Name: Ortotopik Meme Kanseri Modeli Kullanarak Üçlü Negatif Meme Kanseri Eğitimi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-03-20T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 29 s
Description: Öğrenin, ortotopik meme kanseri modelinde GFP etiketleme ve biyolüminesans görüntüleme ile tümör yükünü değerlendirme yöntemini. Bu protokol, anti-kanser ajanların tedavi etkinliğini analiz etmek için güvenilir bir araç sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar Ulusal Sağlık Enstitüleri, Ulusal Kanser Enstitüsü, Bethesda MD, Kanser ve İnflamasyon Programı intramural Araştırma Programı ve Frederick Ulusal Laboratuvarı - Küçük Hayvan Görüntüleme Programı tarafından destek kabul etmek istiyorum, Leidos Biyomedikal Araştırma, Inc, Frederick Maryland, ABD.

Tümör büyümesinin analizi, Ulusal Kanser Enstitüsü Hayvan Deneyleri Etik Komitesi tarafından onaylanan protokoller kullanılarak gerçekleştirildi ve Amerika Birleşik Devletleri Ulusal Araştırma Konseyi'nin "Bakım ve Kullanım Kılavuzu" önerilerine uyularak Laboratuvar Hayvanları", Amerika Birleşik Devletleri Halk Sağlığı Servisi'nin "Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Rehberi", "Laboratuvar Hayvanlarının İnsani Bakımı ve Kullanımı Politikası".
1. İmplantasyon için hücrelerin hazırlanması
NOT: MDA-MB-231 insan meme adenokarsinom hücreleri (ticari olarak elde edilen) luciferase gen III ve geliştirilmiş yeşil floresan protein (GFP) belirteci ile lentivirus tarafından transfeced ve seçim antibiyotik varlığında yetiştirilen (puromisin) .
<ol><li>Hücre kültürüne 1 x 106 MDA-MB-231-Luc/GFP hücreleri ile başlayın ve T75 kültür şişesine fetal sığır serumu (FBS) ile 15 mL önceden ısıtılmış (37 °C) RPMI 1640 orta ekleyin. Hücreleri sıcaklık kontrollü hücre kültürü kuluçka makinesinde %5 CO2ile 37 °C'de tutun. Tam ortamı haftada en az 2x değiştirin. </li><li><li><li></li><li> </li></ol><ol><li> </li><li><li> </li><li><li> </li><li><li> <img src="/files/ftp_upload/60316/60316eq1.jpg"> </li><li><li></ol><ol><li><li> </li><li><li> </li><li><li> </li><li><li><li></ol><ol><li><li> </li><li> </li><li><li> </li><li> <img src="/files/ftp_upload/60316/60316eq2.jpg"></li><li><li> </li><li> </li><li> </li></ol><ol><li><li><li><li><li></ol><ol><li><li></ol>

<ol><li>Abramson, V. G., Lehmann, B. D., Ballinger, T. J., Pietenpol, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subtyping+of+triple-negative+breast+cancer%3A+implications+for+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer%22%5BJournal%5D)">Subtyping of triple-negative breast cancer: implications for therapy.</a> Cancer. 121, 8-16 (2015).</li>
<li>Zhuang, X., Zhang, H., Hu, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+and+Microenvironment+Plasticity%3A+Double-Edged+Swords+in+Metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Pharmacological+Sciences%22%5BJournal%5D)">Cancer and Microenvironment Plasticity: Double-Edged Swords in Metastasis.</a> Trends in Pharmacological Sciences. 40 (6), 419-429 (2019).</li>
<li>Campbell, J. P., Merkel, A. R., Masood-Campbell, S. K., Elefteriou, F., Sterling, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Models+of+bone+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Models of bone metastasis.</a> Journal of Visualized Experiments. (67), e4260(2012).</li>
<li>Saha, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+bioluminescence+imaging+of+tumor+hypoxia+dynamics+of+breast+cancer+brain+metastasis+in+a+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">In vivo bioluminescence imaging of tumor hypoxia dynamics of breast cancer brain metastasis in a mouse model.</a> Journal of Visualized Experiments. (56), e3175(2011).</li>
<li>Goddard, E. T., Fischer, J., Schedin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Portal+Vein+Injection+Model+to+Study+Liver+Metastasis+of+Breast+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">A Portal Vein Injection Model to Study Liver Metastasis of Breast Cancer.</a> Journal of Visualized Experiments. (118), e54903(2016).</li>
<li>Lim, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+tumor+metastases+and+osteolytic+lesions+with+bioluminescence+and+micro+CT+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Monitoring tumor metastases and osteolytic lesions with bioluminescence and micro CT imaging.</a> Journal of Visualized Experiments. (50), e2775(2011).</li>
<li>Bauerle, T., Komljenovic, D., Berger, M. R., Semmler, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-modal+imaging+of+angiogenesis+in+a+nude+rat+model+of+breast+cancer+bone+metastasis+using+magnetic+resonance+imaging%2C+volumetric+computed+tomography+and+ultrasound%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Multi-modal imaging of angiogenesis in a nude rat model of breast cancer bone metastasis using magnetic resonance imaging, volumetric computed tomography and ultrasound.</a> Journal of Visualized Experiments. (66), e4178(2012).</li>
<li>Katsuta, E., Oshi, M., Rashid, O. M., Takabe, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generating+a+Murine+Orthotopic+Metastatic+Breast+Cancer+Model+and+Performing+Murine+Radical+Mastectomy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Generating a Murine Orthotopic Metastatic Breast Cancer Model and Performing Murine Radical Mastectomy.</a> Journal of Visualized Experiments. (141), e57849(2018).</li>
<li>Rashid, O. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Is+tail+vein+injection+a+relevant+breast+cancer+lung+metastasis+model%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Thoracic+Disease%22%5BJournal%5D)">Is tail vein injection a relevant breast cancer lung metastasis model?</a> Journal of Thoracic Disease. 5, 385-392 (2013).</li>
<li>Bhambhani, V., Beri, R. S., Puliyel, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inadvertent+overdosing+of+neonates+as+a+result+of+the+dead+space+of+the+syringe+hub+and+needle%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Disease+in+Childhood%3A+Fetal+and+Neonatal+Edition%22%5BJournal%5D)">Inadvertent overdosing of neonates as a result of the dead space of the syringe hub and needle.</a> Archives of Disease in Childhood: Fetal and Neonatal Edition. 90, F444-F445 (2005).</li>
<li>Zhang, G. L., Zhang, Y., Cao, K. X., Wang, X. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+Injection+of+Breast+Cancer+Cells+into+the+Mice+Mammary+Fat+Pad%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mice Mammary Fat Pad.</a> Journal of Visualized Experiments. (143), e58604(2019).</li>
<li>Tavera-Mendoza, L. E., Brown, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+less+invasive+method+for+orthotopic+injection+of+breast+cancer+cells+into+the+mouse+mammary+gland%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animals%22%5BJournal%5D)">A less invasive method for orthotopic injection of breast cancer cells into the mouse mammary gland.</a> Laboratory Animals. 51, 85-88 (2017).</li>
<li>Paschall, A. V., Liu, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Orthotopic+Mouse+Model+of+Spontaneous+Breast+Cancer+Metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">An Orthotopic Mouse Model of Spontaneous Breast Cancer Metastasis.</a> Journal of Visualized Experiments. (114), e54040(2016).</li>
<li>Kocaturk, B., Versteeg, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+injection+of+breast+cancer+cells+into+the+mammary+fat+pad+of+mice+to+study+tumor+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Orthotopic injection of breast cancer cells into the mammary fat pad of mice to study tumor growth.</a> Journal of Visualized Experiments. (96), e51967(2015).</li>
<li>Fletcher, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+breast+adipose+tissue%3A+characterization+of+factors+that+change+during+tumor+progression+in+human+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+and+Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Human breast adipose tissue: characterization of factors that change during tumor progression in human breast cancer.</a> Journal of Experimental and Clinical Cancer Research. 36, 26(2017).</li>
<li>Giuliano, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Axillary+dissection+vs+no+axillary+dissection+in+women+with+invasive+breast+cancer+and+sentinel+node+metastasis%3A+a+randomized+clinical+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Medical+Association%22%5BJournal%5D)">Axillary dissection vs no axillary dissection in women with invasive breast cancer and sentinel node metastasis: a randomized clinical trial.</a> Journal of the American Medical Association. 305, 569-575 (2011).</li>
<li>Rummel, S., Hueman, M. T., Costantino, N., Shriver, C. D., Ellsworth, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumour+location+within+the+breast%3A+Does+tumour+site+have+prognostic+ability%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Ecancermedicalscience%22%5BJournal%5D)">Tumour location within the breast: Does tumour site have prognostic ability?</a> Ecancermedicalscience. 9, 552(2015).</li>
<li>Kroman, N., Wohlfahrt, J., Mouridsen, H. T., Melbye, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+tumor+location+on+breast+cancer+prognosis%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Cancer%22%5BJournal%5D)">Influence of tumor location on breast cancer prognosis.</a> International Journal of Cancer. 105, 542-545 (2003).</li>
<li>Bao, J., Yu, K. D., Jiang, Y. Z., Shao, Z. M., Di, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+laterality+and+primary+tumor+site+on+cancer-specific+mortality+in+breast+cancer%3A+a+SEER+population-based+study%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">The effect of laterality and primary tumor site on cancer-specific mortality in breast cancer: a SEER population-based study.</a> PLoS One. 9, e94815(2014).</li>
<li>Faustino-Rocha, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estimation+of+rat+mammary+tumor+volume+using+caliper+and+ultrasonography+measurements%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Animal%22%5BJournal%5D)">Estimation of rat mammary tumor volume using caliper and ultrasonography measurements.</a> Lab Animal. 42, 217-224 (2013).</li>
<li>Mullen, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+Matrigel+to+facilitate+the+establishment+of+human+cancer+cell+lines+as+xenografts%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">The use of Matrigel to facilitate the establishment of human cancer cell lines as xenografts.</a> Methods in Molecular Medicine. 88, 287-292 (2004).</li>
<li>Jensen, R. L., Leppla, D., Rokosz, N., Wurster, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Matrigel+augments+xenograft+transplantation+of+meningioma+cells+into+athymic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Matrigel augments xenograft transplantation of meningioma cells into athymic mice.</a> Neurosurgery. 42, 130-136 (1998).</li>
<li>Mullen, P., Langdon, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+matrigel+in+the+establishment+of+ovarian+carcinoma+cell+lines+as+xenografts%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">The use of matrigel in the establishment of ovarian carcinoma cell lines as xenografts.</a> Methods in Molecular Medicine. 39, 199-203 (2001).</li>
<li>Fliedner, F. P., Hansen, A. E., Jorgensen, J. T., Kjaer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+matrigel+has+no+influence+on+tumor+development+or+PET+imaging+in+FaDu+human+head+and+neck+cancer+xenografts%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Medical+Imaging%22%5BJournal%5D)">The use of matrigel has no influence on tumor development or PET imaging in FaDu human head and neck cancer xenografts.</a> BMC Medical Imaging. 16, 5(2016).</li>
<li>Mullen, P., Ritchie, A., Langdon, S. P., Miller, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+Matrigel+on+the+tumorigenicity+of+human+breast+and+ovarian+carcinoma+cell+lines%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Cancer%22%5BJournal%5D)">Effect of Matrigel on the tumorigenicity of human breast and ovarian carcinoma cell lines.</a> International Journal of Cancer. 67, 816-820 (1996).</li>
<li>Zinn, K. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+bioluminescence+imaging+in+small+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Institute+for+Laboratory+Animal+Research%22%5BJournal%5D)">Noninvasive bioluminescence imaging in small animals.</a> Journal of the Institute for Laboratory Animal Research. 49, 103-115 (2008).</li>
<li>Troy, T., Jekic-Mullen, D., Sambucetti, L., Rice, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+Comparison+of+the+Sensitivity+of+Detection+of+Fluorescent+and+Bioluminescent+Reproters+in+Animal+Models%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Imaging%22%5BJournal%5D)">Quantitative Comparison of the Sensitivity of Detection of Fluorescent and Bioluminescent Reproters in Animal Models.</a> Molecular Imaging. 3 (1), 9-23 (2004).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Hayvanlarda TNBC çalışması için, iki murine modelleri geliştirilmiştir: Bağışıklık tehlikeye farelerde MDA-MB-231 insan meme adenokarsinom hücreleri (yani atimik çıplak fareler, NSG fareler), ve 4T1 bağışıklık-yetkili BALB / c fareler. Her iki modelin de avantajları vardır. Bir çalışma için hayvan modelinin seçimi araştırma hedeflerine bağlıdır. Örneğin, MDA-MB-231 modeli immünosupresif insan meme kanseri hastaları taklit bağışıklık laşmış farelerde yetiştirilen bir insan TNBC hücre hattıdır. Öte yandan, BALB/c farelerinde ortotopik 4T1 üçlü negatif murin meme kanseri hücrelerinin invaziv fenotipleri, evre IV insan meme kanseri hastalarında meydana geldiği için metastatik süreci yakından taklit eder. Intravenöz hücre enjeksiyonu yaklaşımı aksine, insan MDA-MB-231 meme kanseri hücreleri benzer meme yağ pedi enjekte edildi11,12 ortotopik meme kanseri modeli11,13. Uzun tümör büyümesi ve edinsel metastatik yeteneği daha fizyolojik olarak ilgili, bu nedenle yapay bir metastatik kanser modeli değildir4,14. Böyle bir spontan metastaz modeli yakından inisiyasyon aşaması dışında insan meme kanseri gelişimini taklit eder. Bu metastatik meme kanserinde in vivo ilaç taraması ve terapötik etkinlik değerlendirmesi için önemli bir modeldir.
Faredeki tümör implantasyon bölgesi, tümör büyümesini ve insanlarda meydana gelene benzer metastatik fenotip seçimisağlayan bir mikroortamın sağlanmasında önemli bir rol oynar. Proksimal lenf düğümü ve yağ dokusunun varlığı meme kanserinin hastalık ilerlemesini etkileyen önemli faktörlerdir15,16. Bir insan hastada, lenf düğümü ve yağ dokusu hem malignite ve meme kanseri insidansını etkileyen önemli etkileşen faktörlerdir17,18,19. Böylece, enjeksiyon bölgesi için doğru anatomik yerseçimi insan hastalığına göre tümör modelinin alaka kuvvetini oldukça etkileyebilir. Bu çalışmada, dördüncü meme bezi implantasyon bölgesi olarak esas olarak yukarıda belirtilen gereksinimleri nedeniyle kullanılan ve anatomik olarak daha erişilebilir ve manipüle etmek daha kolay olduğunu.
Farklı tümör hacmi hesaplama yöntemleri mevcuttur, ve bir araştırmacı uygun gördükleri herhangi seçebilirsiniz. Bu çalışma için seçilen algoritma, farklı tümör hacmi hesaplama formüllerini karşılaştıran ve aşağıdaki formülün en doğru20olduğu sonucuna varan Faustino-Rocha ve ark.'nın bulgularına dayanmaktadır.
<img src="/files/ftp_upload/60316/60316eq3.jpg">
Bazal membran matriks çeşitli in vitro21 ve in vivo22,,23 tahlillerde kullanılan önemli bir hücre dışı matristir. 2222,24,25 ksenogreft malignitesi üzerinde bazal membran matris etkisi ile ilgili çelişkili raporlar vardır. Sadece ksenogreft in ilk kurulmasını etkiler ve ksenogreft büyüme üzerinde daha fazla etkisi var gibi görünüyor25. Açıklanan ksenogreft implantasyonu için, bazal membran matrisi implantasyon dan önce hücre/jel karışımı çözeltisi viskozitesini artırmak için kanser hücreleri ile karıştırıldı. İnatmembran matrisinin varlığı enjeksiyon bölgesinden karışım çözeltisi kaybını azaltır ve miksçözeltiyi implantasyon yerinde tutar, böylece implante edilen ksenogreft hacminin tekdüzeliğini artırır.
MDA-MB-231 hücre hattı kötü huylu ölümsüzleştirilmiş insan meme adenokarsinom hücre hattı ve üçlü negatif durumu nedeniyle meme kanseri araştırmalarında popüler bir araçtır. Çift muhabir (luciferase ve GFP) hücre hattı kullanımı in vivo ve ex vivo görüntüleme işleme daha fazla esneklik sağlar. Biyolüminesans sinyalinin GFP sinyallerinden daha fazla hassasiyet, derinlik algılanabilirliği ve üstün kontrasta (sinyal-gürültü oranı) sahip olduğu iyi bilinmektedir. Bu nedenle, tüm vücut görüntüleme için yaygın olarak kullanılan bir görüntüleme yöntemidir. Ne yazık ki, biyolüminesans algılama sinyal algılama doğrusal olduğu dar bir zaman penceresi (~ 15−20 dakika sonrası luciferin enjeksiyonu) ile sınırlıdır. BLI sinyali hayvanlar ötenazi yapıldığında hızla azalır. Birçok fare ötanazi ve birden fazla doku veya organ hasat gerekiyorsa bu deneysel bir tasarım sorunu haline gelir. Bu çalışmalarda doğrudan kalp delinmesi ile kan alındı, beyin, primer tümör, akciğer ve etkilenen lenf nodu 40 farede incelendi. Organlar hasat edilip ek vivo görüntülemeye hazır hale gelene kadar biyolüminesans sinyali tespit edilemiyordu. Bu nedenle, GFP algılama bu durumlarda daha uygundur. GFP sinyalinin salınımı görünür aralıktadır ve bu dalga boylarında kana bağlı sinyal emilimi (yani hemoglobin) önemli ölçüde daha yüksektir. Ayrıca, NADH, lipo-pigmentler ve flavins nedeniyle görünür aralıkta otofloresans, düşük seviyeli GFP sinyali ile otofloresan arka planı ayırt etmeyi zorlaştıran önemli bir arka planla sonuçlanır. Geleneksel filtre çifti görüntüleme yerine multispektral floresan görüntüleme yaklaşımı kullanmak ve spektral karıştırma algoritmaları kullanmak, ilgi alanında gerçek GFP sinyalini belirlemeye yardımcı olur. Bu nedenle, vivo algılama ve ex vivo organ / doku değerlendirmelerinde multispektral GFP görüntüleme tüm vücutta biyolüminesans görüntüleme güçlü birleştirerek, ölçülebilir veri farelerin büyük bir kohort en üst düzeye çıkarılabilir.
Bir hayvan çalışması için hangi yaklaşım seçilirse seçilsin, özellikle metastatik yükü hedefleyen çalışmalarda, organ/doku alımı öncesinde tüm kanın çıkarılması şiddetle tavsiye edilir. Bu protokol, ortotopik meme kanseri modelinde bulunan farelerden alınan tüm kan örneklerinden alınan GFP sinyallerini gerçek zamanlı PCR tahlilleri ile algılar. Organlarda/dokularda kan hacminin en aza indirilmesi hedef organlardaki yanlış pozitif sinyali azaltacaktır.
Sonuç olarak, MDA-MB-231-Luc/GFP hücrelerini kullanan ortotopik meme kanseri modeli, insan TNBC hasta durumunu yakından taklit eden son derece alakalı bir hayvan modelidir. Bu model, insana benzer bir tümör mikroortamında terapötik etkinliğin incelenmesi, izlenmesi ve değerlendirilmesi için gereklidir. Çift muhabir hücre hatlarının kullanımı daha bu ortotopik meme kanseri modelinin pratikliğini artırır.

Amerika Birleşik Devletleri'nde yaklaşık bir sekiz kadın ömrü boyunca invaziv meme kanseri gelişecektir, ve 10% −20% agresif üçlü negatif meme kanseri tanısı olacak (TNBC) alt tipi. Primer lezyonlar çoğu durumda cerrahi olarak çıkarılabilirken, subklinik mikrometastaz ve kemodirenç onu inatçı bir hastalık haline getirse de. Daha da önemlisi, metastatik TNBC olan hastaların çoğu sonunda nüks, onlar erken aşamada tedavi uygulandı bile1. Bu nedenle, kanser heterojenitesi, mikrometastaz ve terapötik direnç TNBC hastalarının başarılı klinik sonuçlarını sınırlayan üç önemli sorundur. Bu nedenle, Daha iyi TNBC polimorfik moleküler arka plan anlamak ve metastatik hastalığı sınırlayan etkili terapötik ajanlar geliştirmek için acil bir ihtiyaç vardır.
Tümör metastazı, tümör hücresinin mikroçevresini kontrol ettiği ve mikroçevresini kontrol ettiği ve mikroçevresini gasp ettiği, membran bozulması ve tümör hücresinin primer lezyondan kaçışı yoluyla, vazodan giriş (yani, ekstravazasyon) yoluyla ve sonuçta adaptasyon ve kolonizasyon yoluyla kendi mikroçevresini gasp ettiği çok aşamalı bir süreçtir2. Hayvan modelleri meme kanseri metastazı çalışmak için geliştirilmiştir, burada iki metodoloji yaygın olarak uygulanmaktadır: direkt kan dolaşımı enjeksiyonu ve ortotopik implantasyon. Doğrudan kan dolaşımı enjeksiyonu için yaygın olarak kullanılan yöntemler kuyruk damar enjeksiyonu dahil, doğrudan kardiyak enjeksiyon dahil olmak üzere diğer yaklaşımlar3, direkt beyin enjeksiyonu4, ve doğrudan karaciğer enjeksiyonu5 de istihdam edilmiştir. Doğrudan kan dolaşımı enjeksiyonu genellikle bir yapay metastaz modeli olarak adlandırılır, hangi hızlı ve kolay ama daha az fizyolojik olarak doğru çünkü primer lezyon ve intravazasyon tümör kaçış atlatır6,7,8. Doğrudan enjeksiyon modelleri ile karşılaştırıldığında, ortotopik meme kanseri modeli akciğer gibi uzak organlarda saptanabilir metastatik lezyonların oluşumu için daha uzun sürer, ancak yakından insanlarda meydana geldiği gibi çok adımlı metastatik süreci taklit çünkü fizyolojik olarak daha alakalıdır. Daha da önemlisi, 2013 yılında yapılan bir çalışmadakuyruk damar enjeksiyonu ve ortotopik modeller karşılaştırılmış ve kuyruk damarına enjekte edilen meme kanseri hücrelerinin ve kuyruk damar enjeksiyonundan sonra akciğer metastatik lezyonlarından izole edilenlerin benzer küresel gen ekspresyonu profilleri sergilendiği bulunmuştur. Buna karşılık, ortokjenik enjekte meme kanseri hücrelerinin küresel gen ekspresyonu profili ortotonik enjekte hücrelerden kaynaklanan akciğer metastatik lezyonların önemli ölçüde farklıydı9. Bu gözlemler ortotopik modelin fizyolojik olarak daha alakalı olduğunu göstermektedir, çünkü metastatik lezyonlar insanlarda meydana geldiği gibi çok aşamalı metastaz sürecine benzer bir seçim sürecinden geçmektedir.
Bu çalışmada, laboratuarımızda görüntüleme algılama teknikleri için optimize edilmiş çıplak farelerde ortotopik meme kanseri (MDA-MB-231-Luc/GFP) modelinin yanı sıra yeni biyobelirteçlerin belirlenmesi ve hedefe yönelik kemoterapötik ajanların geliştirilmesi anlatılmaktadır.

<table><tbody><tr><td>Bouins Solüsyonu</td><td>Sigma</td><td>HT10132-1L</td><td>Akciğer metastatik nodül boyama</td></tr><tr><td>D-Luciferin, Potasyum Tuzu</td><td>GoldBio</td><td>LUCK-1G</td><td>Luciferase substrat</td></tr><tr><td>DNAzol</td><td>ThermoFisher</td><td>10503027</td><td>DNA ekstraksiyon Kiti</td></tr><tr><td>Excel</td><td>Microsoft</td><td></td><td>Elektronik Tablo yazılımı</td></tr><tr><td>homojenleştirici</td><td>Virtis</td><td>Cyclone Virtishear</td><td>Doku homojenizasyonu için</td></tr><tr><td>IVIS SPECTRUM tarayıcı</td><td>Perkin Elmer</td><td></td><td>floresan ve BLI görüntüleme sistemi</td></tr><tr><td>Maestro GNIR-FLEX floresan tarayıcı</td><td>Perkin Elmer</td><td></td><td>floresan görüntüleme sistemi</td></tr><tr><td>MatriGel Matrix</td><td>Corning</td><td>356234</td><td>-20C'de saklayın ve kullanım sırasında eski (4 C) tutun.</td></tr><tr><td>MDA-MB-231 / Luciferase-2A-GFP Kararlı Hücre Hattı</td><td>GenTarget</td><td>SC044</td><td>Çift Raportör insan meme kanseri hücre hattı</td></tr><tr><td>Mikroskobu</td><td>ThermoFisher</td><td>EVOS</td><td>histoloji görüntü yakalama</td></tr><tr><td>Fosfat Tamponlu</td><td>Tuzlu Su ThermoFisher</td><td>10010049</td><td>durulama tamponu</td></tr><tr><td>Primer3</td><td>MIT</td><td></td><td>Astar</td></tr><tr><td>Tasarım Prizma</td><td>GraphPad</td><td></td><td>İstatistiksel Analiz Yazılımı</td></tr><tr><td>Puromycin</td><td>ThermoFisher</td><td>A1113803</td><td>Antibiyotikler</td></tr><tr><td>RPMI 1640 ortamı</td><td>ThermoFisher</td><td>61870127</td><td>Kültür ortamı</td></tr><tr><td>SeniFAST SYBR Lo-ROX kiti</td><td>Bioline</td><td>BIO-94020</td><td>Hızlı Gerçek Zamanlı PCR Reaktifi</td></tr><tr><td>StepOne Plus Gerçek Zamanlı PCR sistemi</td><td>ThermoFisher</td><td></td><td>Gerçek Zamanlı PCR makinesi</td></tr></tbody></table>

ortotopik meme kanseri modeli kullanarak Üçlü negatif meme kanseri eğitimi

Studying Triple Negative Breast Cancer Using Orthotopic Breast Cancer Model

Üçlü negatif meme kanseri (TNBC) sınırlı tedavi seçenekleri ile agresif bir meme kanseri alt türüdür. Daha az agresif meme tümörü olan hastalarla karşılaştırıldığında, TNBC hastalarının 5 yıllık sağkalım oranı karakteristik ilaca dirençli fenotip ve metastatik yükü nedeniyle %77'dir. Bu doğrultuda, TNBC tümör büyümesini ve metastatik yayılımı sınırlayan yeni tedavi stratejilerini belirlemeyi amaçlayan minin modelleri oluşturulmuştur. Bu çalışma, bir bodrum zarı matris asılı MDA-MB-231 meme kanseri hücreleri yakından insanlarda kanser hücresi davranışını taklit dördüncü meme yağ yastığı implante edildiği TNBC ortotopik modeli için pratik bir kılavuz açıklar. Tümörlerin kaliper ile ölçümü, in vivo ve ex vivo görüntüleme ile akciğer metastazı değerlendirmesi ve moleküler saptama tartışılmıştır. Bu model terapötik etkinliğini incelemek için mükemmel bir platform sağlar ve özellikle primer tümör ve distal metastatik siteler arasındaki etkileşimin incelenmesi için uygundur.

Kaliper ile tümör hacim ölçümü tedavi etkinliğini değerlendirmek için kurulmuş bir yöntemdir(Şekil 1). İmplante edilen hücrelerin sayısı, bazal membran matriskullanımı, mikrobiyom, tesis temizliği ve enjeksiyon bölgesi tümör büyüme hızını etkileyen önemli faktörlerdir.
GFP görüntülemenin aksine, BLI görüntülemeden önce en az 15−20 dk luciferase substrat uygulanması nı gerektirmiş. Ayrıca, fare zorlanma, hücre hattı, tedaviler ve luciferase muhabiri tüm biyolüminesans sinyal düzeylerini etkiler. Bu nedenle, çalışma grupları arasında karşılaştırılabilir sinyaller elde etmek için, en iyi görüntüleme zaman dilimini belirlemek için bir ön görüntüleme BLI kinetik çalışma yapılmalıdır (Şekil 2).
Üstün sinyal-arka plan oranı26nedeniyle,27, vivo biyolüminesans görüntüleme tüm vücut GFP yaklaşımı ile karşılaştırıldığında düşük seviyeli metastaz sinyali tespit oldukça duyarlıydı (Şekil 3). Ayrıca, biyolüminesans sinyali birkaç milimetre gfp daha derin penetrasyon sağladı. Ancak, biyolüminesans sinyal üretimi ATP gerektirir, hangi ex vivo doku örneklerinin değerlendirilmesinde sınırlayıcı bir faktördür. Hayvanlar hızlı bir şekilde işlenirse, o zaman BLI metastaz üzerinde nicel sonuçlar elde etmek için uygun bir yaklaşım olabilir. Bunu başarabilmek için bir yolu bir seferde bir hayvan işleme gereğidir. Ancak bu yaklaşım bu çalışma için mümkün değildi çünkü büyük bir fare kohortu kullanılmıştır. 45 dk civarında luciferin enjeksiyonu sonrası organlar görüntülendiğinde BLI sinyali tespit edilmedi. Bir çift muhabir hücre hattı kullanımı bu durumda yararlıdır. GFP molekülünün kararlı doğası nedeniyle, araştırmacılar hedef organlardan GFP sinyallerini yakalamadan önce leşi işlemek için yeterli zamana sahip olacaklardı(Şekil 4).
Şekil 5 kaliper tümör boyutu ölçümlerinin veri yorumunu nasıl bozabileceğine dair gerçek hayattabir örnek sağlar, çünkü ksenogreft canlı tümör hücre içeriğinin çoğunu kaybetmiştir, ancak yine de büyük kütlesini ve şeklini korumuştur. Bu ksenogreftlerin histopatolojik incelemesi kitle içinde nekroz olduğunu göstermiştir(Şekil 5B).
Ortotopik meme kanseri modelinde beyin metastazı ile ilgili görüntüleme sonuçlarına meydan okuyan araştırmacılar için, gerçek zamanlı PCR ile moleküler algılama ikna edici kanıtlar sağlayabilir(Şekil 6). Bu durumda, transfected GFP DNA dizisi doğal olarak insanlarda veya kemirgenlerde bulunmadığından, eksojen GFP DNA dizisi bu sorunu çözmenin en iyi yoluydu.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60316/60316fig1.jpg"> Şekil 1: Tümör hacmi ölçümü. Ksenogreft implantasyonundan sonra 10. Hata çubukları SEM değerine göre hesaplanır. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60316/60316fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60316/60316fig2.jpg"> Şekil 2: En uygun görüntü edinme penceresinin belirlenmesi. Sol: Optimal luciferin kinetik aralık tayini için büyük ksenogreftli bir fare ve küçük ksenogreftli bir fare seçildi. Sağ: 40 dk için her 2 dakika görüntüleri elde ederek elde Luciferin kinetik eğrisi. Bir plato 15−22 dakika arasında gözlendi ve sonraki tüm görüntülemeler için en uygun görüntü edinme süresi olarak kullanıldı. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60316/60316fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60316/60316fig3.jpg"> Şekil 3: Tüm vücut BLI görüntüleme. L: Tüm vücut BLI görüntüleme. M: Siyah bir eldiven bir kol ile kaplı alt vücut ile Ventral görünümü. R: Siyah bir eldiven kol ile kaplı alt gövde ile Dorsal görünümü. BLI görüntüleme ile ventral görünümde aksiller lenf nodfar metastazı saptanır. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60316/60316fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60316/60316fig4.jpg"> Şekil 4: Ex vivo BLI/GFP sinyal algılama. Aynı fareden 20 dk sonra beyin ve akciğerde GFP sinyalleri tespit edildi. BLI sinyali 45 dk sonrası luciferin enjeksiyonu saptamadı. Naif fare beyin ve akciğerinde GFP sinyali saptanmadı. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60316/60316fig4large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60316/60316fig5.jpg"> Şekil 5: Optik görüntüleme tekniklerinin kaliper ölçümlerinin avantajları. (A) Primer tümörde in vivo GFP sinyal tespitini gösteren temsili görüntü. Ksenogreftin sadece küçük bir kısmı GFP sinyali göstererek kitlenin önemli bir kısmının stroma olduğunu düşündürdü. Bu, geleneksel kaliper ölçümleri ile belirlenemez ve yanlış bir sonuca yol açabilir. Bu örnek, hayvan modeli çalışması için optik görüntülemenin önemini vurgulamaktadır. (B) Aynı farenin histopatoloji bölümünde nekrotik bölgenin (yani iç bölge) tümör boyutu hesaplamasına da katkıda bulunduğu saptanmasıdır. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60316/60316fig5large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60316/60316fig6.jpg"> Şekil 6: Erime eğrisi analizi. GFP amperinin özgüllüğünü gösteren erime eğrisi çizimi. MDA-MB-231-Luc/GFP implante edilmiş farelerden elde edilen beyindna'sı ve mda-MB-231-Luc/GFP hücrelerinden izole edilen DNA (pozitif kontrol) olarak belirlendi. Gerçek zamanlı PCR tsömonbeyin dokusunda GFP içeriğini değerlendirmek için yapıldı. (A,B) Pozitif kontrolün erime eğrileri ve fare beyninden çıkarılan DNA sırasıyla. (C) Fare beyin DNA'larından gelen tepe sinyallerini gösteren A ve B panellerinin çakışan eğrileri eksojen GFP dizisine özgüdür. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60316/60316fig6large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>

Bu çalışma, yeşil floresan protein ve biyolüminesans sinyallerinin yanı sıra kantitatif moleküler algılama tekniğinin entegrasyonu ile tümör yüklemesini doğru bir şekilde değerlendirmek için gelişmiş bir protokol hazırlaştır.

Ortotopik Meme Kanseri Modeli Kullanarak Üçlü Negatif Meme Kanseri Eğitimi

Triple-negative breast cancer (TNBC) is an aggressive breast cancer subtype with limited therapeutic options. When compared to patients with less ...

Protokolümüz, pcr analizi ile mikrometastazın saptanmasını ve ölçülmesini kolaylaştıran bir GFP etiketi ekleyerek sınırlı biyolüminesans görüntüleme penceresini aşar. GFP etiketi sınırlı biyolüminesans edinme penceresini aşındırdığından, sinyal kaybı olmadan daha fazla konu görüntülenebilir ve yanlış negatif sonuç potansiyeli sınırlıdır. Bu çalışma, anti-kanser ajanlarının terapötik etkinliğinin değerlendirilmesi için araştırmacılar için yararlı olacaktır.Bu metodoloji, EMT, ilaç direnci ve metastatik süreç le ilgili kanser kök hücre mekanizmaları nın yanı sıra anti-kanser ilaç gelişimi ile ilgilenen araştırmacılar için yararlı bir model sağlar. Pedal refleks yanıt eksikliği doğruladıktan sonra, alkol ile sol dördüncü meme bezi bezi bezi ve biraz dördüncü meme bezi kaldırmak için ince sıçan-diş forseps kullanın. Ucun yukarı doğru olduğundan emin olun, hücre bodrum membran matris karışımının 100 mikrolitresini içeren bir mililitreşşile şırıngaya bağlı 25 kalibrelik bir iğne yerleştirin ve iğnenin herhangi bir kan damarına temas etmediğinden emin olmak için pistonu hafifçe geri çekin.Karşılaştırmalı sonuçlar için, tümör hücre enjeksiyon sitesi tüm alıcı hayvanlar arasında tutarlı olmalıdır. Şırıngaya kan girmezse, çözeltinin tüm hacmini yavaşça meme yağı yastığına enjekte edin. Bir yuvarlak yükseltilmiş kitle deri altında görünecektir.İğneyi çıkarmadan önce bazal membran matrisinin sertlemesine 10 ila 15 saniye bekleyin ve tümör boyutu ölçümü yapmadan önce 7 ila 10 gün boyunca ksenogreftin kesintisiz olarak büyümesine izin verin. Daha sonra tüm farelerde ksenogreft boyutunu ölçmek ve belirtildiği gibi denklemi kullanarak tümör hacmini belirlemek için kalipers kullanın. Çalışma hayvanları görüntülemeden önce, çalışma için luciferin kinetik elde etmek için belirtilen parametreleri kullanarak iki dakikalık aralıklarla 40 dakika boyunca görüntü üç ek tümör taşıyan fareler.Sonraki tüm zaman noktaları için en uygun görüntü edinme süresi penceresini tanımlamak için tepe ölçülen biyolüminesans sinyalini kullanın. Metastaz görüntüleme yapmak için, siyah bir eldivenden kesilmiş bir kol ile birincil tümörü kaplayın ve tarayıcıya anestezili bir fare yerleştirin sonra sadece akciğer metastaz görüntüleme için kamera bakan farenin ventral tarafı ve beyin metastaz görüntüleme için kamera bakan farenin dorsal tarafı ile gösterildiği aynı parametreleri kullanarak luciferin sinyali görüntü. Bir tarayıcı ve veri analizi yazılımı kullanarak, metastatik yükün değerlendirilmesine olanak sağlamak ve biyolüminesans çıktısını saniyede toplam akı ve foton olarak ölçmek için tüm ilgi organının kapsandığından emin olmak için görüntülenmiş alanın üzerine bir ilgi alanı çizin.Biyolüminesans sinyal idrarından hemen sonra, beyin ve akciğer dokusunu hasat ve herhangi bir yüzeysel kan lekeleri kaldırmak için pbs organları hızlı bir şekilde durulayın. Organları düşük otomatik floresan siyah plastik plakaya yerleştirin ve örnekleri GFP algılaması için spektral karıştırma yeteneği yle donatılmış çok spektral floresan tarayıcıya taşıyın. Çıkarılan organların çok spektral GFP görüntülerini elde etmek için, 10 nanometre adım boyutu ile 500 ila 720 nanometre organları tarayın.Doku oto floresan profili elde etmek için, enjekte edilmemiş kontrol farelerin excised organları taz. Ayrıca, görüntü GFP pozitif dokular primer tümör gibi otomatik floresan karışık GFP profili elde etmek. Saf GFP ve otomatik floresan profilleri ile bir spektral kütüphane kurmak için üreticinin protokolü uyarınca bu spektrumları işleyin.Spektral kütüphanenin doğruluğunu doğruladıktan ve GFP sinyalini doku oto floresan arka planından ayırdıktan sonra, çalışmadaki tüm görüntüleri karıştırmak için aynı kütüphaneyi kullanır. Ani donma sonrası DNA ekstraksiyonu için, tüm beyni iki mililitre DNA lizis tamponu içeren beş mililitrelik homojenize bir tüpe yerleştirin ve dokuyu homojenize etmek için 50'ye ayarlanmış bir homogenizer kullanın. Doku tamamen homojenhale geldiğinde, bir mililitre lysat'ı bir DNAse ve RNAse serbest iki mililitrelik mikrosantrifüj tüpüne aktarın ve DNA'yı üreticinin protokolüne göre izole edin.İzole etmek için 500 mikrolitre %100 etanol ekleyin ve ters çevrilerek numuneyi karıştırın. Oda sıcaklığında üç dakika sonra, yeni bir iki mililitre DNaAse ve RNaE serbest tüp için yün benzeri DNA çökelti aktarmak için bir pipet kullanın. Tüpe bir mililitre %75 etanol eklemeden ve numuneyi yıkamak için tüpü üç ila altı kez ters çevirmeden önce numunenin havasını bir dakika kurutun.Sadece gösterildiği gibi yıkama başına taze etanol ile DNA iki kez daha yıkamadan önce son inversiyon sonra etanol atın. Son yıkamadan sonra, hava sekiz milimolar sodyum hidroksit 52 mikrolitre DNA eritmeden önce 10 saniye boyunca örnek kuru. İki mikrolitrelik DNA aliquot'u bir spektrofotometre şişesine aktarın ve formüle göre A260 ile 280 arasında bir emme oranı kullanarak örnekteki DNA konsantrasyonu ölçün.Ek sekiz milimolar sodyum hidroksit ile mikrolitre başına 50 nanogram için numunenin DNA konsantrasyonu ayarlayın ve gfp etiketi nin gerçek zamanlı PCR tespiti için açık kaynak primer tasarım web portalı ve tümörün distal siteleri kolonize olan metastatik hücreleri kullanarak ek olarak yeşil GFP dizisine özgü astar çiftini şirket içinde tasarlayın. Ardından, numunenin gerçek zamanlı kantitatif PCR analizi için hızlı gerçek zamanlı PCR protokolünü destekleyen gerçek zamanlı bir PCR reaktifi ve gerçek zamanlı BIR PCR makinesi kullanın. Akciğerde metastatik meme kanseri hücrelerinin tespiti için, göğüs boşluğu açmak için makas diseksiyon kullanın ve trakea ortaya çıkarmak için kalp ve timus geçmiş kesti.Trakea içine Bouin çözeltisi içeren 10 mililitrelik şırınga bağlı bir 22 gauge iğne takın ve çökmüş akciğerler çözeltinin yaklaşık iki mililitre ile şişmiş olana kadar piston depress. Akciğerler şişirildikten sonra şırınga ve iğneyi çıkarın ve tüm akciğeri taze Bouin solüsyonu içeren 15 mililitrelik bir tüpe aktarın. Yavaşça oda sıcaklığında 24 saat bekletmek için doku bırakmadan önce tüp birkaç kez ters.Ertesi gün, su ile akciğer durulayın ve% 70 etanol bir tüp içine örnek yerleştirin. Sonra akciğerlerin yüzeylerinde metastatik beyaz lekeler ve nodüllerin sayısını saymak için bir diseksiyon mikroskop kullanın. Kaliper ile tümör hacim ölçümü tedavi etkinliğini değerlendirmek için köklü bir yöntemdir.Çalışma grupları arasında karşılaştırılabilir sinyaller elde etmek için, en iyi görüntüleme zaman dilimini belirlemek için bir ön görüntüleme BLI kinetik çalışması yapılmalıdır. Üstün sinyal-arka plan oranı nedeniyle, vivo BLI tüm vücut GFP yaklaşımına göre düşük seviyeli metastaz sinyalleri tespit oldukça hassastır. Ancak, GFP molekülünün istikrarlı doğası nedeniyle, araştırmacılar çift muhabir çalışmalarda hedef organlardan GFP sinyalleri yakalamadan önce karkas işlemek için yeterli zamana sahip.Bu gerçek yaşam örneği kaliper tümör boyutu ölçümleri hala büyük kütle ve şekil korurken bu ksenogreft canlı tümör hücre içeriğinin çoğunu kaybetti gibi veri yorumunu bozabilir nasıl göstermektedir. Gerçek zamanlı PCR ile moleküler algılama da transfected GFP DNA dizisi doğal olarak insanlar da veya kemirgenler mevcut değildir gibi eksojen GFP DNA dizilimi kullanarak ortopik meme kanseri modelinde beyin metastazı ikna edici kanıt sağlayabilir. İmplantasyon bölgesi fizyolojik ve anatomik olarak kanser malignitesi ile ilgili olmalıdır.Hem tümör geni hem de protein ekspresyonu primer ve distal bölgelerde değerlendirilebilir ve metastatik hücreler daha fazla karakterizasyon için izole edilebilir.

studying-triple-negative-breast-cancer-using-orthotopic-breast-cancer

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kanser Araştırmaları

Video, bir fare modelinde meme kanseri ortotopik aşılama tekniğini göstermektedir. Bu teknik, deri altı veya cerrahi olmayan enjeksiyona kıyasla tümör boyutu ve şeklinde daha az değişkenlik ile yüksek bir tümör oluşumu oranı üretir.

Ortotopik Enjeksiyon: Dokuya Özgü Kanser Hücrelerinin Yetişkin Bir Fareye İmplante Edilmesi

Kanser tümörü çevreleyen dokunun hem de yerel pro- ve anti-inflamatuar aracılar tarafından etkilenir kompleks bir hastalıktır. Bu nedenle, daha çok deri altı modellere göre ortotrop enjeksiyon modelleri, bir şekilde daha iyi taklit eden insan patoloji kanser ilerlemesinin incelemek için yararlı olabilir.

Farelerin Meme Fat Pad içine Meme Kanseri Hücreleri Ortotopik Enjeksiyon Tümör Büyüme Eğitim için.

Ortotopik meme kanseri primer tümör modeli ve primer tümörün cerrahi olarak çıkarılması açıklanan spontan metastaz oluşturmak için fare ömrünü uzatmak için. tümör büyümesi ve ilerlemesi izlenir ve lusiferaz floresan görüntüleme ile ölçülür.

Spontan Meme Kanseri metastaz Ortotopik Fare Modeli

Biz bir fare orthotopic meme kanseri modeli ve radikal mastektomi modeli insan meme kanseri ilerleme taklit etmek için tümör yükünü ölçmek için bioluminescence teknolojisi ile tanıtmak.

Fare Orthotopic metastatik meme kanseri Model oluşturma ve fare radikal mastektomi gerçekleştirme

Burada, biz meme kanseri hücrelerinin basit, daha az invaziv ve ele kolay bir şekilde meme yağ yastığı içine implant için bir protokol mevcut ve bu fare orthotopic meme kanseri model uygun meme yağ yastığı yapısına sahip çeşitli yönlerini incelemek için kullanılabilir kanser.

Fareler meme yağ yastığı içine meme kanser hücrelerinin Orthotopic enjeksiyon

Hasta kaynaklı ksinograft (PDX) modelleri ve nakledilebilir genetik olarak tasarlanmış fare modelleri insan hastalığına sadık kalınarak rekapitulate edilir ve temel ve çevirisel meme kanseri araştırmaları için tercih edilen modellerdir. Burada, tümör biyolojisini incelemek ve ilaç yanıtını değerlendirmek için meme tümörü parçalarını meme yağ yastığına ortotopik olarak nakleden bir yöntem açıklanmaktadır.

Meme Kanseri için Preklinik Modeller Olarak Meme Tümörlerinin Ortopedik Transplantasyonu

Burada, çeşitli meme kanseri hücre hatlarında lusiferaz ve yeşil floresan protein ekspresyonunu içeren noninvaziv bir izleme yöntemini tanımladık. Bu protokol, farelerde tümör oluşumunu ve metastatik kolonizasyonu gerçek zamanlı olarak izlemek için bir teknik sağlar.

Biyolüminesans Kullanarak Farelerde Meme Kanseri Büyümesi ve Metastatik Koloni Oluşumunun İzlenmesi

Bu protokol, ortopik osteosarkom ve pulmoner metastaz lezyonlarını taşıyan fare modelleri oluşturmak için intratibia osteosarkom hücre enjeksiyonunu tanımlamaktadır.

Ortotopik Osteosarkom ve Akciğer Metastazı Fare Modelleri Oluşturmak için İntratibiyal Osteosarkom Hücre Enjeksiyonu

Bu protokol, farelerde meme kanseri hastasından türetilen ksenogreftlerin ortotopik implantasyonu için etkili, cerrahi olmayan bir yöntemi tanımlar. Teknik, enzimatik tümör ayrışmasını ve ardından meme yağ yastıkçıklarına doğrudan enjeksiyonu içerir ve yüksek verimli implantasyonu mümkün kılar. Kapsamlı doğrulama, çeşitli meme kanseri alt tiplerinde titiz çalışmaları kolaylaştırarak model aslına uygunluğunu sağlar.

Meme kanseri hasta kaynaklı ksenogreftlerin yüksek verimli dissosiyasyonu ve ortotopik implantasyonu

Klinik öncesi testlerden insan denemelerine geçiş yapan yeni ilaç hedeflerinin belirlenmesi bilimsel bir önceliktir. Bu amaçla, burada, gen tükenmesinin kanser hücre hattı sferoidleri üzerindeki etkisini incelemek için işlevsel bir genomik yaklaşımı tanımlıyoruz, bu da insan kanserlerini in vivo olarak daha uygun bir şekilde modelliyor.

İşlevsel Genomik Tarama kullanılması Kanser Hücre Sfero Kültürleri Potansiyel Yeni İlaç Hedefleri Belirlemek İçin

Öğrenin, ortotopik meme kanseri modelinde GFP etiketleme ve biyolüminesans görüntüleme ile tümör yükünü değerlendirme yöntemini. Bu protokol, anti-kanser ajanların tedavi etkinliğini analiz etmek için güvenilir bir araç sunar.

Ortotopik Meme Kanseri Modeli Kullanarak Üçlü Negatif Meme Kanseri Eğitimi

Daha fazla video keşfet