Name: Lazer Doppler Flowmetry Kullanarak Sıçanserebral Kan Akımı Otoregülasyon Değerlendirilmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-01-19T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 12 s
Description: Öğrenin, lazer Doppler flowmetry kullanarak sıçanlarda serebral kan akımı otoregülasyonunu değerlendirmeyi. Bu yöntem, kan basıncı değişiklikleri sırasında mikrosirkülasyon yeteneğini sürekli izlemek için değerlidir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar Kaleigh Kozak, Megan Stumpf ve Jack Bullis'e bu çalışmanın tamamlanması ve el yazmasının hazırlanmasındaki olağanüstü yardımları için içten teşekkürlerini sunarlar. Hibe Desteği: NIH #R01-HL128242, #R21-OD018309 ve #R21-OD024781.

Wisconsin Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi Tıp Koleji (IACUC) bu yazıda açıklanan tüm protokolleri onayladı ve tüm prosedürler Ulusal Sağlık Enstitüleri (NIH) Laboratuvar Hayvan Refahı Ofisi (OLAW) ile uyumludur Yönetmelik.
1. Deneysel hayvanlar ve kayıt için hazırlık
<ol><li>8-12 haftalık erkek Sprague-Dawley sıçanlarının 250-300 g ağırlığında olduğunu kullanın. Bu deneyler için, %0.4 NaCl, 200 g/kg kazein, 3 g/kg DL-metiyonin, 497,77 g/kg sakaroz, 150 g/kg mısır nişastası, 50 g/kg mısır yağı, 50 g/kg selüloz, 2 g/kg kolin bitartrat, 35 g/kg mineral karışımı ve 10 kg vitamin karışımından oluşan standart bir diyetdir.</li>
	<li>Veri toplama yazılımı veya karşılaştırılabilir bir kayıt yöntemi kullanarak arteriyel kan basıncı ve LDF okumaları kaydedin.</li>
	<li>Arteriyel basınç transdüserini kayıt sisteminin bir kanalına ve LDF sondasını kayıt sistemindeki diğer kanala takın.</li>
	<li>Ölçümden önce, bir hareketlilik standardı ayarlamak ve lazer Doppler akış ölçerin sabit bir çıkış sağladığından emin olmak için lazer Doppler probu kalibre edin.</li>
	<li>Hazırlık cerrahisi ve deney için gerekli ek ekipmanı hazırlayın: bir diseksiyon mikroskobu, bir kemirgen ventilatör, bir son gelgit CO2 monitörü, farenin kafasını pozisyonda onarmak için stereotaksik bir alet ve pial mikrosirkülasyon üzerinde LDF probu bulmak ve sabit bir konumda tutmak için bir mikromanipülatör.</li>
</ol>2. Cerrahi hazırlık
<ol><li>Sıçan tartMak ve% 3.5 isofluran ve% 30 O2 takviyesi ile bir indüksiyon odasında hayvan anestezik.</li>
	<li>Indüksiyon odasından hayvan çıkarın ve% 30 O2 takviyesi ile% 1.5-3 isofluran veren bir anestezik maske yerine.</li>
	<li>Fareyi 37 °C'de tutulan dolaşan bir su battaniyesine yerleştirin ve geri çekilme refleksi olduğundan emin olmak için refleksleri bir ayak tutamı ile kontrol edin. Kornea desiccation önlemek için her iki göze steril oftalmik merhem uygulayın.</li>
	<li>Kafatasının üst kısmını, ventral boyun bölgesini ve femoral üçgenleri tıraş edin. Bu alanlardaherhangi bir gevşek saç çıkarın ve sürtünme alkol ile temizleyin.</li>
	<li>37 °C'de hayvanın vücut ısısını korumak ve tıbbi bant kullanarak geçici olarak ped için güvenli bir sirkülasyon sıcak su pompası ile bir ısıtma yastığı üzerinde bir supine pozisyonda sıçan yerleştirin.</li>
	<li>Başka bir yerde açıklandığı gibi boyun bir ventral kesi ile bir trakeal kanül (PE240 polietilen tüp) yükleyin26.</li>
	<li>Bir son gelgit CO2 monitör ve% 2.5-3.0 izofluran (hayvanın büyüklüğüne bağlı olarak) ve% 30 O2 inhalasyon takviyesi teslim ventilatör trakeal kanül takın. Solunum hızı, inspiratuar zaman ve dakika ventilatör hacmi ayarlanmış ve deneme boyunca yaklaşık 35 mmHg bir süresi dolmuş son gelgit CO2 sağlamak için izlenen emin olun. NOT: Bu genellikle yaklaşık 48-60 nefes/dk solunum hızı, 1.70-2.30 mL gelgit hacmi ve 250-300 g sıçan için 0.50-0.60 s'lik bir ilham süresi ile elde edilir.</li>
	<li>Pıhtılaşmayı önlemek ve kateterlerin açıklığını korumak için izotonik NaCl çözeltisinde iki PE50 polietilen kanülleri 1 U/mL heparin ile doldurun. Doldurduktan sonra, arter içine ekleme kolaylaştırmak için cerrahi makas ile her kanül açık ucunu bevel.</li>
	<li>Başka bir yerde açıklandığı gibi sağ ve sol femoral arterler Kanülasyon27 bir kateter arteriyel basıncın sürekli izlenmesi ve diğer kateter kan çekilmesi sağlamak için.<ol>
<li>Dikkatle bir diseksiyon mikroskop altında çevre dokudan arterler ayırdıktan sonra, arterin distal ucunu ligate ve düğümleri sıkma olmadan arterin orta ve proksimal uçları etrafında iki ek dikişler yerleştirin.</li>
		<li>Kanül insersiyonu için insizyon sonrası arterden kanamayı önlemek için proksimal sütür olarak kullanın (adım 2.11).</li>
	</ol>
</li>
	<li>Kanül sabitlenene kadar damarı tıkamak için arterin altına ataştan yapılmış V şeklinde bir tel yerleştirin.</li>
	<li>Bir diseksiyon mikroskop altında Vannas makas kullanarak distal ligasyon yakın femoral arter küçük bir kesi yapmak. Kanülün yontma ucunu kesiye yerleştirin ve femoral artere doğru ilerletin. Kaldırma ligatür veya ataş çıkarıldığında arteriyel basınç tarafından yerinden olmaz böylece yerinde kanül güvenli orta ligatür üzerinde düğüm sıkın.</li>
	<li>Orta ligatür sıkıldıktan sonra, kaldırma ligatür üzerinde gerginlik bırakın ve / veya ataş çıkarın, ve proksimal ligature sıkın.</li>
	<li>Kesiyi ince dikişlerle (3-0 ipek) veya cerrahi bir zımba ile kapatın. Alternatif olarak, kesi nin boyutuna bağlı olarak, kesi bölgesinin üzerine nemli bir gazlı bez yerleştirin.</li>
</ol>3. LDF ölçümleri için kafatası inceltme
<ol><li>Kanüller yerleştirildikten hemen sonra, hayvanı sert bir konuma yerleştirin ve kateterleri veya trakeal tüpü çıkarmamaya dikkat edin.</li>
	<li>Kafatası kapsayan deride eliptik bir kesi yapmak için cerrahi makas kullanın. Herhangi bir bağ dokusu kaldırmak için bir pamuklu bez kullanın, kafatası temiz ve kuru olduğundan emin olun. Herhangi bir kanamayı durdurmak için kafa derisi üzerinde kesi etrafında küçük bir uzatılmış ve haddelenmiş kağıt parçası yerleştirin.</li>
	<li>Diseksiyon mikroskobu altında, sol veya sağ somatosensoriyel korteks üzerinde parietal alanda küçük bir kemik alanını (farenin büyüklüğüne bağlı olarak yaklaşık 0,5-1 cm) inceltmek için 2,15 mm matkap ucuna sahip bir Dremel aracı veya diş matkabı kullanın. DİkKAT: Kafatasına girmemek için kemiği yavaşça ve dikkatlice inceltin. Bu adımı gerçekleştirirken, alanın aşırı ısınmasını önlemek için tuzlu çözelti serbestçe uygulanmalıdır.</li>
	<li>Kafatası inceltildikten ve alan pembe bir görünüme sahip ve/veya kan damarları görselleştirildikten sonra, bölgeyi mineral yağla kaplayın ve lazer Doppler sondasını maruz kalan serebral mikrosirkülasyon üzerine konumlandırmak için bir mikromanipülatör kullanın, böylece sondanın ucu sadece mineral yağ havuzunun tepesine dokunuyor(Şekil 1). NOT: Lazer Doppler okumalarını engelleyecek harici titreşimlerin olmadığı ve probun deney boyunca aynı hedef alan üzerinde güvenli bir şekilde sabitlendiği bir alanda LDF ölçümleri almak esastır.</li>
</ol>4. Serebral vasküler otoregülasyonun değerlendirilmesi
<ol><li>LDF probu konumlandırıldıktan sonra, deneye başlamadan önce 30-45 dk'lık bir denge süresi bekleyin. Equilibr döneminden sonra, ortalama arteriyel basınç (MAP) ve lazer serebral kan akımı (LCBF) 2 dakika için her 30 s ve ortalama değerleri prehemorrhage kan basıncı ve LCBF için temel değerleri elde etmek için ölçün.</li>
	<li>Arteriyel basınç azaltma yanıt olarak serebral vasküler otoregülasyon değerlendirmek için, femoral arter11kan 1.5 mL ardışık çekilmesi sonrasında LCBF ve MAP ölçmek. Kateter patentini korumak için, her kan çekiminden sonra kateter hacmine yaklaşık olarak eşit bir heparin çözeltisi (100 U/mL) olduğundan emin olun. NOT: Kateter açıklığını korumak için heparin çözeltisini infüzyonu yapılırken, heparin çözeltisinin hacmini kateterin hacmine mümkün olduğunca yakın bir şekilde eşleştirmek önemlidir, bu da hayvanın çok fazla heparin almasını önlemek için, istenmeyen neden olabilir Kanama.</li>
	<li>Her kan hacmi çekilmesinden sonra, sıçan 2 dakika için denge sağlar, sonra MAP ve LCBF 2 dk için her 30 s kaydedilir. Hayvan yaklaşık 20 mmHg bir MAP ulaşana kadar kan hacmi çekilmesi tekrarlayın.</li>
	<li>Prehemorrhage MAP'den LLA'ya kadar kan basıncı aralığını belirleyerek etkili otodüzenleyici aralığı belirleyin (aşağıdaki adım 4.5 ve 5.3).</li>
	<li>LCBF'nin kan hacminin çekilmesinden sonra hala prehemorrhage kontrol değerinin %20'sine geri döndüğü en düşük basıncı belirleyerek, daha önce11,28'de açıklandığı gibi veya otoregülasyonplato aşamasında ve LCBF'nin art arda her kan çekilmesiile azaldığı LLA'nın altında belirlenen regresyon hatlarının kesişme noktasını belirleyerek (adım 5.3, aşağıda). NOT: LLA ve otodüzenleyici plato tanımlama kriterleri laboratuvarlar arasında farklılık gösterebilir (örneğin, Takada ve ark.28 vs Jones ve ark.29)yanı sıra arteriyel kan basıncını azaltmak için prosedürler (örneğin, belirli arteriyel basınç düzeylerine ulaşmak için kan ve kontrollü kanama belirli bir hacmin çekilmesi)11.</li>
	<li>Deneyin sonunda, IACUC tarafından onaylandığı gibi, anestezi cerrahi bir düzlem altında iken ikili bir pnömotoraks oluşturarak hayvan ötenazi.</li>
	<li>Hayvan ötenazi den sonra dokuda elde edilen LDF değerleri deneysel kurulum için sıfır temel akış değeri sağlayacaktır.</li>
</ol>5. İstatistiksel analiz
<ol><li>LDF değerleri ile bunlara karşılık gelen arteriyel basınç arasındaki korelasyonun değerlendirilmesi için doğrusal regresyon analizi yapın. Ölçülen akış oranlarını etkileyen spesifik olmayan LDF sinyali olmadığından emin olmak için hayvan ötenazi yapıldıktan sonra elde edilen temel LDF okumalarını kullanın.</li>
	<li>LlA'yı, otodüzenleyici platonun üstündeki ve altındaki regresyon çizgileri arasındaki kesişimi kullanarak hesaplayın. Bu yöntemi kullanarak LLA hesaplamak için, iki regresyon denklemi birleştirmek ve arteriyel basınç için ortaya çıkan denklemi çözmek.</li>
	<li>Farklı deney gruplarını karşılaştırırken, LDF ile arteriyel basınç ilişkisinin eğimlerini her hayvan için LLA'nın üstünde ve altında hesaplamak için doğrusal regresyon analizini kullanın ve bunları bu deney grubundaki hayvanlar için ortalama ± SEM olarak özetleyin.</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Lazer Doppler Flowmetri (LDF) ile Doku Kan Akımı Yanıtlarının Değerlendirilmesi. Yukarıda belirtildiği gibi, LDF sinyali mikrosirkülasyonda, bu durumda RBC, hareketli parçacıkların sayısı ve hızı ile orantılıdır. Farklı organlarda LDF okumaları iyi elektromanyetik akış ölçerler ve radyoaktif mikroküreler30 gibi kurulan yöntemlerle değerlendirilen tüm organ kan akımı ile ilişkilidir ve genellikle kanüle arter preparatları aktif ton regülasyonu değerlendiren çalışmalar ile tutarlı<s...

Serebral dolaşımdaki otodüzenleyici mekanizmalar homeostazın ve beyindeki normal fonksiyonun korunmasında önemli bir rol oynar. Serebral kan akımının otoregülasyonu kalp hızı, kan hızı, perfüzyon basıncı, serebral direnç arterlerin çapı ve mikrosirkülasyon direnci gibi birçok faktörden etkilenir, bunların hepsi sistemik kan basıncının fizyolojik aralığı üzerinde beyindeki toplam serebral kan akımı sabitinin korunmasında rol oynar. Arteriyel basınç arttığında, Bu mekanizmalar intrakraniyal basınçta tehlikeli artışları önlemek için arteriyol ve direnç arterleri daraltır. Arteriyel kan basıncı düştüğünde, lokal kontrol mekanizmaları doku perfüzyonu ve O2 doğum korumak için arteriyolleri dilfle. Hiperkapni gibi çeşitli patolojik koşullar, travmatik veya küresel hipoksik beyin hasarı, ve diyabetik mikroanjiyopati1,2,3,4,5,6 kan akışını otomatik düzenleme beynin yeteneğini bozabilir. Örneğin, kronik hipertansiyon yüksek basınçlar doğru etkili otodüzenleyici aralığı kaydırıyor7,8,9, ve yüksek tuz (HS) diyet sadece serebral mikrosirkülasyon normal endotel bağımlı dilatasyon ile müdahale10, ama aynı zamanda arteriyel basınç azaldığında doku perfüzyonu azaltmak ve korumak için serebral dolaşımda otodüzenleyici mekanizmaların yeteneğini bozar11. Serebral otoregülasyon da Bir HS diyet12beslenir dahl tuza duyarlı sıçanlarda bozulur.
Arteriyel basınç azalmaları sırasında, serebral direnç arterler ve arteriyollerin genişlemesi başlangıçta azaltılmış perfüzyon basıncına rağmen değerleri kontrol etmek için serebral kan akımı nı döndürür. Arteriyel basınç daha da azalır gibi, serebral kan akımı düşük basınçta sabit kalır (otodüzenleyici yanıt plato faz) vaskülatür artık düşük basınçta kan akışını korumak için genişledikçe kadar. Bir organın normal kan akışını koruyabileceği en düşük basınç, otoregülasyonun alt sınırı (LLA) olarak adlandırılır. LLA altındaki basınçlarda, serebral kan akımı istirahat değerlerinden önemli ölçüde azalır ve arteriyel perfüzyon basıncı nda her azalma ile doğrusal bir şekilde azalır13,14. LLA bir yukarı kayma, hipertansiyon gözlenen7,8,9, arteriyel perfüzyon basıncı azalır koşullar sırasında iskemik yaralanma riskini ve şiddetini artırabilir (örneğin, miyokard infarktüsü, iskemik inme, veya dolaşım şoku).
LDF serebral dolaşımda kan akışının otoregülasyonu da dahil olmak üzere çeşitli koşullar altında mikrosirkülasyon kan akışını değerlendirmek için son derece değerli bir yaklaşım olduğu kanıtlanmıştır11,14,15. Otodüzenleyici yanıtları değerlendirmeye ek olarak, LDF metabolik araştırırken kortikal kan akışını izlemek için kullanılabilir, miyojenik, endotel, humoral, veya serebral kan akışını düzenleyen nöral mekanizmalar ve serebral kan akımı üzerinde çeşitli deneysel müdahaleler ve patolojik koşulların etkisi10,16,17,18,19,20,21.
LDF, yansıyan lazer ışığındaki değişimi hareket eden parçacıkların sayısı ve hızına yanıt olarak ölçer- bu durumda, kırmızı kan hücreleri (RBC). Serebral vasküler otoregülasyon çalışmaları için, arteriyel kan basıncı arteriyel basıncı artırmak için bir alfa-adrenerjik agonist infüzyonu ile değiştirilir (çünkü beyin dolaşımı kendisi alfa-adrenerjik vazokonstriktör agonistler duyarsız olduğu için)12,15 veya arteriyel basıncı azaltmak için kontrollü kan hacmi çekilmesi yoluyla11,14. Bu çalışmada, LDF sağlıklı bir sıçanda serebral otoregülasyon üzerine kan basıncında dereceli azalmaetkilerini göstermek için kullanılmaktadır. Literatürde açık ve kapalı kafatası yöntemleri tanımlanmış olmasına rağmen22,23,24,25, Bu kağıt kapalı bir kafatası hazırlığı gösterir, serebral kan akışının kafatası nüfuz veya bir oda veya serebral pencere yüklemeden değerlendirilmesine izin.

<table><tbody><tr><td>3-0 örgülü siyah ipek sütür</td><td>Midwest Vet</td><td>193.73000.2</td><td></td></tr><tr><td>Arteriyel Basınç Dönüştürücü</td><td>Merit Medical</td><td>041516504A</td><td></td></tr><tr><td>Otomatik Veri Toplama Sistemleri (WINDAQ & BIOPAC sistemi)</td><td>DATAQ Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kan Basıncı Gösterge Ünitesi</td><td>Çalma</td><td>50115</td><td></td></tr><tr><td>Sirkülasyonlu ılık su pompası</td><td>Gaymar Industries</td><td>T-pompası</td><td></td></tr><tr><td>Gelgit sonu CO2 monitörü</td><td>Çalma</td><td>Capstar-100</td><td></td></tr><tr><td>Heparin Sodyum Midwest</td><td>Vet</td><td>191.46720.3</td><td></td></tr><tr><td>Kimwipe</td><td>Fisher Scientific</td><td>06-666A</td><td></td></tr><tr><td>Lazer Doppler Akış Ölçer</td><td>Perimed</td><td>PeriFlux 5000 LDPM</td><td></td></tr><tr><td>Lazer Doppler Dolum Motilite Standardı</td><td>Perimed</td><td>PF1001</td><td></td></tr><tr><td>Polietilen Boru (PE240) (trakea kanülü için)</td><td>VWR</td><td>63018-828</td><td></td></tr><tr><td>Polietilen Boru (PE50) (femoral kateterler için)</td><td>VWR</td><td>63019-048</td><td></td></tr><tr><td>Kemirgen Ventilatör</td><td>Cwe/ Stoelting</td><td>SAR-830/P</td><td></td></tr><tr><td>Saline</td><td>Midwest Vet</td><td>193.74504.3</td><td></td></tr><tr><td>Sprague-Dawley Outbred Sıçanlar</td><td>Değişken</td><td>N/A</td><td>Sıçanlar çeşitli şirketlerden sipariş edildi</td></tr><tr><td>Standard Rat Chow</td><td>Dyets, Inc.</td><td></td><td></td>113755</tr><tr><td>Stereotaksik Alet</td><td>Cwe / Stoelting</td><td>Klasik Laboratuvar Standardı</td><td></td></tr></tbody></table>

lazer doppler flowmetry kullanarak sıçanserebral kan akımı otoregülasyon değerlendirilmesi

Evaluation of Cerebral Blood Flow Autoregulation in the Rat Using Laser Doppler Flowmetry

Serebral kan akışını düzenleyen vücudun mekanizmaları araştırırken, mikrosirkülasyon kan akışının göreceli bir ölçüm lazer Doppler flowmetry kullanılarak elde edilebilir (LDF). Bu kağıt, serebral kan akışının kafatasını delmeden veya bir oda veya serebral pencere kurmadan değerlendirilmesini sağlayan kapalı bir kafatası hazırlığı göstermektedir. Otodüzenleyici mekanizmaları değerlendirmek için, aynı anda LDF istihdam ederken dereceli kanama yoluyla kontrollü kan basıncı azaltma modeli kullanılabilir. Bu dolaşımdaki kan hacminin çekilmesi ile üretilen arteriyel kan basıncında azalmayanıt olarak kan akışında göreceli değişikliklerin gerçek zamanlı izleme sağlar. Bu paradigma arteriyel kan basıncında azalma sırasında serebral kan akımı otoregülasyonu incelemek için değerli bir yaklaşımdır ve protokolde küçük değişiklikler ile, hemorajik şok deneysel bir model olarak da değerlidir. Otodüzenleyici yanıtları değerlendirmeye ek olarak, LDF, serebral kan akışını ve çeşitli deneysel etkileri düzenleyen metabolik, miyojenik, endotel, humoral veya nöral mekanizmaları araştırırken kortikal kan akışını izlemek için kullanılabilir serebral kan akımına müdahaleler ve patolojik durumlar.

Şekil 2, standart laboratuvar yemekle beslenen 10 erkek Sprague-Dawley sıçanında yapılan deneylerin sonuçlarını özetlemektedir. Bu deneylerde ortalama LCBF, ortalama arteriyel basınç LLA'ya ulaşana kadar ilk üç kan hacmi çekilmesinden sonra premoraji değerinin 'sinde muhafaza edildi. LLA'nın altındaki basınçlarda sonraki kan hacmi çekilmeleri LCBF'nin ilerleyici bir azalmaya neden oldu, serebral dolaşımın artık düşük perfüzyon basınçlarında serebral kan akışını sabit tutmak için yeterli düz...

Bu makalede, arteriyel kan basıncında azalma sırasında kan akışını otomatik düzenleme serebral dolaşımın yeteneğini değerlendirmek için lazer Doppler flowmetry kullanımını göstermektedir.

Lazer Doppler Flowmetry Kullanarak Sıçanserebral Kan Akımı Otoregülasyon Değerlendirilmesi

When investigating the body&#39;s mechanisms for regulating cerebral blood flow, a relative measurement of microcirculatory blood flow can be obtained ...

Bu protokol, normal ve patolojik koşullar altında kan basıncı değişiklikleri sırasında kendi kan akışını düzenlemek için serebral mikrosirkülasyon yeteneğini değerlendirmek için idealdir. LDF, diğer yöntemlerle mümkün olmayan çeşitli koşullar altında serebral kan akışının sürekli izlenmesi için nispeten non-invaziv bir yöntem sağlar. Lazer Doppler flowmetry non-invaziv kan akımı değerlendirmesi için kullanılabilir.Örneğin, sağlıklı genç kadınlarda bozulmuş kan akımı düzenleme üzerinde yüksek tuz diyetetkilerini değerlendirmek için. LDF, insan ve hayvanların birçok farklı vasküler yataklarında kan akışının kolayca izlenmesini sağlar ve çok çeşitli çalışmalarda kullanılabilir. Adrienne Allen ile prosedürü gösteren Megan Stumpf, benim araştırma teknoloji ve laboratuvar yöneticisi olacak.İşleme başlamadan önce, 37 santigrat derece tutulan dolaşan bir su battaniyesi üzerine sıçan yerleştirin ve anestezili deneysel sıçan da pedal refleks yanıt eksikliği onaylamak. Hayvanların gözlerine merhem uygulayın ve kafatası, ventral boyun bölgesi ve femoral üçgenlerin üst tıraş. Maruz kalan cilt herhangi bir saç dökülmesi kaldırın.Ve alkol sürtünerek cildi dezenfekte edin. Dolaşan bir sıcak su pompası ile bir ısıtma yastığı için sıçan taşıyın. Ve fareyi geçici olarak supine pozisyonunda sabitlemek için tıbbi bant kullanın.İzotonik sodyum klorür çözeltisinde mL başına iki PE 50 kanülü heparin başına bir ünite doldurun. Ve arterlere yerleştirilmelerini kolaylaştırmak için kateterlerin açık ucunu cerrahi makasla besle. Dikkatle bir diseksiyon mikroskop altında çevre dokudan femoral arterler ayırdıktan sonra, izole femoral arter segmentinin distal ucunu ligate ve düğümleri sıkma olmadan arterin orta ve proksimal uçları etrafında iki ek dikişler yerleştirin.Kanül sabitlenene kadar damarı tıkamak için arterin altına ataştan yapılmış V şeklinde bir tel yerleştirin. Sonra distal ligasyon yakınındaki femoral arter küçük bir kesi yapmak için vannas makas kullanın. Kanülün yontma ucunu kesiye yerleştirin ve kanülü femoral artere doğru ilerletin.Ataş çıkarın. Yerde kanül güvenli kanül üzerinde kanül üzerinde orta ligature düğüm sıkın. Kaldırma ligatür üzerinde gerginlik bırakın, sonra proksimal ligature sıkın ve kesi kapatın.Kanüller yerleştirildikten hemen sonra hayvanı sert bir konuma getirin. Ve kateterleri yerinden çıkarmamaya özen takınarak kafayı stereotaksik bir cihaza sabitle. Kafatasıkapsayan deride eliptik bir kesi yapın.Ve herhangi bir bağ dokusu kaldırmak için bir pamuklu bez kullanın, kafatası temiz ve kuru olduğundan emin olun. Herhangi bir kanamayı durdurmak için kafa derisi üzerinde kesi etrafında küçük, haddelenmiş kağıt parçası yerleştirin ve diseksiyon mikroskobu altında, sıçan boyutuna bağlı olarak, sol veya sağ somatosensoriyel korteks üzerinde parietal alanda kemik 0,5 ila 1 cm alan inceltmek için 2.15mm matkap ucu ile uygun büyüklükte bir matkap kullanın. Kafatasına girmemek için kemiği yavaşça ve dikkatlice inceltin.Bu adımı gerçekleştirirken, alanın aşırı ısınmasını önlemek için tuzlu çözelti serbestçe uygulanmalıdır. Alan pembe bir görünüme sahip olduğunda ve/veya kan damarları görüntülenebilirse, inceltilmiş kemiği mineral yağile kaplayın. Lazer doppler sondasını maruz kalan serebral mikrosirkülasyonüzerine konumlandırmak için bir mikromanipülatör kullanın, böylece sondanın ucu mineral yağ havuzunun tepesine dokunuyor.İlk sonda yerleşimi için, sondanın mikro sirkülasyon üzerinde konumlandırıldığından emin olmak için yaklaşık 150 birimlik bir sinyalle başlamak en iyisidir. Lazer doppler flowmetry probu yerinde olduğunda, 30 saniyelik bir süre içinde uygun femoral arter kanül1.5mL kan çekmeden önce 30 ila 45 dakikalık bir eşitlik süresi için hayvan dinlenme için izin verin. Kateter patentini korumak için, her kan alındıktan sonra kanüle izotonik tuzlu heparin inmülin başına 100 birim heparin aşılayın.Sıçan iki dakika kurtarmak için izin verin ve daha sonra iki dakika boyunca her 30 saniyede LDF ve kan basıncı ölçmek. Kan basıncı ve LDF ölçümlerinden sonra, hayvan yaklaşık 20mmHg ortalama arteriyel basınca ulaşana kadar her iki dakikada bir kan hacmi çekilmesi tekrarlayın. Bu temsili deneylerde, standart laboratuvar chow beslenen 10 Sprague-Dawley sıçanların ortalama lazer serebral kan akımı, ortalama arteriyel basınç otoregülasyon alt sınırına ulaşana kadar, ilk üç kan hacmi çekilmesinden sonra kanama öncesi değerin %20'si içinde muhafaza edilmiştir.Otoregülasyon alt sınırının altındaki basınçlarda sonraki kan hacmi çekilmesi, serebral dolaşımın artık alt profüzyon basınçlarında serebral kan akımı sabitini korumak için vazodilatasyon yeterli düzeyde üretmek mümkün olduğunu gösteren lazer serebral kan akımının ilerleyici bir azalma neden oldu. Otoregülasyonalt sınırının üstündeki veya üzerindeki basınçlarda, lazer serebral kan akımı ile arteriyel basınç arasında anlamlı bir korelasyon yoktu, bu da lazer serebral kan akışının otodüzenleyici eğrinin plato aralığındaki arteriyel basınçtan bağımsız olduğunu gösteriyordu. Otoregülasyon alt sınırının altında, lazer serebral kan akımı arteriyel basınç ilişkisi olumsuz bir eğim vardı.Ve lazer serebral kan akımı arteriyel basınçla anlamlı bir şekilde ilişkiliydi. Hatırlanması gereken en önemli şey kafatasını çok dikkatli bir şekilde inceltmek ve LDF sondasının aynı doku bölgesine sıkıca bağlı kaldığından emin olmaktır. Bu prosedür karotis arter yoluyla retrograd infüzyon sonrası çeşitli ajanların mikrosirkülasyon reaktivitesini test etmek için kullanılabilir, ya da serebral dolaşımda fonksiyonel hiperemi ve nörovasküler kaplin değerlendirmek için.Bu teknik, farklı ilaçların ve anesteziklerin serebral dolaşım üzerindeki etkilerinin ve hipertansiyon gibi hastalık modellerinde serebral otoregülasyondaki değişikliklerin araştırılmasını sağlamıştır.

evaluation-cerebral-blood-flow-autoregulation-rat-using-laser-doppler

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Serebral iskemi Çeşitli hayvan modellerinde inme insanlık durumu simüle etmek için geliştirilmiştir. Bu protokol sıçanlarda iskemik inme için endotelin-1 (ET-1) bağlı orta serebral arter tıkanıklığı (MCAO) modeli anlatılmaktadır. Buna ek olarak, önemli hususlar, avantajlar, ve bu modelin eksiklikler ele alınmaktadır.

Rat Lazer Doppler Flowmetri Rehberlik ile İskemik İnme için Endotelin-1 Bağlı Orta Serebral Arter Tıkanıklığı Modeli

Serebral perfüzyon izleme iskemik inme modelleri doğruluğunu geliştirmek için gösterilmiştir. Teknik zorluklar sıklıkla serebrovasküler araştırma için bu önemli aracının kullanımını sınırlamak. Bu videoda, optimize edilmiş bir sistem sıçanlarda intraluminal orta serebral arter oklüzyonu sırasında tek veya çoklu-site hemodinamik izleme elde etmek gösterilmiştir.

Intraluminar Orta Serebral Arter Tıkanıklığı ve Sıçan Strok Model Serebral Perfüzyon İzleme için Optimize Sistemi

Serebral perfüzyon, serebral otoregülasyon yoluyla bir dizi basınç boyunca korunur. Bununla birlikte, otoregülasyonun karakterize edilmesi, düzenlenmiş frekanslarda belirgin basınç dalgalanmaları gerektirir. Açıklanan protokol, salınımlı alt gövde negatif basıncının, otoregülasyon eğrisinin nicelleştirilmesi için projeksiyon takibi regresyonu için veri sağlamak üzere nasıl basınç dalgalanmaları oluşturabileceğini gösterecektir.

Salınım Alt Vücut Negatif Basınç ve Projeksiyon Takip regresyon yoluyla Serebral otoregülasyonda Değerlendirilmesi

Bu el yazması sıçan beyin direnç arterlerin vasküler işlevinde değerlendirilmesinde vitro video mikroskobu iletişim kurallarını açıklar. El yazması da microvessel yoğunluğu fluorescently etiketli lektin ve doku perfüzyon lazer Doppler Flowmetry kullanarak değerlendirmek için teknikler açıklanır.

Sıçan izole direnç arter Video mikroskobu kullanan vasküler kontrol mekanizmalarının değerlendirilmesi

Burada lazer Doppler perfüzyon görüntüleme (LDPI) bir arada sunmak ve lazer Doppler perfüzyon (LDPM) spinal ölçmek için izleme kordon yerel kan akışı ve oksijen doygunluğu (SO2), omurilik tanıtmak için standart bir prosedür yanı sıra sıçan travmada.

Lazer Doppler görüntüleme ve izleme sıçan Spinal kord mikro analiz etmek için kullanma

Bu yordamı genel amacı fare modelleri iskemik inme kan - beyin bariyerini bozulma vivo içinde değerlendirmesi için son derece tekrarlanabilir bir teknik sağlamaktır.

Kan - beyin bariyerini bozulma iskemik inme, bir fare modeli Vivo içinde değerlendirilmesi

Burada, geçici MCA oklüzyonu sırasında kan akışını değerlendirmek için lazer Doppler probunun, sıçanlar ve fareler için uygun bir periorbital konum olan orta serebral arterin (MCA) distal bölgesi üzerine kafatasına yerleştirilmesini içeren minimal invaziv bir cerrahi prosedür gösterilmektedir.

Kemirgen Modellerinde Orta Serebral Arter Oklüzyonu Öncesi Serebral Kan Akışının İzlenmesi için Bir Lazer Doppler Probunun Periorbital Yerleştirilmesi

Serebral kan akışının düzenlenmesini in vivo olarak incelemek için, geleneksel farmakolojik yöntemler invazivdir ve genellikle kafatasına, duraya ve leptomeninglere zarar verir. Bu çalışmada, nanoenjektör kılavuzluğunda intrasisternal magna (ICM) enjeksiyonunu lazer benek kontrast görüntüleme ile birleştiren, kafatasının ve leptomeninglerin bütünlüğünü koruyan minimal invaziv bir teknik geliştirdik.

Serebral Kan Akışı Düzenlemesini İn Vivo Çalışmak için Eşleştirilmiş Sarnıç Magna Nanoenjeksiyon ve Lazer Benek Kontrast Görüntüleme Testi

Intraluminal orta serebral arter tıkanıklığı (MCAO) modeli deneysel iskemik inme modelleri arasında en sık kullanılan model. Burada Lazer Doppler flowmetre kılavuzu ile ayrıntılı olarak tüm model ve onun temsilcisi sonuçları gösterecektir.

Fare lazer Doppler flowmetre Rehberlik İskemik İnme intraluminal Orta Serebral Arter Tıkanıklığı (MCAO) Model

Kan-beyin bariyeri (KBB) ve Mikro-aracılı odaklanmış ultrason bozulması beyinde non-invaziv hedeflenen ilaç dağıtımı için umut verici bir...

Sıçan Modelinde Transkraniyal Odaklanmış Ultrason kullanarak Kan-beyin bariyeri MRG eşliğinde bozulması

Öğrenin, lazer Doppler flowmetry kullanarak sıçanlarda serebral kan akımı otoregülasyonunu değerlendirmeyi. Bu yöntem, kan basıncı değişiklikleri sırasında mikrosirkülasyon yeteneğini sürekli izlemek için değerlidir.

Lazer Doppler Flowmetry Kullanarak Sıçanserebral Kan Akımı Otoregülasyon Değerlendirilmesi

Daha fazla video keşfet