Name: Boyuna morfolojik ve fizyolojik izleme optik koherens tomografi kullanarak üç boyutlu tümör pulcuklarının (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-02-09T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 50 s
Description: Öğrenin, optik koherens tomografi kullanarak üç boyutlu tümör küreciklerinin morfolojik ve fizyolojik izlemesini. Bu yöntem, ilaç keşfi sürecini hızlandırarak kanser tedavilerinin geliştirilmesine katkı sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu eser NSF tarafından desteklenen IDBR (DBI-1455613), PFI:AIR verir-TT (dudak-1640707), NIH hibe R21EY026380, R15EB019704 ve R01EB025209 ve Lehigh Üniversitesi başlangıç fonu.

1. hücre hazırlanması
<ol><li>Hücre hatları nitelikli bir tedarikçiden edinin. Not: hücreleri ilgi hücre satırlarından küresel kültür ortamda veya bir substrat (Matrigel gibi membran matris) yardımıyla oluşturabilir doğrulayın. Bir tur öncesi bir deneme için bir denetimi gerçekleştirmek ya da edebiyat9 içine bak.</li>
	<li>Aşağıdaki hücre kültürünü tedarikçi tarafından sağlanan belirli yordamı donmuş hücreleri çözülme. Genel yordam43başka bir yerde bulunabilir.</li>
	<li>1-2 pasajlar 25 cm2 kültür şişeler için hücreleri kültür. Hücreleri sonra 3D hücre kültürü için kullanmaya hazırsınız.</li>
	<li>Her gün hücreleri sağlık durumunu izlemek ve bir kuluçka (37 ° C, % 5 CO2, % 95 nem) standart koşullarda proje. Medya gerektiği gibi yenileyin. Not: Kültür orta DMEM (4,5 g/M glikoz), %1 antibiyotik antimycotic, % 10 fetal Sığır serum oluşur. Onlar izdiham içinde kültür şişeye ulaşmadan alt kültür hücreleri. Tedarikçi tarafından sağlanan hücre kültür kılavuz izleyin. Genel bir prosedür-ebilmek bulunmak elsehwhere44.</li>
	<li>3D hücre kültürü çok iyi plakaları üzerinde aşağıdaki genel Protokolü9dayalı gerçekleştirin.<ol>
<li>Kültür balonun kültür ortamını çıkarın ve sterilize edilmiş fosfat tamponlu tuz (PBS, 37 ° C'ye ısıtılmış) ile yıkayın.</li>
		<li>Hücreleri tripsin ethylenediaminetetraacetic asit (EDTA, % 0.5) 1 mL ekleyerek 3 min için balonun içine resuspend. Daha sonra kültür tripsin sulandırmak için medya ekleyin.</li>
		<li>Hücre süspansiyon 15 mL santrifüj tüpü ve santrifüj 500 x g ve oda sıcaklığında 5 min için içine aktarın.</li>
		<li>Süpernatant kaldırmak ve önceden ısıtılmış kültür ortamının 4 mL içeren hücreleri resuspend. Örnek hücre konsantrasyonu belirlemek için hücre sayımı için bir hemasitometre üzerine bir damla pipet. (Örneğin, 3.000 hücre/mL) tohum için uygun toplama hücrelere sulandırmak. Not: ilk hücre konsantrasyonu küresel her hücre kültürünü ve çok iyi plaka (96-şey, 384-şey veya 1536-şey) her tür için en iyi duruma getirme.</li>
		<li>Tohum hücrelere bir ultra düşük eki (ULA) yuvarlak popolu çok iyi plaka. Her şey yaklaşık 600 hücreleri olan hücre süspansiyon, 200 µL 3.000 hücre/mL konsantrasyonu her kuyuda içine ekleyin.</li>
		<li>RT santrifüj kapasitesi 7 dk, 350 g x hızında veya kullanılabilir en düşük hız tohum sonra doğru bir plaka bağdaştırıcısı kullanan bütün tabağı. Not: Santrifüj hücreleri tek, tek bir küresel şekillendirme kolaylaştırmak için kuyu ortasına doğru toplamak yardımcı olur. Santrifüj adım başlangıçta tümör pulcuklarının oluşturmak için yalnızca bir kez gerçekleştirilir. Tümör pulcuklarının büyüyen başlattığınızda bu yinelenir değil.</li>
		<li>Çok iyi plaka 37 ° C ve % 5 CO2 bir kültür kuluçka korumak ve Kültür medya 3 günde yenileyin. Not: Büyüme zaman farklı 3D kültür koşulları için değişebilir. Böylece küresel ~ 500 mikron 4\u20127 gün HCT 116 hücrelerin içinde büyüyebilir bizim çalışmada, 96-şey kaplamalar, U-87 MG ve HCT 116 hücre hatlarında 3.000 hücre/mL kullanılır. Medya takviyeleri ve büyüme faktörleri için farklı küresel modelleri, bağlı genel 3D kültür Protokolü eklemeyi düşünün.</li>
		<li>OCT görüntüleme tümör pulcuklarının 3\u20124 günde onların büyüme boyuna bir çalışma için gerçekleştirin. Not: OCT görüntüleme için önerilen zaman puan 4. gün, gün 7, gün 11, gün 14, gün 18 ve 21 gün olurdu.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. yüksek-Platform Imaging üretilen iş Ekim
Not: başvuruda bulunulan bkz: iş29,30,31,32,33,34 için ayrıntılı bir inceleme ilkeleri ve uygulamaları, Ekim. Bkz: Şekil 1 ve Huang vd. 42 , görüntüleme sistemi bu çalışmada kullanılan özel Ekim Ayrıntılar için.
<ol><li>Tümör küresel görüntüleme için OCT sistemi için uygun bir geniş bant ışık kaynağı seçin. Not: Burada, merkezi bir dalga boyu ~ 1,320 ile superluminescent diyot (SLD, Şekil 1A,B) nm ve ~ 110 nm bant genişliği geniş bant bir ışık kaynağı olarak kullanıldı.</li>
	<li>Başvuru kol ve örnek kol ( Şekil 1A,B Ayrıntılar için bakınız) şemaları takip OCT sistemi oluşturmak. OCT sistem inşa Malzemeleri tablo optik bileşenlerinin bir listesi için bkz. Başvuru kol ve örnek kol optik yol uzunluğu yakından eşleşen emin olun.</li>
	<li>Ekim tasarımını Spektrometre ayrıntılarını alternatif olarak, eşleşen bir ticari Spektrometre seçmek için bir Kolimatör, bir ızgara, bir F-theta lens ve bir satır taramalı kamera (bkz: Şekil 1 c için kurulum34) de dahil olmak üzere spektrometre, inşa Merkezi dalgaboyu ışık kaynağı. Spektrometre düzgün tüm Lazer bant genişliği, yüksek foton toplama verimliliği elde etmek için ve yavaş wash-out kesişim deseni sağlamak için kapsayacak şekilde hizalanmış emin olun.</li>
	<li>Örnek kol gücü, görüntüleme derinliği, derinlik bağımlı duyarlılık, eksenel çözünürlük, odak ve lateral çözünürlük derinliği toplam gibi aşağıdaki ölçümler de dahil olmak üzere OCT sisteminin performansını karakterize. Zayıf bir yansıtıcı (Örneğin, bir ayna ile bir nötr yoğunluk filtresi) derinlik bağımlı duyarlılık, eksenel çözünürlük ve odak derinliği ölçmek için bir örnek olarak yerleştirin. Bir USAF çözünürlük testi grafik hedef yanal çözünürlük kontrol etmek için örnek yerleştirin. Not:34,45 tanımları ölçümler OCT performansı ve bu ölçümler45karakterize etmek için iletişim kuralları için bkz: başvurur. Bizim çalışmada kullanılan özel OCT sistemi için ölçülen parametrelerinin bir listesi için bkz. Tablo 1 .</li>
	<li>Görüntü tümör pulcuklarının farklı Wells (bkz: Şekil 1B) çok iyi plakasına yatay hareketi sağlamak için bir motorlu çeviri sahne alanı seçin. Bir sahne ile bir seyahat sıra-108 mm x 72 mm çaptan çok iyi plaka tüm Kuyu yapımı tam bir tarama sağlamak için kullanın. Bir 2D veya 3D motorlu çeviri sahne yazılım kontrolü ile her şey tam yerini ve otomasyon OCT sistem yüksek üretilen iş görüntüleme için etkinleştirmek için kullanın.</li>
	<li>Bir plaka adaptörü kullanın veya bir plaka sahibi (3D baskı tarafından) çok iyi plaka sabit bir pozisyonda tutmak için tasarım.</li>
	<li>Yatırma ve rotasyon sahne ve çevirim sahne alanı'nda (bkz: Şekil 1 D), monte edilmiş bir rotasyon sahne devirme bir 2D kullanarak çok iyi plaka farklı kuyulardan odak düzlem varyasyonu en aza indirmek için herhangi bir OCT Imaging gerçekleştirmeden önce düzeltin. D2, D11, B6, D6, G6 yol gösterici wells göreli konumlarını (Şekil 1A) OCT görüntüleri izlerken kullanın.</li>
	<li>Döndürme kuyuları, OCT görüntüler (Şekil 1E) aynı yatay pozisyonlarda kadın plaka kenarlarını sahne hareket yönü ile paralel olduğundan emin olmak için plaka ayarlayın. Böylece kuyu OCT (Şekil 1F) görüntüleme için aynı dikey konumlarda kalır optik tabloya paralel olması için plaka devirme ayarlayın. Not: Uyum devirme açı ve odak yardımcı OCT görüntü kalitesi bütün kuyuları için en iyi duruma getirme. Ancak, Kültür medya farklı Wells yüksekliğini varyasyonları küresel görüntü defocusing için yol açabilir optik yolları değişiklikler neden olabilir. Auto-odak iyi görüntü kalitesi elde etmek için OCT Imaging odak düzlemi kontrol etmek için uygulanabilir. Ayarlama adım OCT görüntü kalitesiz tümör küresel nedeniyle aşağıdaki sorunları gidermez: küresel ilk tohumlama konumu nedeniyle; decentering biofabricated hücre dışı matrisler katıştırılmış küresel yükselmesi; Zavallı plaka kaliteli iyi dipleri boy büyük farklılıklar nedeniyle. Ek yazılım denetim ile auto-odak ya da otomatik hizalama görev görüntüleme sistemi OKT performansını optimize etmek için uygulanabilir.</li>
	<li>OCT resim alma ve her birinden de sırayla veri toplamak için sahne hareketi kontrol etmek için bir özel bilgisayar programı kullanın.</li>
</ol>3. tarama ve tümör pulcuklarının işleme Ekim
<ol><li>Tümör pulcuklarının OCT görüntüleme günü, çok iyi plaka kuluçka makinesi al. Görüntüleme sistemi OKT altında çok iyi plaka aktarın. Plaka bağdaştırıcısı üstüne yerleştirin. Not: Tümör pulcuklarının OCT görüntüleme Polistren levha kapak açma veya kapatma ile gerçekleştirilebilir. Ancak, kuyulardan buharlaşma nedeniyle kapağındaki su yoğunlaşmaları ışık geçirgenliği etkiler ve en uygun daha az OCT görüntüleri pulcuklarının verimli ışık yolunu deforme.</li>
	<li>Z-yönünü çeviri sahne hareket ettirerek plaka yüksekliğini ayarlayın. ~ 100-200 odak düzlemi konumunu korumak mikron depth-wise üniform olmayan etkisini en aza indirmek için her küresel üst yüzeyinin altında odak profil.</li>
	<li>Bir uygun OCT tarama aralığı (Örneğin, 1 mm x 1 mm) onun gelişme evrelerine göre bütün tümör küresel karşılamak için özel yazılım ayarlayın. Ayarı kaydetmek için Kaydet parametreler ' i tıklatın.</li>
	<li>Tümör pulcuklarının teker teker pulcuklarının içeren plaka bütün kuyuları için 3 boyutlu OCT görüntüleri elde etmek için özel yazılım kullanmak. Önizleme resmi görüntülemek ve OCT görüntü elde etmek için Al düğmesini tıklatın için Önizleme düğmesini tıklatın. Not: sahne hareket halinde değilken OCT küresel veri toplanan olun. Küresel U alt Merkezi'nde de genellikle bulunur. Ancak, sahne hızlanan veya küresel kültür medya atalet nedeniyle yavaşlatma küresel kültür medyada kaydırılır.</li>
	<li>İşlem 3D OCT veri kümeleri, tümör pulcuklarının özel C++ işleme kodu ile OCT yapısal görüntüler oluşturmak için. Şekil 2A post-processing OCT veri akış çizelgesi için bkz. Not: Şekil 4A oluşturulan 3D OCT yapısal görüntüleri için bkz.<ol>
<li>Bkz: Bölüm 5, Drexler ve Fujimoto34 ve Jian vd. 46 OCT veri işleme adımları ayrıntılı açıklaması için. Tüm üç boyutlu piksel boyutunu ayarlamak. OCT yapısal görüntü düzeltilmiş ölçeklerde yeniden ölçeklendirme. Not: Başvuru kol ve örnek kol optik yol farkı ölçüsü eksenel yönde (z-yön) OCT görüntülerin mesafedir. Böylece, kırılma indisi (n) örneğinin rescaling için eksenel yönde piksel boyutunu ayarlama zaman dikkate alınması gerekir. Bizim çalışmada, n kullandığımız 1.37 tümör küresel42kırılma indisi =.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Küresel görüntüleri 2B OCT görüntüleri üç kesitsel XY, XZ ve YZ uçak içinde küresel centroid kullanarak kolaj oluşturmak. Şekil 3 c-E kolajlar küresel görüntüleri temsilcisi çıkışı için bkz. Tüm küresel cisimlerin yaklaşık aynı yerde konumlandığından emin olmak için MATLAB işlevi dftregistration47, kullanarak tüm pulcuklarının için görüntü kaydı gerçekleştirmek.</li>
	<li>Bir ticari veya özel yazılım kullanarak küresel 3D render edinin. Not: Aşağıdaki adımlar tümör pulcuklarının ticari bir yazılım kullanarak 3D render edinme gösterir.<ol>
<li>3D OCT veri belgili tanımlık bilgisayar yazılımı yükleyin.</li>
		<li>Surpass Masası'nı tıklatın. Sonra Eklemek Yeni Birim'itıklatın. 3D render için kullanılacak karışım modu seçin.</li>
		<li>Görüş açısı fare işaretçisini kullanarak görüntü sürükleyerek ayarlayın.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3D tümör pulcuklarının 4. morfolojik miktar
Not: Bu miktar özel bir yazılı kod MATLAB içinde işler. İşlemi başlatmak için Çalıştır düğmesini tıklatın. Şekil 2B pulcuklarının morfolojik miktar adımları akış çizelgesi için bkz.
<ol><li>Küresel çapı, yükseklik ve çapı tabanlı birim ölçmek.<ol>
<li>2D OCT görüntüleri küresel centroid geçen üç kesitsel XY, XZ ve YZ uçak içinde seçin.</li>
		<li>Çapı ölçmek ve küresel XY ve XZ yüksekliğini uçak, anılan sıraya göre.</li>
		<li>Küresel çapı tabanlı birim kullanarak hesaplama: <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/59020/59020eq1v2.jpg"> , tümör küresel şeklinde bir varsayım ile.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Voksel tabanlı küresel güç ölçmek.<ol>
<li>Speckles kaldırmak için küresel OCT yapısal Datası 3D ortalama filtre uygulayın.</li>
		<li>Açıkgöz kenar algılama48 filtre, kare kare, tümör küresel bölge iyi alttan ayıran uygun bir eşik ile kullanarak tümör pulcuklarının kesiminde.</li>
		<li>3D verileri için bağ voxels grubu (yerleşik işlev bkz: bwconncomp).</li>
		<li>Her bağ Voksel grubunda ve (el ile seçilmiş), küresel centroid her grup için arasındaki uzaklığı hesaplamak. Küresel bölge grup olarak en az ortalama mesafe ile tanımlayın.</li>
		<li>Voxels küresel bölgesi içinde saymak ve küresel toplam hacmi verimli gerçek birim (birim/Voksel), bir tek tek Voksel tarafından çarpın.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. ölü hücre bölge 3D tümör pulcuklarının tespiti
Not: homojen bir ortamda bira-Lambert hukuk49tarafından OCT geri dağınık yoğunluğu Derinlik (ı(z)) bir fonksiyonu olarak algılanan tanımlanabilir: <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/59020/59020eq2v2.jpg"> , z derinliğini gösterir nerede μ optik zayıflama olduğunu katsayısı, ve ben0 örnek olay yoğunluğu. Bu nedenle türetilmiş optik zayıflatma katsayısı olarak ifade edilebilir: <img alt="Equation 3" src="/files/ftp_upload/59020/59020eq3v2.jpg"> . OCT görüntüleri kez logaritmik bir ölçekte çizilen ilişkili beri OCT yoğunluğu profil eğimi optik zayıflatma katsayısı türetmek için alınabilir. Şekil 2C optik zayıflatma haritaların üretimi bir akış çizelgesi için bkz:.
<ol><li>Küresel dışında istenmeyen bölgeleri kaldırmak için segment gerçekleştirin. OCT Albümdeki doğasında vardır benek gürültü bastırmak için 3D ortalama filtre uygulayın.</li>
	<li>Pixel-Wise edinmek optik zayıflama katsayıları doğrusal tarafından belirli bir derinlik Aralık üzerinde (hareketli pencere), günlük ölçekli OCT yoğunluğu profiline uyan onun yamaç ayıklamak ve yamaç -1 tarafından çarpın/2. Not: Her Voksel parçalı Küresel bölgesi içinde zayıflatma katsayısı OCT yoğunluğu profil 10-Voksel derinlik penceresindeki (derinlemesine ~ 40 mikron), eğimi dayalı ortasındaki pencerede yer alan Voksel ile hesaplanır.</li>
	<li>Bir çerçeve içinde eksenel her tarama ve optik zayıflama katsayıları parçalı Küresel bölgesinin tüm voxels için hesaplanır kadar parçalı Küresel bölge içeren bir 3B veri kümesi her çerçevede yukarıda (merdiven 5.1 ve 5.2) yöntemleri uygulayın.</li>
	<li>Yüksek-zayıflama bölgesi vurgulamak için ikili eşik gerçekleştirin. Not: Bkz: Huang vd. 42 eşik çubuk grafik analizi ile yüksek-zayıflama bölgesinin belirlenmesi için.</li>
	<li>Binarized optik zayıflama harita (karıştırma) ölü hücre bölge etiketlemek için orijinal görüntü üzerinde vurgulayın. Ölü hücre bölgesinin 3D dağılımını görselleştirmenizi karışımlı zayıflama harita 3D olarak işlenen görüntü oluşturmak.</li>
</ol>6. Histoloji ve immünhistokimya
Not: Histoloji ve tümör pulcuklarının görüntülerini lekeli immünhistokimya (IHC) karşılık gelen OCT sonuçları ile ilişkilendirmek için elde edilir.
<ol><li>Seçilen zaman noktalarda, 1-2 tümör pulcuklarının Histoloji ve IHC boyama çok iyi plaka seçin. Bir pipet 1 mL pipet ipuçları ile küresel bir 1,5 mL santrifüj tüpü kuyudan aktarmak için kullanın. Not: 1 mL pipet ucu ucunu açılışı küresel yapısını zarar görmesini önlemek için tümör küresel boyutundan büyük olduğundan emin olmak için transfer önce kesilmiş.</li>
	<li>% 10 formaldehit ve düzeltme 48 h için dolu bir tek 1.5 mL microcentrifuge tüp her tümör küresel toplayın.</li>
	<li>Histoloji ve IHC işlemleri standart parafin katıştırma teknikleri kullanarak her küresel için gerçekleştirin. Not: Leke 5 mikron kalınlığında kesitler tümör pulcuklarının Hematoksilen ve eozin (H &amp; E) ve terminal deoksinükleotidil transferaz dUTP nick bitiş (tünel) apoptosis algılama etiketleme için. Hematoksilen counterstaining tünel için uygulanır. Dijital slayt tarayıcı lekeli örnek inceden inceye gözden geçirmek ve yüksek çözünürlüklü elde etmek için kullanılan histolojik ve IHC görüntüler.</li>
</ol>

Yazarlar hiçbir rakip faiz ifşa.

Tümör faaliyet morfolojik yapısı için son derece uygundur. Karakteristik büyüme eğrisi 2D hücre kültürleri için izleme, izleme için 3D tümör pulcuklarının büyüme eğrisi de uzun vadeli küresel büyüme davranış farklı hücre hatları için karakterize etmek için geleneksel bir yaklaşım benzer. Özellikle, biz tümör bozulma ya da doğrudan büyüme eğrisi yansır tümör büyütme analiz ederek uyuşturucu yanıt karakterize olabilir. Bu nedenle, boyutu ve büyüme eğrisi türetmek için ses düzeyi de dahil olmak üzere 3D tümör pulcuklarının,...

Kanser Dünya1' deki ölüm ikinci önde gelen nedenidir. Kanser hedefleme uyuşturucu gelişmekte olan hastalar için çok önemli önem taşımaktadır. Ancak, bu yeni anti-kanser ilaçlar fazla % 90 etkinlik ve klinik çalışmalarda2beklenmedik toksisite eksikliği nedeniyle geliştirme aşamasında başarısız tahmin edilmektedir. Nedeni basit iki boyutlu (2D) hücre kültür modelleri kullanımını ilaç bulma2 aşağıdaki aşamaları için bileşik etkinlik ve toksisite sınırlı tahmini değerleri ile sonuçları sağlayan bileşik filtreleme için bağlanabilir , 3 , 4. son zamanlarda, üç boyutlu (3D) tümör küresel modelleri anti-kanser ilacı discovery3,4,5 için klinik fizyolojik ve farmakolojik veri sağlamak için geliştirilmiştir ,6,7,8,9,10,11,12,13,14, 15,16,17,18,19,20,21,22,23, 24,25. Beri bu pulcuklarının tümörler vivo içindedoku özgü özelliklerini taklit edebilen, besin ve oksijen gibi ilaç direnci19, bu modellerin kullanımı yanı sıra degrade, hipoksik çekirdek potansiyel olarak ilaç bulma zaman çizelgeleri kısaltabilir, yatırım maliyetleri azaltmak ve yeni ilaçlar hastalara daha etkili bir şekilde getir. 3D tümör küresel kalkınma bileşik etkinliğini değerlendirmek için bir kritik yaklaşım küresel büyüme ve yineleme tedaviler9,26altında izlemektir. Bunu yapmak için onun çapı ve hacmi, yüksek çözünürlüklü görüntüleme yöntemleri ile ilgili tümör morfolojisi nicel karakterizasyonu zorunludur.
Konvansiyonel görüntüleme yöntemleri, alan parlak, faz kontrast7,9,22,24ve floresan mikroskopi8,9,16gibi 18,22 küresel'ın çapı ölçüsü sağlayabilirsiniz ancak küresel 3B alanda genel yapısını çözümlenemiyor. Pek çok faktör penetrasyon problama ışığın içinde küresel dahil olmak üzere bu kısıtlamalar katkıda bulunmak; küresel içine floresan boyalar difüzyon; heyecanlı floresan boyalar içinde veya küresel güçlü emme ve saçılma nedeniyle ters yüzeyine flüoresan sinyalleri yayan; ve derinlik-resolvability bu yöntemleri görüntüleme. Bu kez bir yanlış cilt ölçüde yol açar. Pulcuklarının nekrotik çekirdek geliştirilmesi nekroz vivo içinde tümör6,10,15,19,25taklit eder. Bu patolojik özellik 2D hücre kültürleri19,25,27,28çoğaltılamaz düşüktür. Küresel boyutu 500 µm çapı, üç kat konsantrik yapısı, daha büyük olan Proliferasyona hücreler dış tabakası, orta tabaka deneniyor hücre ve nekrotik bir çekirdek, dahil olmak üzere küresel6',10 görülebilir ,15,19,25, oksijen ve besin yetersizliği nedeniyle. Canlı ve ölü hücre floresans görüntüleme nekrotik çekirdek sınırına etiketlemek için standart bir yaklaşımdır. Ancak, yine, bu floresan boyalar ve görünür ışık penetrations gerçek şeklini gelişimini izlemek için nekrotik çekirdek içine sonda potansiyeline engel.
Modalite Imaging alternatif bir 3D optik koherens tomografi (OCT) tümör pulcuklarının karakterize tanıştırdı. OCT ilâ etiket içermeyen, tahribatsız 3D verileri alınıyor kapasitesine sahip bir tekniktir Biyomedikal görüntüleme 1-2 mm biyolojik doku29,30,31,32,33 derinliklerinde ,34. OCT düşük tutarlılık Interferometry örnek farklı derinliklerinden gelen sinyalleri arka dağınık algılamak için kullanır ve yatay ve dikey yönlere mikron düzeyinde mekansal çözünürlükte yeniden oluşturulan derinlik çözüldü görüntüleri sağlar. OCT göz hastalıkları35,36,37 ve anjiyografi38,39yaygın olarak benimsemiştir. Önceki çalışmalarda OCT vitro morfolojisi tümör pulcuklarının membran matris (Örneğin, Matrigel) gözlemlemek ve fotodinamik tedavi40,41onların yanıtları değerlendirmek için kullandık. Son zamanlarda, bizim grup sistematik olarak izlemek ve çok iyi plakaları423D tümör pulcuklarının büyüme kinetik ölçmek için bir yüksek-den geçerek OCT görüntüleme platformu kuruldu. Yaklaşım ve içsel optik zayıflama Karşıtlık'dayalı pulcuklarının etiket içermeyen nekrotik doku algılama sayma Voksel kullanarak 3D tümör pulcuklarının kesin hacimsel miktar gösterdi. Bu yazıda nasıl OCT görüntüleme platformu inşa ve tümör pulcuklarının yüksek çözünürlüklü 3 boyutlu görüntüleri elde etmek için istihdam ayrıntılarını açıklar. Büyüme kinetik 3D tümör pulcuklarının, küresel çapı ve birimlerin, doğru ölçümler de dahil olmak üzere, adım adım kantitatif analiz konusunda açıklanmıştır. Ayrıca, içsel optik zayıflama Karşıtlık'dayalı EKM kullanarak nekrotik doku bölgeleri tahribatsız algılama yöntemi gösterilir.

<table><tbody><tr><td>< güçlü > Özel Spektral Alan OCT görüntüleme sistemi< / güçlü ></td><td></td><td></td> <td>Laboratuvarımızda geliştirildi</td></tr><tr><td>Süper Işıldayan Diyot (SLD)</td> <td>< güçlü > Thorlabs < / güçlü > <</td> <td>güçlü >SLD1325< / güçlü ></td> <td>ışık kaynağı</td></tr><tr><td>2 kez; 2 tek modlu sigortalı fiber kuplör, 50:50 bölme oranı</td><td>AC Fotonik</td><td>WP13500202B201</td><td></td></tr><tr><td><güçlü>Referans Kolu< / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Lens Tüpü</td> <td>< güçlü > Thorlabs< / güçlü ></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Adaptör</td> <td>< güçlü > Thorlabs< / güçlü ></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Paralel Lens</td><td>Thorlabs</td><td>AC080-020-C</td><td></td></tr><tr><td>Odaklama Lensi</td><td>Thorlabs</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kinematik Ayna Dağı</td><td>Thorlabs</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ayna</td><td>Thorlabs</td><td></td><td></td></tr><tr><td>1D Translasyon Aşaması</td><td>Thorlabs</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sürekli nötr yoğunluk filtresi</td><td>Thorlabs</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kaide</td><td>Direği Thorlabs</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sıkıştırma Çatalı</td><td>Thorlabs</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sample Arm</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Lens Tüpü</td><td>Thorlabs</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Adaptörü</td><td>Thorlabs</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kolimasyon Lensi</td><td>Thorlabs</td><td>AC080-020-C</td><td></td></tr><tr><td>Galvanometre</td><td>Thorlabs</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Röle Lensi</td><td>Thorlabs</td><td>AC254-100-C</td><td>Teleskop kurulumu yapmak için iki Röle lensi</td></tr><tr><td>Üçgen Ayna Dağı</td><td>Thorlabs</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ayna</td><td>Thorlabs</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Objektif</td><td>Mitutoyo</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kaide Direği</td><td>Thorlabs</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sıkıştırma Çatalı</td><td>Thorlabs</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Polarizasyon Kontrol Cihazı</td><td>Thorlabs</td><td></td><td></td></tr><tr><td>30mm Kafes Dağı</td><td>Thorlabs</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kafes Çubuğu</td><td>Thorlabs</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>< güçlü > Sahne< / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>3D motorlu çeviri aşaması</td><td>Pekin Mao Feng Optoelektronik Technology Co., Ltd.</td><td></td><td></td>JTH360XY</tr><tr><td>2D Devirme Aşaması Döndürme</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Aşaması Plaka</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tutucu</td><td></td><td></td><td>3D baskılı</td></tr><tr><td><güçlü>Spektrometre< / güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Lens Tüpü</td><td>Thorlabs</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Adaptörü</td><td>Thorlabs</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kolimasyon Lensi</td><td>Thorlabs</td><td>AC080-020-C</td><td></td></tr><tr><td>Izgara</td><td>Wasatch</td><td></td><td>G = 1145 lpmm</td></tr><tr><td>F-teta Lens</td><td>Thorlabs</td><td>FTH-1064-100</td><td></td></tr><tr><td>InGaAs Çizgi Taramalı Kamera Sensörü</td><td>Sınırsız</td><td>SU1024-LDH2</td><td></td></tr><tr><td>Name<</td><td>strong>Company</strong</td><td>>Katalog Numarası</td><td> Yorumlar</td></tr><tr><td>Hücre Kültürü Bileşeni</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>HCT 116 Hücre hattı</td><td>ATCC</td><td>CCL-247</td><td></td></tr><tr><td>Hücre Kültürü Şişesi</td><td>SPL Yaşam Bilimleri</td><td>70025</td><td></td></tr><tr><td>Pipet</td><td>Fisherbrand</td><td>14388100</td><td></td></tr><tr><td>Pipet uçları</td><td>Sorenson Bioscience</td><td>10340</td><td></td></tr><tr><td>Gibco GlutaMax DMEM</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10569044</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Sığır Serumu, sertifikalı, ABD menşeili</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>16000044</td><td></td></tr><tr><td>Antibiyotik-Antimikotik (100X)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15240062</td><td></td></tr><tr><td>Corning 96 kuyulu Şeffaf Yuvarlak Alt Ultra Düşük Bağlantılı Mikroplaka</td><td>Corning</td><td>7007</td><td></td></tr><tr><td>Gibco PBS, pH 7.4</td><td>Thermo Fisher Bilimsel</td><td>10010023</td><td></td></tr><tr><td>Gibco Tripsin-EDTA (% 0.5)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15400054</td><td></td></tr><tr><td>Forma Serisi II 3110 Su Ceketli CO2 İnkübatörleri</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>3120</td><td></td></tr><tr><td>Eldivenler</td><td>VWR</td><td>89428-750</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P7793</td><td></td></tr><tr><td>Transfer pipetleri</td><td>Globe Scientific</td><td>138080</td><td></td></tr><tr><td>Santrifüj</td><td>Eppendorf</td><td>5702 R</td><td>15 mL tüpü santrifüjlemek için</td></tr><tr><td>Santrifüj</td><td>NUAIRE</td><td>AWEL CF 48-R</td><td>96 oyuklu plaka</td></tr><tr><td>Mikroskobunu</td> santrifüjlemek için <td>Olympus</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Name<</td><td>strong>Company</td><td>Katalog Numarası</td><td>Yorumlar</ güçlü></td></tr><tr><td><güçlü>histoloji ve IHC</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dijital slayt tarayıcı</td><td>Leica</td><td>Aperio AT2</td><td>Yüksek çözünürlüklü histolojik görüntüler elde edin</td></tr><tr><td>Histowiz</td><td></td><td>Tümör sferoidinin histolojik ve immünohistolojik boyanması için hizmet talep edin</td><td></td></tr><tr><td>Name<</td><td>strong>Company</td><td>Katalog Numarası</strong</td><td>>Comments</td></tr><tr><td>Ticari OCT'lerin listesi</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>SD-OCT system</td><td>Thorlabs</td><td>Telesto Serisi</td><td></td></tr><tr><td>SD-OCT sistemi</td><td>Wasatch Photonics</td><td>WP OCT 1300 nm</td><td></td></tr><tr><td>Name</td><td>Company<</td><td>strong>Katalog Numarası</td><td>Comments</td></tr><tr><td>Veri Analizi Yazılımı</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Basic Görüntü Analizi</td><td>NIH</td><td>ImageJ</td><td>Fiji de çalışır.</td></tr><tr><td>3D Render</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Amira</td><td>Ticari yazılım. Seçenek 1</td></tr>: <tr><td>3D Render</td><td>Bitplane</td><td>Imaris</td><td>Ticari yazılımı. Seçenek 2. C</td></tr><tr><td>++ ile özel olarak geliştirilmiş</td> <td>protokol OCT edinim yazılımında</td><td></td><td></td> kullanılır.</tr><tr><td>Sahne Kontrolü</td><td>Pekin Mao Feng Optoelektronik Technology Co., Ltd.</td><td>MRC_3</td> C++'da özel olarak geliştirilen <td>özel OCT edinme kodu</td></tr><tr><td>OCT işleme yazılımına</td><td></td><td></td> dahil edilmiştir<td>. GPU'yu kullanın. Özel OCT edinme koduna dahil edilmiştir.</td></tr><tr><td>MATLAB'da özel olarak geliştirilen</td> <td>Morfolojik ve Fizyolojik Analiz</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

boyuna morfolojik ve fizyolojik izleme optik koherens tomografi kullanarak üç boyutlu tümör pulcuklarının

Longitudinal Morphological and Physiological Monitoring of Three-dimensional Tumor Spheroids Using Optical Coherence Tomography

Tümör pulcuklarının üç boyutlu (3D) hücre kültür model kanser araştırma ve anti-kanser ilaç keşif olarak geliştirilmiştir. Ancak, şu anda, yüksek-den geçerek görüntüleme yöntemleri kullanan parlak alan veya floresan algılama, tümör küresel nedeniyle sınırlı ışık penetrasyon, difüzyon floresan boyalar ve genel olarak 3D yapısını çözümleyemediği ve Derinlik-resolvability. Son zamanlarda, bizim laboratuvar optik koherens tomografi (OCT), çok hücreli tümör pulcuklarının boyuna karakterizasyonu bir 96-şey tabak içinde gerçekleştirmek için modality, Imaging 3D etiket içermeyen ve tahribatsız kullanımı gösterilmiştir. OCT yüksekliği yaklaşık 600 µm kadar büyüyen tümör pulcuklarının 3D morfolojik ve fizyolojik bilgi alma yeteneğine sahip. Bu makalede, tüm çok iyi plaka tarayan ve tümör pulcuklarının, 3D OCT verilerini otomatik olarak alır yüksek üretilen iş OCT (HT-Ekim) görüntüleme sistemi göstermektedir. Biz protokol HT-Ekim sistemi ve inşaat kurallarda ayrıntıları açıklamak. 3D OCT verilerden bir 3D render ile küresel genel yapısını görselleştirebilirsiniz ve ortogonal dilimleri, boyut ve hacim morfolojik bilgilere göre tümör küresel boyuna büyüme eğrisi karakterize ve gelişimini izlemek Optik içsel zayıflama Karşıtlık'göre tümör küresel ölü hücre bölgelerde. HT-Ekim için eleme yanı sıra biofabricated örnekleri karakterize uyuşturucu yüksek üretilen iş görüntüleme yöntemi kullanılabileceğini göstermektedir.

Yüksek işlem hacmi optik koherens tomografi görüntüleme pulcuklarının bir 96-şey plaka
Şekil 3 gün 3 HCT 116 tümör pulcuklarının 96-şey plakalı HT-Ekim tarama sonucu sergiler. Koca tabağı sıralı tarama (H12) sağ alt kuyudan başlar. Şekil 3B HT-Ekim sisteminin yazılım uygulama Akış grafiğini gösterir. Bir küresel veriler toplanır ve işlenen sonra plaka sonraki ~ 2 için bekl...

Optik koherens tomografi (OCT), üç boyutlu görüntüleme teknolojisi, izlemek ve çok hücreli tümör pulcuklarının büyüme kinetik karakterize etmek için kullanıldı. Tümör pulcuklarının yaklaşım ve içsel optik zayıflama Karşıtlık'dayalı pulcuklarının etiket içermeyen ölü dokuyu algılama sayma Voksel kullanarak hassas hacimsel miktar gösterdi.

Boyuna morfolojik ve fizyolojik izleme optik koherens tomografi kullanarak üç boyutlu tümör pulcuklarının

Tumor spheroids have been developed as a three-dimensional (3D) cell culture model in cancer research and anti-cancer drug discovery. However, currently, ...

Üç boyutlu tümör sheroidler vivo tümörlerin dokuya özgü özelliklerini taklit edebilir, basit 2D hücre kültürü daha anti-kanser ilaç keşfi için daha klinik olarak ilgili veriler sağlayan. Görüntüleme tekniğimiz, optik koherence tomografi, birkaç yüz mikron boyutu ile, tek bir tümörlü sinirlerin 3D yapısını kolayca görselleştirebilir ve morfolojisi ve iş infest daha doğru karakterizasyonu sağlamak, genellikle birkaç saniye içinde. 3D küresel modeli kullanarak potansiyel olarak ilaç keşif zaman çizelgesi kısaltabilir, maliyeti azaltmak ve hastalara daha etkili yeni ilaç getirmek.Tümör kümesinin küresel şeklini oluşturmak deneyimizin kritik bir adımıdır. Yuvarlak alt ile doğru ultra-düşük eki plaka seçmek önemlidir, ve hücre tohumlama sonra uygun santrifüj hızı. Bu deneyi, el yazmasında açıklandığı gibi bir kültür şişesinde ilginç hücreler büyüterek başlatın.Hücreleri standart koşullar altında bir kuvözde saklar ve sağlık durumlarını her gün izleyin. Ortamı gerektiği gibi yenileyin. Çok kuyulu plakalarda 3D hücre kültürünü gerçekleştirmek için, ilk hücre kültürü şişesi orta kaldırmak ve sterilize hücreleri yıkayın, 33 derece Santigrat önceden ısıtılmış PBS.Sonra hücreleri yeniden askıya almak ve 37 santigrat derece üç dakika kuluçka için Trypsin-EDTA bir mililitre ekleyin. Trypsin seyreltmek için kültür orta üç mililitre ekleyin. Bu hücre süspansiyonunu 15 mililitrelik bir santrifüj tüpüne aktarın ve 500G'de santrifüj ve oda sıcaklığında beş dakika bekleyin.Sonra supernatant çıkarın ve önceden ısıtılmış kültür orta dört mililitre ile hücre pelet resuspend. Hücre konsantrasyonu belirlemek için, bir hemositometre üzerine örnek bir damla hypat, ve hücreleri saymak. İstenilen tohumlama konsantrasyonuna seyreltin.Tohum 200 hücre süspansiyon her kuyuiçine ultra-düşük eki, yuvarlak-alt çok kuyulu plaka, bir konsantrasyon 3, mililitre başına 000 hücre, iyi başına yaklaşık 600 hücre elde etmek için. Tohumlamadan hemen sonra, tüm tabağı oda sıcaklığında, yedi dakika boyunca mevcut en düşük hızda santrifüj edin. Tabağı 37 santigrat derece ve %5 Co2'de kuvöze yerleştirin ve her üç günde bir ortamı yenileyin.İlk olarak, bu makaledeki şemaları izleyerek OCT sisteminin referans kolunu ve örnek kolunu oluşturabilirsiniz. Daha sonra, bir kilometre, bir dereceleme, bir F-Theta lens ve bir çizgi tarama kamera dahil olmak üzere spektrometre, inşa. Çok kuyulu plakayı sabit bir konumda tutmak için bir plaka bağdaştırıcısı kullanın.Görüntülemeden önce, 2B yatırma aşaması nı ve farklı kuyulardan gelen odak düzleminin varyasyonuna en aza indirmek için geçiş aşamasına monte edilmiş bir dönüş aşaması kullanarak çok kuyulu plakanın eğim ve dönüşünü düzeltin. Ardından, plakanın kenarlarının sahne hareketinin yönüyle paralel olduğundan emin olmak için döndürmeyi ayarlayın, böylece kuyular OCT görüntülerinde aynı yatay konumlarda kalır. Daha sonra, plakanın optik tabloya paralel olduğundan emin olmak için yatırma aşamasını ayarlayın, böylece kuyular görüntüleme için aynı dikey konumlarda kalır.Tümör küreseloidlerin görüntülenmesi nin olduğu gün, çok kuyulu plakayı kuvözden çıkarın. OCT görüntüleme sistemi altında aktarın ve plaka adaptörü üzerine yerleştirin. Plakanın yüksekliğini ayarlamak için, çeviri aşamasının Z yönü boyunca hareket ettirin.Özel görüntüleme yazılımında, gelişim aşamalarına bağlı olarak tüm tümör küreselliğini kapsayacak şekilde istenilen bir OCT tarama aralığı ayarlayın ve ayarı kaydetmek için parametreleri kaydet'e tıklayın. Daha sonra tümör küresellerinin optimize edilmiş XZ ve YZ OCT önizlemelerini gösterin. Spheroidler içeren plaka tüm kuyular için tümör spheroids tek tek 3D OCT görüntüleri elde.Önizleme görüntüsünü görüntülemek için önizleme düğmesini tıklatın. OCT görüntüsünü elde etmek için edinme düğmesini tıklatın. OCT veri toplama işleminin genel aşama taşıma işlemini kaydedin.Tüm tümör spheroidleri için en uygun görüntü kalitesini sağlamak için plaka adaptörlerinin doğru bir şekilde ayarlanabilmesi ve ortanca hacmin aynı olması gerekir. OCT yapısal görüntüler oluşturmak için tümör küresel lerinin 3D OCT veri kümelerini işlemek için özel bir C+işleme kodu kullanın. Küresel görüntülerin kolajını oluşturmak için küresel oidin santrifüjündeki üç kesitsel, XY, XZ ve YZ düzleminde 2B OCT görüntüleri kullanın.İstenilen bir yazılım kullanarak küresel in 3D görüntülenmesini elde etmek için, önce SD OCT verilerini yazılıma yükleyin. Üstle panelini tıklatın, ardından yeni birim ekleyin ve 3B işleme için kullanılacak karışım modunu seçin. Görüntüleme açısını ayarlamak için, görüntüyü sürüklemek ve el yazmasında açıklandığı gibi niceliksel olarak devam etmek için fare işaretçisini kullanın.HCT116 hücre hattı spheroidlerinin etkilenmemiş OCT görüntülerinin bir kolajı işlenmiş verilerden üretilmiş ve sonuçlar diğer 2D yüksek işlemli görüntüleme sistemlerinin görüntüleriyle karşılaştırılabilir. Ayrıca, 96 kuyudan 2D kesitsel küresel görüntülerin kolajı küresel yükseklikleri izlemek ve dikey yönde küresel inhomogeneity görselleştirmek için oluşturuldu. 3D işlenmiş küresel görüntülerden oluşan bir kolaj, genel 3B şekli görselleştirmek ve küresel oidin yuvarlaklığını değerlendirmek için önceden tanımlanmış herhangi bir açıdan oluşturulabilir.Genel OCT post-processing sonrası tümör küresel oidin 3D OCT yapısal görüntüleri elde edilmiştir. OKT verilerinden, tümör sferoidinin yapısını herhangi bir yönde görselleştirmek için 3Boyutlu yüzey direğine ve XZ, YZ ve XY ortogonal dilimler oluşturuldu. Çapı, yüksekliği ve voksel bazlı hacmi karakterize etmek için tek bir tümörün uzunlamasına takibi yapıldı ve 21 günlük gelişim sırasında boyut ve hacim olarak büyüme eğrileri ortaya çıktı.Burada, küresel 11. Uzunlamasına takip tümör spheroid ölü hücre alanlarının artış gösterdi. Tümör spheroid 3D render görüntüleri görünüm ve ölü hücre bölgelerinin büyüme gösterdi gün yedi gün 14, kırmızı vurgulanmış nekrotik alanların artması ile gösterildiği gibi.Nekrotik alanların yüzdesi arttıkça, tümör küresel mükemmel şeklini koruyamadı ve bu nedenle çöktü. Bu görüntüleme platformu ile daha iyi in vivo tümörleri simüle etmek için 3D görüntüleme modeli, geniş yaratık modeli ve co-kültür modelleri gibi diğer karmaşık tümör küre modelleri, keşfedebilirsiniz. Bizim yüksek iş itimat OCT görüntüleme sistemi kanser ilaç keşfi ilaç tarama için alternatif bir yaklaşım sağlayabilir.Bu da karakterize bir şey, çeşitli biyomedikal uygulamalar için 3D biyofabrikasyon örnekleri.

longitudinal-morphological-physiological-monitoring-three-dimensional

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kanser Araştırmaları

Optik Projeksiyon Tomografi İnsan Meme Kanseri Örnekler ve Analiz Uzun vadeli Kültür

Source: Huang, Y. et. al., Optik Koherens Tomografi Kullanarak Üç Boyutlu Tümör Sferoidlerinin Boylamsal Morfolojik ve Fizyolojik İzlemesi. J. Vis. Exp. (2019)Bu video, yüksek çözünürlüklü kesitsel görüntüler yakalayarak çok kuyulu bir plakadaki tümör sferoidlerini izlemek için optik koherens tomografinin (OCT) kullanımını göstermektedir. OCT, hücresel yapılardan gelen ışık yansımalarını analiz ederek, boyut ve şekil gibi morfolojik özellikleri değerlendirmek için 3D modeller oluştururken, aynı...

Optik Koherens Tomografi ile Tümör Sferoidlerinin Morfolojik ve Fizyolojik İzlenmesi 

Parçacık izleme microrheology olmayan yıkıcı ölçmek ve 3 boyutlu uzamsal tümör modellerinde hücre dışı matris mekanik özelliklerinde değişiklikler eşlemek için kullanılabilir.

Partikül izleme Microrheology kullanarak 3D Tümör Modelleri Ekstrasellüler Matriks Rijitliğinin Boyuna Ölçümü

Biz, parlak-alan mikroskopisi ile görüntülenmiş üç boyutlu tümör küremsiler boyutunu ölçmek için, bir yüksek verimli bir görüntü analiz yazılımı uygulaması mevcut. Bu uygulama ilaç ekranlarında sferoitlerden kullanmak isteyen araştırmacılar için faydalıdır küremsiler üzerinde tedavi edici ilaçların etkilerini incelemek için hızlı ve etkili bir şekilde sağlar.

Tümör sferoidlerin Yüksek throughput Görüntü Analizi: Otomatik ve Doğru küremsiler boyutunu ölçmek için kullanıcı-dostu Yazılım Uygulama

Çevredeki normal dokuların invazyonu, malign tümörlerin tanımlayıcı bir özelliğidir. Burada, bir dizi ileri insan kanseri modeliyle örneklenmiş doğal bir 3D biyomatrise basit, yarı otomatik bir mikro plaka istila testi sunuyoruz.

Üç boyutlu (3D) Tümör Sfero Yayılması deneyindeki

Burada, retinal dejenerasyon, glokom, diyabetik retinopati ve miyopi modellerinde retinal ve oküler yapıları in vivo olarak görselleştirmek için spektral-alan optik koherens tomografinin (SD-OCT) kullanımını açıklamaktayız.

Optik Koherens Tomografi Kullanılarak Kemirgen Modellerinde Oküler Hastalığın İn vivo Yapısal Değerlendirmeleri

Burada bir küresel görüntüleme cihazının üretimi için bir protokol sunulmaktadır. Bu cihaz kanser hücre sferoidlerinin dinamik veya boyuna floresan görüntülemesini sağlar. Protokol ayrıca kanser hücre invazyonunun analizi için basit bir görüntü işleme prosedürü sunmaktadır.

3D Sferoid Modelinde Zaman Çözülen Floresan Görüntüleme ve Kanser Hücre İstilasının Analizi

Mevcut protokol, 3D tümör agregalarında hızlı, tahribatsız ve etiketsiz bölgesel hücre yoğunluğu ve canlılık ölçümü için görüntü tabanlı bir teknik geliştirmektedir. Bulgular, çekirdek bölgelerde agregaların geliştirilmesinde dış katmanlardan daha yüksek hücre yoğunluklarına ve Trastuzumab ile tedavi edilen HER2 + agregalarında ağırlıklı olarak periferik hücre ölümüne sahip bir hücre yoğunluğu gradyanı ortaya koymuştur.

İlaç Tedavisini Takiben Tümör Agregaları İçindeki Bölgesel Hücre Yoğunluğunun Tahribatsız Değerlendirilmesi

Tümör sferoidleri, tümör hücresi-mikroçevre etkileşimlerini ve tedavi yanıtını değerlendirmek için giderek daha fazla kullanılmaktadır. Mevcut protokol, hızlı optik temizleme kullanarak 3D tümör sferoidlerinin yarı yüksek verimli görüntülenmesi için sağlam ama basit bir yöntemi tanımlamaktadır.

Tümör Sferoidlerinin Yarı Yüksek Verimli Analizi için Hızlı Optik Temizleme

Bu makalede, üç boyutlu tümör sferoidlerinin oluşturulması için standartlaştırılmış bir yöntem gösterilmektedir. Otomatik bir görüntüleme sistemi kullanarak küresel gözlem ve görüntü tabanlı derin öğrenme analizi için bir strateji de açıklanmaktadır.

İlaç Değerlendirme Çalışmaları için 3D Tümör Sferoidlerinin Üretimi

İntravital mikroskopi bulgularının translasyonu, dokuya sığ derinlik penetrasyonu ile karşı karşıyadır. Burada, intravital mikroskopi bulgularının klinik translasyonunu potansiyel olarak kolaylaştıran, doğrudan uzamsal korelasyon için intravital mikroskopi ve klinik olarak uygulanabilir görüntüleme modalitelerinin (örneğin, BT, MRI) birlikte kaydedilmesini sağlayan bir dorsal pencere odası fare modelini açıklıyoruz.

Translasyonel Kanser Araştırmalarında Kombine İntravital Mikroskopi ve Manyetik Rezonans Görüntüleme için Dorsal Deri Kıvrımlı Pencere Odası Tümör Fare Modeli

Öğrenin, optik koherens tomografi kullanarak üç boyutlu tümör küreciklerinin morfolojik ve fizyolojik izlemesini. Bu yöntem, ilaç keşfi sürecini hızlandırarak kanser tedavilerinin geliştirilmesine katkı sağlar.

Boyuna morfolojik ve fizyolojik izleme optik koherens tomografi kullanarak üç boyutlu tümör pulcuklarının

Daha fazla video keşfet