Name: Migrastatik İnhibitörlerin 3Boyutlu Tümör Spheroid İnvazyonu Üzerine Etkilerinin Yüksek Çözünürlüklü Konfokal Mikroskopi Ile Karakterizasyonu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-09-16T13:45:00.000+00:00
Duration: 9 min 17 s
Description: Keşfedin, migrastatik inhibitörlerin glioma hücre göçü üzerindeki etkilerini 3D tümör spheroidleri ve yüksek çözünürlüklü konfokal mikroskopi kullanarak nasıl değerlendirebilirsiniz. Bu yöntem, kanser ilaç testi için daha fizyolojik bir ortam sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Profesör Chris Jones'a KNS42 hücre hattına katkıda bulunanlara teşekkür ederiz. Bu çalışmada kullanılan AiryScan ile Zeiss LSM880 konfokal mikroskobu Huddersfield Yenilik ve Kuluçka Projesi (HIIP) Leeds City Region Enterprise Partnership (LEP) Büyüme Anlaşması ile finanse bir parçasıdır. Mikroskop görüntüsü için Kredi Şekil 3: Carl Zeiss Mikscopy GmbH, microscopy@zeiss.com.

1. Hücre Spheroids Üretimi
1. Gün
<ol><li>Araştırma altındaki hücre hattının gerektirdiği standart kültür ortamını hazırlayın.</li>
	<li>Steril işleme tekniklerini kullanarak doku kültürü ile ilişkili tüm adımları bir doku kültürü başlık yürütmek.</li>
	<li>Kanser hücrelerini deneyin ve sayın. Plaka başına 20 mL hücre süspansiyonu kullanın. Hücre süspansiyonlarını açıkça etiketli steril evrensel tüplerde tutun.</li>
	<li>Her kuyuya önceden belirlenmiş sayıda hücre ekleyin. Hem ilk hücre sayısı hem de gerekli olan nihai küresel boyut araştırılan hücre hattının çoğalma hızına bağlıdır. NOT: U251 ve KNS429,10,5 x 103 hücre/mL gibi glioma hücre hatları için 4 günlük kuluçkadan sonra mikroskobik olarak görünür bir sferoid (200 veya 800 m) üretecektir.</li>
	<li>Hücre kümelenmeönlemek için nazik inversiyon ile evrensel tüplerhücreleri resuspend. Pipet 96 kuyulu bir plakanın her kuyuya hücre süspansiyonunun 200°L.'si. Tüm kuyular gerekli değilse, buharlaşmayı önlemek için her boş kuyuya 200 μL 1x PBS eklemeniz tavsiye edilir.</li>
	<li>Hücreleri 37 °C'de normal bir kuvözde kuluçkaya yatırın. NOT: Glioma kanser hücre hatları gibi hücre hatları içinde spheroidler oluşturacak 24 saat. 3D hücresel mimari 72 saat için spheroid kuluçka tarafından oluşturmak için izin verir.</li>
</ol>2. Gün
<ol start="7"><li>Hücreleri 24 saat sonra parlak alan mikroskobu ile kontrol edin. NOT: Kurulan glioma kanser hücre hatları kolayca 24 saat içinde spheroids formu. Hasta kaynaklı glioma kanser hücre hatları kadar sürebilir 1-2 hafta.</li>
</ol>2. Kollajen İstilası Tsası
3. Gün
<ol><li>Buz üzerinde kollajen, 5x kültür orta, 1 M NaOH ve bir 20 mL tüp yerleştirin.</li>
	<li>Dikkatle ve yavaş yavaş soğutulmuş bir kültür tüpü içine soğuk kollajen 10.4 mL ekleyin. Kabarcıklar kaçının. Kollajen bu miktar bir 96-well plaka için yeterlidir. Yükseltme mümkündür, ancak her bir seferde plaka başına 20 mL tüp hazırlanması önerilir.</li>
	<li>Hafifçe soğuk steril 5x kültür orta 1,52 mL ekleyin. Kabarcıklar kaçının.</li>
	<li>Kullanımdan hemen önce, 72 μL soğuk steril 1 M NaOH ekleyin. Çözeltiyi buzda tut.</li>
	<li>Pipetleme yaparak hafifçe karıştırın. Kabarcıklar kaçının. Verimli karıştırma, ortamda bir renk değişimine (kırmızıdan turuncu-kırmızıya (pH 7.4) yol açar. Kullanıma kadar buz üzerinde karışımı bırakın.</li>
	<li>Önemli adım: 1. günde hazırlanan 96 kuyulu plakadan 190 μL supernatant'ı çıkarın. Kuyunun dibinde oluşan küreselleri rahatsız etmemek için çok dikkatli olun. Pipeti kuyunun ortasına değil, yan tarafına doğru bir açıyla kullanın.</li>
	<li>Kollajen karışımından 100 μL'yi her kuyuya hafifçe ekleyin. Herhangi bir küresel bozulmayı önlemek için, pipet kuyunun yan aşağı karışımı. Kabarcıklar kaçının. Polimerizasyonu değerlendirmek için kalan kollajen karışımını oda sıcaklığında 20 mL tüpte saklayın.</li>
	<li>Kollajen polimerize sağlamak için en az 10 dakika kuluçka plakası. Bir kılavuz olarak, kalan kollajen ayarlanmış ise, yarı katı ve sünger gibi olma, küresel ler inhibitör ile tedavi edilmesi için hazırız.</li>
	<li>Kültür ortamına 2x konsantrasyonunda ilaç veya inhibitörlerekleyin. Ortayı her kuyuya hafifçe ekleyin (kuyubaşına 100°L). Yine, pipet spheroid bozukluğu önlemek için kuyunun yan aşağı orta.</li>
	<li>İlaç aktivitesini değerlendirmek için her küresel spheroidi t = 0 h, 24 h, 48 h ve 72 h zamanlarında parlak alan mikroskobu ile gözlemleyin ve görüntüleyin. Sonra tabağı kuvöze geri ver. NOT: Hücre hattının invaziv davranışına bağlı olarak, orijinal küresel çekirdekten uzak göç 24 saat itibaren görülebilir.</li>
</ol>3. Kollajen Gömülü Spheroidlerin ve Göçmen Hücrelerinin Konfokal Mikroskopi İçin Hazırlanması
<ol><li>Plakayı bir doku kültürü başlığına yerleştirin ve süpernatantı (200 μL) yavaşça çıkarın. Yine, bu kollajen fişi ile müdahale edebilir gibi, küresel rahatsız ve kollajen dokunmaktan kaçınmak dikkat edin.</li>
	<li>Supernatant'ı 1x PBS'nin 100 μL'si ile değiştirin. Bu yıkama adım 3x tekrarlayın.</li>
	<li>Son yıkamayı çıkarın ve 1x PBS'de (kuyu başına 100°L) %4 formaldehit ile değiştirin. DİkKAT: Formaldehit potansiyel bir karsinojendir. Sağlık ve güvenlik yönergelerine uygun olarak özenle işleyebilir.</li>
	<li>96 kuyulu plakayı bir laboratuvar bankına yerleştirin, folyo ile kaplayın ve oda sıcaklığında 24 saat bekletin.</li>
	<li>Formaldehiti dikkatlice çıkarın ve 1x PBS ile değiştirin. Bu 1x PBS yıkama 3x tekrarlayın.</li>
	<li>1x PBS%0.1 Triton X-100 hazırlayın. 1x PBS yıkamayı çıkarın ve Triton X-100 çözeltisinin 100 μL'si ile değiştirin. Oda sıcaklığında 30 dakika kuluçka. Bu arada, 1x PBS ve% 0.05 yağsız süt tozu ile engelleme çözeltisi hazırlamak ve iyice karıştırın.</li>
	<li>Triton X-100'ü çıkarın ve 1x PBS ile 3x yıkayın. Her kuyuya 100 μL engelleme çözeltisi ekleyin ve 15 dakika kuluçkaya yatırın.</li>
	<li>Önceden belirlenmiş konsantrasyonda tampon engelleme gerekli birincil antikor seyreltmek. Burada, anti-fare IgG asetiltli tubulin antikor (1:100) kullanın.</li>
	<li>Santrifüj birincil antikor engelleme tampon karışımı için 5 dk 15,682 x g. Engelleme çözeltisini dikkatlice çıkarın ve her kuyuya süpernatant (25−50°L) ekleyin. 1 saat oda sıcaklığında karanlıkta kuluçka.</li>
	<li>Antikor solüsyonunu çıkarın ve 3x 1x PBS (kuyu başına 100°L) ile yıkayın.</li>
	<li>Herhangi bir ek floresan lekelere ek olarak, önerilen veya önceden belirlenmiş konsantrasyonda bloke edici tampon ikincil antikor seyreltin. Burada, actin boyama için 1:500 anti-fare florofor-488 konjuge antikor, phalloidin-594 (1:500) ve DNA lekesi (DAPI) kullanın.</li>
	<li>Yine, 13.000 rpm 5 dakika için ikincil antikor çözeltisi santrifüj.</li>
	<li>Her kuyudan blokaj çözeltisini çıkarın ve ikincil antikor/phalloidin/DAPI karışımından 25−50 μL ekleyin. Oda sıcaklığında 1,5 saat karanlıkta kuluçka.</li>
	<li>İkincil antikor boya çözeltisi çıkarın ve 1x PBS (kuyu başına 100 μL) ile 3x yıkayın.</li>
	<li>Yüksek kaliteli düz cam kaydırak merkezine plastik pipet (200 μL) ile emme ile bireysel kollajen fişleri dikkatlice kaldırın.</li>
	<li>Kollajen fişe uygun bir montaj antünün bir damlasını ekleyin, fişin tamamen kapalı olmasını sağlar. Kabarcıklar kaçının.</li>
	<li>Görüntüleme için kullanılacak ve bir gecede ayarlanabilmesine izin verecek olan mikroskop hedefi için en uygun kalınlıkta kapak kaymasını uygulayın. Slaytları karanlıkta oda sıcaklığında saklayın.</li>
</ol>4. Floresan Mikroskopisi
<ol><li>Uygun bir konfokal mikroskop kullanarak floresan görüntüleri yakalayın.</li>
</ol>

<ol><li>Gandalovičová, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Migrastatics-anti-metastatic+and+anti-invasion+drugs%3A+promises+and+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Cancer%22%5BJournal%5D)">Migrastatics-anti-metastatic and anti-invasion drugs: promises and challenges.</a> Trends in Cancer. 3 (6), 391-406 (2017).</li>
<li>Delgado-López, P. D., Corrales-García, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Survival+in+glioblastoma%3A+a+review+on+the+impact+of+treatment+modalities%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+and+Translational+Oncology%22%5BJournal%5D)">Survival in glioblastoma: a review on the impact of treatment modalities.</a> Clinical and Translational Oncology. 18, 1062(2016).</li>
<li>Foreman, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oncolytic+virotherapy+for+the+treatment+of+malignant+glioma%5BTitle%5D)+AND+%22Neurotherapeutics%22%5BJournal%5D)">Oncolytic virotherapy for the treatment of malignant glioma.</a> Neurotherapeutics. 14, 333(2017).</li>
<li>Rodrigues, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emerging+tumor+spheroids+technologies+for+3D+in+vitro+cancer+modelling%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacology+and+Therapeutics+Technologies%22%5BJournal%5D)">Emerging tumor spheroids technologies for 3D in vitro cancer modelling.</a> Pharmacology and Therapeutics Technologies. 184, 201-211 (2018).</li>
<li>Sirenko, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-content+assays+for+characterizing+the+viability+and+morphology+of+3D+cancer+spheroid+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Assay+and+Drug+Development+Technologies%22%5BJournal%5D)">High-content assays for characterizing the viability and morphology of 3D cancer spheroid cultures.</a> Assay and Drug Development Technologies. 13 (7), Mary Ann Liebert, Inc. (2015).</li>
<li>Wu, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bionic+3D+spheroids+biosensor+chips+for+high-throughput+and+dynamic+drug+screening%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedical+Microdevices%22%5BJournal%5D)">Bionic 3D spheroids biosensor chips for high-throughput and dynamic drug screening.</a> Biomedical Microdevices. 20, 82(2018).</li>
<li>Mosaad, E., Chambers, K. F., Futrega, K., Clements, J. A., Doran, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+microwell-mesh%3A+a+high-throughput+3D+prostate+cancer+spheroid+and+drug-testing+platform%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">The microwell-mesh: a high-throughput 3D prostate cancer spheroid and drug-testing platform.</a> Scientific Reports. 8, 253(2018).</li>
<li>Jonkman, J., Brown, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Any+way+you+slice+it-a+comparison+of+confocal+microscopy+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomolecular+Techniques%22%5BJournal%5D)">Any way you slice it-a comparison of confocal microscopy techniques.</a> Journal of Biomolecular Techniques. 26 (2), 54-65 (2015).</li>
<li>Pontén, J. Neoplastic human glia cells in culture. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPont%C3%A9n%2C+J+%22Human+Tumor+Cells+in+Vitro%22">Human Tumor Cells in Vitro</a>. , Springer US. Boston. 175-206 (1975).</li>
<li>Takeshita, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characteristics+of+an+established+human+glioma+cell+line%2C+KNS-42%5BTitle%5D)+AND+%22Neurologica+Medico+Chirurgica%22%5BJournal%5D)">Characteristics of an established human glioma cell line, KNS-42.</a> Neurologica Medico Chirurgica. 27 (7), 581-587 (1987).</li>
<li>Bance, B., Seetharaman, S., Leduc, C., Boëda, B., Etienne-Manneville, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microtubule+acetylation+but+not+detyrosination+promotes+focal+adhesion+dynamics+and+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cell+Science%22%5BJournal%5D)">Microtubule acetylation but not detyrosination promotes focal adhesion dynamics and cell migration.</a> Journal of Cell Science. 132, (2019).</li>
<li>Bacon, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histone+deacetylase+3+indirectly+modulates+tubulin+acetylation%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+Journal%22%5BJournal%5D)">Histone deacetylase 3 indirectly modulates tubulin acetylation.</a> Biochemical Journal. 472, 367-377 (2015).</li>
<li>Jackman, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tackling+infiltration+in+paediatric+glioma+using+histone+deacetylase+inhibitors%2C+a+promising+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Neuro-Oncology%22%5BJournal%5D)">Tackling infiltration in paediatric glioma using histone deacetylase inhibitors, a promising approach.</a> Neuro-Oncology. 20, i19-i19 (2018).</li>
<li>Bhandal, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+glioma+migration+with+the+histone+deacetylase+inhibitor+MI192%5BTitle%5D)+AND+%22Neuro-Oncology%22%5BJournal%5D)">Targeting glioma migration with the histone deacetylase inhibitor MI192.</a> Neuro-Oncology. 19, i12-i12 (2017).</li>
<li>Del Duca, D., Werbowetski-Ogilvie, T. E., Del Maestro, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spheroid+preparation+from+hanging+drops%3A+characterization+of+a+model+of+brain+tumor+invasion%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuro-oncology%22%5BJournal%5D)">Spheroid preparation from hanging drops: characterization of a model of brain tumor invasion.</a> Journal of Neuro-oncology. 67 (3), 295-303 (2004).</li>
<li>Bender, B. F., Aijian, A. P., Garrell, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Digital+microfluidics+for+spheroid-based+invasion+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+on+a+Chip%22%5BJournal%5D)">Digital microfluidics for spheroid-based invasion assays.</a> Lab on a Chip. 16 (8), 1505-1513 (2016).</li>
<li>Vinci, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+establishment+and+analysis+of+three+dimensional+tumor+spheroid-based+functional+assays+for+target+validation+and+drug+evaluation%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Biology%22%5BJournal%5D)">Advances in establishment and analysis of three dimensional tumor spheroid-based functional assays for target validation and drug evaluation.</a> BMC Biology. 10, 29(2012).</li>
<li>Härmä, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+dynamic+morphological+drug+responses+in+3D+organotypic+cell+cultures+by+automated+image+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+ONE%22%5BJournal%5D)">Quantification of dynamic morphological drug responses in 3D organotypic cell cultures by automated image analysis.</a> PLOS ONE. 9 (5), e96426(2014).</li>
</ol>

Yazarlar çıkar çatışması olmadığını beyan etmezler.

Yüksek çözünürlüklü konfokal mikroskopi kullanarak migrastatik ilaç aktivitesinin belirlenmesi için kanser hücresi küresel oluşturmak için yeni bir yol açıklanmıştır. Diğer teknikler üzerinde düşük yapışkan plakaların kullanımı, bu tür damla asılı15, kollajen göç ve istila tahlilleri kullanılmak üzere tekrarlanabilir ve tek tip sferoidler üreten bir araç kolaylaştırmıştır. Bu protokoldeki kritik noktalar, kollajen matrisine hücre küresel katıştırma işleminden önce 96 kuyulu plakadan büyüme ortamın...

Preklinik ilaç keşfi ve potansiyel kanser ilaçlarının geliştirilmesi için üç boyutlu küresel teknolojiler giderek geleneksel ilaç ekranları üzerinde tercih edilmektedir; böylece, migrastatik daha fazla gelişme var - göç ve işgali önleme - uyuşturucu. Kanser tedavisindeki bu gelişmelerin ardındaki mantık açıktır: 3D küresel tahliller, 3D tümör mimarisini hücre monokatmanlı kültürlere göre daha sadık bir şekilde taklit ettikleri için potansiyel anti-kanser ilaçlarının taranması için daha gerçekçi bir yaklaşım dır. ilaç-tümör etkileşimlerini (kinetik) daha doğru bir şekilde özetler ve tümörle ilgili bir ortamda ilaç aktivitesinin karakterizasyonuna izin verir. Buna ek olarak, birçok kanser türünde kemotoksik ilaçlara karşı direncin artması ve kanser hücrelerinin uzak tümör bölgelerine göç etme yeteneği ile güçlü metastaz nedeniyle kanser hastaları arasında yüksek ölüm oranları kemoterapötik ajanların dahil edilmesini destekler gelecekteki klinik kanser çalışmalarında adjuvan tedavi olarak kanser hücrelerinin göç potansiyelini hedefleme1. Bu durum özellikle yüksek dereceli glioblastomlar (GBM) gibi yüksek invaziv kanserlerde geçerlidir. GBM yönetimi cerrahi, radyoterapi ve kemoterapi içerir. Ancak, kombinasyon tedavisi ile bile, çoğu hasta 11-15 ay ortanca sağkalım ile ilk tanı 1 yıl içinde nüks2,3. 3D teknolojisi alanında büyük gelişmeler son birkaç yıl içinde yapılmıştır: rotatif sistemler, mikrofabrikasif yapılar ve 3D iskeleler, ve diğer bireysel tahliller sürekli büyük ölçekli rutin test sağlamak için geliştirilmektedir4, 5,6,7. Ancak, veri yorumlama genellikle 2B görüntü analiz sistemleri ile 3D oluşturulan verileri analiz girişimleri tarafından engellenir, çünkü bu tahlillerden elde edilen sonuçlar anlamlı bir şekilde analiz edilmelidir.
Görüntü edinme hızı ve azaltılmış foto-toksisite açısından tercih edilmesine rağmen, en geniş alan sistemleri çözünürlük8ile sınırlı kalır. Bu nedenle, uyuşturucu etkinliğiyle ilgili veri okumalarının yanı sıra, geniş alan sistemi kullanılarak görüntülendiği takdirde, uyuşturucu eyleminin göç eden hücrelerin 3B hücresel yapıları üzerindeki ayrıntılı etkileri kaçınılmaz olarak kaybolmaktadır. Buna karşılık, confocal lazer tarama mikroskobu (CLSM) bilgisayar yazılımı kullanılarak 3D satın alma sonrası yeniden inşa edilebilir ve işlenebilir yüksek kaliteli, optik kesitli görüntüler yakalar. Böylece CLSM, kompleks 3D hücresel yapıların görüntülenmesi için kolayca uygulanabilir ve böylece anti-migrastatik inhibitörlerin 3Boyutlu yapılar üzerindeki etkilerinin sorgulanmasını ve hücre geçiş mekanizmalarının derinlemesine analizlerinin incelenmesini sağlar. Bu şüphesiz gelecekteki migrastatik ilaç gelişimine rehberlik edecektir. Burada, küresel nesil kombine bir iş akışı, ilaç tedavisi, boyama protokolü, ve yüksek çözünürlüklü konfokal mikroskopi ile karakterizasyon açıklanmıştır.

<table><tbody><tr><td>Kollajen I, sıçan kuyruğu, glioma</td> invazyon testi için 100 mg <td>Corning</td><td>354236</td><td>; Bu, birçok distribütör / üretici tarafından sunulmaktadır ve hem amaçlanan test türü hem de kullanılan hücre hatları için belirlenmesi gerekecektir. Glioma kanseri hücre hatları için Kollajen sıçan kuyruğu tip 1 (örneğin Corning) tercih edilen seçimdir. Kollajen 4 ° C'de saklanmalıdır; C, karanlıkta, gerekene kadar. Polimerize kollajenin kıvamını etkileyebileceğinden, kollajenin farklı partilerden karıştırılması tavsiye edilmez. &nbsp; &nbsp;</td></tr><tr><td></td><td></td><td>Glioma</td><td></td></tr><tr>invazyon testi için kollajen çözeltisi için 5x konsantrasyonda gerekli olan mikroskopi görüntüleme<td>DMEM tozu</td><td>Sigma</td><td>D5648</td> için çeşitli lameller<td>; &nbsp; Bu, toz halinde satın alınabilir, çift damıtılmış suda yapılabilir ve büyüme ortamının nihai bileşimine bağlı olarak, gerekli herhangi bir katkı maddesi ile tamamlanabilir. Komple 5x çözelti bir şırınga filtre sisteminden (0.22 & mu; m) kullanmadan önce.</td></tr><tr><td>Glioma hücre hatlarının hücre kültürü için gerekli</td> <td>fetal buzağı serumu</td><td>Sigma</td><td>F7524-500ML</td></tr><tr><td>Mikroskopi görüntüleme için</td><td></td><td>çeşitli</td><td>cam slaytlar</td></tr><tr><td>Yüksek glikozlu DMEM</td><td>Gibco</td><td>41965062</td><td>glioma hücre hatlarının hücre kültürü için gereklidir</td></tr><tr><td>İnhibitör</td><td>Tocris</td><td>çeşitli</td><td>çeşitli - deneysel tasarıma göre; inhibitörler Selleckchem ve Tocris gibi üreticilerden satın alınabilir. Bu üreticiler, inhibitör özelliklerinin ayrıntılı açıklamasını, ilgili referanslara bağlantılar ve çalışma konsantrasyonları önerilerini sunar. Tüm inhibitörlerde olduğu gibi, potansiyel olarak toksik olabilirler ve sağlık ve güvenlik yönergelerine göre ele alınmalıdırlar. İnhibitörler, üretici tarafından tavsiye edildiği şekilde stok çözeltileri olarak hazırlanır. Örnek olarak, bu tür inhibitörlerin kullanımını göstermek için migrastatik inhibitör MI-192'yi kullandık. Bu şekilde bir dizi migrastatik inhibitörü karşılaştırılabilir sonuçlarla test ettik.</td></tr><tr><td></td><td>Mikroskobik görüntüleme için</td><td></td> <td>çeşitli</td></tr><tr><td>montaj NaOH (1 M)</td> <td>çeşitli&nbsp;</td><td>çeşitli</td><td>NaOH, gerekli molaritede satın alınabilir veya katı formdan hazırlanabilir. Hazırlanan çözelti, bir şırınga filtre sistemi kullanılarak filtre ile sterilize edilmelidir. Bir M NaOH aşındırıcıdır ve çözelti hazırlanırken dikkatli olunmalıdır.</td></tr><tr><td>Paraformaldehit&nbsp;</td><td></td><td></td><td>sferoidleri ve hücreleri sabitlemek için çeşitli çeşitli; % 4'te makyaj yapın, sağlık tehlikesine dikkat edin, sağlık ve güvenlik düzenlemelerine uyulduğundan emin olun İstila testi için kollajen çözeltisi</td></tr><tr><td>Pastetler (dereceli pipet, 3 mL)</td> <td>istila testi için</td> <td>çeşitli</td><td>çeşitli</td>, çözelti çıkarma</tr><tr><td>PBS, doku kültürü için steril</td><td>Sigma</td><td>D1408-500ML & nbsp; &nbsp;</td><td>Glioma hücre hatlarının hücre kültürü için gereklidir ve boyama için yıkamalar</td></tr><tr><td>Kalem / strep (antibiyotikler)</td> <td>Glioma hücre hatlarının hücre kültürü için gerekli</td> <td>Sigma</td><td>P4333</td></tr><tr><td>Birincil antikor, ikincil antikor, DAPI, Phalloidin</td><td>çeşitli</td><td>bu</td><td>reaktifler için birçok üretici vardır, ikincil etiketli antikorlar için Alexa Fluor (Moleküler Problar) öneririz. Burada primer antikorlar için fare anti-asetillenmiş tübülin antikoru (1/100, Abcam) kullandık. İkincil antikorlar için 1/500 anti-fare Alexa Fluor 488 konjuge antikor, Moleküler Problar kullandık. Nükleer leke için DAPI (birçok üretici) ve aktin boyası Phalloidin (birçok üretici) kullandık, her ikisi de önerilen 1/500 seyreltmede kullanıldı.</td></tr><tr><td>5x konsantrasyonda glioma invazyon testi için kollajen çözeltisi için gerekli</td> <td>sodyum bikarbonat</td><td>Sigma</td><td>S5761</td></tr><tr><td>Sodyum piruvat</td><td>Sigma</td><td>P5280</td>, <td>5x konsantrasyonda glioma invazyon testi için kollajen çözeltisi</td></tr><tr><td>Tripsinizasyon için tripsin</td><td></td><td></td><td>Sigma T4049</td></tr><tr><td>Ultra düşük bağlantı plakaları</td><td>Sigma / Nunc</td><td>CLS7007-24EA</td><td>glioma invazyon testi için; İncelenen bileşiklerin büyük ölçekli taranmasına izin vermek için tercih edilen 96 oyuklu plakalar ile düşük yapışkan bir plaka gereklidir. Piyasada bulunan birkaç düşük yapışma plakası vardır; Optimum sferoid üretimi için çeşitli plakaların test edilmesi tavsiye edilir. Deneyimlerimize göre, kapaklı, yuvarlak tabanlı Costar Ultra Low Cluster, %100 sferoid oluşumu ve tekrarlanabilirlik açısından glioma kanser hücrelerinden sferoid üretimi için en iyi sonucu verir. Bu plaklar ayrıca laboratuvarımızda hasta kaynaklı materyal, mesane ve yumurtalık kanseri hücrelerinden glioma sferoidlerinin üretilmesi için başarıyla kullanılmıştır. Ek olarak, standartlaştırılmış nörosfer sferoidlerinin oluşumunu kolaylaştırmak için bu plakalarda kök veya progenitör nöroküreler kullanılabilir</td></tr><tr><td>Striptizler (serolojik pipetler, steril, 5 mL ve 10 mL)</td> <td>çeşitli, örneğin Costar</td><td>CLS4488-50; Doku</td><td>kültürü ve kollajen hazırlama için</td>CLS4487-50</tr><tr><td>Çeşitli çok kanallı (50 - 250 &mu; L) ve tek kanallı pipetler (10 &mu; L, 50 &mu; L, 200 &mu; L 1 mL)</td><td></td> <td>hücre ve sferoid kullanımı için</td> <td>çeşitli</td></tr><tr><td>Geniş alan mikroskobu</td><td>çeşitli&nbsp;</td><td></td><td>sferoid oluşumunun ve sferoid görüntülemenin gözlemlenmesi için çeşitli; burada geniş alanlı floresan görüntüleri, bir EVOS FL hücre görüntüleme sistemi (Thermo Fisher Scientific) kullanılarak yakalandı.Plan</td></tr> <tr><td>Apochromat 63x 1.4 NA yağ objektifi ile donatılmış Zeiss LSM 880 CLSM</td><td>Üreticiden</td><td>Zeiss</td> teklifi <td>Confocal görüntüler, Plan Apochromat 63x 1.4 NA yağ objektifi ile donatılmış bir Zeiss LSM 880 CLSM kullanılarak çekildi. Diyot 405nm, 458/488/514 nm argon multiline ve HeNe 594nm lazerler sırasıyla Phalloidin 594, Alexa Fluor 488 ve DAPI'yi uyarmak için kullanıldı. Her görüntü için tek bir temsili optik bölüm yakalandı ve hem görüntü yakalama öncesi hem de sonrası tüm ayarlar karşılaştırmalı amaçlar için korundu. Tüm görüntüler daha sonra ilgili Zen görüntüleme yazılımı ve Adobe Photoshop kullanılarak işlendi.</td></tr></tbody></table>

migrastatik İnhibitörlerin 3boyutlu tümör spheroid İnvazyonu Üzerine etkilerinin yüksek Çözünürlüklü konfokal mikroskopi ile karakterizasyonu

Characterization of the Effects of Migrastatic Inhibitors on 3D Tumor Spheroid Invasion by High-resolution Confocal Microscopy

Kanser araştırmalarında ilaç keşfi ve gelişimi giderek 3D formatında ilaç ekranları üzerinde kuruluyor. Kanser hücrelerinin göçmen ve invaziv potansiyelini ve dolayısıyla hastalığın metastatik yayılımını hedefleyen yeni inhibitörler, gliomas gibi yüksek invaziv kanserlerde keşfedilmekte ve tamamlayıcı tedaviler olarak kabul edilmektedir. Bu nedenle, bir ilacın eklenmesinden sonra 3Boyutlu bir ortamda hücrelerin ayrıntılı analizlerini sağlayan veri üretmek gereklidir. Burada açıklanan metodoloji, yüksek çözünürlüklü görüntü yakalama ve konfokal lazer tarama mikroskopisi (CLSM) ile veri analizi ile küresel invazyon tahlilleri birleştirerek, potansiyel anti-göçmen inhibitörü etkilerinin ayrıntılı karakterizasyonu sağladı Mi-192 glioma hücrelerinde. Sferoidler düşük yapışık 96-iyi plakalar invazyon tahlilleri için hücre hatlarından üretildi ve daha sonra CLSM analizi için hazırlandı. Açıklanan iş akışı, hem kolaylık hem de tekrarlanabilirlik nedeniyle yaygın olarak kullanılan küresel üretim tekniklerine göre tercih edilebildi. Konfokal mikroskopi ile elde edilen gelişmiş görüntü çözünürlüğü ile birlikte konvansiyonel geniş alan yaklaşımları, göçmen hücrelerdeki farklı morfolojik değişikliklerin tanımlanmasına ve analiz inanılmaktadır. migrastatik ilaç MI-192 ile tedavi.

Üç boyutlu küresel teknoloji kansere özgü ortamın daha fazla temsilcisi olduğu için ilaç-tümör etkileşimleri anlayışı nı ilerletmektedir. Küresel lerin üretimi çeşitli şekillerde elde edilebilir; bu protokolde düşük yapışma 96-kuyu plakaları kullanılmıştır. Farklı üreticilerin çeşitli ürünleri test ettikten sonra, burada kullanılan plakalar sürekli başarılı küresel üretim ve tekdüzelik açısından en iyi performans çünkü seçildi. Büyüme ortamının kollajen matrisle değiştirildiği değiştirme ...

Histon deasetilez (HDAC) inhibitörü kullanılarak yapılan üç boyutlu (3D) invazyon tahlillerinde migrastatik inhibitörlerin glioma kanser hücresi göçü üzerindeki etkileri yüksek çözünürlüklü konfokal mikroskopi ile karakterizedir.

Migrastatik İnhibitörlerin 3Boyutlu Tümör Spheroid İnvazyonu Üzerine Etkilerinin Yüksek Çözünürlüklü Konfokal Mikroskopi Ile Karakterizasyonu

Drug discovery and development in cancer research is increasingly being based on drug screens in a 3D format. Novel inhibitors targeting the migratory and ...

Bu protokol, migrastatik inhibitörlerin etkisini 3Boyutlu kanser modellerinde ayrıntılı olarak belirleyebileceğimizi gösteriyor. En büyük avantajı, bu tekniğin uygulanabileceği kolaylık ve hepsi bir e-bir yaklaşımdır. Bu teknik, kanser araştırmalarında migrastatik ilaçların 3Boyutlu bir ortamda değerlendirilmesine olanak sağlayarak, ilaçların daha tümör ortamıyla ilgili bir ortamda test edilmesine olanak sağlar.Bu yöntem kanserde sitotoksik ilaçların test edilmesi veya örneğin radyasyonun kanser proliferasyonu ve hücre göçü üzerindeki etkisini değerlendirmek için uygulanabilir. Bu emin olmak için sıradan 96-iyi plakalar ile orta kaldırma adım ve kollajen replasmanı uygulama yararlıdır. Ayrıca, konfokal mikroskop eğitimi esastır.Bu tekniğin görsel gösterimi araştırmacılar ın küresel oidlerin gerekli hassas kullanımını ve konfokal mikroskopide kullanımını anlamaları açısından çok önemlidir. Denemenin ilk gününde, standart kültür ortamına sahip olun, bu durumda, U251, uygun hücre hattı için hazır. Bir doku kültürü başlık olarak, kanser hücrelerini denemek için kültüriçine tripsin 0.5 mililitre ekleyin.Bir hemositometre üzerinde kanser hücrelerini saymak ve mililitre başına üçüncü hücrelere beş kez 10 bir konsantrasyon seyreltmek. Hücre süspansiyonlarını açıkça etiketlenmiş, steril evrensel tüplerde tutun. Hücre kümelenmesini önlemek için hücreleri nazik bir şekilde tersine çevirme ile yeniden askıya alın.96 kuyulu bir plaka içinde her kuyuya hücre kültürünün 200 mikrolitre eklemek için bir pipet kullanın. Buharlaşmayı önlemek için her boş kuyuya 200 mikrolitre 1X PBS ekleyin. Hücreleri 37 derecede bir kuluçka makinesinde kuluçkaya yatırın.24 saat sonra, parlak alan mikroskobu ile hücreleri kontrol edin. Glioma kanser hücre hatları gibi hücre hatları 24 saat içinde kuyunun dibinde spheroids oluşturur. 3Boyutlu bir hücresel mimarinin oluşmasıiçin küresel leri 48 saat daha kuluçkaya yatırın.Üçüncü gün, kollajen yerleştirin, 5X kültür orta, tek azılı sodyum hidroksit, ve buz üzerinde bir 20 mililitrelik tüp. Dikkatle ve yavaş yavaş soğutulmuş kültür tüpü içine soğuk kollajen 10.4 mililitre ekleyin. Kabarcıklar kaçının.Sonra, yavaşça soğuk steril 5X kültür orta 1,52 mililitre ekleyin. Kabarcıklar kaçının. Kullanımdan hemen önce, 72 mikrolitre soğuk steril tek molar sodyum hidroksit ekleyin ve çözeltiyi buzda tutun.Pipetleme ve kabarcıklar kaçınarak yavaşça karıştırın. Verimli karıştırma, ortamda kırmızıdan turuncu-kırmızıya doğru renk değişimine yol açar. Kullanıma kadar buz üzerinde karışımı bırakın.Daha sonra, ilk gün hazırlanan 96 kuyulu plakadan 190 mikrolitre süpernatant çıkarmak için kuyunun yan tarafına doğru bir açıyla bir pipet kullanın. Kuyunun dibinde oluşan küreselleri rahatsız etmemek için çok dikkatli olun. Yavaşça her kuyuya kollajen karışımı 100 mikrolitre ekleyin, kuyunun yan aşağı borulama.Kabarcıklar ve herhangi bir küresel rahatsızlık kaçının. Polimerizasyonu değerlendirmek için oda sıcaklığında 20 mililitrelik tüp içinde kalan kollajen karışımı tutun. Kollajenin polimerize olması için en az 10 dakika boyunca kuvözde plakayı kuluçkaya yatırın.Kalan kollajen yarı katı ve sünger gibi hale geldiğinde, küresel ler inhibitör ile tedavi edilmesi için hazır. 2X konsantrasyonunda inhibitörleri beş mililitre kültür ortamına ekleyin. Pipet 100 mikrolitre orta hafifçe her kuyunun yan aşağı küresel rahatsızlık önlemek için.İlaç aktivitesini değerlendirmek için her küresel spheroidi sıfır saat, 24 saat, 48 saat ve 72 saat gibi zamanlarda parlak alan mikroskobuyla gözlemleyin ve görüntüleyin. Sonra tabağı kuvöze geri ver. Şimdi, bir doku kültürü başlık plaka yerleştirin ve yavaşça 1X PBS 100 mikrolitre ile supernatant değiştirin.Küresel balığı rahatsız etmemeye dikkat edin ve kollajene dokunmaktan kaçının. Bu yıkama adımLarını üç kez daha tekrarlayın. Her kuyudaki son yıkamayı çıkarın ve 1X PBS'de %4 formaldehit 100 mikrolitre ile değiştirin.96 kuyulu plakayı bir laboratuvar bankına yerleştirin, folyo ile kaplayın ve oda sıcaklığında 24 saat bekletin. Ertesi gün formaldehiti dikkatlice çıkarın ve 1X PBS ile değiştirin. Bu yıkamayı üç kez daha tekrarlayın.Ardından, 1X PBS yıkamayı 100 mikrolitre taze hazırlanmış Triton X-100 çözeltisi ile değiştirin. Oda sıcaklığında 30 dakika kuluçkaya yat. Bu arada, 50 mililitrelik bir tüpte 50 mililitre ve %05 yağsız süt tozu ile blokaj çözeltisini hazırlayın ve iyice karıştırın.30 dakika sonra Triton X-100'ü çıkarın ve 1X PBS ile üç kez yıkayın. Her kuyuya 100 mikrolitre engelleme çözeltisi ekleyin ve 15 dakika kuluçkaya yatırın. Daha sonra, 1-100 oranında engelleme tampon anti-fare IgG asetillenmiş tubulin antikor seyreltmek.Birincil antikor bloke tampon karışımını 15, 682 kez beş dakika santrifüj edin. Her kuyudaki engelleme çözeltisini dikkatlice çıkarın ve tüpten tampon süpernatantı bloke eden antikor un 25 ila 50 mikrolitresini ekleyin. Bir saat oda sıcaklığında karanlıkta kuluçka.Daha sonra, her kuyudan antikor çözeltisini çıkarın ve 1X PBS 100 mikrolitre ile üç kez yıkayın. Herhangi bir ek floresan lekelere ek olarak önerilen konsantrasyonda bloke tampon ikincil antikor seyreltin. Yine, 15, 682 kez g beş dakika ikincil antikor solüsyonu santrifüj.Engelleme çözeltisini her kuyudan çıkarın ve ikincil antikor süpernatantının 25 ila 50 mikrolitresini ekleyin. Oda sıcaklığında 1,5 saat karanlıkta kuluçkaya yat. İkincil antikor boya çözeltisini çıkarın ve her kuyuda 100 mikrolitre olan 1X PBS ile üç kez yıkayın.Cam bir kaydırak merkezine plastik 200 mikrolitrelik pipet ile emme ile tek tek kollajen fişleri dikkatlice kaldırın. Kollajen fişi kapsayacak şekilde uygun bir montaj bir damla ekleyin. Bir kapak kaymasını numunenin üzerine yerleştirin ve slaydı karanlıkta oda sıcaklığında saklayın.Üç boyutlu küresel teknoloji kansere özgü ortamın daha fazla temsilcisi olduğu için ilaç-tümör etkileşimleri anlayışı nı ilerletmektedir. Bu çalışmada, potansiyel anti-veya pro-göç etkileri tespit edildi. Bu özellikle KNS42'de kontrol veya tedavi edilen küresel lerde göç olmadığı görülür.Hücre ölümü 10 mikromolar en yüksek inhibitör konsantrasyonu gözlendi. Nükleer parçalanma ve göç eden hücreler U251 hücrelerinde belirgindi. U251 hücre spheroidleri orijinal küresel uzak yayılan sivri vardı, artan inhibitör konsantrasyonu ile görünür hücrelerde hücre yuvarlama artan.KNS42'de çöken mikrotübüller ve nükleer parçalanma gözlendi. Tek hücreli sivri yaprak benzeri çıkıntılar KNS42 geçişini gösterir. En düşük inhibitör konsantrasyonu, bu fenotip telaffuz edildi ama artan inhibitör konsantrasyonu ile kayboldu.Hazır olana kadar tüm reaktifleri buzda bırakmak çok önemlidir. Aksi takdirde, kollajen tüm küresel lere eklendi önce polimerize başlar. Konfokal mikroskopi ile oluşturulan görüntüleri ölçmek için kapsam vardır, örneğin, hücre morfolojisi üzerinde migrastatik ilaçların etkilerini değerlendirmek için.İlk defa migrastatik inhibitör MI-192'nin mikrotübül asetilasyon düzeyleri üzerindeki etkisini doğrulamamıza ve bunu hücre göçü açısından daha fazla araştırmamıza olanak sağladı. Fiksasyon adımı için formaldehit ele alırken ekstra dikkat edilmelidir. Her zamanki sağlık ve güvenlik yönergeleri geçerlidir.

characterization-effects-migrastatic-inhibitors-on-3d-tumor-spheroid

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kanser Araştırmaları

Kantitatif büyüme faktörü (TGF)-β indüklenen 3 boyutlu kolajen jel işgali dönüştürme ölçmek için bir test tarif edilir. Bu testte, meme kanseri gelişiminin farklı aşamaları temsil hücre hatlarının MCF10A serisi, yararlanır. Bu yöntem, diğer hücre hatları ile birlikte kullanılmak üzere ve diğer potansiyel aktivatörleri veya işgali inhibitörleri araştırmak için kullanılmış olabilir kabul edilebilir.

TGF-β-kaynaklı Invasion Tedbir Sfero Testi

Üç boyutlu hücre dışı matriks içine tümör hücresi invazyonu modelleri daha iyi...

Modelleme ve Görüntüleme 3-Boyutlu Toplu Hücre Invasion

Kaynak: Guyon, J.,  et al. Glioblastoma için bir 3D sferoid modeli. J. Vis. Uzm. (2020)Video, tümör hücresi istilasının üç boyutlu küresel bir modelinin oluşturulmasını göstermektedir. Sferoidler, insan beyni tümör hücrelerinden oluşur ve bir kollajen matrisine gömülür. Küresel periferdeki tümör hücreleri, kollajeni parçalamak için proteazlar salgılayan ve çevredeki matrisi istila etmek için ilerleyen istilacı bir fenotip benimser.

Tümör Hücresi İstilasının Üç Boyutlu Küresel Modelinin Oluşturulması

Çevredeki normal dokuların invazyonu, malign tümörlerin tanımlayıcı bir özelliğidir. Burada, bir dizi ileri insan kanseri modeliyle örneklenmiş doğal bir 3D biyomatrise basit, yarı otomatik bir mikro plaka istila testi sunuyoruz.

Üç boyutlu (3D) Tümör Sfero Yayılması deneyindeki

Bu yöntem, kanser hücresinin sferoidlerden çevredeki bir 3B matrise invazyonunu değerlendirir.  Sferoidler, asılı damla kültürü yöntemi ile üretilir ve daha sonra bazal membran malzemeleri ve tip I kollajenden oluşan bir matrise gömülür.  Spheroidlerin istilası daha sonra izlenir.

Bir Kanseri Hücre Sfero Testi 3D ortamda Invasion Değerlendirmek için

Bu iletişim kuralı yanlısı ve anti migratory faktörlerin etkisi hücre geçiş bir üç boyutlu fibrin matris içinde değerlendirmek için hedeftir.

İçinde üç boyutlu Vitro hücre göç karakterize ortamlar yara

Mesane kanseri istila yönetim süreçleri biyomarker ve terapötik geliştirme fırsatları temsil eder. Burada hangi 3-b kültür tümör pulcuklarının, hızlandırılmış görüntüleme ve confocal mikroskobu birleştirmek bir mesane kanseri istila modeli mevcut. Bu teknik invaziv işlem özelliklerini tanımlamak için ve terapötik ajanlar süzmek için yararlıdır.

3-b hücre kültür sistemi istila eğitim ve Mesane kanserinde tedavi değerlendirmek için

Tümör mikroçevre kanser büyüme ve işgali önemli bir parçasıdır. Karsinom ilerlemesini taklit etmek için biyolojik olarak alakalı bir insan matrisine ihtiyaç vardır. Bu protokol, insan leiomyoma tabanlı matris uygulayarak in vitro üç boyutlu küroid invazyonu tahlil için bir gelişme tanıtır. Protokol aynı zamanda bilgisayar tabanlı bir hücre istilası analizi sunar.

Üç boyutlu Küroid Istilası tahlil tam ınsan tümör tabanlı matris

Bu protokolün amacı, immünofluorescence, transkripsiyon gibi farklı analiz sistemlerinde ele alınabilir bir tümör toplu benzeri ortamda, kanserle ilişkili fibroblastların (CAFs) farklılaşmasını incelemek için bir 3D in vitro modeli kurmaktır analiz ve yaşam hücresi görüntüleme.

Kanser Ilişkili fibroblastlar farklılaşma ve Invazyon In vitro etütler için daha fizyolojik bir sistem olarak bir 3D Küroid modeli

Burada glioblastoma için kullanımı kolay bir istila çıktısını tanımlıyoruz. Bu töz glioblastoma kök benzeri hücreler için uygundur. İstilanın, göçün ve çoğalmanın kolay ölçülmesi için bir Fiji makrosu da tanımlanmıştır.

Glioblastoma için 3D Spheroid Model

Burada bir küresel görüntüleme cihazının üretimi için bir protokol sunulmaktadır. Bu cihaz kanser hücre sferoidlerinin dinamik veya boyuna floresan görüntülemesini sağlar. Protokol ayrıca kanser hücre invazyonunun analizi için basit bir görüntü işleme prosedürü sunmaktadır.

3D Sferoid Modelinde Zaman Çözülen Floresan Görüntüleme ve Kanser Hücre İstilasının Analizi

Keşfedin, migrastatik inhibitörlerin glioma hücre göçü üzerindeki etkilerini 3D tümör spheroidleri ve yüksek çözünürlüklü konfokal mikroskopi kullanarak nasıl değerlendirebilirsiniz. Bu yöntem, kanser ilaç testi için daha fizyolojik bir ortam sağlar.

Migrastatik İnhibitörlerin 3Boyutlu Tümör Spheroid İnvazyonu Üzerine Etkilerinin Yüksek Çözünürlüklü Konfokal Mikroskopi Ile Karakterizasyonu (Video) | JoVE Journal

Migrastatik İnhibitörlerin 3Boyutlu Tümör Spheroid İnvazyonu Üzerine Etkilerinin Yüksek Çözünürlüklü Konfokal Mikroskopi Ile Karakterizasyonu

Daha fazla video keşfet