Farelerde Tümör Büyümesini Azaltmak için MikroRNA'nın Vivo İnhibisyonu

Biz bir tiroid kanseri modelinde bir mikroRNA inhibitörü dayalı ilk tedaviyi gerçekleştirmek. Bu gelişmekte olan tedaviler bu hastalığın tedavisi için umut vaat ediyor. Ortotopik model bu tür, tedavi teslim sistemik bir rota kullanarak, yeni bir mikroRNA tabanlı ilaçların doğrulanmasını kolaylaştırır.

Biz fare tiroid içine insan tiroid kanser hücreleri implante etmek için bir ortotopik model kullanmak rağmen, bu modellerin tüm diğer kanser türleri için sistemik olabilir. Julia Ramirez-Moya ve Adrian Acuna ile prosedürü gösteren Raquel Arocha Riesco olacak. Enstitümüzden bir teknisyen.

Bir CAL-62 insan tiroid kanseri hücre hattı eksik orta kurduktan sonra, 4 santigrat derece PBS 50 mikrolitre 6 hücreli aliquot için 1 kez 10 askıya ve bazal membran matris eşit hacimli hücreleri karıştırın. Hücreleri 27 gage yarım inç lik bir iğneyle donatılmış 1 mililitrelik şırıngaya yükleyin ve 6 haftalık immünodeficient valf C çıplak farenin sol kanadına numunenin 100 mikrolitresini subkutan olarak enjekte edin. Enjeksiyondan iki hafta sonra, antagomiR veya kontrollü tedavi tampon çözeltisi 1 nokta 5 mililitrelik bir tüp içinde vivo doğum reaktifoda sıcaklığında 160 mikrolitre ekleyin.

Ve hemen karışımın karmaşıklığını sağlamak için 10 saniye boyunca çözelti girdap. Tedavi çözeltisini 50 santigrat derecede 30 dakika kuluçkaya yatırın ve ardından mikro santrifüjde kısa bir santrifüj edin. Daha sonra, taze PBS ve iyice karıştırma ile tortulanmış tedavi kompleksi altı kat seyreltin.

Ve tedavinin 200 mikrolitrelik hacmini doğrudan tümöre enjekte edin. Her deney hayvanına haftada 2 kez d-Luciferin substrat çözeltisi başına 40 miligram lık 50 mikrolitre mikrolitre enjekte edin. Isofluran anestezisi sonrası parmak ucurluğuna yanıt eksikliğini doğruladığından emin olun.

Hayvanı in vivo biyolüminesans görüntüleme sisteminin odasına yerleştirin ve biyolüminesans sinyalini in vivo görüntüleme yazılımı ile standart protokollere göre görüntüleyin. O zaman tümörün büyümesini analiz et. T-testi ile her iki tedavinin de karşılaştırılması ve önemi ve büyüme farklılıklarının belirlenmesi.

Ortotopik tiroid tümör hücre aşısı için PBS 5 mikrolitre CAL-62 hücrelerinin bir aliquot askıya almak, ve subkutan analjezik 100 mikrolitre ve antibiyotik 100 mikrolitre enjekte 7 haftalık kapak C çıplak fare içine. Ayak sıkışması için bir eksikliği yanıt doğruladıktan sonra, bir diseksiyon mikroskobu n altında hayvan yerleştirin ve iodopovione ile hayvanın boynunu dezenfekte. Daha sonra, deride yaklaşık 2 santimetrelik bir kesi yapın ve boyun ortaya çıkarmak için tükürük glans yerinden.

Trakea ve tiroid bezini ortaya çıkarmak için kayış kaslarını incelemek için diseksiyon terhisleri ve/veya makas kullanın ve cricoid kıkırdağının yan tarafında bulunan 5 mikrolitrelik tümör hücrelerini sağ tiroid lobule enjekte etmek için 10 mikrolitrelik bir şırınga kullanın. Tüm hücreler teslim edildiğinde, tükürük glans yeniden konumlandırmak ve kesi kapatmak için ipek örgülü, kaplamalı, emilebilir olmayan dikişler kullanın. Sonra yara bölgesine iodopovione uygulayın ve tam iyileşme kadar izleme ile bir termik battaniye üzerine fare yerleştirin.

intratiroid hücre enjeksiyonundan 2-3 hafta sonra, tedavi çözümünü gösterildiği gibi hazırlayın ve anestezili tiroid tümör taşıyan hayvanın venöz sinüsünün retro-orbital enjeksiyonu ile intravenöz olarak çözümünü teslim edin. Bu temsili deneyde mikroRNA 146B inhibitörü olmaksızın intratümöre enjekte edilen tümörlerin büyümesi negatif kontrol açısından önemli ölçüde bastırıldı. Bazı proliferasyon belirteçlerinin intratümöral ekspresyon düzeyleri düşük düzeylerde, antagomir tedavi edilen tümörlerde kontrol tümörlerine göre gözlendi.

Buna ek olarak, mikro-RNA hedeflerinin kurtarma tümör çıkarılan RNA analizi ile çalışılabilir, veya protein. Topluca bireysel mikro RNA in vivo inhibisyonu etkili olduğunu ve tiroid kanseri tedavileri için terapötik olarak istismar edilebilir ortaya koymaktadır. Farelerde kurulan tiroid tümörlerinin histolojik analizi gösterildiği gibi, tümörü çevreleyen epitel hücrelerinin boyanmasına izin vererek tümör dokusunun tiroid folikül mimarisini ortaya çıkarır.

Özellikle, mikroRNA 146B inhibitörünün farelere intravenöz enjeksiyonu, tümörlü, tümör hacminde kontrol edilen hayvanlara göre önemli bir azalma ile sonuçlanır. Ayrıca, primer tümörde yeni tanımlanan mikroRNA 146B hedef DICER1 ifadesi, anti mikro-RNA 146B tedavisinden sonra artar, indojen mikro-RNA ekspresyonunun inhibisyonunun potansiyelinin altını çizerek ve bu nedenle tiroid kanserinde bir tedavi olarak hedef genlerin restorasyonu. Bu teknik, ve sonraki lipin sonuçları, tiroid kanseri tedavisi için olmayan rNA's dayalı yeni tedaviler keşfetmek olasılığını açın.