Name: Fareler içinde Apical periodontitis İndükleme (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-08-06T13:30:00.000+00:00
Duration: 10 min 26 s
Description: Öğrenin farelerde apikal periodontitis indüksiyonu için cerrahi protokolü. Bu yöntem, diş etrafındaki kemik rezorpsiyonu ve bağışıklık yanıtlarını in vivo analiz etmeyi sağlar. Mikro-CT ve histoloji ile doku hasarını değerlendirin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dr. kanlı Heyman 'a hayvan konumlandırma, Raphael Lieber ile birlikte mikro-CT analizinde yardım için ve Prof. Andiara de Rossi Daldegan 'ın deney öncesi konusunda tavsiyelerde bulunmasını istiyoruz. Biz de kritik okuma ve düzenleme için Dr Sidney Cohen kabul etmek istiyorum.
Bu çalışma, Dr. ızador ı. Cabakoff araştırma Bağış Fonu 'ndan MK ve IA 'ya bir hibe ve Israil bilim ve Teknoloji Bakanlığı 'ndan ÖRNEĞIN Yitzhak Navon bursu ile destekleniyordu.

Burada açıklanan tüm yöntemler, Ibranice Üniversitesi Kurumsal hayvan bakımı ve kullanım Komitesi (ıAYUC) tarafından onaylanmıştır (etik No. MD-17-15093-5).
1. hayvan anestezi ve konumlandırma
<ol><li>Aşağıda açıklandığı gibi steril çözümler hazırlayın.<ol>
<li>Hazırlamak 5 mL 7 mg/mL ketamin ve 0,09 mg/mL Medetomidin fosfat tampon solüsyonu seyreltilmiş (PBS)/Saline.</li>
		<li>PBS/Saline (5 mL 'Lik bir miktar hazırlamak için tavsiye edilir) seyreltilmiş atipamezol (0,4 mg/mL) steril bir çözelti hazırlayın.</li>
		<li>Hazırlamak mepivacaine steril bir çözüm (7,5 mg/mL) Yerel anestezi için PBS/Saline seyreltilmiş (mepivacaine bir sağlanan şişe 7,2 mL bir stok için yeterlidir).</li>
	</ol>
</li>
	<li>Deneme için 6-8 hafta eski kadın C57BL/6 fareler kullanın. Hayvanları belirli bir patojen ücretsiz (SPF) hayvan ünitesinde, standart su ve gıda tesisi tarafından sağlanan ve hayvan besleme reklam libitum ile tutun.</li>
	<li>Fare tartmak ve intraperitoneal enjekte (IP) ağırlığı her gram için 10 μL bir hacim. Örneğin, 20 gram ağırlığında bir fare için, 200 μL ketamin/Medetomidin çözeltisi enjekte edilir. Bu son konsantrasyon verecektir (70 mg/kg) ketamin ve (0,9 mg/kg) Medetomidine Her hayvan için.</li>
	<li>Prosedür sırasında kuruluk nedeniyle göz ülserasyonu önlemek için, Kloramphenicol (% 5) içeren göz merhem uygulayın Onlar anestezi altında iken hayvanların gözleri üzerinde. Onlar anestezize iken bir lamba ile hayvanları sıcak tutun. Pedal refleks kontrol ederek anestezi derinliğini kontrol edin (firma ayak tutam performans).</li>
	<li>Fare anestezi sonra, sağ tarafında (sağ el araştırmacı için) kapalı hücre Ekstrüze Polistiren köpük yüzeyi üzerinde döşeme ve bant kullanarak yüzeye ayak eklemek fare konumlandırın.</li>
	<li>Kapalı hücre ekstrüde Polistiren köpük yüzeyine sabitlenmiş uzun iğneler ile yerinde tutulan (üst kesici ve 1 alt kesici için 1) kesici taşları etrafında küçük kauçuk bantları kullanarak ağzını açın.</li>
	<li>Yüzeye bantlanmış forseps kullanarak sağ yanağını geri çekin. Sabit durumda kapalı olan forseps kullanın.</li>
	<li>Uygun büyütme (bir dürbün mikroskop veya klinik mikroskop) ve ışık kullanarak, mandibular Molars erişim sağlayan rahat bir çalışma konumda fare ile yüzeyi yerleştirin.</li>
	<li>Forseps veya diş spatula kullanarak dili geri çekin ve ilk mandibular molar bitişik Mukozit kat içine 27 Gauge iğne ile lokal anestezi enjekte. 25-50 μL yeterlidir. Enjeksiyon yerinde dokuların şişmesi görüntülenmesi gerekir.</li>
</ol>2. Selüloz pozlama
<ol><li>Bir 1/4 yuvarlak diş Burr kullanın, ya da aynı boyutta elmas Burr (uzun bir şaft önerilir) dakika başına 800 mermi hızı (rpm), herhangi bir uygun diş motoru bağlı (örneğin bir otomatik tork azaltma (ATR) motor).</li>
	<li>İlk sağ mandibular molar oklüzal parçası üzerinde sondaj hamuru boynuzları dentin aracılığıyla görünür kadar. aşırı Isıtma alanı önlemek için motorun kısa patlamaları kullanın.</li>
	<li>Bir K-dosya veya H-dosya #8 veya hamuru delmek ve onları kapsayan dentin kırarak Pulp boynuzları (Mesial ve distal) içine dosya eklemek için #10 kullanın. Dosyalar autoclave tarafından sterilize edilir.</li>
	<li>Dosyaları ile açıklıkları genişletirken, mümkün olduğunca derin hamuru içinde dosyaları ile çalışmaya devam edin. Genellikle selüloz görünür kanama olacaktır.</li>
	<li>Deney sırasında ağrıyı azaltmak için, dişin keskin kenarlarını Burr ile yuvarlamak ve dişini oklüzyondan çıkarmak için emin olun. Bir mikrofırça ile prosedür sırasında temiz enkaz.</li>
	<li>Kontralateral diş (sol ilk mandibular molar) bir kontrol olarak bırakın.</li>
</ol>3. klinik prosedürün sonu
<ol><li>Fare sabitleme durumundan bırakın ve Atipamezole IP enjekte (her vücut ağırlığı gram için 10 μL. Bu son doz verecektir (4 mg/kg) Atipamezole.</li>
	<li>PBS/Saline (0,05 mg/kg) IP (prosedür gününde 3 mL 'Lik bir miktar hazırlamak için tavsiye edilir) seyreltilmiş buprenorfik enjekte. Ağrı kesici neden gerekli olduğunu açıklamak için tartışma konusuna bakın.</li>
	<li>Hayvanlar onları ayrılmadan önce anestezi kurtarmak emin olun. Onlar diş ağrısı nedeniyle sert gıda yeme aciz olabilir çünkü onlara yumuşak yiyecek verin.</li>
</ol>4. prosedür takip sonrası (42 gün)
<ol><li>Prosedürden sonra ilk 3 gün için, hayvanları tartmak ve Buprenorfik enjekte (0,1 mg/kg) IP günde bir kez (6mL bir miktar hazırlamak için önerilir).</li>
	<li>Deneme süresi boyunca (42 gün inflamasyon oluşturur) kilo ve genel davranışsal değerlendirme 2-3 kez bir hafta hayvanları izlemek.</li>
	<li>Takip süresi boyunca hayvanlara yumuşak yiyecekler sunun. Suyu su ile ıslak ve kafesin katında bir petri-çanak koydu.</li>
</ol>5. deney sonlandırma ve analiz
<ol><li>Zaman 42 gün11 takip tamamlandığında, anestezize hayvanlar IP ile ketamin/xylazine bir konsantrasyonda 106,25 mg/kg ketamin, ve 75 mg/kg xylazine (bir stok çözüm 42,5 mg/ml ketamin, ve 1,5 mg/ml xylazine toplam hacminde 2 ml Önerilen) ve servikal dislocation preform. Not: inflamasyonu değerlendirmek için olası analizler için farklı seçenekler vardır20,21. Burada mikro-CT ve histolojik boyama ile dokusunun Analizi tarif edilecektir.</li>
	<li>Ötenazi sonra, 3 azı da dahil olmak üzere çenenin bir kısmını kesmek için cerrahi makas ve forseps kullanın (ayrı her yan-tedavi ve tedavi olmayan kontrol için). Forseps kullanarak mümkün olduğunca yumuşak doku kadar Peel, çoğunlukla kemik ve diş numunenin üzerinde bırakarak.</li>
	<li>Doku PBS kısaca durulayın ve sonra civarında formaldehite koymak (PFA) 4% (PBS seyreltilmiş) için 24-48 saat sabitleme için. DIKKAT: PFA 'yı kimyasal bir kaput içinde ve malzeme güvenliği veri belgesi (MSDS) yönergelerine göre kullanın.</li>
	<li>24-48 saat sonra PFA 'yı yıkamak için PBS 3x ile durulayın.</li>
	<li>Mikro-CT<ol>
<li>Mikro-CT analizi için, hasat edilen dokulara (yaklaşık 4 mm x 5 MMX 1 mm boyutlarında 3 Molars dahil olmak üzere) bir Micro-CT tarayıcısını alın, onları 1,5 ml 'lik PBS odaklı 12 mm çapında bir tüpün içine yerleştirin, böylece bukkal veya dilli yüzeyler Diş ve kök tüpün altına paralel döşenmesi. Sünger ile numune arasında ayrı, ve esnek film ile tüp üst kapak.</li>
		<li>Tarama panelini açın ve ölçüm numarasını seçin. Aşağıdaki parametrelerle kontrol dosyasını seçin: 70 kV enerji, 114 μA yoğunluğu ve 6 μm3 Voksel boyutu çözünürlüğü.</li>
		<li>Scout görünümünetıklayın ve görüntü göründüğünde, Referans satırı 'na tıklayın ve numunelerin tarama için alanını işaretleyin. Her örnek sonra Tarama Ekle'yi tıklatın. Örnekleri işaretleme bittiğinde, görev listesine gidin ve etkileşimi Başlat görevleri'ni seçin. Not: aynı numune daha sonra Histoloji için kullanılabilir. CT-Scan sırasında kuruması önemlidir.</li>
	</ol></li>
	<li>Mikro-CT hizalama ve analiz için uygun bir bilgisayar programı kullanın.<ol><li>Mikroct değerlendirmesinde XY düzleminde örnek açın. Her örnekteki hizalama için üç nokta seçin: Mezial apikal konstriksiyon-koordinat sisteminin kökeni tanımlar. Mezial kanalın koronal parçası-Z ekseninde bir nokta tanımlar. Distal apikal konstriksiyon-XZ düzleminde bir nokta tanımlar.</li>
		<li>Sol paneldeki ölçüm aracını kullanın ve her noktaya ulaşan bir çizgi çizin. Her üç noktayı, sağ panelde göründüğü gibi X, Y & Z değerine göre tanımlayın.</li>
		<li>Μct değerlendirmealtında görev seçerek örnek Ilgi alanı tanımlayın ve 3B değerlendirme'i tıklatın. Bir dikdörtgen ve eksen başına ölçümlendirmelere sahip bir pencere ekranda görünecektir. Dikdörtgenin boyutlarını, farenin orta düğmesiyle köşelere tıklayarak XY eksenindeki ilgi alanına sığacak şekilde eşleştirin. Z ekseninde, VOI Başlat'ın altında yer alan ilk dilim sayısını ve ilk dilimdeki z karesi altında yer alan son dilim sayısına kadar olan dilimler sayısını ekleyerek z ekseni içindeki boyutları seçin.</li>
		<li>Oturum Yöneticisialtında uygulamalar ' ı tıklatın ve dectermseçin. Bir pencerenin açılması için birkaç saniye bekleyin ve ardından aşağıdaki yönergelere göre aşağıda açıklanan eğimli komut dosyasının beş adımını yazın (satırlar arasında ENTER'a tıklayın): ıpl isq_to_aim aim1</li>
		<li>ISQ (ilgi dosyası) adını kopyalayın: oturum Yöneticisi altında Görünümler 'ı seçin ve microctdata'yı tıklatın. Üzerinde çalışan dosyayı bulun ve dosyaya orta tıklayın. Sonra orta tıklayın geri DECterm penceresinde.</li>
		<li>Faiz bölgesini seçerken VOI altında belirlenen X, Y & Z değerlerini (aralarında bir boşluk) girin.</li>
		<li>İlgi bölgesini seçerken Dim altında belirlenen X, Y & Z değerlerini (aralarında bir boşluk) girin.</li>
		<li>Bir ileti almaya kadar bekleyin: ISQ tamamlanmış amaç için. (adım II-hizalama): (z) aim1 aim2</li>
		<li>Koordinat sisteminin kökeni için belirlenen X, Y & Z değerlerini (aralarında bir boşluk) girin.</li>
		<li>Z eksenindeki nokta için belirlenen X, Y & Z değerlerini (aralarında bir boşluk) girin.</li>
		<li>XZ düzleminde nokta için belirlenen X, Y & Z değerlerini (aralarında bir boşluk) girin.</li>
		<li>Bir mesaj almadan bekleyin: "align_Z tamamlandı" (adım III-başlık): Üstbilgi aim2 0 0 0 0 0 0</li>
		<li>ENTER'a tıklayın. (adım IV-yeniden hedef ISQiçin dosya dönüştürme): toisq aim2</li>
		<li>ISQ (ilgi dosyası) adını kopyalayın: oturum Yöneticisi altında Görünümler 'ı seçin ve MicroCT verileri'ni tıklatın. Üzerinde çalıştığınız dosyayı bulun ve dosyaya orta tıklayın. Sonra orta tıklayın geri DECterm penceresinde. Sil ("Backspace" kullanarak) ". ISQ "dosyasının sonunda ve yazma:" _new. ISQ "hizalanmış dosyayı tanımak için.</li>
		<li>ENTER | girin.</li>
		<li>Bir ileti almadan bekleyin: "toisq_from_aim tamamlandı" (adım V-Flip): ISQ A</li>
		<li>Yeni ISQ (ilgi dosyası) adını kopyalayın: oturum Yöneticisi altında Görünümler 'i seçin ve MicroCT verileri'ni tıklatın. Üzerinde çalışan dosyayı bulun ve dosyaya orta tıklayın. Sonra orta tıklayın geri DECterm penceresinde.</li>
		<li>ENTER | girin. Bir ileti almak için bekleyin: "isq_to_aim tamamlandı" Flip A Acar Zx bir mesaj almak için bekleyin: "flip_aim Completed" Kaynak Acar</li>
		<li>Yeni ISQ adını kopyalayın: oturum Yöneticisi altında Görünümler 'i seçin ve MicroCT verileri'ni tıklatın. Üzerinde çalışan dosyayı bulun ve dosyaya orta tıklayın. Sonra orta tıklayın geri DECterm penceresinde. Sil ("Backspace" kullanarak) ". ISQ "dosyasının sonunda ve yazma:" _flip. ISQ "hizalanmış dosyayı tanımak için.</li>
		<li>Bir ileti almadan bekleyin: "from_aim_to_isq tamamlandı"</li>
	</ol></li>
	<li>Şekillendirme<ol>
<li>Dişin yaklaşık ortasını temsil eden dilimi seçin, her iki kanalın koronal hamuru, radiküler hamuru ve her iki apikal foramat sunulmaktadır.</li>
		<li>Sol üst kontur paneline tıklayarak orta dilimdeki ilginin konturunu el ile işaretle-distal kökünün distal noktasından başlayarak, mezial kök ekinin mezial sınırında, radyopak apikal alanına Cor, apikal sınırını işaretleyerek , mezial kökünün distal sınırını ve distal kökünün mezial sınırını furkasyon bölgesi aracılığıyla takiben (bkz. Şekil 3 II, IV).</li>
		<li>Bu konturu kopyalayın (CTRL + C, CTRL + V) ve orta dilimin her iki tarafında konumlandırılmış 5 dilime göre ayarlayın.</li>
		<li>Her örnek için işaretlenmiş kontur doku hacmi hesaplamak için görev μct değerlendirmealtında seçin ve 3B değerlendirmetıklayın. 3B değerlendirme penceresinde tıklayın yakın görev seçin ve doku hacmi (TV) hesaplamak için bir filtre seçin.</li>
	</ol></li>
	<li>Histoloji<ol>
<li>Mikro-CT tarayıcıdan dokuların kaldırılmasından sonra, 1 ml etilendiamintetraasetik asit (EDTA) 0,5 M pH 8,0 ile bir mikrosantrifüjle tüpte her numuneyi koyarak dokulara kireç koyma 10 gün. EDTA çözümünü her 3 günde bir değiştirin.</li>
		<li>Dehidrasyon: histolojik kasetleri örnekleri koymak, ve artan etanol konsantrasyonları içine, bir saat her, aşağıdaki gibi: 70% etanol (Bu noktada süreç birkaç hafta boyunca durdurulabilir, sürece örnekleri etanol tutulur), 90% etanol 2x, 100% etanol 2x, ksilen 2x (dikkat: bir kimyasal kaput içinde ksile kullanın, ve onun MSDS yönergelerine göre).<ol>
<li>Kasetleri sıvı parafine (60 °C) aktarabilir ve Ksilin Buharlık için bir gecede kimyasal kaput bırakın.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Engelleme: numuneleri parafine gömmek için histolojik engelleme makinesini kullanın. Doğru bir konumda onları katıştırmak için dikkatli olun (yani, taç ve kökleri kalıp alt kısmına paralel odaklı olmalıdır, bir şekilde diş "yatıyor") amacıyla sagittal bölümler almak için. Numuneler şimdi bir mikrotome ile kesilmeye hazırdır.</li>
		<li>Bölümleri kesme: doku ilgili kısmına ulaşıncaya kadar ~ 20 μm kalın dilimleri keserek başlayın. Bir kez diş (taç veya kökleri) herhangi bir kısmını tanıma 6 μm bölümlere değiştirin ve önceki bölüme göre kesme açısını değiştirin.<ol>
<li>Örneğin, önceki bölümde taç ancak kökleri dahil, böylece kökleri bıçak daha yakın gelir ve taç geri gider mikrotome bloğunun açısını değiştirmek (diş parçaları blok kendisi üzerinde çıplak bir göz ile tanınabilir).</li>
			<li>Koronal ve radiküler Selüloz ve apikal foramen gibi sagittal bölümler elde edene kadar açısını ayarlamaya devam edin. Bu yönde, mümkün olduğunca çok sayıda dilim olarak kesilmiş, ilgili doku tüm kesilir kadar.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Boyama protokolleri (örn., hemotoxylin ve Eosin boyama (H & e), kahverengi & Brenn boyama, tartrat dirençli asit fosfataz (tuzak) boyama, immünhistokimya), bkz.20,21.</li>
	</ol></li>
</ol>

<ol><li>Azuma, M. M., Samuel, R. O., Gomes-Filho, J. E., Dezan-Junior, E., Cintra, L. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+IL-6+on+apical+periodontitis%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22International+Endodontics+Journal%22%5BJournal%5D)">The role of IL-6 on apical periodontitis: a systematic review.</a> International Endodontics Journal. 47 (7), 615-621 (2014).</li>
<li>Marton, I. J., Kiss, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overlapping+protective+and+destructive+regulatory+pathways+in+apical+periodontitis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Endodontics%22%5BJournal%5D)">Overlapping protective and destructive regulatory pathways in apical periodontitis.</a> Journal of Endodontics. 40 (2), 155-163 (2014).</li>
<li>Graunaite, I., Lodiene, G., Maciulskiene, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+of+apical+periodontitis%3A+a+literature+review%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Oral+and+Maxillofacial+Research%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis of apical periodontitis: a literature review.</a> Journal of Oral and Maxillofacial Research. 2 (4), e1(2012).</li>
<li>Hussein, F. E., Liew, A. K., Ramlee, R. A., Abdullah, D., Chong, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factors+Associated+with+Apical+Periodontitis%3A+A+Multilevel+Analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Endodontics%22%5BJournal%5D)">Factors Associated with Apical Periodontitis: A Multilevel Analysis.</a> Journal of Endodontics. 42 (10), 1441-1445 (2016).</li>
<li>Takahashi, K., MacDonald, D. G., Kinane, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+immunoglobulin-synthesizing+cells+in+human+dental+periapical+lesions+by+in+situ+hybridization+and+immunohistochemistry%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Oral+Pathology+Medicine%22%5BJournal%5D)">Analysis of immunoglobulin-synthesizing cells in human dental periapical lesions by in situ hybridization and immunohistochemistry.</a> Journal of Oral Pathology Medicine. 25 (6), 331-335 (1996).</li>
<li>Lin, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enterococcus+faecalis+lipoteichoic+acid+regulates+macrophages+autophagy+via+PI3K%2FAkt%2FmTOR+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+and+Biophysical+Research+Community%22%5BJournal%5D)">Enterococcus faecalis lipoteichoic acid regulates macrophages autophagy via PI3K/Akt/mTOR pathway.</a> Biochemical and Biophysical Research Community. 498 (4), 1028-1036 (2018).</li>
<li>Wu, Y., Sun, H., Yang, B., Liu, X., Wang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((5-Lipoxygenase+Knockout+Aggravated+Apical+Periodontitis+in+a+Murine+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Dental+Research%22%5BJournal%5D)">5-Lipoxygenase Knockout Aggravated Apical Periodontitis in a Murine Model.</a> Journal of Dental Research. 97 (4), 442-450 (2018).</li>
<li>Barreiros, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunohistochemical+and+mRNA+expression+of+RANK%2C+RANKL%2C+OPG%2C+TLR2+and+MyD88+during+apical+periodontitis+progression+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Oral+Science%22%5BJournal%5D)">Immunohistochemical and mRNA expression of RANK, RANKL, OPG, TLR2 and MyD88 during apical periodontitis progression in mice.</a> Journal of Applied Oral Science. 26, e20170512(2018).</li>
<li>Barreiros, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MMP2+and+MMP9+are+Associated+with+Apical+Periodontitis+Progression+and+Might+be+Modulated+by+TLR2+and+MyD88%5BTitle%5D)+AND+%22Brazillian+Dentistry+Journal%22%5BJournal%5D)">MMP2 and MMP9 are Associated with Apical Periodontitis Progression and Might be Modulated by TLR2 and MyD88.</a> Brazillian Dentistry Journal. 29 (1), 43-47 (2018).</li>
<li>Virtej, A., Papadakou, P., Sasaki, H., Bletsa, A., Berggreen, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((VEGFR-2+reduces+while+combined+VEGFR-2+and+-3+signaling+increases+inflammation+in+apical+periodontitis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Oral+Microbiology%22%5BJournal%5D)">VEGFR-2 reduces while combined VEGFR-2 and -3 signaling increases inflammation in apical periodontitis.</a> Journal of Oral Microbiology. 8, 32433(2016).</li>
<li>De Rossi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cementocytes+Express+Receptor+Activator+of+the+Nuclear+Factor+Kappa-B+Ligand+in+Response+to+Endodontic+Infection+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Endodontics%22%5BJournal%5D)">Cementocytes Express Receptor Activator of the Nuclear Factor Kappa-B Ligand in Response to Endodontic Infection in Mice.</a> Journal of Endodontics. 42 (8), 1251-1257 (2016).</li>
<li>Rider, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elevated+CD14+%28Cluster+of+Differentiation+14%29+and+Toll-Like+Receptor+%28TLR%29+4+Signaling+Deteriorate+Periapical+Inflammation+in+TLR2+Deficient+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Anatomy+Records+%28Hoboken%29%22%5BJournal%5D)">Elevated CD14 (Cluster of Differentiation 14) and Toll-Like Receptor (TLR) 4 Signaling Deteriorate Periapical Inflammation in TLR2 Deficient Mice.</a> Anatomy Records (Hoboken). 299 (9), 1281-1292 (2016).</li>
<li>Martins, C. M., Sasaki, H., Hirai, K., Andrada, A. C., Gomes-Filho, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relationship+between+hypertension+and+periapical+lesion%3A+an+in+vitro+and+in+vivo+study%5BTitle%5D)+AND+%22Brazillian+Oral+Research%22%5BJournal%5D)">Relationship between hypertension and periapical lesion: an in vitro and in vivo study.</a> Brazillian Oral Research. 30 (1), e78(2016).</li>
<li>Rao, N. J., Wang, J. Y., Yu, R. Q., Leung, Y. Y., Zheng, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+Periapical+Diseases+in+Medication-Related+Osteonecrosis+of+the+Jaws%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedical+Research+International%22%5BJournal%5D)">Role of Periapical Diseases in Medication-Related Osteonecrosis of the Jaws.</a> Biomedical Research International. 2017, 1560175(2017).</li>
<li>Song, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preexisting+Periapical+Inflammatory+Condition+Exacerbates+Tooth+Extraction-induced+Bisphosphonate-related+Osteonecrosis+of+the+Jaw+Lesions+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Endodontics%22%5BJournal%5D)">Preexisting Periapical Inflammatory Condition Exacerbates Tooth Extraction-induced Bisphosphonate-related Osteonecrosis of the Jaw Lesions in Mice.</a> Journal of Endodontics. 42 (11), 1641-1646 (2016).</li>
<li>Wu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoxic+Preconditioning+Enhances+Dental+Pulp+Stem+Cell+Therapy+for+Infection-Caused+Bone+Destruction%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering+Part+A%22%5BJournal%5D)">Hypoxic Preconditioning Enhances Dental Pulp Stem Cell Therapy for Infection-Caused Bone Destruction.</a> Tissue Engineering Part A. 22 (19-20), 1191-1203 (2016).</li>
<li>Eichele, D. D., Kharbanda, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dextran+sodium+sulfate+colitis+murine+model%3A+An+indispensable+tool+for+advancing+our+understanding+of+inflammatory+bowel+diseases+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Dextran sodium sulfate colitis murine model: An indispensable tool for advancing our understanding of inflammatory bowel diseases pathogenesis.</a> World Journal of Gastroenterology. 23 (33), 6016-6029 (2017).</li>
<li>Choudhary, N., Bhatt, L. K., Prabhavalkar, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+animal+models+for+rheumatoid+arthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Immunopharmacology+and+Immunotoxicology%22%5BJournal%5D)">Experimental animal models for rheumatoid arthritis.</a> Immunopharmacology and Immunotoxicology. 40 (3), 193-200 (2018).</li>
<li>Shah, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clastic+cells+are+absent+around+the+root+surface+in+pulp-exposed+periapical+periodontitis+lesions+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Oral+Disease%22%5BJournal%5D)">Clastic cells are absent around the root surface in pulp-exposed periapical periodontitis lesions in mice.</a> Oral Disease. 24 (1-2), 57-62 (2018).</li>
<li>Wan, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MMP9+deficiency+increased+the+size+of+experimentally+induced+apical+periodontitis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Endodontics%22%5BJournal%5D)">MMP9 deficiency increased the size of experimentally induced apical periodontitis.</a> Journal of Endodontics. 40 (5), 658-664 (2014).</li>
<li>Bezerra da Silva, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MyD88+knockout+mice+develop+initial+enlarged+periapical+lesions+with+increased+numbers+of+neutrophils%5BTitle%5D)+AND+%22International+Endod+Journal%22%5BJournal%5D)">MyD88 knockout mice develop initial enlarged periapical lesions with increased numbers of neutrophils.</a> International Endod Journal. 47 (7), 675-686 (2014).</li>
<li>Mehrazarin, S., Alshaikh, A., Kang, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+Mechanisms+of+Apical+Periodontitis%3A+Emerging+Role+of+Epigenetic+Regulators%5BTitle%5D)+AND+%22Dental+Clinics+of+North+America%22%5BJournal%5D)">Molecular Mechanisms of Apical Periodontitis: Emerging Role of Epigenetic Regulators.</a> Dental Clinics of North America. 61 (1), 17-35 (2017).</li>
<li>Metzger, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophages+in+periapical+lesions%5BTitle%5D)+AND+%22Endodontics+Dentisrty+and+Traumatology%22%5BJournal%5D)">Macrophages in periapical lesions.</a> Endodontics Dentisrty and Traumatology. 16 (1), 1-8 (2000).</li>
<li>Lungova, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tooth-bone+morphogenesis+during+postnatal+stages+of+mouse+first+molar+development%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Anatomy%22%5BJournal%5D)">Tooth-bone morphogenesis during postnatal stages of mouse first molar development.</a> Journal of Anatomy. 218 (6), 699-716 (2011).</li>
<li>Zilberstein, L. F., Moens, Y. P., Leterrier, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+local+anaesthesia+on+anaesthetic+requirements+for+feline+ovariectomy%5BTitle%5D)+AND+%22Veterinary+Journal%22%5BJournal%5D)">The effect of local anaesthesia on anaesthetic requirements for feline ovariectomy.</a> Veterinary Journal. 178 (2), 214-218 (2008).</li>
<li>Kaufman, E., Epstein, J. B., Gorsky, M., Jackson, D. L., Kadari, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preemptive+analgesia+and+local+anesthesia+as+a+supplement+to+general+anesthesia%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Anesthesia+Progress%22%5BJournal%5D)">Preemptive analgesia and local anesthesia as a supplement to general anesthesia: a review.</a> Anesthesia Progress. 52 (1), 29-38 (2005).</li>
<li>Song, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+Direct+Pulp-capping+Model+for+the+Evaluation+of+Pulpal+Wound+Healing+and+Reparative+Dentin+Formation+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visual+Experimentalization%22%5BJournal%5D)">Development of a Direct Pulp-capping Model for the Evaluation of Pulpal Wound Healing and Reparative Dentin Formation in Mice.</a> Journal of Visual Experimentalization. (119), (2017).</li>
<li>Yoneda, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+root+canal+treatment+model+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Development of a root canal treatment model in the rat.</a> Scientific Reports. 7 (1), 3315(2017).</li>
<li>AlShwaimi, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulatory+T+cells+in+mouse+periapical+lesions%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Endodontics%22%5BJournal%5D)">Regulatory T cells in mouse periapical lesions.</a> Journal of Endodontics. 35 (9), 1229-1233 (2009).</li>
</ol>

Yazarlar açıklamak için hiçbir şey var

Farelerde apikal periodontitis indüksiyonu için burada bir yöntem tanıtıldı. Yöntemin amacı, bu inflamatuar sürecin mekanizmaları ve sonuçlarını incelemek için apikal periodontitis koşulunu yararlanmasıdır. Apical periodontitis 6-8 hafta eski fareler, kökleri tamamen24geliştirilen bir yaş indüklenen oldu. Bu modelde apikal periodontitis neden için, fare mandibular azı diş hamuru bir diş Burr kullanılarak maruz kalır. Fareler (SPF koşullarında) oral floradan bakteriler diş hamuru ve kö...

Bu yöntemin amacı, doğal mikroflora ile Apex kontamine ve daha sonra bu patolojik sürecin çeşitli özelliklerini incelemek için bir fare içinde apikal periodontitis ikna etmektir.
Apical periodontitis (AP), diş kökünü çevreleyen periodontal dokularda inflamatuar bir doğanın yaygın bir patolojisidir. Bu diş hastalığı şiddetli ağrıya neden olabilir ve bir diş hekimi tarafından tedavi edilmelidir. Tedavi seçenekleri arasında kök kanal tedavisi (primer veya ikincil), Endodontik cerrahi, diş çıkarma veya klinik ve radyografik bulgulara bağlı olarak takip ve klinisyen görüşü yer aldı. Bu inflamatuar sürecin mekanizması, birkaç yıl1,2,3için okudu rağmen, hala kapsamlı olarak anlaşılmamıştır. Bu patolojinin şiddetini göz önünde bulundurarak, bu nedenle temel doğasını ele alan araştırma için net bir ihtiyaç vardır. Böylece AP 'nin çalışmasında mümkün olan sistemler büyük bilimsel ilgi görmektedir.
AP, yerel dokulara ve bağışıklık sistemini içeren karmaşık bir patolojik süreçtir, in vitro çalışmalar süreçlerin tam bir anlayış için yetersiz. Bu hastalığın klinik örneklerinin incelenmesi aynı zamanda etik sınırlamalar ve farklı insanlar ve farklı klinik aşamaları arasında önemli değişkenlik nedeniyle sorunlu4,5, ve dolayısıyla in vivo modellerin gereksinimi. Bu modeller, diş hamuru kirliliğine maruz ve periapikal dokularda Bu uyarıcı için vücudun inflamatuar reaksiyonu gözlemleme kavramını temel alan6,7. Ortak in vivo modelleri kemirgenler veya köpekler gibi büyük hayvanları içerir. Minyatür dişler ile çok küçük hayvanlar olan fareler tedavisinde klinik zorluk rağmen, fare modelinin avantajları önemlidir: pratikte, fareler ile çalışmak teknik tesisler açısından basit ve en uygun maliyetli ve bilimsel olarak, fare, kolayca mevcut genetik ve moleküler araçlar ve iyi okudu genom ile iyi incelenmiştir hayvan modelidir. Nitekim, önceki çalışmalar inflamatuar ve kemik reorpsiyon sinyalleri ve hücreler apikal periodontitis katılan okumak için bir fare modeli kullanılan8,9,10,11. Bu nedenle, AP çalışması için bir fare modelinin nasıl kullanılacağı konusunda net bir protokol gereklidir. Burada, böyle bir protokol tarif ediyoruz.
Burada açıklanan protokol knock-out (Ko) fareler çalışmak için uygun olmanın büyük avantajı vardır ve nasıl belirli bir gen eksikliği diş iltihabı etkiler öğrenmek7,12. Bu protokolün diğer kullanışlı uygulamaları, apikal periodontitis13' ün gelişimi üzerine ilaçların ve sistemik koşulların etkileri, apikal Periodontitin çenelerin osteatrosis gelişimi üzerine etkisi14 , 15 ve kemik rejenerasyonu için kök hücre terapisi16.
Bu protokol Ayrıca yerel inflamasyon çalışmak için bir model olarak Genelleştirilmiş olabilir. Enflamatuar süreci incelemek için, örneğin indüklenen kolit veya artrit17,18dahil olmak üzere çeşitli fare modelleri geliştirilmiştir. Bu modellerin sistemik etkileri vardır ve aynı hayvan içinde hiçbir yerleşik kontrol vardır. İnflamasyon olmadan kontralateral kontrol içeren indüklenen apikal periodontitis için modeller, bu sınırlamalar14,19üstesinden avantajı vardır.
Aşağıda açıklanan protokol bu nedenle yerel inflamatuar süreçlerle ilgilenen araştırmacılar için yararlıdır. Bu iltihap kontrollü doğası, belirli bir yere onun hapis, ve kontralateral kontrol diş, tüm bu süreç içinde yer alan mekanizmaları incelemek için bu protokol değerli olun. Ayrıca, protokol periapikal inflamasyonun klinik yönleri ile ilgilenen araştırmacılar için yararlıdır. Fare modeli, hastalığın farklı değişkenlerini incelemek için idealdir, fare modelinde genetik manipülasyonları kolayca gerçekleştirebilmek için, periapikal inflamasyonda spesifik genlerin aktivitesini araştırmak için avantajına ek olarak.
Teknik olarak, klinik prosedür fareler dişlerin küçük boyutları nedeniyle yürütmek için zordur. Konumlandırma, gerekli ekipman ve performans hakkında bilgi edinmek için bu prosedürü görselleştirmek yararlı olacaktır.

<table><tbody><tr><td>Atipamezol hidroklorür</td><td>Eurovet Hayvan Sağlığı</td><td>CAS 104075-48-1</td><td></td></tr><tr><td>ATR</td><td>dentsply</td><td>tecnika</td><td></td></tr><tr><td>engelleme makinesi</td><td>Leica</td><td>EG1150H</td><td></td></tr><tr><td>buprenorfin</td><td>vetmarket</td><td>163451</td><td></td></tr><tr><td>klinik mikroskop/dürbün</td><td>Olympus</td><td>Sz61</td><td></td></tr><tr><td>diş bur</td><td>Komet diş</td><td>ZR8801L 315 008</td><td></td></tr><tr><td>diş spatulası</td><td>Premier</td><td>1003737</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>J.T Baker</td><td>8993</td><td></td></tr><tr><td>entelan</td><td>cıva</td><td>1.07961</td><td></td></tr><tr><td>Eozin Y çözeltisi, alkolik</td><td>SIGMA</td><td>HT110116</td><td></td></tr><tr><td>hematoksilen çözeltisi, Mayer'in</td><td>SIGMA</td><td>MHS 16</td><td></td></tr><tr><td>Ketamin hidroklorür</td><td>Vetoquinol</td><td>CAS 1867-669</td><td></td></tr><tr><td>Medetomidin hidroklorür (cepetor)</td> <td>CP-pharma GmbH</td><td>CAS 86347-15-1</td><td></td></tr><tr><td>Mepivakain HCl% 3</td> <td>Teva</td><td>CAS 96-88-8</td><td></td></tr><tr><td>mikro fırçalar - ayarlanabilir hassas aplikatörler</td><td>PARKELL</td><td>S379</td><td></td></tr><tr><td>mikro-ct tarayıcı</td><td>scanco</td><td>uCT 40</td><td></td></tr><tr><td>parafin</td><td>Leica</td><td>39602004</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>SIGMA</td><td>D8537</td><td></td></tr><tr><td>PFA</td><td>EMS</td><td>15710</td><td></td></tr><tr><td>Kloramfenikol göz merhemi (% 5)</td> <td>Rekah ilaç</td><td>CAS 56-75-7</td><td></td></tr><tr><td>cımbız</td><td>WAM</td><td>Ref-CT</td><td></td></tr><tr><td>ksilazin</td><td>Eurovet Hayvan Sağlığı</td><td>CAS 7361-61-7</td><td></td></tr><tr><td>ksilen</td><td>Gadot</td><td>CAS 1330-20-7</td><td></td></tr></tbody></table>

fareler içinde apical periodontitis İndükleme

Inducing Apical Periodontitis in Mice

Yerel kaynaklı inflamasyona katılan mekanizmalar, mevcut birçok hayvan modeli kullanılarak incelenebilir. Bunlardan biri apikal periodontitis indüksiyonu (AP). Apical periodontitis, diş kökünü çevreleyen periodontal dokularda inflamatuar bir doğanın yaygın bir patolojisidir. Bu patolojinin yapısını ve mekanizmasını daha iyi anlamak için farelerde prosedürü gerçekleştirmek avantajlıdır. Bu odontojenik inflamasyonun indüksiyon diş hamuru maruz kadar fare diş içine sondaj ile elde edilir. Sonra, diş hamuru zaman içinde doğal oral Flora tarafından kontamine maruz kalır, apikal periodontitis neden. Bu süre sonra, hayvan feda edilir ve diş ve çene kemiği çeşitli şekillerde analiz edilebilir. Tipik analizler arasında mikro-CT görüntüleme (kemik reorpsiyonu değerlendirmek), histolojik boyama, immünhistokimya ve RNA ifadesi yer aldı. Bu protokol, oral biyoloji alanında, bu inflamatuar süreci uniform koşullara sahip bir In vivo Deneysel ortamda daha iyi anlamak için araştırma için yararlıdır. Prosedür fareler ve izole çene dikkatli bir şekilde işlenmesi gerekir, ve tekniğin görsel bir gösteri yararlıdır. İndüklenen apikal periodontitis ve bir fare modelinde karakterizasyonu için yol açan prosedürlerin tüm teknik yönleri gösterilmiştir.

Deneysel adımların akış çizelgesi Şekil 1' de sunulmuştur. Protokolde belirtildiği gibi, fareler anestezize edilir, ve bir tarafta ilk mandibular molar hamuru pozlama kadar delinmiş, kontralateral diş bir kontrol olarak bırakılır iken. Ardından, dişler 42 gün boyunca oral Flora tarafından kontamine edilir, bunlar izlenen ve ağrı kesici alır. 42 gün sonra fareler ötenize edilir ve diş ve bitişik çene analizi için alınır.
<p class="jove_content" fo:keep-tog...

Burada, yerel olarak farelerde apikal periodontitis teşvik etmek için bir protokol sunuyoruz. Biz nasıl fare diş bir delik matkap ve onun hamuru maruz göstermek, amacıyla lokal inflamasyon neden. Mikro-CT ve histoloji gibi bu inflamasyonun doğasını araştırmak için analiz yöntemleri de gösterilmiştir.

Fareler içinde Apical periodontitis İndükleme

The mechanisms involved in local induced inflammation can be studied using several available animal models. One of these is the induction of apical ...

Protokolümüz periapical periodontitisin erişilebilir ve kontrollü bir fare modelinde incelenmesini sağlar. Bu nedenle, bu protokol hasta örnekleri veya in-vitro modellerüzerinde avantajları vardır. Bu tekniğin başlıca avantajları farenin iyi incelenmiş olması ve yöntemin tesis gereksinimleri açısından teknik olarak basit olması ve maliyet etkin olmasıdır.Bu işlem dişlerin küçük boyutları nedeniyle zorlu olduğundan, tekniğin konumlandırılması ve performansı hakkında bilgi edinmek için prosedürü görselleştirmek faydalıdır. Parmak ucutuya yanıt eksikliğini doğruladıktan sonra, fareyi kapalı hücreli ekstrüzyonlu polistiren köpük yüzeyine baskın tarafa yerleştirin ve pençeleri bantla sabitleyin. Kesici dişlerin çifti başına tek bir lastik bant ve kapalı hücreekströz polistiren köpük yüzeyine sabitlenmiş uzun iğneler kullanarak, ağzı açık şekilde destekle.Sağ yanağı geri çekmek için köpük bantlı kapalı forseps kullanın. Ve bir mikroskop ve bir ışık kaynağı altında köpük ve fare yerleştirin. Daha sonra, bir diş spatula kullanarak dil geri çekmek ve ilk mandibular azı bitişik mukobukkal kat içine lokal anestezik 25 ila 50 mikrolitre enjekte etmek için 27 gauge iğne kullanın.Enjeksiyon bölgesi çevresinde doku şişmesi gözlenmelidir. Hamuru ortaya çıkarmak için, bir yuvarlak ile donatılmış herhangi bir uygun diş motoru kullanın, dakikada 800 mermi hızında yüksek hızlı elmas 0.8 milimetrelik diş bur, hamuru boynuzları dentin ile görünür kadar ilk sağ mandibular molar oklüzal kısmını delmek için. Bir K veya H dosyası kullanın, sayı sekiz veya sayı 10 hamuru delmek ve boynuzları içine dosyanın eklenmesine izin vermek için mesial ve distal hamuru boynuzları kapsayan dentin kırmak.Dosyaları ile açıklıkları genişletirken hamuru içinde dosyaları ile mümkün olduğunca derinlemesine çalışmaya devam, hamuru kanama genellikle bur ile dişin keskin kenarları yuvarlak gözlenir ve deneme sırasında ağrıyı azaltmak için aclusion diş kaldırmak. Herhangi bir enkaz temizlemek için bir mikro fırça kullanın. Ve kontralateral sol ilk mandibular azı azını kontrol olarak bırakın.İşlemden sonraki ilk üç gün boyunca, hayvanları ağırlıkve günde bir kez buprenorfin intraperitoneally kilogram başına 0.1 miligram enjekte. Haftada 2-3 kez tartma ve genel davranış değerlendirmesi ile önümüzdeki 42 gün boyunca hayvanları izlemeye devam edin. Ve takip süresi boyunca kafesin zemininde bir Petri kabında su ile yumuşatılmış gıda peletteslim.Deneyin sonunda, hem tedavi edilen hem de tedavi edilmeyen taraflarda üç azı azı lının bulunduğu çene kısmını toplamak için cerrahi makas ve forseps kullanın. Ve mümkün olduğunca yumuşak doku soymak için forceps kullanın, örnekler üzerinde çoğunlukla kemik ve diş bırakarak. PBS'de dokuyu kısa bir süre durula.24 ila 48 saat boyunca yüzde dört paraformaldehit fiksasyon önce. Daha sonra taze PBS'de numuneleri üç kez durulayın. Mikro-Bilgisayarlı Tomografi veya Mikro-BT analizi için, hasat edilen dokuları tarayıcı aşamasında 1,5 mililitre PBS içeren 12 milimetre çapındaki bir tüpe yerleştirin.Diş ve kökün bukcal veya lingual yüzeyleri tüpün altına paralel yatmak için yönlendirilmiş örneklerle. Örnekleri ayırmak için bir sünger kullanın. Ve esnek film ile tüpün üst kapağı.Kontrol dosyasını seçin ve enerjiyi 70 kilovolta, yoğunluğu 114 mikro amper'e ve çözünürlüğü altı mikrometrelik voxel boyutuna ayarlayın. Scout Görünümü'ne tıklayın. Görüntü göründüğünde, Başvuru Satırı'nı tıklatın ve tarama için örneklerin alanını işaretleyin, her örnekten sonra Tarama Ekle'yi tıklatın.Tüm örnekler işaretlendiğinde, görev listesine gidin ve Etkileşim görevlerini başlat'ı seçin. Mikro-BT dilimlerinin konturunu belirlemek için, koronal hamurun, her iki kanalın radiküler posasının ve her iki apikal foramenin bulunduğu dişin yaklaşık ortasını temsil eden dilimi seçin. Kontur paneline tıklayın ve distal kök apeksdistal noktasından başlayarak, radyal paque apikal alana pikonal olarak apikal sınır işareti, mesial kök ünün distal sınırını takip mesial kök apeks mesial sınırından, ve distal kökün mesial sınırı, furkasyon bölgesi ile.Elde edilen konturkopyalayıp yapıştırın ve konturu orta dilimin her iki tarafına yerleştirilmiş beş dilime göre ayarlayın. Mikro-BT Değerlendirmesi altında her örnek için işaretlenmiş konturun doku hacmini hesaplamak için Görev'i seçin ve 3D-Değerlendirme'yi tıklatın. Ardından, 3D-Değerlendirme penceresinde, Doku hacmini hesaplamak için Seç'i tıklatın ve bir filtre seçin.Mikro-BT analizinin sonunda, dokuları tarayıcıdan 10 gün boyunca bir mililitre EDTA içeren mikro santrifüj tüpüne aktarın. Kireçlenmenin sonunda, numuneleri konsantrasyon başına bir saat boyunca artan etanol konsantrasyonları içeren histolojik kasetlere yerleştirin. İkinci etanol daldırma sonra, ksilenin buharlaşmasını sağlamak için bir gecede kimyasal bir başlık içinde 60 derece santigrat sıvı parafin içine kasetleri aktarmadan önce, iki bir saatlik daldırma için ksilene içine örnekleri aktarın.Ertesi sabah, taç ve kökleri kalıbın altına paralel odaklı ile kurutulmuş örnekleri yerleştirin, bir histolojik engelleme makinesine parafin örnekleri gömmek için. Bölümleri elde etmek için parafin bloğu örneğini mikroton kesme bloğuna sabitle ve numuneyi ilgi dokusuna ulaşılına kadar kesin. Dişin herhangi bir parçası görünür olduğunda, koronal ve radiküler hamuru ve apikal foramen elde edilense kadar kesme açısını ayarlayarak altı mikrometre kalınlığında kesitler elde etmeye başlayın.Burada, bir bütün tedavi mandibula gösterilir. Tedavi edilen ilk sağ azı nın büyütülmesi, hem mesial hem de distal pulpboynuzlarının maruz ihyasının ve kanalların girişinin gözlemlenmesine olanak sağlar. Mikro-BT görüntüleme mesial pulpa pozlama görselleştirme sağlar, ve kemik rezorbtion mesial ve distal periapical radyolüan alanları.Gerçekten de, doku hacminin önemli bir periapical kemik rezorbasyonu kontrollere göre, tedavi edilen dişler de ölçülür. Histolojik analizler, tedavi edilen dişte diş posasının nekroz alabildiği, H ve E boyamadan sonra kontrol organize edilmiş pulpdokuya göre net bir şekilde görülebilen bir nekroz olduğunu göstermektedir. Ayrıca, ve daha da önemlisi, tedavi edilen dişin periapical bölgesinde, kontrol dişlerinde bulunmayan bağışıklık hücrelerinden oluşan periapical bir lezyon gözlenir.Fareyi, hamurun pozlanması sırasında doğru bir konumlandırma hayvanın ağzına iyi bir erişim ve en iyi sonuçlar elde etmek için doğru şekilde konumlandırmak hayati önem taşır. Bu protokolden sonra immünohistokimyasal doku boyama ve faks gibi periaptik inflamasyon analizi ve detaylı moleküler analiz yöntemleri yapılabilir. Bu protokol önemli, sadece diş araştırmaları için değil, aynı zamanda immünolojik araştırmalar için, dahili iç kontrol ile lokal indüklenen inflamasyon için bir model sağlar gibi.

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Hayvan modelleri kronik inflamasyon gelişimine katkıda konak ve patojen spesifik mekanizmaları tanımlarken paha biçilmez araçlardır olduğu kanıtlanmıştır. Burada, lokal ve sistemik inflamasyon bölgelerinde ilerlemesini değerlendirmek için insan patojeni Porphyromonas gingivalis ve detay metodolojileri ile ağızdan enfeksiyondan bir fare modeli tarif eder.

Lokal ve sistemik Yer de patojen kaynaklı kronik enflamasyon Fare Modeli

Bu makale, birden fazla maksiller molar içeren bir ligatür kaynaklı murine periodontitis modeli nin oluşturulması için bir protokol sunmaktadır, sonraki analizler için ilgili dişeti dokusu ve kemik daha geniş alanlarda sonuçlanan yanı sıra azaltılmış hayvan kullanımı. Oral nötrofilleri insan deneklere benzer bir şekilde değerlendirme tekniği de tanımlanmıştır.

Oral Nötrofillerin Değerlendirilmesinde Mürin Periodontitin Sağlam Ligatür Kaynaklı Modeli

Bu çalışmada, periodontitis indüksiyonunun sıçan modeli, ilk maksiller azı dişlerinin etrafında 14 gün boyunca, Porphyromonas gingivalis'ten türetilen tekrarlayan lipopolisakkarit enjeksiyonları ve geciktirici ligatür kombinasyonu ile sunulmuştur. Ligasyon ve LPS enjeksiyon teknikleri peridonti indüklemede etkiliydi, bu da alveoler kemik kaybı ve inflamasyona neden oldu.

Bir sıçan modelinde ligatür ve lipopolisakkarit enjeksiyonunun bir kombinasyonu ile periodontitisin indüksiyonu

Bu makale, yenilikçi bir ağız tıkaç kullanarak farelerde bir pulpitis modeli oluşturmak için kolaylaştırılmış bir protokol ve ardından müteakip histolojik analiz sunmaktadır.

Pulpitis Araştırmaları için Yeni Bir Ağız Tıkaç ile Murin Pulpa Maruziyet Modelinin Kurulması

Bu, farelerde ligatür kaynaklı peri-implantitisin deneysel bir modeli hakkında bir rapordur. Hayvanların ameliyat öncesi ve sonrası yönetiminden, ekstraksiyonlardan, implant yerleştirmeden ve ligatüre bağlı peri-implantitisten tüm cerrahi adımları açıklıyoruz.

Farelerde Ligatür ile İndüklenen Peri-İmplantitisin Deneysel Modeli

Bu çalışma, farelerde periodontitisi indüklemek için modifiye edilmiş bir 6-0 naylon ligasyon yöntemini tanımlamaktadır, bu yöntem yüksek oranda tekrarlanabilir ve araştırmacıların periodontal hastalığı gelişiminden patolojik sonuçlarına kadar incelemeleri için bir alternatif teşkil etmektedir.

İkinci Üst Azı Dişinde Naylon Ligatür ile İndüklenen İleri Periodontitisin Murin Modeli

Fare heterotopik kalp transplantasyonu modeli ret ve immün yanıt mekanizmaları eğitim için önemli bir yöntem olduğu birçok araştırmacı tarafından kanıtlanmıştır. Ancak, söz konusu teknikleri hala zorlu. Standart teknikler değiştirerek 1000 nakli ile daha fazla başarı elde ettiler.

Farelerde Heterotopik Kalp Nakli

Fare ince bağırsak nakli modeli bağışıklık ret ve ekran yeni immünsupresif ilaçlar mechanismes çalışma için önemli bir araç olarak kabul edilmiştir. Ancak, bu model ilgili teknikleri son derece teknik bir sorundur çünkü kullanımı sınırlıdır. Şimdi değiştirilmiş teknik tanıtmak.

Farelerde Küçük Bağırsak Nakli

Fare Enine aort daralma (TAC), kalp hipertrofisi ve kalp yetmezliği gelişme yatan mekanizmaları incelemek için yaygın olarak kullanılan bir deneysel model. Burada, prosedürler, farelerde kalp hipertrofisi tekrarlanabilir bir derece oluşturmak için aort sıkmak için açıklanmaktadır.

Farelerde Enine Aort Konstrüksiyon

Telemetrik EKG, kardiyak aritmiler ve ani kardiyak ölüm için hayvan modellerinde değerlendirilmesinde önemli bir araç olarak ortaya çıkmıştır. Burada, fareler üzerinde yapılan uzun vadeli ambulatuvar EKG monitorizasyonu uygulama için telemetrik EKG kayıtları kademeli bir kılavuz mevcut.

Farelerde ambulatuvar EKG Kaydı

Öğrenin farelerde apikal periodontitis indüksiyonu için cerrahi protokolü. Bu yöntem, diş etrafındaki kemik rezorpsiyonu ve bağışıklık yanıtlarını in vivo analiz etmeyi sağlar. Mikro-CT ve histoloji ile doku hasarını değerlendirin.

Fareler içinde Apical periodontitis İndükleme

Daha fazla video keşfet