Name: Gut hormonu salgılanması izole kullanarak temel mekanizmaları fare bağırsağı periosteum (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-02-26T13:30:00.000+00:00
Duration: 7 min
Description: Keşfedin bağırsak hormonu salgılanmasının moleküler mekanizmalarını izole perfüze sıçan ince bağırsağı kullanarak. Bu yöntem besin emilimi ve hormonal süreçleri fizyolojik koşullarda inceleme olanağı sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu eser tarafından sınırsız ödenekle Prof. Dr. Jens Juul Holst Novo Nordisk Merkezi'nden temel metabolik araştırma (Novo Nordisk Vakfı, Danimarka), Novo Nordisk Vakfı (Hayır ver. kemirgen perfüzyon çalışmaları yapmak için ayrı bir hibe için desteklenen NNF15OC0016574), Avrupa Araştırma Konseyi (Grant no.695069) ve theEuropean Birliği'nden Prof. Holst için bir hibe yanı sıra bir doktora sonrası araştırma, TechnologicalDevelopment ve gösteri faaliyetleri (Grant No. 266408) yedinci Çerçeve Programı'nın Rune E. Kuhre için Lundbeck Vakfı'ndan (R264-2017-3492) verin. Biz Jenna E. Hunt ve Carolyn F. Deacon dikkatli proofreading için teşekkür ederim.

Danimarka hayvan deneyleri Müfettişliği (2013-15-2934-00833) ve yönergeleri hayvan deneme (1987) ve ulusal yöneten Danimarka mevzuatı uyarınca yerel etik kurul iznine sahip tüm çalışmalar yapılmıştır Sağlık (yayın numarası 85-23) Enstitüleri.
1. deneysel hayvan
<ol><li>Erkek Wistar rats (250 g) elde etmek ve kafes, standart chow ve su, ad libitum erişim başına 2 ev ve bir 12: 12'korumak s koyu döngüsü. Bizim Hayvanlar imkanları olmayan tedavi su ve Alrtromin kemirgen chow (1319 FORTI, Brogaarden, Lynge, Danimarka) kullanır. Not: hayvanlar iklimlendirme en az bir hafta izin.</li>
</ol>2. ameliyat öncesi hazırlıklar
<ol><li>Perfüzyon arabellek olun: Krebs-zil bikarbonat arabellek takıma % 0,1 BSA (kesir V), % 5 dextran T-70, 3.5 mmol/L glikoz ve 5 mmol/L pyruvate, fumarat ve (gerekirse) Glutamat; pH 7.4.</li>
	<li>Filtre uygun bir boyut süzülerek perfüzyon arabellek yeterli miktarda hazırlamak ve dropwise buna ek olarak 5 M HCl tarafından pH ~7.5 için ayarlayın.</li>
	<li>3-İzobütil-1-methylxanthine (IBMX) (gerekirse) 10 µM son bir konsantrasyon için çalışma gününde arabelleğe doğrudan ekleyin. Not: IBMX hassasiyet ve salgı uyarıcı hormon salgılayan açısından gut yanıt [kampı]ben artırır ve böylece bir fosfodiesteraz inhibitörü olduğunu.</li>
	<li>Test isn'ta hazırlayın. Filtre uygulanmış ve pH-düzeltilir perfüzyon arabelleği istenen son konsantrasyonu daha yüksek konsantrasyon x 20 vasküler uyaranlara hazırlayın. Son konsantrasyon izotonik salin luminal test uyaranların hazırlayın.</li>
	<li>% 100 Dimetil sülfoksit (DMSO) kolayca çözünen bileşikler dağıtılması ve seyreltik perfüzyon arabellek veya izotonik salin daha fazla. Vasküler uyaranlara için son DMSO konsantrasyonu % 1 veya daha düşük, bu bağırsak zarar ve belirsiz gut hormonu salgılanması için neden olabilir konsantrasyonları yukarıdaki olarak tutmak. PH ölçmek ve gerekirse ~7.5 için ayarlayın.</li>
</ol>3. işletme ve perfüzyon
Not: Perfüzyon Kur bir çizimi şekil 1' de verilmiştir.
<ol><li>Cerrahi anestezi ve analjezi için 30-40 dk Hypnorm/Midazolam tarafından ayakta olabilir bir anestezik rejimi kullanımı tarafından fareler anestezi (ml başına 0.3 ml/100 g vücut ağırlığı: Hypnorm: 0,08 mg fentanil, 2.5 mg fluanisone, 0,45 mg metil Parahydroxybenzoate, 0,05 mg Propil Parahydroxybenzoate, Midazolam: 1.25 mg, matris ilaç, Hellerup, Danimarka)</li>
	<li>Refleksler (ayak tutam) olmaması için kontrol, ısıtılmış ameliyat masasında fare yerleştirin ve bağırsak ortaya çıkarmak için deri kesik gerçekleştirin.</li>
	<li>
İki nokta üst üste terminal kısmındaki bir kenara olabildiğince ince bağırsak taşıyarak maruz. Damarlara kolon ve tüketim için yavaş yavaş bağırsağın doğru hareket iki nokta üst üste, terminal kısmından başlayarak temin ettiğimi kravat.
	<ol>
<li>Sadece belirli bir kısmını bağırsağın perfüzyon (üst yarısı) için gereklidir, gerekli olmayan kesimleri damarlara sağlayan kapalı bağlama sonra tüketim. Doku hasarı en aza indirmek için izotonik salin ile bağırsak nemlendirmek ve temizleme bezi bağ dokusu kaldırmak için kullanın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Bir plastik tüp takın (uzunluk: ~ 15 cm, dış çap: ~0.4 cm) (proksimal bölümünde) intestinal Lümen ve kravat düzgün kullanarak tasarlamak. Dikkatle chyme Lümen boşaltmak için izotonik salin ile (oda sıcaklığında) sifonu çek.</li>
	<li>Lümen 0.25 mL/min, bir şırınga pompa bağlı bir 10 mL şırınga kullanarak bir akışı adlı izotonik salin ile sıvı.</li>
	<li>Üst Mezenterik arter erişilebilir kadar bağırsak kenara çekilin ve bağ ve yağ dokusu arter ortaya çıkarmak için kaldırın.</li>
	<li>İki dikiş Mezenterik arter altında para cezası nokta forseps kullanarak yerleştirebilirsiniz; dikiş arter kez atardamarı kesilmiş oldu ve diğer arter içinde yerleştirileceğini kateter sağlamak için kanama kontrolü için kaldırma için biridir. Arter sorgulamaktı değil dikkatli.</li>
	<li>İki dikiş perfüzyon atık koleksiyon için ven yerleştirilmesini gidiyor metal kateter güvenliğini sağlamak için portal ven altında yerleştirin.</li>
	<li>Mezenterik arter delik kesmeden önce arter için eklenen gidiyor kateter ile perfüzyon arabelleği hava embolisi oluşumunu önlemek için doldurulur olun.</li>
	<li>Cerrahi makas kullanarak Mezenterik arter küçük bir delik açın ve plastik kateter takın hemen sonra.</li>
	<li>Sonra hemen kateter güvenlik altına alındı, gut perfüzyon silindir pompa başlatarak başlatmak (akış hızı 7.5 mL/dk =).</li>
	<li>Kan damarları bağırsak kaç saniye içinde soluk açmak ve portal ven soluk döner onaylayın.</li>
	<li>Hemen uygun perfüzyon, portal ven delik kurulduktan sonra metal kateter takın ve sütür ile güvenli. Not: Kateter yer ama damar yukarı kaldırarak ihtiyatlı en proksimal dikiş yardımcı olur çekerek için zor olabilir.</li>
	<li>Bir kez Kateterler yerdesiniz ve perfüzyon çıkış tatmin edici, diyafram perforasyon, Kateterler rip değil dikkatli olmak tarafından fareyi öldür.</li>
	<li>Perfüzyon çıktı 1 dk. için toplamak ve birimin tedbir. Basınç kayıt programı Yürütmek deney tıklamayla perfüzyon basıncı edinme/kayda başlayın.</li>
	<li>Göbek deneme sırasında kurumasını önlemek için nemli dokusu de kapsar.</li>
	<li>Bağırsak distal sonuna böylece luminal atık çıkabilirsiniz, aksi takdirde bağırsak kabarma olacaktır, ödem gelişecektir, perfüzyon basıncı artacak ve perfüzyon çıkış düşecek bloke değildir olun.</li>
	<li>Yaklaşık 30 dakika için hazırlık deneme başlatmadan önce bırakın. Not: Bu denge adım istikrarlı bir temel elde etmek için gerekli bu yüzden gut hormon salgı çıkışlarını perfüzyon, ilk 15 dk için çok kararsız.</li>
</ol>4. deney
<ol><li>Perfüzyon yaklaşık 30 dakika sonra bir kesir toplayıcı kullanarak ilk temel örnek toplayarak deneme başlayın. Örnekler toplamak istediğiniz zaman aralığında (örneğin, her dakika, 6,5-7,5 mL genellikle toplanır) ve birkaç dakika içinde buz koyun.</li>
	<li>
Kabarcık tuzak düzenli olarak inceleyin ve eğer boşalttı, perfüzyon arabellek ile doldurma.
	<ol>
<li>Üç yönlü horoz-valf aracılığıyla arabellek hemen organ girmeden önce ve sonra (Bu yayın organları periosteum) portal ven organ metabolik olarak aktif olduğunu doğrulamak için eklenen kateter toplamak. Başlangıç ve bitiş canlılığı deneme boyunca değerlendirmek için deney örnekleri toplamak.</li>
		<li>En plastik içerir/şırınga tamamen hava geçirmez değildir olarak örnekleri ile atmosferik hava değişimi için sebebiyet veren bir otomatik kan gazı analizörü ile hızlı bir şekilde ölçmek.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Temel toplama 10-15 dk sonra ilk test madde ile teşvik. İntra Arteryel elektrodlar ile bir şırınga pompa üç yollu stopcock ile yönetmek (akış 0,350 mL/dk =).</li>
	<li>Luminal elektrodlar zaten test çözüm daha düşük Debi (0.5 mL/dk) yönetimi tarafından takip lümen, kullandığı izotonik salin değiştirmek için bir ilk bolus enjeksiyon (ilk 5 dk içinde 2.5 mL/dk), yerine getirilir.</li>
	<li>Luminal stimülasyon dönemi bittiğinde Lümen hızlı bir şekilde test madde boşaltılır emin olmak için yukarıdaki gibi aynı akış oranları uygulanarak intestinal Lümen izotonik salin ile yıkayın.</li>
	<li>Sonraki test madde yönetilir önce temel örnekleri için 15-30 dakika toplamak. İletişim kuralı bağlı olarak 2-3 testi uyaranlara genellikle deneme dahil edilebilir. Deneysel protokol harekete geçirmek/inhibisyonu verilen bir moleküler site belirli bir salgılatıcı İdaresi ile aynı anda içeriyorsa, her zaman harekete geçirmek/inhibitörü ile önceden uyarmak için salgılatıcı yönetim önce 10-15 dk Moleküler sitesi salgılatıcı infüzyon çok başında inhibe emin olun.</li>
	<li>Protokol sonunda (5-10 dk) uygun olumlu denetim stimülasyon döneminden sonra hazırlık yanıt için test etmek ve 10-15 dk temel örnekler toplamak için yönetmek. Not: Birkaç test maddelerin kullanılabilir pozitif kontrol, örneğin, artan [kampı]ben (örneğin, foskolin veya IBMX), [Ca2 +]ben (örneğin, bombesin veya neuromedin C), için bir çekim gücü ajanlar depolarize (örneğin, 30-50 mM KCl) veya daha fazla macronutrients gibi fizyolojik alakalı uyaranlara: glikoz, peptones, amino asitler, vb. Ancak, seçtiğiniz bir pozitif kontrol deneysel sonucuna bağlı. Glikoz örneğin bir zavallı cholecystokinin (CCK) salgılatıcı bombesin glikoz bağımlı insulinotropic peptid (GIP) salgılanması30için güçlü salgılatıcı değil ise.</li>
	<li>Deneme sonunda perfused gut tüketim, tartmak ve uzunluğu ölçmek. Paraformaldehyde içinde koymak ve (4 ° C) potansiyel daha sonra histochemical analiz doku bütünlüğü/hasarı, için örneğin H & E boyama saklayın.</li>
</ol>5. biyokimyasal ölçümleri
<ol><li>Bir in-house ya da ticari olarak mevcut radioimmunoassays (RIA) kullanımını tarafından salgılanan peptidler Venöz atık konsantrasyonları ölçmek ya da ELISA deneyleri. Bağırsak emilim araştırmak çalışmaları, ilgi, örneğin, glikoz veya amino asitler, Venöz atık molekülünün ölçmek. Not: Perfusate genellikle enzimatik reaksiyonları (örneğin glikoz glucoseoxidase yöntemi tarafından miktar) dayanan deneyleri de dahil olmak üzere çoğu analizleri için iyi bir Bazal tampon var.</li>
</ol>6. veri analizi
<ol><li>Mevcut verileri farklı şekillerde, örneğin gerçek salgı çıkış gösteren bir zaman-konsantrasyon grafik (akış toplama x) ve toplam salgı temel ve yanıt dönemlerinde (genellikle 10-15 saat puan) çıkış gösteren sütun Arsa olarak.</li>
	<li>İlgili hormonlar gerçek ölçülen konsantrasyonu konsantrasyonu birimleri olarak çiz. (pmol/M), Not: İçinde vivo çalışmalar, aksine bu model ile elde edilen değerler gerçek salgı çıktı (Sabit perfüzyon atık toplama nedeniyle) olduğu için bunun yerine verileri çıktı (fmol/dak) olarak ifade etmek için tercih edilir.</li>
	<li>Bağlı olarak istatistiksel analiz edilecek grup sayısı, kullanım iki kuyruklu t-Testi (iki grup) eşleştirilmiş veya birden fazla karşılaştırma için bir uygun post-hoc testi tekrarlanan ölçüler (ikiden fazla gruplar) için tek yönlü ANOVA izledi.</li>
</ol>

<ol><li>Rindi, G., Leiter, A. B., Kopin, A. S., Bordi, C., Solcia, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+%26%2334%3Bnormal%26%2334%3B+endocrine+cell+of+the+gut%3A+changing+concepts+and+new+evidences%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+the+New+York+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">The &#34;normal&#34; endocrine cell of the gut: changing concepts and new evidences.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 1014, 1-12 (2004).</li>
<li>Brighton, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bile+Acids+Trigger+GLP-1+Release+Predominantly+by+Accessing+Basolaterally+Located+G+Protein-Coupled+Bile+Acid+Receptors%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Bile Acids Trigger GLP-1 Release Predominantly by Accessing Basolaterally Located G Protein-Coupled Bile Acid Receptors.</a> Endocrinology. 156, 3961-3970 (2015).</li>
<li>Kuhre, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bile+acids+are+important+direct+and+indirect+regulators+of+the+secretion+of+appetite-+and+metabolism-regulating+hormones+from+the+gut+and+pancreas%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Bile acids are important direct and indirect regulators of the secretion of appetite- and metabolism-regulating hormones from the gut and pancreas.</a> Molecular Metabolism. , (2018).</li>
<li>Roberge, J. N., Brubacker, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Secretion+of+Proglucagon-Derived+Peptides+in+Response+to+Intestinal+Luminal+Nutrients%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Secretion of Proglucagon-Derived Peptides in Response to Intestinal Luminal Nutrients.</a> Endocrinology. 128, 3169-3174 (1991).</li>
<li>Brubaker, P. L., Schloos, J., Drucker, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+glucagon-like+peptide-1+synthesis+and+secretion+in+the+GLUTag+enteroendocrine+cell+line%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Regulation of glucagon-like peptide-1 synthesis and secretion in the GLUTag enteroendocrine cell line.</a> Endocrinology. 139, 4108-4114 (1998).</li>
<li>Jacobsen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+Gastrointestinal+Hormone+Responses%2C+Insulin+Sensitivity%2C+and+Beta-Cell+Function+Within+2+Weeks+After+Gastric+Bypass+in+Non-diabetic+Subjects%5BTitle%5D)+AND+%22Obesity+Surgery%22%5BJournal%5D)">Changes in Gastrointestinal Hormone Responses, Insulin Sensitivity, and Beta-Cell Function Within 2 Weeks After Gastric Bypass in Non-diabetic Subjects.</a> Obesity Surgery. 22, 1084-1096 (2012).</li>
<li>Kuhre, R. E., Frost, C. R., Svendsen, B., Holst, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+mechanisms+of+glucose-stimulated+GLP-1+secretion+from+perfused+rat+small+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Molecular mechanisms of glucose-stimulated GLP-1 secretion from perfused rat small intestine.</a> Diabetes. 64, 370(2014).</li>
<li>Svendsen, B., Holst, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+gut+hormone+secretion.+Studies+using+isolated+perfused+intestines%5BTitle%5D)+AND+%22Peptides%22%5BJournal%5D)">Regulation of gut hormone secretion. Studies using isolated perfused intestines.</a> Peptides. 77, 47-53 (2016).</li>
<li>Ratner, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+Peripheral+Neurotensin+on+Appetite+Regulation+and+Its+Role+in+Gastric+Bypass+Surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Effects of Peripheral Neurotensin on Appetite Regulation and Its Role in Gastric Bypass Surgery.</a> Endocrinology. 157, 3482-3492 (2016).</li>
<li>Wewer Albrechtsen, N. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamics+of+glucagon+secretion+in+mice+and+rats+revealed+using+a+validated+sandwich+ELISA+for+small+sample+volumes%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology+Endocrinology+and+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Dynamics of glucagon secretion in mice and rats revealed using a validated sandwich ELISA for small sample volumes.</a> American Journal of Physiology Endocrinology and Metabolism. 311, E302-E309 (2016).</li>
<li>Vilsboll, T., Agerso, H., Krarup, T., Holst, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Similar+elimination+rates+of+glucagon-like+peptide-1+in+obese+type+2+diabetic+patients+and+healthy+subjects%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Clinical+Endocrinology+and+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Similar elimination rates of glucagon-like peptide-1 in obese type 2 diabetic patients and healthy subjects.</a> The Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism. 88, 220-224 (2003).</li>
<li>Windelov, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Why+is+it+so+difficult+to+measure+glucagon-like+peptide-1+in+a+mouse%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetologia%22%5BJournal%5D)">Why is it so difficult to measure glucagon-like peptide-1 in a mouse?</a> Diabetologia. 60, 2066-2075 (2017).</li>
<li>Gorboulev, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Na%2B-d-glucose+Cotransporter+SGLT1+is+Pivotal+for+Intestinal+Glucose+Absorption+and+Glucose-Dependent+Incretin+Secretion%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Na+-d-glucose Cotransporter SGLT1 is Pivotal for Intestinal Glucose Absorption and Glucose-Dependent Incretin Secretion.</a> Diabetes. 61, 187-196 (2012).</li>
<li>Kuhre, R. E., Bechmann, L. E., Wewer Albrechtsen, N. J., Hartmann, B., Holst, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucose+stimulates+neurotensin+secretion+from+the+rat+small+intestine+by+mechanisms+involving+SGLT1+and+GLUT2%2C+leading+to+cell+depolarization+and+calcium+influx%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology+Endocrinology+and+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Glucose stimulates neurotensin secretion from the rat small intestine by mechanisms involving SGLT1 and GLUT2, leading to cell depolarization and calcium influx.</a> American Journal of Physiology Endocrinology and Metabolism. 308, E1123-E1130 (2015).</li>
<li>Kuhre, R. E., Christiansen, C. B., Saltiel, M. Y., Wewer Albrechtsen, N. J., Holst, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+relationship+between+glucose+absorption+and+glucose-stimulated+secretion+of+GLP-1%2C+neurotensin%2C+and+PYY+from+different+intestinal+segments+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Reports%22%5BJournal%5D)">On the relationship between glucose absorption and glucose-stimulated secretion of GLP-1, neurotensin, and PYY from different intestinal segments in the rat.</a> Physiological Reports. 5, (2017).</li>
<li>Svendsen, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+analysis+of+cosecretion+and+coexpression+of+gut+hormones+from+male+rat+proximal+and+distal+small+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">An analysis of cosecretion and coexpression of gut hormones from male rat proximal and distal small intestine.</a> Endocrinology. 156, 847-857 (2015).</li>
<li>Goldspink, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanistic+insights+into+the+detection+of+free+fatty+and+bile+acids+by+ileal+glucagon-like+peptide-1+secreting+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Mechanistic insights into the detection of free fatty and bile acids by ileal glucagon-like peptide-1 secreting cells.</a> Molecular Metabolism. 7, 90-101 (2018).</li>
<li>Sun, E. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+Controlling+Glucose-Induced+Glp-1+Secretion+in+Human+Small+Intestine%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Mechanisms Controlling Glucose-Induced Glp-1 Secretion in Human Small Intestine.</a> Diabetes. , (2017).</li>
<li>Kuhre, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peptide+production+and+secretion+in+GLUTag%2C+NCI-H716+and+STC-1+cells%3A+a+comparison+to+native+L-cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Molecular+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Peptide production and secretion in GLUTag, NCI-H716 and STC-1 cells: a comparison to native L-cells.</a> Journal of Molecular Endocrinology. 56, 11(2016).</li>
<li>Reimann, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucose+sensing+in+L+cells%3A+a+primary+cell+study%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Glucose sensing in L cells: a primary cell study.</a> Cell Metabolism. 8, 532-539 (2008).</li>
<li>Reimann, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+and+functional+role+of+voltage+gated+cation+conductances+in+the+glucagon-like+peptide-1+secreting+GLUTag+cell+line%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Characterization and functional role of voltage gated cation conductances in the glucagon-like peptide-1 secreting GLUTag cell line.</a> The Journal of Physiology. 563, 161-175 (2005).</li>
<li>Kuhre, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fructose+stimulates+GLP-1+but+not+GIP+secretion+in+mice%2C+rats+and+humans%5BTitle%5D)+AND+%22American+journal+of+physiology.+Gastrointestinal+and+Liver+Physiology%22%5BJournal%5D)">Fructose stimulates GLP-1 but not GIP secretion in mice, rats and humans.</a> American journal of physiology. Gastrointestinal and Liver Physiology. 306, G622-G630 (2014).</li>
<li>Reimann, F., Tolhurst, G., Gribble, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((G-Protein-Coupled+Receptors+in+Intestinal+Chemosensation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metabolism%22%5BJournal%5D)">G-Protein-Coupled Receptors in Intestinal Chemosensation.</a> Cell Metabolism. 15, 421-431 (2012).</li>
<li>Parker, H. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+mechanisms+underlying+bile+acid-stimulated+glucagon-like+peptide-1+secretion%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Molecular mechanisms underlying bile acid-stimulated glucagon-like peptide-1 secretion.</a> British Journal of Pharmacology. 165, 414-423 (2012).</li>
<li>Petersen, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+L+cells+in+mouse+and+human+small+intestine+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Generation of L cells in mouse and human small intestine organoids.</a> Diabetes. 63, 410-420 (2014).</li>
<li>Parker, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Predominant+role+of+active+versus+facilitative+glucose+transport+for+glucagon-like+peptide-1+secretion%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetologia%22%5BJournal%5D)">Predominant role of active versus facilitative glucose transport for glucagon-like peptide-1 secretion.</a> Diabetologia. 55, 2445-2455 (2012).</li>
<li>Roberts, G. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+Human+and+Murine+Enteroendocrine+Cells+by+Transcriptomic+and+Peptidomic+Profiling%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Comparison of Human and Murine Enteroendocrine Cells by Transcriptomic and Peptidomic Profiling.</a> Diabetes. , (2019).</li>
<li>Reimann, F., Gribble, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucose-Sensing+in+Glucagon-Like+Peptide-1-Secreting+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Glucose-Sensing in Glucagon-Like Peptide-1-Secreting Cells.</a> Diabetes. 51, 2757-2763 (2002).</li>
<li>Drucker, D. J., Jin, T., Asa, S. L., Young, T. A., Brubaker, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+proglucagon+gene+transcription+by+protein+kinase-A+in+a+novel+mouse+enteroendocrine+cell+line%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Activation of proglucagon gene transcription by protein kinase-A in a novel mouse enteroendocrine cell line.</a> Molecular Endocrinology. 8, Baltimore, Md. 1646-1655 (1994).</li>
<li>Svendsen, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GLP1-+and+GIP-producing+cells+rarely+overlap+and+differ+by+bombesin+receptor-2+expression+and+responsiveness%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">GLP1- and GIP-producing cells rarely overlap and differ by bombesin receptor-2 expression and responsiveness.</a> The Journal of Endocrinology. 228, 39-48 (2016).</li>
<li>Bak, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specificity+and+sensitivity+of+commercially+available+assays+for+glucagon-like+peptide-1+%28GLP-1%29%3A+implications+for+GLP-1+measurements+in+clinical+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%2C+Obesity+%26+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Specificity and sensitivity of commercially available assays for glucagon-like peptide-1 (GLP-1): implications for GLP-1 measurements in clinical studies.</a> Diabetes, Obesity & Metabolism. 16, 1155-1164 (2014).</li>
<li>Jacobsen, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+gastric+bypass+surgery+on+glucose+absorption+and+metabolism+during+a+mixed+meal+in+glucose-tolerant+individuals%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetologia%22%5BJournal%5D)">Effects of gastric bypass surgery on glucose absorption and metabolism during a mixed meal in glucose-tolerant individuals.</a> Diabetologia. 56, 2250-2254 (2013).</li>
</ol>

Bu eser yazarlar hiçbir potansiyel çıkar çatışmaları bu makale ile ilgili ilan ediyorum.

İzole sıçan periosteum ince bağırsak dinamikleri ve moleküler mekanizmaları gut hormonu salgılanması ayrıntılı olarak incelenecektir için temel sağlayan bir güçlü araştırma araçtır. Bu modeli ile veri başarılı üretim için en önemli adım cerrahi işlemdir. Gut kullanımı kaçınılmaz olarak bazı bağırsak zarar ve bu nedenle mutlak bir minimum tutulmalıdır. Daha da önemlisi, işlem hızı, Mezenterik arter kateter yerleştirme süre açısından özellikle anahtarıdır. Bizim deneyim kateter başarılı bir şekilde yer almalıdır ve perfüzy...

Bağırsak vücudun düzenleyen besin emilimi ve besin bırakma, bağırsak büyüme ve iştah1modüle 15'den fazla farklı peptid hormonları üreten en büyük endokrin organıdır. Gut hormonlar bu nedenle, birçok temel fizyolojik süreçlerinde söz konusu ve salgı ve ilgili hormon salgısını kontrol moleküler detaylar bu desen anlayışı böylece bizim temel fizyolojik önemlidir anlayış ve gut hormon eylemler translasyonel yönlerini adresleme için; Ama nasıl bir gut hormonu salgılanması temel moleküler algılama mekanizmaları eğitim alabilirim? Genel olarak, hormon salgılanması olduğu gibi organizmalar (insan veya deneysel hayvan), izole gut hazırlıklar veya gut hormon salgılayan birincil hücre kültürleri okudu olabilir veya hücre kültürleri2,3, ölümsüzleştirilmiş 4 , 5 , 6. en uygun zaman çözünürlüğü (salgı oranları herhangi bir saat ile belirlenen ile ayrıntılı olarak incelenecektir için gut hormonların salgılanmasını sağlar fizyolojik ilgili bir modeldir izole sıçan periosteum ince bağırsak bizim tercih edilen modelidir İkinci aşağı temel), ve sonuçları da muhtemel bir içinde vivo durum7için transferrable. Burada, biz bu yordamı gerçekleştirme konusunda detaylı bir protokol sağlar, ancak ilk gut hormonu salgılanması, faydaları ve sınırlamaları izole sıçan periosteum bağırsağın karşılaştırıldığında bu modellerin de dahil olmak üzere eğitim için diğer yöntemleri tartışacağız.
Eğer bir belirli bir bileşik bazı gut hormonların salgılanmasını düzenleyen kurmak dilek, çalışmalar insanlarda nihai hedefi vardır. Bunu doğruladı, böylece, bir bileşik kemirgen (VIVO veya perfusions) bir veya daha fazla gut hormonların salgılanmasını üzerinde büyük etkileri gösterir veya hormon salgılayan hücreleri (hücre hatları veya Primer hücre), bu etkiyi sadece tıp ve insan fizyolojisi için uygun olur insanlarda. Ancak, insanlarda yapılan çalışmalar türü için net sınırlar vardır ve içinde vivo çalışmalar deneysel hayvanlar üzerinde bu nedenle, bu tür çalışmalar için en iyi ikinci seçenek çoğu kez. Fare ve sıçanlar vardır muhtemelen nedeniyle uygun büyüklükleri, düşük maliyetli ve genetik olarak belirli çalışma soruları dahil olmak şüpheli genler değiştirmek için seçenek en sık kullanılan deneysel hayvan (örneğin, belirli bir ışınlama dışarı vurmak veya reseptör). Genel olarak, içinde vivo modelleri fizyolojik sağlam olmaktan yarar ama bazı sınırlamaları da mevcuttur. Çoğu deneyleri gut hormon miktar için en az 20 µL gerektiği en önemlisi, küçük kemirgen, özellikle fareler, kısıtlayıcı bir faktör büyüklüğünde plazma (ve genellikle çok daha fazlası), en az anlamını 100 µL kan bir yinelenen yapmak içine kapanık olması gerekiyor miktar. Bu nedenle, bu sadece çok az örnekleri temel örnekleri için karşılık gelen ve bir ya da iki sonrası stimülasyon örnekleri (20 g bir fare toplam kan hacmindeki ~1.4 mL'dir) elde etmek mümkündür. Sonuç olarak, potansiyel salgı yanıt (örneğin, hızlı bir şekilde veya geç meydana gelen yanıt) bu nedenle özledim.
Perfüzyon modelinde, bu sorunu aşmak, büyük örnek olarak birimleri elde edilen (akış hızı: 7,5 mL/dak) ve toplama aralıkları hızlı ve kısa ömürlü yanıt kaçırmayın emin olmak için gerektiği şekilde ayarlanabilir (biz toplamak örnekleri her dk)7 . Başka bir konuda Rodents vivo çalışmalarda çoğu gut hormonlar daha fazla hızla ortadan ya da daha sonraki biyokimyasal analiz karmaşık hale hangi insanlar8,9,10', metabolize edilir. Örneğin, GLP-1 farelerde insanlar bile daha hızlı bir oranda metabolize edilir (1-2 dk11T1/2 mi nerede) gösterdik ve daha da önemlisi, GLP-1 bölünme farelerde, N-terminal bölünme tarafından ek olarak içeren dipeptidyl-peptidaz-(büyük GLP-1 aşağılayıcı enzim insanlarda olan) 4 (DPP4), daha fazla bölünme enzim tarafsız endopeptidase 24.1112tarafından. Sonuç olarak, ya sağlam izoformu GLP-1 (7-36amide) veya DPP-4 i ciddi izoformu (9-39amide) temel alan, geçerli ticari deneyleri GLP-1, miktar için büyük ölçüde GLP-1 salgı farelerde hafife ve sonuçları yanıltıcı neden 12. izole sıçan periosteum bağırsakta salgılanan hormonlar, metabolizma çoğunu ortadan veya belirgin azaltılmış, plazma-aracılı bozulması kaçınılması ve karaciğer/böbrek/akciğer çıkarma/bozulması (çünkü engellenir gut bırakır olarak perfusate toplanır).
Tabii ki, önemli fikir genetiği değiştirilmiş hayvanlar, örneğin, sodyum-glikoz taşıyıcı-1 nakavt fareler13, kullanımıyla oluşturulabilir ancak moleküler sensörlerin salgı kez ilgili ayrıntılı bir değerlendirme gerektirir İyon kanalları için moleküler taşıyıcı ve farklı G protein birleştiğinde reseptörleri hücre içi proteinlere değişen birden fazla moleküler site dikkate. Örneğin, dokuz farklı moleküler sitelerin faaliyet moleküler sensörler glikoz uyarılmış GLP-1 salgı7için sorumlu çözülüyor zaman hedef. Benzer bir soruşturma mümkün içinde kullanılan bileşiklerin bazı belirsiz gibi vivo veya zararlı/ölümcül etkiler olmaz. Örneğin, perfused gut kullanırken, GLP-1 ve neurotensin salgılanması için içi hücresel glikoz metabolizmasının rol ATP oluşumu rolünün yanı sıra 2-4-dinitrophenol7,14 ile bloke ederek değerlendirmek mümkün Voltaj kalsiyum kanalları için safra asidi GLP-1, NT ve PYY salgısı3uyarılmış. Gerçekten de, çok zehirli sodyum kanal engelleyici Tetradotoksin perfüzyon çalışmaları başarılı bir şekilde uygulanabilir. Son olarak, perfüzyon modelinde bu doğrudan nerede gut belirli bir bileşik bir bazı hormon salgılanmasını araştırmacı sadece seçin ve istenen bölge sıvı için hazırlamak ve aynı zamanda bunun araştırılması gibi harekete geçirir tespit edilebilir olup olmadığını bir uyarıcı salgı moleküler sensörler etkinleştirme tarafından bağırsak3,15,16luminal veya vasküler taraftan neden olur.
Temel gut hormonu salgılanması da tarafından okudu salgı mekanizmaları (insan dokusu da dahil olmak üzere), gut doku parçaları (fare ve insan kaynaklı), hücre satırlarını salgılayan gut tarafından ölümsüzleştirilmiş birincil bağırsak kültürler (genellikle fareler), hormon kullanın. doku Ussing odaları ya da organoids (her ikisi de genellikle fareler)2,3,4,5,6,17,18monte. Bağırsak perfusions göre insan gut parçaları, birincil hücre kültürleri ve hücre hatları çalışmalar gerçekleştirmek teknik olarak daha kolay ve veri üreten bir daha hızlı ve daha ucuz yolu vardır ama tabii çalışma gut adet taze insan gut erişmesi numuneler. Ancak, bu modelleri bağırsak normal hücre kutuplaşma bu modeller moleküler sensörlerin normal harekete geçirmek değerlendirmek için kullanılamaz ve emme süreçleri de okudu değil doğal olarak kaybolur. Ayrıca, bu tür çalışmalar genellikle statik incubations istihdam (için birkaç saat kadar) olan son derece fizyolojik olmayan ve salgılanan ürün kaldırılmaz ve böylece geribildirim etkileyebilir çünkü hücrelerin normal salgı dinamikleri ile ilgisi yok hormonların salgılanmasını. İçinde emme ve salgı normal bir hızla oluşan bu yüzden transmucosal degradeler korunur sağlamak vivo, oldukları gibi buna ek olarak, perfused bağırsaklarda salgılanan ve absorbe molekülleri verimli Mukozal mikro tarafından kaldırılır. Ayrıca, hücre kültürlerinde hala rağmen onlar artık temsilcisi peptid içeriği açısından yerel hücre ve moleküler sensörler, ifade vardır anlamına gelir onların yerli enteroendocrine hücre arterin dedifferentiated söz konusu hormon salgılar. Bu, örneğin, GLP-1 salgılayan hücre hatları19böyledir.
Bu nedenle, birincil hücre kültürleri veya hücre çalışmaları çizgi bize göre en uygun amaçlar süzmek için ve gerçekleştirilen vivo içinde olamaz türleri deneyler gerçekleştirmek için veya izole perfused gut olduğunu. Örneğin, birincil hücre ve hücre satırı kültürler gerçek gücünü o intra hücresel ikincil olduğunu peygamberler (örneğin Ca2 +, kamp, NAD(P)H) gerçek zamanlı olarak izlenen ve elektrik hücreleri salgılayan hormon sinyal olabilir 20,21,22araştırıldı. Buna ek olarak, belirli inhibitörleri mevcut20,21,22,23,24değilseniz özellikle yararlı olan siRNA nakavt yapılabilir. Fareler Ussing odasında monte bağırsak dokusundan son zamanlarda kullanılan moleküler mekanizmaları safra asidi uyarılmış GLP-1 salgılanması ise bağırsak organoids (dan fareler) temel eğitim için ve insan gut parçaları da kullanılmıştır çalışmak için gut hormon salgısı17,25moleküler ayrıntıları. Oysa olmaktan eski faydaları2 polarize tümü bu modellerin statik incubations ilgilidir. Çalışmalar insan gut parçalar üzerinde ancak, doku ifade 7TM reseptörlerinin türler fark beri önemli olan insan yerine, kemirgen, doku kullanarak yararlı ve moleküler taşıyıcı farklı moleküler algılama yolları arasında neden olabilir bir tür. Aslında, bu alanda en çok veri domuz, fare ya da sıçan çalışmalar tarafından üretilen ve bu bulgular insanlar için transfer edilebilir zor kalır. Ancak, glikoz uyarılmış GLP-1 salgı altında yatan moleküler algılama mekanizmaları arasında fare, sıçan, adam, benzer gibi görünen güven verici olduğunu ve transcriptomic ve peptidomic fare ve insan L-hücreleri profil oluşturma ortaya güçlü küresel iki tür7,18,26,27arasındaki benzerlikler.
İzole sıçan periosteum ince bağırsak, ancak, aynı zamanda düşünülmesi gereken bazı sınırlamalar vardır. En önemlisi, bu olup olmadığını belirli bir salgı yanıt sonuçları hedeflenen hormon üreten hücrelerin test madde tarafından doğrudan harekete geçirmek ya da daha doğrusu dolaylı bir mekanizma tarafından neden belirlemek mümkün değildir. Örneğin, KCl anında perfused bağırsak7GLP-1 salgısı artar ama bu L hücrenin doğrudan depolarizasyon sonucu veya depolarizasyon nöronların L-hücreleri yakın veya etkileri sonuçları bilinmeyen kalır aynı anda parakrin uyarıcılar/inhibitörleri piyasaya. Veri olan salgı temel moleküler mekanizmaları aydınlatmak için amacı perfused bağırsak kullanarak çalışmalardan doğan bu nedenle, her zaman bağlam içine kurmak için yeteneğini artırmak için daha özel diğer modellerden elde edilen verilerle konması nedensellik. Örneğin, glikoz uyarılmış GLP-1 salgı GLP-1 secreting hücre kültürünü GLUTag28,29 ve birincil fare L-hücreleri glikoz taşıyıcı (SGLT1 ve GLUT2) faaliyete bağlıdır. Bu taşıyıcı periosteum sıçan küçük bağırsak engelleme salgı20glikoz uyarılmış GLP-1 salgılanması büyük ölçüde glikoz L-hücre üzerinde doğrudan eylemler tarafından aracılık ettiği olasılığı anlamına gelir, zayıflar. Başka bir önemli izole perfused bağırsak lipidler bazıları kendi hydrophobicity nedeniyle çalışma zordur kısıtlamasıdır. Son ürünler lipid sindirim (yağ asitleri, diacyl glycerols, lysophosphatidylglycerols, vb) araştırmak mümkündür ancak ve hazırlık lipidler intra cellularly ve belki de yeniden esterify ancak onları içine paketi silomikron, silomikron hücreleri ve onların sonraki alımı villus lacteals tarafından taşınması bozulur, izole gut lenf akışında güvenli olamaz beri. Hücrelerinde birikir absorbe ürünleri başladıktan sonra büyük olasılıkla, bu nedenle, lipid emme durdurulur. İn vitro hücre sistemleri kutuplaşma onların eksikliği nedeniyle daha az lipid çalışmalar için uygundur. Açıkçası, bu kısıtlama sadece emilir ve lacteals yolu ile taşınan lipidler için geçerlidir, bu bağırsak kan damarları yolu ile absorbe ise normal olarak ele alınması muhtemeldir.

<table><tbody><tr><td>Perfüzyon tamponu için kimyasallar</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Sığır serum albümini (BSA)</td> <td>Merck</td><td>1.12018.0500</td><td></td></tr><tr><td>Kalsiyum klorür dihidrat (CaCl<alt>2< / alt> x 2 H<alt>2< / alt>O)</td><td>Merck</td><td>102382</td><td></td></tr><tr><td>Dextran 70</td><td>Pharmacosmos</td><td>40014</td><td></td></tr><tr><td>Fumarik asit disodyum tuzu (C44H2Na2O4)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>F9642</td><td></td></tr><tr><td>Glikoz (C6H12O6)</td><td>Merck</td><td>108342</td><td></td></tr><tr><td>Magnezyum sülfat hepatahidrat (MgSO4</ alt>)</td><td>Merck</td><td>105886</td><td></td></tr><tr><td>Potasyum klorür (KCl)</td><td>Merck</td><td>104936</td><td></td></tr><tr><td>Potasyum dihidrojen fosfat (KH<alt>2</alt>PO<alt>4</alt>)</td><td>Merck</td><td>104873</td><td></td></tr><tr><td>Pirüvik asit sodyum tuzu (C<alt>3</alt>H<alt>3</alt>NaO<alt>4</alt>)</td><td>Merck</td><td>106619</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum bikarbonat (NaHCO<alt>3</alt>)</td><td>Merck</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sodyum klorür (NaCl)</td><td>Merck</td><td>106404</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum L-glutamat monohidrat (C<alt>5</alt>H<alt>8</alt>NNaO<alt>4</alt> x H<alt>2</alt>O)</td><td>Merck</td><td>106445</td><td></td></tr><tr><td>İsim</td><td>Company</td><td>Katalog Numarası</td><td>Comments</td></tr><tr><td>Perfüzyon eşitliği</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Universial perfüzyon sistemi</td><td>Harvard Bioscience, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>732316 TEMEL BİRİM UNIPER UP-100, TİP 834</td><td>Harvard Bioscience, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dört kanallı Makaralı Pompa</td><td>Harvard Bioscience, Inc.</td><td>730100</td><td></td></tr><tr><td>Windkessel Harvard Biyobilim</td><td>, Inc.</td><td></td><td></td>732068</tr><tr><td>Termostatik Sirkülatör, Banyo Hacmi 3L, 230V / 50Hz</td><td>Harvard Bioscience, Inc.</td><td></td><td></td>730125</tr><tr><td>Tripod standında ısıtmalı ameliyat masası, tip 873</td><td>Harvard Bioscience, Inc.</td><td></td><td></td>733776</tr><tr><td>Baskili kanül, OD = 2.0 mm, ID = 1.0 mm</td><td>Harvard Bioscience, Inc.</td><td></td><td></td>733313</tr></tbody></table>

gut hormonu salgılanması izole kullanarak temel mekanizmaları fare bağırsağı periosteum

Mechanisms Underlying Gut Hormone Secretion Using the Isolated Perfused Rat Small Intestine

Bağırsak vücudun iştahı ve gıda alımı, sindirim, besin emilimi ve dağıtım ve sonrası prandial glikoz geziler düzenleyen 15'den fazla farklı peptid hormonları üreten en büyük endokrin organıdır. Gut hormonu salgılanması düzenleyen moleküler mekanizmaları anlama anlama ve gut hormon Fizyoloji çeviri için esastır. Geleneksel olarak, gut hormonu salgılanması yatan mekanizmaları da içinde (deneysel hayvan veya insan) vivo incelendiği veya gut hormon salgılayan İlköğretim Mukozal kullanarak hücre kültürleri veya satırları hücre. Burada, bir izole sıçan periosteum ince bağırsak bağırsak hormonu salgılanması eğitim için alternatif bir yöntem olarak tanıtmak. Çoğu Fizyolojik açıdan önemli parametrelerden biri Mukozal polarizasyon, parakrin ilişkileri ve yolların da dahil olmak üzere içinde vivo çalışmalarda salgı sorumlu beyannamedir anlam bozulmamış gut yapılmasını gerektirecek ayarlamalardan bu model erdemleri vardır perfüzyon/uyarıcı pozlama. Buna ek olarak ve içinde vivo çalışmalar, aksine izole sıçan periosteum bağırsağın hemen hemen tam deneysel kontrol ve salgı doğrudan değerlendirilmesi için sağlar. Tüp Bebek çalışmaları aksine, büyüklüğü ve salgı ve ne uyaranlara salgı gut (luminal veya vasküler) hangi taraftan olduğunu farklı gut hormonların salgılanmasını neden gibi önemli soruları için dinamikleri çalışma mümkündür teşvik ve salgı yanıt arka plandaki ayrıntı moleküler sensörler çözümlemek için. Ayrıca, hazırlık, bağırsak emilim ve bağırsak emilim sorumlu taşıyıcılar da dahil olmak üzere dinamikleri ile ilgili detayları için güçlü bir modeldir.

Yetenek belirli bir uyarıcı ilgi gut hormon salgılanmasını neden olup olmadığını belirlemek için bir sabit temel salgı üzerinde dayanır. Ayrıca, uyarıcı yanıt gözlem yapılırsa, bir güçlü salgı kontrol tepki olarak pozitif test uyarana tepki eksikliği yanıt genel eksikliği yansıtacak dışlamak için belirgin olması gerekir. Şekil 2A ve 2B'yi gösterir kaliteli veri örneği; GLP-1 salgı izole sıçan periosteum ince bağırsak üzerinden 1 dk aralıklarl...

Burada, gut hormonu salgılanması ve bağırsak emilim temel moleküler mekanizmaları incelemek için güçlü ve fizyolojik bir modeli mevcut — izole sıçan periosteum ince bağırsak.

Gut hormonu salgılanması izole kullanarak temel mekanizmaları fare bağırsağı periosteum

The gut is the largest endocrine organ of the body, producing more than 15 different peptide hormones that regulate appetite and food intake, digestion, ...

Burada geliştirdiğimiz yöntem, bağırsaktan hormonların salgılanMasının moleküler mekanizmalarını, aynı zamanda besinlerin emilimini ve ikisi arasındaki bağlantıyı bulmak için çalışmamızda son derece yararlı olduğu ortaya çıktı. Bu son derece fizyolojik tekniğin en büyük avantajı bağırsak yerinde bırakılır, genellikle sadece In Vitro modelleri içinde yapılan ayrıntılı çalışmalar sağlarken. İlk ısıtmalı bir ameliyat masasına sıçan yerleştirin, parmak çimdik yanıt eksikliği onaylamak, ve karın boşluğu ortaya çıkarmak için bir deri ve periton eksizyonu yapmak.Kolon terminal bölge ortaya çıkarmak için yan ince bağırsak taşıyın. Ve kolona tedarik eden vaskülatürü de hafifletin. Yavaş yavaş kolon ayıklayın, terminal bölgeden başlayarak, ve ince bağırsak doğru hareket, iyotonik salin ile doku nemlendirici, ve gerektiğinde bağ dokusu kaldırmak için pamuklu bezler kullanarak.Tüm kolon kaldırıldı zaman, ince bağırsak lümenproksimal sonuna plastik boru 15 santimetrelik bir parça yerleştirin ve dikişler ile tüp güvenli. Sonra dikkatle oda sıcaklığında iyotonik tuzlu ile ince bağırsak yıkamak için 10 mililitrelik şırınga ve bir şırınga pompası kullanın 25-mililitre başına akış hızı. Doku şime boşaltıldı zaman, üst mezenterik arter erişilebilir böylece dokuları ayarlamak ve arter ortaya çıkarmak için bağ dokusu ve yağ dokusu kaldırın.Mezenterik arter in altına iki dikiş ve portal ven altında iki dikiş yerleştirmek için ince nokta forceps kullanın. Perfüzyon tampon ile bir haddeleme pompası bağlı plastik 22-gauge kateter doldurun ve mezenterik arter küçük bir delik kesmek için cerrahi makas bir çift kullanın, hemen kesi içine kateter yerleştirerek. Arter bir delik kesme iki dakika içinde kateteri yerleştirin, aksi takdirde bağırsak büyük olasılıkla iskemik hasar muzdarip olacaktır.Kateter bir dikişle sabitlendirin, dakikada 7,5 mililitre akış hızında perfüzyon başlatmak için haddeleme pompasını çalıştırın. Bağırsak ve portal ven kan damarları soluk açmak, portal ven bir delik kesti. Metal bir kateter yerleştirin ve metal kateteri başka bir dikişle sabitle.Damar ince duvarlı olduğu için kateteri portal vene takarak dikkatli olalım. Ancak, bekçi şimdi perfüzyon ediliyor gibi, hızlı ekleme çok önemli değildir. Perfüzyon çıktısını bir dakika topladıktan sonra, perfüzyon basıncı edinme kayıtlarını başlatmak için ses düzeyini ölçün ve basınç kayıt programındaki yürütme deneyini tıklatın.Sonra kurumasını engellemek için nemlendirilmiş bir laboratuvar dokusu ile bağırsak kapağı, ve bağırsak distal ucu bloke olmadığını onaylamak, ve bir luminal haploid çıkabilirsiniz. Oksijen ve karbondioksit kısmi basıncı ölçmek için, organ girmeden hemen önce üç yönlü stop-cock vana ile perfüzyon tampon toplamak, perfüzyon yaklaşık üç dakika sonra, ve portal ven içine yerleştirilen kateter. Örnekleri buza yerleştirin ve toplamadan hemen sonra örnekleri ölçmek için otomatik bir kan gazı analizörü kullanın.İlk taban çizgisi örneklerini elde etmek için bir kesir toplayıcısı kullanın. Temel toplama 10 ila 15 dakika sonra, dakikada 35 mililitre akış hızı üç yönlü stop-cock ile ilk intraarteriyel test uyarıcı yönetmek için bir şırınga pompası kullanın. Stimülasyonun ilk beş dakikasında dakikada 2,5 mililitre akış hızında yapılan ilk stimülasyon boas enjeksiyonu ile luminal stimülasyonlar yapın ve ardından test solüsyonunun dakikada 5 mililitre akış hızında uygulanması nı bekleyin.En kısa sürede bir luminal stimülasyon süresi sona ermez, beş dakika boyunca dakikada 2,5 mililitre akış hızı nda iyotonik salin ile lümen floş. Daha sonra bir sonraki test maddesi uygulanmadan önce 15 ila 30 dakika boyunca dakikada 5 mililitre temel numune toplayın. Deneyin sonunda, pozitif kontrol stimülasyon periyodunun sonunda 5 ila 10 dakika boyunca preparatın yanıt verme, toplama ve ek 10 ila 15 dakikalık temel numunelerin yanıt verme yeteneğini test etmek için uygun, pozitif bir kontrol uygulayın.Burada glukagon benzeri peptid-1 veya GLP-1 gösteren, bir dakika aralıklarla toplanan izole perfüze sıçan ince bağırsak salgılanması gösteren, kaliteli veri bir örnek gösterilir. Bazal koşullar altında, salgı test uyarıcı ve pozitif kontrol yönetimi öncesi ve sonrası, sağlam bir salgı yanıtı belirgin iken sabit ti. İzole perfüzyon sıçan ince bağırsağı elde edilen bu GLP-1 salgı verileri, test maddesi yönetimleri veya pozitif kontrol ile ilgisiz bir şekilde test boyunca yukarı doğru sürüklenen bazal koşullarda ölçülen kararsız bir salgı ile düşük kalitededir.Bu nedenle vasküler fruktoz stimülasyonu sonunda gözlenen artmış GLP-1 salgısının fruktoz aracılı bir yanıt olup olmadığı sonucuna varmak mümkün değildir. Bu prosedürü çalışırken kateterleri düzgün bir şekilde sabitlemek ve perfüzyon tamponu bakteri üremesi için mükemmel bir ortam sağladığından perfüzyon ekipmanını iyice temizlemek için özen göstermektedir. Bu prosedürü takiben, primer bağırsak hücre kültürlerinin hormon salgılayan hücre hatları üzerinde In Vitro çalışmaları gibi diğer yöntemler, doğrudan döngüsel AMP veya hücre içi kalsiyum hücre içi üretimini araştırmak için yapılabilir.Bu yüzden bu yöntemi, besinlerin emilimini ve hormonların salgılanma mekanizmasının ardındaki bir dizi sürecin açıklanması için kullandık ve son derece yararlı olduğu ortaya çıktı. Moleküler alanların blokerleri veya aktivatörleri ile çalışmanın son derece tehlikeli olabileceğini ve laboratuvar önlüğü, eldiven ve güvenlik gözlüğü kullanmak gibi önlemlerin bu işlemi gerçekleştirirken her zaman bir duman başlığı nın alınması gerektiğini unutmayın.

mechanisms-underlying-gut-hormone-secretion-using-isolated-perfused

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Bu protokol, eksize edilmiş bağırsak dokusu preparatlarının veya "bağırsak keselerinin" bağırsak bariyer fonksiyonunun ex vivo modeli olarak kullanımını tanımlar. Bu model, sindirim hastalığının hayvan modellerinde belirli bağırsak bölgelerinde hem epitel bariyerinin hem de mukoza jel tabakasının bütünlüğünü değerlendirmek için kullanılabilir.

Ex Vivo Bağırsak Sacs Gastrointestinal Hastalık Modelleri mukozal geçirgenliği Değerlendirmek için

3 boyutlu yetiştirilen Caco-2 hücreleri bir in vitro hücre kültürü modeli ve fare bağırsak bir ex vivo modeli kullanılarak bağırsak serotonin taşıyıcısı (SERT) fonksiyonu ve ifadesinin düzenlenmesi çalışma basit bir yöntem tarif eder. Bu yöntemler, diğer epitelyal taşıyıcılar çalışma için de geçerlidir.

Yöntem 3D Yetiştirilen Yerli Barsak ve Caco-2 Hücreler Epitel Ulaşım Protein Fonksiyonu ve Anlatım Eğitim için

Bu protokol karışık fare küçük bağırsak hücrelerinin izolasyonu ve kültürü anlatılmaktadır. Bu primer bağırsak kültürler bir takım teknikler kullanılarak bağırsak peptidi salgısının temel sinyal yollarının inceleme sağlar.

Enteroendokrin Hücre Gut Hormon salgısını Çalışması ve Canlı Hücre Görüntüleme için Amaçlanan Kemirgen Küçük Bağırsak Karışık İlköğretim Kültürler

Enterochromaffin (EC) hücreleri küçük bir alt gastrointestinal epitel hücrelerinin oluşturmaktadır. EC hücreleri elektriksel olarak heyecanlı ve kültür ve EC hücreleri tanımlayan zorlukları fizyolojik çalışmalar sınırlı henüz serotonin, bırakın. Burada sunulan yöntem bir birincil kültür model tek EC hücrelerin incelenmesi için mükellef tarafından Elektrofizyoloji kurar.

Tüm cep telefonu Elektrofizyoloji birincil kültürlü fare Enterochromaffin hücre

İnce bağırsağın farklı boyutlardaki partikülleri nasıl işlediğini incelemek için, ince bağırsak geçişini belirlemek için yerleşik bir in vivo yöntemi değiştirdik.

Luminal Partiküllerin Murine İnce Bağırsak Mekanosenizasyonunun İncelenmesi

Bu protokol, bir siklik adenozin monofosfat (cAMP) biyosensörünün, bir cAMP fark detektörünün in situ (cADDis) ve bir mikroperifüzyon sisteminin adenoviral iletimini kullanarak hücre içi sinyal olaylarının senkron edinimi ve birlikte kaydı ve birincil insan psödoisletleri tarafından insülin ve glukagon salgılanması için bir yöntemi açıklar.

Floresan Biyosensör Dinamiğinin ve Hormon Salgı Profillerinin Senkron Değerlendirmesi için İnsan Psödoislet Sistemi

Burada, sıçan bağırsak organoidleri üretmek ve bunları birkaç aşağı akış uygulamasında kullanmak için bir protokol sunuyoruz. Sıçanlar genellikle tercih edilen bir klinik öncesi modeldir ve sağlam bağırsak organoid sistemi, in vivo çalışmalara eşlik edecek bir in vitro sistem ihtiyacını karşılar.

Sıçan Bağırsak Organoidlerinin Üretimi ve Manipülasyonu

Sıçan bağırsak tüplerini izole etmek ve ilaçların gerginlik, frekans ve amplitüd üzerindeki etkisini in vitro olarak değerlendirmek için bir yöntem sunuyoruz. Bu yöntem, bağırsak tüplerini araştıran araştırmacılar için değerli bir yaklaşım sunmaktadır.

İzole Edilmiş Bağırsak Tüplerinin Fonksiyonel Aktivitelerini Gerçek Zamanlı Olarak Tespit Etmek için İn Vitro Doku Perfüzyon Sistemi Kullanma

Bu çalışma, ince ve kalın bağırsaklardan türetilen 2D tek katmanlı domuz organoidleri oluşturmak için bir protokolün ana hatlarını çizmektedir. Bu tek tabakaların büyümesi, sağlam epitel bütünlüğünü gösteren artan TEER değerleri ile işaretlenir. Ek olarak, bu tek tabakalar, forskolin uygulamasını takiben Ussing odası deneylerinde fizyolojik salgı tepkileri sergiler.

Doğal Bağırsağın Fizyolojik Özelliklerini Yansıtan İki Boyutlu Domuz Bağırsak Organoidleri

Burada, olası karışıklıkların azaltılması ile endokrin pankreas fonksiyonunu değerlendirmek için ek bir teknik olarak, sağlam bir pankreas ile fare damar sistemi yoluyla perfüzyon yoluyla glikoz ile uyarılan insülin sekresyonu (GSIS) gerçekleştirme hakkında ayrıntılar sunuyoruz.

Sağlam Bir Pankreas ile Farelerin Damar Sisteminden Perfüzyon Yoluyla Glikozla Uyarılan İnsülin Sekresyonu

Keşfedin bağırsak hormonu salgılanmasının moleküler mekanizmalarını izole perfüze sıçan ince bağırsağı kullanarak. Bu yöntem besin emilimi ve hormonal süreçleri fizyolojik koşullarda inceleme olanağı sunar.

Gut hormonu salgılanması izole kullanarak temel mekanizmaları fare bağırsağı periosteum

Daha fazla video keşfet