklılaşanlar bazen ilkel tüpler oluştururlar.Endotel soyu neden serum konsantrasyonu ve hücre yoğunluğu çok önemlidir, ve canlılık korurken proliferasyon yavaşlamasını garanti etmek için ayarlanması gerekir. Soy indüksiyonu üzerine, in vivo farklılaşma potansiyellerini değerlendirmek için hücre nakli çalışmalarında insanlardan veya klinik öncesi hastalık modellerinden alınan KSK'lar kullanılabilir. Bu protokol yeni kardiyak rejenerasyon araçlarının incelenmesine veya kurulmasına yardımcı olabilir ve daha önce erken soy bağlılığının moleküler mekanizmasını incelemek için kullanılmıştır.

induction-endothelial-differentiation-cardiac-progenitor-cells-under

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Gelişim Biyolojisi

Biz büyük bir tedarik kardiyovasküler onarım için insan kalp atalarıdır ve fonksiyonel kardiyomiyositlerde türetilmesi sağlayan küçük moleküller ile tanımlanmış koşullar altında tutulan pluripotent insan embriyonik kök hücreleri doğrudan cardioblasts indüksiyonu için bir protokol kurduk.

Küçük Molekül İndüksiyon Pluripotent İnsan Embriyonik Kök Hücreleri İnsan Kardiyak Öncüleri ve kardiyomiyositlerde Verimli türetilmesi

Çalışmada insan embriyonik kök hücreleri pankreas farklılaşma uyarması yönlendirilmiş bir farklılaşma yaklaşım anlatılmaktadır. Büyük önem insülin salgılayan hücrelerin içine pankreas ataları edilen insan embriyonik kök hücre bulma olduğu endotel hücre ko-kültür aracılık olgunlasmasi.

İnsan Embriyonik endotel hücre Co-kültür aracılık Olgunlaşma Bir Yönetmen Farklılaşma Yaklaşım Pankreas insülin üreten hücreler için Kök Hücre

Bu protokol, transkripsiyon faktörlerinin zorlanmış ekspresyonu yoluyla insan pluripotent kök hücrelerinden hemojenik endotel ve multipotansiyel hematopoietik progenitörlerin verimli indüksiyonunu açıklar.

İnsan Pluripotent Kök Hücreleri Transkripsiyon Faktörleri aşırı ifadesinin doğrudan Hemogenic Endotelyumunun uyarılması ve Kan

Bu el yazması, yüzey işaretleyici ekspresyonu ve hücre sıralaması kullanılarak tanımlanmış tasarlanmış kardiyak dokuların oluşturulmasını açıklar. Tanımlanan dokular daha sonra insan kalbinin işlevsel, ancak kontrollü bir model sistemini sağlamak için kardiyak hücre tedavisi mekanizmalarını araştırmak için çok dokulu bir biyoreaktörde kullanılabilir.

Tanımlı İnsan Engineered Kalp Dokuların inşaatı Kardiyak Hücre Tedavisinin Mekanizmaları Eğitim için

Endotelyal Ata Hücreler (EPC'ler) önemlisi, iskemik dokuların neovaskülarizasyonu katılmaktadırlar. Bu yöntem, periferal kandan alınan insan EPC izolasyonunu, hem de kalp cerrahi hastalarında serum örneklerinde karşı göç potansiyelinin belirlenmesi açıklanmaktadır.

Kalp Damar Cerrahisi sonra serum Örnekleri etkilenerek Sağlıklı Gönüllüler ve Bunların Göçmen Potansiyelden Endotel Ata Hücreleri İzolasyon

Bu iletişim kuralının amacı göbek kordon kanı endotelyal progenitor hücrelerini izole etmektir. Bazı uygulamalar bu hücreler bir biyomarker hastaların kardiyovasküler riski ile iskemik hastalıklar, tedavi tanımlamak için kullanmayı içerir ve oluşturma doku Mühendisliği vasküler ve kalp kapak oluşturur.

Yalıtım endotelyal Progenitor Hücre insan göbek kordon kanı

Burada ilk kalp alan benzeri kardiyak ataları ve ventrikül benzeri cardiomyocytes insan pluripotent kök hücre üretmek için aktivin A ve lentivirus-aracılı ID1-overexpression, basit bir birleşimini kullanarak ölçeklenebilir bir yöntem açıklanmaktadır.

İlk kalp alan benzeri kardiyak ataları ve ventrikül benzeri Cardiomyocytes insan Pluripotent kök hücrelerden nesil

Bu yöntemin amacı, progenitör hücre spesifikasyonu ve fonksiyonel özelliklerini incelemek ve kalp hastalığı modelleme için oda spesifik kardiyak hücreler oluşturmak için, in vitro kalp alanına özgü kardiyak progenitör hücreleri oluşturmadır.

In vitro Generation fare kalp alanı-spesifik kardiyak progenitor hücreler

Bu protokol, kalp hastalıkları için hücre implantasyon tedavisinin araştırılmasına olanak sağlamak için insan kaynaklı pluripotent kök hücrelerden elde edilen kardiyovasküler hücreleri içeren mesh şeklinde tasarlanmış kardiyak dokular üreder.

In Vivo Miyokardiyal Onarım için İnsan iPS Hücrelerinden Elde Edilen Örgü Şekilli Mühendislik Kardiyak Dokuların Hazırlanması

Burada hemojenik endotel hücrelerinin insan pluripotent kök hücrelerinden yaklaşık 1 hafta içinde yönlendirilmiş farklılaşması için basit bir protokol sunulmaktadır.

Hemojenik Endotel Hücrelerinin İnsan Pluripotent Kök Hücrelerinden Yönlendirilmiş Farklılaşması

Keşfedin kalp progenitör hücrelerinin endotel farklılaşması için optimize edilmiş protokolü. Düşük serum konsantrasyonu ve laminin kaplı substrat kullanarak hücre terapisi ve rejeneratif tıp araştırmalarında uygulanabilir yöntemler geliştirin.

İndüksiyon düşük Serum koşullar altında kalp Progenitor hücreler endotel farklılaşma

Daha fazla video keşfet