Name: Floresan Sinyallerini Etkin Bir Şekilde Ayırt Etmek Için Uyarma-Tarama hiperspektral görüntüleme mikroskobu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-08-22T12:30:00.000+00:00
Duration: 7 s
Description: Öğrenin, uyarma-tarama hiperspektral görüntüleme ile tek örnekteki çoklu floresan sinyallerini ayırt etmeyi. Süperkontinuum lazer kullanarak deney hızını artırın ve veri duyarlılığını geliştirin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar NSF 1725937, NIH P01HL066299, NIH R01HL058506, NIH S10OD020149, NIH UL1 TR001417, NIH R01HL137030, AHA 18PRE34060163 ve İbrahim Mitchell Araştırma Fonu'ndan destek almak istiyorum.

Dr. Leavesley ve Rich, spektral görüntüleme teknolojisini ticarileştirmek için kurulan spectracyte LLC şirketinin finansal çıkarlarını ifşa etmektedir.

Uyarma taramalı hiperspektral görüntüleme kurulumunun en iyi kullanımı ışık yolunun inşası ile başlar. Özellikle, ışık kaynağı seçimi, filtreler (tunable ve dichroic), filtre anahtarlama yöntemi ve kamera mevcut spektral aralığı, olası tarayın hızı, dedektör hassasiyeti ve mekansal örnekleme belirler. Cıva ark lambaları birçok uyarma dalga boyu zirveleri sunuyoruz ama düz bir spektral çıkış sağlamaz ve bir NIST izlenebilir yanıt geri spektral görüntü verilerini düzeltmek için çıkış zirvelerinde önemli sinyal azaltma gere...

Spektral görüntüleme çeşitli şekillerde yapılabilir ve çeşitliterimler1,2,3,4ile adlandırılır. Genel olarak, spektral görüntüleme en az iki mekansal boyut ve bir spektral boyutta elde edilen verileri ifade eder. Multispektral ve hiperspektral görüntüleme en sık dalga boyu bantlarının sayısı veya spektral bantların bitişik olup olmadığı ile ayırt edilir1. Bu uygulama için hiperspektral veriler, uyarma için kullanılan her bandpass filtresinin yarım maksimum (FWHM) tam genişliğinin yarısından az olmayan merkez dalga boylarının aralıkları ile elde edilen bitişik dalga boyu bantları ile elde edilen spektral veriler olarak tanımlanır (örn. 5 nm 14-20 nm bant genişlikli bandpass filtreler iã§in merkez dalga boyu sÃ1/4releri). Veri bantlarının bitişik yapısı, veri kümesinin aşırı örneklemesine olanak sağlayarak, spektral etki alanını örneklemede Nyquist ölçütlerinin karşılanmasını sağlar.
Hiperspektral görüntüleme NASA tarafından 1970'li ve 1980'li yıllarda ilk Landsat uydusu 5 ile birlikte geliştirilmiştir5,6. Birkaç bitişik spektral banttan veri toplamak, her pikselin parlak spektrumunun oluşmasına olanak sağladı. Tek tek bileşenlerin parlaklık spektrumunun tanımlanması ve tanımlanması, yüzey malzemelerinin karakteristik spektrumları tarafından algılanmasının yanı sıra, sinyaldeki değişimler gibi müdahale eden sinyallerin de atmosferik koşullar. Karakteristik spektrumlarını kullanarak malzemelerin saptanması kavramı 1996 yılında Schröck ve ark. beş farklı floroforve bilinen spektrumların kombinasyonlarını kullanarak etiketli kromozomları bir süreç olarak adlandırıldığında biyolojik sistemlere uygulanmıştır. spektral karyotipleme7. Bu teknik 2000 yılında Tsurui ve ark. tarafından doku örneklerinin floresan görüntülemesi için, yedi floresan boya ve tekil değer ayrışması kullanılarak, her pikselin referanstaki doğrusal spektrum kombinasyonlarına spektral ayrıştırma elde edilmesi için ayrıntılı olarak geliştirilmiştir. kütüphane8. Uzaktan algılama benzerlerine benzer şekilde, bilinen her floroforun katkısı hiperspektral görüntüden hesaplanabilir, her florofor spektrumunun priori bilgileri göz önüne alındığında.
Hiperspektral görüntüleme de tarım alanlarında kullanılmıştır9, astronomi10, biyotıp11, kimyasal görüntüleme12, çevresel uygulamalar13, göz bakımı14, gıda bilimi15, adli tıp16,17, tıp bilimi18, mineraloji19, ve gözetim20. Mevcut floresan mikroskop hiperspektral görüntüleme sistemlerinin önemli bir sınırlamastandart hiperspektral görüntüleme teknolojisi dar bantlarda floresan sinyalleri izole 1) ilk örnek uyarma kontrol etmek için uyarma ışığı filtreleme, daha sonra 2) daha fazla filtreleme daha sonra matematiksel olarak 21 ayrılabilir dar bantlarhalinde floresan emisyon ayırmak için yayılan ışık . Hem uyarma aydınlatmasını hem de yayılan floresanları filtrelemek, mevcut sinyal miktarını azaltır, bu da sinyal-gürültü oranını düşürür ve uzun edinme süreleri gerektirir. Düşük sinyal ve uzun edinme süreleri, hiperspektral görüntülemenin tanı aracı olarak uygulanabilirliğini sınırlar.
Hiperspektral görüntülemekullanan ancak mevcut sinyali artıran bir görüntüleme yöntemi geliştirilmiştir, böylece gerekli edinme süresini kısaltır21,22. Uyarma taramalı hiperspektral görüntüleme adı verilen bu yeni yöntem, uyarma dalga boyunu değiştirerek ve geniş bir yayılan ışık aralayarak spektral görüntü verilerini elde eder. Daha önce bu tekniğin emisyon tarama teknikleri21,22ile karşılaştırıldığında sinyal-gürültü oranı büyüklük artışları siparişleri verimleri gösterilmiştir. Sinyal-gürültü oranındaki artış büyük ölçüde tespit edilen geniş bantgeçişinden (~600 nm) kaynaklanırken, özgüllük floresan emisyon yerine sadece uyarma ışığının filtrelanmasıyla sağlanır. Bu, yayılan tüm ışığın (her uyarma dalga boyuiçin) dedektör21'e ulaşmasını sağlar. Ayrıca, bu teknik eksojen etiketlerden otofloresans ayırt etmek için kullanılabilir. Ayrıca, artan tespit edilebilir sinyal nedeniyle edinme süresini kısaltma yeteneği fotobeyazrlama tehlikesini azaltır yanı sıra spektral video görüntüleme için kabul edilebilir bir edinim hızında spektral taramaları sağlar.
Bu protokolün amacı, hiperspektral görüntüleme mikroskobu için bir veri toplama rehberi olarak hizmet vermektir. Buna ek olarak, ışık yolunu ve donanımı anlamanın yolunu anlamaya yardımcı olan açıklamalar da dahildir. Ayrıca açıklanan bir uyarma tarama hiperspektral görüntüleme mikroskobu için açık kaynak yazılım uygulamasıdır. Son olarak, sistemin NIST tarafından izlenebilir bir standarda göre nasıl kalibre edilemeyeceği, doğru sonuçlar için yazılım ve donanım ayarlarını ayarlama ve algılanan sinyali tek tek bileşenlerin katkılarına karıştırması için açıklamalar sağlanır.

<table><tbody><tr><td>Hava Yolu Düz Kas Hücreleri</td><td>Ulusal Hastalık Araştırma Değişimi (NDRI)</td><td>NDRI'dan elde edilen insan akciğer dokularından izole edilmiştir</td><td>Yüksek otofloresan, kalsiyuma duyarlı hücreler</td></tr><tr><td>Otomatik Deklanşör</td><td>Thorlabs Inc.</td><td>SHB1</td><td>Foto ağartmayı en aza indirmek için uzaktan kontrol edilebilir deklanşör</td></tr><tr><td>Otomatik Aşama</td><td>Önceki Bilimsel</td><td>H177P1T4</td><td>Otomatik çoklu görüş alanı veya dikişli görüntü toplama için uzaktan kontrol edilebilir aşama.</td></tr><tr><td>Otomatik Aşama Kontrolörü (XY)</td><td>Önceki Scientific</td><td>Proscan III (H31XYZE-US)</td><td>Otomatik aşamayı bilgisayar ve joystick ile arayüzlemek için</td></tr><tr><td>Şirket</td> içinde <td>yapılan</td> Tampon <td>Şirket içi 145</td><td>mM NaCl, 4 mM KCl, 20 mM HEPES, 10 mM D-glikoz, 1 mM MgCl2 ve 1mM CaCl2, pH 7.3</td></tr><tr><td>Hücre Odasında</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>Attofluor Hücre Odası, A7816</td><td>Ortamı sızdırmaz hale getirmek ve numune ve/veya objektif kontaminasyonu önlemek için cerrahi paslanmaz çelik ve kauçuk bir O-ringden oluşan lamel tutucu</td></tr><tr><td>Uyarma Filtreleri</td><td>Semrock Inc.</td><td>TBP01-378/16</td><td>Merkez dalga boyu aralığı (340-378 nm), Bant genişliği (Minimum 16 nm, nominal FWHM 20 nm), Kırılma indisi (1.88)</td></tr><tr><td></td><td>Semrock Inc.</td><td>TBP01-402/16</td><td>Merkez dalga boyu aralığı (360-400 nm), Bant genişliği (Minimum 16 nm, nominal FWHM 20 nm), Kırılma indisi (1.8)</td></tr><tr><td></td><td>Semrock Inc.</td><td>TBP01-449/15</td><td>Merkez dalga boyu aralığı (400-448.8 nm), Bant genişliği (Minimum 15 nm, nominal FWHM 20 nm), Kırılma indisi (1.8)</td></tr><tr><td></td><td>Semrock Inc.</td><td>TBP01-501/15</td><td>Merkez dalga boyu aralığı (448.8-501.5 nm), Bant genişliği (Minimum 15 nm, nominal FWHM 20 nm), Kırılma indisi (1.84)</td></tr><tr><td></td><td>Semrock Inc.</td><td>TBP01-561/14</td><td>Merkez dalga boyu aralığı (501.5-561 nm), Bant Genişliği (Minimum 14 nm, nominal FWHM 20 nm), Kırılma indisi (1.83)</td></tr><tr><td>Floresan Filtre Küpü Dikroik Işın Ayırıcı</td><td>Semrock Inc.</td><td>FF495-Di03</td><td>495 nm'de uyarma ve emisyon ışığını ayırır (350-488 nm arasında %>98 yansıma, 502-950 nm arasında %>93 iletim), Filtre etkili indeksi (1.78)</td></tr><tr><td>Floresan Filtre Küpü Uzun Geçiren Filtre</td><td>Semrock Inc.</td><td>FF01 496/LP-25</td><td>496 nm'den daha uzun ışık geçişine izin verir (503.2-1100 nm arasında ortalama %>93 iletim), Kırılma indisi (1.86)</td></tr><tr><td>GCaMP Probu</td><td>Addgene</td><td>G-CaMP3; Plazmid #22692</td><td>Tek dalga boylu GCaMP2 tabanlı genetik olarak kodlanmış kalsiyum indikatörü</td></tr><tr><td>Entegre Küre</td><td>Okyanus Optiği</td><td>FOIS-1</td><td>Geniş açılı aydınlatmanın doğru ölçümü için kullanılır</td></tr><tr><td>Ters Floresan Mikroskobu</td><td>Nikon Instruments</td><td>TE2000</td><td>Ters çevrilmiş mikroskoplar, ortam ve/veya doku katmanlarına nüfuz etmeye gerek kalmadan numunenin doğrudan uyarılmasına izin verir.</td></tr><tr><td>Mitotracker Green FM</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>M7514</td><td>Etiketler mitokondri</td></tr><tr><td>NIST-İzlenebilir Kalibrasyon Lambası</td><td>Okyanus Optiği</td><td>LS-1-CAL-INT</td><td>Standart olarak kullanım için bilinen bir spektruma sahip bir lamba</td></tr><tr><td>NIST-İzlenebilir Floresein</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>F36915</td><td>Sistemin uygun spektral tepkisini doğrulamak için</td></tr><tr><td>NucBlue</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>R37605</td><td>Etiketler hücre çekirdeği</td></tr><tr><td>Amaç (10X)</td><td>Nikon Instruments</td><td>Plan Apo &lambda; 10X/0.45 &infin;/0.17 MRD00105</td><td>Geniş görüş alanları için kullanışlıdır</td></tr><tr><td>Objektif (20X)</td><td>Nikon Instruments</td><td>Plan Apo &lambda; 20X/0.75 &infin;/0.17 MRD00205</td><td>En sık doku örnekleri için kullanılır</td></tr><tr><td>Objektif (60X)</td><td>Nikon Instruments</td><td>Plan Apo VC 60X/1.2 WI &infin;/0.15-0.18 WD 0.27</td><td>En sık hücre örnekleri için kullanılır</td></tr><tr><td>sCMOS Kamera</td><td>Fotometrisi</td><td>Prime 95B (Rev A8-062802018)</td>Yüksek <td>hassasiyetli dijital görüntüler elde etmek için</td></tr><tr><td>Spektrometre</td>, <td>Okyanus Optiği</td><td>QE65000</td><td>Uyarma tarama spektral sisteminin spektral çıktısını ölçmek için kullanılır</td></tr>, <tr><td>Ayarlanabilir Filtre Değiştirici</td>, <td>Sutter Cihazı</td>, <td>Lambda VF-5</td>, <td>Otomatik uyarma filtresi ayarı için motorlu ünite/ anahtarlama</td></tr><tr><td>Xenon Ark Lambası</td><td>Sunoptik Teknolojileri</td><td>Titan 300HP Işık Kaynağı</td><td>Nispeten düzgün spektral çıkışa sahip ışık kaynağı</td></tr></tbody></table>

floresan sinyallerini etkin bir Şekilde ayırt etmek için uyarma-tarama hiperspektral görüntüleme mikroskobu

Excitation-Scanning Hyperspectral Imaging Microscopy to Efficiently Discriminate Fluorescence Signals

Çeşitli teknikler, fenomenleri tanımlamak veya incelemek veya işlevleri açıklamak için floresan sinyallerinin algılanmasına dayanır. Bu floresan sinyallerinin ayrılması, floresan kaynaklarının birbirlerinden, arka plan sinyalleri ve otofloresanlardan ayrılabildiği hiperspektral görüntülemenin ortaya çıkmasına kadar hantal olduğu kanıtlanmıştır (spektral bilgileri ne kadar dır? imzalar). Ancak, geleneksel, emisyon taramalı hiperspektral görüntüleme, hem uyarma hem de emisyon ışığının gerekli filtrelenmesi nedeniyle yavaş edinim süreleri ve düşük sinyal-gürültü oranlarından muzdariptir. Daha önce uyarma taramalı hiperspektral görüntülemenin gerekli kazanım süresini kısaltırken aynı zamanda elde edilen verilerin sinyal-gürültü oranını artırdığı gösterilmiştir. Ticari olarak kullanılabilen ekipmanı kullanan bu protokol, tek bir örnekteki birkaç floresan kaynaktan gelen sinyallerin ayrılması için uyarma taramalı hiperspektral görüntüleme mikroskobu sisteminin nasıl monte edilebildiğini, kalibre edilebildiğini ve kullanılacağını açıklar. Hücrelerin ve dokuların mikroskobik görüntülemesi için son derece geçerli olmakla birlikte, bu teknik, uyarma dalga boylarını değiştirmek mümkün olan floresan kullanan her türlü deney için de yararlı olabilir: kimyasal görüntüleme, çevre uygulamaları, göz bakımı, gıda bilimi, adli tıp, tıp bilimi ve mineraloji.

Bu protokolden birkaç önemli adım, hem doğru hem de görüntüleme ve spektral eserlerden yoksun veri toplanmasını sağlamak için gereklidir. Bu adımları atlamak, önemli görünen ancak başka bir spektral görüntüleme sistemiyle doğrulanamayan veya çoğaltılamayan verilere neden olabilir ve böylece söz konusu verilerle elde edilen sonuçlar etkin bir şekilde geçersiz kılınabilir. Bu önemli adımlar arasında baş uygun spektral çıkış düzeltme (bölüm 3). Düzeltme faktörü, tunable uyarma sisteminin spe...

Spektral görüntüleme, birden fazla floresan sinyalin tek bir örnekte tanımlanması ve ayrılması için güvenilir bir çözüm haline gelmiştir ve ilgi sinyallerini arka plandan veya otofloresanstan kolayca ayırt edebilir. Uyarma-tarama hiperspektral görüntüleme aynı anda sinyal-gürültü oranını artırırken gerekli görüntü edinme süresini azaltarak bu tekniği geliştirir.

Floresan Sinyallerini Etkin Bir Şekilde Ayırt Etmek Için Uyarma-Tarama hiperspektral görüntüleme mikroskobu

Several techniques rely on detection of fluorescence signals to identify or study phenomena or to elucidate functions. Separation of these fluorescence ...

Bu protokol, tek bir örnekte birkaç floresan sinyali ayırmak için kullanılabilecek bir yöntemi tanımladığı için önemlidir. Geleneksel yöntemlerle karşılaştırıldığında, uyarma-tarama deneyin hızını artırabilir ve verilerin hassasiyetini artırabilir. Bu yöntem, süper süreklilik lazer gibi farklı aydınlatma kaynakları kullanılarak dönen disk veya lazer tarama konfokal mikroskop sistemleri için uygulanabilir.Uyarma-tarama, spektral görüntüleme mikroskopisi yaparken, her floresan etiketin uyarma zirvesinin farklı bir dalga boyunda oluşunun olup olmadığını kontrol etmek önemlidir. Başlamak için, metin protokolünde açıklandığı gibi ters floresan mikroskobu ve kamerayı ayarlayın. Sonra sahnede örnek yükleyin.Micromanager ana penceresinin açılır menüsünden, ilk örnek görüntüleme için 475 nanometre seçin. Ardından pozlamanın yanındaki kutuya çift tıklayın ve pozlama süresini 100 milisaniye olarak ayarlamak için 100 girin. Son olarak, örneği görüntülemek için canlı'yı tıklatın.Şimdi Otomatik'e tıklayın. Minimum ve maksimum değerleri anlamlı, görsel aralıklara getirmek için otomatik yoğunluk izleme aralığı düğmesi. Ardından, numuneyi odaklamak için mikroskobun odak tonlarını kullanın.Odaklandıktan sonra, numunenin konumunu, kenarının görüş alanının merkezinde olacak şekilde ayarlayın. O zaman odakta ince ayar. Görüntüdeki kenar özellikleri keskin göründüğünde örnek odaktadır.Şimdi, çok boyutlu edinme aracını açın. Menüde, yük düğmesini tıklatın ve spektral edinimi için uygun bir dalga boyu aralığı içeren önceden ayarlanmış bir ayar seçin. Edinme ayarları onaylandıktan sonra, numunenin boş bir bölgesine geçin ve daha sonra çıkarma için kullanılacak arka plan ve gürültü içeren bir spektral görüntü yığını toplamak için satın alın'ı tıklatın.Ardından, en parlak bölgeleri bulmak için örnek hakkında hareket edin. Örneklerin, numunenin kenarından uzakta daha yoğun floresan olması muhtemeldir. En parlak bölge bulunduğunda, tek bir görüntü yığını alın.Elde edilen görüntüyü Görüntü J'ye yükleyin ve hiçbir dalga boylarının aşırı pozlanmış piksel içermediğini doğrulamak için Image J'nin ölçüm işlevini kullanın. Aşırı pozlama nedeniyle daha az pozlama süresi gerekiyorsa, arka plan görüntüsü de yeni bir pozlama süresi ile geri alınmalıdır. Görüntülerden herhangi birinin kameranın yukarı algılama sınırını içerdiği tespit edilirse, spektral aralıkboyunca maksimum sinyalin kameranın dinamik aralığını aşmadığından emin olmak için spektral tarayın pozlama süresini ayarlayın.Şimdi belirlenen uygun bir pozlama süresiyle, sahneye etiketlenmemiş bir örnek yerleştirin. Altta yatan bir otofloresence olup olmadığını belirlemek için etiketlenmemiş örnekten spektral görüntü verilerini edinin. Ardından, sahneye tek etiketli bir örnek yerleştirin.Spektral kitaplık oluşturmak için spektral denetimolarak kullanmak üzere tek etiketli örneklerin her birinden spektral görüntü verileri edinin. Aynı dalga boyu aralığı pozlama süresi ve kamera ayarlarını kullanarak her kontrol numunesi için taramaya devam edin. Ardından, mikroskoba deneysel numuneiçeren bir slayt yerleştirin.Hücreleri uygun şekilde etiketlemiş bir görünüm alanı seçin ve belirlenen edinme ayarlarını kullanarak örnekten spektral görüntü verilerini elde edin. Arka plan spektrumunu örnek görüntüden çıkararak ve görüntüyü düzeltme katsayısıyla çarparak görüntüleri düz bir spektral yanıta doğru layın. Burada, görüntüleri hızlı bir şekilde işlemek için bir MATLAB komut dosyası kullanılır.Sonra, spektral kitaplığı oluşturun. En iyi sonuçlar için, hangi dalga boyu bandının en yoğun değere sahip olduğunu belirleyerek ve her dalga boyu bandındaki ölçümü bu maksimum değere bölerek her bir uç üyeyi en yüksek yoğunluktaki dalga boyu bandına normalleştirin. Sonra spektral verileri dat dosyası olarak kaydedin.Tamamlandığında, spektral görüntü verilerini karıştırın. Karıştırmayı karıştırmaadım, her floresan etiket için bir bolluk görüntüsü oluşturur, burada bolluk, görüntüdeki göreli floresan sinyal miktarıdır. Ardından, saf bileşenlerin dağıtımını görsel olarak incelemek için her karışık olmayan görüntüyü açın.Hata görüntüsünün büyüklüğünü karışık olmayan görüntülerle karşılaştırın. Hata görüntüsünün büyüklüğü karışık olmayan bolluk görüntülerine benziyorsa, spektral görüntü verilerindeki sinyaller doğru bir şekilde muhasebelemeyebilir. Son olarak, hata görüntüsünü karışık olmayan görüntülerle karşılaştırarak tanımlanamayan artık yapılar olup olmadığını denetleyin.Doğru yapıldığında, spektral karıştırma işlemi, spektral görüntü yığınının her floresan etiketinden ilgili katkılara ayrılmasını sağlar. Burada, hava yolu düz kas hücre otofloresans vurgulayan bireysel görüntüler ile karışık olmayan bir spektral görüntü seti, bir GCaMP prob ve bir mitokondriyal etiket. Hücrelerin nükleer ve perinükleer bölgeleri ile ilişkili yüksek hata bu bölgelerin ölçülen spektrumları iyi spektral kütüphanede spektrumlar tarafından hesap olmadığını gösteren vardır.Aynı zamanda otofloresan etiketli hücrelerden toplanan saf spektrumlar büyük olasılıkla saf bileşen için spektral profili kontamine olacaktır. Burada, bir otofloresan ile kontamine saf spektrumile karıştırma farkı görebilirsiniz, ölçekli çıkarma sonra düzeltilmiş saf spektrumları karşı. Hassas numunelerin görüntülenmesinde uygun veri toplama, arka plan ve yeniden görüntülenebilen kontrollerden farklı olarak tek bir görüntüleme seansı sağlanabilir.Uygun donanım ve edinme ayarlarının mümkün olduğunca önceden belirlendiğinden emin olun. Bir sonraki adım olarak, bu sistem kullanılarak elde edilen hızlandırılmış verilerden oluşturulan videolar, ikinci haberci sinyali yerelleştirme gibi zaman içinde gizli konumlardaki floresan kaynakları izlemek için kullanılabilir. Göze maruz kalmaktan kaçınmak için güçlü ışık kaynaklarını kullanırken dikkatli olalım.Ayrıca, biyolojik etiketleri kullanırken uygun eldiven giymek emin olun.

excitation-scanning-hyperspectral-imaging-microscopy-to-efficiently

Research

JoVE Journal

Engineering

Mühendislik

Hücreler içinde birden fazla floresan etiketli molekül türünü aynı anda görüntülemek için floresan fotoaktivasyon lokalizasyon mikroskobunun (FPALM) kullanımını gösteriyoruz. Açıklanan teknikler, tek hücreler içinde onlarca nanometrelik bir hassasiyetle binlerce ila yüz binlerce ayrı floresan etiketli proteinin lokalizasyonunu sağlar.

Floresan Fotoaktivasyon Lokalizasyon Mikroskobu ile Biyolojik Yapıların Eş Zamanlı Çok Renkli Görüntülenmesi

Amiloid birikimi farklı hastalıklar özelliğidir ve birçok farklı organları afflicts. Bu kağıt Işıksaçan konjuge oligothiophene floresan Floresans mikroskobu teknikleri ile birlikte boyama uygulaması açıklanır. Bu boyama yöntemi algılama ve klinik ve bilimsel kurulumları protein toplamları keşfi için güçlü bir araç temsil eder.

Amiloid doku Imaging ile Işıksaçan konjuge Oligothiophenes Hyperspectral tarafından Confocal mikroskobu ve floresan ömür boyu görüntüleme lekeli

Burada geleneksel epi-floresan görüntüleme, tek molekül algılama tabanlı süper kararlılık düşsel ve çok renkli tek molekül algılama birleştiren, bir tümleşik mikroskobu sistem inşaat pratik bir rehber mevcut de dahil olmak üzere tek molekül floresans rezonans enerji görüntüleme, maliyet-etkin bir şekilde bir set-up içine aktarın.

Çoklu görüntüleme modları bir floresan mikroskop ile iletken

Burada, parlak hiperspektral görüntüleme verilerini elde etmek ve hiperspektral görüntüleme sistemi kullanarak lantanit bazlı tek kristallerin optik asiztropi özelliklerini analiz etmek için bir protokol sıyoruz.

Lantanit Bazlı Moleküler Tek Kristallerde Optik Asiztropi Çalışma Aracı Olarak Hiperspektral Görüntüleme

Bu makalede, altın nanopartiküllerin ve kanser hücrelerinin hızlı hiperspektral görüntülenmesini sağlayan spektral odaklama modülü ve çift çıkışlı darbe lazerinin entegrasyonu sunulmaktadır. Bu çalışma, multimodal doğrusal olmayan optik tekniklerin ayrıntılarını standart bir lazer tarama mikroskobu üzerinde göstermeyi amaçlamaktadır.

Multimodal Doğrusal Olmayan Optik Mikroskopi Kullanılarak Nanopartiküllerin Hücresel Alımının Biyomoleküler Görüntülenmesi

Bu makale, aynı mikroskop platformuna entegre edilmiş uyarılmış Raman saçılmasının (SRS) ve tutarlı anti-Stokes Raman saçılmasının (CARS) çözünürlüğünü, hassasiyetini ve görüntüleme kontrastlarını doğrudan karşılaştırmaktadır. Sonuçlar, CARS'ın daha iyi bir uzamsal çözünürlüğe sahip olduğunu, SRS'nin daha iyi kontrastlar ve spektral çözünürlük sağladığını ve her iki yöntemin de benzer hassasiyete sahip olduğunu göstermektedir.

Kimyasal Görüntüleme için Hiperspektral Uyarılmış Raman Saçılması ve Tutarlı Anti-Stokes Raman Saçılma Mikroskobunun Doğrudan Karşılaştırılması

Geniş bantlı titreşimsel toplam frekans üretimi (VSFG) görüntülerinin yanı sıra parlak alan, ikinci harmonik üretim (SHG) görüntüleme modaliteleri elde etmek için çok modlu, hızlı bir hiperspektral görüntüleme çerçevesi geliştirilmiştir. Kızılötesi frekansın moleküler titreşimlerle rezonans olması nedeniyle, simetriye izin verilen numunelerin mikroskobik yapısal ve mezoskopik morfoloji bilgisi ortaya çıkar.

Çizgi Taramalı Titreşimli Toplam Frekans Oluşturma Mikroskobu Kullanılarak Multimodal Doğrusal Olmayan Hiperspektral Kimyasal Görüntüleme

Etiketsiz optik görüntüleme modalitelerini birleştiren çok modlu bir platform kullanarak, hücresel dinamikleri ve metabolizmayı görselleştirmek ve ölçmek için bir protokol geliştirdik. Çoklu foton floresansı, ikinci harmonik üretimi ve uyarılmış Raman saçılma mikroskobu yoluyla görüntüleme yoluyla, hücresel ve moleküler çevreye bütünsel bir genel bakış oluşturabiliriz.

Hücresel metabolizmayı incelemek için multimodal optik görüntüleme platformu

Spektral Yinelemeli Ağartma Çoklamayı Genişletir (IBEX), spesifik olmayan bağlanmayı en aza indirmek için heparin blokajı ekleyerek ve otofloresansı bastırmak için hesaplamalı karıştırma ile spektral algılamadan yararlanarak temel IBEX tekniğini temel alır. Bu yaklaşım, arka plan kaynaklarını azaltırken görüntü elde etmeyi hızlandırır ve sağlam, çok yönlü, yüksek parametreli uzamsal proteomik analizlere olanak tanır.

Spesifik Olmayan Doku Floresansını En Aza İndirmek için Spektral Konfokal Mikroskopi Kullanılarak Yüksek Pleks Görüntüleme

Çok bölmeli dinamik fantom, hiperpolarize mıknatıs rezonans ajanları kullanılarak metabolik çalışmalar için ilgilenilen bazı biyolojiyi simüle etmek için kullanılır.

Hiperpolarize Manyetik Rezonans Ajanlar Araştırmaları bir Multi-bölmesi Dinamik Tek Enzim Phantom Kullanımı

Öğrenin, uyarma-tarama hiperspektral görüntüleme ile tek örnekteki çoklu floresan sinyallerini ayırt etmeyi. Süperkontinuum lazer kullanarak deney hızını artırın ve veri duyarlılığını geliştirin.

Floresan Sinyallerini Etkin Bir Şekilde Ayırt Etmek Için Uyarma-Tarama hiperspektral görüntüleme mikroskobu

Daha fazla video keşfet