Name: Yetişkin Farede Koklear Yüzey Hazırlama (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-11-06T16:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 51 s
Description: Öğrenin, yetişkin farede koklear yüzey hazırlama tekniğini kullanarak immunohistokimya ile organ of Corti yapılarını görüntülemeyi. Bu yöntem, saç hücresi rejenerasyonu ve işitme patolojilerinin incelenmesine olanak tanır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Açıklanan araştırma projesi, Ulusal Sağırlık ve Diğer İletişim Bozuklukları Enstitüsü, Ulusal Sağlık Enstitüleri'nden Hibe R01 DC009222 tarafından desteklenmiştir. Bu çalışma, Hibe C06 RR014516 tarafından desteklenen yenilenmiş alanda MUSC'deki WR Binası'nda gerçekleştirilmiştir. Hayvanlar, Ulusal Araştırma Kaynakları Merkezi'nin Ekstramural Araştırma Tesisleri Programı'ndan C06 RR015455 hibe ile desteklenen MUSC CRI hayvan tesislerinde barındı. Yazarlar değerli yorumları için Dr. Jochen Schacht'a ve el yazmasının okunması için Andra Talaska'ya teşekkür eder.

10-12 haftalık erkek erişkin CBA/J fareleri ve 6-8 haftalık C57BL/6J fareleri içeren tüm araştırma protokolleri Güney Carolina Tıp Üniversitesi'ndeki (MUSC) Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmıştır. Hayvan bakımı MUSC'deki Laboratuvar Hayvan Kaynakları Bölümü'nün gözetimi altındaydı.
NOT: Aşağıda sunulan işlemler için fareler intraperitoneal enjeksiyonlar yoluyla ketamin (100 mg/kg) ve ksilazin (10 mg/kg) ile anestezi edilir. Fareler, hayvan artık bir ayak çimdik gibi ağrılı uyaranlara yanıt sonra kafası kesilir.
1. Temporal Kemiklerin Çıkarılması
<ol><li>Farenin hemen cerrahi makasla (17 cm uzunluğunda) kafasını koparın ve kafatası kemiğini ön ten çekerek kafatası kemiğini ortaya çıkardıktan sonra arka taraftan ileriye makasla kesin.</li>
	<li>Forseps kullanarak beyin dokusu çıkarın ve el ile yaş veya daha büyük fareler için başparmak ve işaret parmağı ile temporal kemikleri kaldırın. Üç aylıktan küçük farelerin temporal kemiğini kesmek için küçük cerrahi makas (11 cm uzunluğunda) kullanın.</li>
	<li>Temporal kemiği, fosfat tamponlu salin (PBS), pH 7.4'te çözünmüş buz gibi taze %4 paraformaldehit (PFA) çözeltisi içeren bir Petri kabına (30 mm çapında) yerleştirin. NOT: Taze %4 PFA çözeltisi hazırlayın ve pH'ı temporal kemikleri sabitlemeden hemen önce 7,4'e ayarlayın, çünkü PFA solüsyonunun yanlış pH dengelemesi immünetiketlemenin kalitesini düşürecektir.</li>
</ol>2. Fiksasyon ve Perfüzyon
<ol><li>Oval pencereden stapes çıkarın ve boyutu #5 forseps ile yuvarlak pencere zarı delin. Bir stereo diseksiyon mikroskobu altında 1 mL şırınga bağlı bir 27 G iğne kullanarak koklea apeks içine küçük bir delik yapmak.</li>
	<li>Çözelti tepedeki küçük delikten yıyana kadar yuvarlak ve oval pencereler aracılığıyla kokleayı %4 PFA çözeltisi ile yavaşça ve yavaşça perfitleyin. Kokleayı (şişe başına bir veya iki kokleae) 10 mL%4 PFA çözeltisi içeren 20 mL hacimli sintilasyon şişelerine aktarın.</li>
	<li>Oda sıcaklığındaki (RT) ışıltılı şişeleri 2 saat boyunca hafifçe çalkalayın ve bir rotator üzerinde bir buzdolabında (4 °C) gece bırakın. NOT: Fiksasyon süresi kullanılan antikora bağlı olarak ayarlanabilir. Örneğin, fiksasyonu 1,5 saatle sınırlamak, GluA 2 antikorunu kullanırken post sinaptik terminallerin başarılı immünetiketlemesini sağlayacaktır.</li>
</ol>3. Temporal Kemik Kireçlenmesi
<ol><li>PFA çözeltisini çıkarın ve kokleayı her biri 5 dakika boyunca taze PBS 3x ile yıkayın.</li>
	<li>Sintilasyon şişelerine %4 oranında etilendiamintetraasetik asit disodyum tuzu (EDTA) çözeltisi (pH 7.4) ekleyin ve hafif ajitasyonlu bir rotatörüzerinde 48-72 saat buzdolabında saklayın. Kokleae sökülene kadar EDTA çözümünü günlük olarak değiştirin. Kokleae elastikiyetini değerlendirmek için forseps ile kemikli vestibüler kısmı dokunarak dekalcified olup olmadığını kontrol edin ya da sadece vestibüler kısmının kenarından küçük bir parça kesti. Bu tür kesme ezilmiş bir parça ile sonuçlanırsa, koklea dekalcified değildir. NOT: EDTA solüsyonu, çözelti konsantrasyonuna bağlı olarak primer antikorların immünreaksiyonuna engel olabilir. PBS'de %4 EDTA hazırlayın ve pH'ı 7.4'e ayarlayın. Temporal kemiklerin tutarlı kireçlenmesi için taze EDTA çözeltisi kullanılır.</li>
	<li>Kireçlenme tamamlandıktan sonra mikrodiseksiyon için çözeltiyi PBS olarak değiştirin. NOT: Kokleae yeterince kireçlenmezise kokleae diseksiyonu yapılamaz.</li>
</ol>4. Koklear Epitelin mikrodiseksiyonu
NOT: Kireçlenme tamamlandıktan sonra immünetiketleme için koklear epitelin mikrodiseksiyonunun mümkün olan en kısa sürede yapılması gerekmektedir. PBS içeren temiz bir 30 mm Petri kabında, iç kulak aşağıdaki şekilde yönlendirilir: Petri kabının üst (kapak) ve alt referans olarak, koklear yuvarlak ve oval pencereler üst yüz. Dissector referans olarak, koklear kısmı ön doğru (uzak dissector) ve vestibüler kısmı arka doğru (dissector yakın) doğru yönlendirilir. Aşağıdaki adımları ayrıntılı olarak açıklanır.
<ol><li>Temporal kemiğin vestibüler kısmını forsepslerle tutun ve kırmızı çizgide belirtildiği gibi neşterle apikal dönüşü 45° açıyla kesin(Şekil 1a).</li>
	<li>Kırmızı çizgi(Şekil 1b)ile gösterildiği gibi yuvarlak pencere ile oval pencere arasındaki soluk çizgi boyunca dikey olarak keserek kokleayı vestibüler kısımdan ayırın (Şekil 1c). NOT: Bu koklear kısmı epitelorta, bazal ve kanca bölümlerini içerir.</li>
	<li>Koklear kısmı alta doğru çevirerek koklear kısmı yerleştirin ve ortadaki kemikli kapsülü ve orta daki lateral duvarı kırmızı çizgide belirtildiği gibi apikal bölümün çıkarıldığı uca doğru kesin (Figu re 1d,e).</li>
	<li>Orta kısmı bazal ve kanca bölgelerinden tamamen ayırmak için kesmeye devamedin( Şekil 1f,g). NOT: Kokleanın kanca bölgesi, farelerde 48 kHz ve daha yüksek tonlara duyarlılık la karşılık gelen koklear epitelin sonudur.</li>
	<li>Çanak altına doğru yönlendirilmiş bazal membran site ile bazal ve kanca kısmı koyun ve dikey kırmızı çizgi(Şekil 1g)ile belirtildiği gibi modiolus kaldırmak için kanca bölgeden modiolus kesip dikey olarak . NOT: Modiolus süngerimsi kemik ve koklear sinir yanı sıra spiral ganglion oluşan koklea konik şekilli merkezi eksenidir. Bu kesimin makasla yapılması tercih edilebilir.</li>
	<li>Diğer kırmızı çizginin şekil 1g'da gösterdiği gibi bazal ve kanca bölgelerini kesilerek kanca kısmını ayırın (Şekil 1h). NOT: Koklea şimdi apikal, orta, bazal ve kanca kısımları ayrılmıştır. Sonraki adımlar, orta dönüşü örnek olarak kullanarak, her bir dönüşün son bölümü olacaktır.</li>
	<li>Kırmızı çizgiile belirtildiği gibi kemik kapsülü ve orta dönüş lateral duvar dokusunispeten büyük kısımları kes (Şekil 1i). NOT: Koklear kanalın lateral duvarı spiral ligament ve stria vascularis tarafından oluşturulur.</li>
	<li>Kemikkapsülü ve lateral duvarı Petri kabının alt kısmıyla hizalamak ve bu dokuları basiler membran tarafından kesmek için çiller ile lateral duvarı tutun. Sonra duyusal saç hücresi yüzey ilerler için örnek düzleştirmek. Kemikkapsülünün ve lateral duvarın geri kalanını kırpın (Şekil 1j).</li>
	<li>Orta bölgeyi tamamen ayırmak için tektorial membranı forcep'ler kullanarak çıkarın (Şekil 1k).</li>
	<li>Şekil 1l'degösterildiği gibi kalan dönüşlerin veya bölgelerin son diseksiyonları için 4.7−4.9 adımlarını tekrarlayın.</li>
	<li>Duyusal epitelin yapışması için 10 mm'lik yuvarlak bir kapak fişi hazırlayın. Yuvarlak kapak kaymasının ortasına 0,5 μL hücre ve doku yapıştırıcısı yaymak için bir pipet kullanın. Kuruduktan sonra (RT'de 3-5 dk), Petri kaplarında PBS'deki kapakları koyun.</li>
	<li>Petri kabındaki 10 mm'lik yuvarlak kapak lıya duyusal epitelin dört parçasını da yapıştırın. Daha sonra immünetiketleme veya immünohistokimya için dört kuyulu bir tabağa aktarmak için kapak kapağının bir kenarını tutun (Şekil 1m). NOT: Şekil 2 büyük kesimlerin yerini göstermektedir.</li>
</ol>5. Koklear Sinapslar için Immünetiketleme
NOT: Bu çalışmada takip edilen koklear sinapslar için immünetiketleme protokolü daha önce13tanımlanmıştır. Presinaptik kurdeleler CtBP2 antikor (fare anti-karboksil-terminal bağlayıcı protein 2 IgG1, RIBEYE iskele proteininin B etki alanını etiketleme) ile etiketlenmiştir. Post sinaptik terminaller GluA2 antikor (fare anti-glutamat reseptörü 2 IgG2a, AMPA reseptörünün alt birimlerini etiketleme) ile etiketlendi.
<ol><li>Dört kuyulu bir tabakta her yıkamada 5 dakika pbs 3x ile duyusal epiteli yıkayın ve sonra bir rotator üzerinde RT'de 30 dakika boyunca tabağa %2 noniyonik yüzey aktif madde (yani Triton-X 100) 2 mL ekleyin.</li>
	<li>Bir pipet kullanarak çanaktan noniyonik yüzey aktif solüsyonu çıkarın ve RT'de hafif ajitasyon ile bir rotator üzerinde 1 saat boyunca her kuyuya %10 normal keçi serumu içeren 100 μL blokaj çözeltisi ekleyin.</li>
	<li>Engelleme çözeltisini her kuyudan çıkarın, RT'de nazik ajitasyon altında her yıkamada 5 dk pbs 3x ile yıkayın.</li>
	<li>Her kuyuya PBS ile seyreltilmiş birincil antikorların 100 μL'sini ekleyin: fare anti-GluA2 IgG2a (1:2,000), fare anti-CtBP2 IgG1 (1:400). Her dört kuyulu yemeğin üzerini kapağını kapatın ve ışıktan koruyan büyük bir nemlendirilmiş kap içine yerleştirin. 37 °C'de 24 saat kuluçkaya yatırın. NOT: Bir seçenek olarak, tavşan anti-miyozin VIIa (1:400) duyusal saç hücreleri immünetiketleme için eklenebilir.</li>
	<li>RT'de hafif ajitasyon ile her yıkamada 5 dakika pbs ile 3kat yıkayın.</li>
	<li>Alexa 594 keçi anti-fare IgG1a (1:1.000), Alexa 488 keçi anti-fare IgG2a (1:1.000) her kuyuya PBS ile seyreltilmiş ikincil antikorlar 100 μL ekleyin. Her dört kuyulu yemeğin üzerini kapağını kapatın ve ışıktan koruyan büyük bir nemlendirilmiş kap içine yerleştirin. 37 °C'de 2 saat kuluçkaya yatırın. NOT: Miyozin VIIa kullanılırsa, Alexa 350 keçi anti-tavşan (1:200) ekleyin.</li>
	<li>5 dakika PBS ile 3x yıkayın. Daha sonra, 10 mm'lik yuvarlak kapak kaymasını, örnekler in üstünde ki bir slayta aktarın.</li>
	<li>Coverslip'in ortasına Tris tamponu ile 8 μL Floro-Jel'i dikkatlice ekleyin. Daha sonra 10 mm'lik başka bir yuvarlak örtünün kenarını, üzerine monte etmek için forceps ile tutun ve iki örtüyü birbirine sıkıştırın.</li>
	<li>Slaytları mühürlemek için oje kullanın, bir karton slayt klasörüne koyun ve buzdolabında saklayın. NOT: Bazı Floro-Jel montaj sırasında kapaklar arasında dışarı sızıntıları ise, oje ile slayt mühürleme önce kapakların kenarlarını temizleyin. Konfokal görüntülerin 7 gün içinde alınması gerekir.</li>
</ol>

<ol><li>Muller, M., von Hunerbein, K., Hoidis, S., Smolders, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+physiological+place-frequency+map+of+the+cochlea+in+the+CBA%2FJ+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Hearing+Research%22%5BJournal%5D)">A physiological place-frequency map of the cochlea in the CBA/J mouse.</a> Hearing Research. 202 (1-2), 63-73 (2005).</li>
<li>Viberg, A., Canlon, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+guide+to+plotting+a+cochleogram%5BTitle%5D)+AND+%22Hearing+Research%22%5BJournal%5D)">The guide to plotting a cochleogram.</a> Hearing Research. 197 (1-10), (2004).</li>
<li>Sha, S. H., Schacht, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emerging+therapeutic+interventions+against+noise-induced+hearing+loss%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opinion+on+Investigational+Drugs%22%5BJournal%5D)">Emerging therapeutic interventions against noise-induced hearing loss.</a> Expert Opinion on Investigational Drugs. 26 (1), 85-96 (2017).</li>
<li>Kujawa, S. G., Liberman, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adding+insult+to+injury%3A+cochlear+nerve+degeneration+after+%22temporary%22+noise-induced+hearing+loss%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Adding insult to injury: cochlear nerve degeneration after "temporary" noise-induced hearing loss.</a> Journal of Neuroscience. 29 (45), 14077-14085 (2009).</li>
<li>Chen, F. Q., Zheng, H. W., Hill, K., Sha, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Traumatic+Noise+Activates+Rho-Family+GTPases+through+Transient+Cellular+Energy+Depletion%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Traumatic Noise Activates Rho-Family GTPases through Transient Cellular Energy Depletion.</a> Journal of Neuroscience. 32 (36), 12421-12430 (2012).</li>
<li>Hill, K., Yuan, H., Wang, X., Sha, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noise-Induced+Loss+of+Hair+Cells+and+Cochlear+Synaptopathy+Are+Mediated+by+the+Activation+of+AMPK%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Noise-Induced Loss of Hair Cells and Cochlear Synaptopathy Are Mediated by the Activation of AMPK.</a> Journal of Neuroscience. 36 (28), 7497-7510 (2016).</li>
<li>Xiong, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+Histone+Methyltransferase+G9a+Attenuates+Noise-Induced+Cochlear+Synaptopathy+and+Hearing+Loss%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Association+for+Research+in+Otolaryngology%22%5BJournal%5D)">Inhibition of Histone Methyltransferase G9a Attenuates Noise-Induced Cochlear Synaptopathy and Hearing Loss.</a> Journal of Association for Research in Otolaryngology. 20 (3), 217-232 (2019).</li>
<li>Yuan, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autophagy+attenuates+noise-induced+hearing+loss+by+reducing+oxidative+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Antioxidant+%26+Redox+Signaling%22%5BJournal%5D)">Autophagy attenuates noise-induced hearing loss by reducing oxidative stress.</a> Antioxidant & Redox Signaling. 22 (15), 1308-1324 (2015).</li>
<li>Wang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+Calcium+Transporters+Mediate+Sensitivity+to+Noise-Induced+Losses+of+Hair+Cells+and+Cochlear+Synapses%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Molecular+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial Calcium Transporters Mediate Sensitivity to Noise-Induced Losses of Hair Cells and Cochlear Synapses.</a> Frontiers in Molecular Neuroscience. 11, 469(2018).</li>
<li>Bohne, B. A., Harding, G. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Processing+and+analyzing+the+mouse+temporal+bone+to+identify+gross%2C+cellular+and+subcellular+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22Hearing+Research%22%5BJournal%5D)">Processing and analyzing the mouse temporal bone to identify gross, cellular and subcellular pathology.</a> Hearing Research. 109 (1-2), 34-45 (1997).</li>
<li>Jiang, H., Sha, S. H., Forge, A., Schacht, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Caspase-independent+pathways+of+hair+cell+death+induced+by+kanamycin+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+%26+Differentiation%22%5BJournal%5D)">Caspase-independent pathways of hair cell death induced by kanamycin in vivo.</a> Cell Death & Differentiation. 13 (1), 20-30 (2006).</li>
<li>Johnsson, L. G., Hawkins, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensory+and+neural+degeneration+with+aging%2C+as+seen+in+microdissections+of+the+human+inner+ear%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Otology%2C+Rhinology%2C+and+Laryngology%22%5BJournal%5D)">Sensory and neural degeneration with aging, as seen in microdissections of the human inner ear.</a> Annals of Otology, Rhinology, and Laryngology. 81 (2), 179-193 (1972).</li>
<li>Wan, G., Gomez-Casati, M. E., Gigliello, A. R., Liberman, M. C., Corfas, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurotrophin-3+regulates+ribbon+synapse+density+in+the+cochlea+and+induces+synapse+regeneration+after+acoustic+trauma%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Neurotrophin-3 regulates ribbon synapse density in the cochlea and induces synapse regeneration after acoustic trauma.</a> Elife. 3, (2014).</li>
<li>Wang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+HDAC+with+a+novel+inhibitor+effectively+reverses+paclitaxel+resistance+in+non-small+cell+lung+cancer+via+multiple+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+%26+Disease%22%5BJournal%5D)">Targeting HDAC with a novel inhibitor effectively reverses paclitaxel resistance in non-small cell lung cancer via multiple mechanisms.</a> Cell Death & Disease. 7, 2063(2016).</li>
<li>Weber, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+cell-cycle+reentry+and+cell+death+after+acute+inactivation+of+the+retinoblastoma+gene+product+in+postnatal+cochlear+hair+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Rapid cell-cycle reentry and cell death after acute inactivation of the retinoblastoma gene product in postnatal cochlear hair cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105 (2), 781-785 (2008).</li>
<li>Engström, H., Ades, H. W., Andersson, A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aEngstr%C3%B6m%2C+H+%22Structural+pattern+of+the+organ+of+Corti%3A+a+systematic+mapping+of+sensory+cells+and+neural+elements%22">Structural pattern of the organ of Corti: a systematic mapping of sensory cells and neural elements</a>. , Almqvist & Wiksell. Stockholm, Sweden. (1966).</li>
<li>Hawkins, J. E., Linthicum, F. H., Johnsson, L. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cochlear+and+vestibular+lesions+in+capsular+otosclerosis+as+seen+in+microdissection%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Otology%2C+Rhinology%2C+and+Laryngology+Supplement%22%5BJournal%5D)">Cochlear and vestibular lesions in capsular otosclerosis as seen in microdissection.</a> Annals of Otology, Rhinology, and Laryngology Supplement. 87, Pt 3 Suppl 48 1-40 (1978).</li>
<li>MassEyeAndEar.org. , https://www.masseyeandear.org/research/otolaryngology/eaton-peabody-laboratories (2019).</li>
<li>Montgomery, S. C., Cox, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole+Mount+Dissection+and+Immunofluorescence+of+the+Adult+Mouse+Cochlea%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Whole Mount Dissection and Immunofluorescence of the Adult Mouse Cochlea.</a> Journal of Visualized Experiments. (107), (2016).</li>
<li>Corning Cell Culture Surfaces. , https://www.corning.com/catalog/cls/documents/brochures/CLS-C-DL-006.pdf (2019).</li>
<li>Nouvian, R., Beutner, D., Parsons, T. D., Moser, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure+and+function+of+the+hair+cell+ribbon+synapse%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Membrane+Biology%22%5BJournal%5D)">Structure and function of the hair cell ribbon synapse.</a> The Journal of Membrane Biology. 209 (2-3), 153-165 (2006).</li>
<li>Atturo, F., Barbara, M., Rask-Andersen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+anatomy+of+the+%27hook%27+region+of+the+human+cochlea+and+how+it+relates+to+cochlear+implantation%5BTitle%5D)+AND+%22Audiology+and+Neurootology%22%5BJournal%5D)">On the anatomy of the 'hook' region of the human cochlea and how it relates to cochlear implantation.</a> Audiology and Neurootology. 19 (6), 378-385 (2014).</li>
<li>Kim, N., Steele, C. R., Puria, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+importance+of+the+hook+region+of+the+cochlea+for+bone-conduction+hearing%5BTitle%5D)+AND+%22Biophysical+Journal%22%5BJournal%5D)">The importance of the hook region of the cochlea for bone-conduction hearing.</a> Biophysical Journal. 107 (1), 233-241 (2014).</li>
<li>Zheng, H. W., Chen, J., Sha, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Receptor-interacting+protein+kinases+modulate+noise-induced+sensory+hair+cell+death%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+%26+Disease%22%5BJournal%5D)">Receptor-interacting protein kinases modulate noise-induced sensory hair cell death.</a> Cell Death & Disease. 5, 1262(2014).</li>
<li>Brown, L. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage-Mediated+Glial+Cell+Elimination+in+the+Postnatal+Mouse+Cochlea%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Molecular+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Macrophage-Mediated Glial Cell Elimination in the Postnatal Mouse Cochlea.</a> Frontiers in Molecular Neuroscience. 10, 407(2017).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Immünetiketleme ile birlikte tam montaj yüzey preparatlarının koklear mikrodizise, iç kulak patolojileri ve moleküler mekanizmaların araştırılması için temel bir araç tır. Bu modifiye yetişkin fare koklear diseksiyon yöntemi hücre ve doku yapıştırıcı kullanarak bu zor prosedürü basitleştirir.
Bu modifiye koklear yüzey hazırlama yöntemi nispeten kolay ve erişilebilir olmasına rağmen, yine de yeterlilik elde etmek için uygulama gerektirir. Doğru kesimyapmak için, dissector dikkatli konsantrasyon...

Koklea ses in algılanmasına adanmıştır ve işitmeden sorumludur. Koklear kanal kemik labirent bir spiral şeklinde sarılır ve işitsel duyusal son organ tutar, Corti organı (OC). OC baziler membran üzerinde, koklear epitel oluşturan, yaklaşık bir uzunluğu ile 5.7 mm yetişkin CBA / CaJ fareler de uncoiled1,2. OC tonotopik baz ve apeks düşük frekanslarda tespit yüksek frekansları ile organize olduğundan, koklear epitel genellikle analitik karşılaştırmalar için üç bölüme ayrılır: apikal, orta ve bazal düşük karşılık gelen döner, orta ve yüksek frekans algılama, sırasıyla. Destekleyen hücreler dizisine ek olarak, OC, medial olarak bulunan bir iç saç hücresi (IHC) sırası ve koklear spirale göre yanal olarak bulunan üç sıra dış saç hücrelerinden (OhC) oluşur.
Doğru işitsel işleme koklea duyusal saç hücrelerinin bütünlüğüne bağlıdır. Duyusal saç hücrelerinin hasar veya kaybı, aşırı gürültüye maruz kalma, ototoksik ilaçların kullanımı, bakteriyel veya viral kulak enfeksiyonları, kafa yaralanmaları ve yaşlanma gibi çok sayıda etiyolojisi neden olduğu kazanılmış işitme kaybı, ortak bir patolojik özelliğidir süreç3. Ayrıca, bütünlük ve iç saç hücresi fonksiyonu / işitsel sinir sinapsları hafif hakaret ler tarafından bozulabilir4. Moleküler ve genetik bilginin mevcudiyeti ve genlerin nakavt ve nakavt teknikleri ile manipüle edilebisi ile, fareler işitme biliminde yaygın olarak kullanılmaktadır. Yetişkin fare koklea küçük ve koklear epitel teknik olarak zor mikrodiskes ile sonuçlanan kemikli bir kapsül ile çevrili olmasına rağmen, immünetiketleme veya immünohistokimya ile birlikte epitel yüzey preparatları ve konfokal görüntüler geniş kollear patolojilerin araştırılması için kullanılmıştır, şerit sinaps ve saç hücrelerinin kayıpları da dahil olmak üzere, duyusal saç hücrelerinde protein düzeylerinde değişiklikler ve destekleyici hücreler, ve saç hücresi rejenerasyonu. Koklear yüzey preparatları da muhabir genlerin ekspresyon deseni belirlemek için kullanılmıştır (yani, GFP) ve başarılı transdüksiyon onaylamak ve transdükse hücre tiplerini belirlemek. Bu teknikler daha önce yetişkin CBA / J fareler5,6,7,8,9kullanarak gürültü kaynaklı işitme kaybı altında yatan moleküler mekanizmaların çalışması için kullanılmıştır.
Her bölümde üç dış saç hücresi (OHC) ve bir iç saç hücresi (IHC) içeren kokleanın küçük kesitkısımlarını elde etmek için parafin kesitleri veya kriyokesitler kullanarak immünohistokimyanın aksine, koklear yüzey preparatları duyusal saç hücreleri ve şerit sinapsları sayma ve duyusal saç hücrelerinin belirli fonksiyonel frekanslara karşılık gelen immünetiketleme için OC tüm uzunluğu görselleştirme. Tablo 1 Muller1 ve Viberg ve Canlon1,2çalışmalara göre yetişkin CBA / J fare koklear spiral uzunluğu boyunca mesafe bir fonksiyonu olarak işitme frekansları haritalama gösterir . Koklear yüzey preparatları koklear patolojilerin araştırılmasında yaygın olarak kullanılmıştır4,5,6,7,8,9,10 ,11,12,13,14,15. Tüm montaj koklear diseksiyon yöntemi aslında hans Engstrom tarafından 196616yılında düzenlenmiş bir kitapta tanımlanmıştır. Bu teknik daha sonra rafine edilmiş ve işitme bilimi bilim adamları bir dizi tarafından literatürde açıklandığı gibi türlerin çeşitli adapte10,11,12,13, 15,17 ve Eaton-Peabody Laboratuvarları tarafından Massachusetts Göz ve Kulak18. Son zamanlarda, başka bir koklear diseksiyon yöntemi Montgomery ve ark.19tarafından bildirilmiştir. Kokleanın mikrodiseksiyonu koklear yüzey preparatları için önemli ve kritik bir adımdır. Ancak, fare kokleae diseksiyon teknik bir sorundur ve önemli bir uygulama gerektirir. Burada, yetişkin fare kokleae kullanılmak üzere değiştirilmiş bir koklear yüzey hazırlama yöntemi sunulmaktadır. Bu yöntem, kochlear epitel parçalarını immünetiketleme için 10 mm yuvarlak kapaklara yapıştırmak için hücre ve doku yapıştırıcısının (yani Cell-Tak) kireçlenmeyi ve kullanımını gerektirir. Hücre ve doku yapıştırıcıyaygın immünohistokimya20için kullanılmaktadır. Bu modifiye koklear mikrodisesiksiyon yöntemi daha önce bildirilen18göre nispeten basittir18 ,19.

<table><tbody><tr><td>10 mm Rund Lameller</td><td>Bilim ve endüstri için mikroskopi ürünleri</td><td>260367</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 Keçi Anti-fare IgG2</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A-21131</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 Phalloidin</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A12379</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 594 Keçi Anti-fare IgG1</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A-21125</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 594 Keçi Anti-tavşan IgG (H + L)</td> <td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A11012</td><td></td></tr><tr><td>Karton Mikro Slayt Tepsileri</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-587-10</td><td></td></tr><tr><td>Cell-Tak</td><td>BD Biosciences</td><td>354240</td><td></td></tr><tr><td>Corning Petri Kapları</td><td>Fisher Scientific</td><td>353004</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>62247</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5 Forseps</td><td>FST güzel bilim araçları</td><td>11251-20</td><td></td></tr><tr><td>EDTA Disodyum Tuzu</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E5134</td><td></td></tr><tr><td>Tris Tamponlu Floro-jel</td><td>Elektron Mikroskobu Bilimleri</td><td>17985-10</td><td></td></tr><tr><td>Dört Kuyulu Hücre Kültürü Yemekleri</td><td>Greiner Bio-One</td><td>627170</td><td></td></tr><tr><td>Keçi Anti-miyozin VIIa Antikoru</td><td>Proteus Biosciences</td><td>25-6790</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop Slaytları</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-544-7</td><td></td></tr><tr><td>Fare Anti-CtBP2 Antikoru</td><td>BD Biosciences</td><td>#612044</td><td></td></tr><tr><td>Fare Anti-Glu2R Antikoru</td><td>Millipore</td><td>MAB397</td><td></td></tr><tr><td>Normal Keçi Serumu</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>31872</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>441244</td><td></td></tr><tr><td>Fosfat Tamponlu Salin</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP665-1</td><td></td></tr><tr><td>Neşter</td><td>VWR</td><td>100491-038</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>X100-500ML</td><td></td></tr><tr><td>Vannas Bahar</td><td>Makas Güzel Bilim Araçları</td><td>15001-08</td><td></td></tr></tbody></table>

yetişkin farede koklear yüzey hazırlama

Cochlear Surface Preparation in the Adult Mouse

Kokleada işitsel işleme mekanosensory saç hücrelerinin bütünlüğüne bağlıdır. Bir ömür boyunca, işitme kaybı aşırı gürültüye maruz kalma gibi çok sayıda etiyolojisi elde edilebilir, ototoksik ilaçların kullanımı, bakteriyel veya viral kulak enfeksiyonları, kafa yaralanmaları, ve yaşlanma süreci. Duyusal saç hücrelerinin kaybı edinilmiş işitme kaybı çeşitlerinin ortak bir patolojik özelliğidir. Ayrıca, iç saç hücre sinaps hafif hakaretler tarafından zarar görebilir. Bu nedenle, koklear epitelin yüzey preparatları, immünetiketleme teknikleri ve konfokal görüntülerle birlikte, şerit sinapsları ve duyusal saç hücrelerinin kayıpları da dahil olmak üzere koklear patolojilerin araştırılması nda çok yararlı bir araçtır, saç hücrelerinde ve destekleyici hücrelerde protein düzeylerinde değişiklikler, saç hücresi yenilenmesi, ve rapor gen ekspresyonunun belirlenmesi (yani, GFP) başarılı transdüksiyon doğrulama ve transdükse hücre tiplerinin belirlenmesi için. Koklea, iç kulakta kemikli spiral şekilli bir yapı, işitsel duyu salkım organı tutar, Corti organı (OC). Duyusal saç hücreleri ve OC çevreleyen destek hücreleri koklear kanal ve basiler membran üzerinde dinlenme, baz ve apeks düşük frekanslı meydana gelen yüksek frekanslı algılama ile tonotopik bir şekilde düzenlenen bulunur. Moleküler ve genetik bilginin kullanılabilirliği ve nakavt ve nakavt teknikleri ile genleri manipüle etme yeteneği ile, fareler yaygın işitme bilimi de dahil olmak üzere biyolojik araştırmalarda kullanılmıştır. Ancak, yetişkin fare koklea miniscule, ve koklear epitel kemikli bir labirent içinde kapsüllenmiş, mikrodisesit zor hale. Diseksiyon teknikleri birçok laboratuvarda geliştirilmiş ve kullanılmış olsa da, hücre ve doku yapıştırıcısı kullanan bu modifiye mikrodisesiyöntemi daha kolay ve kullanışlıdır. Kireçlenmeden sonra her türlü yetişkin fare kokleasında kullanılabilir.

Kollear epitelin yüzey preparatları, immünetiketleme ve konfokal görüntüleme ile birlikte, kollear patolojilerin araştırılmasında, şerit sinapslarının, duyusal saç hücrelerinin sayısallaştırılması, duyusal saç hücrelerinde protein ekspresyonu5,6,7,8. Yüzey preparatları için yetişkin fare koklealarının diseksiyonu basit olmasa da, yeni mezun öğrenciler 10-15 kulakla pratik yaptıktan sonra bu değ...

Bu makalede, yetişkin fare kokleae immünohistokimya için 10 mm yuvarlak kapak fişleri koklear epitel parçaları yapıştırmak için bir hücre ve doku yapıştırıcı kullanımı ve kireçlenme gerektiren değiştirilmiş bir koklear yüzey hazırlama yöntemi sunar.

Yetişkin Farede Koklear Yüzey Hazırlama

Auditory processing in the cochlea depends on the integrity of the mechanosensory hair cells. Over a lifetime, hearing loss can be acquired from numerous ...

Koklear yüzey preparatları immünohistokimya ve konfokal görüntüleme kullanarak Corti organının tüm lens görselleştirme sağlar. Bu geniş ilgi belirli koklear patolojilerin araştırılması için kullanılmıştır. Koklear mikrodiseksiyon yöntemini değiştireceğiz.Bu tekniğin en büyük avantajı, birden fazla yıkama adımı sırasında doku kaybını önlerken immünetiketleme işlemi için koklear epitel in 10 milimetre lik yuvarlak kapaklara yapışmasidir. Buna ek olarak koklear patolojiler, koklear yüzey hazırlama da değerlendirme ekspresyonu ve saç hücre rejenerasyonu için kullanılabilir. Bu teknik için temel mikroskop becerileri gereklidir ve yöntemin görsel gösterimi her adımın doğru şekilde gerçekleştirilmesini sağlamaya yardımcı olabilir.Prosedürü gösteren Qiaojun Fang, benim laboratuvar bir yüksek lisans öğrencisi olacaktır. Temporal kemik çıkarma için, hemen post-mortem kafatası kemik ortaya çıkarmak için ön deri çekin ve kafatasının orta hattı boyunca ileri arka açıdan kemik kesmek için makas kullanın. Başparmak ve işaret parmağını kullanmadan önce beyin dokusunu çıkarmak için pratisyen hekimler kullanın ve üç aylık veya daha büyük farelerden zamansal kemikleri elle çıkarın.Kemikleri bir diseksiyon mikroskobu altında taze buz soğuk% 4 PFA ve PBS içeren 30 milimetre çapında Petri çanak içine yerleştirin ve oval pencereden stapes kaldırın. Beş numaralı forsepsile yuvarlak pencere zarını delin ve kokleanın doruk larına küçük bir delik açmak için taze %4 PFA içeren bir mililitreşşile bağlı 27 kalibrelik bir iğne kullanın. Çözelti tepedeki küçük delikten yıkana kadar yuvarlak ve oval pencereler aracılığıyla kokleayı yavaşça ve yavaşça fiksatif bir çözümle perfitleyin.Daha sonra iki perfüzyon kokleae'yi şişe başına 10 mililitre lik %4'lük PFA içeren tek tek 20 mililitrelik sintillasyon şişelerine aktarın ve numuneleri oda sıcaklığında iki saat boyunca hafifçe çalkalayın ve ardından bir rotatörde dört santigrat derecede geceleme işlemini takip edin. Ertesi sabah kokleayı yıkama başına taze PBS ile üç beş dakikalık yıkar ile yıkayın. Son yıkamadan sonra, her şişeye %4 EDTA'dan 20 mililitre ekleyin ve numuneleri 48 saat boyunca dört derece santigrat derecede hafif bir ajitasyonla döndürün.Kuluçka sonunda, numunelerin elastikiyetini değerlendirmek için her kokleanın kemikli vestibüler kısmına forceplerle dokunun. Kemikler sert yerine elastik ise, koklea dekalcified edilmiştir. Her numune için EDTA'yı taze PBS ile değiştirin.Koklear epitelin mikrodiseksiyonu için temporal kemiğin vestibüler kısmını forsepslerle tutarak ve apikal dönüşü 45 derecelik açıyla kesmek için neşter kullanın. Vestibüler kısımdan kokleayı ayırmak için yuvarlak pencere ile oval pencere arasındaki soluk çizgi boyunca dikey olarak kesin ve koklear kısmı alt ve orta kısıma doğru çeviren koklear kısmı Petri kabının tepesine doğru çevirin. Bu konumdan, apikal bölüm kaldırıldı sonuna doğru orta dönüş kemikkapsül ve lateral duvar kesilmiş ve bazal ve kanca bölgelerinden tamamen orta kısmını ayırmak için kesme ye devam.Çanak altına doğru yönlendirilmiş bazal ve kanca kısmı basilar membran site ile yerleştirerek, dikey medialis kaldırmak için kanca bölgeden medialis kesip ve kanca kısmını ayırmak için bazal ve kanca bölgeleri kesti. Doku bozulmasını önlemek için, bazal dönüş ve kanca bölge ayırmadan önce kanca bölgeden medialis kesti. Orta dönüş kemikkapsül ve lateral duvar dokusunun nispeten büyük bölümlerini kesip ve Petri kabının alt kemik kapsül ve lateral duvar hizalamak için forceps ile lateral duvar tutarak, baziler membran tarafında bu dokuları kesti.Daha sonra, duyusal saç hücresi yüzeyi yan yönlendirmek ve kemik kapsülü ve lateral duvarın geri kalanını kırpmak için örnek düzleştirmek. Sonra tamamen orta bölge ayırmak ve kemik kapsülü kaldırmak için tektorial membran kaldırmak için forceps kullanın, lateral duvar dokusu, ve sadece gösterildiği gibi kalan döner tektorial bölgeleri. Koklear dönüşlerin tamamı incelendiğinde, 0,5 mikrolitre hücre ve doku yapıştırıcısını bir yuvarlak 10 milimetrelik kapak lının ortasına yayın ve yapıştırıcının oda sıcaklığında 3-5 dakika kurumasını bekleyin.Kurutulmuş kapakları Petri kabına yerleştirin ve her duyusal epitel örneğinin dört parçasını da bir kapak içine yerleştirin. Daha sonra her örtünün bir kenarını kavramak için forseps kullanın ve numuneleri immünetiketleme için dört kuyulu bir hücre kültür yemeğinin ayrı kuyularına aktarın. Yüzey koklear sinaps preparatlarının immünetiketlemesi için, her duyusal epiteli her bir taze PBS'de beş dakika boyunca üç kez yıkayın ve ardından her numunenin iki mililitre 2%2 iyonik olmayan yüzey aktif madde ile bir rotatörde oda sıcaklığında 30 dakika boyunca tedavi edin.Kuluçka sonunda, her kuyudan sürfaktan çözeltisi aspire ve oda sıcaklığında nazik ajitasyon ile rotator üzerinde bir saat boyunca kuyu başına bloklama çözeltisi 100 mikrolitre ile herhangi bir nonspesifik bağlama blok. Engelleme kuluçka sonunda, 37 santigrat derece ışıktan korunan 24 saat boyunca ilgi birincil antikorların 100 mikrolitre ile etiketleme den önce nazik ajitasyon altında gösterildiği gibi PBS ile üç kez örnekleri yıkayın. Ertesi gün, numuneleri taze PBS ve yıkama başına hafif ajitasyon ile üç kez yıkayın ve numuneleri ışıktan korunan 37 santigrat derecede iki saat boyunca uygun ikincil antikorlardan 100 mikrolitre ile etiketleyin.Kuluçka sonunda, numuneleri her bir kapak kapağını tek tek cam mikroskop slaytlarına yerleştirmeden önce yıkama başına taze PBS'de üç beş dakikalık yıkama ile yıkayın. Daha sonra, her coverslip'in ortasına uygun bir montaj ortamının sekiz mikrolitresini dikkatlice ekleyin ve her numunenin üzerine 10 milimetrelik bir kapak daha takmak için forceps kullanın. Sonra net oje ile her coverslip sandviç kenarları mühür, bir karton slayt klasörüne örnekleri yerleştirin ve dört derece santigrat slaytlar saklayın.Yüzey preparatları için yetişkin fare koklealarının diseksiyonu basit olmasa da, teknikte yeni olan araştırmacılar 10-15 kulakla pratik yaptıktan sonra yöntemi öğrenebilmelidir. Tedavi edilmeyen 10-12 haftalık CBAJ farelerin CTBP2 ve GluA2 ile yüzey preparatlarının immünetiketlemesi, hem presinaptik şeritlerin hem de postsinaptik terminallerin sırasıyla iç saç hücre çekirdeklerinin altında yer alan ve fonksiyonel sinapsları gösteren yan yana olduğunu göstermektedir. Miyozin 7A için immünetiketleme ve phalloidin ve DAPI ile karşı boyama dış saç hücreleri ve iç saç hücreleri ve çekirdekleri de dahil olmak üzere duyusal saç hücrelerinin varlığını ortaya koymaktadır.Miyozin 7A için immünetiketleme ve phalloidin ile karşı boyama hücre ve doku yapıştırıcısı kullanımı ile veya olmadan immünoreaktivite veya tekdüzelik hiçbir fark gösterir. Buna ek olarak, tedavi edilmeyen altı ila sekiz haftalık C57 siyah 6 farelerden yüzey preparatlarının taramaelektron mikroskobu, numunenin üç sıra içinde dış saç hücrelerinin iyi organize edilmiş V şeklinde bir stereosilya sını göstermektedir. Çözelti tepedeki küçük delikten yıkana kadar koklearı yuvarlak ve oval pencerelerden hafifçe ve yavaşça sabitleştirici solüsyonla doldurmayı unutmayın.Kanca bölgesini bazal dönüşten ayırmadan önce, medialis'in kaldırılmasını kolaylaştırmak için medialis'i kanca bölgesinden kesmeye özen.

cochlear-surface-preparation-in-the-adult-mouse

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Hayvan modellerinin koklealarına ototoksik ajanlar eklemek için çeşitli yöntemler mevcuttur. Sunulan, ototoksik ajanların yuvarlak pencere nişine verilmesi için cerrahi bir protokoldür. Prosedür güvenilirdir, hedefe yönelik intra-koklear lezyonlar oluşturur ve mikromimaride mekanik hasarı önler. Koklear kendi kendine onarım/rejenerasyon muayenesi mümkündür.

Koklear Hücre Dejenerasyonu Inducing için hızlı ve Güvenilir Teknik: Ototoksik Ajan Teslimat için Fare Yuvarlak pencere Yaklaşımı

Birincil kirpikler çeşitli sinyal yollarını etkiler. Memeli kokleası, düzlemsel hücre polaritesi (PCP) sinyalini incelemek için idealdir. Kirpikler disfonksiyonu koklear büyümeyi, hücresel paternlenmeyi ve saç hücresi oryantasyonunu, PCP okumalarını etkiler. Amacımız, fare kokleasında PCP sinyalizasyonunu fenotipik analiz, immünohistokimya ve taramalı elektron mikroskobu ile analiz etmektir.

Ciliopathy Fare Mutant Kohlea Planar-Hücre-Polarite fenotipleri Değerlendirilmesi

Biz üç bozulmamış koklear döner (apeks, orta ve üs) olarak Corti yetişkin organı izole etmek için bir yöntem mevcut. Biz de floresan levhası 'antikorlar ile immün için bir prosedür ortaya koymaktadır. Birlikte bu teknikler kokleadaki bulunan saç hücreleri, destek hücreler ve diğer hücre türleri çalışma sağlar.

Tüm Dağı Diseksiyon ve Yetişkin Fare Kohlea immünofloresan

İç kulağa lokal ilaç verilmesi için iki mikrocerrahi yaklaşım burada tanımlanmış ve işitme parametreleri, koklear sitomimari ve inflamatuar belirteçlerin ekspresyonu üzerindeki etkisi açısından karşılaştırılmıştır.

Fare İç Kulak Hedefli İlaç Dağıtım Yöntemleri Karşılaştırmalı İncelemesi: Bullostomy Karşı Transtimpanik Enjeksiyon

Bu protokolün amacı, yenidoğan murin koklear eksplantlarının hazırlanması, kültürü, tedavisi ve immün boyanmasını göstermektir. Bu teknik, işitme araştırmalarında in vitro bir tarama aracı olarak kullanılabilir.

Yenidoğan Murin Koklear Explant Tekniği<em&gt; In vitro</em&gt; İşitme Araştırmalarında Tarama Aracı

Koklear implant hayvan modelleri elektrik stimülasyonu ile kalıcı sensorinöral işitme kaybı tedavisinde teknolojik üsler bilgisine ilerletebilirsiniz. Bu çalışmada akut sağır edici ve fareler hem de işlevsel değerlendirme İşitsel Beyin Sapı Davranım Odyometrisi ile bir elektrot dizinin koklear implantasyon için cerrahi bir Protokolü sunar.

Koklear Implant ameliyatı ve elektriksel olarak uyarılmış işitsel beyin sapı yanıt kayıtları C57BL/6 farelerde

Bu yazıda normal farelerde morfolojik özellikleri ve kurdele sinüslerinin fonksiyonel durumunu değerlendirmek için deneysel bir protokol açıklanmaktadır. Bu model aynı zamanda gürültüye bağlı ve yaşa bağlı Cochlear synaptopathy-kısıtlanmış modeller için de uygundur. Önceki fare çalışmalarından gelen göreli sonuçlar da tartışılmaktadır.

Fare koklea belirli frekans bölgelerinde şerit synapses morfolojik ve fonksiyonel değerlendirilmesi

Burada, fonksiyonel mekanotransdüksiyon kanalları ile işitsel saç hücrelerinde 3 kDa Texas Kırmızı etiketli dextran alımını görselleştirmek için bir yöntem salıyoruz. Buna ek olarak, 3-10 kDa dekstrans saç endositoz ve Corti organının destekleyici hücreleri çalışmak için kullanılabilir.

Canlı ve Fonksiyonel Murine Koklear Saç Hücrelerinde Dekstran Etiketleme ve Alımı

Burada, farelerden birincil koklear saç hücrelerinin izole edilmesi ve kültürlenmesi için ayrıntılı bir protokol sunuyoruz. Başlangıçta, Corti'nin organı yenidoğan (3-5 günlük) murin koklealarından mikroskop altında diseke edildi. Daha sonra, hücreler enzimatik olarak tek hücreli bir süspansiyona sindirildi ve kültürde birkaç gün sonra immünofloresan kullanılarak tanımlandı.

Yenidoğan Farelerden Primer Koklear Saç Hücrelerinin İzolasyonu ve Kültürü

Fare iç kulak dokusunun acemi kullanıcıları için tasarlanan bu protokol, kesit immün boyama için farklı gelişim aşamalarında fare iç kulaklarının işlenmesine yönelik adımları kapsamlı bir şekilde detaylandırır.

Fare İç Kulak Dokusunun Kriyoseksiyon ve İmmün Boyama: Embriyonik Aşamalardan Yetişkin Aşamalarına

Burada, fare stria vascularis'ten birincil marjinal hücrelerin izolasyonu, saflaştırılması ve kültürü için bir protokol sunuyoruz ve koklear yan duvar bozukluklarını incelemek için oksidatif stres ve hücresel yaşlanma için in vitro modeller oluşturulmuştur.

Stria vascularis'in Primer Marjinal Hücrelerinin Yenidoğan Farelerden İzolyasyonu ve Kültürü

Öğrenin, yetişkin farede koklear yüzey hazırlama tekniğini kullanarak immunohistokimya ile organ of Corti yapılarını görüntülemeyi. Bu yöntem, saç hücresi rejenerasyonu ve işitme patolojilerinin incelenmesine olanak tanır.

Yetişkin Farede Koklear Yüzey Hazırlama

Daha fazla video keşfet