Yüzey gelişmiş rezonans Raman nanoprobe Ratiometry mikroskobik yumurtalık kanseri folat reseptör via algılamak için saçılma hedefleme

Bu yöntem, özellikle yumurtalık kanseri metastazı gibi vaskülatüre henüz erişimi olmayan malignitelerde, mikroskobik tümörlere nano partiküllerin topikal uygulamasını kullanır. Bu teknik, yanlış sinyalleri azaltmak ve tümörün gerçek boyutunu ortaya çıkarmak için tek bir tarak ta oranmetrik, görüntüleme hedefli ve hedefsiz nano tanecikleridir. Bu nano tanecikleri yumurtalık kanseri ve diğer birçok tümör türleri yüksek hassasiyetli görüntüleme için intraperitoneal veya intravenöz enjeksiyon ile uygulanabilir.

Altın nanostar çekirdek sentezi için dört santigrat derece bir manyetik karıştırma plakası üzerinde taze hazırlanmış askorbik asit çözeltisi 800 mililitre içeren konik bir şişe yerleştirin ve sabit bir girdap neden. Girdaba hızlıca sekiz mililitre taze hazırlanmış tetrakloroaurik asit çözeltisi ekleyin. Saniyeler içinde nanoyıldızlar oluşacak ve çözüm koyu mavi bir renk varsayar.

Nanostar süspansiyonu santrifüj için 50 mililitrelik konik tüplere dökün ve dönüş sonunda her tüpten süpernatantın son 200 mikrolitresini aspire edin. Tek bir diyaliz kasetinde tüm nano tanecikleri biraraya önce her tüpnano tanecikleri yeniden askıya almak için bir mikropipet kullanın. Sonra günlük su değişen deiyonize su iki litre karşı en az üç gün boyunca nano tanecikleri diyaliz.

Silika kabuk oluşumu için, ilk olarak 10 mililitre isopropanol, 500 mikrolitre TEOS, 200 mikrolitre deiyonize su ve 50 mililitrelik konik bir tüpe 60 mikrolitre boya ekleyin. Ve 15 mililitrelik bir tüpe üç mililitre etanol ve 200 mikrolitre amonyum hidroksit ekleyin. Daha sonra, herhangi bir kümeleri dağıtmak ve tüp e nanoyıldız 1.2 mililitre eklemek için diyaliz nanostar sonicate.

Bir girdap karıştırıcı üzerine 50 mililitrelik tüp yerleştirin ve sabit bir girdap neden. Hızlı bir şekilde oda sıcaklığında 300 RPM de 15 dakika boyunca bir shaker için tüp aktarmadan önce karıştırma yaklaşık beş saniye daha karıştırma ile 50 mililitrelik tüp nanostar çözüm ekleyin. Silikasyon reaksiyonunun nanoyıldızlarda olmasını sağlamak ve serbest silika üretimini en aza indirmek için iki tüp hızlı ve sürekli nixing altında birleştirilmelidir.

Kuluçka sonunda reaksiyon söndürmek ve santrifüj ile nanostars toplamak için etanol ile tüp doldurun. Son 500 mikrolitre supernatant'ı, peleti rahatsız etmemeye ve nano partikülleri bir mililitre taze etanolde yeniden askıya almaya özen gösterip aspire edin. Daha sonra solüsyonu santrifüj le dört adet mililitrelik etanol yıkamaiçin 1,5 mililitrelik santrifüj tüpüne aktarın, her yıkama arasında yaklaşık bir saniye ultrasonication ile peleti yeniden sulandırın.

Parçacık yüzeylere tiyol tanıtmak için, son yıkamadan sonra bir mililitre de pelet resuspend 85%etanol, 10%3-mercaptoproyl-trimethoxysilane, ve 5% deiyonize su çözeltisi oda sıcaklığında bir-iki saatlik kuluçka için. Kuluçka sonunda, tiyol fonksiyonel nano tanecikleri belirtildiği gibi santrifüj ile yıkayın, yıkamalar arasında ultrasonication tarafından pelet resuspend. Antikor fonksiyonel anti-folat reseptör nanoprobları için 200 mikrogram anti-folat bağlayıcı protein antikorunu, 500 mikrolitre HEPES tamponunda on kat molar molar fazla PEG çapraz bağlayıcısı ile reaksiyona girerler.

30 dakika sonra ek bir santrifüj için yeni bir tüp içine filtre ters tarafından antikor kurtarma, bir santrifüj filtre ile antikor konsantre. Sonra konsantre antikor ile tiyol fonksiyonel nano tanecikleri karıştırın ve oda sıcaklığında en az 30 dakika boyunca karışımı kuluçka. Hedefsiz nanoproblar oluşturmak için dmso'da çözünmüş beş miligram methoksi sonlandırılmış PEG 5000 maleimid ilâ nı, oda sıcaklığında en az 30 dakikalık bir kuluçka için 500 mikrolitre HEPES tamponundaki tiyol-fonksiyonel nano partiküllere ekleyin.

Nanoprob enjeksiyonu için hem nanoprob tatlar aşağı spin ve 600 picomolar konsantrasyontaze MES tampon pelet resuspend. Nano partikülleri karıştırın ve elde edilen çözeltinin bir mililitresini fare başına 26 kalibrelik bir iğneyle donatılmış bir mililitreşinşiçine yükleyin ve intraperitoneally her farenin karın içine tüm hacmi enjekte. Sonra yavaşça periton boşluğu boyunca nano tanecikleri dağıtmak için karın masaj.

En az 25 dakika sonra bir cerrahi platform üzerine bir ötenazi enjekte hayvanın uzuvları güvenli ve periton ortaya çıkarmak için deri kaldırmak için tırtıklı forceps ve diseksiyonu makas kullanın. Periton eğim. Periton kapaklarını platforma takın ve periton boşluğunun içini en az 60 mililitre PBS ile yıkayın.

Daha sonra platformu dik optik konfigürasyon ve motorlu bir sahne ile Raman spektrofotometreye aktarın ve uygun görüntüleme parametreleri altında karnı görüntüleyin. Bu Raman tarar için odak düzlemi vissera çoğu yüzeyinde olması çok önemlidir. Eğer organlar düzlem dışı ysa, elde edilen sinyal işe yaramaz.

Kalite kontrol amacıyla nano tanecikleri sentez işlemi sırasında iletim elektron mikroskobu, dinamik ışık saçılımı, nanopartikül izleme analizi ve ultraviyole görünür emici spektroskopi gibi çeşitli yöntemler kullanılarak karakterize edilebilir. Raman ölçümleri sentez boyunca nanopartikülher lezzet benzersiz spektrumvarlığını ortaya koymaktadır. Tipik reaksiyon verimleri ve konsantrasyonları yıkama adımları sırasında pipetleme tekniğine bağlıdır.

Raman spektrumları floresan kaldırmak için işlenebilir ve klasik en az kareler uygulamadan önce sinyal gücünü telafi etmek için birim alana normalleştirilmiş. Her nanoprob referans spektrumundaki klasik en küçük kareli skorlar tümörlerin belirli yerlerini tek tek vermese de, nokta-bilge oranlar yaygın mikroskobik yayılımın varlığını ortaya koymaktadır. Bu yordamı çalışırken nano tanecikleri kalitesi kuvvetle nihai sonuçları etkiler gibi sentezin her adımında nano tanecikleri doğrulamak için hatırlamak önemlidir.

Bu teknik, araştırmacıların hayvan modellerinde tümöre bağlı belirteçlerin ve yüksek derecede mikroskobik hassasiyete sahip hasta dokularının saptanması için SERRS nanoprobuklarını kullanma potansiyelini göstermektedir.