Name: Zebrabalığı Embriyoları Kullanılarak Kimyasal Bileşiklerin Toksisitesinin Hızlı Değerlendirilmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-08-25T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 s
Description: Keşfedin kimyasal bileşiklerin toksisitesini Danio rerio embriyoları kullanarak hızlı ve verimli bir şekilde değerlendirme yöntemini. Bu teknik, hücre kültüründe kaçırılan yan etkileri tespit ederek erken aşama ilaç geliştirmede kritik öneme sahiptir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Çalışma Sigrid Juselius Vakfı (SP, MP), Finlandiya Kültür Vakfı (AA, MH), Finlandiya Akademisi (SP, MP), Orion Farmos Vakfı (MH), Tampere Tüberküloz Vakfı (SP, MH ve MP) ve Jane ve Aatos Erkko Vakfı (SP ve MP) hibe ile desteklendi ). İtalyan ve Fransız işbirlikçilerimiz Prof. Supuran ve Prof. Winum'a anti-TB ve anti-kanser ilaç geliştirme amaçları için güvenlik ve toksisite değerlendirmesi için karbonik anhidraz inhibitörleri sağladıklarından dolayı teşekkür ederiz. Aulikki Lehmus ve Marianne Kuuslahti'ye teknik yardımları için teşekkür ederiz. Ayrıca Leena Mäkinen ve Hannaleena Piippo'ya zebra balığı üremesi ve embriyo toplama konusunda yardımcı olmaları için teşekkür ederiz. Harlan Barker'a el yazmasının eleştirel değerlendirmesi ve anlayışlı yorumları için içtenlikle teşekkür ederiz.

Tampere Üniversitesi'ndeki zebra balığı çekirdek tesisi, Ulusal Hayvan Deney Kurulu tarafından verilen bir kuruluş iznine sahiptir (ESAVI/7975/04.10.05/2016). Zebra balığı embriyosu kullanılarak yapılan tüm deneyler, Doğu Finlandiya İl Hükümeti, Tampere Bölgesel Hizmet Birimi Protokolü Sosyal ve Sağlık Bakanlığı 'lSLH-2007-7254/Ym-23'e göre yapılmıştır.
1. Gecelik Zebrabalığı Çiftertanklarının Kurulumu
<ol><li>Bir gecede çiftleme tanklarına 2-5 yetişkin erkek zebra balığı ve 3-5 yetişkin dişi zebra balığı yerleştirin. (Üreme otomatik karanlık ve ışık döngüsü gecede tarafından sabah indüklenir).</li>
	<li>İkiden fazla kimyasal bileşiklerin toksisitesini değerlendirmek için yeterli embriyo elde etmek için birkaç haç ayarlayın. Toksisite nin değerlendirilmesi için, her konsantrasyon20 embriyo23en az ihtiyacı vardır.</li>
	<li>Hayvanlara stres le başa çıkmaktan kaçınmak için, hayvanların üreme için aynı bireyleri kullanmadan önce 2 hafta dinlenmesine izin verin.</li>
</ol>2. Embriyoların Toplanması ve Kimyasal Bileşiklere Maruz Kalmak İçin Plakahazırlama
<ol><li>Embriyoları toplayın, ertesi gün öğlenden önce, ince örgüsüz bir süzgeç kullanarak ve E3 embriyo orta [5.0 mM NaCl, 0.17 mM KCl, 0.33 mM CaCl2, 0.33 mM MgSO4içeren bir Petri çanak üzerine transfer ve 0.1% w / v Methylene Mavi].</li>
	<li>Plastik pasteur pipeti (örneğin, gıda ve katı atık) kullanarak enkaz kaldırın. Döllenmemiş/ölü embriyoları (opak görünümleriyle tanımlanan) çıkarmak için her bir embriyo kümesini stereomikroskop altında inceleyin.</li>
	<li>Embriyoları 28.5 °C'de bir kuvözde tutun. Embriyoları, ertesi sabah, bir stereomikroskop altında inceleyin ve herhangi bir sağlıksız veya ölü embriyoları çıkarın. Ayrıca, taze E3 orta ile eski E3 orta değiştirin. NOT: Zebra balığı embriyoları her zaman laboratuvar koşullarında 28.5 °C'de muhafaza edilir.</li>
	<li>Dikkatle embriyoları kapsayacak kadar E3 orta içeren 24 kuyuplaka her kuyuya 1 embriyo aktarın.</li>
</ol>3. Kimyasal Bileşiklerin Stok Çözeltisinin Hazırlıkları ve Seyreltilmiş Bileşiklerin Kuyulara Dağılımı
<ol><li>4 °C'de depolanan inhibitör bileşikleri içeren şişeleri çıkarın. NOT: Bileşiğin özelliklerine bağlı olarak farklı sıcaklıklarda saklanır.</li>
	<li>Bileşiğin birkaç miligramını (mg) doğru bir şekilde tartabilen analitik bir denge kullanarak bileşiğin(ler) tartın.</li>
	<li>Bileşiklerin çözünürlüğü özelliklerine göre, her bileşik için uygun bir çözücüde (örn. E3 su veya Dimetil sülfoksit (DMSO) en az 250 μL (100 mM) stok çözeltisi hazırlayın. NOT: Yukarıdaki adımlar, denemenin başlamasından bir gün önce uygun bir zamanda yapılabilir ve 4 °C'de saklanabilir).</li>
	<li>15 mL santrifüj tüplerinde E3 suyu kullanarak stok çözeltilerinin seri seyreltmelerini (örn. 10 μM, 20°M, 50 μM, 100 μM, 150 μM, 300 μM ve 500 μM) yapın. NOT: Seri seyreltme konsantrasyonları ve sayısı toksisite düzeylerine bağlı olarak bir bileşikten başka bir bileşiğin sayısına göre değişir.</li>
	<li>Embriyo içeren 24 kuyu plakasından, pasteur pipeti ve 1 mL pipet (1 dpf embriyo içeren) kullanarak kuyulardan e3 suyunu bir seferde çıkarın.</li>
	<li>Her kuyuda (alttan başlayıp daha yüksek konsantrasyona doğru hareket eden) her bir dilüentin 1 mL'sini 24 kuyunun kuyularına dağıtın.</li>
	<li>Aynı embriyo grubundan bir kontrol grubu ayarlayın ve karşılık gelen miktarda dilüent ekleyin.</li>
	<li>İsmi ve konsantrasyonu ile 24 kuyulu plakaları etiketleyip plakaları bir kuluçka makinesinde 28,5 °C'de tutun.</li>
</ol>4. Stereomikroskop Kullanarak Embriyoların Henotypik Analizi ve Görüntülemesi
<ol><li>Kimyasal bileşiklere maruz kaldıktan sonra 24 saat parametreler için embriyoları stereomikroskop altında inceleyin.<ol>
<li>Mortalite, kuluçka, kalp atışı, sarısı çuval kullanımı, mesane gelişimi, balık hareketi, perikardiyal ödem ve vücudun şekli gibi parametrelere dikkat edin23.</li>
		<li>Bileşiğin her konsantrasyonuna maruz kalan larvaları alın ve metal bir sonda kullanarak %3 yüksek molekül ağırlıklı metil selüloz içeren küçük bir Petri kabında yan lara yerleştirin. NOT: %3'lük metil selüloz (yüksek moleküler) balığımikroskobik inceleme için gerekli bir oryantasyonla yerleştirmek için gerekli olan viskoz bir sıvıdır. Bu sıvı balık yönlendirme için, bir metal sonda gereklidir.</li>
		<li>Görüntüleri kameraya bağlı stereomikroskop kullanarak çekin. Görüntüleri denemenin sonuna kadar her gün ayrı bir klasöre kaydedin.</li>
		<li>Tüm gözlemleri her gün bir tabloya çevrimiçi bir tabloya veya basılı bir sayfaya girin.</li>
		<li>Bileşikler nörotoksik ise, 4-5 dpf larvaları değiştirilmiş yüzme paterni gösterebilir, anormal hareket paterni sergileyen larvaların kısa (30 s ila 1 dk) videosunu çekerek bu tür değişikliklerin kaydını yapabilir.</li>
		<li>Kimyasal bileşiklere maruz kaldıktan 5 gün sonra, her kimyasalın 50 (LC50)yarısını hesaplamak için embriyoların yarısının öldüğü konsantrasyona dikkat edin. NOT: LC50, embriyoların %50'sinin kimyasal bir bileşiğe maruz kaldıktan 5 gün sonra öldüğü konsantrasyondur. Bir bileşik 23 her konsantrasyonun toksisitesini test etmekiçin en az 20 embriyo kullanın.</li>
		<li>Uygun bir program kullanarak tüm konsantrasyonları için embriyoların mortalite için bir eğri oluşturmak.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Amaouche, N., Casaert Salome, H., Collignon, O., Santos, M. R., Ziogas, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Marketing+authorization+applications+submitted+to+the+European+Medicines+Agency+by+small+and+medium-sized+enterprises%3A+an+analysis+of+major+objections+and+their+impact+on+outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Discovery+Today%22%5BJournal%5D)">Marketing authorization applications submitted to the European Medicines Agency by small and medium-sized enterprises: an analysis of major objections and their impact on outcomes.</a> Drug Discovery Today. 23 (10), 1801-1805 (2018).</li>
<li>Garg, R. C., Bracken, W. M., Hoberman, A. M. Reproductive and developmental safety evaluation of new pharmaceutical compounds. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGarg%2C+RC+%22Reproductive+and+Developmental+Toxicology%22">Reproductive and Developmental Toxicology</a>. Gupta, R. C. , Elsevier. Boston, MA, USA. 89-109 (2011).</li>
<li>Lee, H. Y., Inselman, A. L., Kanungo, J., Hansen, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alternative+models+in+developmental+toxicology%5BTitle%5D)+AND+%22Systems+Biology+in+Reproductive+Medicine%22%5BJournal%5D)">Alternative models in developmental toxicology.</a> Systems Biology in Reproductive Medicine. 58 (1), 10-22 (2012).</li>
<li>Gao, G., Chen, L., Huang, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-cancer+drug+discovery%3A+update+and+comparisons+in+yeast%2C+Drosophila%2C+and+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Molecular+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Anti-cancer drug discovery: update and comparisons in yeast, Drosophila, and zebrafish.</a> Current Molecular Pharmacology. 7 (1), 44-51 (2014).</li>
<li>Brown, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selection+of+test+chemicals+for+the+ECVAM+international+validation+study+on+in+vitro+embryotoxicity+tests.+European+Centre+for+the+Validation+of+Alternative+Methods%5BTitle%5D)+AND+%22Alternatives+to+Laboratory+Animals%22%5BJournal%5D)">Selection of test chemicals for the ECVAM international validation study on in vitro embryotoxicity tests. European Centre for the Validation of Alternative Methods.</a> Alternatives to Laboratory Animals. 30 (2), 177-198 (2002).</li>
<li>Selderslaghs, I. W., Van Rompay, A. R., De Coen, W., Witters, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+screening+assay+to+identify+teratogenic+and+embryotoxic+chemicals+using+the+zebrafish+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Reproductive+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Development of a screening assay to identify teratogenic and embryotoxic chemicals using the zebrafish embryo.</a> Reproductive Toxicology. 28 (3), Elmsford, N.Y. 308-320 (2009).</li>
<li>Brannen, K. C., Panzica-Kelly, J. M., Danberry, T. L., Augustine-Rauch, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+zebrafish+embryo+teratogenicity+assay+and+quantitative+prediction+model%5BTitle%5D)+AND+%22Birth+Defects+Research+Part+B+Developmental+and+Reproductive+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Development of a zebrafish embryo teratogenicity assay and quantitative prediction model.</a> Birth Defects Research Part B Developmental and Reproductive Toxicology. 89 (1), 66-77 (2010).</li>
<li>Hermsen, S. A., van den Brandhof, E. J., van der Ven, L. T., Piersma, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relative+embryotoxicity+of+two+classes+of+chemicals+in+a+modified+zebrafish+embryotoxicity+test+and+comparison+with+their+in+vivo+potencies%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicology+in+Vitro%22%5BJournal%5D)">Relative embryotoxicity of two classes of chemicals in a modified zebrafish embryotoxicity test and comparison with their in vivo potencies.</a> Toxicology in Vitro. 25 (3), 745-753 (2011).</li>
<li>Lessman, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+developing+zebrafish+%28Danio+rerio%29%3A+a+vertebrate+model+for+high-throughput+screening+of+chemical+libraries%5BTitle%5D)+AND+%22Birth+Defects+Research.+Part+C%2C+Embryo+Today%3A+Reviews%22%5BJournal%5D)">The developing zebrafish (Danio rerio): a vertebrate model for high-throughput screening of chemical libraries.</a> Birth Defects Research. Part C, Embryo Today: Reviews. 93 (3), 268-280 (2011).</li>
<li>Lantz-McPeak, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+toxicity+assay+using+high+content+screening+of+zebrafish+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Developmental toxicity assay using high content screening of zebrafish embryos.</a> Journal of Applied Toxicology. 35 (3), 261-272 (2015).</li>
<li>Truong, L., Harper, S. L., Tanguay, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+embryotoxicity+using+the+zebrafish+model%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Evaluation of embryotoxicity using the zebrafish model.</a> Methods in Molecular Biology. 691, 271-279 (2011).</li>
<li>Rodrigues, G. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Design%2C+synthesis%2C+and+evaluation+of+hydroxamic+acid+derivatives+as+promising+agents+for+the+management+of+Chagas+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Medicinal+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Design, synthesis, and evaluation of hydroxamic acid derivatives as promising agents for the management of Chagas disease.</a> Journal of Medicinal Chemistry. 57 (2), 298-308 (2014).</li>
<li>Kanungo, J., Cuevas, E., Ali, S. F., Paule, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+model+in+drug+safety+assessment%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Pharmaceutical+Design%22%5BJournal%5D)">Zebrafish model in drug safety assessment.</a> Current Pharmaceutical Design. 20 (34), 5416-5429 (2014).</li>
<li>Peterson, R. T., Link, B. A., Dowling, J. E., Schreiber, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small+molecule+developmental+screens+reveal+the+logic+and+timing+of+vertebrate+development%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Small molecule developmental screens reveal the logic and timing of vertebrate development.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 97 (24), 12965-12969 (2000).</li>
<li>Stainier, D. Y., Fishman, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+zebrafish+as+a+model+system+to+study+cardiovascular+development%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Cardiovascular+Medicine%22%5BJournal%5D)">The zebrafish as a model system to study cardiovascular development.</a> Trends in Cardiovascular Medicine. 4 (5), 207-212 (1994).</li>
<li>Aspatwar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nitroimidazole-based+inhibitors+DTP338+and+DTP348+are+safe+for+zebrafish+embryos+and+efficiently+inhibit+the+activity+of+human+CA+IX+in+Xenopus+oocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Enzyme+Inhibition+and+Medicinal+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Nitroimidazole-based inhibitors DTP338 and DTP348 are safe for zebrafish embryos and efficiently inhibit the activity of human CA IX in Xenopus oocytes.</a> Journal of Enzyme Inhibition and Medicinal Chemistry. 33 (1), 1064-1073 (2018).</li>
<li>Rami, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoxia-targeting+carbonic+anhydrase+IX+inhibitors+by+a+new+series+of+nitroimidazole-sulfonamides%2Fsulfamides%2Fsulfamates%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Medicinal+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Hypoxia-targeting carbonic anhydrase IX inhibitors by a new series of nitroimidazole-sulfonamides/sulfamides/sulfamates.</a> Journal of Medicinal Chemistry. 56 (21), 8512-8520 (2013).</li>
<li>Spitsbergen, J. M., Kent, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+state+of+the+art+of+the+zebrafish+model+for+toxicology+and+toxicologic+pathology+research--advantages+and+current+limitations%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicologic+Pathology%22%5BJournal%5D)">The state of the art of the zebrafish model for toxicology and toxicologic pathology research--advantages and current limitations.</a> Toxicologic Pathology. , Suppl 31. 62-87 (2003).</li>
<li>Teraoka, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+cytochrome+P450+1A+is+required+for+circulation+failure+and+edema+by+2%2C3%2C7%2C8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+and+Biophysical+Research+Communications%22%5BJournal%5D)">Induction of cytochrome P450 1A is required for circulation failure and edema by 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin in zebrafish.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 304 (2), 223-228 (2003).</li>
<li>Zon, L. I., Peterson, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+drug+discovery+in+the+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Drug+Discovery%22%5BJournal%5D)">In vivo drug discovery in the zebrafish.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 4 (1), 35-44 (2005).</li>
<li>Hill, A. J., Teraoka, H., Heideman, W., Peterson, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+as+a+model+vertebrate+for+investigating+chemical+toxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicological+Sciences%22%5BJournal%5D)">Zebrafish as a model vertebrate for investigating chemical toxicity.</a> Toxicological Sciences. 86 (1), 6-19 (2005).</li>
<li>Kari, G., Rodeck, U., Dicker, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish%3A+an+emerging+model+system+for+human+disease+and+drug+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Pharmacology+and+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">Zebrafish: an emerging model system for human disease and drug discovery.</a> Clinical Pharmacology and Therapeutics. 82 (1), 70-80 (2007).</li>
<li>Gourmelon, A., Delrue, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Validation+in+Support+of+Internationally+Harmonised+OECD+Test+Guidelines+for+Assessing+the+Safety+of+Chemicals%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Experimental+Medicine+and+Biology%22%5BJournal%5D)">Validation in Support of Internationally Harmonised OECD Test Guidelines for Assessing the Safety of Chemicals.</a> Advances in Experimental Medicine and Biology. 856, 9-32 (2016).</li>
<li>Aspatwar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((beta-CA-specific+inhibitor+dithiocarbamate+Fc14-584B%3A+a+novel+antimycobacterial+agent+with+potential+to+treat+drug-resistant+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Enzyme+Inhibition+and+Medicinal+Chemistry%22%5BJournal%5D)">beta-CA-specific inhibitor dithiocarbamate Fc14-584B: a novel antimycobacterial agent with potential to treat drug-resistant tuberculosis.</a> Journal of Enzyme Inhibition and Medicinal Chemistry. 32 (1), 832-840 (2017).</li>
<li>Kazokaite, J., Aspatwar, A., Kairys, V., Parkkila, S., Matulis, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorinated+benzenesulfonamide+anticancer+inhibitors+of+carbonic+anhydrase+IX+exhibit+lower+toxic+effects+on+zebrafish+embryonic+development+than+ethoxzolamide%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+and+Chemical+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Fluorinated benzenesulfonamide anticancer inhibitors of carbonic anhydrase IX exhibit lower toxic effects on zebrafish embryonic development than ethoxzolamide.</a> Drug and Chemical Toxicology. 40 (3), 309-319 (2017).</li>
<li>Howe, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+zebrafish+reference+genome+sequence+and+its+relationship+to+the+human+genome%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The zebrafish reference genome sequence and its relationship to the human genome.</a> Nature. 496 (7446), 498-503 (2013).</li>
<li>Granato, M., Nusslein-Volhard, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fishing+for+genes+controlling+development%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Genetics+%26+Development%22%5BJournal%5D)">Fishing for genes controlling development.</a> Current Opinion in Genetics & Development. 6 (4), 461-468 (1996).</li>
<li>Bambino, K., Chu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+in+Toxicology+and+Environmental+Health%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Topics+in+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Zebrafish in Toxicology and Environmental Health.</a> Current Topics in Developmental Biology. 124, 331-367 (2017).</li>
<li>Goldsmith, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+as+a+pharmacological+tool%3A+the+how%2C+why+and+when%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Zebrafish as a pharmacological tool: the how, why and when.</a> Current Opinion in Pharmacology. 4 (5), 504-512 (2004).</li>
</ol>

Yazarlar tarafından olası bir çıkar çatışması bildirilmedi.

Kültürlü hücreler kullanılarak yapılan in vitro toksisite testi, test bileşiğinin neden olduğu toksisite hakkında sınırlı bilgi sağlayan hücrelerin hayatta kalma ve morfolojik çalışmalarını tespit edebilir. Zebra balığı embriyoları kullanılarak kimyasal bileşiklerin toksisite tarama avantajı ilgili bir model organizmada embriyonik gelişim sırasında bütün bir hayvankimyasal kaynaklı phenotik değişikliklerin hızlı tespitidir. Protein kodlayan insan genlerinin yaklaşık %70'inde zebrabalığı genomu<...

İlaç geliştirme pahalı bir süreçtir. Tek bir kimyasal bileşik Gıda ve İlaç İdaresi (FDA) ve Avrupa İlaç Ajansı (EMA) tarafından onaylanmadan önce birkaç bin bileşikler bir milyar doların üzerinde bir maliyetle taranmaktadır1. Preklinik gelişim sırasında, bu maliyetin en büyük kısmı hayvantesti2 için gereklidir. Maliyetleri sınırlamak için, ilaç geliştirme alanında araştırmacılar kimyasal bileşiklerin güvenlik tarama için alternatif modeller gerekir3. Bu nedenle, ilaç gelişiminin erken aşamasında, hızlı bir şekilde uygun bir modelde bileşiklerin güvenlik ve toksisitesini değerlendirebilir bir yöntem kullanmak çok yararlı olacaktır. Hayvan ve hücre kültürü modellerini içeren kimyasal bileşiklerin toksisite taraması için kullanılan çeşitli protokoller vardır ama doğrulanır ve ortak kullanımda olan tek bir protokol yoktur4,5. Zebra balığı kullanarak mevcut protokoller uzunluğu değişir ve kendi kolaylık gereksinimi6,7,8,9 , olarak toksisite değerlendirildi bireysel araştırmacılar tarafından kullanılmıştır 10.000 , 11.11.20 , 12. Yıl.
Yakın geçmişte, zebra balığı embriyonik gelişim sırasında kimyasal bileşiklerin toksisite değerlendirilmesi için uygun bir model olarak ortaya çıkmıştır6,7. Zebra balığı kimyasal bileşiklerin değerlendirilmesi için birçok dahili avantajları vardır13. Hatta büyük ölçekli deneyler münasip, bir zebra balığı dişi hızla ex vivogeliştirmek 200-300 yumurta, toplu koyabilirsiniz gibi, bir haftakadar dış besleme gerekmez ve şeffaf. Bileşikler doğrudan suya eklenebilir, nerede (bileşiğin doğasına bağlı olarak) chorion yoluyla yayılır, ve yumurtadan sonra, deri yoluyla, solungaçları ve larvaağız. Deneyler, embriyonun küçük boyutu nedeniyle14 kimyasal bileşiklerin bol miktarda gerektirmez. Zebra balığı embriyolarının geliştirilmesi, normal gelişimsel sonuca ulaşmak için gereken proteinlerin çoğunu ifade eder. Bu nedenle, bir zebra balığı embriyopotansiyel bir ilaç bir protein veya sinyal molekülünün işlevini bozabilir olup olmadığını değerlendirmek için hassas bir modeldir. Zebra balığının organları 2-5 dpf15arasında işlevsel hale gelir ve embriyonik gelişimin bu hassas döneminde toksik olan bileşikler zebra balığı larvalarında henotik bozukluklara neden olur. Bu fenotipik değişiklikler kolayca invaziv teknikler olmadan basit bir mikroskop kullanılarak tespit edilebilir11. Zebrabalığı embriyoları yaygın hücre kültürü modelleri kullanarak in vitro ilaç tarama göre çok daha büyük biyolojik karmaşıklığı nedeniyle toksikolojik araştırmalarda kullanılır16,17.  Bir omurgalı olarak, zebra balığı genetik ve fizyolojik makyaj insanlar ve dolayısıyla kimyasal bileşiklerin toksisite zebra balığı ve insanlar arasında benzer karşılaştırılabilir8,18,19, 20.000 , 21.000 , 22. Zebrabalığı, böylece, kimyasal bileşiklerin toksisite ve güvenlik değerlendirmesi için ilaç keşif erken aşamasında değerli bir araçtır.
Bu makalede, tek bir araştırmacı tarafından 1-5 günlük post fertilizasyon (dpf) zebra balığı embriyoları kullanılarak karbonik anhidraz (CA) inhibitör bileşiklerinin güvenliğini ve toksisitesini değerlendirmek için kullanılan yöntemin ayrıntılı bir açıklamasını salıyoruz. Protokol, zebra balığı embriyolarının farklı kimyasal inhibitör bileşiklerkonsantrasyonlarına maruz kalmalarını ve embriyonik gelişim sırasındaki mortalite ve henotik değişimleri incelemeyi içerir. Kimyasal bileşiklere maruz kalma sonunda, kimyasal LC50 doz belirlenir. Bu yöntem bireyin 1-5 test bileşiğinin verimli taramasını gerçekleştirmesini sağlar ve yöntemle kişinin deneyiminebağlı olarak yaklaşık 8-10 saat sürer (Şekil 1). Bileşiklerin toksisitesini değerlendirmek için gereken adımların her biri Şekil2'de özetlenmiştir. CA inhibitörlerinin toksisitesinin değerlendirilmesi 8 gün gerektirir ve çiftleşerek çiftleşerek çiftleşerek (1. gün) kurulmasını içerir; embriyoların üreme tanklarından toplanması, temizlenmesi ve 28,5 °C'ye aktarılması (2. gün); 24-iyi plaka kuyularına embriyoların dağılımı ve seyreltilmiş CA inhibitörü bileşiklerin eklenmesi (gün 3); larvaların fenotipik analizi ve görüntülemesi (gün 4-8) ve LC50 dozu (gün8) tayini.  Bu yöntem hızlı ve verimli, kimyasal bileşik ve laboratuvar sadece temel tesisleri küçük bir miktar gerektirir.

<table><tbody><tr><td>24 kuyucuklu plakalar</td><td>Nunc</td><td>Thermo Scientific Terazi</td><td></td></tr><tr><td>(Tartı)</td><td>KERN</td><td>PLJ3000-2CM</td><td></td></tr><tr><td>Terazi (Tartı)</td><td>Mettler Toledo</td><td>AB104-S/PH</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>JT. Baker</td><td>RS421910024</td><td></td></tr><tr><td>Diseksiyon Probu</td><td>Thermo Scientific</td><td>17-467-604&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma Aldrich, Almanya</td><td>D4540</td><td></td></tr><tr><td>Falcon tüpleri 15 mL</td><td>Greiner bio-one</td><td>188271</td><td></td></tr><tr><td>Yüksek moleküler ağırlıklı metilselüloz</td><td>Sigma Aldrich, Almanya</td><td>M0262&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Zebra balığı larvaları için kuluçka makinesi</td><td>Termaks</td><td>B8000</td><td></td></tr><tr><td>KCL</td><td>Merck</td><td>1.04936.0500</td><td></td></tr><tr><td>Metil Mavi</td><td>Sigma Aldrich, Almanya</td><td>28983-56-4</td><td></td></tr><tr><td>MgSO4</td><td>Sigma Aldrich, Almanya</td><td>M7506</td><td></td></tr><tr><td>Mikrosantrifüj tüpleri</td><td>Starlab</td><td>S1615-5500</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>VWR Kimyasalları</td><td>27810.295</td><td></td></tr><tr><td>Parafin Histoplast IM</td><td>Thermo Scientific</td><td>8331</td><td></td></tr><tr><td>Pastör pipeti&nbsp;</td><td>Sarstedt</td><td>86.1171</td><td></td></tr><tr><td>Petri kabı</td><td>Thermo Scientific</td><td>101R20&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Petri</td><td>plakaları Sarstedt</td><td>82.1473</td><td></td></tr><tr><td>Pipet (1 mL ve 200 &mu; L)</td> <td>Termo Bilimsel</td><td>4641230N, 4641210N ve nbsp; &nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Plakalar 24 Kuyulu</td><td>Thermo Scientific</td><td>142485</td><td></td></tr><tr><td>Steriomikroskop/Kamera</td><td>Zeiss</td><td>Stemi 2000-C/Axiocam 105 renkli</td><td></td></tr><tr><td>Şişeler (1,5 mL)</td><td>Fisherbrand</td><td>11569914</td><td></td></tr><tr><td>Zebra balığı AB suşları</td><td>ZIRC&nbsp;</td><td>&nbsp; ZL1&nbsp;</td><td></td></tr></tbody></table>

zebrabalığı embriyoları kullanılarak kimyasal bileşiklerin toksisitesinin hızlı değerlendirilmesi

Rapid Evaluation of Toxicity of Chemical Compounds Using Zebrafish Embryos

Zebra balığı hastalık ve fenotip bazlı ilaç keşfi için yaygın olarak kullanılan omurgalı modeli organizmadır. Zebra balığı birçok yavru üretir, şeffaf embriyolar ve hızlı dış gelişim vardır. Zebra balığı embriyoları, bu nedenle, aynı zamanda değerli ve küçük miktarlarda mevcut ilaçların toksisite hızlı değerlendirilmesi için kullanılabilir. Bu makalede, 1-5 günlük gübreleme sonrası embriyolar kullanılarak kimyasal bileşiklerin toksisitesinin etkin bir şekilde taranması için bir yöntem tanımlanmıştır. Embriyolar, farklı bileşik konsantrasyonlarına maruz kalmanın neden olduğu henotipik kusurları araştırmak için stereomikroskop la izlenir. Bileşiklerin yarı maksimal öldürücü konsantrasyonları (LC50)de belirlenir. Bu çalışma bir inhibitör bileşik 3-6 mg gerekli, ve tüm deney temel tesisleri olan bir laboratuvarda bir birey tarafından tamamlanması için yaklaşık 8-10 saat sürer. Mevcut protokol, ilacın keşfinin erken evresinde bileşiğin dayanılmaz toksik veya hedef dışı etkilerini belirlemek ve hücre kültürü veya diğer hayvan modellerinde gözden kaçmış olabilecek ince toksik etkileri tespit etmek için herhangi bir bileşiği test etmek için uygundur. Yöntem, prosedürdeki gecikmeleri ve ilaç geliştirme maliyetlerini azaltır.

Toksisite değerlendirmesinin kritik kısmı, tek bir deneyde bir veya birden fazla kimyasal bileşiğin farklı konsantrasyonlarını test etmektir. Başlangıçta, toksisite nin değerlendirilmesi için bileşikleri seçin, her bileşik için test etmek için konsantrasyonsayısı, ve buna göre, bir grafik yapmak (Şekil 3). Örnekleri düzenlemek için her bileşik için benzersiz bir renk kullandık (Şekil 3). Daha sonra karışmayı önlemek için solvente...

Zebra balığı embriyoları kimyasal bileşiklerin toksisitesini değerlendirmek için kullanılır. Onlar harici geliştirmek ve kimyasallara duyarlı, ince phenotik değişikliklerin tespitine izin. Deney sadece doğrudan embriyo içeren plaka eklenir bileşik küçük bir miktar gerektirir, test sistemi verimli ve maliyet-etkin hale.

Zebrabalığı Embriyoları Kullanılarak Kimyasal Bileşiklerin Toksisitesinin Hızlı Değerlendirilmesi

The zebrafish is a widely used vertebrate model organism for the disease and phenotype-based drug discovery. The zebrafish generates many offspring, has ...

Toksisite testi prosedürleri Dr.Ashok Aspatwar tarafından gösterilecek. Protokolümüz hedef dışı etkileri tanımlar ve hücre kültürü veya diğer hayvan modellerinde gözden kaçırılabilir keşif erken aşamasında kimyasalların ince toksik etkileri algılar. Tekniğimizin başlıca avantajları şunlardır: hızlı ve verimli, çok az miktarda kimyasal ve laboratuvardaki temel olanaklar gerektirir.Toksisite taraması tüberküloza neden olan mikobacteriuma karşı etkinliğini incelemek için konsantrasyon belirlemede ve daha fazla klinik öncesi hesaplama için bize yardımcı olacaktır. Bu yöntem kimyasalların hedef dışı etkilerine ilişkin içgörüler kullanır ve bu nedenle bu yöntem kimyasalın toksisitesinin birincil öneme sahip olduğu herhangi bir araştırma alanında kullanılabilir. Bu yöntem çok basittir ve önceden deneyimi olmayan herkes tarafından yapılabilir.Hiçbir deneyimi olan bireyler dikkatle deney planlamak ve sadece bir bileşik kullanmalısınız. Bu yöntem, gelişmekte olan zebra balığı embriyolarında ve dolayısıyla test edilen bileşiklerin güvenliğinde phenotik değişiklikler şeklinde kimyasalların toksik etkilerini sağlar. Başlamak için, çiftleme tankları içine bir gecede iki ila beş yetişkin erkek ze

rapid-evaluation-toxicity-chemical-compounds-using-zebrafish

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Bu makalede, zebra balığı embriyoları kimyasal toksisite taraması için kullanılmıştır. Kimyasal toksisite, fenotip okumaları ile ilişkilidir. Numune protokolü, kimyasal toksisite taramasının gerçekleştirilmesine yönelik metodolojik bir yaklaşımı göstermektedir.

Embriyo Bazlı Kimyasal Toksisite Ekranı: Zebra Balığı Embriyolarının Geliştirilmesi Üzerindeki Etkilerin Değerlendirilmesi

Zebra balığı omurgalı gelişimsel süreçleri ve model insan hastalığı araştırmak için mükemmel bir deneysel organizmadır. Burada, bir ile zebra balığı embriyolarının bir manuel yüksek verimli kimyasal ekran gerçekleştirmek için nasıl bir protokol tarif Okuması in situ hibridizasyon (VVISH) içinde tüm montaj.

Zebra balığı Embriyolar kullanılarak Yüksek verim Yaklaşıyor A Manuel Küçük Molekül Ekran

teratojen Pozlama doğum kusurlarına neden olabilir. Balığı kimyasal teratojenik potansiyeli belirlemek için faydalıdır. Biz maruz kalma farklı zamanlarda da nitrit değişik düzeylerde embriyoların açığa tarafından zebrabalıkları yararını göstermektedir. Biz nitrit toksik ve ağır gelişimsel bozukluklara neden olduğunu göstermektedir.

Bir Model Olarak Zebra balığı Nitrit teratojenik potansiyelini değerlendirmek için

Zebra balığı son zamanlarda potansiyel radyasyon değiştiricilerini doğrulamak için bir model olarak kullanılmıştır. Mevcut protokol, radyasyona dayalı tarama deneyleri için zebra balığı embriyolarını kullanmanın ayrıntılı adımlarını ve farklı tedavilerin ve radyasyonun etkisini değerlendirmek için bazı gözlemsel yaklaşımları açıklamaktadır.

Potansiyel Radyosensitizörleri veya Koruyucuları Değerlendirmek için Bir Model Olarak Zebra Balığı Larvaları

Zebra balığı embriyo titreşimi ürkütücü tepkisine dayalı olarak kimyasal bileşik toksisitesini değerlendirmek için bir tarama sisteminin iş akışını ve veri analizini açıklıyoruz. Sistem, zebra balığı embriyolarının bir titreşim uyaranına maruz kaldıklarında hareketlerini kaydeder ve genel toksisite/ölümcüllük ve nöromüsküler toksisitenin entegre bir değerlendirmesine izin verir.

Zebra Balığı Titreşim İrkilme Tepkisi Tarama Sistemi Kullanılarak Kimyasalların Toksisitesinin Değerlendirilmesi

Bu protokol, zebra balığı larvalarında döllenmeden 3-7 gün sonra bir ilaç tarama prosedürünü ve ardından morfolojik değerlendirmeyi tanımlar.

Erken Evre Zebra Balığı Larvalarında Küçük Molekül Taraması ve Toksisite Testi

Biz bir kuş embriyo modeli dinamik, gerçek zamanlı intravital görüntüleme kullanarak insan xenografted tümörlerin vasküler nanoparçacık yerelleştirme ölçmek için yeni bir yaklaşım sunuyoruz.

Intravital Görüntüleme Gerçek Zamanlı tümörler Nanopartikül Alımı Değerlendirme

Ikizden ikize transfüzyon sendromu ve perinatal tıp ikiz anemi polisitemia dizisi iki potansiyel olarak yıkıcı sorunlar. Her iki bozukluk da sadece monokoryonik ikizlerde ve plasental vasküler anastomozlar yoluyla dengesiz kan akımı sonucu oluşur. Doğumdan sonra plasenta damarlarının renkli boya enjeksiyon kullanılarak vasküler anastomozlar varlığı doğru değerlendirmek için basit bir protokol sağlar.

Renkli Boya kullanarak Monokoryonik Plasenta vasküler anastomozlar doğru ve basit Değerlendirme

Zebra balığı omurgalılarda kalp rejenerasyon mekanizmaları incelemek için değerli bir modeli temsil eder. Burada, cryoinjury kullanarak yetişkin zebrabalıkları yılında bir kalp infarkt indüksiyonu için bir protokol mevcut. Memeli enfarkt gözlenen benzer ventriküler duvarın 20% içinde büyük hücre ölümü, bu yöntem sonuçlar,.

Yetişkin Zebra balığı Myokard İnfarktüsü İndüksiyon Cryoinjury kullanma

A CD4 numaralandırma yöntemi, α-testi, hızlı ve doğru CD4 sayımları sağlamak üzere tam tükürük kullanan tarif edilmektedir. Α-test maliyetleri pennies ve bu monoklonal antikorlar, enstrümantasyon, soğutma, numunelerin taşınması gibi toplama ve kan işleme gibi teknik eğitim, pahalı reaktifler için gereksinimini ortadan kaldırır.

Α-testi: Tüm Tükürük Kullanarak Hızlı Hücre içermeyen CD4 sayımı

Keşfedin kimyasal bileşiklerin toksisitesini Danio rerio embriyoları kullanarak hızlı ve verimli bir şekilde değerlendirme yöntemini. Bu teknik, hücre kültüründe kaçırılan yan etkileri tespit ederek erken aşama ilaç geliştirmede kritik öneme sahiptir.

Zebrabalığı Embriyoları Kullanılarak Kimyasal Bileşiklerin Toksisitesinin Hızlı Değerlendirilmesi

Daha fazla video keşfet