Kaekal Patch Kesin Lokalizasyonu ile Kronik Kolit İlişkili Kolorektal Kanser Murine Apendektomi Modeli
August 24th, 2019
Sunulan protokol, inflamatuar barsak hastalığı ile ilişkili kolorektal kanserin indüksiyonu takip eden bir farede apandisin (kaekal yama) kolay bir cerrahi olarak çıkarılmasını açıklar. Bu murine apendektomi modeli insan gastrointestinal hastalığın patogenezinde apandisin biyolojik rolünün araştırılmasını sağlar.
Genel protokol farelerde kaekal yama olarak bilinen apandisçıkarma kolayca uygulanan cerrahi prosedürleri açıklar. Murine apendektomi modeli, apendiksin insan gastrointestinal hastalığının patogenezindeki biyolojik rollerini incelemek için kullanılabilir. İnsan apandisiti tartışılmaz bir organdır.
Son çalışmalar apandisin bağırsak sağlığının korunmasında önemli bir rol oynadığını ileri sürmüşlerdir. Apandisin biyolojik işlevini incelemek için hastalıkla ilişkili apendektomi hayvan modeli nin üretilmesi çok önemlidir. Bu protokolde, farelerde kaekal yama olarak bilinen apandisi çıkarmanın basit ve güvenli bir cerrahi adımını açıklayacağız.
Bu modelin başarısını sağlamak için, aşağıdaki videoda göreceğiniz gibi üç önemli adım vardır. İlk olarak, ameliyattan önce farelerin kaecum bulmak. İkincisi, karın küçük bir kesi yapmak.
Üçüncüsü, caecum kütüğünün dezenfekte edin ve kapatın. İlk bölüm, fareler apendektomi. Ameliyat öncesi steril cerrahi aletler ve temizlik solüsyonları hazırlayın.
Ameliyat sırasında postural hareketi önlemek için ekstremiteler boyunca tıbbi yapışkan bant dört şeritler yerleştirerek bir supine pozisyonda bir platform üzerinde fare anestezi ve güvenli. Yavaşça yumru hissi bulmak için farenin tüm karın dokunun. Örtünün üzerini örtün ve fare karnının tıraş lı bölgesini iki kez entoyodin kullanarak mümkün olduğunca geniş bir şekilde dezenfekte edin.
Karın orta hattında 0,5 santimetre ile bir santimetre arasında değişen uzunlamasına bir kesi yapın. Kaecum önceden belirlenmiş konumuna göre, caecum aramak ve yavaşça yaklaşık bir santimetre uzunluğunda kaecal yama tanımlamak için dışa. Bağırsak nemlendirmek için önceden ısıtılmış ve steril fizyolojik salin kullanın.
Postoperatif kanama ve enfeksiyon olası komplikasyonları önlemek için, 8-0 kullanarak kaecum mezenterik kan damarları ligate Dikiş. Caecum'u tuzlu suyla nemlendirin. Proksimal kolonda caecum apeks yakın açık döngü ile 4-0 sütür kullanarak rezeksiyon bölgesi işaretleyin.
Mikro makas kullanarak işaretli rezeksiyonun altındaki kaekal yamasını kesin ve tıbbi pamuklu bezlerle kalan kaecal içeriğini silin. Kaecum kütüğünün entoiyomu ile dezenfekte edin. 8-0'ı kullanarak kütüğü çalıştırarak kapatın Dikiş.
Daha önce kaecum kütüğünde rezeksiyon işaretleme için kullanılan 4-0 iplik döngü, dikkatle çıkarın. Entoiyot kullanarak dikişli konumu sterilize. Kesme alanını tuzlu su ile yeniden nemlendirin.
8-0 kullanarak çalışan dikiş ile kas tabakasını kapatın dikiş iplik. 4-0 dikiş ipliği ile kesilen dikişleri kullanarak cilt tabakalarını kapatın. Cerrahi kesiği entoiyom ile iki kez dezenfekte edin.
Sonra, % 75 tıbbi alkol kullanarak iyot çıkarın. Fareyi yavaşça geri çevirin. Subkutan buprenorfin kilogram vücut ağırlığı başına 0.1 miligram enjekte, ve fizyolojik tuzlu 0.4 mililitre.
Ve fareyi ısı yastığında dinlendirin, ta ki bilinçliliğe dönene kadar. Fareyi steril kafese geri koyun ve iyileşmesini sağlamak için ameliyattan sonra üç gün boyunca ağrı belirtileri için fareyi yakından izleyin. İkinci bölüm: Azoksimetan ile Kolit İlişkili Kolorektal Kanser indüksiyonu, AOM, ve Dekstran Sodyum Sülfat, DSS, yedi gün post-apendektomi.
AOM bir aliquot eritin ve% 0.9 normal tuzlu kullanarak mililitre başına 1 miligram seyreltin. Tüm hazırlık süreci duman kaputunda gerçekleştirilir. % 2 DSS hazırlamak için 200 mililitre otoklavlı su çözeltisi dört gram DSS tozu çözünür.
Her kafeste beş fare var. Ağırlığına göre fare başına gram başına 0,01 mililitre ile Intraperitoneal AOM enjeksiyonu yapın. Otoklavlı suyu beş gün boyunca %2 DSS ile değiştirin.
Fareler ek iki döngü için otoklavlı su ile beslenir. Üçüncü bölüm:Sonuçlar. Akış ve ELISA sonuçları kaecal yamanın başarılı bir şekilde kaldırıldığını gösterir.
Bu işlem IgA özgü plazma hücrelerinin önemli azalma katkıda bulunabilir, kalın bağırsakta salgı IgA bariz bir değişiklik, karşılaştırıldığında 3%DSS, şiddetli kanlı dışkı nedeniyle yüksek mortalite oranı ve önemli kilo değişikliği vardır, anüs prolapsus, ve abdominal abcess. %2'lik DSS, yüksek sağkalım oranının yaklaşık %80'e kadar olması ve hem sham hem de apendektomi gruplarında makul kilo değişimi için tüm süreç için uygundur. Bu görüntülerde gösterildiği gibi kolitle ilişkili kolorektal tümörleri başarıyla indükledik.
H & E boyama görüntülerde, siyah ok mukozal ülser gösterir, ok ucu adenokarsinom gösterir, ve beyaz bir ok bezleri arasında nötrofil infiltrasyon gösterir. Adenokarsinomun farklı evreleri hem sham hem de apendektomi gruplarında görülebilir. Bu uygun maliyetli Murine Apendektomi Modeli gibi bazı önemli soruları cevaplamak için kullanılabilir: bağırsak bakterilerinin düzenlenmesinde apandis rolü nedir ve nasıl bağırsak ilişkili lenfoid dokuda bağışıklık yanıtı katılır.
Unutmayın, bağırsak yapışmasında hasar görmesini önlemek için, kaecum ve küçük deri kesisi ön konumu önemlidir. Buna ek olarak, kolit indüklemek için% 2 DSS kullanılır. Ancak diğer fare suşları için daha yüksek bir DSS konsantrasyonu kullanılabilir.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
Genel Bakış
Bu protokol, farelerde cekum yaması olarak adlandırılan apandisit çıkarılması için basit bir cerrahi prosedürü özetlemektedir. Bu murine apandisektomi modeli, insanlarda gastrointestinal hastalıkların gelişiminde apandisitin biyolojik rolünün çalışılmasını kolaylaştırır.
Çalışmanın Temel Bileşenleri
Bilim Alanı
- Nörobilim
- Gastroenteroloji
- Onkoloji
Arka Plan
- İnsan apandisinin işlevi bilim insanları arasında tartışmalıdır.
- Son araştırmalar apandisit'in bağırsak sağlığına katkıda bulunabileceğini göstermektedir.
- Apandisin hastalığın gelişiminde rolünün anlaşılması, gastrointestinal araştırmaların ilerlemesi için kritik öneme sahiptir.
- Bu çalışmalar için hastalıkla ilişkili bir apandisektomi modeli oluşturmak esastır.
Çalışmanın Amacı
- Apandisit'in biyolojik işlevlerini araştırmak.
- Apandisektomi ve gastrointestinal hastalık patogenezi arasındaki ilişkiyi keşfetmek.
- Inflamatuar barsak hastalığı ile ilişkili kolorektal kanser için bir model sağlamak.
Kullanılan Yöntemler
- Fareleri cekum yaması cerrahi olarak çıkarmak.
- Inflamatuar barsak hastalığı ile ilişkili kolorektal kanser indüksiyonu.
- Biyolojik araştırmalar için murine model kullanımı.
- Hastalık gelişiminde apandisit rolünün değerlendirilmesi.
Ana Sonuçlar
- Protokol, güvenli cerrahi teknikleri başarılı bir şekilde gösterir.
- Hastalıktaki apandisit rolünün incelenmesi için bir modelin kurulması.
- Gastrointestinal hastalıkların patogenezine ilişkin içgörüler.
- İnsan gastrointestinal sağlığını anlamak için potansiyel sonuçlar.
Sonuçlar
- Apandisektomi modeli araştırma için değerli bir araçtır.
- Daha fazla çalışma, apandisit'in sağlık ve hastalıktaki rolünü açıklayabilir.
- Bu araştırma, kolorektal kanser mekanizmalarının daha iyi anlaşılmasına yol açabilir.
Sıkça Sorulan Sorular
Executive Industry Relevance
The murine appendectomy model enables mechanistic investigation of the appendix in gut immune regulation and microbiota homeostasis, providing a disease-relevant system to study colorectal cancer pathogenesis. By linking appendectomy to colitis-associated tumor development, the model supports target validation and de-risking of hypotheses linking lymphoid tissue to tumorigenesis. This preclinical model offers predictive value for evaluating therapeutic interventions targeting gut-associated immune pathways in oncology pipelines.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Scientific Value: Interrogates the therapeutic hypothesis that the appendix modulates gut-associated lymphoid tissue and immune responses relevant to colorectal cancer development.
- Operational Value: Provides a reproducible surgical model to assess changes in IgA+ plasma cells and secretory IgA as biomarkers of intestinal immune function.
- Predictive Value: Enables evaluation of how appendix removal influences tumor initiation and progression in a colitis-associated cancer context.
Screening & Assay Development
- Scientific Value: Generates a standardized disease model with quantifiable histological endpoints including mucosal ulceration, neutrophil infiltration, and adenocarcinoma staging.
- Operational Value: Supports assay readiness through consistent induction of colitis-associated tumors using DSS and AOM, enabling compound screening in a controlled inflammatory microenvironment.
- Translational Value: Facilitates biomarker qualification efforts by correlating immune alterations (e.g., IgA reduction) with histopathological disease severity.
Translational & Preclinical Research
- Scientific Value: Models the continuum from immune dysregulation to tumorigenesis, allowing study of inflammatory drivers in colorectal cancer.
- Operational Value: Demonstrates high survival (~80%) and minimal weight loss, supporting longitudinal study designs and repeated dosing regimens.
- Risk Mitigation: Enables mechanistic de-risking by isolating the variable of appendectomy in a defined genetic background (C57BL/6) to assess its impact on disease penetrance.
Pipeline & Workflow Integration
The model fits within the discovery continuum from target validation through lead identification to preclinical efficacy testing, particularly for immunomodulatory or microbiome-modulating agents.
- Discovery Biology: Tests hypotheses regarding the appendix’s role in gut immune regulation and microbial homeostasis using measurable immune and histopathological outputs.
- Screening: Provides a standardized, inducible colitis-associated cancer model suitable for evaluating therapeutic candidates in a pathophysiologically relevant setting.
- Analytics: Delivers quantitative and qualitative readouts including flow cytometry for IgA+ cells, ELISA for secretory IgA, and histology for tumor grade and inflammation.
- Translational Research: Bridges discovery to preclinical validation by modeling a human-relevant disease sequence (inflammation to cancer) in a genetically tractable system.
- Enterprise Reuse: Establishes a reusable platform for studying gastrointestinal immune-oncology interactions across multiple therapeutic areas.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Enhances target confidence by linking a defined anatomical manipulation (caecal patch removal) to measurable immune and neoplastic outcomes.
- Operational Value: Delivers a standardized, scalable surgical procedure with clear postoperative monitoring criteria to ensure model reproducibility across sites.
- Strategic Value: Informs go/no-go decisions by providing mechanistic insights into immune-mediated tumor promotion or suppression.
- Portfolio Impact: Supports risk-adjusted prioritization of immunomodulatory candidates by validating disease-relevant biological activity in a preclinical setting.
Implementation Considerations
- Requires expertise in murine surgical techniques, including vascular ligation and intestinal handling to prevent postoperative complications.
- Dependent on sterile surgical instrumentation, sutures (8-0 and 4-0), disinfectants (entoiodine, alcohol), and postoperative analgesics (buprenorphine).
- Necessitates standardized postoperative care protocols, including heat support and pain monitoring for three days to ensure model validity.
- Requires precise DSS concentration (2%) and AOM dosing (0.01 mL/g) to achieve consistent colitis-associated tumorigenesis without excessive mortality.
- Model applicability may vary across mouse strains due to differences in DSS sensitivity, necessitating strain-specific optimization.
