Name: Fizyolojik hasta, kanser kök hücrelerini hedef alan anti-neoplastik Ilaç taraması için 3B kürler türetilmiştir (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-07-05T12:30:00.000+00:00
Duration: 10 min 3 s
Description: Keşfedin, asılı damla modeliyle hasta kaynaklı kanser kök hücrelerinden 3D küreler oluşturma ve yüksek verimli ilaç taraması yapma yöntemini. Bu teknik, kişiselleştirilmiş tedavi stratejileri geliştirmeyi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma öncelikle DOD OCRP erken kariyer araştırmacı Ödülü W81XWH-13-1-0134 (GM), DOD pilot Ödülü W81XWH-16-1-0426 (GM), DOD araştırmacı başlattı Ödülü W81XWH-17-OCRP-ıIRA (GM), Rivkin merkezi Ovarian kanser ve Michigan Ovarian kanser için desteklenmektedir Ittifak. Bu yayında rapor edilen araştırma, Ulusal Sağlık Enstitüleri Ulusal Kanser Enstitüsü tarafından ödül numarası P30CA046592 altında destekleniyordu. CMN, 1256260 No 'lu Grant altında Ulusal Bilim Vakfı lisansüstü araştırma bursu tarafından desteklenmektedir. MEB, Ulusal Ihtiyaç (GAANN) bursu alanlarında eğitim bölümü lisansüstü yardımı tarafından desteklenmektedir.

<ol><li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22All+cancers+Source%3A+Globocan%22">All cancers Source: Globocan</a>. , Globocan. http://gco.iarc.fr/today/data/factsheets/cancers/39-All-cancers-fact-sheet.pdf (2018).</li>
<li>Prasad, V., Mailankody, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Research+and+Development+Spending+to+Bring+a+Single+Cancer+Drug+to+Market+and+Revenues+After+Approval%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA+Internal+Medicine%22%5BJournal%5D)">Research and Development Spending to Bring a Single Cancer Drug to Market and Revenues After Approval.</a> JAMA Internal Medicine. 177, 1569-1575 (2017).</li>
<li>Raghavan, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Personalized+Medicine+Based+Approach+to+Model+Patterns+of+Chemoresistance+and+Tumor+Recurrence+Using+Ovarian+Cancer+Stem+Cell+Spheroids%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Personalized Medicine Based Approach to Model Patterns of Chemoresistance and Tumor Recurrence Using Ovarian Cancer Stem Cell Spheroids.</a> Clinical Cancer Research. 23 (22), 6934-6945 (2017).</li>
<li>Jordan, C. T., Guzman, M. L., Noble, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+Stem+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Cancer Stem Cells.</a> New England Journal of Medicine. 355, 1253-1261 (2006).</li>
<li>Ishiguro, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+and+Characterization+of+an+In+Vitro+Model+of+Ovarian+Cancer+Stem-like+Cells+with+an+Enhanced+Proliferative+Capacity%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Establishment and Characterization of an In Vitro Model of Ovarian Cancer Stem-like Cells with an Enhanced Proliferative Capacity.</a> Cancer Research. 76, 150-160 (2016).</li>
<li>Páez, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+Dormancy%3A+A+Model+of+Early+Dissemination+and+Late+Cancer+Recurrence%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Cancer Dormancy: A Model of Early Dissemination and Late Cancer Recurrence.</a> Clinical Cancer Research. 18, 645-653 (2012).</li>
<li>Ahmed, N., Stenvers, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Getting+to+Know+Ovarian+Cancer+Ascites%3A+Opportunities+for+Targeted+Therapy-Based+Translational+Research%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Oncology%22%5BJournal%5D)">Getting to Know Ovarian Cancer Ascites: Opportunities for Targeted Therapy-Based Translational Research.</a> Frontiers in Oncology. 3, (2013).</li>
<li>Pradhan, S., Clary, J. M., Seliktar, D., Lipke, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+three-dimensional+spheroidal+cancer+model+based+on+PEG-fibrinogen+hydrogel+microspheres%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">A three-dimensional spheroidal cancer model based on PEG-fibrinogen hydrogel microspheres.</a> Biomaterials. 115, 141-154 (2017).</li>
<li>Varna, M., Bertheau, P., Legrès, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+Microenvironment+in+Human+Tumor+Xenografted+Mouse+Models%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Analytical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Tumor Microenvironment in Human Tumor Xenografted Mouse Models.</a> Journal of Analytical Oncology. 3, 159-166 (2014).</li>
<li>Huang, S. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+integrated+microfluidic+cell+culture+system+for+high-throughput+perfusion+three-dimensional+cell+culture-based+assays%3A+Effect+of+cell+culture+model+on+the+results+of+chemosensitivity+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+on+a+Chip%22%5BJournal%5D)">An integrated microfluidic cell culture system for high-throughput perfusion three-dimensional cell culture-based assays: Effect of cell culture model on the results of chemosensitivity assays.</a> Lab on a Chip. 13, 1133-1143 (2013).</li>
<li>Zang, R., Li, D., Tang, I. C., Wang, J., Yang, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-Based+Assays+in+High-Throughput+Screening+for+Drug+Discovery%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Biotechnology+for+Wellness+Industries%22%5BJournal%5D)">Cell-Based Assays in High-Throughput Screening for Drug Discovery.</a> International Journal of Biotechnology for Wellness Industries. , (2012).</li>
<li>Murphy, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+alternative+in+vivo+drug+screening+methodology%3A+a+single+mouse+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Evaluation of alternative in vivo drug screening methodology: a single mouse analysis.</a> Cancer Research. 76, 5798-5809 (2016).</li>
<li>Hidalgo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+Xenograft+models%3A+An+emerging+platform+for+translational+cancer+research%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Discovery%22%5BJournal%5D)">Patient-derived Xenograft models: An emerging platform for translational cancer research.</a> Cancer Discovery. 4, 998-1013 (2014).</li>
<li>Damiati, S., Kompella, U. B., Damiati, S. A., Kodzius, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microfluidic+devices+for+drug+delivery+systems+and+drug+screening%5BTitle%5D)+AND+%22Genes%22%5BJournal%5D)">Microfluidic devices for drug delivery systems and drug screening.</a> Genes. 9, (2018).</li>
<li>Caliari, S. R., Burdick, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Practical+Guide+to+Hydrogels+for+Cell+Culture%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">A Practical Guide to Hydrogels for Cell Culture.</a> Nature Methods. 14, 69-81 (2016).</li>
<li>Mehta, G., Hsiao, A. Y., Ingram, M., Luker, G. D., Takayama, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Opportunities+and+challenges+for+use+of+tumor+spheroids+as+models+to+test+drug+delivery+and+efficacy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Control+Release%22%5BJournal%5D)">Opportunities and challenges for use of tumor spheroids as models to test drug delivery and efficacy.</a> Journal of Control Release. , (2012).</li>
<li>Mehta, P., Novak, C., Raghavan, S., Ward, M., Mehta, G. Self-Renewal and CSCs In Vitro Enrichment: Growth as Floating Spheres. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMehta%2C+P+%22Cancer+Stem+Cells%3A+Methods+and+Protocols%22">Cancer Stem Cells: Methods and Protocols</a>. Papaccio, G., Desiderio, V. , Springer. New York. 61-75 (2018).</li>
<li>Raghavan, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Formation+of+stable+small+cell+number+three-dimensional+ovarian+cancer+spheroids+using+hanging+drop+arrays+for+preclinical+drug+sensitivity+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Gynecologic+Oncology%22%5BJournal%5D)">Formation of stable small cell number three-dimensional ovarian cancer spheroids using hanging drop arrays for preclinical drug sensitivity assays.</a> Gynecologic Oncology. 138, 181-189 (2015).</li>
<li>Raghavan, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+analysis+of+tumor+spheroid+generation+techniques+for+differential+in+vitro+drug+toxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Comparative analysis of tumor spheroid generation techniques for differential in vitro drug toxicity.</a> Oncotarget. 7, 16948-16961 (2016).</li>
<li>Kim, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluating+Tumor+Evolution+via+Genomic+Profiling+of+Individual+Tumor+Spheroids+in+a+Malignant+Ascites%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Evaluating Tumor Evolution via Genomic Profiling of Individual Tumor Spheroids in a Malignant Ascites.</a> Scientific Reports. 8, 1-11 (2018).</li>
<li>Silva, I. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aldehyde+dehydrogenase+in+combination+with+CD133+defines+angiogenic+ovarian+cancer+stem+cells+that+portend+poor+patient+survival%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Aldehyde dehydrogenase in combination with CD133 defines angiogenic ovarian cancer stem cells that portend poor patient survival.</a> Cancer Research. 71, 3991-4001 (2011).</li>
<li>Pulaski, H. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identifying+alemtuzumab+as+an+anti-myeloid+cell+antiangiogenic+therapy+for+the+treatment+of+ovarian+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Identifying alemtuzumab as an anti-myeloid cell antiangiogenic therapy for the treatment of ovarian cancer.</a> Journal of Translational Medicine. 7, 49(2009).</li>
<li>Jager, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+enzymatic+and+mechanical+methods+of+dissociation+on+neural+progenitor+cells+derived+from+induced+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Medical+Sciences%22%5BJournal%5D)">Effect of enzymatic and mechanical methods of dissociation on neural progenitor cells derived from induced pluripotent stem cells.</a> Advances in Medical Sciences. 61, 78-84 (2016).</li>
<li>Ivanov, D. P., Grabowska, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spheroid+arrays+for+high-throughput+single-cell+analysis+of+spatial+patterns+and+biomarker+expression+in+3D%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Spheroid arrays for high-throughput single-cell analysis of spatial patterns and biomarker expression in 3D.</a> Scientific Reports. 7, 41160(2017).</li>
</ol>

Yazarların ifşa etmesi gereken hiçbir şey yok.

3D küroid oluşumu için 384-iyi asılı damla plaka platformu herhangi bir hücre biyoloji veya kanser biyoloji Labs için kolayca uygulanan bir araçtır. Bu fizyolojik platform, fiziksel olarak ilgili 3D kültürler içinde hücre hatları, yanı sıra, primer hasta örnekleri çalışma sağlar yüksek verim ilaç taraması için izin verirken. Platform ayrıca kültür koşullarının son derece ayarlanabilir olmasını sağlar, kaplama yoğunlukları üzerinde sıkı kontrol sağlayan, hücre Co-kültür oranları, ekstrsellüler bileşenleri, ve orta kompozi...

Dünya çapındaki kanserle ilgili mortalite, 20181' de 9.800.000 ölümlere ulaştı ve gelişmiş terapinin gelişmesine ihtiyacı vurgulandı. Ne yazık ki, kanser ilaçların geliştirilmesi maliyeti artmaktadır, tek bir ilacın gelişimi ile yaklaşık 650.000.000 USD2 yeni anti-kanser ilaçları geliştirmek için gelişmiş stratejiler ihtiyacını gösteren. Kanser kök hücreleri (CSCs), artan kemoresistans ile karakterize edilir3, kendini yenilemek için kapasite, ve yeni tümörler tohum yeteneği4 tümör nüks sorumlu olduğu düşünülmektedir4, metasür5, ve kemoterapi4,6, tüm tümör malign kapasitesine katkıda ve böylece yüksek ölüm ücreti. Yumurtalı kanserde, bu hücreler periton boşlukta malign asit sıvısında zenginleştirilmiş olarak bulunur, kötü klinik sonuçlar ile ilişkili bir durumdur1. CSCs 'nin malign yetenekleri sonucunda, geleneksel kemoterapiler ile birlikte kullanılmak üzere yeni CSC hedefleme ilaçları geliştirmek için bir itme olmuştur. CSC hedefleyen ilaçların gelişimine eşlik eden çeşitli zorluklar vardır: 1) CSCs in vitro genişletilmesi ve bakımını yapma zorluk; 2) hasta örneklerinin kıtlık; 3) kültür platformunun fizyolojik alaka; ve 4) hastalar arasında ilaç hassasiyetinde heterojenlik. Bu protokol, bu zorlukların her birinin üstesinden gelebilmek için yüksek verimlilik sağlayan 3D kültür platformunun uygulanmasını özetliyor. Özellikle, bu sistem hasta türeyen ovaryalı CSCs az sayıda kullanarak hızlı ilaç taraması için izin verir, ve son derece aşağı akış analizi teknikleri için imkan sağlar. Yumurtalı kanserleri ve CSCs 'leri incelemek için ideal olan platformumuz, karmaşık 3D ortamlarda diğer kanserleri ve farklılaşmış hücre tiplerini incelemek için de değerlidir.
Kompleks 3 boyutlu (3D) modeller, kanser hücrelerinden oluşan bir 3D niş olan tümör mikroortamının (TME), kanser olmayan destek hücrelerinden ve hücre dışı matriks (ECM) proteinleri4' ün incelenmesi açısından önemlidir. Bu 3D ortam, benzersiz hücre morfolojisi, hücre hücresi ve hücre matris etkileşimleri, hücre farklılaşma, hücre göçü, hücre yoğunluğu ve difüzyon degradelerinin geleneksel 2D hücre kültürüne göre in vitro4' e kıyasla sonuçlanır. Tüm bu faktörlerin 3D kültürler içinde diferansiyel ilaç tepkisi sonuçlanan, artan ilaç direnci ve fizyolojik alaka sergiler7,8. 3D TME 'nin CSC farklılaşma ve kemoresistleşme rolü nedeniyle, fizyolojik mikroortamlarda CSC hedefleyen ilaçlar için ekran için hayati önem taşımaktadır. CSC ilaç tarama platformlarının fizyolojik alaka iyileştirilmesi hastanın spesifik ilaç taraması, ilaç gelişimi, tedavi stratejileri formülasyonu ve sonuçta klinik sonuçlar geliştirmek için potansiyele sahiptir. İlaç taraması için kullanılan platformun yüksek verim ve maliyet, zaman ve umut verici ilaçların klinik çeviri süresini en aza indirmek için aşağı akış analizi yöntemleri ile uyumlu olması aynı derecede önemlidir9.
Şu anda kompleks TME, fizin syngeneic tümör modelleri, hücre hattı tarafından türetilen xenograflar ve hasta tarafından türetilen xenograft (PDX) modelleri12gibi in vivo modellerde ilaç tarama uygulamaları için en iyi şekilde korunur, fizyolojik Koşul -ları. Ancak, bu modellerin düşük verim doğası, yanı sıra, maliyet, zaman, ve teknik beceri setleri hızlı, yüksek verimlilik ilaç tarama uygulamaları13onların yardımcı sınırları gerektirir. Bu in vivo modellerde alternatifler olarak, Hidrojeller8kullanan birçok in vitro 3D modelleri, mikroakışkan cihazlar içinde kültür veya ' organ-on-a-Chip ' cihazlar10,14ve olmayan-yapışmaz kültürler3,8 Ayrıca, maliyet, zaman ve gerekli skillset açısından giriş için düşük bariyer nedeniyle, geliştirilmiştir.
Hidrojel kültür platformları, matris bileşimi, mekanik özellikler ve matris yapısı15' te sağlanan ince kontrolde avantajlıdır; Ancak, yüksek yoğunluklu hücre kültürü inhibe edebilir14. Ayrıca, hidrojellerin gelen hasat hücreleri aşağı analiz karmaşıklığa neden olabilir, hasat yöntemlerinin potansiyel zararlı etkileri nedeniyle15. Mikrofluidik cihazlar, diğer taraftan, aynı cihaz içinde ve hücre kültürü için en az reaktif tüketimi ile fizyolojik olarak ilgili ölçeklerde çıkış algılaması için izin mikroölçekli cihazlar, azalma reaksiyon süresi, minimize atık ve hızlı difüzyon14. Bu özellikleri onları uyuşturucu toksisitesi, etkinliği ve farmakokinetiği araştırmak için umut verici platformlar olun. Ancak, verimli, ölçülebilir, reproducible ve Kullanıcı Dostu 3D hücre kültürünün zorlukları, hem de, hantal ve pahalı pompalama sistemleri yüksek verimlilik araştırma10mikrofluidik uygulamalar kısıtlı vardır. Verimli algılama kurulumları ve alanlarda potansiyel olarak zor uygulama da mikrofluidik sistemlerin yaygın benimsenmesini engelledi10.
Aksine, dönen mikserler (nutators), ultra-düşük ataşman plakaları ve asılı damlacıklar içinde olmayan-yapışmaz koşullarda oluşturulan küreler Kullanıcı tanımlı matris bileşenleri içermez. Bu metodolojiler özellikle yumurtalı kanserleri incelemek için ilgilidir, çünkü non-yapışkanlık koşullar, kürlerin periton kavite içinde büyümesini sağlayan koşulların temsilcisidir5. Bu olmayan-yapışmaz kültür yöntemleri içinde, nutator ve asılı damla küreler yüksek sıkıştırma sergiler gösterilmiştir, remodeling, ve kemoterapi Ultra düşük ataşman plakaları oluşturulan küreler karşılaştırıldığında, artan fizyolojik düşündürmektedir alaka16,17,18,19. Daha küçük iyi boyutlarda ve minimum gerekli hücre numaralarından yüksek verim taraması için artan kapasite nedeniyle, asılı damla plaklarda küroid üretimi ilaç taraması için ideal bir platformdur. Burada, 384 içinde ayarlanabilir bir 3D fizyolojik platform sunuyoruz-iyi asılı damla plakaları, bu uygulama kolay ve yüksek akış analizi için yüksek verim, yumurtalı kanser ve yumurtalı CSCs üst verimlilik ilaç taraması için ideal hale.
3D fizyolojik platformumuz, fizyolojik hücre-hücre kontakları, difüzyon degradeleri, hücre yoğunlukları ve doğal olarak üretilen ECM proteinleri dahil olmak üzere 3D kültürünün tüm avantajlarını sağlar ve bu da gerçekçi ilaç yanıtlarını16' ya katkıda bulunabilir, 17,18,19. Buna ek olarak, hasta türevi CSCs ile bu küreler oluşturarak, hasta tümör içinde bulunan heterojenlik üstesinden gelmek için, aynı anda birçok teknik çoğaltır ile ilaçlar1 hasta özel tepkiler belirlemek edebiliyoruz örnekleri20. Ayrıca, 3D kültür CSC nüfusu3,16 bakımını artırmak için gösterilmiştir ve böylece asit7zenginleştirilmiş CSC nüfus temsilcisi. Bu kolay akış analizi ile birlikte, canlılığı ve CSC oranlarında akış sitometri analizi de dahil olmak üzere CSC en iyi değerlendirme için ilaç etkinliğini hedefleme sağlar. Son olarak, bu fizyolojik platform, deney sırasında birden çok zaman noktasında görüntüleme, hücre ölümü ve proliferasyon, hücre organizasyonu ve immünhistokimya ile morfolojinin değerlendirilmesi, ELıSA ile çözünür sinyalizasyon ile uyumludur Orta, akış sitometri ile hücre fenotipleri, ve gen ifadesi aşağıdaki PCR.

<table><tbody><tr><td>% 0.25 tripsin-EDTA</td><td>Gibco</td><td>ILT25200056</td><td></td></tr><tr><td>10 mL serolojik pipet</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-678-11E</td><td></td></tr><tr><td>10.000 cSt Si yağı</td><td>Millipore Sigma</td><td>63148-62-9</td><td>Histogel gibi doku işleme jellerinin kalıptan çıkarılmasını kolaylaştırmak için sferoid dizi kalıbını kaplamak için kullanılır.</td></tr><tr><td>100 mm doku kültürü kabı</td><td>Thermo Scientific</td><td>130182</td><td></td></tr><tr><td>15 mL konik tüp</td><td>Celltreat</td><td>FL4021</td><td></td></tr><tr>Serumsuz Orta <td>Gibco</td><td>11965-092</td><td></td><td>için 1x</td></tr><tr><td>DMEM Serumsuz Orta için 1x F12</td><td>Gibco</td><td>11765-054</td><td></td></tr><tr><td>1x fosfat tamponlu salin (PBS)</td><td>Gibco</td><td>ILT10010023</td><td></td></tr><tr><td>4',6- diamidino-2-fenilindol (DAPI)</td> <td>Thermo Fisher</td><td>D1306</td><td></td></tr><tr><td>40 ve mikro; m filtre</td><td>Fisher Scientific</td><td>22363547</td><td></td></tr><tr><td>6 kuyulu plaka</td><td>Fisher Scientific</td><td>353046</td><td></td></tr><tr><td>Accutase</td><td>Yenilikçi Hücre Teknolojileri A.Ş.</td><td>1449</td><td>Proteolitik ve kollajenolitik enzimlerden oluşan nazik bir hücre ayrılma enzimi.</td></tr><tr><td>ACK Lysing Buffer</td><td>Thermo Scientific</td><td>A1049201</td><td></td></tr><tr><td>alamarBlue</td><td>Invitrogen</td><td>DAL1025</td><td>Resazurin boyası, resazurini yüksek oranda floresan olan resorufin'e indirgeme yeteneklerine dayalı olarak hücrelerin canlılığını ve çoğalmasını ölçmek için kullanılır.</td></tr><tr><td>ALDEFLUOR tahlil kiti</td><td>Kök Hücre Teknolojisi</td><td>1700</td><td>Kiti, kanser kök hücrelerinin bir göstergesi olan yüksek seviyelerde aldehit dehidrojenaz eksprese eden kök ve progenitör hücreleri tanımlamak için. Kit, ALDEFLUOR Reaktifi, DEAB, Hidroklorik Asit, Dimetilsülfoksit ve ALDEFLUOR Test Tamponundan oluşur.</td></tr><tr><td>ALDEFLUOR Dietilaminobenzaldehit (DEAB)</td><td>Kök Hücre Teknolojisi</td><td>1705</td><td>Dietilaminobenzaldehit (DEAB), spesifik olmayan ALDH boyamasını belirlemek için kullanılan bir ALDH izozim inhibitörüdür.</td></tr><tr><td>Andor iXon x3 CCD Kamera</td><td>Oxford</td> <td>Instruments-Antibiyotikler</td><td></td></tr> <tr><td>ve Antimikotikler</td><td>Gibco</td><td>15240-062</td><td></td></tr><tr><td>APC-izotip IgG2b</td><td>Miltenyi biotec</td><td>130-092-217</td><td>IgG2b antikorlarının spesifik olmayan boyanmasını ölçmek için izotip kontrolü.</td></tr><tr><td>B27 Takviyesi</td><td>Gibco</td><td>17504044</td><td></td></tr><tr><td>temel Fibroblast Büyüme Faktörü</td><td>Kök Hücre Teknolojileri</td><td>78003.1</td><td></td></tr><tr><td>BD Lo-Dose U-100 İnsülin Şırıngaları</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-826-79</td><td></td></tr><tr><td>BioTek Synergy HT Mikroplaka Okuyucu</td><td>BioTek</td><td>7091000</td><td></td></tr><tr><td>CD133-APC</td><td>Miltenyi biotec</td><td>130-113-184</td><td>Bir kanser kök hücre belirteci olan CD133'ü hedefleyen floresan antikor.</td></tr><tr><td>cellSens Dimension Software</td><td>Olympus</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cisplatin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4394</td><td>DNA'yı bozan bir alkilleyici ajan olarak işlev gören platin bazlı kemoterapi ajanı.</td></tr><tr><td>DAPI (4 ',6-Diamidino-2-Fenilindol, Dihidroklorür)</td> <td>İnvitrojen</td><td>D1306</td><td></td></tr><tr><td>Epidermal Büyüme Faktörü</td><td>Gibco</td><td>PHG0311</td><td></td></tr><tr><td>EVOS XL Çekirdek Hücre Görüntüleme Sistemi</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>AME3300</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Sığır Serumu - premium (FBS)</td><td>Atlanta Biologicals</td><td>S11150</td><td></td></tr><tr><td>Ficoll 400</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F4375</td><td></td></tr><tr><td>Hemacytometer</td><td>Hausser Scientific</td><td>1490</td><td></td></tr><tr><td>Histogel</td><td>Thermo Scientific</td><td>HG-4000-012</td><td>Lekelenme üzerine numunenin etrafındaki renk bozulmasını önlerken, numuneye nüfuz edebilen ve jel içinde tutabilen doku işleme jeli.</td></tr><tr><td>İnsan Yağ Kaynaklı Mezenkimal Kök Hücreler</td><td>Lonza</td><td>PT-5006</td><td></td></tr><tr><td>İnsan Mikrovasküler Endotel Hücreleri</td><td>Lonza</td><td>CC2543</td><td></td></tr><tr><td>İnsülin-Transferrin-Selenyum Takviyesi</td><td>Gibco</td><td>51500-056</td><td></td></tr><tr><td>Canlı / Ölü canlılık kiti</td> Canlı <td>(kalsein-) ve ölü hücrelerin (Ethidium Homodimer-1) floresan bazlı tespiti için</td> <td>Invitrogen</td><td>L3224</td> Kiti.</tr><tr><td>MEM Esansiyel Olmayan Amino Asitler</td><td>Gibco</td><td>11140-050</td><td></td></tr><tr><td>MetaMorph 7.8 Yazılımı</td><td>Moleküler</td> <td>Cihazlar-Olympus</td><td></td></tr> <tr><td>IX81 Ters Konfokal Mikroskop</td><td>Olympus-Olympus</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>IX83 Araştırma Ters Mikroskop</td><td>Olympus</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Parafilm M</td><td>Thomas Scientific</td><td>7315D35</td><td>Gaz değişimine izin verirken asılı damla plakalarında damlacık buharlaşmasını sınırlamaya yarayan termoplastik polimer şeritler.</td></tr><tr><td>Perfecta 3D 384 Kuyu Asılı Damla Plakaları</td><td>3D Biomatrix</td><td>HDP1384-8</td><td>Sigma-Aldrich</td></tr><tr><td>phalloidin AlexaFluor488</td><td>Invitrogen</td><td>A12379</td> ile temin edilebilir <td>Phalloidin, sabit hücrelerde F-aktini floresan olarak etiketlemek için kullanılan bir peptittir.</td></tr><tr><td>ProJet 3500 HD Max</td><td>3D</td> <td>Sistemleri-3D</td> <td>yazıcı</td></tr><tr><td>Steril DI su</td><td>Fisher Scientific</td><td>353046</td><td></td></tr><tr><td>Trypan Blue</td><td>Gibco</td><td>15250061</td><td>Azo boyası, canlı hücrelerin hasarlı zarından geçme kabiliyetine dayanarak canlı ve ölü hücreleri ayırt etmek için kullanılır, ancak canlı hücrelerin sağlam zarından geçmez.</td></tr><tr><td>VisiJet M3 Crystal</td><td>3D Systems-3D</td><td></td> <td>baskı için biyouyumlu bir polimer malzeme.</td></tr><tr><td>Yokogawa CSU-X1 Konfokal Tarayıcı Ünitesi</td><td>yokogawa</td><td>-</td><td></td></tr></tbody></table>

fizyolojik hasta, kanser kök hücrelerini hedef alan anti-neoplastik ilaç taraması için 3b kürler türetilmiştir

Physiologic Patient Derived 3D Spheroids for Anti-neoplastic Drug Screening to Target Cancer Stem Cells

Bu protokolde, biz 384 içinde tümör küreler nesil için prosedür anahat-iyi bir fizyolojik temsili mikroortamda anti-kanser terapileri yüksek verimlilik taraması için izin damlacıkları asılı. Biz hasta türetilmiş kanser kök hücre kürleri oluşumunu, yanı sıra, ilaç tedavisi sonrasında ayrıntılı analiz için bu kürlerin manipülasyon özetlemektedir. Özellikle, biz küroid morfoloji, proliferasyon, viability, ilaç toksisitesi, hücre fenotipi ve hücre yerelleştirme veri koleksiyonunu tarif. Bu protokol, 384-iyi asılı bırakma platformu kullanılarak kolayca uygulanan analiz tekniklerine odaklanarak yüksek verimlilik sağlayan ilaç taraması için idealdir. Biz yumurtalık kanser çalışmaları ve kanser kök hücre araştırma bu modelin önemini vurgulamak iken, 384-Well platformu diğer kanser türleri ve hastalık modelleri araştırma için, birçok alana platformun yarar uzanan imkan sağlar. Kişisel ilaç taramasının hızını ve kolayca uygulanan fizyolojik temsili 3D kültürlerle tarama sonuçlarının kalitesini geliştirerek, bu platform yeni terapötik ve hasta spesifik gelişimine yardımcı olmak için tahmin edilmektedir tedavi stratejileri ve böylece geniş kapsamlı klinik etkiye sahiptir.

Hücre hatları veya hasta türevi CSCs ile oluşturulan küreler, asılı damlacıklar içinde bir dizi küçük hücre numarası ile oluşturulabilir (Şekil 2a). Küreler, nadir görülen hasta örneklerinin korunması için izin veren en az 10 hücre ile güvenilir bir şekilde oluşturur. Bu kürlerin içindeki hücreler, fizyolojik hücre hücresi kontakları ve difüzyon oranlarına izin vererek 3 boyutta diğer hücrelerle çevrilidir. Kürlerin içindeki tümör hücreleri, kürlerin zaman içinde boyuttaki genişleymesine ned...

Bu protokol, ilacın belirlenmesi için, hastanın türetildiği kürlerin oluşumunu, proliferasyonun ölçülmesi, sitotoksisite testi, akış sitometri, immünofluoresesans boyama ve konfoksel görüntüleme gibi aşağı akış analizini açıklar. anti-neoplastik terapötik olarak adayların potansiyeli. Bu protokol her hasta ve hastalığın aşaması için spesifik ilaçların tanımlanması ile hassas ilacı destekler.

Fizyolojik hasta, kanser kök hücrelerini hedef alan anti-neoplastik Ilaç taraması için 3B kürler türetilmiştir

In this protocol, we outline the procedure for generation of tumor spheroids within 384-well hanging droplets to allow for high-throughput screening of ...

Protokolümüz 3D hücre kültürü için basit bir yöntem sağlar ve downstream analizi için son derece münasiptir. Bu, heterojen hasta örneklerinin ve bunların spesifik ilaç yanıtlarının değerlendirilmesini kolaylaştırır. Bu tekniğin avantajı, küresel lerin küçük hücre sayılarından oluşabilmesi, hem az sayıda birincil numunenin korunmasına hem de hastaya özgü ilaç yanıtları için yüksek iş elde taramasına olanak sağlamasıdır.Asılı damla modeli 3D ilaç difüzyonu ile fizyolojik bir ortam oluşturur ve tümör aşamasına karşılık gelen yanıtlar yapar. Bu hedeflenen tedaviler ve hastaya özel tedavilerin geliştirilmesine olanak sağlar. Bu yöntem yumurtalık kanseri, heterojenlik ve kemo direnci gelişimi için idealdir.Ancak, aynı zamanda diğer kanserler ve ilaca dirençli hücre popülasyonları incelemek için kullanılabilir. Spheroidleri kaplamayaparken, pipet hassas hacimleri önemlidir. Bu küresel ler arasında tutarlılık sağlar.Spheroids ve ilgili damlacıkları doğal olarak kırılgan ve kolayca uygun kullanım olmadan kaybolur, bu nedenle nasıl uygun plaka, korumak ve asılı bir damla plaka analiz gösterecektir. Bu prosedürü gösteren Michael Bregenzer, bizim laboratuvardan bir lisansüstü öğrenci olacaktır

physiologic-patient-derived-3d-spheroids-for-anti-neoplastic-drug

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kanser Araştırmaları

Sulu iki fazlı bir sistem kullanılarak yüksek verimli 96 oyuklu plaka formatında kanser hücresi sferoidlerinin robotik baskısı için bir protokol sunulmaktadır.

İlaç test için bir sulu iki-fazlı bir sistem ile Cancer Celi sferoitlerin Robotik üretimi

Klinik öncesi testlerden insan denemelerine geçiş yapan yeni ilaç hedeflerinin belirlenmesi bilimsel bir önceliktir. Bu amaçla, burada, gen tükenmesinin kanser hücre hattı sferoidleri üzerindeki etkisini incelemek için işlevsel bir genomik yaklaşımı tanımlıyoruz, bu da insan kanserlerini in vivo olarak daha uygun bir şekilde modelliyor.

İşlevsel Genomik Tarama kullanılması Kanser Hücre Sfero Kültürleri Potansiyel Yeni İlaç Hedefleri Belirlemek İçin

Terapi değerlendirilmesi amaçlayan deneysel tedavi rejimleri hücre hatları, baş ve boyun Skuamöz hücreli karsinom için geçerli standart test etmemizi sağlayan bir küresel tabanlı, üç boyutlu vitro modeli evrimi tarif duyarlılık ve direnci Primer hücre insan örnekler üzerinden üzerinde içinde belgili tanımlık gelecek.

Baş ve boyun Skuamöz hücreli karsinom için bir küresel tabanlı 3D hücre kültür modelinde test terapi

Hastalık göstergeler çok çeşitli, daha fizyolojik ilgili modelleri gelişmiş ve içine uygulanan ilaç bulma programları davranıyorsun. Burada açıklanan yeni modeli sistemi pulcuklarının kültürlü ve yeni Onkoloji uyuşturucu aramak için bir yüksek üretilen iş 1536-şey plaka tabanlı sistem festivalde nasıl üç boyutlu tümör göstermektedir.

Yüksek işlem hacmi üç boyutlu tümör pulcuklarının nesil uyuşturucu taraması

Bu iletişim kuralı immunotherapeutic yeniden yönlendirilen T-hücre (araba T-hücreli) sitotoksisite karşı 3D yapılandırılmış kanserli hücreleri (pulcuklarının) gerçek zamanlı olarak değerlendirmek için tasarlanmıştır.

Bir küresel öldürme tahlil araba T hücreleri tarafından

Optik koherens tomografi (OCT), üç boyutlu görüntüleme teknolojisi, izlemek ve çok hücreli tümör pulcuklarının büyüme kinetik karakterize etmek için kullanıldı. Tümör pulcuklarının yaklaşım ve içsel optik zayıflama Karşıtlık'dayalı pulcuklarının etiket içermeyen ölü dokuyu algılama sayma Voksel kullanarak hassas hacimsel miktar gösterdi.

Boyuna morfolojik ve fizyolojik izleme optik koherens tomografi kullanarak üç boyutlu tümör pulcuklarının

Tümör hücreleri ve stromal fibroblastların heterotipik etkileşimine dayanan üç boyutlu yeni bir küresel model oluşturulmuştur. Burada, spheroidlerin oluşumunu görselleştirmek için tümör hücreleri ve stromal fibroblastlar, hızlandırılmış görüntüleme ve konfokal mikroskopi ortak kültürünü satıyoruz. Bu üç boyutlu model tümör-stroma etkileşimleri ve test kanser terapötik çalışma için ilgili bir platform sunuyor.

Tümör-Stroma Etkileşimi ve İlaç Keşfini İncelemek İçin Yeni Bir Stromal Fibroblast-Modüle 3D Tümör Küresel Modeli

Bu protokol, Caco2 kolon adenokarsinom hücrelerinden üç boyutlu küreseller üretmek ve yetiştirmek için yeni, sağlam ve tekrarlanabilir bir kültür sistemi sunar. Sonuçlar, kemoterapiye yanıt da dahil olmak üzere kanser kök hücre biyolojisini incelemek için bu yaklaşımın uygunluğu için ilk kavram kanıtını sağlar.

Kolon Kanseri Kök Hücrelerini İncelemek İçin Üç Boyutlu Bir Küresel Model

Bu protokol, primer kanser hücrelerinden 3D tümör kültürü modelleri oluşturmayı ve hücre canlılık testleri ve mikroskobik incelemeler kullanarak ilaçlara duyarlılıklarını değerlendirmeyi açıklamaktadır.

Hasta Kaynaklı Tümör Örneklerinden 3 Boyutlu Sferoidlerin Oluşturulması ve İlaçlara Duyarlılıklarının Değerlendirilmesi

Bu makalede, üç boyutlu tümör sferoidlerinin oluşturulması için standartlaştırılmış bir yöntem gösterilmektedir. Otomatik bir görüntüleme sistemi kullanarak küresel gözlem ve görüntü tabanlı derin öğrenme analizi için bir strateji de açıklanmaktadır.

İlaç Değerlendirme Çalışmaları için 3D Tümör Sferoidlerinin Üretimi

Burada, antitümör antikorların önemli bir kanser hücresi öldürme mekanizması olan ADCC mekanizmasını modüle eden bileşikleri tanımlamak için bir yöntem sunuyoruz. NK hücrelerinin sitotoksik etkisi, Trastuzumab varlığında meme kanseri hücre sferoidlerinde ölçülür. Görüntü analizi, sferoidlerdeki canlı ve ölü öldürücü ve hedef hücreleri tanımlar.

Bir Tümör Sferoid Modelinde Antikora Bağımlı Hücresel Sitotoksisitenin Ölçülmesi: İlaç Keşfi Uygulaması

Keşfedin, asılı damla modeliyle hasta kaynaklı kanser kök hücrelerinden 3D küreler oluşturma ve yüksek verimli ilaç taraması yapma yöntemini. Bu teknik, kişiselleştirilmiş tedavi stratejileri geliştirmeyi sağlar.

Fizyolojik hasta, kanser kök hücrelerini hedef alan anti-neoplastik Ilaç taraması için 3B kürler türetilmiştir

Daha fazla video keşfet