Dizili Kütüphanelerin Orta İşleç Lik Taraması ve Çift Luciferase Tabanlı Muhabir kullanılarak Transkripsiyon Faktörü Düzenleyicilerin Tanımlanması

Bu protokol, kanser hücrelerindeki transkripsiyon faktörlerinin yeni düzenleyicilerini belirlemek için dizili lentiviral veya retroviral test kitaplıklarını taramak için kullanılabilir. Bu tekniğin başlıca avantajları, hızlı, orta iş ortası ve ucuz olması ve çoğu araştırmacının erişebileceği ekipman ve reaktifler kullanmasıdır. Genişletmek ve kütüphanede her lentiviral vektör arındırmak için, ilk 96-derin kuyu plaka her kuyuya ampisilin mililitre başına 100 mikrogram ile desteklenen Luria suyu 1.3 mililitre ekleyin.

Dakikada 37 santigrat derece ve 225 devrimleri bir gecede kuluçka için gliserol stok iki mikrolitre ile her iyi aşılamak. Ertesi gün, santrifüj için ayrı 1.5 mililitre mikrosantrifüj tüpler içine her bakteri kültürü aktarın. Üreticinin talimatlarına uygun bir bakteriyel miniprep kiti ile her vektör arındırın.