Name: Dang humması virüs kaynaklı akut viral Ensefalitis-benzeri hastalık bir Murine modeli (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-04-28T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 23 s
Description: Öğrenin, deng virüsü kaynaklı nöropatiyi incelemek için immünokompetan ICR emzikli fare modeli oluşturma yöntemini. Bu protokol, akut viral ensefalit benzeri hastalıkları canlı ortamda izlemeyi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışmada bilim ve Teknoloji Bakanlığı (MOST107-2321-B-038-001) ve Intramural finansman 106TMU-CIT-01-2, Taipei, Tayvan hibe tarafından desteklenmektedir.

Hayvan etüdünün deneysel protokolleri, Tayvan bilim ve Teknoloji Bakanlığı tarafından kurulan yönergelere göre, ulusal savunma Tıp Merkezi 'nin (ıAUC numarası: 16-261) Kurumsal hayvan bakımı ve Kullanıcı Komitesi tarafından onaylanmıştır.
1. enfeksiyon prosedürü
<ol><li>Adapte olmayan DENV2 (strain PL046) stokları9 (aslen 2,5 x 107 ile 1 x 109 PFU/ml arasında değişen Tayvan 'da hastalık kontrolü merkezlerinden elde edilir).</li>
	<li>1 x 106 PFU Ile Roswell Park Memorial Enstitüsü (RPMI) 1640 orta 40 μL toplam hacmine virüs stok seyreltmeli.</li>
	<li>10 μL (2,5 x 105 PFU) seyreltilmiş virüs Ile 30 g iğne ile donatılmış bir 0,3 ml şırınga doldurun ve seyreltilmiş virüs 30 μl (7,5 x 105 PFU) ile 30 g iğne ile donatılmış başka bir 0,3 ml şırınga doldurun.</li>
	<li>
7 gün eski ıCR Suckling fareyi tutun ve aşağıdaki adımları gerçekleştirin.
	<ol>
<li>İntraserebral enjeksiyon için, parmak ve başparmak arasında auricle basarak eğilimli bir konumda fareyi tutun ve intracerebrally lambda alanına seyreltilmiş virüs 10 μL enjekte, sagittal ve lambdoid sütür kesişiminde nokta 16 yaşında.</li>
		<li>İntraserebral enjeksiyon sonra, parmak ve başparmak kullanarak bir sırtüstü pozisyonda fareyi tutun ve intraperitoneal hafifçe murine ağının içine seyreltilmiş virüs 30 μL enjekte. Not: yamyamlık önlemek Için, 75% alkol annenin koku hissi geçici bir kayıp oluşturmak için kullanılır. Ayrıca, annelerinin dışkı ve idrar ile çöp kapsayan önerilmektedir.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Onların kafesleri geri Suckling fareler Lay ve 5 dakika için bekleme ve anne süt emme de dahil olmak üzere fareler, avidite ile güvenlik poststimulasyonu kontrol etmek için bekleyin. Not: Çoğu zaman, fareler normal aktivite poststimulasyonu göstermek ve teknik zorluk aşağıdaki herhangi bir zararlı etkileri gibi görünmüyor. Bu deney sırasında hayvanlar, Tayvan Ulusal Savunma Tıp Merkezi 'nin kurumsal hayvan bakımı ve Kullanıcı Komitesi tarafından sürdürülmüştür.</li>
	<li>Farelerin günlük ilerlemesini vücut ağırlığı (mikrogram dengesi kullanarak), Akut Viral ensefalit benzeri hastalık (Bölüm 2 ' de açıklandığı gibi hastalık skorlamasına göre) ve hayatta kalma oranı9,10,11 ile değerlendir ,12,13,14,15.</li>
</ol>2. hastalık skorlama
<ol><li>Akut viral ensefalitis benzeri hastalıkların notunu izleyin. Sağlıklı fareler için 0 puan atayın; 1 küçük hastalıklar belirtileri ile fareler, kilo kaybı dahil, hareketlilik azaltılmış, ve bir kambur vücut yönü; limbik nöbet sergileyen fareler 2; 3 fareler için sergi limbik zayıflık, zorluk ve anterior ekstremite veya posterior ekstremite zayıflık ile hareket dahil; 4 felç için; ölüm için 5. Not: Puan 3 ulaştığında, hastalık belirtileri hızla gelişen olarak kabul edilir.</li>
	<li>Her grupta günlük test puanlarının ortalama ± SD 'yi kullanarak, her gün eğri bazlı bir rakam olarak, adım 2,1 ' e göre hastalığın puanlamasını çizin.</li>
</ol>

<ol><li>Guzman, M. G., Gubler, D. J., Izquierdo, A., Martinez, E., Halstead, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dengue+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Disease+Primers%22%5BJournal%5D)">Dengue infection.</a> Nature Reviews Disease Primers. 2, 16055(2016).</li>
<li>Katzelnick, L. C., Coloma, J., Harris, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dengue%3A+knowledge+gaps%2C+unmet+needs%2C+and+research+priorities%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Dengue: knowledge gaps, unmet needs, and research priorities.</a> Lancet Infectious Diseases. 17 (3), e88-e100 (2017).</li>
<li>Carod-Artal, F. J., Wichmann, O., Farrar, J., Gascon, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurological+complications+of+dengue+virus+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Neurology%22%5BJournal%5D)">Neurological complications of dengue virus infection.</a> Lancet Neurology. 12 (9), 906-919 (2013).</li>
<li>Geneva: World Health Organization. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Dengue%3A+Guidelines+for+Diagnosis%2C+Treatment%2C+Prevention+and+Control%3A+New+Edition%22">Dengue: Guidelines for Diagnosis, Treatment, Prevention and Control: New Edition</a>. , WHO Guidelines Approved by the Guidelines Review Committee (2009).</li>
<li>Amaral, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracerebral+infection+with+dengue-3+virus+induces+meningoencephalitis+and+behavioral+changes+that+precede+lethality+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Intracerebral infection with dengue-3 virus induces meningoencephalitis and behavioral changes that precede lethality in mice.</a> Journal of Neuroinflammation. 8, 23(2011).</li>
<li>de Miranda, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dengue-3+encephalitis+promotes+anxiety-like+behavior+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Dengue-3 encephalitis promotes anxiety-like behavior in mice.</a> Behavioural Brain Research. 230 (1), 237-242 (2012).</li>
<li>Velandia-Romero, M. L., Acosta-Losada, O., Castellanos, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+infection+by+a+neuroinvasive+neurovirulent+dengue+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurovirology%22%5BJournal%5D)">In vivo infection by a neuroinvasive neurovirulent dengue virus.</a> Journal of Neurovirology. 18 (5), 374-387 (2012).</li>
<li>Despres, P., Frenkiel, M. P., Ceccaldi, P. E., Duarte Dos Santos, C., Deubel, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apoptosis+in+the+mouse+central+nervous+system+in+response+to+infection+with+mouse-neurovirulent+dengue+viruses%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">Apoptosis in the mouse central nervous system in response to infection with mouse-neurovirulent dengue viruses.</a> Journal of Virology. 72 (1), 823-829 (1998).</li>
<li>Tsai, T. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+retard+dengue+virus-induced+acute+viral+encephalitis%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Microglia retard dengue virus-induced acute viral encephalitis.</a> Scientific Reports. 6, 27670(2016).</li>
<li>Cheng, Y. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+Nrf2+by+the+dengue+virus+causes+an+increase+in+CLEC5A%2C+which+enhances+TNF-alpha+production+by+mononuclear+phagocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Activation of Nrf2 by the dengue virus causes an increase in CLEC5A, which enhances TNF-alpha production by mononuclear phagocytes.</a> Scientific Reports. 6, 32000(2016).</li>
<li>Ho, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blockade+of+dengue+virus+infection+and+viral+cytotoxicity+in+neuronal+cells+in+vitro+and+in+vivo+by+targeting+endocytic+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Blockade of dengue virus infection and viral cytotoxicity in neuronal cells in vitro and in vivo by targeting endocytic pathways.</a> Scientific Reports. 7 (1), 6910(2017).</li>
<li>Jhan, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-TNF-alpha+restricts+dengue+virus-induced+neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Leukocyte+Biology%22%5BJournal%5D)">Anti-TNF-alpha restricts dengue virus-induced neuropathy.</a> Journal of Leukocyte Biology. 104 (5), 961-968 (2018).</li>
<li>Kao, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+antiparasitic+drug+niclosamide+inhibits+dengue+virus+infection+by+interfering+with+endosomal+acidification+independent+of+mTOR%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Neglected+Tropical+Diseases%22%5BJournal%5D)">The antiparasitic drug niclosamide inhibits dengue virus infection by interfering with endosomal acidification independent of mTOR.</a> PLoS Neglected Tropical Diseases. 12 (8), e0006715(2018).</li>
<li>Tsai, T. T., Chen, C. L., Tsai, C. C., Lin, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+heat+shock+factor+1+as+an+antiviral+strategy+against+dengue+virus+replication+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Antiviral+Research%22%5BJournal%5D)">Targeting heat shock factor 1 as an antiviral strategy against dengue virus replication in vitro and in vivo.</a> Antiviral Research. 145, 44-53 (2017).</li>
<li>Jhan, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dengue+virus+infection+increases+microglial+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Dengue virus infection increases microglial cell migration.</a> Scientific Reports. 7 (1), 91(2017).</li>
<li>Benskey, M. J., Manfredsson, F. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraparenchymal+Stereotaxic+Delivery+of+rAAV+and+Special+Considerations+in+Vector+Handling%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Intraparenchymal Stereotaxic Delivery of rAAV and Special Considerations in Vector Handling.</a> Methods in Molecular Biology. , 199-215 (2016).</li>
<li>Fong, C. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mild+encephalitis%2Fencephalopathy+with+reversible+splenial+lesion+%28MERS%29+due+to+dengue+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Mild encephalitis/encephalopathy with reversible splenial lesion (MERS) due to dengue virus.</a> Journal of Clinical Neuroscience. 36, 73-75 (2017).</li>
<li>Sarathy, V. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+lethal+murine+infection+model+for+dengue+virus+3+in+AG129+mice+deficient+in+type+I+and+II+interferon+receptors+leads+to+systemic+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">A lethal murine infection model for dengue virus 3 in AG129 mice deficient in type I and II interferon receptors leads to systemic disease.</a> Journal of Virology. 89 (2), 1254-1266 (2015).</li>
<li>Schul, W., Liu, W., Xu, H. Y., Flamand, M., Vasudevan, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+dengue+fever+viremia+model+in+mice+shows+reduction+in+viral+replication+and+suppression+of+the+inflammatory+response+after+treatment+with+antiviral+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">A dengue fever viremia model in mice shows reduction in viral replication and suppression of the inflammatory response after treatment with antiviral drugs.</a> The Journal of Infectious Diseases. 195 (5), 665-674 (2007).</li>
<li>Tyler, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+Viral+Encephalitis%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Acute Viral Encephalitis.</a> New England Journal of Medicine. 379 (6), 557-566 (2018).</li>
<li>Yauch, L. E., Shresta, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+dengue+virus+infection+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Antiviral+Research%22%5BJournal%5D)">Mouse models of dengue virus infection and disease.</a> Antiviral Research. 80 (2), 87-93 (2008).</li>
<li>Assir, M. Z., Jawa, A., Ahmed, H. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expanded+dengue+syndrome%3A+subacute+thyroiditis+and+intracerebral+hemorrhage%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Expanded dengue syndrome: subacute thyroiditis and intracerebral hemorrhage.</a> BMC Infectious Diseases. 12, 240(2012).</li>
<li>Kumar, R., Prakash, O., Sharma, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracranial+hemorrhage+in+dengue+fever%3A+management+and+outcome%3A+a+series+of+5+cases+and+review+of+literature%5BTitle%5D)+AND+%22Surgical+Neurology%22%5BJournal%5D)">Intracranial hemorrhage in dengue fever: management and outcome: a series of 5 cases and review of literature.</a> Surgical Neurology. 72 (4), 429-433 (2009).</li>
<li>Simanjuntak, Y., Liang, J. J., Lee, Y. L., Lin, Y. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repurposing+of+prochlorperazine+for+use+against+dengue+virus+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Repurposing of prochlorperazine for use against dengue virus infection.</a> Journal of Infectious Diseases. 211 (3), 394-404 (2015).</li>
<li>Rocha, B. A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dengue-specific+serotype+related+to+clinical+severity+during+the+2012%2F2013+epidemic+in+centre+of+Brazil%5BTitle%5D)+AND+%22Infectious+Disease+Poverty%22%5BJournal%5D)">Dengue-specific serotype related to clinical severity during the 2012/2013 epidemic in centre of Brazil.</a> Infectious Disease Poverty. 6 (1), 116(2017).</li>
</ol>

Yazarların ifşa etmesi gereken hiçbir şey yok.

Şiddetli Dang hastalığı hastalarının CNS 'inde denv enfeksiyonu tespit edilmiştir3,17, Dang patogenezi sırasında akut viral ensefalitin tezahürü olasılığını düşündürmektedir. Burada, özellikle DENV kaynaklı akut viral ensefalitis benzeri hastalıklara odaklanarak, şiddetli Dang CNS disfonksiyonunun katılımı ile ilgili olarak DENV enfeksiyonunun bir in vivo murine modelini bildiriyoruz. Önceki modeller ile karşılaştırıldığında, özellikle tek rota enfeksiyonu için (...

Flaviviridae ailesinin bir artthropod kaynaklı virüsü olan denv, üç viral yapısal proteini (capsid, premembran ve zarf) ve yedi viral yapısal olmayan PROTEINLERE (ns1, NS2A, NS2B, NS3, NS4A, NS4B) kodlayan pozıtıf anlamda RNA genomu içerir. ve NS5). Denv dört serotipleri (DENV1-4), hangi yaklaşık 390.000.000 kişi yıllık enfekte, hükümetler sivrisinek vektör ve hastalık kontrolü doğru önemli çabaları yönetmiş olsa bile küresel bir yük neden1. Şu anda, koruyucu aşılar ve terapötik antiviral ilaçlar geliştirilmesi altında ve daha uzun vadeli doğrulama gerektirir2. Klinik uygulamada, CNS enfeksiyonu olan bir Dang hastasıyla nadir olmasına rağmen, Dang hastalığı gelişiminin çeşitliliğini anlamak için daha fazla incelenmesi gerekir3. Daha fazla soruşturma ve doğrulama gereklidir; Özellikle, Dünya Sağlık Örgütü (WHO) ciddi Dang 'ın sınıflandırılmasında, bilişsel bozukluk, konvülsiyonlar, ensefalopati ve ensefalit gibi CNS bozukluğu katılımı dahil etti3,4. Denv enfeksiyonunun hayvan modellerini inşa etmek, DENV enfeksiyonu neuropathogenesis keşfetmek için vazgeçilmez.
Denv tarafından cns enfeksiyonu oluşturmak için, çeşitli çalışmalar denv enfeksiyon farklı yollar idam, dahil olmak üzere (1) C57BL/6 fareler intraserebral aşı 4 x 103 plak şekillendirme birimleri (PFU) adapte olmayan DENV35, 6, (2) alınan Balb/c fareler intraperitoneal inokülasyon 7 x 104 PFU in vitro nörouyarlanmış DENV47, (3) alınan İsviçre fareler intraserebral aşı 1 x 105 PFU In vivo nörouyarlanmış DENV18, ve (4) 1 x 106 PFU 'ya adapte olmayan DENV29' u alan ICR Suckling fareler intrakerebral ve intraperitoneal Co-inoculation. Bu çalışmaların bulgularınagöre5,6,7,8,9, farelerde denv enfeksiyonu beyin viral çoğaltma sonucu, akut viral yol ensefalit benzeri sendromlar, ekstremite felç ve postural istikrarsızlık, CNS nörotoksisite ve inflamasyon, genel ve lokalize plazma sızıntısı ile kan-beyin bariyeri (BBB), ve hırıllık eşliğinde davranışsal değişiklikler. Bu çalışmaların tüm sonuçları5,6,7,8,9 denv 'in CNS ve akut viral ensefalitis gibi indüksiyon enfekte yeteneği göstermiştir enfeksiyon aşağıdaki hastalık.
Mevcut bulgularımıza dayanarak9,10,11,12,13,14,15, biz bir in vivo olarak denv enfeksiyon bir murine modeli oluşturduk Platform/faktörler viral çoğaltma karşı hedeflenen ajanlar terapötik etkinliğini incelemek için, yanı sıra nörotoksisite. Burada, CNS enfeksiyonunu incelemek ve DENV 'in neden olduğu farklı önem dereceleri ile nöropatilerin gelişimini izlemek için immünoptikli bir outbred ıCR Mouse oluşturmak için kullanılan protokolü rapor ediyoruz. Sonuçları zaman bağımlı bir şekilde DENV-enfekte fareler ensefalit benzeri hastalığın önemli progresyonu gösterir.

<table><tbody><tr><td>Roswell Park Memorial Institute 1640 orta (RPMI)</td><td>Gibco</td><td>11875-085</td><td>Seyreltici virüs</td></tr><tr><td>0.3 mL İnsülin Şırıngası&nbsp;</td><td>BD Ultra-Fine&shy;II</td><td>328838</td><td>İntraserebral ve intraperitoneal enjeksiyon</td></tr><tr><td>Mikro terazi</td><td>METTLER TOLEDO'nun LabX</td><td>AL104</td><td>Ağırlık faresi</td></tr><tr><td>Uyarlanmamış DENV2 (suş PL046)</td><td>Tayvan Hastalık Kontrol</td><td></td> <td>Merkezleri-Enfekte fare</td></tr><tr><td>Kanser Araştırmaları Enstitüsü (ICR) emziren fare</td><td>BioLASCO Taiwan Co.,</td> <td>Ltd-Fare</td> <td>modelimiz</td></tr></tbody></table>

dang humması virüs kaynaklı akut viral ensefalitis-benzeri hastalık bir murine modeli

A Murine Model of Dengue Virus-induced Acute Viral Encephalitis-like Disease

Ritim virüsü (DENV), sivrisinekler tarafından iletilen bir artthropod kaynaklı virüs,, plazma kaçağı nedeniyle ölümcül komplikasyonlar ile karakterize Dang Hemorajik ateş olarak bilinen şiddetli hastalığa neden olabilir, asit, plevral efüzyon, solunum sıkıntısı, şiddetli kanama ve organ bozukluğu. DENV enfeksiyonu birkaç olgu nörolojik belirtiler mevcut; Ancak çalışmalar DENV kaynaklı neuropathogenesis 'i daha fazla araştırmadı. Bu çalışmada, orta sinir sistemi (CNS) enfeksiyonu ile DENV indüksiyonu araştırılması için immünoteksel bir outbred ıCR (kanser araştırması Enstitüsü) fare kullanmak için bir protokol sunuyoruz, akut viral ensefalitis gibi progresyon takip Hastalığı.

Dang patogenezi için hastalarda şiddetli Dang humması ile ilişkili nörolojik komplikasyonlar bildirilmiştir4. Bu vakalar klinikte nadir olmasına rağmen, DENV enfeksiyonunun immünoyetenekli bir duvar modeli oluşturmak sadece immünopatogenezi incelemek için değil, aynı zamanda CNS enfeksiyonu, nöroinflamasyon, nörotoksisite ve akut viral ensefalitis benzeri bir hastalık. Bu çalışmada, mevcut modelimize göre9,10</su...

Burada, nöropati gelişimini görüntülemek için bir immünopetik ıCR (Kanser Araştırma Enstitüsü) merkezi sinir sistemi enfeksiyonu murine modeli oluşturmak için bir protokol sunuyoruz. Akut viral ensefalitik bozuklukların aynı hastalık puanları ile izlenmesi, Dang virüse bağlı nöropati içinde vivo göstermek için gerçekleştirilebilir.

Dang humması virüs kaynaklı akut viral Ensefalitis-benzeri hastalık bir Murine modeli

Dengue virus (DENV), an arthropod-borne virus transmitted by mosquitoes, may cause the severe disease known as dengue hemorrhagic fever, which is ...

Beyinde dang virüsü enfeksiyonu gördüğünüz bir hastalık modelinin bu protokolü nöropatogenez ile ilişkili viral ve konak vektörleri taranması için bir in vivo platform haline gelir. Önceki modellerin aksine, bizim modeller düşük viral titre ile enfeksiyon araçları kullanmak, ensefalik benzeri hastalık üreme indüksiyon için immünobeceriksiz Kanser Araştırma Enstitüsü emzirme fareler enfekte etmek. Prosedürü gösteren Ting-Jing Shen, benim laboratuvarımdan doktora adayı olacak.Enfeksiyon prosedürünü başlatmadan önce, adapte olmayan dang virüsü iki stokseyreltmek, bir kez 10 beşinci plak oluşturan birimleri rpmi 1640 orta konsantrasyon40 mikrolitre başına. Sonra, seyreltilmiş virüs 10 mikrolitre ile 30 gauge iğne ile donatılmış bir 0.3 mililitre şırınga yükleyin. Ve bir 0.3 mililitrelik şırınga 30 ölçü iğnesi ile donatılmış, hayvan başına 30 mikrolitre virüs.Virüsün interserebral teslimi için, yavaşça eğilimli bir pozisyonda yedi günlük emzirme Kanser Araştırma Enstitüsü fare dizginlemek ve lambda alana seyreltilmiş virüsün 10 mikrolitre hacmi enjekte başparmak ve işaret parmağı arasında oracle basın, sagittal ve lambdoid sütür kesiştiği. Intercerebral enjeksiyonsonra, bir supine pozisyonda fare tutmak için başparmak ve işaret parmağı kullanın, ve yavaşça intraperitoneally, seyreltilmiş virüsün 30 mikrolitre hacmi enjekte, murine karın içine. Hastalığın ilerlemesini puanlama için, akut viral ensefalit benzeri hastalıkların derecesine göre, her bir aşılanmış fare günlük sıfır dan beş puan atamak ve her grupta günlük test puanları standart sapma ortalama artı ve eksi kullanarak, bir eğri tabanlı rakam olarak her gün için puanları arsa.Sahte, orta sadece aşılanmış farelerde ölçülen vücut ağırlığı değişiklikleri ile karşılaştırıldığında, dang virüsü aşılanmış hayvanlar deneme sırasında her zaman vücut ağırlığında bir azalma sergilerler. Buna ek olarak, dang virüsü enfekte hayvanlar kambur sırt duruşları önemli bir artış göstermektedir, limbik nöbetler, limbik güçsüzlük, felç, ve ölüm sahte aşılanmış hayvanların gösterdiği belirtilere göre. Gerçekten de, dang virüsü sıçanlarda sahte aşılanmış hayvanlarda gözlenmez sağkalım oranlarında zamana bağlı bir azalma sergileyen, farelerde akut viral ensefalit benzeri hastalıkların ilerlemesini gösteren merkezi sinir sistemi içinde dang virüsü bulaşıcı bir model kurulmasını doğrulayan.Yanlış bölgede delinme, skor ve virüs çözeltisinin kafa dışında taşması sonucu iğne tıkanmasına neden olabilir, bu da başarısız enjeksiyon ve başarısız bir enfeksiyona neden olabilir. İşlemden sonra, beyin örnekleri patolojik hasar, immün hücre infiltrasyonu ve viral replikasyon analizi için hematoksilin ve eozin boyama akış sitometrisi ve plak oluşumu tahlilleri için hasat edilebilir. Bizim immünobeceriksiz murine modeli, dang virüsü enfeksiyonu patojenik mekanizmaları keşfetmek için bir platform sağlar, dang virüsü aşıları gelişimi için, veya anti-dang virüsü ilaçları.Dang virüsü bir biyogüvenlik düzeyi iki patojen, ve, bu nedenle, bu virüs ile tüm deney nitelikli bir hayvan biyogüvenlik düzeyi iki laboratuvarda tamamlanmalıdır.

a-murine-model-dengue-virus-induced-acute-viral-encephalitis-like

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

DA sıçanlarda kronik relapsing deneysel otoimmün ensefalomyelit: Bu video, multipl skleroz bir hayvan modeli indüksiyonu ve klinik skorlama göstermektedir. Tüm sıçan omurilik ve tam Freund adjuvan içeren bir emülsiyon immunizing fareler tarafından uyarılan hastalık, insan hastalığına benzer klinik belirtiler sunar.

İndüksiyon ve Kronik Relaps Deneysel Otoimmün Encephalomyelitis Klinik Puanlama

Bir roman olarak lusiferaz ve in vivo görüntüleme sistemleri (IVIS) olarak kullanılması klinik gelişmeler ortaya çıkmadan hastalığın bitiş noktaları tespit etmek anlamına gelir. IVIS bizim gelecekteki çalışma için daha doğru bir hastalık modeli sağlayan, gerçek zamanlı olarak birden fazla gün içinde encephalitic virüs istilasına görselleştirmek için izin verdi. Bu da bize daha hızlı şu anda kullanılan hayvan modellerinde daha antiviral ve aşıların potansiyel koruyucu özellikleri tanımlamak için...

Bir Nöro-İnvazif encephalitic Virüs Vivo Görüntüleme Sistemleri (IVIS) Algılama

Video, miyelin oligodendrosit glikoproteinleri ve inaktive edilmiş Mycobacterium tuberculosis'in bir kombinasyonunu enjekte ederek bir fare modelinde deneysel otoimmün ensefalomiyelit indüksiyonunu göstermektedir. Model, araştırmacıların hastalık mekanizmalarını incelemelerine ve terapötik müdahaleleri test etmelerine olanak tanır.

Bir Fare Modelinde Deneysel Otoimmün Ensefalomiyelit İndüksiyonu

Bu video, CNS enfeksiyonu olan bir fare modelinin oluşturulmasını gösterir. Emziren bir yavruya virüs hem intrakraniyal hem de intraperitoneal olarak enjekte edilir. Virüs yayılır ve CNS'yi enfekte ederek nöronal hücre ölümüne ve iltihaplanmaya neden olur. Yavru, hastalık ilerledikçe enfeksiyon semptomları açısından değerlendirilir.

Merkezi Sinir Sistemi Enfeksiyonu Olan Bir Murin Modelinin Oluşturulması

Bu videoda, deneysel otoimmün ensefalomiyelit (EAE) kullanılarak multipl sklerozun bir fare modeli oluşturulmuştur. Fareye, otoreaktif T hücrelerini aktive eden bir bağışıklık tepkisini tetikleyen bir nöronal peptit ve bir adjuvan içeren bir emülsiyon enjekte edilir. Bunu, otoreaktif T hücrelerinin beyne sızmasına izin vererek kan-beyin bariyeri geçirgenliğini artırmak için bir boğmaca toksini (PTX) enjeksiyonu takip eder. Bu infiltrasyon, multipl sklerozun demiyelinizan durumunu taklit ederek...

Bu video, Theiler'in Murin Ensefalomiyelit Virüsü (TMEV) ile enfekte olmuş bir farede elleçlemeye bağlı nöbetlerin indüksiyonunu göstermektedir. Hiperuyarılabilir nöronlara sahip olan enfekte fare, dış fiziksel uyaranlara maruz kalır. Bu maruziyet strese neden olarak nöronlarda anormal elektriksel aktiviteye yol açar ve bu da nöbetlerle sonuçlanır.

Bir Fare Modelinde Kullanıma Bağlı Nöbetler

Grip A virüs (IAVs) önemli insan solunum patojenler vardır. İnsan fizyolojisi taklit hayvan modelleri IAVs patojenitesi anlamak ve preklinik roman aşı yaklaşımlar sınamasını gerçekleştirmek için gereklidir. Burada, biz IAV Patogenez, humoral yanıt ve enfeksiyon bir fare modeli kullanarak aşı etkinliğini değerlendirmek için teknikler açıklanmaktadır.

Grip A virüs enfeksiyonu bir fare modeli çalışmalarda

Burada fare Zika virüs kaynaklı microcephaly bir model oluşturmak için bir yöntem açıklanmaktadır. Bu iletişim kuralı embriyonik, Yenidoğan ve yetişkin-sahne intraserebral aşılama Zika şunun için yöntemler içerir.

İntraserebral enjeksiyon stratejileri kullanarak Zika virüs kaynaklı nörolojik bozukluklar için fare modelleri oluşturma: embriyonik, Yenidoğan ve yetişkin

Burada sunulan protokol, yetişkin erkek Dark Agouti sıçanlarında her iki kortikal yarımkürenin yaygın bir gri madde demyelinasyonunun çoğaltılmasına izin verir. Yöntem, bir kateterin intraserebral implantasyonu, miyelin oligodendrosit glikoproteine karşı subklinik bağışıklama ve implante kateterden pro-enflamatuar sitokin karışımının intraserebral enjeksiyonundan oluşur.

Pro-enflamatuar Sitokinlerin İntraserebral Enjeksiyonu ile İndüklenen Yaygın Serebral Kortikal Demiyelinasyonun Sıçan Modeli

Protokolün amacı, enfeksiyon sonrasında faredeki birden fazla organdan Zika virüsünü izole ederek ve ölçerek viral hastalıkları araştırmak için kullanılan teknikleri göstermektir.

Farede Birden Fazla Organdan Zika Virüsünün İzolasyon ve Nicelikselleştirilmesi

C57BL / 6 farelerde Theiler'in murin ensefalomiyelit virüsü (TMEV) ile intraserebral enfeksiyon, insan hastalarda viral ensefalitin ve müteakip epilepsinin erken ve kronik klinik semptomlarının çoğunu çoğaltır. Bu yazıda TMEV modelinin virüs enfeksiyonu, semptomları ve histopatolojisi anlatılmaktadır.

Theiler's Murine Encephalomyelitis Virus Kullanarak Enfeksiyöz Etiyolojinin Epilepsisi İçin Bir Model

Öğrenin, deng virüsü kaynaklı nöropatiyi incelemek için immünokompetan ICR emzikli fare modeli oluşturma yöntemini. Bu protokol, akut viral ensefalit benzeri hastalıkları canlı ortamda izlemeyi sağlar.

Dang humması virüs kaynaklı akut viral Ensefalitis-benzeri hastalık bir Murine modeli

Daha fazla video keşfet