Dimethylbenz[a]Anthracene ve 12-O-Tetradecanoyl Phorbol-13-Asetat (DMBA-TPA) Kullanarak Kimyasal Kaynaklı Cilt Karsinogenez Modeli
19 Aralık 2019
İki aşamalı deri karsinogenezi topikal olarak uygulanan iki kimyasal tarafından indüklenir. Bir mutajen 7,12-dimethylbenz[a]anthracene) epidermal hücrelerde mutasyonlara neden olur ve genel büyüme uyarıcı sürekli bir uygulama 12-O-tetradecanoyl phorbol-13-asetat cilt papilloma oluşumunu hızlandırır.
Bu iki adım cilt kanseri modeli cilt kanseriiltihabı rolü çalışma sağlar ve tümör ilerlemesi ayrı bir süreç olarak çalışma tümör başlatılması sağlar. Bu modelde tümör oluşumu kimyasal indüklenen ve nakavt suşları kullanımı çevresel faktörler veya terapötik adayların etkilerini incelemek için izin verir. Model de kanser bağışıklık sistemi ve anjiyogenez rolünü incelemek için uygundur.
İnsan hastalarda skuamöz hücreli karsinombenzer bir hastalık patolojisi göstermektedir. Bu yöntemin yürütülmesi nispeten kolay olsa da, doğru zamanlama esastır. Ayrıca bir karsinojen olan DMBA'yı kullanırken uygun güvenlik önlemlerinin alınması da önemlidir.
Deneye başlamadan önce, kavga ve deri lezyonları önlemek için ayrı kafeslerde herhangi bir agresif yedi ila dokuz haftalık fareler ev. Deri papilloma indüksiyon için, ilk deneysel hayvanların arka derileri tıraş ve fareler tek tek tartmak. Tıraştan 48 saat sonra, her anestezili farenin tıraş alanına 200 mikrolitre aseton halinde 50 mikrogram DMBA uygulamak için bir pipet kullanın.
Cilt papilloma promosyon için, Yedi gün sonra DMBA uygulama deneyin sonuna kadar haftada iki kez aseton 200 mikrolitre TPA beş mikrogram ile cilt tedavi. Papillomlar ve fotoğraf için hayvanları inceleyin ve her hafta bir harita üzerinde her papilloma boyutunu kaydedin. Çapı bir milimetreden büyük hissedilir bir kitle bir haftadan uzun kalırsa papilloma olarak kabul edilir.
Tümör yanıtı bir platoulaştığında, son TPA uygulamasından 24 saat sonra hayvanlardan uygun numune malzemesini toplayıp immünohistokimyasal analiz için tam kalınlıkta deri parçaları toplayıp toplayıp. Gen ekspresyonu ve protein anailses için papilloma ve non-papilloma deri örneklerinden deri parçaları toplamak için biyopsi yumruğu kullanın ve immünohistokimyasal analiz için papilloma ve non-papilloma deriden parçalar toplamak için bir neşter kullanın. Sonra istediğiniz gibi akış sitometrik analiz için cilt drenaj lenf düğümleri ve dalak bir parça toplamak.
DMBA TPA tümör modelinde papilloma serbest zaman ve deney grupları arasındaki papillom sayısında istatistiksel olarak anlamlı fark gözlenmektedir. Histolojik analizler papillomların yapısını, derinin morfolojisini veya ilgili bağışıklık hücrelerinin infiltrasyonunu incelemek için uygundur. DMBA ve TPA'yı cilde eşit olarak uygulamak ve TPA'yı tutarlı aralıklarla uygulamak esastır.
Ayrıca papillomlar düzenli olarak saymak önemlidir. Tümör oluşumunun sayısını ve zamanını etkileyen mekanizmalar immünohistokimya, akış sitometrisi, kantitatif PCR ve protein analizi gibi farklı yöntemler kullanılarak incelenebilir. Bu konvansiyonel teknik kolayca adapte edilebilir ve farklı genlerin etkilerini incelemek için uygulanabilir, çevresel faktörler, ya da tümör başlatma ve ilerlemesi üzerinde ilgi terapötik.
DMBA kanserojen olduğundan ve aseton hızlı bir şekilde buharlaştığından, tekniği gerçekleştirirken dikkatli olunması gerekir. Uygun bir solunum maskesi ve akış kabini kullanılması tavsiye edilir.
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin
Genel Bakış
Bu çalışma, araştırmacıların cilt kanserinde inflamasyonun rolünü incelemelerine olanak tanıyan iki aşamalı bir cilt karsinogenez modeli sunmaktadır. Model, tümör oluşumunu tetiklemek için bir mutajen ve bir büyüme stimülatörü kullanarak tümör başlangıcı ve ilerlemesi hakkında bilgiler sağlamaktadır.
Temel Çalışma Bileşenleri
Bilim Alanı
- Onkoloji
- Karsinogenez
- İnflamasyon
Arka Plan
- İki aşamalı deri karsinojinezi, bir mutajen ve bir büyüme stimülatörü içerir.
- Bu model, skuamöz hücreli karsinomun incelenmesi için uygundur.
- Deneysel düzenekte doğru zamanlama ve güvenlik önlemleri kritik öneme sahiptir.
- Çevresel ve terapötik faktörleri araştırmak için nakavt suşlar kullanılabilir.
Çalışmanın Amacı
- Tümör başlangıcı ve ilerlemesinin mekanizmalarını araştırmak.
- Cilt kanserinde bağışıklık sisteminin rolünü değerlendirmek.
- Kimyasal olarak indüklenen tümörler bağlamında anjiyogenezi değerlendirmek.
Kullanılan Yöntemler
- 7,12-dimetilbenz[a]antrasenin (DMBA) topikal uygulaması.
- 12-O-tetradekanoil forbol-13-asetatın (TPA) sürekli uygulaması.
- Çevresel faktör çalışmalarında knockout suşların kullanımı.
- Tümör oluşumunun ve ilerlemesinin zaman içinde izlenmesi.
Ana Sonuçlar
- Model, insan skuamöz hücreli karsinom patolojisini başarıyla taklit etmektedir.
- Enflamasyon, tümör gelişiminde önemli bir rol oynamaktadır.
- Sonuçların tekrarlanabilirliği için zamanlamanın doğru olması esastır.
- Karsinojenik maddelerle çalışırken güvenlik protokolleri gereklidir.
Sonuçlar
- İki aşamalı model, cilt kanseri mekanizmalarını incelemek için etkilidir.
- Terapötik adayların test edilmesi için bir platform sağlar.
- İleri araştırmalar, kanser biyolojisi anlayışını geliştirebilir.
Sıkça Sorulan Sorular
Yönetici Sektör Alakası
DMBA-TPA iki aşamalı deri karsinogenez modeli, preklinik onkoloji araştırmalarında tümör başlangıcının ve ilerlemesinin detaylandırılması için güvenilir bir platform sunar. Modelin tekrarlanabilirliği ve kantitatif çıktıları, inflamatuar yolakların ve immün aracılı tümör promovasyonunun mekanistik risk analizini destekler. Bu durum, dermatolojik ve immüno-onkoloji programları için erken keşif ve portföy önceliklendirme süreçlerinde veri odaklı karar verme imkanı sağlar.
Biyofarma Ar-Ge'sinde Stratejik Uygulamalar
Erken Keşif ve Hedef Doğrulama
- Bilimsel Değer: Zamansal olarak ayrılmış kimyasal etkiler kullanarak tümör başlangıcı ile ilerlemesinin sorgulanmasına olanak tanır.
- Bilimsel Değer: Nakavt suşu analizi yoluyla inflamasyon kaynaklı karsinojenezdeki hedeflerin fonksiyonel validasyonunu destekler.
- Bilimsel Değer: Tümör oluşumuna yönelik immün hücre infiltrasyonu ve anjiyojenik katkıları izole ederek mekanistik risklerin azaltılmasını kolaylaştırır.
Tarama ve Analiz Geliştirme
- Operasyonel Değer: Bileşik taraması için standardize edilmiş, nicelendirilebilir papilloma sayıları ve büyüme metrikleri oluşturur.
- Operasyonel Değer: Analiz standardizasyonuna uygun, tekrarlanabilir tümöre kadar geçen süre ve çokluk okumaları sağlar.
- Operasyonel Değer: Başlatma veya teşvik aşamalarını etkileyen terapötik adayların ölçeklenebilir değerlendirmesini destekler.
Translasyonel ve Preklinik Araştırmalar
- Translasyonel Değer: İnsan skuamöz hücreli karsinom patolojisini modeller ve dermatolojik onkoloji endikasyonları ile olan ilgiyi mümkün kılar.
- Translasyonel Değer: İnflamatuar mekanizmaları tümör progresyonu ile ilişkilendirerek biyobelirteç odaklı preklinik doğrulamayı destekler.
- Translasyonel Değer: İmmünomodülatör ve anti-anjiyojenik ajanların fizyolojik olarak ilgili bir bağlamda test edilmesi için bir platform sağlar.
Boru Hattı ve İş Akışı Entegrasyonu
Model; hedef doğrulamadan preklinik etkinlik testlerine kadar uzanan keşif sürekliliğine, özellikle de immüno-onkoloji ve inflamatuar yolak modülasyonu alanlarına uygundur.
- Keşif Biyolojisi: İndüklenebilir veya konstitütif nakavt modelleri kullanarakle karsinogenezde gen-çevre etkileşimlerinin hipotez testlerini gerçekleştirir.
- Tarama: Doz-yanıt ve öncü bileşik optimizasyonu için papillom latens süresi ve yükü gibi kantitatif son noktalar sağlar.
- Analizler: Fenotipik sonuçları mekanizma ile ilişkilendirmek için histopatolojik, akış sitometrik ve moleküler veriler üretir.
- Translasyonel Araştırma: Paylaşılan inflamatuar ve anjiyojenik eksenler aracılığıyla mekanistik keşiften preklinik doğrulamaya kadar olan sürekliliği destekler.
- Kurumsal Yeniden Kullanım: Deri ve epitelyal kanserlerde endikasyonlar arası tarama için yeniden kullanılabilir bir inflamatuar karsinogenez platformu oluşturur.
Operasyonel ve Kurumsal Etki
- Bilimsel Değer: Tümör gelişimindeki başlatma ve geliştirme evrelerini birbirinden ayırarak mekanistik belirsizliği azaltır.
- Operasyonel Değer: Standartlaştırılmış kimyasal dozajlama, zamanlama ve güvenlik kontrollü uygulama ile tekrarlanabilirliği sağlar.
- Stratejik Değer: İnflamasyon kaynaklı tümör modellerinde hedeflerin erken aşamada risk analizine tabi tutulmasını sağlayarak sermaye verimliliğini artırır.
- Portföy Etkisi: Tümörsüz sağkalım ve ilerleme metriklerine dayalı, riske göre ayarlanmış ilerleme kararlarına temel oluşturur.
Uygulama Hususları
- Karsinojenlerin kullanımı ve kemirgen modellerde topikal tedavilerin uygulanması konusunda uzmanlık gerektirir.
- DMBA volatilitesi ve karsinojenliği nedeniyle havalandırma ve kişisel koruyucu donanım (KKD) altyapısına bağımlıdır.
- Kavga veya deri lezyonlarından kaynaklanabilecek karıştırıcı değişkenleri önlemek için standart hayvan bakımı gerektirir.
- Güvenilir son noktalar için tutarlı tümör ölçümü ve boylamsal takip konusunda eğitim gerektirir.
- Kutanöz veya erişilebilir epitelyal yüzeylerle sınırlıdır; bu da kullanımı topikal veya mukozal uygulama çalışmalarıyla kısıtlar.
