In Vitro Establishment of a Genetically Engineered Murine Head and Neck Cancer Cell Line using an Adeno-Associated Virus-Cas9 System

Manu Prasad; Sankar Jagadeeshan; Maurizio Scaltriti; Irit Allon; Moshe Elkabets

doi:10.3791/60410

Adeno-Associated Virus-Cas9 Sistemi Kullanılarak Genetiği Değiştirilmiş Bir Murine Baş ve Boyun K...

JoVE Journal
Cancer Research

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Cancer Research

In Vitro Establishment of a Genetically Engineered Murine Head and Neck Cancer Cell Line using an Adeno-Associated Virus-Cas9 System

Adeno-Associated Virus-Cas9 Sistemi Kullanılarak Genetiği Değiştirilmiş Bir Murine Baş ve Boyun Kanseri Hücre Hattı In Vitro Kurulması

Full Text

8,435 Views

05:45 min

January 9, 2020

DOI: 10.3791/60410-v

Manu Prasad*^1,2, Sankar Jagadeeshan*^1,2, Maurizio Scaltriti³, Irit Allon^2,4, Moshe Elkabets^1,2

¹The Shraga Segal Department of Microbiology, Immunology and Genetics,Ben-Gurion University of the Negev, ²Faculty of Health Sciences,Ben-Gurion University of the Negev, ³Human Oncology & Pathogenesis Program (HOPP),Memorial Sloan Kettering Cancer Center, ⁴Institute of Pathology,Barzilai University Medical Center

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Neoplazi anlayışı için baş ve boyun kanseri hastalarında mutasyona uğramış spesifik genler ile murine modellerinin geliştirilmesi gereklidir. Burada, belirli genomik değişikliklerile murine HNC hücre hatları oluşturmak için adeno-ilişkili bir virüs-Cas9 sistemi kullanarak primer minür dil hücrelerinin in vitro dönüşümü için bir protokol salıyoruz.

Bu protokol, belirli genomik operasyonla baş boyun kanseri modellerinin geliştirilmesini sağladı ve neoplazi sürecinde spesifik gen mutasyonlarının rolünü anlamamızı önemli ölçüde etkiledi. Bu tekniğin en büyük avantajı, hücre hattının hemen hemen her organdan geliştirilme kolaylığıdır. Prosedürü gösteren Manu Prasad benim laboratuvarımdan yüksek lisans öğrencisi olacak.

Altı haftalık erkek veya kadın B6 transgenik fare dil hasat için cerrahi makas kullanarak başlayın. Çok küçük parçalar halinde doku kıyma ve serum olmadan RPMI düz orta 4,5 mililitre içeren 15 mililitrelik tüp içine parçaları toplamak için bir neşter kullanın. Tüpün enzim karışımına 200 mikrolitre üçlü enzim karışımı ekleyin ve tüpün enzimasyonunu geliştirmek için her 10 dakikada bir 30 dakika boyunca numuneyi 37 derecede kuluçkaya yatırın.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos

Explore More Videos

Kanser Araştırma Sayı 155 baş ve boyun kanseri murine kanseri modelleri genomik düzenleme CRISPR adeno ilişkili virüs vektörü in vitro hücre dönüşümü tümör hücre hattı