Hücre Fenotimi ve Sekretom Karakterizasyonu için İnsan Yağ Dokusu Mikro-parçalanma

Bu sistemi kullanarak, insan yağ dokusunun milimetre altı kümelerini toplayabiliriz, rejeneratif hücrelerin tüm mikro ortamının sağlam olduğu. Tüm mikrovasküler sistem de sağlam, ve bu yüzden in-vitro kültür için in-vivo transplantasyon ve daha fazla karakterizasyon için hücre izolasyonu için mikro organları n için bu tür kullanabilirsiniz. Araştırma laboratuvarında sistemin kullanımıiçin temel gerekçe sürecin tamamen enzimsiz olmasıdır, ve bu nedenle bir mikro-mimari korurken insan yağ dokusunun hızlı ve verimli işlenmesine olanak sağlar ve tamamen bozulmamış doku mikrovaskülatür olacaktır.

Ve böylece doğrudan klinikte zaten çok yararlı olduğu kanıtlanmıştır bir hücre tedavisi ürün üzerinde çalışabilirsiniz. Bu kapalı sistem teknolojisi hasat, işleme ve re-enjeksiyon rafine yağ dokusu intra-operatif için kullanımı kolay bir tekniktir ve başarıyla kozmetik ortopedi, proktoloji ve aynı zamanda jinekoloji uygulanabilir. Bu yöntem doku rejenerasyonu yağ etkisi nin daha fazla çalışma sağlar.

Prosedür bianca Vezzani, bir doktora sonrası adam ve Mario Gomez-Salazar, bir doktora öğrencisi tarafından gösterilecek. Hasattan sonraki 16 saat içinde aseptik koşullar altında çalışarak, abdominoplasti örneğini deri yukarı bakacak şekilde cerrahi bir bezin üzerine yerleştirin. Deri altı yağ dokusuna 50 ila 100 mililitre 37 santigrat derece sodyum klorür çözeltisi enjekte etmek için tek kullanımlık doku infiltrasyon kanülkullanın.

Tek kullanımlık liposuction kanüle 10 mililitrelik Luer kilit şırıngası bağlayın ve numunenin kenarına yakın kutanöz bölgede numuneyi tutarak, kanülü yağ dokusuna dikkatlice tanıtın. Kanül doku içinde olduğunda, piston ayıklayın ve yağ dokusu örneği içinde radially kanül hareket ettirin. Lipo-aspirasyon sırasında yağ dokusunu sıkıca işlemek önemlidir.

Yeterli yağ toplanır değilse, ek bir tuzlu enjeksiyon gerçekleştirmeyi düşünün. Şırınga lipo-aspire dolu olduğunda, kanülü dikkatlice dokudan çıkarın ve toplam 60 mililitre aspire hasat edilene kadar tam şırıngayı yeni bir boş şırınga ile değiştirin. Lipo-aspirenin mikro parçalanması için cihazı paketten çıkarın ve ana ünitenin atık torbasına bağlı olduğunu doğrulayın.

Atık toplama torbasını yere yerleştirin ve vanaların proses ünitesi kapaklarına sabitolduğundan emin olun. Giriş hattının terminal ani kısmını tuzlu torbaya bağlamak için çanta bağlantı bağlantı noktasını delin ve tuzlu çantayı işleme ünitesinden daha yükseğe yerleştirin. Devrelerin tüplerine bağlı beş kelepçenin de açık olduğunu doğrulayın, işlem ünitesini dikey konuma yerleştirin, tuzlu çözeltinin işlem ünitesini doldurmasına izin verin ve akışın atık torbasına ulaştığını doğrulayın.

Herhangi bir hava kabarcıkları kaldırmak için işleme ünitesi sallayın ve mavi kapak yukarı bakacak şekilde dikey bir pozisyonda birim yerleştirin. Giriş hattının yanındaki kelepçeyi kapatın ve lipo-aspire enjekte etmeye başlamak için mavi giriş kapağının kendi kendini tıkayan vanasına lipo-aspire bir şırınga bağlayın. İşlem ünitesini dikey tutarak, lipo-aspireedilenin tamamı üniteye aktarılana kadar şırınga pistonuna yavaşça bastırın.

Tüm lipo-aspire enjekte edildiğinde, tuzlu akışı geri yüklemek için giriş kıskacı açın ve en az iki dakika boyunca işleme ünitesini şiddetle sallayın, düzenli olarak atık torbasına tuzlu çözelti akışını kontrol edin. İşlem birimindeki tuzlu çözelti saydam olduğunda, üniteyi gri kapaklı yukarı yerleştirin ve drenajda bulunan kelepçeleri hem mavi hem de gri kapakların yakınına kapatın. İşlenmiş doku en üstte yüzecek.

Daha sonra, 10 mililitrelik Luer kilidi şırıngını tuzlu çözeltiyle doldurun ve şırıngayı mavi kapağın yükleme vanasına bağlayın. Boş bir 10 mililitrelik Luer kilit şırıngasını, gri kapağın vanasına tamamen takılı olan pistonla bağlayın. Sıkıca mavi kapaktan işlem ünitesiiçine tuzlu enjekte, gri kapak bağlı şırınga dolayısıyla işlenmiş doku ile dolduruluyor olup olmadığını kontrol.

Tüm tuzlu su enjekte edildiğinde, dikkatlice her iki şırınga çıkarın ve tüm işlenmiş doku toplanana kadar tuzlu infüzyon tekrarlayın. İşlemin sonunda, tüm şırıngaları çıkarın, tüm kelepçeleri kapatın, tuzlu torbayı çıkarın ve cihazı yerel protokollere göre imha edin. İşlenmiş dokunun tamamı toplandığında, mikro-parçalanmış yağ dokusunu steril bir kap içine aktarın ve konteynere eşit hacimli sindirim ortamı ekleyin.

Kapalı kabı, kuluçka sonunda eşit hacimde bloklama çözeltisi ile sindirimi durdurarak, dakikada 120 dönüşe ayarlanmış 37 derece santigrat derece sallayarak su banyosuna yerleştirin. Numuneyi sırayla filtreleyin, önce 100 mikrometrelik bir hücre süzgecinden geçirin ve ardından 70 mikrometrelik bir hücre süzgecinden geçirin ve filtrelenmiş süspansiyonu 200 kez beş dakika santrifüj edin. Oda sıcaklığında yaklaşık 5 mililitre eritrosit lysis tamponu içinde peleti 15 dakika süreyle askıya alıyoruz.

Eşit hacimli blokaj çözeltisi ile lysis'i durdurun ve çözeltiyi 40 mikrometrelik bir hücre süzgecinden geçirin. Daha sonra mikro-parçalanmış yağ dokusu hücrelerini santrifüj ile toplayın ve taze blokaj çözeltisi içinde pele'yi saymak için un karıştırma ile askıya alıyoruz. Dissosilasyon ve antikor boyama sonra, mikro-parçalanmış yağ hücreleri hücre analizi ve / veya sıralama için akış sitometre alınabilir.

Manuel lipo-aspirates mekanik ayrışma bir mikrovasküler ağ saran adipositler bir toplam oluşan mikro-parçalanmış yağ dokusu üretimi ile sonuçlanır. Kriyofixed mikro-parçalanmış yağ dokusuna gömülü jelatinin immünfloresans analizi, endotel hücre belirteci Ulex Europaeus Agglutinin 1 reseptörü ile işaretlenmiş ve esas olarak küçük kılcal damarlardan oluşan vasküler ağı gösteren yapıyı vurgular. Özellikle, nöron-glial antijen ifade perisitler 2 veya trombosit türetilmiş büyüme faktörü reseptör beta normalde dağıtılır, endotel hücreleri ensheathing.

CD31 pozitif endotel ve CD45 pozitif hematopoetik hücreler hariç tutularak, CD146 pozitif CD34 negatif perisitler ve CD146 negatif ve CD34 pozitif adventif hücrelerin varlığı MAT içinde tespit edilebilir. Mikro-parçalanmış yağ dokusu daha fazla immünohistokimyasal boyama, in vitro kültür veya sekretasyon analizi ile yağ dokusu biyolojisi içine daha derin bir fikir elde etmek için işlenebilir.

Bu teknik, farelerde nakledilecek ya da uzun süreli kültürde muhafaza edilecek kadar küçük olan küçük organoidler bir tür olarak doğal, yerli, üç boyutlu düzenleme içinde çeşitli dokuların çalışma sağlar. Ve bu sistemi esas olarak farklı organa özgü mikroortamlara deneysel olarak yaklaşmak için kullanıyoruz. Bizim yağ dokusu donörleri geçirilebilir enfeksiyonların taşıyıcıları olarak bilinmemektedir.

Ancak daha fazla tarama yapılmadığında, tüm insan dokuları potansiyel olarak kontamine olmuş ve buna göre ele alınmalıdır.