Name: İçinde vivo beyin omurilik akışkan taşınması floresan Makroskopisi kullanarak bozulmamış fare kafatası aracılığıyla görüntüleme (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-07-29T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 22 s
Description: Öğrenin, canlı farelerde bozulmamış kafatası üzerinden floresan makroskopisi ile beyin omurilik akışkanı taşınmasını gerçek zamanlı görüntüleme yöntemini. Bu teknik, glimfatik sistem dinamiklerini düşük maliyetle incelemeyi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma Ulusal Sağlık Enstitüsü nörolojik hastalıklar ve Inme ve Ulusal Enstitüsü yaşlanma (ABD Ulusal sağlığı Enstitüleri tarafından finanse edildi; R01NS100366 ve RF1AG057575-MN), Fondation Leducq transatlantik mükemmellik ağları programı ve AB Horizon 2020 araştırma ve yenilik programı (Grant No. 666881; SVDs @ Target). Biz de grafik çizimler ile uzman yardım için dan Xue teşekkür etmek istiyorum.

Tüm deneyler, Rochester Üniversitesi 'nde hayvan kaynakları (UCAR, protokol No. 2011-023) üniversite Komitesi tarafından onaylandı ve Laboratuvar hayvanlarının bakımı ve kullanımı için NıH Kılavuzu 'na göre gerçekleştirilir.
1. sarnka Magna kanül, baş plaka ve baş tutucu hazırlanması
<ol><li>Ameliyattan önce tüm cerrahi aletleri ve kafa plakalarını sterilize edin. Not: floresan izleyiciler doğrudan CSF içine bir sarnısı Magna kanülasyon yoluyla teslim edilir. Bu yordamla ilgili ayrıntılı talimatlar için lütfen Xavier ve Al9' a bakın.</li>
	<li>Kısaca, bir iğne sürücüsü kullanarak, bir 30G x 12,7 mm (1/2 inç) iğne, aşağı yol 3/4 ucu kırmak ve polietilen 10 (PE10) boru (yaklaşık 45 cm uzunluğunda) bir ucuna iğne künt ucunu yerleştirin. Sadece eğim PE10 boru kenarlığının dışarı çıkıntılı emin olun.</li>
	<li>Break off 1/4 başka bir 30G iğne eğimli ucunu ve PE10 tüp diğer ucuna kalan iğne künt ucunu yerleştirin, plastik Luer-Lock hala bağlı.</li>
	<li>100 μL cam şırıngayı steril, suni CSF (aCSF: 126 mM NaCl, 2,5 mM KCl, 1,25 mM NaH2Po4, 2 mm MgSO4, 2 mM CAcl2, 10 mm glikoz ve 26 mm NaHCO3) ile doldurun.</li>
	<li>Şırıngayı çizginin sonuna takın ve eğimli iğne ucuna ulaşıncaya kadar aCSF ile doldurun. Bir hava sütunu değişken infüzyon hacimlere daha eğilimli olduğu için şırınga, hava değil, aCSF ile geri doldurulur önemlidir.</li>
	<li>Kronik deneyler için, hattı aCSF ile dolu bırakın ve adım 1,7 atlayın.</li>
	<li>Akut deneyler için, şırınga bir infüzyon pompası üzerine yerleştirin ve yaklaşık 5 mm hava çekme, hangi karıştırma önleyecek. Daha sonra, deneme için istenen toplam izleyici hacmini (ölü alan kayıpları nedeniyle% 20 ekstra tavsiye edilir) geri çekin. Not: PE10 boru yeterince uzun olmalıdır böylece hava balonu Tracer yüklerken cam şırınga plastik manşet girmez. Tipik bir deney için, protokol Alexa Fluor 647 (BSA-647) ile% 0,5 ' de acsf seyreltilmiş 10 μL Sığır serum albümin kullanır.</li>
	<li>Baş plakasının baş tutucuya uyduğunu ve kullanılan fare için doğru boyutta olduğunu onaylayın. Anatomik belirteçler bu sağlamak için: pencerenin üst sınır interoküler hattı ile hizalar ve posterior sınır oksipital arması rostral düşüyor. Not: Paslanmaz çelik kafa plakaları sterilize edilmiş ve yeniden kullanılabilir. Çoğu siyanoakrilat karışımı, bir aseton çözeltisi ile çıkarılabilir.</li>
</ol>2. cerrahi prosedür
<ol><li>Tartmak ve fare anestezize (örneğin ketamin/xylazine; 100 mg/kg ketamin, 10 mg/kg xylazine; ı.g).</li>
	<li>Fare artık bir ayak çimdikine yanıt verdikten sonra, boyun ve kafa steril su ile nemlendirin ve Clippers kullanarak tıraş. Bir kez alan traş, herhangi bir kalıntı saç kaldırmak için tekrar bir alkol çubukla ile alanı silin. Not: kırpmadan önce kürk nemlendirme, kesi sonrasında görüntüleme penceresindeki saç miktarını önemli ölçüde azaltır.</li>
	<li>Fare, sıcaklık kontrollü bir Pad üzerine bir stereotaktik çerçevede yerleştirin ve onlar kuruması sağlamak için fare gözlerine petrol oftalmik merhem uygulayın.</li>
	<li>Bir klorheksidin Swab ile maruz cilt temizleyin. 2 dakika sonra, bir alkol silme ile klorhekidin çıkarın. Son olarak, kurumaya bırakılabilen iyot çözeltisi uygulayın.</li>
	<li>Kafatası ve boyun üstüne subkutan analjezi (0,25% Bupivacaine HCl) enjekte.</li>
	<li>Boynun oksipital arması kapsayan kısmından başlayarak, aşırı deri içinde bir orta çizgi kesim yapmak ve Interorbital hat doğru rostrally devam. Geçici kas kafatasına ekler sınırına yanal incise. Hem frontal hem de parietal kemikleri ortaya çıkarmak için fusiform kesi tüm cilt çıkarın. Dikkat: arkasındaki sinüs gözleri ve posterior yüz ven büyük dalları Pinna için rostral göz kaudal yatıyor. Bu yapıları yedek kesi yaparken dikkatli olun. Bu durumda, birkaç dakika boyunca steril bir pamuklu çubukla hemostaz koruyarak kanamayı durdurun ve devam edin.</li>
	<li>Steril tuz ile kafatası irrigate ve bu görüntü kalitesi ile müdahale edecektir çünkü enkaz ve saç ücretsiz böylece yüzey pamuk bezlerden kullanarak temizleyin. Kafatası saydamlığı en iyi periost ve aşırı fasya sağlam bırakarak korunur. Not: Bu yapılar yanlışlıkla kaldırılırsa, kafatası zaman içinde kuru ve opak olabilir. ACSF ile yeniden nemlendirin veya akut deneylerde kafatası yansımasını azaltmak için parafin yağı ve gliserol karışımı kullanın21.</li>
	<li>Bu prosedürün cerrahi detayları için Cisterna Magna kanül eklemeye devam edin, Xavier ve Al9' a bakın.</li>
	<li>CM kanül taktıktan sonra, sınır etrafında baş plaka ventral tarafına siyanoacrylate tutkal ile diş çimento karışımı uygulayın ve böylece kafa plakasının anterior sınır burun kemik ve Po posterior ucu ile hizalar kafatası üzerine yerleştirin sterior sınır, interparietal kemik anterior yönü ile hizalanır, sagittal sütür (orta çizgi) pencere göre ortalanmış ve düz emin olmak (Şekil 1B).</li>
	<li>Tutkal Hızlandırıcı birkaç damla kullanarak baş plaka konumunu düzeltin. Çimento karışımı ile kalan boşlukları doldurun ve Hızlandırıcı ile tedavi. DIKKAT: siyanoakrilatenin fare gözleri ile temas etmediğini veya görüntüleme penceresini engellemesini sağlayın.</li>
	<li>Bu taşıma sırasında veya fare uyanırken ayrılmış hale gelmez emin olmak için baş plaka için CM kanül tutkal.</li>
	<li>Akut deneyler için adım 2,16 ' e geçin.</li>
	<li>Kronik deneyler için, açık kafatasına ince bir tabakalı siyanoakrilat tutkal uygulayın, bu görüntüleme müdahale edecek gibi kabarcıklar oluşturmak için dikkatli olmak. Tutkal kafatası için koruma sağlar ve görüntüleme ile müdahale etmez. Tutkal maruz kafatası kesi sınırında cilt için tüm yol kapsar emin olun.</li>
	<li>Acsf dolu PE10 tüpünü cm 'den 2-3 cm 'ye tutmak için hemostat kelepçe kullanın ve yüksek sıcaklıklı koter ucu ile çizgiyi keser. Bir kez ayrılır, kanül mühür erimiş PE10 boru Düzleştir. DIKKAT: kanül mühürleninceye kadar kelepçeyi serbest bırakmayın ve bir bos fistül önlemek için boru içinde hiçbir sızıntı olduğunu teyit emin olun.</li>
	<li>Karprofen Yönet (her 24 saat 3 gün boyunca 5 mg/kg; ı.y veya s.c.) ve fareyi sıcaklık kontrollü, tek Konaklı bir kafeye döndürmeniz ve görüntülemenin en az 24 saat önce kurtarmasına izin vermenizi sağlar. Sternal recumbency korumak için yeterli bilinç geri gelene kadar fareyi gözetimsiz bırakmayın. Bozulmamış kraniyal pencereler birkaç hafta boyunca istikrarlı kalır. Not: kronik deney burada duraklatılabilir. DIKKAT: bazı postoperatif komplikasyonlar şunlardır: sefohematom/Subgaleal hematomas, bos fistül, ve enfeksiyon.</li>
	<li>Akut deneyler için, kafatasının sabit bir pozisyonda olması için fareyi baş plakasını kullanarak baş tutucuya yerleştirin. Anestezi seviyesini kontrol etmek ve fare altında bir Isıtma Pad yerleştirmek için emin olun. Fare artık makrokapsama götürülmeye hazırdır. DIKKAT: fareyi dikkatle bir sepetteki infüzyon pompası ile birlikte taşıma. CM kanülasyon kesilirse, İntrakraniyal basınçta bir damla neden olur ve herhangi bir CSF sızıntısı deneysel sonuçları değiştirecek.</li>
</ol>3. fareyi görüntüleme için hazırlama
Not: protokol, görüntüleme denemesinde bir anestezize (adım 3,1 ' de başlangıç) veya uyanık (Step 3,2) faresinde gerçekleştirilecek olup olmadığına bağlı olarak değişir.
<ol><li>Anestezize fareler<ol>
<li>Baş tutucuyu makrokapsamın aşamasına yerleştirin, şırınga pompasından CM kanuluna kadar herhangi bir bükülme olmadığından ve bu izleyici infüzyonu etkileyebileceği için gergin olmadığından emin olun.</li>
		<li>Solunum hızı ve mukoza zarlarının pembe renklenme gözlemlemek, iyi oksijenasyon gösteren. Gerekirse hidrasyon seviyesini güvenli hale getirmek için tuz subkutan enjekte edilir. Hayvan yeterli anestezize ve yeniden doz gerekirse emin olmak için kontrol edin.</li>
		<li>Makrokapsam kamerayı ve LED 'i açın ve LıVE moduna başlayın.</li>
		<li>Görüntüleme alanının büyümesini onaylamak için alanın üst kısmındaki nazofrontal sütür ve altta bulunan lambdoid sütür açıkça görüntülenebilir, sagittal sütür paralel ve görüntünün ortasına ortalanır (Şekil 1C). Yerine bir kez, bant ile makrokapsam aşamasında baş tutucu güvenli.</li>
		<li>Makrokapsama maruz kalan kafatasına odaklan. Nispeten büyük bir alan derinliğine sahip makroskoplara rağmen, fare kafatasının eğriliği sadece belirli bir alanın odaklanmasını sağlar. En iyi sonuçlar, odak uçağı, koronal sütürler posterior parietal kemiklerin lateral taraflarında bulunduğunda elde edilir. Not: Bu, çoğu CSF girişi oluştuğu orta serebral arterlerin (MCA) konumdur (Şekil 1D, E)10.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Uyanık fareler<ol>
<li>Görüntüleme seansından önce hayvanların baş plaka cerrahisinde en az 24 saat iyileşmesi için izin verin. Daha uzun kurtarma süreleri (5-7 gün) de önerilir. Bu süre boyunca, kurtarma dönemi süresince günde 0,5-1 h için koruma tüpünde sahnede sabit kafa olmak için fareyi eğitmek. Not: habituation fare anestezi olmadan baş tutucuya iliştirilmesi ve gerçek deney sırasında stres ve anksiyete azaltır sağlar. Bu uygulanabilir değilse ve anestezi denemeye müdahale etmez, bir indüksiyon dozu inhale anestezik (örneğin, Isoflurane 2% at 1-2 L/min O2 debi) hızlı bir şekilde baş aşamasına fareyi eklemek için kullanılabilir.</li>
		<li>Fare baş tutucuya sabitlendikten sonra ve koruma tüpünün içinde olan Steps 3.1.1-3.1.5.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. floresan CSF izleyiciler infüzyon
<ol><li>
Akut CM kanülasyon
	<ol>
<li>Adım 1,6 içinde Sarnıcı Magna yerleştirilmeden önce izleyici zaten kanül yüklendi beri, istenen oran ve hacim için infüzyon pompası ayarlayın. Rutin olarak kullanılan infüzyon paradigmaları 1-2 μL/dak 'da 5-10 μL 'dir, ancak bu parametreler belirli denemeye veya hayvanın boyutuna ve yaşına bağlı olarak ayarlanabilir.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Kronik CM kanülasyon
	<ol>
<li>Görüntüleme oturumuna başlamadan önce, infüzyon hattını izleyicileri teslim etmek için hazırlamak üzere akut deneyler için 1.2-1.7 adımlarına uyun.</li>
		<li>Hat hazırlandıktan sonra, hemostat kelepçe kullanarak kronik CM kanülün mühürlü ucunu kesti. Adım 4.2.1 ' de hazırlanan çizginden iğne alın ve yavaşça kanül içine yerleştirin. Kelepçeyi serbest bırakın ve şırınga pompasını kullanarak, izleme elemanı CM 'de implante edilen iğneye ulaşana kadar, deney için istenen infüzyon oranıyla (örn. 2 μL/dak) CSF izleyici 'yi ilerlet. DIKKAT: Eğer iğne, hattı bağlarken boru üzerinden Sapırsa, iğneyi çıkarın, deldi segmenti kesip bu adımı tekrarlayın. PE10 tüpteki herhangi bir gözyaşı bir sızıntı neden olur ve deney sonuçlarını etkiler.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. Imaging Session kurulumu
<ol><li>İnfaşlık edilen floresan İzleyicine dayanarak, her kanal için uyarma dalga boyu ve pozlama süresini belirleyin. Zaman atlamalı görüntüleme temporal çözünürlüğünü maksimize etmek için izleyici görselleştirmek için gereken en kısa pozlama süresini seçin. Bu pozlama süresi, farklı hayvanlar arasında CSF taşımacılığı karşılaştırmak amaçlayan tüm sonraki deneyler için kullanılacaktır. Not: bir ipucu pozlama süresini ayarlamak için CM satırında izleyici kullanmaktır. Bu yararlı bir ilk yaklaşım olsa da, bu zaman içinde optimize edilmelidir.</li>
	<li>Denemenin süresini ve görüntülerin elde edilecek aralıklarını seçin. Deney normal olarak son 30-60 arasında en az hangi faz glymphatic taşıma ilgi olduğunu bağlı olarak. 1 kare/dak ve daha hızlı kare hızları çoğu deney için yeterlidir.</li>
	<li>Dosya adını ve kaydetme dizinini ayarlayın.</li>
	<li>Diğer değişkenlerin eşzamanlı olarak edinilmesi (örn. Elektrokardiyogram, arter kan basıncı, Elektrofizyoloji) yanı sıra görüntüleme toplanacak ise, makrokapsam ve pompa veri edinme yazılımı ile tetiklenecek şekilde programlanabilmektedir. Bir sonraki adıma geçmeden önce makrokapsamdaki tetikleyici fonksiyonunun doğru olup olmadığını kontrol edin.</li>
</ol>6. Transkraniyal optik görüntüleme deneyi
<ol><li>İzleyici infüzyon ve görüntüleme aynı anda başlatın.</li>
	<li>Herhangi bir sızıntı belirtisi için CM kanülünü ve PE10 tüpünü rutin olarak kontrol edin. CM 'de herhangi bir izleyici sızıntısı varsa, bu denemenin sonuçları hariç tutulmalıdır. Not: Tracer serebellum birikmeye başlar ve MCA glymphatic yol seyahat etmez, bu CM kanül beyine enjekte edilmiştir muhtemeldir. Bu veriler eklenmemelidir.</li>
	<li>Akut deneyler için, denemenin tamamlandıktan sonra, fareyi mikroskop 'dan çıkarın ve hala yeterli anestezinin olduğunu kontrol edin. Hızlı bir şekilde fareyi dökür ve beyin dokusunu hasat edin. 4 °c ' de bir gecede% 4 civarında formaldehite (PFA) içinde beyni onarın.<ol>
<li>Kronik deneyler için, görüntüleme tamamlandıktan sonra, cm çizgisini kanüden çıkarın, steril acsf ile yıkayın ve cm kanülünü yüksek sıcaklıklı koter ucu ile yeniden mühürleyin. Fare baş standı çıkarın ve kafesine geri dönün. Daha fazla görüntüleme gerekli değildir ve sonra adım 6,3 takip kadar bu işlemi yineleyin.</li>
	</ol>
</li>
</ol>7. veri analizi
Not: CSF ön izleme gibi MATLAB tabanlı analizler, bu görüntüleme veri kümeleri10,22' de Tracer cephede büyük miktarlarda nicel veri ayıklayabilir. Ancak, bu dosya türleri de kolayca ithal ve Fiji23gibi açık kaynak görüntü analiz yazılımı analiz edilebilir.
<ol><li>Bio-formatları içe aktarma aracını kullanarak resim yığınlarını Fiji 'ye aktarın. Bu işlev, zaman ve piksel çözünürlüğünü içeren dosya meta verilerini korur. Görüntü yığını bir. tiff dosyası olarak kaydedin.</li>
	<li>Çokgen seçim aracını kullanarak kafatası veya ilgi alanı etrafında bir ilgi bölgesi (YG) el ile çizin. Örneğin, Şekil 1G 'de, travmalı bir beyin yaralanması sonrasında ipsilateral ve kontralateral Yarımküre için ayrı bir YG çekildi. YG 'yi YG yöneticisine (Analiz > Araçları > YG Manager) eklediğinizden emin olun ve kaydedin. Not: CSF taşıma iki ana şekilde nicelik olabilir: 1) bir eşik uygulanmadan sonra YG veya Toplam alan (mm2) yüzdesi olarak ifade edilen zaman veya 2) aküle alanı ortalama floresan yoğunluğu. İkinci Yöntem (Şekil 1s) bir sonraki adımda açıklanmıştır.</li>
	<li>Eşik seviyesini maksimum floresan ile ayarlayın (görüntü &Gt; Adjust &Gt; Threshold...). Otsu gibi otomatik eşik yöntemleri normalde CSF Tracer tespit iyi. Eşik uygulayın.</li>
	<li>İleriye gitmeden önce, çözümleme &Gt; ayarlama ölçümlerinde Seçenekler alanı ve alan kesiri seçili olduğundan emin olun. Sonra YG Yöneticisi'nde, daha fazla > Çoklu ölçüseçin.</li>
	<li>% Alan değerini, çıktıda YG 'nin alan değerini kullanarak mm2 olarak dönüştürün. % Alan değerleri, dorsal kortikal yüzeyin yüzde 'ini CSF Tracer ile yansıtır.</li>
	<li>Zaman fonksiyonu olarak mm2 ' de CSF Tracer akını arsa.</li>
</ol>

<ol><li>Tumani, H., Huss, A., Bachhuber, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cerebrospinal+fluid+and+barriers+-+anatomic+and+physiologic+considerations%5BTitle%5D)+AND+%22Handbook+of+Clinical+Neurology%22%5BJournal%5D)">The cerebrospinal fluid and barriers - anatomic and physiologic considerations.</a> Handbook of Clinical Neurology. , 21-32 (2017).</li>
<li>Jessen, N. A., Munk, A. S., Lundgaard, I., Nedergaard, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Glymphatic+System%3A+A+Beginner%27s+Guide%5BTitle%5D)+AND+%22Neurochemical+Research%22%5BJournal%5D)">The Glymphatic System: A Beginner's Guide.</a> Neurochemical Research. 40 (12), 2583-2599 (2015).</li>
<li>Iliff, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impairment+of+glymphatic+pathway+function+promotes+tau+pathology+after+traumatic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Impairment of glymphatic pathway function promotes tau pathology after traumatic brain injury.</a> The Journal of Neuroscience. 34 (49), 16180-16193 (2014).</li>
<li>Iliff, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+paravascular+pathway+facilitates+CSF+flow+through+the+brain+parenchyma+and+the+clearance+of+interstitial+solutes%2C+including+amyloid+beta%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">A paravascular pathway facilitates CSF flow through the brain parenchyma and the clearance of interstitial solutes, including amyloid beta.</a> Science Translational Medicine. 4 (147), (2012).</li>
<li>Louveau, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+and+functional+features+of+central+nervous+system+lymphatic+vessels%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Structural and functional features of central nervous system lymphatic vessels.</a> Nature. 523 (7560), 337-341 (2015).</li>
<li>Peng, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Suppression+of+glymphatic+fluid+transport+in+a+mouse+model+of+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiology+of+Disease%22%5BJournal%5D)">Suppression of glymphatic fluid transport in a mouse model of Alzheimer's disease.</a> Neurobiology of Disease. 93, 215-225 (2016).</li>
<li>Da Mesquita,, S,, et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+aspects+of+meningeal+lymphatics+in+ageing+and+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Functional aspects of meningeal lymphatics in ageing and Alzheimer's disease.</a> Nature. 560 (7717), 185-191 (2018).</li>
<li>Gaberel, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impaired+glymphatic+perfusion+after+strokes+revealed+by+contrast-enhanced+MRI%3A+a+new+target+for+fibrinolysis%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Impaired glymphatic perfusion after strokes revealed by contrast-enhanced MRI: a new target for fibrinolysis.</a> Stroke. 45 (10), 3092-3096 (2014).</li>
<li>Xavier, A. L. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cannula+Implantation+into+the+Cisterna+Magna+of+Rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Cannula Implantation into the Cisterna Magna of Rodents.</a> Journal of Visualized Experiments. 10 (135), (2018).</li>
<li>Plog, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcranial+optical+imaging+reveals+a+pathway+for+optimizing+the+delivery+of+immunotherapeutics+to+the+brain%5BTitle%5D)+AND+%22JCI+Insight%22%5BJournal%5D)">Transcranial optical imaging reveals a pathway for optimizing the delivery of immunotherapeutics to the brain.</a> JCI Insight. 3 (23), (2018).</li>
<li>Kress, B. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impairment+of+paravascular+clearance+pathways+in+the+aging+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Neurology%22%5BJournal%5D)">Impairment of paravascular clearance pathways in the aging brain.</a> Annals of Neurology. 76 (6), 845-861 (2014).</li>
<li>Mestre, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+of+cerebrospinal+fluid+is+driven+by+arterial+pulsations+and+is+reduced+in+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Flow of cerebrospinal fluid is driven by arterial pulsations and is reduced in hypertension.</a> Nature Communications. 9 (1), 4878(2018).</li>
<li>Xie, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sleep+drives+metabolite+clearance+from+the+adult+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Sleep drives metabolite clearance from the adult brain.</a> Science. 342 (6156), 373-377 (2013).</li>
<li>Plog, B. A., Nedergaard, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Glymphatic+System%5BTitle%5D)+AND+%22in+Central+Nervous+System+Health+and+Disease%3A+Past%2C+Present%2C+and+Future.+Annual+Review+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">The Glymphatic System.</a> in Central Nervous System Health and Disease: Past, Present, and Future. Annual Review of Pathology. 13, 379-394 (2018).</li>
<li>Iliff, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain-wide+pathway+for+waste+clearance+captured+by+contrast-enhanced+MRI%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Brain-wide pathway for waste clearance captured by contrast-enhanced MRI.</a> Journal of Clinical Investigation. 123 (3), 1299-1309 (2013).</li>
<li>Davoodi-Bojd, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+glymphatic+system+of+the+brain+using+MRI%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroimage%22%5BJournal%5D)">Modeling glymphatic system of the brain using MRI.</a> Neuroimage. 188, 616-627 (2019).</li>
<li>Lee, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Effect+of+Body+Posture+on+Brain+Glymphatic+Transport%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The Effect of Body Posture on Brain Glymphatic Transport.</a> The Journal of Neuroscience. 35 (31), 11034-11044 (2015).</li>
<li>Hablitz, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+glymphatic+influx+is+correlated+with+high+EEG+delta+power+and+low+heart+rate+in+mice+under+anesthesia%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Advances%22%5BJournal%5D)">Increased glymphatic influx is correlated with high EEG delta power and low heart rate in mice under anesthesia.</a> Science Advances. 5 (2), (2019).</li>
<li>Rasmussen, M. K., Mestre, H., Nedergaard, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+glymphatic+pathway+in+neurological+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet+Neurology%22%5BJournal%5D)">The glymphatic pathway in neurological disorders.</a> The Lancet Neurology. 17 (11), 1016-1024 (2018).</li>
<li>Mestre, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aquaporin-4-dependent+glymphatic+solute+transport+in+the+rodent+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Aquaporin-4-dependent glymphatic solute transport in the rodent brain.</a> Elife. 7, (2018).</li>
<li>Monai, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcium+imaging+reveals+glial+involvement+in+transcranial+direct+current+stimulation-induced+plasticity+in+mouse+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Calcium imaging reveals glial involvement in transcranial direct current stimulation-induced plasticity in mouse brain.</a> Nature Communications. 7, 11100(2016).</li>
<li>Munk, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PDGF-B+Is+Required+for+Development+of+the+Glymphatic+System%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">PDGF-B Is Required for Development of the Glymphatic System.</a> Cell Reports. 26 (11), 2955-2969 (2019).</li>
<li>Schindelin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fiji%3A+an+open-source+platform+for+biological-image+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">Fiji: an open-source platform for biological-image analysis.</a> Nature Methods. 9 (7), 676-682 (2012).</li>
<li>Ren, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hit+%26+Run%27+model+of+closed-skull+traumatic+brain+injury+%28TBI%29+reveals+complex+patterns+of+post-traumatic+AQP4+dysregulation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cerebral+Blood+Flow+%26+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Hit & Run' model of closed-skull traumatic brain injury (TBI) reveals complex patterns of post-traumatic AQP4 dysregulation.</a> Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. 33 (6), 834-845 (2013).</li>
<li>Plog, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biomarkers+of+traumatic+injury+are+transported+from+brain+to+blood+via+the+glymphatic+system%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Biomarkers of traumatic injury are transported from brain to blood via the glymphatic system.</a> The Journal of Neuroscience. 35 (2), 518-526 (2015).</li>
<li>Ma, Q., Ineichen, B. V., Detmar, M., Proulx, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Outflow+of+cerebrospinal+fluid+is+predominantly+through+lymphatic+vessels+and+is+reduced+in+aged+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Outflow of cerebrospinal fluid is predominantly through lymphatic vessels and is reduced in aged mice.</a> Nature Communications. 8 (1), 1434(2017).</li>
<li>Roth, T. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcranial+amelioration+of+inflammation+and+cell+death+after+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Transcranial amelioration of inflammation and cell death after brain injury.</a> Nature. 505 (7482), 223-228 (2014).</li>
<li>Xu, H. T., Pan, F., Yang, G., Gan, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Choice+of+cranial+window+type+for+in+vivo+imaging+affects+dendritic+spine+turnover+in+the+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Choice of cranial window type for in vivo imaging affects dendritic spine turnover in the cortex.</a> Nature Neuroscience. 10 (5), 549-551 (2007).</li>
<li>Ma, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+lymphatic+efflux+limits+cerebrospinal+fluid+flow+to+the+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathologica%22%5BJournal%5D)">Rapid lymphatic efflux limits cerebrospinal fluid flow to the brain.</a> Acta Neuropathologica. 137 (1), 151-165 (2019).</li>
<li>Silasi, G., Xiao, D., Vanni, M. P., Chen, A. C., Murphy, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intact+skull+chronic+windows+for+mesoscopic+wide-field+imaging+in+awake+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Intact skull chronic windows for mesoscopic wide-field imaging in awake mice.</a> Journal of Neuroscience Methods. 267, 141-149 (2016).</li>
</ol>

Yazarların ifşa etmesi gereken hiçbir şey yok.

Ticari olarak mevcut floresan makroskopları ve izleyiciler kullanarak canlı farelerde Transkraniyal CSF görüntüleme yapmak için ayrıntılı bir protokol tarif ettik. Bu teknik basit ve minimal-invaziv, henüz nicel. In vivo görüntüleme, CM tesliminden sonra 3H-dextran ve 14C-inulin ve ex vivo koronal kesit ölçümü10' da dahil olmak üzere radyo etiketli izleyicileri sıvı scintbrilasyon sayımı gibi hassas yöntemlerle de ilişkilendirir. 18 yaşınak...

Beyin omurilik sıvısı (CSF) beyinleri ve omuriliği yıkanır ve homeostaz bakımını, besin temini ve intrakranial basıncı düzenleyen1. Subaraknoid uzayda CSF perivasküler boşluklar bir ağ ile beyin girer (PVS) kortikal pial arterlerin çevreleyen ve sonra nüfuz arteriyoller boyunca aşağı akar2. Bir kez parankimat, interstisyel sıvı ile CSF değişimleri (ISF), düşük direnç beyaz madde yolları ve perivenöz alanlar ile beynin dışında amiloid β (Aβ) ve Tau protein agrega gibi zararlı metabolitleri taşıyan2,3 . Bu yol astroglial Aquaporin-4 (AQP4) kanallarına bağlıdır ve bu nedenle glial-lenfatik (glymphatic) sistemi4olarak adlandırılır. Nörofobik atık ürünleri sonunda kraniyal sinirlerin yakınındaki lenfatik damarlardan ve servikal lenf nodlarına doğru meninglerin üzerinden CSF-ıSF ' d a k i temizlenir5. Bu sistemin başarısızlığı, Alzheimer hastalığı6,7, travmatik beyin hasarı3, iskemik ve hemorajik inme8gibi çeşitli nörolojik hastalıklarda karışmıştır.
CSF taşımacılığı, (cm)9,10 ve geçmişte glymphatic çalışmalar özellikle iki foton mikroskopisi4,11,12kullanılmış olan Cisterna içinde izleyicileri infaklama tarafından görselleştirilebilir 13, manyetik rezonans görüntüleme (MRG)14,15,16,17, ve ex vivo görüntüleme3,6,11, 18 . Tracer kinetiği değerlendirmek için. İki foton mikroskobu, PVSs 'deki CSF izleyicileri ve yüksek uzamsal çözünürlüğe bağlı olarak parankimat hakkında ayrıntılı görüntüleme için uygun bir yöntemdir, ancak dar bir bakış alanı vardır ve invaziv bir kafatası penceresi veya kafatası inceltme gerektirir. Ex vivo görüntüleme, immünhistokimya ile birlikte, tek hücrelerden tüm beyin19kadar çok düzeyli analizler sağlar. Ancak, post-mortem doku gözlemlemek için gerekli perfüzyon-fiksasyon süreci CSF akış yönünde derin değişiklikler üretir ve PVS daraltır, önemli ölçüde dağılımı ve izleyicinin konumunu değiştiren12. Son olarak, MRI tüm murine ve insan beyni boyunca CSF akışını izleyebilirken, perivasküler akışın uzamsal ve temporal çözünürlüğüne sahip değildir.
Yeni bir teknik, Transkraniyal makroskopik görüntüleme, canlı farelerin tüm dorsal korteks perivasküler CSF taşıma geniş alan görüntüleme sağlayarak bu sınırlamalar bazı çözer. Bu tür görüntüleme, Multiband filtre küpü, ayarlanabilir LED ışık kaynağı ve yüksek verimli CMOS Kamera10kullanarak bir epifloresan makrokapsam ile yapılır. Bu set-up 1-2 kadar PVSs çözmek edebiliyoruz kafatası yüzeyinin altında mm ve kortikal yüzeyin 5-6 mm kadar fluorophores tespit edebilir kafatası tamamen bozulmamış bırakarak10. Çok bantlı filtreler ve hızlı bir şekilde ayarlanabilir LED 'Ler, CSF 'nin aynı denemede farklı moleküler ağırlıklar ve kimyasal özelliklerin izleyicileri ile etiketlenmesine olanak tanıyan birden fazla fluorophorenin kullanımını sağlar.
Bu prosedür, kafatası ortaya çıkarmak için basit ve minimal invazif bir cerrahi gerektirir ve görüntüleme oturumu sırasında başını stabilize etmek için hafif bir baş plaka yerleştirin. İzleyiciler, kafatası delme veya pipetler veya kanüller ile kortikal doku penetran olmadan cm içine teslim edilebilir9,20. Hem CM kanüller hem de baş plakaları birkaç gün boyunca istikrarlı kalır ve klasik son nokta görselleştirmesine kıyasla daha karmaşık Deneysel tasarımlar kolaylaştırır. Bu protokol, floresan CSF izleyicilerin akut veya kronik enjeksiyonunu takiben anestezik/uyku veya uyanık farelerin CM 'ye doğru, glikmiyatik sistem fonksiyonunu incelemek için Transkraniyal makroskopik görüntülemenin nasıl kullanıldığını açıklar.

<table><tbody><tr><td>% 0.25 Bupivakain HCl</td><td></td><td></td><td>, Rochester Üniversitesi, Vivarium</td></tr><tr><td>100 ve mikro; L Gaz Geçirmez Şırınga Modeli 1710 TLL, PTFE Luer Kilidi</td><td>Hamilton Şirketi</td><td>81020</td><td></td></tr><tr><td>Sistemleri Dental Çimento Tozu</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9991371</td><td></td></tr><tr><td>Carprofen</td><td></td><td></td><td>Rochester Üniversitesi Vivarium</td></tr><tr><td>Klorheksidin</td><td>Prevantics</td><td>B10800</td><td></td></tr><tr><td>CMOS Kamera</td><td>Hammamatsu</td><td>ORCA Flash 4.0</td><td></td></tr><tr><td>Kafa Plakası</td><td>Rochester Üniversitesi</td><td>Katalog yok #</td> <td>Rochester Üniversitesi'ndeki makine atölyesinde özel olarak üretilmiştir</td></tr><tr><td>Yüksek Sıcaklık Kotery</td><td>Bovie Medical Corporation</td><td>AA01</td><td></td></tr><tr><td>Insta-set Hızlandırıcı</td><td>Bob Smith Industries</td><td>BSI-151</td><td></td></tr><tr><td>İzofluran - Fluriso</td><td>Vet One 502017</td><td></td><td>Rochester Üniversitesi Vivarium</td></tr><tr><td>Ketamin</td><td></td><td></td><td>Güçlü Memorial Hastanesi Eczanesi</td></tr><tr><td>Krazy Glue</td><td>Elmer's Products, Inc</td><td>Katalog yok #, yorumlarda bağlantıya bakın</td><td></td></tr><tr><td>https://www.amazon.com/Krazy-Glue-KG48348MR-Advance-Multicolor/dp/B000BKO6DG Mikro gözenekli Cerrahi bant</td><td>Fisher Scientific</td><td>19-027-761</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehit</td><td>Sigma-aldrich</td><td>P6148</td><td></td></tr><tr><td>PE10 - Polietilen ft başına .011" x .024", 100 ft. sürekli</td><td>Braintree Scientific</td><td>PE10 100 FT</td><td></td></tr><tr><td>Pompa 11 Yalnızca Elit İnfüzyon Çift Şırınga</td><td>Harvard Cihazı</td><td>70-4501</td><td></td></tr><tr><td>PURALUBE VET MERHEM</td><td>Dechra</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Puritan PurSwab Pamuk Uçlu Temizleme Çubukları</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-029-553</td><td></td></tr><tr><td>Araştırma Makro Zoom Mikroskobu</td><td>Olympus</td><td>MVX10</td><td></td></tr><tr><td>Basit Kafa Tutucu Plaka (fareler için)</td><td>Narishige International USA Inc</td><td>MAG-1</td><td></td></tr><tr><td>Tek Kullanımlık İğneler, BD Medical</td><td>VWR</td><td>BD305106</td><td></td></tr><tr><td>Steril Alkol Hazırlama Pedleri</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-363-750</td><td></td></tr><tr><td>Ayarlanabilir LED</td><td>ÖNCEKİ Lümen 1600-LED</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ksilazin</td><td></td><td></td><td>Rochester Vivarium Üniversitesi</td></tr></tbody></table>

İçinde vivo beyin omurilik akışkan taşınması floresan makroskopisi kullanarak bozulmamış fare kafatası aracılığıyla görüntüleme

In Vivo Imaging of Cerebrospinal Fluid Transport through the Intact Mouse Skull using Fluorescence Macroscopy

Kemirgenlerde beyin omurilik sıvısı (CSF) akışı büyük ölçüde izleyiciler ex vivo ölçülme kullanılarak incelenmiştir. İki foton mikroskopisi ve manyetik rezonans görüntüleme (MRG) gibi teknikler, CSF akışının in vivo ölçümlemesini sağladı, ancak sırasıyla azaltılmış görüntüleme hacimleri ve düşük uzamsal çözünürlük ile sınırlıdır. Son çalışmalar, CSF 'nin, kemirgen korteksinin pial ve penetran arterlerini çevreleyen perivasküler alanların ağ üzerinden beyin parankimesi girdiğini buldu. Bu perivasküler CSF girişi, glikmiyatik sistemin primer bir sürücüsüdür, toksik metabolik solakların (örn. amiloid-β) temizlenmesinden oluşan bir yol. Burada, floresan CSF izleyicilerini canlı farelerin bozulmamış kafatası ile gerçek zamanlı, mezoskopik görüntüleme sağlayan yeni bir makroskopik görüntüleme tekniği göstermektedir. Bu minimal invazif yöntem, çok sayıda deneysel tasarımı kolaylaştırır ve CSF dinamiklerinin tek veya tekrarlanan testlerini sağlar. Makroskoplar yüksek uzamsal ve temporal çözünürlüğe sahiptir ve büyük Portal ve çalışma mesafesi davranışsal cihazlarda görev yaparken görüntüleme için izin verir. Bu görüntüleme yaklaşımı, bu teknikten elde edilen iki foton görüntüleme ve floresan ölçümleri ile güçlü bir şekilde ex vivo floresans ve radyo etiketli izleyicileri ölçmek ile ilişkilendirilir. Bu protokolde, canlı farelerde glymphatic taşımacılığı değerlendirmek için Transkraniyal makroskopik görüntülemenin nasıl kullanılabilen olduğunu tarif ediyoruz, daha pahalı görüntüleme yöntemleri için erişilebilir bir alternatif sunuyor.

CSF akım bir epifloresan makrokapsam üzerinde görüntülenmiş (Şekil 1a), murine korteks içinde CSF Tracer taşıma mezoskopik görüntüleme için izin verir. Tüm kafatası kafa plakası, rostral burun kemiklerinin, hem ön hem de parietal kemiklerinin merkezinde ve interparietal kemiğin rostral kısmının (Şekil 1B) görselleştirilmesine izin verir. Görüntüleme sırasında, nasofrontal, sagittal, koronal ve lambdoid sütürler kolayca tespit edilebilir (Şek...

Transkraniyal optik görüntüleme, canlı fareler korteks içinde sağlam bir kafatası ile beyin omurilik sıvı taşımacılığı geniş alan görüntüleme sağlar.

İçinde vivo beyin omurilik akışkan taşınması floresan Makroskopisi kullanarak bozulmamış fare kafatası aracılığıyla görüntüleme

Cerebrospinal fluid (CSF) flow in rodents has largely been studied using ex vivo quantification of tracers. Techniques such as two-photon microscopy and ...

Canlı farelerin bozulmamış kafatası ndan floresan BOS izlerinin gerçek zamanlı mezoskopik görüntülemesi için bu yeni teknik glenfatik taşımayı değerlendirmek için kullanılabilir. En büyük avantajı, bu tekniğin diğer görüntüleme yöntemlerinin maliyetinin çok altında in-vivo intrassternal izleyicilerin dinamik ölçümlerini sağlamasıdır. Kafa plakasını sarnıç magna kanülüne yerleştirmek için gerekli prosedürler basit ve minimal invaziv olmakla birlikte, doğru bir şekilde uygulanması nı gerektirir.Görüntü kalitesini en üst düzeye çıkarmak ve farklı fareler ve deney grupları arasında tekrarlanabilir karşılaştırmalar sağlamak için bu yöntemin kritik adımlarının görsel olarak gösterilmesi gerekir. Parmak ucurluğuna tepki eksikliğini doğruladıktan sonra boyun ve baş steril su ile ıslatın ve nemlendirilmiş kürk tıraş. Kalan tüyleri çıkarmak için maruz kalan deriyi alkol beziyle silin ve fareyi sıcaklık kontrollü bir yastığın üzerine stereotaktik bir çerçeveye yerleştirin.Hayvanların gözlerine merhem uygulayın ve klorheksidin bezi ile maruz kalan cildi temizleyin. 2 dakika sonra bir alkol silme ile Klorheksidin çıkarın ve bir iyodone çözeltisi uygulayın. Ne zaman iodone kafatası ve boyun üst içine deri altı analjezi enjekte kurudu.Oksipital kabuğu kaplayan boyun kısmından başlayarak, intraorbital çizgidoğru rostrally devam örten deride bir orta hat kesim yapmak. Kesiği yanal olarak temporal kasın kafatasına soktuğü sınıra doğru uzatın ve hem frontal hem de parietal kemikleri ortaya çıkarmak için fusiform kesinin tüm derisini çıkarın. Kafatasını steril salinle sulandırın ve yüzeyi enkaz ve saçsız hale gelene kadar temizlemek için pamuklu bezler kullanın.Sarnıç magna kanül taktıktan sonra sınır etrafında baş plaka ventral tarafına diş çimentosu ve siyanoakrilat tutkal karışımı uygulayın. Kafa plakasını kafatasının üzerine yerleştirin, böylece plakanın ön sınırı burun kemiğinin arka ucuyla hizalanır ve arka sınır interparietal kemiğin ön kısmıyla hizalanır ve yay sütüne göre ortalanır ve düz dürbündür. Bu kafa plakası güvenli olduğundan emin olmak için önemlidir ve sarnıç magna kanülasyon görüş alanı engellemez.Baş plaka konumunu düzeltmek ve çimento karışımı ile kalan boşlukları doldurmak için tutkal hızlandırıcı damla bir çift kullanın. Sarnıç magna kanüllerini baş plakasına yapıştırın ve fareyi sabit bir pozisyonda baş tutucuya yerleştirmek için baş plakayı kullanın. Fareyi ve kanüle bağlı infüzyon pompasını makroskopa taşınması için bir sepete dikkatlice yerleştirin ve baş tutucuyu makroskop un sahnesine yerleştirin.Şırınga pompasından sarnıç magna kanülüne kadar olan hattın gergin olmadığından ve kıvrık olmadığından emin olun. İyi bir oksijenlenmeyi doğrulamak için mukus zarlarının solunum hızını ve pembe rengini gözlemleyin. Makroskop kamerasını ve ışık yayan diyot'u açın ve canlı modu başlatın.Görüntüleme alanının büyütülmesini, alanın üst kısmındaki nasofrontal sütürve alttaki lambdoid sütüraçıkça görselleştirilebilsin şekilde ayarlayın. Bir kez yerinde makroskop aşamasına baş tutucu bant ve odak düzlemi koronal dikişler posterior parietal kemiklerin lateral taraflarında bulunana kadar maruz kafatası üzerinde makroskop odak. BOS izleyici infüzyonu için infüzyon pompasını uygun hız ve hacime ayarlayın ve her kanal için izleyici için uygun uyarma dalga boyu ve pozlama süresini ayarlayın.Ardından, izleyici infüzyonunu ve görüntülemeyi aynı anda başlatmadan önce makroskoptaki tetikleme işlevinin doğru olup olmadığını kontrol edin. Görüntüleme sırasında naso frontal, sagittal, koronal ve lambdoid dikişler kolayca tespit edilebilir. BOS izleyicisi sarnıç magna içine aşılanmış sonra tracer floresan ilk olfactofrontal sarnıç ve pineal girinti yakın quadrigeminal sarnıç ve sonunda orta serebral arterleri çevreleyen subaraknoid BOS büyük havuzlarda gözlenir.BOS izleyiciler sonra orta serebral arter kortikal peal dalları peri vasküler boşluklar boyunca beyin girin. Travmatik beyin hasarı sonrası BOS nakil görüntüleme siperilkte olfactofrontal sarnıçta ilk olarak ortaya çıkar, ancak kortikal perivasküler boşluklar boyunca glenfatik akını tamamen yaralanma tarafında kaldırılır. In-vivo görüntülerde kantitatif analiz ipsilateral akını alanı kontralateral hemisfer ile karşılaştırıldığında yaklaşık üçte bir azaldığını göstermektedir.Hareket yapıları ve odak düzleminde değişiklikler önlemek için doğru baş plaka ve baş plaka sahibi güvenli ve hayvanın anestezi düzeyini kontrol unutmayın. Deney in-vivo görüntüleme sonuçları daha gerçek bu tekniği kullanarak izleyici penetrasyonu quantifying tarafından doğrulanabilir sonra bu teknik fizyolojik ve minimal invaziv bir şekilde glenfatik sistemin çalışma sağlar ve sağlık ve hastalık BOS hidrodinamik hakkında gelecekteki sorulara hitap yardımcı olabilir.

in-vivo-imaging-cerebrospinal-fluid-transport-through-intact-mouse

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Intravital mikroskopi pial mikrosirkülasyon zamansal ve mekansal hemodinamik ve inflamatuar olayları takip etmek.

Kapalı Kranial Pencere kullanarak Fare Beyin Mikrosirkülasyon intravital Mikroskopi

Fare spinal kolon stabilize ve tekrarlayan gerçekleştirmek için minimal invaziv bir...

Fare Omurilik İki foton Mikroskop kullanarak in vivo Görüntüleme

Kaynak: Bisht, K.,  et al. Farelerde nöro-immün dinamiklerin tekrarlayan in vivo görüntülemesini gerçekleştirmek için hassas beyin haritalaması. J. Vis. Uzm. (2020)Bu video, kafatası implantı olan transgenik bir farede nöro-immün dinamiklerin floresan görüntülemesini göstermektedir. Vasküler ve nöronal stabilite, nöronal aktiviteye karşı immün yanıtları yansıtan dinamik mikroglial değişikliklerle birlikte görüntülenir.

Kafatası İmplantı Kullanılarak Nöro-İmmün Dinamiklerin Floresan Görüntülemesi

Kaynak: Sweeney, A. M., et al. Floresan Makroskobu Kullanılarak Sağlam Fare Kafatasından Beyin Omurilik Sıvısı Taşınmasının İn Vivo Görüntülemesi. J. Vis. Exp. (2019)Bu video, floresan görüntüleme kullanarak bir fare beynindeki beyin omurilik sıvısı (BOS) akışını görselleştirme sürecini göstermektedir. Cisterna magna'ya (CM) bir floresan izleyici enjekte edilir ve BOS ile hareketinin subaraknoid ve perivasküler boşluklar boyunca izlenmesine izin verilir. Hızlandırılmış görüntüleme, izleyicinin...

Floresan Makroskobu Kullanılarak Bir Fare Beyninde Beyin Omurilik Sıvısı Taşınmasının İn Vivo Görüntülenmesi

Monositler, doğuştan gelen bağışıklığın anahtar düzenleyicileridir ve periferik mononükleer fagositik sistemin yenilenmesinde ve iltihaplanma durumunda kritik bir rol oynarlar. Bu el yazması, monosit mobilizasyon mekanizmasını incelemek için fare kalvaria kemik iliğinin gerçek zamanlı görüntüleme prosedürünü açıklamaktadır.

Fare Kemik İliği monositlerin Takip<em&gt; İn Vivo</em

İntravital Floresans mikroskobu (IVFM) hasta, posta ve kemik iliği (BM) niş içine hematopoetik hücrelerin engraftment çalışmaya genetik hayvan modelleri ile birlikte uygulanır.

Intravital floresan mikroskobu (IVFM) kemik iliği nişler hematopoetik hücrelerin Engraftment Dynamics çalışmaya genetik modelleri ile birleştirerek

Bu yazının uzunlamasına iki foton mikroskopi kullanılarak in vivo amiloid plak birikimi sırasında cerebrovasculature bir biçimlenme izlemek için bir yordam açıklanır. Incelmiş kafatası preparat, Alzheimer hastalığının bir fare modelinde serebrovasküler hasara ilerlemesini değerlendirmek için floresan boyalar görselleştirme sağlar.

uzunlamasına<em&gt; İn Vivo</em&gt; Cerebrovasculature Görüntüleme: MSS Hastalıkları uygunluk

Bu protokol, nöro-glio-vasküler yapıların uzunlamasına görüntülemesi, hem sağlıklı hem de hastalıklı koşullarda fonksiyon ve fonksiyon için kullanılabilecek kronik bir kafatası pencere implantasyon tekniğini açıklamaktadır. Genellikle tercih edilirken bazı kritik sınırlamalara sahip olan transkraniyal görüntüleme yaklaşımına tamamlayıcı bir alternatif olarak hizmet vermektedir.

Farelerde Nöro-İmmün Dinamiğin Vivo Görüntülemesinde Tekrarlayan Performans için Hassas Beyin Haritalaması

Bu çalışma, farelere tekrarlayan bir travmatik beyin hasarının verilmesini ve iki foton mikroskobu kullanılarak nöron eksprese edilen bir EGFP'nin daha sonraki intravital görüntülemesi için bir kraniyal pencerenin eşzamanlı implantasyonunu göstermektedir.

Kapalı Kafatası Travmatik Beyin Hasarı ve Kraniyal Penceresi Olan Farelerde Floresan Protein Ekspresyonunun İki Foton Mikroskobu Kullanılarak İntravital Görüntülenmesi

İntravital mikroskopi, doku rejenerasyonu ve tümör gelişimi gibi dinamik biyolojik süreçlerin incelenmesine izin verir. Oldukça dinamik bir doku olan kalvarial kemik iliği, hematopoez ve vasküler fonksiyon hakkında bilgi verir. Biyouyumlu bir 3D baskılı kafa sabitleme implantı kullanmak, tekrarlayan uzunlamasına görüntülemeye olanak tanıyarak doku dinamikleri ve tümör mikro çevresi hakkındaki anlayışımızı geliştirir.

Kalvarial Kemik İliğinde Vasküler Dinamiklerin İntravital Longitudinal Görüntülenmesi

Bu protokol, floresan polistiren mikrosferler kullanılarak in vivo iki foton mikroskopi görüntüleme için optimize edilmiş kronik kraniyal pencere ve mikrovasküler embolizm fare fare modeli için adım adım yaklaşımın ayrıntılı bir açıklamasını içerir.

Floresan Polistiren Mikrosferleri Kullanarak In Vivo İki Foton Mikroskopi İçin Mikrovasküler Embolizm Fare Modeli

Öğrenin, canlı farelerde bozulmamış kafatası üzerinden floresan makroskopisi ile beyin omurilik akışkanı taşınmasını gerçek zamanlı görüntüleme yöntemini. Bu teknik, glimfatik sistem dinamiklerini düşük maliyetle incelemeyi sağlar.

İçinde vivo beyin omurilik akışkan taşınması floresan Makroskopisi kullanarak bozulmamış fare kafatası aracılığıyla görüntüleme

Daha fazla video keşfet