Name: 3D Hücre Yüklü Pankreas Dokusu Yapıları Baskı için Pankreas Doku Türetilmiş Ekstrasellüler Matrix Bioink (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-12-13T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 55 s
Description: Keşfedin pankreas doku türetilmiş ekstrasellüler matris bioink kullanarak 3D hücre yüklü pankreas yapıları baskı yöntemini. Bu teknik, diyabet tedavisi için transplantasyon uyumlu doku yapıları oluşturur ve hücre canlılığını artırır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu araştırma, Kore hükümeti (MSIT) (2017M3A9C6032067) ve "BİT Eşzamanlılık Yaratıcı Programı" (IITP-2019-1-00783) tarafından finanse edilen Ulusal Araştırma Vakfı'nın (NRF) Biyo ve Tıbbi Teknoloji Geliştirme programı tarafından desteklenmiştir. IITP (Institute for Information & Communications Technology Planning & Evaluation) tarafından denetlenir.

Domuz eti pankreas dokuları yerel bir mezbaha dan toplandı. Hayvan deneyleri Asan Tıp Merkezi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylandı, Seul, Kore.
1. Doku decellularization
<ol><li>Hücre dışılaştırma için çözümler hazırlayın. NOT: Tüm çözelti preparatlarında kullanılan 1x fosfat tamponlu salin (PBS) 10x PBS'ye distile su eklenerek seyreltilir.<ol>
<li>%1 Triton-X 100 çözümü için, 100 mL 100 mL 100 mL 1x PBS 1x 1x 150 rpm'de karıştırma çubuğu kullanarak 100 mL 100 mL çözündür. PBS kullanımdan hemen önce hazırlanır. NOT: %10 Triton-X 100 çözeltisi ihtiyaç duyulana kadar oda sıcaklığında saklanabilir.</li>
		<li>%0,1 perasetik asit çözeltisi için, 8,5 mL perasetik asitten %4,7'lik perasetik asidi 22,8 mL'lik 70 mL etanol ve 368,7 mL distile su kullanmadan hemen önce seyreltin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Pankreasın periferik dokuları çıkarın ve decellularization önce doku dilim.<ol>
<li>Rezeke domuz pankreasını akan musluk suyuyla yıkayın ve sterilize makas kullanarak periferik dokuları çıkarın.</li>
		<li>Forseps ile plastik bir torbaya pankreas aktarın ve bir sonraki adım için etkili bir şekilde pankreas kesmeye yardımcı olmak için 1 saat için -80 °C dondurun.</li>
		<li>Dondurulmuş pankreası bir rende kullanarak 1 mm kalınlığında parçalar halinde dilimleyin.</li>
		<li>Dilimlenmiş dokunun 50 g'ını 500 mL plastik bir kap içine aktarın. NOT: Burada, dokuları kontaminasyondan korumak ve çözelti buharlaşmasını önlemek için kapaklı plastik bir kap önerilir.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Reaktiflerle tedavi. NOT: Tüm hücre dışılaştırma işlemi 150 rpm'de dijital orbital shaker üzerinde 4 °C'de yapılmalıdır. Tüm decellularization adımlarda, fiziksel müfreze kullanarak forceps birlikte yapışmasını pankreas dilimleri önlemek için gereklidir. Konteynerin distile su ile yıkanması, artık reaktiflerin tamamen kapta çıkarılması için gereklidir.<ol>
<li>Herhangi bir reaktif işlemeden önce, bir shaker kullanarak distile su 300 mL ile dilimlenmiş pankreas 50 g yıkayın.</li>
		<li>Bulutlu su kaybolana kadar (yaklaşık 12 saat sonra) 150 rpm sürekli doku karıştırın. Damıtılmış suyu her 2 saatte bir değiştirin. NOT: Bulutlu suyun daha hızlı temizlenmesi için her saat demıtılmış suyun değiştirilmesi tavsiye edilir.</li>
		<li>Suyu atın ve 50 g mendilin 400 mL'si ile 1x PBS çözeltisinde %1 Triton-X 100 ile 84 saat boyunca çözeltiyi yenileyin. NOT: Bu noktada, hücresel bileşenler çıkarılmaya başladığından doku miktarı azalır.</li>
		<li>Pankreastan kalan yağ kaldırmak için 2 saat için isopropanol 400 mL ile tedavi edin . NOT: Bu süreçte yağ ın alınması nedeniyle dokunun sertleşmesi normaldir.</li>
		<li>2 saat sonra IPA'yı çıkarın ve 24 saat boyunca 400 mL 1x PBS ile dokuyı yıkayın.</li>
		<li>Hücredışı dokuyu sterilize etmek için önceki çözeltiyi atın ve 400 mL%0.1 perasetik asit ile 2 saat boyunca %4 etanolde tedavi edin.</li>
		<li>Artık deterjanı çıkarmak için, 6 saat boyunca 400 mL 1x PBS ile dokuyu yıkayın.</li>
		<li>Dejeneratize edilmiş dokuları 50 mL'lik konik bir tüpte forceps ile toplayın.</li>
		<li>Numuneyi -80 °C'de 1 saat boyunca dondurun. Konik tüpü kapak yerine tüy bırakmayan bir mendille kapatın ve verimli bir şekilde linofizasyon için bir lastik bantla düzeltin.</li>
		<li>-50 °C'de 4 d için hücreli dokuyu lyophilize. NOT: 1.3. adım için, hücre dışı olmayan doku1 g de aynı koşullar altında dondurularak kurutulmalıdır.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. Hücre dışı dokuların değerlendirilmesi
NOT: DsDNA, glikozaminoglikan (GAGs) ve kollajen in decellularized doku doğal doku ile karşılaştırıldığında kalıntı miktarını değerlendirmek için, dejeneratif olmayan doku (yerli doku) ve desellüler doku her biri en az 1 g gereklidir bir değerlendirme toplu. DSDNA, GAGs ve kollajen miktarı dokunun kuru ağırlığına göre hesaplanabilir.
<ol><li>Biyokimyasal tahliller için çözümler hazırlayın.<ol>
<li>Örnek sindirim için papain çözeltisi hazırlayın. NOT: Yapılacak arabellek miktarı örnek sayısına göre ayarlanabilir.<ol>
<li>Çözün 119 mg 0.1 M sodyum fosfat (monobazik), 18.6 mg 0.5 mM Na2-EDTA, ve 8.8 mg 5 mM sistein-HCl 10 mL otoklavlı su.</li>
			<li>10 M NaOH çözeltisi ekleyerek çözeltinin pH'ını 6,5'e ayarlayın.</li>
			<li>Yukarıdaki çözeltiye ve girdaba 125 mg/mL papain stok çözeltisi ekleyerek her bir elementin eşit şekilde karışmasını bekleyin.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Dimetil-metilen mavisi (DMMB) teşbibi için çözümler hazırlayın.<ol>
<li>DMMB boya yapmak için, 1,9-dimethyl-metilen mavi çinko klorür çift tuz 8 mg çözünür, glisin 1.52 g, ve NaCl 1.185 g 500 otoklavlı su mL. Tezgah üstü pH metre kullanarak pH değişimini ölçerken 0,5 M HCl çözeltisi ekleyerek pH'ı 3'e ayarlayın. Ardından, bunu 500 mL'lik şişe üstü vakum filtresine filtreleyin.</li>
			<li>15 μL 10 mg/mL kondroitin sülfat Standart için bir çözelti yapın.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Hidroksiproline titretisi için çözümler hazırlayın.<ol>
<li>Kloramin çalışma çözeltisi için, 2,4 g sodyum asetat, 1 g sitrik asit ve 0,68 g sodyum hidroksiti 24 mL distile suda çözün ve 240 μL buzul asetik asit, 10 μL toluen ve 6 mL IPA ekleyin. NOT: Girdap mikseri kullanarak tüm tozları çözelti halinde çözün. Kloramin çalışma çözeltisi 4 °C'de üç aya kadar saklanabilir.</li>
			<li>Kloramin T çözeltisi için, 0,35 g kloramin T'yi 20 mL kloramin çalışma çözeltisinde çözünve 2,5 mL IPA ekleyin. Girdap tüm bileşenleri karıştırmak için. NOT: Kullanmadan hemen önce hazırlayın.</li>
			<li>P-DAB çözeltisi için, 6,5 mL perklorik asit ve 15 mL IPA içine 3,75 g P-DAB koyun; alüminyum folyo sarın. NOT: Kullanmadan hemen önce hazırlayın.</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
	<li>1.5 mL mikrosantrifüj tüp ve daha iyi örnek sindirmek için tüp girdap lyophilized doku 10 mg papain çözeltisi 1 mL ekleyin.</li>
	<li>1,5 mL mikrosentrifüj tüpünü kauçuk bir rafa yerleştirin ve numuneleri 60 °C'de 16 saat boyunca 300 mL su içeren 500 mL'lik bir kabın içine sindirin.</li>
	<li>20 dk için 9.500 x g santrifüj, supernatant toplamak ve yeni bir tüp içine aktarın.</li>
	<li>Hücreleşmiş dokudaki artık DNA ve ana proteinleri ölçün.<ol>
<li>Sindirilmiş numunenin 1 μL'sini spektrometreye yükleyin ve üreticinin talimatlarına göre dsDNA miktarını ölçün. NOT: Deneyci, numuneyi kirletmemek için saçlarını arkaya bağlamalı ve maske takmalıdır.</li>
	</ol></li>
	<li>Hücredışı dokuda kalan GAG miktarını ölçmek için bir DMMB testi gerçekleştirin.<ol>
<li>Standartları yapmak için 1 μL kondroitin sülfat A çözeltisi ve 499 μL 1x PBS'yi karıştırın. Kondroitin sülfatı seyreltin 0, 4, 8, 12, 16 ve 20 μg/mL konsantrasyonlarda distile su ile bir çözelti.</li>
		<li>Standart ve sindirilmiş numunelerin her konsantrasyonunun 50°L'lik kısmını 96 kuyulu bir tabağa yükleyin.</li>
		<li>Çok kanallı pipet kullanarak her kuyuya 200 μL DMMB boya ekleyin.</li>
		<li>Hemen bir mikroplaka okuyucu üzerinde 525 nm de emici okuyun.</li>
	</ol></li>
	<li>Kollajen miktarını ölçmek için bir hidroksiproline testi gerçekleştirin.<ol>
<li>Hidroksiprolin testini yapmak için, 120 °C'de 16 saat boyunca eşit hcl hacimlerde 250 μL sindirilmiş numuneyi kuluçkaya yatırın.</li>
		<li>Numuneleri soğutmak için oda sıcaklığındaki artıkları 3 saat kurulayın ve numuneleri 1 mL 1x PBS'de yeniden çözün.</li>
		<li>4 °C'de 10 dk için 2.400 x g santrifüj.</li>
		<li>Standart olarak 100 μg/mL hidroksiprolin çözeltisi hazırlayın.</li>
		<li>Standart bir çözelti için 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 8, 10, 15, 20, 30 μg/mL konsantrasyonda distile suile hidroksiprolin çözeltisi.</li>
		<li>50 μL numune ve standart çözeltinin üçe trilycatelerini 96 kuyulu bir tabağa yükleyin.</li>
		<li>50 μL Kloramin T çözeltisi ekleyin ve oda sıcaklığında 20 dakika kuluçkaya yatırın.</li>
		<li>50 μL p-DAB çözeltisi ekleyin ve 60 °C'de 30 dakika kuluçkaya yatırın. NOT: Aliquot karanlık bir odada. Eklemeden sonra, alüminyum folyo ile plaka sarın.</li>
		<li>30 dakika oda sıcaklığında kuluçka.</li>
		<li>Soğuduktan sonra, bir mikroplaka okuyucu üzerinde 540 nm emici ölçün.</li>
	</ol></li>
</ol>3. Bioink hazırlama
NOT: pdECM tozu -80 °C'de en az bir yıl saklanabilir. pH ayarı yapılmadan önce sindirilmiş pdECM çözeltisi -20 °C'de bir ay saklanabilir. Kullanmadan önce, dondurulmuş pdECM çözeltisi örneğini bir gecede 4 °C'de eritin. PH ayarlı pdECM çözeltisi 4 °C'de bir haftaya kadar saklanabilir. Sindirilmiş pdECM çözeltisi en az birkaç gün 4 °C'de saklanabilir ancak 1 haftayı geçmemelidir.
<ol><li>Pepsin ile dondurulmuş pdECM sindirin.<ol>
<li>Bioink etkili sindirim için, bir harç ve havaneli kullanarak sıvı azot ile lyophilized pdECM pulverize.</li>
		<li>50 mL konik tüpte pdECM tozunun 200 mg'ını toplayın ve pepsin'in 20 mg'ını ve 0,5 M asetik asitin 8,4 mL'sini ekleyin (son konsantrasyon 2 w/v%).</li>
		<li>Manyetik karıştırma çubuğunu 50 mL konik tüpe yerleştirin ve 300 rpm'de 96 saat karıştırın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Sindirilmiş pdECM çözeltisinin pH'ını ayarlayın. NOT: PH ayarı öncesi jelleşmeyi önlemek için bu işlem buz üzerinde yapılmalıdır.<ol>
<li>Parçaların optimum sindirimini elde etmek için buz üzerinde pozitif yer değiştirme pipeti kullanarak 40 μm hücreli süzgeç kullanarak pdECM çözeltisindeki sindirilmemiş parçacıkları filtreleyin.</li>
		<li>NaOH kullanmadan önce 10x PBS ve girdap 1 mL ekleyin.</li>
		<li>pH gösterge şeritleri ile pH kontrol 10 M NaOH ile 7 pH ayarlayın. NOT: Girdap her zaman NaOH eklenir böylece bioink iyice diğer reaktifler ile karıştırılır.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. Reolojik analiz
<ol><li>Deneysel kurulum<ol>
<li>Reolojik özellikleri değerlendirmek için pdECM bioink%1.5 (w/v) hazırlayın.</li>
		<li>Bir reometrenin hız kontrollü modunda 20 mm koni plaka geometrisi (2° açı ile 20 mm koni çapı) kurutucu modunu kurun.</li>
		<li>PDECM bioink viskozite, jelleşme kinetik ve dinamik modülü ölçmek için yüklü yazılım (TRIOS) deneysel dizileri oluşturun.<ol>
<li>Viskozite: pdECM bioink'i plakaya yerleştirin. PDECM bioink'in karmaşık viskozitesini (Pa·s) 1ila 1.000 s-1'e kadar artan bir kesme hızı altında 15 °C sabit sıcaklıkta ölçün.</li>
			<li>Jelasyon kinetiği: pdECM bioink'i plakaya yerleştirin. PDECM bioink'in depolama ve kayıp modüllerini 4-37 °C'de 5 °C/dk (zaman süpürme modu) artımlı artış hızıyla ölçerek karmaşık modülü (G*) hesaplayın.</li>
			<li>Dinamik modül: PdECM bioink'i ölçümden önce 60 dk boyunca 37 °C'de plakaüzerine yerleştirin. PdECM bioink'in frekansa bağlı depolama modülünü (G') ve kayıp modülünü (G'') 0,1-100 rad/s aralığında %2 gerilme de ölçün.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. Pankreas dokusunun 3D hücre baskı adacık kullanılarak inşa eder
<ol><li>İzole adacıkların hazırlanması<ol>
<li>Bir önceki çalışmada açıklanan protokollere göre birincil adacıkları bir sıçandan yalıtmak5.</li>
		<li>Yalıtılmış isletten enkaz ve ölü hücreleri ayırmak için hücre süspansiyonundan 70 μm'lik bir süzgeçten geçirin. Çapı 70 μm'den küçük olan adacıklar ölü veya anormal olarak kabul edilir.</li>
		<li>RPMI-1640 orta izole adacıklar askıya ve petri kabına yerleştirin. Biyogüvenlik kabininde mikroskop (4x objektif lens) altında P200 hacimli pipet kullanarak çapı 300 μm'den büyük adacıkları çıkarın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>pdECM bioink içine adacık kapsülleme<ol>
<li>pH ayarlı pdECM bioink ve izole adacık hazırlayın. NOT: pH ayarı yapılmadan önce jelleşmeyi önlemek için bu işlem buz üzerinde yapılmalıdır.</li>
		<li>PdECM bioink'i ve askıya alınan ortamı adacıklarla (oran 3:1) pozitif bir deplasman pipeti kullanarak tek düze karıştırılıncaya kadar hafifçe karıştırın. NOT: PDECM bioink son konsantrasyonu 1.5% ve pdECM bioink hücre yoğunluğu 3.000 IEQ / mL olduğunu.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Pankreas dokusu nun 3Boyutlu hücre baskısı yapır<ol>
<li>Sterilize şırınga ve 22 G nozul hazırlayın. NOT: Bu gösterge, çapı 100-250 m olan adacıkların basımı için seçilmiştir.</li>
		<li>Şırıngaya adacık yüklü pdECM bioink yükleyin.</li>
		<li>Bioink'i en iyi baskı durumuna göre (besleme hızı: 150 mm/dak; pnömatik basınç: 15 kPa) 18 °C'de kafes şeklinde yazdırın.</li>
		<li>Bioink çapraz bağlantı için, 30 dakika için kuvöz baskılı yapı yerleştirin.</li>
		<li>RPMI-1640 orta% 10 fetal sığır serumu (FBS), 100 U / mL penisilin ve 100 U/ mL streptomisin ile birlikte olan adacık kültür medya içine basılı yapı batırın.</li>
	</ol>
</li>
</ol>6. Desenli yapı ile pankreas yapı3D hücre baskı
<ol><li>Bioink iki tip hazırlanması<ol>
<li>Birden fazla bioink kullanarak baskı çok yönlülüğünü doğrulamak için, pdECM bioinks iki set hazırlamak ve her pdECM bioink içine% 0.4 Trypan Blue ve Rose Bengal çözeltisi ekleyerek onları leke 1:20, sırasıyla. NOT: pH ayarı yapılmadan önce jelleşmeyi önlemek için bu işlem buz üzerinde yapılmalıdır.</li>
		<li>PdECM bioink'i ve askıya alınan ortamı adacıklarla (oran 3:1) pozitif bir deplasman pipeti kullanarak tek düze karıştırılıncaya kadar hafifçe karıştırın. NOT: PDECM bioink son konsantrasyonu 1.5% ve pdECM bioink hücre yoğunluğu 3.000 IEQ / mL olduğunu.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Çok malzeme tabanlı pankreas dokusu nun 3Boyutlu hücre baskısı yapır<ol>
<li>Sterilşine şırıngalar ve 25 G nozul hazırlayın.</li>
		<li>Her bioink (mavi ve kırmızı) iki farklı şırınga, sırasıyla yük.</li>
		<li>Bioink'i optimize baskı durumuna (besleme hızı: 150 mm/dak; pnömatik basınç: 15 kPa) 18 °C'de mavi ve kırmızı dan oluşan alternatif çizgilere sahip bir kafes şeklinde yazdırın.</li>
		<li>Bioink çapraz bağlantı için, 30 dakika için kuvöz baskılı yapı yerleştirin.</li>
		<li>RPMI-1640 orta% 10 fetal sığır serumu (FBS), 100 U / mL penisilin ve 100 U/ mL streptomisin ile birlikte olan adacık kültür medya içine basılı yapı batırın.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Shapiro, A. J., Pokrywczynska, M., Ricordi, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+pancreatic+islet+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Clinical pancreatic islet transplantation.</a> Nature Reviews Endocrinology. 13 (5), 268(2017).</li>
<li>Venturini, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Technique%2C+complications%2C+and+therapeutic+efficacy+of+percutaneous+transplantation+of+human+pancreatic+islet+cells+in+type+1+diabetes%3A+the+role+of+US%5BTitle%5D)+AND+%22Radiology%22%5BJournal%5D)">Technique, complications, and therapeutic efficacy of percutaneous transplantation of human pancreatic islet cells in type 1 diabetes: the role of US.</a> Radiology. 234 (2), 617-624 (2005).</li>
<li>Xie, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytoprotection+of+PEG-modified+adult+porcine+pancreatic+islets+for+improved+xenotransplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Cytoprotection of PEG-modified adult porcine pancreatic islets for improved xenotransplantation.</a> Biomaterials. 26 (4), 403-412 (2005).</li>
<li>Sackett, S. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+matrix+scaffold+and+hydrogel+derived+from+decellularized+and+delipidized+human+pancreas%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Extracellular matrix scaffold and hydrogel derived from decellularized and delipidized human pancreas.</a> Scientific Reports. 8 (1), 10452(2018).</li>
<li>Kim, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((3D+cell+printing+of+islet-laden+pancreatic+tissue-derived+extracellular+matrix+bioink+constructs+for+enhancing+pancreatic+functions%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Materials+Chemistry+B%22%5BJournal%5D)">3D cell printing of islet-laden pancreatic tissue-derived extracellular matrix bioink constructs for enhancing pancreatic functions.</a> Journal of Materials Chemistry B. 7 (10), 1773-1781 (2019).</li>
<li>Yi, H. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+bioprinted+human-glioblastoma-on-a-chip+for+the+identification+of+patient-specific+responses+to+chemoradiotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Biomedical+Engineering%22%5BJournal%5D)">A bioprinted human-glioblastoma-on-a-chip for the identification of patient-specific responses to chemoradiotherapy.</a> Nature Biomedical Engineering. 1, (2019).</li>
<li>Das, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decellularized+extracellular+matrix+bioinks+and+the+external+stimuli+to+enhance+cardiac+tissue+development+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomaterialia%22%5BJournal%5D)">Decellularized extracellular matrix bioinks and the external stimuli to enhance cardiac tissue development in vitro.</a> Acta Biomaterialia. , (2019).</li>
<li>Kim, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Shear-induced+alignment+of+collagen+fibrils+using+3D+cell+printing+for+corneal+stroma+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Biofabrication%22%5BJournal%5D)">Shear-induced alignment of collagen fibrils using 3D cell printing for corneal stroma tissue engineering.</a> Biofabrication. 11 (3), 035017(2019).</li>
<li>Huang, H. H., Ramachandran, K., Stehno-Bittel, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+replacement+for+islet+equivalents+with+improved+reliability+and+validity%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Diabetologica%22%5BJournal%5D)">A replacement for islet equivalents with improved reliability and validity.</a> Acta Diabetologica. 50 (5), 687-696 (2013).</li>
<li>Pati, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Printing+three-dimensional+tissue+analogues+with+decellularized+extracellular+matrix+bioink%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Printing three-dimensional tissue analogues with decellularized extracellular matrix bioink.</a> Nature Communications. 5, 3935(2014).</li>
<li>Hussey, G. S., Dziki, J. L., Badylak, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+matrix-based+materials+for+regenerative+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Materials%22%5BJournal%5D)">Extracellular matrix-based materials for regenerative medicine.</a> Nature Reviews Materials. 1, (2018).</li>
<li>Kim, B. S., Kim, H., Gao, G., Jang, J., Cho, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decellularized+extracellular+matrix%3A+a+step+towards+the+next+generation+source+for+bioink+manufacturing%5BTitle%5D)+AND+%22Biofabrication%22%5BJournal%5D)">Decellularized extracellular matrix: a step towards the next generation source for bioink manufacturing.</a> Biofabrication. 9 (3), 034104(2017).</li>
<li>Gaetani, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+different+decellularization+protocols+on+the+generation+of+pancreas-derived+hydrogels%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering+Part+C%3A+Methods%22%5BJournal%5D)">Evaluation of different decellularization protocols on the generation of pancreas-derived hydrogels.</a> Tissue Engineering Part C: Methods. 24 (12), 697-708 (2018).</li>
<li>Gao, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+engineered+bio-blood-vessels+constructed+using+a+tissue-specific+bioink+and+3D+coaxial+cell+printing+technique%3A+a+novel+therapy+for+ischemic+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Functional+Materials%22%5BJournal%5D)">Tissue engineered bio-blood-vessels constructed using a tissue-specific bioink and 3D coaxial cell printing technique: a novel therapy for ischemic disease.</a> Advanced Functional Materials. 27 (33), 1700798(2017).</li>
<li>La, W. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemically+replicated+organic+and+inorganic+bony+microenvironment+for+new+bone+formation+generated+by+a+3D+printing+technology%5BTitle%5D)+AND+%22RSC+Advances%22%5BJournal%5D)">Systemically replicated organic and inorganic bony microenvironment for new bone formation generated by a 3D printing technology.</a> RSC Advances. 6 (14), 11546-11553 (2016).</li>
<li>Lee, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+liver+decellularized+extracellular+matrix+bioink+for+three-dimensional+cell+printing-based+liver+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Biomacromolecules%22%5BJournal%5D)">Development of liver decellularized extracellular matrix bioink for three-dimensional cell printing-based liver tissue engineering.</a> Biomacromolecules. 18 (4), 1229-1237 (2017).</li>
<li>Choudhury, D., Tun, H. W., Wang, T., Naing, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organ-derived+decellularized+extracellular+matrix%3A+a+game+changer+for+bioink+manufacturing%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Organ-derived decellularized extracellular matrix: a game changer for bioink manufacturing?</a> Trends in Biotechnology. 36 (8), 787-805 (2018).</li>
<li>Kurpios, N. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+direction+of+gut+looping+is+established+by+changes+in+the+extracellular+matrix+and+in+cell%3A+cell+adhesion%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">The direction of gut looping is established by changes in the extracellular matrix and in cell: cell adhesion.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 105 (25), 8499-8506 (2008).</li>
<li>Sakai, T., Larsen, M., Yamada, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibronectin+requirement+in+branching+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Fibronectin requirement in branching morphogenesis.</a> Nature. 423 (6942), 876(2003).</li>
</ol>

Bu protokol, pdECM bioinks gelişimi ve 3D hücre baskı teknikleri kullanılarak 3D pankreas dokusu yapıları imalatı açıklanmıştır. 3D mühendislik doku yapısında hedef dokunun mikro ortamını özetlemek için bioink seçimi çok önemlidir. Bir önceki çalışmada, dokuya özgü dECM bioinks kök hücre farklılaşması ve çoğalması teşvik etmek için yararlı olduğunu doğruladı10. Sentetik polimerler ile karşılaştırıldığında, dECM dokuya özgü kompozisyon ve mimarisi nedeniyle hücre açısından elverişli bir ortam olara...

Son zamanlarda, pankreas adacık nakli tip 1 diyabetli hastalar için umut verici bir tedavi olarak kabul edilmiştir. Göreceli güvenlik ve prosedürün minimal invazivlik bu tedavinin büyük avantajları vardır1. Ancak, izole adacıkların düşük başarı oranı ve immünsupresif ilaçların yan etkileri gibi çeşitli sınırlamalar vardır. Ayrıca, engrafted adacık ların sayısı sürekli olarak ekim sonrası düşmancaçevre2 nedeniyle azalır. Bu zorlukların üstesinden gelmek için pankreas adacık transplantasyonuna aljinat, kollajen, poli (laktik-koglikolik asit) (PLGA) veya polietilen glikol (PEG) gibi çeşitli biyouyumlu malzemeler uygulanmıştır.
3D hücre baskı teknolojisi, büyük potansiyeli ve yüksek performansı nedeniyle doku mühendisliğinde gelişmektedir. Söylemeye gerek yok, bioinks uygun bir mikroortam sağlamak ve basılı doku yapıları hücresel süreçlerin iyileştirilmesi sağlayan önemli bileşenleri olarak bilinir. Fibrin, aljinat ve kollajen gibi makas inceltme hidrojelleri önemli sayıda yaygın bioinks olarak kullanılır. Ancak, bu malzemeler in doğal dokuda ekstrasellüler matris (ECM) ile karşılaştırıldığında yapısal, kimyasal, biyolojik ve mekanik karmaşıklık eksikliği göstermektedir3. Adacıklar ve ECM arasındaki etkileşimler gibi mikroçevresel ipuçları adacıkların işlevini artırmak için önemli sinyallerdir. Hücreli ECM (dECM) kollajen, glikozaminoglikanlar (GAGs) ve glikoproteinler de dahil olmak üzere çeşitli ECM bileşenlerinin dokuya özgü bileşimini yeniden oluşturabilir. Örneğin, periferik AK'larını koruyan birincil adacıklar (örneğin, tip I, III, IV, V ve VI kollajen, laminin ve fibronektin) düşük apoptoz ve daha iyi insülin hassasiyeti sergilerler, böylece dokuya özgü hücre-matriks etkileşimlerinin orijinal doku4'ebenzer şekilde çalışma yeteneklerini artırmak için önemli olduğunu gösterirler.
Bu yazıda, pankreas adacıklarının aktivitesini ve işlevlerini artırmak için yararlı mikroçevresel ipuçları sağlamak için pankreas dokusu kaynaklı hücre dışı matriks (pdECM) bioink hazırlanması için protokolleri açıklamak, bir mikroeksistasyon tabanlı biyobaskı tekniği kullanarak 3D pankreas dokusu yapıları oluşturmak için süreçler takip(Şekil 1).

<table><tbody><tr><td>Biyolojik Güvenlik Kabinleri</td><td>CRYSTE</td><td>PURICUBE 1200</td><td></td></tr><tr><td>Derin Dondurucu</td><td>Thermo Scientific Forma</td><td>957</td><td></td></tr><tr><td>Dijital orbital çalkalayıcı</td><td>DAIHAN Scientific</td><td>DH. </td><td></td>WSO04010</tr><tr><td>Kuru fırın</td><td>DAIHAN Scientific</td><td>WON-155</td><td></td></tr><tr><td>Dondurarak kurutucu</td><td>LABCONCO</td><td>7670540</td><td></td></tr><tr><td>Buzdolabı</td><td>SANSUNG</td><td>CRFD-1141</td><td></td></tr><tr><td>Rende</td><td>ABM</td><td>1415605793</td><td></td></tr><tr><td>Ters Mikroskoplar</td><td>Leica</td><td>DMi1</td><td></td></tr><tr><td>Mikrosantrifüj</td><td>CRYSTE</td><td>PURISPIN 17R</td><td></td></tr><tr><td>Mikroplaka okuyucu</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Multiskan GO</td><td></td></tr><tr><td>Mini santrifüj</td><td>DAIHAN Scientific</td><td>CF-5</td><td></td></tr><tr><td>Çoklu Ocak Gözü Karıştırıcılar</td><td>DAIHAN Scientific</td><td>SMHS-6</td><td></td></tr><tr><td>Nanodrop</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>ND-LITE-PR</td><td></td></tr><tr><td>pH tezgah üstü ölçüm cihazı</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>STARA2110</td><td></td></tr><tr><td>Reometre</td><td>TA Enstrüman</td><td>Keşfi HR-2</td><td></td></tr><tr><td>Vorteks Karıştırıcı</td><td>DAIHAN Scientific</td><td>VM-10</td><td></td></tr><tr><td><güçlü>Siurjik Aletler</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>İşletme Makası</td><td>Hirose</td><td>HC.13-122</td><td></td></tr><tr><td>Forcep</td><td>Kore Ace Scientific</td><td>HC.203-30<</td><td></td></tr><tr><td>güçlü>Malzemeler</güçlü> </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1.7 mL mikrosantrifüj tüpü</td><td>Axygen</td><td>MCT-175-C</td><td></td></tr><tr><td>10 ml cam şişe</td><td>Scilab</td><td>SL. VI1243</td><td></td></tr><tr><td>40 ve mikro; m hücreli süzgeç</td><td>Falcon</td><td>352340</td><td></td></tr><tr><td>5 L beher</td><td>Dong Sung Science</td><td>SDS 2400</td><td></td></tr><tr><td>50 mL kornik tüp</td><td>Falcon</td><td>352070</td><td></td></tr><tr><td>500 mL beher</td><td>Kore Ace Scientific</td><td>KA.23-08</td><td></td></tr><tr><td>500 mL şişe üstü vakum filtresi</td><td>Corning</td><td>431118</td><td></td></tr><tr><td>500 mL plastik kap</td><td>KİLİT& KİLİT</td><td>INL301</td><td></td></tr><tr><td>96kuyu plakası</td><td>Falcon</td><td>353072</td><td></td></tr><tr><td>Alüminyum folyo</td><td>DAEKYO</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kimwipe</td><td>Kimtech</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Manyetik çubuk</td><td>Kore Ace Scientific</td><td>BA.37110-0003</td><td></td></tr><tr><td>Harç ve havaneli</td><td>DAIHAN Scientific</td><td>SC. MG100</td><td></td></tr><tr><td>Çok kanallı pipetleyici</td><td>Eppendorf</td><td>4982000314</td><td></td></tr><tr><td>Petri Kabı</td><td>SPL</td><td>10100</td><td></td></tr><tr><td>pH indikatör şeritleri</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1095350001</td><td></td></tr><tr><td>Elek filtre ağı</td><td>DAIHAN Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Decellularization</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>10x pbs</td><td>Hyclone</td><td>SH30258.01</td><td></td></tr><tr><td>%4.7 Perasetik asit</td><td>Omegafarm</td><td></td><td></td></tr><tr><td>%70 etanol</td><td>SAMCHUN KİMYASALLARI</td><td>E0220 SAM</td><td></td></tr><tr><td>Damıtılmış su</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>IPA</td><td>SAMCHUN KİMYASALLARI</td><td>samchun I0348</td><td></td></tr><tr><td>Triton-X 100</td><td>Biosesang</td><td>T1020</td><td></td></tr><tr><td><güçlü>Biyokimyasal tahlil</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1,9-Dimetil-Metilen Mavisi çinko klorür çift tuz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>341088</td><td></td></tr><tr><td>10 N NaOH</td><td>Biosesang</td><td>S2018</td><td></td></tr><tr><td>Kloramin T</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>857319</td><td></td></tr><tr><td>Kondroitin sülfat A</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C4384</td><td></td></tr><tr><td>Sitrik asit</td><td>Supelco</td><td>46933</td><td></td></tr><tr><td>Sistein-HCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C1276</td><td></td></tr><tr><td>Buzlu asetik asit</td><td>Merok</td><td>100063</td><td></td></tr><tr><td>Glisin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>410225</td><td></td></tr><tr><td>HCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H1758</td><td></td></tr><tr><td>Na2-EDTA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E5134</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>SAMCHUN KİMYASALLARI</td><td>S2097</td><td></td></tr><tr><td>Papain</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>p4762</td><td></td></tr><tr><td>P-DAB</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D2004</td><td></td></tr><tr><td>Perklorik asit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>311421</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum asetat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S5636</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum hidroksit</td><td>Supelco</td><td>SX0607N</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum fosfat (monobazik)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>RDD007</td><td></td></tr><tr><td>Toluen</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>244511</td><td></td></tr><tr><td><güçlü>biyomürekkep< / güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Chariterized FBS</td><td>Hyclone</td><td>SH30084.03</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin-Streptomisin</td><td>Thermo Fisher Bilimsel</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>Pepsin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P7215</td><td></td></tr><tr><td>Gül bengal</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>198250</td><td></td></tr><tr><td>RPMI-1640 orta Thermo</td><td>Fisher Scientific</td><td>11875093</td><td></td></tr><tr><td>Tripan Mavisi çözeltisi</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8154</td><td></td></tr></tbody></table>

3d hücre yüklü pankreas dokusu yapıları baskı için pankreas doku türetilmiş ekstrasellüler matrix bioink

Pancreatic Tissue-Derived Extracellular Matrix Bioink for Printing 3D Cell-Laden Pancreatic Tissue Constructs

Pankreas adacıklarının nakli hipoglisemi ve sekonder komplikasyonlar eşliğinde tip 1 diyabet muzdarip hastalar için umut verici bir tedaviyöntemidir. Ancak, adacık nakli nin kötü adacık engraftment ve düşmanca ortamlar nedeniyle nakledilen adacıkların düşük canlılığı gibi çeşitli sınırlamalar hala vardır. Buna ek olarak, insan pluripotent kök hücrelerinden farklı insülin üreten hücreler kan şekeri seviyesini düzenleyen yeterli hormonsssalgılamak için sınırlı yeteneği var; bu nedenle, uygun mikroçevresel ipuçları ile hücreleri kültürleme tarafından olgunlaşma iyileştirilmesi kuvvetle gereklidir. Bu makalede, pankreas adacıklarının glikoz duyarlılığını artırabilecek yararlı bir mikroortam sağlamak için pankreas dokusu ndan elde edilen hücre dışı matriks (pdECM) biyoink hazırlanması için protokolleri açıklar, ardından 3D pankreas dokusu oluşturma süreçleri mikroekstrüzyon tabanlı biyobaskı tekniği kullanılarak oluşturur.

Pankreas dokularının hücredışılaştırılması 3Boyutlu biyobaskılı doku yapısında adacıkların işlevselliğini artırmak için pankreas dokusuna özgü mikroortamlar sağlamak için pdECM bioink hazırlama sürecini geliştirdik(Şekil 2A). <p class="jove_content" fo:keep-together.wit...

Hücre dışı matriks (dECM) tasarlanmış bir yapıda hedef dokuların doğal işlevlerini yeniden özetlemek için uygun mikroçevresel ipuçları sağlayabilir. Bu makalede pankreas dokusunun desellülsizasyonu için protokoller açıklanmıştır, pankreas dokusu kaynaklı dECM bioink decm dECM değerlendirilmesi, ve 3D pankreas dokusu üretimi bir biyobaskı tekniği kullanılarak inşa eder.

3D Hücre Yüklü Pankreas Dokusu Yapıları Baskı için Pankreas Doku Türetilmiş Ekstrasellüler Matrix Bioink

The transplantation of pancreatic islets is a promising treatment for patients who suffer from type 1 diabetes accompanied by hypoglycemia and secondary ...

pdECM bioink dokuya özgü bileşenleri ve mimarisi kullanarak pankreas adacıkları için yararlı bir mikroortam sağlayabilir ve hücre ölümlerini azaltmak ve yazdırılabilirliğini artırmak optimal nörolojik özelliklere sahiptir. Bu tekniğin ana avantajı dokuya özgü kompozisyon 3D pankreas doku yapıları ve kapsüllü adacıklar arasında yapıcı bir crosstalk teşvik pdECM bioink içinde korunabilir olmasıdır. pdECM bioink adacık kapsülleme gelişimi tip bir diyabet tedavisi için transplante edilebilir pankreas dokusu yapılması için uygulanabilir.Bu bioink nakledilebilir yapılar yanı sıra diyabet, diyabete bağlı komplikasyonlar ve pankreas kanseri için in vitro doku modellerinin uygulanmasını genişletmek için kullanılabilir. Dondurulmuş domuz pankreas doku örneğinin hücreden arındırılması için, bir milimetre kalınlığında parçalar halinde dondurulmuş pankreas dilim ve 500 mililitrelik plastik konteyner içine dilimlenmiş doku 50 gram aktarmak için bir rende kullanın. Yaklaşık 12 saat boyunca dakikada 150 rotasyonlarda dijital orbital shaker üzerinde dört santigrat derece distile su 300 mililitre ile doku yıkayın.Ne zaman bulutlu su kaybolur, 84 saat boyunca PBS% 1 Triton-X 100 400 mililitre ile su değiştirin. Deterjan tedavisinin sonunda, pankreastan kalan yağ kaldırmak için iki saat boyunca izopropanol 400 mililitre ile doku kuluçka, PBS 400 mililitre 24 saatlik yıkama takip. Yıkamasonunda, 400 mililitre %0,1 perasetik asitle 400 mililitre lik perasetik asitle iki saat boyunca, numuneyi 400 mililitre taze PBS ile yıkamadan önce altı saat boyunca sterilize edin.Yıkamanın sonunda, doku parçalarını 50 mililitrelik konik bir tüpe aktarmak için forseps kullanın ve numuneyi eksi 80 derecede bir saat boyunca yeniden dondurun. Daha sonra konik tüpü kauçuk bantla sabitlenmiş tüy bırakmayan bir mendille kapatın ve hücredışı dokuyu eksi 50 derecede dört gün boyunca lyophilize edin. Bioink hazırlamak için, yeni bir 50 mililitre konik tüp içine dondurulmuş kurutulmuş pdECM 200 miligram transfer ve doku örneğine pepsin 20 miligram ve 8.4 mililitre 0.5 molar asetik asit ekleyin.Daha sonra dakikada 300 dönüşte 96 saatlik bir kuluçka için tüpün içine manyetik bir karıştırma çubuğu yerleştirin. Kuluçka sonunda, 40 mikrometrelik bir hücre süzgeci ve pozitif yer değiştirme pipetini kullanarak çözeltiyi buz üzerinde yeni bir tüpe filtre uygulayarak sindirilmemiş parçacıkları filtreleyin ve tüpe bir mililitre 10X PBS ekleyin. Girdap tan sonra çözeltinin pH'ını yediye ayarlamak için sodyum hidroksit kullanın.Desenli bir yapıya sahip pankreas yapısının 3Boyutlu hücre baskısı için bioink hazırlamak için, 0.4% Trypan Mavi ve Rose Bengal Çözüm ile bir aliquot pdECM bioink bir aliquot leke bir-20 oranında. Daha sonra her biyoink çözeltisini orta askıda adacık çözeltisi ile son %1,5 bioink konsantrasyonuna ve mililitre başına üç adacık eşdeğerine üç kat 10'luk bir hücre yoğunluğuna göre üç e-bir oranda hafifçe karıştırmak için pozitif bir yer değiştirme pipeti kullanın. Çok malzeme tabanlı pankreas dokusu yapılarının 3D hücre baskısı için, her bioink adacık karışımını, mavi ve kırmızının alternatif çizgileri olan bir kafes şeklinde 18 santigrat derecede optimize edilmiş baskı koşulları altında 25 gauge nozul ve 3D baskı ile donatılmış ayrı sterilize şırıngalara yükleyin.Bioink çapraz bağlantı için, 30 dakika boyunca 37 derece santigrat ve% 5 karbondioksit hücre kültürü kuluçka baskılı yapı yerleştirin. Sonra RPMI içine basılı yapı batırın 1640 orta içine 10% fetal sığır serum ve penisilin ve streptomisin mililitre başına 100 adet ile takviye. Desellülerizasyon işleminden sonra, çift iplikçikli DNA'nın %97.3'ü çıkarılır ve kollajen ve glikozaminoglikanlar gibi temsili ekstrasellüler matriks bileşenleri sırasıyla %1278.1 ve %96.9'da kalır.Bu temsili analizde, pdECM bioink saniyede bir yada yaklaşık 10 pascal değerinde bir kesme inceltme davranışı sergiledi ve biyoink bir meme yoluyla ekstrüzyon için uygun regl özelliklerini gösterdi. Ayrıca, bioink karmaşık modülü sıcaklık 15 santigrat dereceye ulaştığında artmaya başladı ve sıcaklık 37 santigrat derece de muhafaza edildiğinde hızla arttı çözeltinin sol-jel geçiş gösteren. PDECM bioink'in dinamik G prime ve G çift asal asal baskısı, baskı işleminden sonra stabilitesini sağlamak için fizyolojik olarak ilgili sıcaklıklarda incelenmiş ve frekans süpürme koşulu altında istikrarlı bir modül elde edilebistir.Çok başlı bir baskı sistemi kullanarak, çeşitli türde 3D yapılar, doku benzeri bir düzenlemede iki veya daha fazla canlı doku türünü uyumlu hale getirmek için pdECM'nin çok yönlülüğünü gösteren ve geliştirilen pdECM kullanılarak üretilebilir. Kabarcıkların varlığı baskı çözünürlüğünü düşürür ve hücre canlılığını azaltır gibi hücre ölümü ve kabarcık oluşumunu önlemek için hücreleri ile bioink karıştırırken nazik olun. 3D pankreas dokusu yapıları içinde kapsüllenmiş pankreas adacıklarının işlevselliği immünoresans boyama veya glikoz tolerans testi ile değerlendirilebilir.Bu pdECM bioink ve 3D biyobaskı tekniği potansiyel doku mühendisliği alanında fonksiyonel pankreas dokusu yapıları gelişimi için kullanılabilir. Araştırmacılar keskin rende ve reaktifleri kullanırken yaralanmaları önlemek için uygun kişisel koruyucu ekipman giymelidir.

pancreatic-tissue-derived-extracellular-matrix-bioink-for-printing-3d

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Bir Kartezyen biyoyazıcı, hassas, tekrarlanabilir geometrilerde çok malzemeli biriktirmeye izin verirken aynı zamanda çevresel faktörlerin kontrolüne de izin verecek şekilde tasarlanmış ve üretilmiştir. Üç boyutlu biyo-yazıcıyı kullanarak, karmaşık ve uygulanabilir yapılar basılabilir ve kolayca çoğaltılabilir.

Üç Verici Kartezyen Yazıcı Kullanımı Bioprinted Hücresel Yapıların Canlılık

Birlikte işlevsel ve uygun bir 3-D doku yapıları in vitro tarama uygulamalarında kullanılmak üzere bioprinted edilebildiği bir doku taklit hidrojel bioink sağlayan bir protokol kümesi tarif eder.

Bioprinting cellularized dokuya özel Hidrojel Bioink kullanılarak dahil edilmesi

Burada, pankreas kanseri hücreleri ve metabolik fonksiyonların bir hücre dışı akı çözümleyicisini kullanarak ölçüm tarafından takip fibroblastlar, 3 boyutlu (3D) küresel ortak kültür hazırlanması için bir yöntemi açıklanmıştır.

Hazırlık ve pankreas kanseri hücreleri ve fibroblastlar 3 boyutlu küresel ortak kültürlerin metabolik tahlil

Kıkırdak ve cilt analogları nanocellulose-aljinat dayalı bioink kullanarak bioprinted vardı. Bioinks bir tek adım pasif karıştırma ünitesi üzerinden yazdırmadan önce cellularized. Yapıları düzgün cellularized, yüksek canlılık var ve farklılaşma olumlu işaretleri sergilemek için gösterdi.

Bioprinting kıkırdak ve cilt doku analogları bir roman pasif birimi teknik Bioink Precellularization için karıştırma kullanmak

Burada, serbest dalgalı e10.5 ayrışmış pankreas ataları ve ilişkili Mezenşim 3D fare pancreatoids ifade insülin üretmek için bir iletişim kuralı mevcut.

İskele-free, üç boyutlu insülin ifade Pancreatoids fare pankreas ataları Vitro gelen nesil

Biz bir bioprintable aljinat/jelatin bioink gömülü ölümsüzleştirdi tümör ve fibroblast hücreleri içeren türdeş olmayan meme kanseri modeli geliştirilmiştir. Model vivo içinde tümör microenvironment recapitulates ve çok hücreli tümör pulcuklarının, kavrama tumorigenesis sürüş mekanizmaları içine verimli oluşumunu kolaylaştırır.

Bioprintable aljinat/jelatin hidrojel 3D Vitro Model sistemleri hücre küresel oluşumu teşvik

Bu iletişim kuralı ile yapısal doku mühendislik yapıları 3D baskı için decellularized matrisler (DM) içeren katıştırılmış polylactic asit (PLA) mikroküreler polycaprolactone (PCL) filaman imalatı açıklar.

Matrisler roman işlemi 3D baskı için Decellularized

Burada sunulan bir basit kullanımlı, çekirdek / kabuk, üç boyutlu biyobaskı kurulum içi boş iskeleler, vasküler ve diğer borulu yapıların doku mühendisliği için uygun tek adımlı imalatı için.

Boru yapıları doku mühendisliği için Çekirdek / kabuk Baskı İskeleler

Bu protokol, hücre yüzeyi reseptörlerinin, Kit'in (CD117) ve yüksek benzeşimli IgE reseptörlerinin (FcφRI) hücre canlılığı ve fenotipik ekspresyumu açısından fare kemiğinden türetilmiş mast hücreleri ile kristal nanoselüloz (CNC)/agarose kompozit hidrojel biyomalzeme mürekkebinin biyouyumluluğunu hızla değerlendirmek için bir yöntemi vurgulamaktadır.

Kemik İliği Türevi Mast Hücre Kültürü için Kristal Nanoselüloz Gömülü Agarose Biyomalzeme Mürekkep İmalatı

Bu çalışma, dikkate değer geri dönüşümlü sıkışma-sıkışma giderme geçiş özellikleri sergileyen yeni bir κ-İrlanda yosunu alt mikrojel süspansiyon banyosunu tanıtmaktadır. Bu özellikler, gömülü 3D biyobaskıda biyomimetik doku ve organların inşasına katkıda bulunur. Kalp/özofagus benzeri dokuların yüksek çözünürlüklü ve hücre büyümesi ile başarılı bir şekilde basılması, yüksek kaliteli biyobaskı ve doku mühendisliği uygulamalarını göstermektedir.

κ-Carrageenan Sub-Microjel Ortamı Kullanılarak Doku Benzeri Yapıların Gömülü Biyobaskısı

Keşfedin pankreas doku türetilmiş ekstrasellüler matris bioink kullanarak 3D hücre yüklü pankreas yapıları baskı yöntemini. Bu teknik, diyabet tedavisi için transplantasyon uyumlu doku yapıları oluşturur ve hücre canlılığını artırır.

3D Hücre Yüklü Pankreas Dokusu Yapıları Baskı için Pankreas Doku Türetilmiş Ekstrasellüler Matrix Bioink

Daha fazla video keşfet