Farelerde inme sonrası depresyon Inducing için orta serebral arter tıkanıklığı tekniği
22 Mayıs 2019
Burada iç karotis arter üzerinden orta serebral arter yuvasını kapatıp tarafından fareler sonrası felç depresyon teşvik etmek için bir protokol sunuyoruz. İndüklenen depresif ruh hali onaylamak ve değerlendirmek için Porsolt zorla yüzme testi ve sakaroz tercih testi kullanıyoruz.
Protokolümüz, inme sonrası depresyon gelişiminin mekanizmasını incelemeye ve daha etkili bir tedavi bulmaya yardımcı olmak için sıçanlarda yeni bir medial serebral arter oklüzyon tekniği önermektedir. Tekniğimizin en büyük avantajı, kilo değişiklikleri, beyin ödemi ve enfarktüs hacmindeki değişkenliği azaltma ve prosedüre bağlı ölümleri en aza indirebilme yeteneğidir. Bir erkek 300 ila 350 gramsa Sprague Dawley sıçan kuyruk tutam yanıt eksikliği doğruladıktan sonra, 37 santigrat derece ısıtma plakası üzerine hayvan yerleştirin ve çekirdek vücut Sıcaklığı izlemek için bir rektal prob kullanın.
Hayvanın gözlerine merhem uygulayın ve boynundaki tüyleri tıraş edin. Daha sonra, yüzde 70 alkol klorheksidin ile maruz kalan cilt dezenfekte ve standart tekniklere göre oklüzyon yapmadan önce steril cerrahi perde ile sıçan kapağı. Nörolojik şiddet puanı elde etmek için, düz bir yüzeye tıkanmış bir sıçan yerleştirin ve hayvan serbestçe hareket sağlar.
Bir dakika sonra fareyi kuyruğundan yavaşça geriye çekin ve hayvanın yürüyüş tepkisini derecelendirin. Enfarktüs hacmini ölçmek için, hazırlanan lekeli beyin dilimlerini 1,600'e 1, 600 nokta inç çözünürlükte tarayarak ve tüm görüntüler için ölçeği standartlaştırın. Daha sonra, standart görüntüleri uygun bir görüntü analizi yazılımı programına yükleyin ve tüm beyin diliminin yüzdesi olarak enfarktüs boyutunu belirlemek için altı ardışık iki milimetrelik dilimlerde işaretli pallor alanını ölçmek için bir izleme aracı kullanın.
Ameliyattan 30 ila 33 gün sonra hayvanları kafeslerde kapalı, sessiz, ışık kontrollü bir odaya aktarın ve her kafese %1 sakaroz çözeltisi içeren 100 mililitrelik bir şişe yerleştirin. Ertesi gün, 12 saat boyunca şişeyanı, yiyecek ve içme suyu çıkarın. Mahrumiyet süresinin sonunda, 100 mililitre %1 sakaroz çözeltisi içeren bir şişe ve her kafese 100 mililitre musluk suyu içeren bir şişedört saat boyunca yerleştirin.
Daha sonra, her hayvan için sakaroz tercihine yakınlık hesaplama sağlamak için sakaroz çözeltisi ve tüketilen su hacmini kaydedin. Porsolt'ün zorunlu yüzme testi için, ameliyattan 30 ila 33 gün sonra, her sıçanı 15 dakika boyunca 80 santimetre 25 santigrat derece su içeren dikey pleksiglas silindire yerleştirin. Alışma süresinin sonunda, farenin hayvanı ev kafesine geri döndürmeden önce 32 santigrat derecede ısıtılmış kasada 15 dakika kurumasını bekleyin.
Ertesi gün, bu süre boyunca hareketsizlik toplam süresinin hesaplanmasına izin vermek için beş dakikalık test kayıt, son beş dakika için silindir e fare dönün. Histolojik analiz, sahte kontrol grubundaki hayvanlarla karşılaştırıldığında MCAO sonrası toplam beyin hacminin bir yüzdesi olarak istatistiksel olarak anlamlı infarkt hacmini ortaya koymaktadır. Deney hayvanlarında sahte kontrol grubuna göre istatistiksel olarak anlamlı bir beyin ödemi de gözlenmektedir.
MCAO hayvanlar 50 dakika, 24 saat ve yedi gün ameliyat sonrası sham-işletilen hayvanlara göre daha düşük nörolojik performans göstermektedir. MCAO sıçanlar da sakaroz önemli ölçüde daha düşük miktarda tüketmek ve sham işletilen hayvanlara göre Porsalt'S zorunlu yüzme testleri sırasında daha uzun bir hareketsizlik sergiler. Bu davranışsal inme çalışmaları için önemli bir modeldir ve gelecekteki tedavileri değerlendirmek veya terapötik maddelerin etkinliği hakkında kritik preklinik veri sağlamak için bir araç olarak hizmet verebilir.
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin
Genel Bakış
Bu makale, orta serebral arter oklüzyonu yoluyla sıçanlarda inme sonrası depresyonu tetiklemek için bir protokol sunmaktadır. Çalışma, deneklerdeki depresif ruh hallerini değerlendirmek için davranışsal testler kullanmaktadır.
Temel Çalışma Bileşenleri
Bilim Alanı
- Nörobilim
- Davranış Bilimi
- İnme Araştırmaları
Arka Plan
- İnme sonrası depresyon, inme sonrası sık görülen bir komplikasyondur.
- Mekanizmalarının anlaşılması, etkili tedavilerin geliştirilmesine yardımcı olabilir.
- Mevcut yöntemler, sonuçlarda yüksek değişkenlik gösterebilir.
- Bu çalışma, değişkenliği minimize etmek için oklüzyon tekniğini geliştirmeyi amaçlamaktadır.
Çalışmanın Amacı
- İnme sonrası depresyonu incelemek için güvenilir bir model oluşturmak.
- Yeni oklüzyon tekniğinin depresif davranışlar üzerindeki etkilerini değerlendirmek.
- Hayvan modellerinde prosedüre bağlı komplikasyonları azaltmak.
Kullanılan Yöntemler
- Sıçanlarda orta serebral arter oklüzyon tekniği.
- Porsolt zorunlu yüzme testi kullanılarak yapılan davranışsal değerlendirmeler.
- Duygu durum değişikliklerini değerlendirmek için sukroz tercihi testi.
- Prosedür sırasında fizyolojik parametrelerin izlenmesi.
Ana Sonuçlar
- Yeni teknik, ağırlık değişimlerindeki değişkenliğin azaldığını göstermiştir.
- Beyin ödemi insidansında ve enfarkt hacminde düşüş gözlemlenmiştir.
- Prosedürle ilişkili ölümler minimize edilmiştir.
- Davranışsal testler, depresif durumların indüklendiğini doğrulamıştır.
Sonuçlar
- Geliştirilmiş oklüzyon tekniği, inme sonrası depresyonun incelenmesinde etkilidir.
- Bu teknik, gelecek araştırmalar için daha tutarlı bir model sağlar.
- Terapötik müdahaleleri araştırmak için daha fazla çalışmaya ihtiyaç vardır.
Sıkça Sorulan Sorular
Sektörel Uygulama ve Uygunluk
İnme tedavilerinde nöropsikiyatrik hedef doğrulamanın risklerini azaltmak için inme sonrası depresyonun güvenilir preklinik modellerinin oluşturulması kritik önem taşımaktadır. Bu MCAO tekniği; enfarkt hacmi, beyin ödemi ve mortalitedeki değişkenliği azaltarak davranışsal fenotiplemede öngörülebilirlik güvenini artırır. Geliştirilmiş model tutarlılığı, serebral iskemi ile depresif fenotipler arasındaki mekanistik bağlantıları netleştirerek erken keşif aşamasındaki devam/durdur kararlarını destekler.
Biyofarmasötik Ar-Ge'de Stratejik Uygulamalar
Erken Keşif ve Hedef Doğrulama
- Bilimsel Değer: Kontrollü MCAO indüksiyonu aracılığıyla, iskemik hasarı depresif patofizyoloji ile ilişkilendiren terapötik hipotezlerin sorgulanmasına olanak tanır.
- Operasyonel Değer: Ağırlık değişimleri, enfarkt hacmi ve beyin ödemindeki sonuç değişkenliğini azaltarak, hedef etkileşim çalışmaları için analiz tekrarlanabilirliğini artırır.
- Tahminleme Değeri: Sakkaroz tercihi ve zorunlu yüzme testleri yoluyla valide edilmiş depresyon benzeri davranışlar sunarak, bileşiklerin hastalıkla ilgili bir sistem üzerinden fenotipik taramasını destekler.
Tarama ve Analiz Geliştirme
- Deney Hazırlığı: Bileşik tarama süreçleri için ölçülebilir nörolojik şiddet skorları ve enfarkt hacmi ölçümleri içeren standartlaştırılmış biyolojik sistemler üretir.
- Kantitatif Çıktılar: Terapötik taramalarda doz-yanıt analizine olanak tanıyan sakkaroz tercih oranları ve hareketsizlik süresi gibi ölçülebilir son noktalar oluşturur.
- Ölçeklenebilirlik: ICA tabanlı oklüzyon tekniği, kohortlar arasında tutarlı model oluşturumuna izin vererek lider bileşik belirleme kampanyalarında platformun yeniden kullanımını destekler.
Translasyonel ve Preklinik Araştırmalar
- Hastalık İlgisi: İnme sonrası depresyonu, klinik PSD prevalansı ve karşılanmamış terapötik ihtiyaçlarla uyumlu bir komorbid nöropsikiyatrik komplikasyon olarak modeller.
- Translasyonel Süreklilik: Depresif durumların davranışsal ve histolojik doğrulaması aracılığıyla, keşif aşamasındaki mekanik risk azaltma sürecini preklinik validasyonla ilişkilendirir.
- Riske Göre Ayarlanmış İlerleme: MCAO kaynaklı enfarkt hacmini davranışsal sonuçlarla korele ederek terapötik etkililik üzerine preklinik veriler sağlar ve devam/dur kararlarına temel oluşturur.
İşlem Hattı ve İş Akışı Entegrasyonu
Bu yöntem, hedef doğrulamadan öncü bileşik belirlemeye ve preklinik etkinlik testlerine kadar uzanan keşif sürekliliğine uygun olup, inme-nöropsikiyatrik terapötik hipotezlerin yinelemeli olarak geliştirilmesine olanak tanır.
- Keşif Biyolojisi: Kontrollü MCAO ve nörolojik skorlama aracılığıyla, depresif fenotipleri tetikleyen iskemik inme mekanizmalarının hipotez testlerini destekler.
- Tarama: Bileşik kütüphanesi taraması için kritik olan, tekrarlanabilir enfarkt hacmi ve beyin ödemi ölçümleri yoluyla analiz standardizasyonuna olanak tanır.
- Analitik: Sükroz tüketimi ve hareketsizlik süresi dahil olmak üzere kantitatif bağımlı değişkenler sağlayarak, tedavi grupları arasında istatistiksel karşılaştırmayı kolaylaştırır.
- Translasyonel Araştırma: İskemik lezyon yükünü davranışsal fenotiplerle ilişkilendirerek, enfarkt hacmi ile depresyon benzeri sonuçlar arasındaki biyobelirteç uyumunu destekler.
- Kurumsal Yeniden Kullanım: İnme komorbidite modellerinde nöroprotektif ve antidepresan adaylarını değerlendirmek için yeniden kullanılabilir bir preklinik platform oluşturur.
Operasyonel ve Kurumsal Etki
- Bilimsel Değer: İnme-depresyon komorbidite modellerindeki mekanistik belirsizliği azaltarak hedef doğrulama güvenini artırır.
- Operasyonel Değer: Prosedürle ilişkili ölümleri ve değişkenliği en aza indirerek laboratuvarlar arası tekrarlanabilirliği ve standardizasyonu geliştirir.
- Stratejik Değer: Biyolojik olarak riskten arındırılmış modeller aracılığıyla, aday belirleme sürecindeki yanlış pozitifleri azaltarak sermaye verimliliğini artırır.
- Portföy Etkisi: Tutarlı fenotipik okumalar temelinde, nöropsikiyatrik komorbiditeleri hedefleyen inme terapötiklerinin riskten arındırılmış önceliklendirmesine olanak tanır.
Uygulama Hususları
- Kemirgen stereotaksik cerrahisi ve nörolojik şiddet skorlaması konusunda uzmanlık gerektirir.
- Boyanmış beyin kesitlerinin görüntü analizi yoluyla enfarkt hacmi miktarının belirlenmesi için enstrümantasyona bağımlıdır.
- Davranışsal son noktalar için sakroz tercihi ve zorunlu yüzme testi protokollerinin ekipler arası standardizasyonunu gerektirir.
- Adaptasyon hususları, vücut çekirdek sıcaklığı izlenirken ICA tıkanıklığı tekniğinin farklı sıçan suşlarına ve yaşlarına göre ölçeklendirilmesini içerir.
- Pratik kısıtlamalar arasında, enfarkt gelişimini ve MCAO sonrası 30–33. günlerdeki davranışsal değişiklikleri doğrulamak için postoperatif izleme ihtiyacı yer alır.
