Kaekal Patch Kesin Lokalizasyonu ile Kronik Kolit İlişkili Kolorektal Kanser Murine Apendektomi Modeli
24 Ağustos 2019
Sunulan protokol, inflamatuar barsak hastalığı ile ilişkili kolorektal kanserin indüksiyonu takip eden bir farede apandisin (kaekal yama) kolay bir cerrahi olarak çıkarılmasını açıklar. Bu murine apendektomi modeli insan gastrointestinal hastalığın patogenezinde apandisin biyolojik rolünün araştırılmasını sağlar.
Genel protokol farelerde kaekal yama olarak bilinen apandisçıkarma kolayca uygulanan cerrahi prosedürleri açıklar. Murine apendektomi modeli, apendiksin insan gastrointestinal hastalığının patogenezindeki biyolojik rollerini incelemek için kullanılabilir. İnsan apandisiti tartışılmaz bir organdır.
Son çalışmalar apandisin bağırsak sağlığının korunmasında önemli bir rol oynadığını ileri sürmüşlerdir. Apandisin biyolojik işlevini incelemek için hastalıkla ilişkili apendektomi hayvan modeli nin üretilmesi çok önemlidir. Bu protokolde, farelerde kaekal yama olarak bilinen apandisi çıkarmanın basit ve güvenli bir cerrahi adımını açıklayacağız.
Bu modelin başarısını sağlamak için, aşağıdaki videoda göreceğiniz gibi üç önemli adım vardır. İlk olarak, ameliyattan önce farelerin kaecum bulmak. İkincisi, karın küçük bir kesi yapmak.
Üçüncüsü, caecum kütüğünün dezenfekte edin ve kapatın. İlk bölüm, fareler apendektomi. Ameliyat öncesi steril cerrahi aletler ve temizlik solüsyonları hazırlayın.
Ameliyat sırasında postural hareketi önlemek için ekstremiteler boyunca tıbbi yapışkan bant dört şeritler yerleştirerek bir supine pozisyonda bir platform üzerinde fare anestezi ve güvenli. Yavaşça yumru hissi bulmak için farenin tüm karın dokunun. Örtünün üzerini örtün ve fare karnının tıraş lı bölgesini iki kez entoyodin kullanarak mümkün olduğunca geniş bir şekilde dezenfekte edin.
Karın orta hattında 0,5 santimetre ile bir santimetre arasında değişen uzunlamasına bir kesi yapın. Kaecum önceden belirlenmiş konumuna göre, caecum aramak ve yavaşça yaklaşık bir santimetre uzunluğunda kaecal yama tanımlamak için dışa. Bağırsak nemlendirmek için önceden ısıtılmış ve steril fizyolojik salin kullanın.
Postoperatif kanama ve enfeksiyon olası komplikasyonları önlemek için, 8-0 kullanarak kaecum mezenterik kan damarları ligate Dikiş. Caecum'u tuzlu suyla nemlendirin. Proksimal kolonda caecum apeks yakın açık döngü ile 4-0 sütür kullanarak rezeksiyon bölgesi işaretleyin.
Mikro makas kullanarak işaretli rezeksiyonun altındaki kaekal yamasını kesin ve tıbbi pamuklu bezlerle kalan kaecal içeriğini silin. Kaecum kütüğünün entoiyomu ile dezenfekte edin. 8-0'ı kullanarak kütüğü çalıştırarak kapatın Dikiş.
Daha önce kaecum kütüğünde rezeksiyon işaretleme için kullanılan 4-0 iplik döngü, dikkatle çıkarın. Entoiyot kullanarak dikişli konumu sterilize. Kesme alanını tuzlu su ile yeniden nemlendirin.
8-0 kullanarak çalışan dikiş ile kas tabakasını kapatın dikiş iplik. 4-0 dikiş ipliği ile kesilen dikişleri kullanarak cilt tabakalarını kapatın. Cerrahi kesiği entoiyom ile iki kez dezenfekte edin.
Sonra, % 75 tıbbi alkol kullanarak iyot çıkarın. Fareyi yavaşça geri çevirin. Subkutan buprenorfin kilogram vücut ağırlığı başına 0.1 miligram enjekte, ve fizyolojik tuzlu 0.4 mililitre.
Ve fareyi ısı yastığında dinlendirin, ta ki bilinçliliğe dönene kadar. Fareyi steril kafese geri koyun ve iyileşmesini sağlamak için ameliyattan sonra üç gün boyunca ağrı belirtileri için fareyi yakından izleyin. İkinci bölüm: Azoksimetan ile Kolit İlişkili Kolorektal Kanser indüksiyonu, AOM, ve Dekstran Sodyum Sülfat, DSS, yedi gün post-apendektomi.
AOM bir aliquot eritin ve% 0.9 normal tuzlu kullanarak mililitre başına 1 miligram seyreltin. Tüm hazırlık süreci duman kaputunda gerçekleştirilir. % 2 DSS hazırlamak için 200 mililitre otoklavlı su çözeltisi dört gram DSS tozu çözünür.
Her kafeste beş fare var. Ağırlığına göre fare başına gram başına 0,01 mililitre ile Intraperitoneal AOM enjeksiyonu yapın. Otoklavlı suyu beş gün boyunca %2 DSS ile değiştirin.
Fareler ek iki döngü için otoklavlı su ile beslenir. Üçüncü bölüm:Sonuçlar. Akış ve ELISA sonuçları kaecal yamanın başarılı bir şekilde kaldırıldığını gösterir.
Bu işlem IgA özgü plazma hücrelerinin önemli azalma katkıda bulunabilir, kalın bağırsakta salgı IgA bariz bir değişiklik, karşılaştırıldığında 3%DSS, şiddetli kanlı dışkı nedeniyle yüksek mortalite oranı ve önemli kilo değişikliği vardır, anüs prolapsus, ve abdominal abcess. %2'lik DSS, yüksek sağkalım oranının yaklaşık %80'e kadar olması ve hem sham hem de apendektomi gruplarında makul kilo değişimi için tüm süreç için uygundur. Bu görüntülerde gösterildiği gibi kolitle ilişkili kolorektal tümörleri başarıyla indükledik.
H & E boyama görüntülerde, siyah ok mukozal ülser gösterir, ok ucu adenokarsinom gösterir, ve beyaz bir ok bezleri arasında nötrofil infiltrasyon gösterir. Adenokarsinomun farklı evreleri hem sham hem de apendektomi gruplarında görülebilir. Bu uygun maliyetli Murine Apendektomi Modeli gibi bazı önemli soruları cevaplamak için kullanılabilir: bağırsak bakterilerinin düzenlenmesinde apandis rolü nedir ve nasıl bağırsak ilişkili lenfoid dokuda bağışıklık yanıtı katılır.
Unutmayın, bağırsak yapışmasında hasar görmesini önlemek için, kaecum ve küçük deri kesisi ön konumu önemlidir. Buna ek olarak, kolit indüklemek için% 2 DSS kullanılır. Ancak diğer fare suşları için daha yüksek bir DSS konsantrasyonu kullanılabilir.
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin
Genel Bakış
Bu protokol, farelerde apandisin çıkarılmasına yönelik, "çekum yaması" (caecal patch) olarak adlandırılan basit bir cerrahi prosedürü özetlemektedir. Bu murin apandektomi modeli, apandisin insanlardaki gastrointestinal hastalıkların gelişimindeki biyolojik rolünün incelenmesine olanak tanır.
Temel Çalışma Bileşenleri
Bilim Alanı
- Nörobilim
- Gastroenteroloji
- Onkoloji
Arka Plan
- İnsan apandisinin işlevi bilim insanları arasında tartışılmaktadır.
- Güncel araştırmalar, apandisin bağırsak sağlığına katkıda bulunabileceğini göstermektedir.
- Apandisin hastalıklardaki rolünü anlamak, gastrointestinal araştırmaları ilerletmek için kritik öneme sahiptir.
- Bu çalışmalar için hastalıkla ilişkili bir apendektomi modeli oluşturmak esastır.
Çalışmanın Amacı
- Apendiksin biyolojik fonksiyonlarını incelemek.
- Apendektomi ile gastrointestinal hastalık patogenezi arasındaki ilişkiyi araştırmak.
- İnflamatuar bağırsak hastalığı ile ilişkili kolorektal kanserin çalışılması için bir model sağlamak.
Kullanılan Yöntemler
- Farelerde sekal yamayı cerrahi olarak çıkarma.
- İnflamatuar bağırsak hastalığı ile ilişkili kolorektal kanser indüksiyonu.
- Biyolojik araştırmalar için fare modelinin kullanımı.
- Hastalık gelişiminde apandisin rolünün değerlendirilmesi.
Ana Sonuçlar
- Protokol, güvenli cerrahi teknikleri başarıyla ortaya koymaktadır.
- Apandisin hastalıklar üzerindeki rolünü incelemek için bir modelin oluşturulması.
- Gastrointestinal hastalıkların patogenezine dair öngörüler.
- İnsan gastrointestinal sağlığının anlaşılması için potansiyel çıkarımlar.
Sonuçlar
- Appendektomi modeli, araştırmalar için değerli bir araçtır.
- İleriki çalışmalar, apandisin sağlık ve hastalık üzerindeki rolünü aydınlatabilir.
- Bu araştırma, kolorektal kanser mekanizmalarının daha iyi anlaşılmasına ön ayak olabilir.
Sıkça Sorulan Sorular
Sektörel Uygulama ve Önem
Fare appendektomi modeli, apandisin bağırsak bağışıklık düzenlemesi ve mikrobiyota homeostazındaki rolünün mekanistik olarak araştırılmasına olanak tanıyarak, kolorektal kanser patogenezini incelemek için hastalıkla ilişkili bir sistem sağlar. Appendektomiyi kolit ilişkili tümör gelişimiyle ilişkilendiren bu model, lenfoid dokuyule tümörijenez arasındaki bağlantılara dair hipotezlerin doğrulanmasını ve risklerin azaltılmasını destekler. Bu preklinik model, onkoloji süreçlerinde bağırsakla ilişkili bağışıklık yollarını hedefleyen terapötik müdahalelerin değerlendirilmesi için öngörücü değer sunar.
Biyofarma Ar-Ge'sinde Stratejik Uygulamalar
Erken Keşif ve Hedef Doğrulama
- Bilimsel Değer: Apandisin, kolorektal kanser gelişimiyle ilgili olan bağırsak ilişkili lenfoid dokuyu ve immün yanıtları modüle ettiği yönündeki terapötik hipotezi sorgular.
- Operasyonel Değer: Bağırsak immün fonksiyonu biyobelirteçleri olarak IgA+ plazma hücrelerindeki ve sekretuar IgA'daki değişiklikleri değerlendirmek için tekrarlanabilir bir cerrahi model sunar.
- Öngörücü Değer: Apandisektominin, kolitle ilişkili bir kanser bağlamında tümör oluşumu ve ilerlemesini nasıl etkilediğinin değerlendirilmesini sağlar.
Tarama ve Assay Geliştirme
- Bilimsel Değer: Mukozal ülserasyon, nötrofil infiltrasyonu ve adenokarsinom evrelemesi dahil olmak üzere nicelendirilebilir histolojik son noktaları olan standardize bir hastalık modeli oluşturur.
- Operasyonel Değer: DSS ve AOM kullanarak kolit ilişkili tümörlerin tutarlı bir şekilde indüklenmesi yoluyla analiz hazırlığını destekler ve kontrollü bir inflamatuar mikroortamda bileşik taramasına olanak tanır.
- Translasyonel Değer: İmmün değişiklikleri (örneğin, IgA azalması) histopatolojik hastalık şiddeti ile ilişkilendirerek biyobelirteç kalifikasyon çalışmalarını kolaylaştırır.
Translasyonel ve Preklinik Araştırmalar
- Bilimsel Değer: İmmün disregülasyondan tümör oluşumuna kadar olan sürekliliği modeller ve kolorektal kanserdeki inflamatuar tetikleyicilerin incelenmesine olanak tanır.
- Operasyonel Değer: Yüksek sağkalım (%~80) ve minimum ağırlık kaybı sergileyerek boylamsal çalışma tasarımlarını ve tekrarlanan dozaj rejimlerini destekler.
- Risk Azaltma: Hastalık penetransı üzerindeki etkisini değerlendirmek amacıyla, tanımlanmış bir genetik arka planda (C57BL/6) apendektomi değişkenini izole ederek mekanistik risklerin azaltılmasını sağlar.
Boru Hattı ve İş Akışı Entegrasyonu
Bu model; hedef doğrulamadan öncü bileşik tanımlamaya ve preklinik etkinlik testlerine kadar uzanan keşif sürekliliğine, özellikle immünomodülatör veya mikrobiyom modüle eden ajanlar için uygundur.
- Keşif Biyolojisi: Ölçülebilir immün ve histopatolojik çıktılar kullanarak, apandisin bağırsak immün regülasyonu ve mikrobiyal homeostazdaki rolüne ilişkin hipotezleri test eder.
- Tarama: Patofizyolojik olarak ilgili bir ortamda terapötik adaylarını değerlendirmek için uygun, standartlaştırılmış ve indüklenebilir bir kolit ilişkili kanser modeli sağlar.
- Analitikler: IgA+ hücreler için akış sitometrisi, salgısal IgA için ELISA ve tümör evresi ile inflamasyon için histoloji dahil olmak üzere kantitatif ve kalitatif okumalar sunar.
- Translasyonel Araştırma: Genetik olarak yönetilebilir bir sistemde, insanla ilgili bir hastalık dizisini (inflamasyondan kansere) modelleyerek keşif aşamasından preklinik validasyona köprü kurar.
- Kurumsal Yeniden Kullanım: Birden fazla terapötik alanda gastrointestinal immün-onkoloji etkileşimlerini incelemek için yeniden kullanılabilir bir platform oluşturur.
Operasyonel ve Kurumsal Etki
- Bilimsel Değer: Tanımlanmış bir anatomik manipülasyonu (çekum yaması çıkarma) ölçülebilir immün ve neoplastik sonuçlarla ilişkilendirerek hedef güvenini artırır.
- Operasyonel Değer: Farklı merkezlerde model tekrarlanabilirliğini sağlamak için net postoperatif izleme kriterlerine sahip, standartlaştırılmış ve ölçeklenebilir bir cerrahi prosedür sunar.
- Stratejik Değer: İmmün aracılı tümör promovasyonu veya supresyonuna dair mekanistik içgörüler sağlayarak go/no-go (devam/durdur) kararlarını bilgilendirir.
- Portföy Etkisi: Preklinik bir ortamda hastalıkla ilgili biyolojik aktiviteyi doğrulayarak, immünomodülatör adayların riske göre ayarlanmış önceliklendirmesini destekler.
Uygulama Hususları
- Postoperatif komplikasyonları önlemek için vasküler ligasyon ve intestinal manipülasyon dahil olmak üzere murin cerrahi tekniklerinde uzmanlık gerektirir.
- Steril cerrahi aletlere, süturlara (8-0 ve 4-0), dezenfektanlara (entoiyodin, alkol) ve postoperatif analjeziklere (buprenorfin) bağımlıdır.
- Model geçerliliğini sağlamak için üç gün boyunca ısı desteği ve ağrı izlemini içeren standart postoperatif bakım protokollerini gerektirir.
- Aşırı mortalite olmaksızın tutarlı kolit ilişkili tümörijenez elde etmek için kesin DSS konsantrasyonu (%2) ve AOM dozajı (0,01 mL/g) gereklidir.
- Model uygulanabilirliği, DSS duyarlılığındaki farklılıklar nedeniyle fare suşları arasında değişiklik gösterebilir ve suşa özel optimizasyon gerektirebilir.
