Name: Topikal Elastaz Indüklenen İndüklenen Torasik Aort Anevrizması Murine Cerrahi Modeli (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-08-24T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 s
Description: Öğrenin, sıçanlarda torasik aort anevrizması oluşturmak için sol torakotomi ve pankreatik elastaz uygulaması yöntemini. Bu güvenilir cerrahi protokol, kardiyovasküler araştırmalar için tutarlı sonuçlar sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma AHA Scientist Development Grant 14SDG18730000 (Yüksek Lisans), NIH K08 HL098560 (G.A.) ve RO1 HL081629 (G.R.U.) hibeleri ile desteklenmiştir. Bu proje Torasik Cerrahi Araştırma ve Eğitim Vakfı (TSFRE) Araştırma Bursu (PI: G. Ailawadi) tarafından desteklenmiştir. İçerik sadece yazarların sorumluluğundadır ve MUTLAKA NHLBI veya TSFRE görüşlerini temsil etmez. Anthony Herring ve Cindy Dodson'a bilgi ve teknik uzmanlıkları için teşekkür ederiz.

Hayvan protokolleri Virginia Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (No. 3634) tarafından onaylanmıştır.
1. Anestezi indüksiyonu ve entübasyon
<ol><li>8-10 haftalık erkek C57BL/6 fareyi kapalı bir odaya %5 izofluran ve oksijen karışımı ile solunumlar gözle görülür şekilde yavaşlayıncaya kadar 5 dakika boyunca yerleştirin. NOT: Deneysel protokole bağlı olarak farelerin farklı suşları, cinsiyetleri ve yaşları kullanılabilir. Dişi farelerin entübe edilmesi daha zor olabilir çünkü daha küçük boyut ve dolayısıyla daha küçük hava yolu.</li>
	<li>Vandivort ve ark.13tarafından açıklandığı gibi fare entübe . NOT: Entübasyon adımı, bu modelin hem öğrenmek hem de gerçekleştirmek için en zor kısmıdır. Yukarıda başvurulan yazarlar kendi video adımları açıklayan mükemmel bir iş yok.</li>
</ol>2. Fareyi cerrahi tahtaya securing etmek
<ol><li>Endotrakeal (ET) tüpünü bağlayın, göğüs teki yükselmeyi onaylayın ve fareyi sağ lateral dekübitus pozisyonuna getirin. Isoflurane'yi yaklaşık %3'e çevirin ve her iki göze de yağlama uygulayın. Ventilatör dakikada yaklaşık 200 nefes ve 225 μL gelgit hacmi sağlayacak şekilde ayarlanmalıdır. NOT: Isofluran %5'te bırakılırsa toksisite hızlıdır. Ancak, izoflurana yanıt değişkendir, bu nedenle anestezik akış hızı, spontan diyafragmatik kasılmalar yaklaşık her 10-20'de bir meydana gelecek ve mukoza ve maruz kalan dokunun incelenmesinde oksijenasyon yeterli görünmektedir.</li>
	<li>ET tüpünü bantla tahtaya sabitleyin. Ön pençe burun ile hizada ve bant ile güvenli böylece sağ kol rostrally genişletin.</li>
	<li>Sağ kol ve kuyruk arasında gerginlik bir çizgi oluşturmak için kuyruk caudally çekin, omurganın uzantısı üreten. NOT: Hem kuyruğun hem de sağ pençenin hizaya getirilmesi, ET tüpünün takılmasını veya yerinden çıkarmasını önler.</li>
	<li>Sol bacağı doğal konumuna getirin. Sol kol ventrally haddelenmiş gazlı bez ve bant aşağı çizin.</li>
</ol>3. Ameliyata hazırlık
<ol><li>Farenin sol kanadını sol omuzdan sol karnına kadar elektrikli makaslarla tıraş edin.</li>
	<li>Betadine çözeltisini cerrahi bölge üzerinde fırçalamak için pamuk uçlu aplikatör kullanın. Cerrahi site üzerinde% 70 etanol çözeltisi fırçalamak için yeni bir pamuk uçlu aplikatör kullanın. Kurumasını bekleyin. Steril bir perde yerleştirin.</li>
	<li>DİkKAT: Elektrokoter kullanılmadan önce tüm etanolün tamamen kurutulduğundan ve etanolün tutuşturduğundan emin olun.</li>
</ol>4. Toraksa giriş
<ol><li>Cerrahi makas kullanarak hemithorax orta noktasında 1 cm lateral kesi yapın. Kaburga görünür olana kadar kas katmanları bölmek için el elektrokoter kullanın.</li>
	<li>Doğrudan kaburga 2 mm kısmını cauterize. NOT: Kaburgaüzerinde elektrokoter kullanırken spontan solunum frekansını gözlemleyin. Farenin kateterlik sırasında diyafram daralması varsa, uç toraksa girebilir ve akciğeri delebilir, bu modelde genellikle ölümcüldür.</li>
	<li>Kaburga boşluğunda, koterize kısımdan daha üstün ıslak, ince pamuk uçlu bir aplikatör kullanarak, plevral alana girmek için ucu dokunun üzerine döndürün. Akciğerçökmesine yardımcı olmak için toraks içine ıslak 3 mm x 2 mm sünger yerleştirin. NOT: Sadece son derece hassas olduğu için yumuşak, ıslak, süngerler akciğertemas sağlar.</li>
	<li>Diyafram görünür olana kadar, koterize kaburga üst yönü boyunca kesmek için makas kullanın.</li>
</ol>5. Aort maruziyeti
<ol><li>Kaburga retraktörleri yerleştirin ve torakotomi kesisini açmak için kullanın. Süngeri akciğer yüzeyinden dikkatlice çıkarın.</li>
	<li>Islak 6 mm x 4 mm sünger yerleştirin, böylece akciğeri kaplayan, uçları rostrally ve caudally işaret ile yatıyor. (Geniş düz) akciğer retraktörü süngerin üzerine yerleştirin ve azalan torasik aort açığa çıkana kadar retraktör ventrally'yi yavaşça kaydırın.</li>
	<li>Yaklaşık 5 mm'lik bir kesit için bağ dokusunu ve aorttaki yağı incelemek için #7 forseps kullanın. NOT: Küçük damarlar aort boyunca enine çalışıyor olabilir; diseksiyon sırasında yırtılma önlemek (en az 14x büyütme kullanarak bu komplikasyonu önlemek için yardımcı olabilir).</li>
</ol>6. Elastaz maruziyeti
<ol><li>0,5 mm x 1 mm süngeri 12 μL domuz pankreas elastazı ile doygunlaştırın ve aort yüzeyine yerleştirin. NOT: Süngerin kontralateral akciğere dokunmasına izin vermeyin.</li>
	<li>Önceden belirlenen süreden sonra (genellikle 3-5 dk), #7 forceps ile elastaz süngeri çıkarın. Akciğer retraktörü çıkarın. Göğüs boşluğunu 1 mL steril salin ile sulandırın. NOT: Akciğer süngerinin doymuş ve yumuşak olmasını sağlayarak akciğer yüzeyinin çıkarılmasını kolaylaştıracağı için, sulamadan önce akciğer retraktörü tuzlu sula çıkarın.</li>
	<li>Kalan tuzlu sulama emmek için haddelenmiş 2 "x 2" gazlı bez kullanın. Isoflurane%2'ye düştü.</li>
</ol>7. Göğüs kapanması
<ol><li>Akciğer süngerini çıkar. Kaudal akciğer retraktörü çıkarın. Rostral akciğer retraktörü çıkarın.</li>
	<li>Kaburga karşı 3 kesildi 6-0 emilemez dikişler, her gevşek bir düğüm kravat ama aşağı kravat yok. Dikiş iğnesi ile akciğerdokunmamaya özen.</li>
	<li>Çıkış tüpünü ventilatöre tıkarak veya et tüpünden 0,5-1,0 mL havayı hızla üfleyerek 3 şekilde dur musluğunu kullanarak akciğeri yeniden şişirin. NOT: Barotravmayı önlemek için, hava dolu şırınganın aşırı kullanımından kaçının ve en fazla 1,0 mL hava kullanın.</li>
	<li>Emilemez dikişleri bağlayın. Çalışan 5-0 emilebilir multifilament sütür ile kas tabakalarını yeniden approximate. Isoflurane%1'e düştü.</li>
	<li>7-10 kesilen 5-0 emilemez dikişler ile yakın cilt. Isoflurane%0'a dönün.</li>
</ol>8. Kurtarma
<ol><li>Buprenorfinin 6 μg (0.02 mL 0.3 mg/mL süspansiyon) kısmını subkutan olarak uygulayın. Bandı sağ ayak, kuyruk ve sol koldan ve ardından sağ kol bandından çıkarın.</li>
	<li>Fare ekstremiteleri hareket ettirdiğinde, ET tüpünden kaymak için kuyruğundan çekerek ektübate edin. Supine pozisyonda yüksek oksijen içeriği ısıtıcı odasında yerleştirin. NOT: Fareyi oksijen odasından kafese taşımak, kendini normal duruş pozisyonuna çevirebildiği zaman güvenlidir. Ayrıca, fareler ağrı belirtileri için izlenmeli, sıkıntı, ya da ameliyattan sonra ilk 24-48 saat boyunca sık gelişmek için başarısızlık ve belirtildiği gibi ek analjezi veya yumuşak gıda sağlanan.</li>
</ol>9. Aort anevrizması maruziyeti (terminal hasat prosedürü)
NOT: Genel olarak doku hasadı 14 günde yapılır, çünkü bu maksimal dilatasyon dönemini temsil eder. Ancak, deneye bağlı olarak, hasat işleminin zamanlaması deneye bağlı olarak 3 gün ile 4+ hafta arasında herhangi bir zamanda gerçekleştirilebilir.
<ol><li>Yukarıda açıklandığı gibi ameliyat alanına entübasyon ve güvenli fare (bölüm 1-3). Periton girmemeye özen alarak sol kanadından orta karına kadar orta derecede deri incise makas kullanın.</li>
	<li>Dorsal sol kanadından sol omuz seviyesine doğru eğimli deri. Daha sonra 90° açıyla aksilladan göğüs kafesine doğru eğilin. NOT: Bu kesi orijinal deri kesisini tamamen çevrelemelidir.</li>
	<li>Kateter kullanarak, farenin ventral yönü doğru deri flep incelemek, sol hemithorax açığa. Karın girmek için makas kullanın ve sol diyafram alt ortaya çıkarmak için ventral dorsal için sol costal marjı boyunca eğim. Diyaframın lateral kenarı istenilen açılabilir.</li>
	<li>Önceki adımla oluşturulmazsa, diyaframı en yanal kenarına doğru bükün. Bu deliğe katutery ucu yerleştirin ve ksifoid sürecine costal marjı kapalı diyafram cauterize. Nemli ince uçlu pamuk uçlu aplikatör kullanarak, akciğeri göğüs duvarına yapışıklıklardan hafifçe kurtarın ve akciğeri medial olarak itin. NOT: Yapışmalar göğüs duvarından kolayca çıkamazsa, bunları çıkarmak için katüllik kullanın; bunu yapmak ağır kanamaya neden olabilir akciğer yırtılma önlemeye yardımcı olur.</li>
	<li>Kaburga bir den maliyet marjı göğüs duvarının iç cauterize, orta aksiller çizgi ye dorsal ama aort en az 2 mm. Küretilmiş çizgi boyunca göğüs duvarını kesin. NOT: Bu teknik interkostal arterlerden kanamayı önler.</li>
	<li>Kaburga bir üstün marjı boyunca kesilmiş ve daha sonra göğüs kafesi lateral kenarı boyunca caudally, sol göğüs kafesi kaldırarak. Akciğer üzerine retractors yerleştirin ve medially çekin. Diyafram üzerine retraktör yerleştirin ve mümkün olduğunca çok aort ortaya çıkarmak için caudally çizin.</li>
	<li>Aort anevrizması ve etkilenmemiş distal segmentteki yapışıklıkları gidermek için kuru pamuk uçlu aplikatör kullanın. Etkilenmemiş kontrol segmentinin çapını ve elastazın en geniş kısmını video mikrometrisi kullanarak anevrizma ile ölçün. NOT: Video mikrometri ölçümleri, anevrizmal segmentin yüzde genişlemesini denklem 1'li bir kontrol segmentine göre hesaplamak için kullanılır. Anevrizmal segment 1'e 0,5 mm distal olan bir kontrol segmenti seçilir. <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/60105/60105eq1.jpg">Denklem 1 
	 </li>
	<li>Harms forceps ile aort kavramak, sadece tedavi segmentine distal. Forceps distal kesmek için makas kullanın, sonra omurilik kapalı aort incelemek. Tedavi segmentine aort proksimal kesin ve anevrizmal aort kaldırın.</li>
	<li>Bir tüberkülin şırınga ve iğne kullanarak, aort lülesini istediğiniz gibi tuzlu ve proses dokusu ile yıkayın.</li>
</ol>

<ol><li>Coady, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+is+the+appropriate+size+criterion+for+resection+of+thoracic+aortic+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Thoracic+and+Cardiovascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">What is the appropriate size criterion for resection of thoracic aortic aneurysms.</a> Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 113 (3), 489-491 (1997).</li>
<li>Aggarwal, S., Qamar, A., Sharma, V., Sharma, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Abdominal+aortic+aneurysm%3A+A+comprehensive+review%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+and+Clinical+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Abdominal aortic aneurysm: A comprehensive review.</a> Experimental and Clinical Cardiology. 16 (1), 11-15 (2011).</li>
<li>Bickerstaff, L. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thoracic+aortic+aneurysms%3A+a+population-based+study%5BTitle%5D)+AND+%22Surgery%22%5BJournal%5D)">Thoracic aortic aneurysms: a population-based study.</a> Surgery. 92 (6), 1103-1108 (1982).</li>
<li>Cheng, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endovascular+aortic+repair+versus+open+surgical+repair+for+descending+thoracic+aortic+disease+a+systematic+review+and+meta-analysis+of+comparative+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+College+of+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Endovascular aortic repair versus open surgical repair for descending thoracic aortic disease a systematic review and meta-analysis of comparative studies.</a> Journal of the American College of Cardiology. 55 (10), 986-1001 (2010).</li>
<li>Walsh, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endovascular+stenting+versus+open+surgery+for+thoracic+aortic+disease%3A+systematic+review+and+meta-analysis+of+perioperative+results%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Endovascular stenting versus open surgery for thoracic aortic disease: systematic review and meta-analysis of perioperative results.</a> Journal of Vascular Surgery. 47 (5), 1094-1098 (2008).</li>
<li>Absi, T. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+patterns+of+gene+expression+distinguishing+ascending+aortic+aneurysms+from+abdominal+aortic+aneurysms%3A+complementary+DNA+expression+profiling+in+the+molecular+characterization+of+aortic+disease%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Thoracic+and+Cardiovascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Altered patterns of gene expression distinguishing ascending aortic aneurysms from abdominal aortic aneurysms: complementary DNA expression profiling in the molecular characterization of aortic disease.</a> The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 126 (2), 344-357 (2003).</li>
<li>Ailawadi, G., Eliason, J. L., Upchurch, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+concepts+in+the+pathogenesis+of+abdominal+aortic+aneurysm%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Current concepts in the pathogenesis of abdominal aortic aneurysm.</a> Journal of Vascular Surgery. 38 (3), 584-588 (2003).</li>
<li>Ikonomidis, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+murine+model+of+thoracic+aortic+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Surgical+Research%22%5BJournal%5D)">A murine model of thoracic aortic aneurysms.</a> Journal of Surgical Research. 115 (1), 157-163 (2003).</li>
<li>Daugherty, A., Manning, M. W., Cassis, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiotensin+II+promotes+atherosclerotic+lesions+and+aneurysms+in+apolipoprotein+E-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Angiotensin II promotes atherosclerotic lesions and aneurysms in apolipoprotein E-deficient mice.</a> Journal of Clinical Investigation. 105 (11), 1605-1612 (2000).</li>
<li>Trachet, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ascending+Aortic+Aneurysm+in+Angiotensin+II-Infused+Mice%3A+Formation%2C+Progression%2C+and+the+Role+of+Focal+Dissections%5BTitle%5D)+AND+%22Arteriosclerosis%2C+Thrombosis%2C+and+Vascular+Biology%22%5BJournal%5D)">Ascending Aortic Aneurysm in Angiotensin II-Infused Mice: Formation, Progression, and the Role of Focal Dissections.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 36 (4), 673-681 (2016).</li>
<li>Johnston, W. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+interleukin-1beta+decreases+aneurysm+formation+and+progression+in+a+novel+model+of+thoracic+aortic+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Inhibition of interleukin-1beta decreases aneurysm formation and progression in a novel model of thoracic aortic aneurysms.</a> Circulation. 130 (11), Suppl 1 51-59 (2014).</li>
<li>Pope, N. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interleukin-6+Receptor+Inhibition+Prevents+Descending+Thoracic+Aortic+Aneurysm+Formation%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Thoracic+Surgery%22%5BJournal%5D)">Interleukin-6 Receptor Inhibition Prevents Descending Thoracic Aortic Aneurysm Formation.</a> Annals of Thoracic Surgery. 100 (5), 1620-1626 (2015).</li>
<li>Vandivort, T. C., An, D., Parks, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Improved+Method+for+Rapid+Intubation+of+the+Trachea+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">An Improved Method for Rapid Intubation of the Trachea in Mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (108), e53771(2016).</li>
<li>Ailawadi, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+nonintrinsic+regional+basis+for+increased+infrarenal+aortic+MMP-9+expression+and+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">A nonintrinsic regional basis for increased infrarenal aortic MMP-9 expression and activity.</a> Journal of Vascular Surgery. 37 (5), 1059-1066 (2003).</li>
<li>Ruddy, J. M., Jones, J. A., Spinale, F. G., Ikonomidis, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regional+heterogeneity+within+the+aorta%3A+relevance+to+aneurysm+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Thoracic+and+Cardiovascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Regional heterogeneity within the aorta: relevance to aneurysm disease.</a> Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 136 (5), 1123-1130 (2008).</li>
<li>Trigueros-Motos, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryological-origin-dependent+differences+in+homeobox+expression+in+adult+aorta%3A+role+in+regional+phenotypic+variability+and+regulation+of+NF-kappaB+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Arteriosclerosis%2C+Thrombosis%2C+and+Vascular+Biology%22%5BJournal%5D)">Embryological-origin-dependent differences in homeobox expression in adult aorta: role in regional phenotypic variability and regulation of NF-kappaB activity.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 33 (6), 1248-1256 (2013).</li>
<li>Lu, G. S. G., Davis, J. P., Schaheen, B., Downs, E., Roy, R. J., Ailawadi, G., Upchurch, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+chronic+advanced+staged+abdominal+aortic+aneurysm+murine+model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">A novel chronic advanced staged abdominal aortic aneurysm murine model.</a> Journal of Vascular Surgery. 66 (1), 232-242 (2017).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Torasik ve abdominal aort hücresel ve embriyolojik olarak farklı, hangi anevrizmal hastalık ile ilgili14,15,16. Bu nedenle, TAA çalışmak için belirli bir hayvan modeli gereklidir. Diğer murine dTAA modelleri8yayınlanmış olmasına rağmen , bizim gerçekten anevrizmal olarak kabul edilebilir inen torasik aort dilatasyonu oluşturmak için tek modeldir (üzerinde 50% dilatasyon). Ayrıca, bizim model yürütmek için...

Bu yöntemin amacı aort anevrizması oluşumu sırasında inen torasik aortun gelişimi, patofizyolojisi ve yapısal değişikliklerini incelemektir. Modelimiz farelerde torasik aort anevrizmalarını (dTAA) indüklemek için tekrarlanabilir ve tutarlı bir yöntem sunarak çeşitli genetik ve farmakolojik inhibitörlerin test edilmesine olanak sağlamaktadır. Bu çalışma, dTAA hastalığı olan insanlar için uygulanabilir bir tedavi stratejisine çevrilebilecek ilaçların ve gen terapilerinin belirlenmesine yardımcı olabilir.
torasik aort duvarı zayıfladığında ve zaman içinde genişlediğinde yırtılma veya yırtılma meydana geldiğinde kritik bir çapa ulaşıncaya kadar dTA'lar oluşur. Klinik olarak, dTAA sessizlik içinde ilerleyebilir, aort duvarının yapısı o kadar bozulmuş ki sonunda başarısız olana kadar boyutu artmaktadır, yıkıcı sonuçlara yol açabilir. Bununla ilgili olarak, semptomlar genellikle sadece anevrizma tehlikeli bir boyuta ulaştığında gelişir (100-150% genişleme) ve diseksiyon veya rüptür için yüksek risk altındadır1,2. dTAA rüptürü neredeyse evrensel olarak ölümcüldür 3, ve elektif cerrahi onarım önemli morbidite taşır4,5. Ayrıca, çoğu hasta cerrahionarım6 ,7önce yaklaşık 5 yıl boyunca bir aort anevrizması tanısı taşımak . Bu pencere, cerrahi olmayan müdahale için uygun bir zamanı temsil eder. Bu nedenle, dTAA'nın tedavisi veya yavaş ilerlemesi için tıbbi tedavilere ihtiyaç duyulmaktadır ve anevrizma araştırmaları alanında önemli bir ilerleme yitirmeolacaktır. Şu anda dTAA patogenezinin eksik anlaşılması nedeniyle dTAA için tıbbi tedavi bulunmamaktadır.
Son 20 yıl içinde, birkaç dTAA hayvan modelleri geliştirilmiştir, ancak bu modellerin her biri bizimkinden farklı ydı ve sağlam anevrizmalar üretmedi. Bizimkine en çok benzeyen bir murine dTAA modeli, CaCl 2'nin aort adventisine doğrudan uygulanmasını içeren Ikonomidis ve ark.8tarafından geliştirilmiştir. Modelimiz Ikonomidis tarafından belirlenen tekniklerin çoğundan uyarlanmış olsa da, modelimiz üç ayrı şekilde benzersizdir. İlk olarak, modelimizde aort 3-5 dakika topikal elastaza maruz kalır, CaCl2 pozlama 15 dakika ile karşılaştırıldığında. İkinci olarak, aort genişlemesi 2 hafta içinde oluşur, CaCl 16 hafta ile karşılaştırıldığında2 model. Son olarak, modelimiz sürekli olarak yaklaşık %100 dilatasyon anevrizmaları üretir, CaCl2 uygulaması tarafından üretilen %20-30 aort dilatasyonlarına göre (aort artışı olarak tanımlandıkları için gerçekten anevrizma olarak kabul edilemezler). çapı >%50). Anevrizma oluşumunun diğer cerrahi olmayan murine modelleri vardır, Apo E nakavt fare gibi, anjiyotensin infüzyonu ile sağlam anevrizmalar oluşturan II. Ancak, bu fareler özellikle alçalan torasik aort9,10anevrizma yerine supra-renal veya yükselen torasik aort anevrizmaları geliştirmek .
Bu protokol için rasyonel basit, ucuz ve bir murine modelinde dTAA çalışma için uygun bir yol olmasıdır. Fare modeli diğer damar hastalıklarında etkili olduğu tespit edilmiştir birçok genetik ve hücreye özgü nakavt kullanmak için eşsiz bir fırsat sağlar. Bizim özel TAA modelinin kullanımı iyi kabul edilmiş ve deneyler yüksek etkili dergilerde yayınlanmıştır11,12. Bu noktada, model abdominal aort anevrizması (AAA) mürin modellerinde önemli bir etkiye sahip olası genetik ve farmakolojik tedavileri araştırmak için kullanılmıştır; ancak laboratuvarımız dTAA modelinin kullanımını genişlettikçe, insanlarda hedefli tedaviler olarak kullanılabilecek dTAA oluşumuna özgü hedefler buluyoruz.
Bu model en çok murine mikro-cerrahi yetenekleri olan laboratuvarlar için uygundur. Teknik olarak zor olsa da, daha önce hiçbir cerrahi deneyimi olmayan araştırmacılar tarafından bile sürekli olarak yürütülebilir. Hiçbir murine cerrahi deneyimi olan bir araştırmacı için model yaklaşık 20 ameliyat seans (veya yaklaşık 50 fare) hakim olabilir. Önceki cerrahi deneyimi olan araştırmacı için, model 5 ameliyat seanslarında (yaklaşık 20 fare) hakim olabilir. Biz yüksek kaliteli bir video ile, ustalık için zaman daha da azaltılabilir inanıyoruz. Yeterlilik sağlandıktan sonra ameliyat için 35 dakika, terminal hasat için 20 dakika içinde işlem tamamlanabilir. Laboratuvarımızdaki cerrahlar günde 10-12 tam ameliyat yapabilirler ve ameliyat mortalite oranı %5-10'dur. Mortalitenin en sık nedeni göğüse girişte akciğer hasarı, anestezik toksisite veya diseksiyon sırasında aort un yırtılmasıdır. DTAA araştırmaek, bu model aynı zamanda göğüs diğer müdahaleler ilerleyen araştırmacılar için torasik aort ve akciğer hilum güvenli ve kolay erişim için bir rehber olarak hizmet vermektedir.

<table><tbody><tr><td>Anjiyokateter (22G)</td><td></td><td></td><td>ET Tüp</td></tr><tr><td>Dumont Cımbız için kullanılır; Desen # 7 x2</td><td>Roboz</td><td>RS-4982</td><td></td></tr><tr><td>Graefe Doku Forseps</td><td>Roboz</td><td>RS-5158</td><td></td></tr><tr><td>Zararlar Forseps x2</td><td>Roboz</td><td>RS-5097</td><td></td></tr><tr><td>İntrakardiyak İğne Tutucu; Ekstra hassas; Karbür Çeneler; 7 "Uzunluk</td><td>Roboz</td><td>RS-7800</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp;KL 1500 LED Işık Kaynağı</td><td>Leica</td><td>150-400</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; M205A Dissksiyon Mikroskobu</td><td>Leica</td><td>CH 94-35</td><td></td></tr><tr><td>İris Makası, 11cm, Tungsten Karbür</td><td>Dünya Hassas Aletler</td><td>500216-G</td><td></td></tr><tr><td>Metal Pano Fare Toplayıcı</td><td></td><td></td><td>Seti ile Kullanım&nbsp;</td></tr><tr><td>Fare Ekartör Seti</td><td>Kent</td><td>SURGI-5001</td><td>2 kısa ve 1 uzun fiksatör gerekir</td></tr><tr><td>Fare Vantilatörü MiniVent Tip 845, 115 V, ABD Konnektörlü Güç</td><td>Kaynağı Harvard Aparatı</td><td>73-0043</td><td>Fareler için MiniVent Vantilatör (Model 845), Tek Hayvan,</td></tr><tr><td>Domuz pankreasından</td> Ses Kontrollü<td>Sigma Aldrich</td> Elastaz <td>E0258-50MG</td><td>Çeşitli boyutlarda şişelerde satın alınabilir</td></tr> Küçük <tr><td>Gemi Koterizatör Kiti</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>18000-00</td><td>Şarj edilebilir AA pillerin kullanılmasını tavsiye eder</td></tr><tr><td>Bahar Makas, 10.5cm</td><td>Dünya Hassas Aletler</td><td>14127</td><td></td></tr><tr><td>Steril Çubuklar (Süngerler)</td><td>Sugi</td><td>31603</td><td>Boyuta göre kesilebilir</td></tr><tr><td>Surgi Suite Cerrahi Platform</td><td>Kent</td><td></td><td>Panoya takın&nbsp;</td></tr><tr><td>Teknik IV İzofluran Vap</td><td>Jorgensen&nbsp; Laboratuvarlar&nbsp;</td><td>J0561A</td><td>Anestezi buharlaştırıcı&nbsp;</td></tr></tbody></table>

topikal elastaz indüklenen İndüklenen torasik aort anevrizması murine cerrahi modeli

Murine Surgical Model of Topical Elastase Induced Descending Thoracic Aortic Aneurysm

Hastalık Kontrol Merkezi'ne göre, 1999-2016 yılları arasında tüm ırklarda ve her iki cinste de aort anevrizmaları (AAs) önde gelen ölüm nedeni olarak kabul edildi. Anevrizma, kritik bir çapa ulaştığında yırtılma veya yırtılma yapabilen aortun ilerleyici zayıflaması ve nihai genişlemesi sonucu oluşur. Göğüste alçalan aort anevrizmaları, inen torasik aort anevrizmaları denir (dTAA), Amerika Birleşik Devletleri'nde anevrizma vakalarının büyük bir kısmını oluşturan. Kontrolsüz dTAA rüptürü neredeyse evrensel olarak ölümcüldür ve elektif onarım yüksek oranda morbidite ve mortaliteye sahiptir. Modelimizin amacı özellikle dTAA'yı incelemek, dTAA'nın patofizyolojisini açıklamak ve büyümeyi durdurmak veya dTAA'nın boyutunu küçültmek için moleküler hedefler aramaktır. Torasik patolojiyi tam olarak incelemek için bir murine modeline sahip olarak özellikle dTAA'yı test etmek için hedefli tedaviler geliştirilebilir. Yöntem, cerrahi maruziyet sonrası domuz pankreatik elastazın (PPE) doğrudan dış mürin aort duvarına yerleştirilmesine dayanmaktadır. Bu yıkıcı ve inflamatuar reaksiyon oluşturur, hangi aort duvarı zayıflatır ve aylara haftalar boyunca anevrizma oluşumunu sağlar. Murine modelleri sınırlamalara sahip olsa da, dTAA modelimiz öngörülebilir boyutta sağlam anevrizmalar üretir. Ayrıca, bu model dTAA büyümesini durdurabilecek veya yırtılmayı önleyebilecek genetik ve farmasötik hedefleri test etmek için kullanılabilir. İnsan hastalarda, bu gibi müdahaleler anevrizma rüptürü ve zor cerrahi müdahale önlemeye yardımcı olabilir.

Protokolümüzün uygulanması, farelerde tuzlu kontrollere kıyasla sağlam dTAA ile sonuçlanır. Geliştirilen TAA'lar fusiform şeklindedir ve sadece aortun tedavi edilen kısmında görülür (Şekil 1 ve Şekil 2)11. Şekil 2 doku hasat bir video mikrometri ölçüm bir örnek gösterir. Denklem 1'i kullanarak, aort genişlemesi bu örnekte 0'dur.
Johnston ve ark.11'in modeli ...

Farelerde sürekli olarak alçalan torasik aort anevrizmalarını tetikleyen bir cerrahi protokol uyguluyoruz. Prosedür sol torakotomi içerir, torasik aort maruzkalma, ve aort duvarında domuz pankreas elastaz batırılmış bir sünger yerleştirme.

Topikal Elastaz Indüklenen İndüklenen Torasik Aort Anevrizması Murine Cerrahi Modeli

According to the Center for Disease Control, aortic aneurysms (AAs) were considered a leading cause of death in all races and both sexes from 1999-2016. ...

Bu protokol farelerde tutarlı boyut ve yer sağlam torasik aort anevrizmaları üretme yeteneğine sahiptir ve murin göğsüne güvenli erişim için bir rehber olarak hizmet vermektedir. Bu protokol, diğer modellere göre makul bir süre içinde farelerde torasik aort anevrizmaları üretmek için basit ve tutarlı bir yöntemdir. Sekiz ila 10 haftalık erkek c57 siyah altı farede uygun bir sedasyon seviyesini doğruladıktan sonra, fareyi sağ lateral dekübitus pozisyonuna yerleştirin ve ön patinin burunla aynı hizada olması için sağ kol rostrally'yi bantlayın.Sağ kol ve kuyruk arasında gerginlik bir çizgi oluşturmak için kuyruk caudally çekin, omurgauzantısı üreten, ve doğal pozisyonda sol bacak bant. Sonra, sol kol ventrally haddelenmiş gazlı bez üzerinde bant. İşleme başlamadan önce sol omzundan sol sol adadan sol kanadı tıraş etmek için makas kullanın.İlk betadyne çözeltisini fırçalamak için pamuk uçlu aplikatör kullanın, sonra cerrahi alan üzerinde %70 etanol. Cilt kuruduğunda, hayvanın üzerine steril bir örtü yerleştirin. Hemothoraks orta noktasında iki santimetre lateral kesi yapmak ve kaburga görünür olana kadar kas tabakalarını bölmek için el elektrokoter kullanın.10 ila 15x büyütme altında, doğrudan kaburga arasında iki milimetrelik bir kısmını katuterize ve koterize kısmı ile plevral alana incelemek için kaburga alanında tuzlu ıslak, ince pamuk uçlu aplikatör kullanın. Akciğeri çökertmek için toraksa tuzlu, üçer iki milimetrelik bir sünger yerleştirin. Daha sonra, diyafram görünür ventrally ve kesi paraspinus kasları dorsally birkaç milimetre uzakta olana kadar torakotomi genişletmek için makas kullanın.Aortu ortaya çıkarmak için, torakotomi kesi içine kaburga retractors yerleştirin ve dikkatle akciğer yüzeyinden sünger çıkarın. Bir tuzlu ıslak, uçları rostrally ve caudally işaret ile altı dört milimetrelik sünger ile akciğer kapak ve sünger üzerinde geniş, düz akciğer retractor yerleştirin. Daha sonra, azalan torasik aort maruz kalana kadar retraktör ventrally doğru kaydırın ve aort bağ dokusu ve yağ yaklaşık beş milimetrelik bir bölümünü incelemek için yedi numaralı forceps kullanın.Elastaz uygulamak için, ilk olarak, domuz pankreas elastaz 12 mikrolitre ile bir milimetre sünger 0,5 doymuş ve aort maruz yüzeye sünger yerleştirmek için bir mikropipet kullanın. Üç ila beş dakika sonra, elastaz süngeri çıkarmak ve akciğer retraktörünü çıkarmak için yedi numaralı forceps kullanın. Steril salin mililitre yaklaşık yarım ile göğüs boşluğu sulamak.Akciğer süngeri çıkarın ve kalan tuzlu sulama emmek için gazlı bez bir haddelenmiş iki inç parça kullanın. Kaburga retractors çıkarın ve üç kesilen altı-oh olmayan emültürler ile kaburga degifi, dikişleri aşağı bağlamadan her dikiş gevşek bir düğüm bağlama. Akciğer ilerlettikten sonra, dikişleri bağlayın ve çalışan beş-oh emilebilir örgülü dikiş ile kas tabakalarını yeniden approximate.7-10 kesilen beş-oh olmayan emdirilebilir dikişler ile cildi kapatın. Sonra, tam recumbency kadar hayvan izlemek. Uygun deneysel bitiş noktasında, periton girmemeye dikkat ederek, sol kanattan merkezi karın için orta derecede deri eğim makas kullanın.Dorsal sol kanadından sol omzuna doğru deri eğim ve sternum axilla ile 90 derecelik bir açıyla bir kesi yapmak. Kateter kullanarak, sol hemothoraks ortaya çıkarmak için farenin ventral yönü doğru deri flep incelemek ve sol diyafram alt ortaya çıkarmak için dorsal yönden ventral sol costal marjı boyunca karın girmek için makas kullanın. Diyaframın lateral-en kenarı açılmıyorsa, diyaframı en lateral kenarına doğru eğin.Bu deliğe kateterucuucu ucu yerleştirerek, ksifoid sürecine costal marjı diyafram cauterize ve hafifçe göğüs duvarına herhangi bir yapışma akciğer serbest etmek için nemli, ince uçlu pamuk uçlu aplikatör kullanın. Akciğer in yolunun dışında olduğundan emin olurken, ilk kaburga maliyet marjı kaburga ve göğüs duvarı ile kesmek için elektrokoter kullanın, orta aksiller çizgi ye dorsal, ama aort en az iki milimetre. İlk kaburga nın üstün kenarı boyunca kesin ve hemothoraks ortaya çıkarmak için göğüs kafesi ventrally yansıtır.Akciğer üzerine retractors yerleştirin ve medially çekin. Diyafram üzerine bir retraktör veya tuzlu ıslak gazlı bez yerleştirin ve mümkün olduğunca aort kadar ortaya çıkarmak için caudally çizin. Aort anevrizması ve etkilenmemiş distal segmentteki yapışıklıkları gidermek için kuru, pamuk uçlu aplikatör kullanın ve etkilenmemiş kontrol segmentinin çapını ve elastaz ile tedavi edilen anevrizmanın en geniş kısmını ölçmek için video mikrometrisini kullanın.Aort hasat için, tedavi segmentine sadece distal sadece distal ve forceps distal kesmek için makas kullanın zararları ile damar kavramak. Omurilik kapalı aort diseksiyon ve anevrizmal doku kaldırmak için tedavi segmentine damar proksimal kesti. Daha sonra, bir tüberkülin şırınga ve iğne kullanarak, aort lülesini tuzlu su yla yıkayın ve numuneyi planlanan aşağı deneysel analize göre işlayın.Formda fusiform olarak geliştirilen torasik anevrizmalar ve sadece aort üzerinde tedavi kısmında meydana gelir. Bu temsili video mikrometri ölçümünde doku hasatında aort genişlemesi %130 olarak saptandı. Nitekim, tip elastaz tedavi fareler gün üç, yedi, 14 ve 21 post-tedavi de aort genişlemesi önemli bir artış sergilerken maksimal dilatasyon gün 14 kontrol vahşi tip fareler ile karşılaştırıldığında gözlenen.Histolojik analizler yabani tip anevrizmaların ince ve parçalanmış elastin liflerine sahip olduğunu ortaya koymaktadır. Makrofaj ve interlukin tek beta ekspresyonunda artış ile daha az düz kas hücresi boyama da vardır. Minten akciğeri son derece hassastır ve yaralanma genellikle ölümcüldür.Göğüs içine ilk giriş ile son derece dikkatli alın ve sadece tuzlu ıslak sünger ile akciğer işlemek. Bu model, inen torasik aort anevrizmalarının patogenezinde interlukin bir-beta ve interlukin altının rolünün ve ablukalarının bu anevrizmaların cerrahi olmayan yönetimini nasıl kolaylaştırabileceğini niçin açıklığa kavuşturmaya yardımcı olmuştur.

murine-surgical-model-topical-elastase-induced-descending-thoracic

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Bu video infrarenal abdominal aort segmentine domuz pankreatik elastaz geçici intraluminal infüzyonu ile farelerde abdominal aort anevrizması (AAA) ikna etmek için nasıl gösterir. Modeli birçok transgenik ve gen knockout farelerde ortaya çıkması nedeniyle AAA patobiyolojisi geniş bir fikir eklemek için yeteneğine sahiptir.

Elastaz ile murin Deneysel Abdominal Aort Anevrizmalarının Yaratılış

Anevrizma endogreft dışlama sonra histolojik ve biyokimyasal değişiklikler hala belirsiz. Bir fare anevrizma üzerinde endogreft implantasyon yeni bir model tarif. Kalıcı dolaşan kan akışı arayüzü ve yeni endovasküler biyomalzemeler değerlendirme olan ve olmayan trombüs analizi sayesinde, bu model daha iyi endovasküler anevrizma dışlama patobiyolojisi anlamanıza yardımcı olacaktır.

Endovasküler Aort Anevrizma Onarımı Yeni Bir murin Modeli

Mevcut protokol, farelerde infrarenal abdominal aortun adventitisine doğrudan elastaz uygulanması yoluyla elastaz kaynaklı AAA modeli için standartlaştırılmış bir cerrahi yöntemi tanımlamaktadır.

Elastazın Perivasküler Uygulaması ile İndüklenen Fare Abdominal Aort Anevrizması Modeli

Bu makale, önceki modelleme yöntemlerinin avantajlarını birleştirerek, kalsiyum klorür ve elastaz kullanarak bir fare abdominal aort anevrizması modeli oluşturmak için bir protokol sunmaktadır. Bu model, abdominal aort anevrizmalarının altında yatan patofizyolojik mekanizmaları araştırmak için kullanılabilir.

Periadventitial Kalsiyum Klorür ve Elastaz İnfiltrasyonu ile Bir Fare Abdominal Aort Anevrizması Modeli

Bu protokol, farelerde ileri abdominal aort anevrizmalarının modellenmesine yönelik metodik bir cerrahi yaklaşımı, infrarenal aorta doğrudan elastaz uygulanması ve içme suyu yoluyla ß-aminopropionitrilin uygulanmasının bir kombinasyonu ile tanımlar.

Topikal Elastaz ve Oral ß-aminopropionitril kombinasyonu ile farelerde ileri abdominal aort anevrizması modellemesi

Bu protokol, tek bir cerrahi operasyonla bir murin modelinde karotis anevrizmalarının indüklenmesi için standart bir cerrahi yöntemi tanımlamaktadır.

Karotis Anevrizması Oluşumunun Bir Murin Modeli

Bu protokol, farelerde torasik aort diseksiyonunun indüksiyonu için ayrıntılı, adım adım bir prosedür sağlar. Spesifik olarak, gerekli β-aminopropionitril ve anjiyotensin II dozlarının kesin hesaplamasını, ozmotik pompa doldurma prosedürünü ve ozmotik pompanın implantasyon tekniğini içerir.

Oral β-Aminopropionitril ve Subkütan Anjiyotensin II İnfüzyonu ile İndüklenen Torasik Aort Diseksiyonunun Murin Modeli

Bu protokol, elastin hassasiyeti ve perivasküler elastaz uygulaması kullanarak C57BL/6 farelerinde abdominal aort anevrizmalarını (AAA) indüklemek için tekrarlanabilir ve güvenilir bir yöntem sunar; bu yöntem bağışıklık duyarlılığı bileşeni içeren bir AAA modelidir.

Elastin duyarlılığı ve perivasküler elastaz kullanarak güvenilir bir fare karın aort anevrizması modeli oluşturulması

Spinal kord iskemi-reperfüzyon hasarı mekanistik anlayış eksikliği, yüksek riskli aort operasyonları aşağıdaki paraplejiyi önlemek için ek maddeler engellemiştir. Bu nedenle, hayvan modellerinin geliştirilmesi zorunludur. Bu el yazması bir fare modelinde torakal aort tıkanıklığı sonrası tekrarlanabilir alt ekstremite felci gösterir.

Spinal Kord İskemi-reperfüzyon bir Mürin Modelinde Torasik Aort Tıkanıklığı tarafından tekrarlanabilir Parapleji

Biz tekrar elde edilebilirliğini arttırmak için, sol ön inen arter (LAD) üzerine ligasyon konumlandırma daha fazla netlik sağlar fare modellerinde miyokard infarktüsü (MI) simüle etmek için deneysel iskemi / reperfüzyon (I / R) hasarı ikna etmek için bir cerrahi yöntemi tanıtmak Farelerde MI deneyler.

Sol ön inen arter ligasyonu ile Miyokard İskemi-reperfüzyon Hasarı bir fare modeli

Öğrenin, sıçanlarda torasik aort anevrizması oluşturmak için sol torakotomi ve pankreatik elastaz uygulaması yöntemini. Bu güvenilir cerrahi protokol, kardiyovasküler araştırmalar için tutarlı sonuçlar sağlar.

Topikal Elastaz Indüklenen İndüklenen Torasik Aort Anevrizması Murine Cerrahi Modeli

Daha fazla video keşfet