Name: Intravajinal HIV Maruziyeti ve HIV Enfeksiyonu Tedavisi için İnsanize NOG Fareler (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-01-31T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 15 s
Description: Öğrenin, insanize NOG farelerde intravajinal HIV maruziyeti ve tedavi protokollerini. Kök hücre nakli, viral yük kantitatifikasyonu ve CCR5 varyant taraması yöntemleriyle klinik öncesi HIV araştırmaları için değerli bir model sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar Aarhus Üniversitesi Biyotıp Hayvan Tesisi personeli, koloni bakım çabaları ve fare ağırlıkları izlemek için özellikle Bayan Jani Kær teşekkür etmek istiyorum. Yazarlar, standart bakım cART'ı geliştirdiği ve rehberlik için Profesör Florian Klein'a teşekkür etmek isterler. Aşağıdaki reaktif NIH AIDS Reaktif Programı, AIDS Bölümü, NIAID, NIH: pRHPA.c/2635 (kedi# 11744) Dr. John Kappes ve Dr. Christina Ochsenbauer tarafından elde edilmiştir.

<ol><li>WHO. GHO | By category | Antiretroviral therapy coverage - Data and estimates by WHO region (2018). World Health Organization. , Available from: 
 <a target="_blank" href="http://apps.who.int/gho/data/node.main.626">http://apps.who.int/gho/data/node.main.626</a> (2018).</li>
<li>Skelton, J. K., Ortega-Prieto, A. M., Dorner, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Hitchhiker%27s+guide+to+humanized+mice%3A+new+pathways+to+studying+viral+infections%5BTitle%5D)+AND+%22Immunology%22%5BJournal%5D)">A Hitchhiker's guide to humanized mice: new pathways to studying viral infections.</a> Immunology. 154 (1), 50-61 (2018).</li>
<li>Denton, P. W., Krisko, J. F., Powell, D. A., Mathias, M., Kwak, Y. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+Administration+of+Antiretrovirals+Prior+to+Exposure+Prevents+Rectal+and+Intravenous+HIV-1+Transmission+in+Humanized+BLT+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Systemic Administration of Antiretrovirals Prior to Exposure Prevents Rectal and Intravenous HIV-1 Transmission in Humanized BLT Mice.</a> PLoS ONE. 5 (1), 8829(2010).</li>
<li>Zou, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nef+functions+in+BLT+mice+to+enhance+HIV-1+replication+and+deplete+CD4+%2B+CD8+%2B+thymocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Retrovirology%22%5BJournal%5D)">Nef functions in BLT mice to enhance HIV-1 replication and deplete CD4 + CD8 + thymocytes.</a> Retrovirology. 9 (1), 44(2012).</li>
<li>Berges, B. K., Akkina, S. R., Folkvord, J. M., Connick, E., Akkina, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mucosal+transmission+of+R5+and+X4+tropic+HIV-1+via+vaginal+and+rectal+routes+in+humanized+Rag2+-%2F-+%CE%B3c+-%2F-+%28RAG-hu%29+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Virology%22%5BJournal%5D)">Mucosal transmission of R5 and X4 tropic HIV-1 via vaginal and rectal routes in humanized Rag2 -/- γc -/- (RAG-hu) mice.</a> Virology. 373 (2), 342-351 (2008).</li>
<li>Veselinovic, M., Charlins, P., Akkina, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+HIV-1+Mucosal+Transmission+and+Prevention+in+Humanized+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Modeling HIV-1 Mucosal Transmission and Prevention in Humanized Mice.</a> Methods Mol Biol. , 203-220 (2016).</li>
<li>Neff, C. P., Kurisu, T., Ndolo, T., Fox, K., Akkina, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+topical+microbicide+gel+formulation+of+CCR5+antagonist+maraviroc+prevents+HIV-1+vaginal+transmission+in+humanized+RAG-hu+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">A topical microbicide gel formulation of CCR5 antagonist maraviroc prevents HIV-1 vaginal transmission in humanized RAG-hu mice.</a> PLoS ONE. 6 (6), 20209(2011).</li>
<li>Neff, P. C., Ndolo, T., Tandon, A., Habu, Y., Akkina, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oral+pre-exposure+prophylaxis+by+anti-retrovirals+raltegravir+and+maraviroc+protects+against+HIV-1+vaginal+transmission+in+a+humanized+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Oral pre-exposure prophylaxis by anti-retrovirals raltegravir and maraviroc protects against HIV-1 vaginal transmission in a humanized mouse model.</a> PLoS ONE. 5 (12), 15257(2010).</li>
<li>Veselinovic, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HIV+pre-exposure+prophylaxis%3A+Mucosal+tissue+drug+distribution+of+RT+inhibitor+Tenofovir+and+entry+inhibitor+Maraviroc+in+a+humanized+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Virology%22%5BJournal%5D)">HIV pre-exposure prophylaxis: Mucosal tissue drug distribution of RT inhibitor Tenofovir and entry inhibitor Maraviroc in a humanized mouse model.</a> Virology. 464-465, 253-263 (2014).</li>
<li>Akkina, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Humanized+Rag1-%2F-%CE%B3c-%2F-+mice+support+multilineage+hematopoiesis+and+are+susceptible+to+HIV-1+infection+via+systemic+and+vaginal+routes%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Humanized Rag1-/-γc-/- mice support multilineage hematopoiesis and are susceptible to HIV-1 infection via systemic and vaginal routes.</a> PLoS ONE. 6 (6), 20169(2011).</li>
<li>Zhou, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+administration+of+combinatorial+dsiRNAs+via+nanoparticles+efficiently+suppresses+HIV-1+infection+in+humanized+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy%22%5BJournal%5D)">Systemic administration of combinatorial dsiRNAs via nanoparticles efficiently suppresses HIV-1 infection in humanized mice.</a> Molecular Therapy. 19 (12), 2228-2238 (2011).</li>
<li>Balcombe, J. P., Barnard, N. D., Sandusky, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laboratory+routines+cause+animal+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Contemporary+Topics+in+Laboratory+Animal+Science%22%5BJournal%5D)">Laboratory routines cause animal stress.</a> Contemporary Topics in Laboratory Animal Science. 43 (6), 42-51 (2004).</li>
<li>Trecarichi, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Partial+protective+effect+of+CCR5-Delta+32+heterozygosity+in+a+cohort+of+heterosexual+Italian+HIV-1+exposed+uninfected+individuals%5BTitle%5D)+AND+%22AIDS+Research+and+Therapy%22%5BJournal%5D)">Partial protective effect of CCR5-Delta 32 heterozygosity in a cohort of heterosexual Italian HIV-1 exposed uninfected individuals.</a> AIDS Research and Therapy. 3 (1), (2006).</li>
<li>Novembre, J., Galvani, A. P., Slatkin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+geographic+spread+of+the+CCR5+%CE%9432+HIV-resistance+allele%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biology%22%5BJournal%5D)">The geographic spread of the CCR5 Δ32 HIV-resistance allele.</a> PLoS Biology. 3 (11), 1954-1962 (2005).</li>
<li>Solloch, U. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Frequencies+of+gene+variant+CCR5-%CE%9432+in+87+countries+based+on+next-generation+sequencing+of+1.3+million+individuals+sampled+from+3+national+DKMS+donor+centers%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Immunology%22%5BJournal%5D)">Frequencies of gene variant CCR5-Δ32 in 87 countries based on next-generation sequencing of 1.3 million individuals sampled from 3 national DKMS donor centers.</a> Human Immunology. 78 (11-12), 710-717 (2017).</li>
<li>Ochsenbauer, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+Transmitted%2FFounder+HIV-1+Infectious+Molecular+Clones+and+Characterization+of+Their+Replication+Capacity+in+CD4+T+Lymphocytes+and+Monocyte-Derived+Macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">Generation of Transmitted/Founder HIV-1 Infectious Molecular Clones and Characterization of Their Replication Capacity in CD4 T Lymphocytes and Monocyte-Derived Macrophages.</a> Journal of Virology. 86 (5), 2715-2728 (2012).</li>
<li>Andersen, A. H. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-Acting%2C+Potent+Delivery+of+Combination+Antiretroviral+Therapy%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Macro+Letters%22%5BJournal%5D)">Long-Acting, Potent Delivery of Combination Antiretroviral Therapy.</a> ACS Macro Letters. 7 (5), 587-591 (2018).</li>
<li>Caro, A. C., Hankenson, F. C., Marx, J. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+thermoregulatory+devices+used+during+anesthesia+of+C57BL%2F6+mice+and+correlations+between+body+temperature+and+physiologic+parameters%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Association+for+Laboratory+Animal+Science+JAALAS%22%5BJournal%5D)">Comparison of thermoregulatory devices used during anesthesia of C57BL/6 mice and correlations between body temperature and physiologic parameters.</a> Journal of the American Association for Laboratory Animal Science JAALAS. 52 (5), 577-583 (2013).</li>
<li>Gatlin, J., Padgett, A., Melkus, M. W., Kelly, P. F., Garcia, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+engraftment+of+nonobese+diabetic%2Fsevere+combined+immunodeficient+mice+with+human+CD34%2B+cells+transduced+by+a+self-inactivating+human+immunodeficiency+virus+type+1+vector%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Gene+Therapy%22%5BJournal%5D)">Long-term engraftment of nonobese diabetic/severe combined immunodeficient mice with human CD34+ cells transduced by a self-inactivating human immunodeficiency virus type 1 vector.</a> Human Gene Therapy. 12 (9), 1079-1089 (2001).</li>
<li>Leth, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HIV-1+transcriptional+activity+during+frequent+longitudinal+sampling+in+aviremic+patients+on+antiretroviral+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22AIDS%22%5BJournal%5D)">HIV-1 transcriptional activity during frequent longitudinal sampling in aviremic patients on antiretroviral therapy.</a> AIDS. 30 (5), 713-721 (2016).</li>
<li>Halper-Stromberg, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Broadly+neutralizing+antibodies+and+viral+inducers+decrease+rebound+from+HIV-1+latent+reservoirs+in+humanized+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Broadly neutralizing antibodies and viral inducers decrease rebound from HIV-1 latent reservoirs in humanized mice.</a> Cell. 158 (5), 989-999 (2014).</li>
<li>Rothenberger, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Large+number+of+rebounding%2Ffounder+HIV+variants+emerge+from+multifocal+infection+in+lymphatic+tissues+after+treatment+interruption%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Large number of rebounding/founder HIV variants emerge from multifocal infection in lymphatic tissues after treatment interruption.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 112 (10), 1126-1134 (2015).</li>
<li>Rongvaux, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+Hemato-Lymphoid+System+Mice%3A+Current+Use+and+Future+Potential+for+Medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Human Hemato-Lymphoid System Mice: Current Use and Future Potential for Medicine.</a> Annual Review of Immunology. 31 (1), 635-674 (2013).</li>
<li>Walsh, N. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Humanized+Mouse+Models+of+Clinical+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Pathology%3A+Mechanisms+of+Disease%22%5BJournal%5D)">Humanized Mouse Models of Clinical Disease.</a> Annual Review of Pathology: Mechanisms of Disease. 12 (1), 187-215 (2017).</li>
<li>Denton, P. W., García, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Humanized+mouse+models+of+HIV+infection%5BTitle%5D)+AND+%22AIDS+Reviews%22%5BJournal%5D)">Humanized mouse models of HIV infection.</a> AIDS Reviews. 13 (3), 135-148 (2011).</li>
<li>Denton, P. W., Søgaard, O. S., Tolstrup, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+animal+models+to+overcome+temporal%2C+spatial+and+combinatorial+challenges+in+HIV+persistence+research%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Using animal models to overcome temporal, spatial and combinatorial challenges in HIV persistence research.</a> Journal of Translational Medicine. 14 (1), (2016).</li>
<li>Andersen, A. H. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((cAIMP+administration+in+humanized+mice+induces+a+chimerization-level-dependent+STING+response%5BTitle%5D)+AND+%22Immunology%22%5BJournal%5D)">cAIMP administration in humanized mice induces a chimerization-level-dependent STING response.</a> Immunology. 157 (2), 163-172 (2019).</li>
<li>Tanaka, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+Mature+and+Functional+Human+Myeloid+Subsets+in+Hematopoietic+Stem+Cell-Engrafted+NOD%2FSCID%2FIL2r+KO+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Development of Mature and Functional Human Myeloid Subsets in Hematopoietic Stem Cell-Engrafted NOD/SCID/IL2r KO Mice.</a> The Journal of Immunology. 188 (12), 6145-6155 (2012).</li>
<li>Quan, P. L., Sauzade, M., Brouzes, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DPCR%3A+A+technology+review%5BTitle%5D)+AND+%22Sensors+%28Switzerland%29%22%5BJournal%5D)">DPCR: A technology review.</a> Sensors (Switzerland). 18 (4), (2018).</li>
<li>Denton, P. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+HIV+Latency+in+Humanized+BLT+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">Generation of HIV Latency in Humanized BLT Mice.</a> Journal of Virology. 86 (1), 630-634 (2012).</li>
<li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+human+immune+system+mouse+model+with+robust+lymph+node+development%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">A human immune system mouse model with robust lymph node development.</a> Nature Methods. 15 (8), 623-630 (2018).</li>
<li>Satheesan, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HIV+Replication+and+Latency+in+a+Humanized+NSG+Mouse+Model+during+Suppressive+Oral+Combinational+Antiretroviral+Therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">HIV Replication and Latency in a Humanized NSG Mouse Model during Suppressive Oral Combinational Antiretroviral Therapy.</a> Journal of Virology. 92 (7), 02118(2018).</li>
<li>Bachmanov, A. A., Reed, D. R., Beauchamp, G. K., Tordoff, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Food+intake%2C+water+intake%2C+and+drinking+spout+side+preference+of+28+mouse+strains%5BTitle%5D)+AND+%22Behavior+Genetics%22%5BJournal%5D)">Food intake, water intake, and drinking spout side preference of 28 mouse strains.</a> Behavior Genetics. 32 (6), 435-443 (2002).</li>
<li>Shultz, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+functional+human+T-cell+subsets+with+HLA-restricted+immune+responses+in+HLA+class+I+expressing+NOD%2FSCID%2FIL2r+null+humanized+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Generation of functional human T-cell subsets with HLA-restricted immune responses in HLA class I expressing NOD/SCID/IL2r null humanized mice.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 107 (29), 13022-13027 (2010).</li>
<li>Willinger, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+IL-3%2FGM-CSF+knock-in+mice+support+human+alveolar+macrophage+development+and+human+immune+responses+in+the+lung%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Human IL-3/GM-CSF knock-in mice support human alveolar macrophage development and human immune responses in the lung.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 108 (6), 2390-2395 (2011).</li>
<li>Hanazawa, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+human+immunosuppressive+myeloid+cell+populations+in+human+interleukin-6+transgenic+NOG+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Generation of human immunosuppressive myeloid cell populations in human interleukin-6 transgenic NOG mice.</a> Frontiers in Immunology. 9, FEB (2018).</li>
<li>Huntington, N. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IL-15+trans-presentation+promotes+human+NK+cell+development+and+differentiation+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">IL-15 trans-presentation promotes human NK cell development and differentiation in vivo.</a> The Journal of Experimental Medicine. 206 (1), 25-34 (2009).</li>
<li>Rongvaux, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+function+of+human+innate+immune+cells+in+a+humanized+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Development and function of human innate immune cells in a humanized mouse model.</a> Nature Biotechnology. 32 (4), 364-372 (2014).</li>
</ol>

Yazarlar çıkar çatışması beyan etmezler.

Ağır bağışıklık sistemi zayıflamış fare suş NOD. Cg-PrkdcscidIl2rgtm1Sug/JicTac (NOG) insan hücreleri ve dokuların nakli için son derece uygundur. Bu farelerde hem doğuştan gelen hem de adaptif bağışıklık yolları tehlikeye girer. NOG ve NSG fareleri, kusurlu T ve B hücre fonksiyonu ile sonuçlanan bir Prkdcscid mutasyonu barındırır. Ayrıca, bu fareler il-2, IL-4, IL-4, IL-7, IL-9, IL-15 ve IL-21 gibi birçok anahtar sitokinlerin bağlayıcı komplekslerinde ...

İnsan immün yetmezlik virüsü (HIV) dünya çapında 37 milyondan fazla enfekte bireyler ile kronik bir enfeksiyondur1. Kombinasyon antiviral tedavi (cART) bir hayat kurtarıcı tedavi, ama bir çare hala garanti edilir. Böylece, HIV sürekli araştırma kolaylaştırmak için insan bağışıklık sistemi ve tepkileri ayna hayvan modelleri için bir ihtiyaç vardır. Hücre ve doku engraftment destekleme yeteneğine sahip insanlaşmış farelerin birden fazla türü ciddi immünoeksik fareler içine insan hücreleri nakli ile geliştirilmiştir2. Bu tür insanlaşmış fareler HIV enfeksiyonuna karşı hassastır ve insan olmayan primat simian immün yetmezlik virüs modellerine önemli bir alternatif sağlar, çünkü insan olmayan primatlardan daha ucuz ve kullanımı daha kolaydır. Humanized fareler HIV viral iletim araştırma kolaylaştırdı, patogenez, önleme, ve tedavi3,4,5,6,7,8,9,10,11.
Biz NOD fareler içine kordon kanı kaynaklı insan kök hücreleri nakli tarafından geliştirilen HIV araştırma için esnek bir insanlaştırılmış model sistemi saiyoruz. Cg-PrkdcscidIl2rgtm1Sug/JicTac (NOG) arka plan. Fetal kökenli olmamasının yanı sıra, bu farelerin pratik biyomühendislik daha az teknik olarak kan-karaciğer timus (BLT) yapı nakli dahil mikrocerrahi işlemler egöre talep edilir.
İntravajinal iletim yoluyla HIV enfeksiyonunun nasıl kurulabildiğini ve hassas bir damlacık dijital PCR (ddPCR) tabanlı kurulum la plazma viral yükünün nasıl izlendiğini gösteriyoruz. Daha sonra, günlük fare diyetinin bir parçası olarak verilen standart cART'ın kurulmasını tanımlıyoruz. Bu kombine yöntemlerin amacı hayvanlariçin stresi azaltmak ve her hayvan ın kullanımı nda harcanan sürenin sınırlı olduğu büyük ölçekli deneylerikolaylaştırmaktır 12.
İnsanlarda, bir CCR5Δ32/wt veya CCR5Δ32/ Δ32 genotip verici / kurucu virüsler13ile HIV enfeksiyonuna daha az duyarlılık neden olur , ve bazı önlemler zaman biyomühendislik insanlı fareler kök hücreleri ile HIV çalışmaları amacıyla alınması gerekir. CCR5 genidoğal olarak meydana gelen varyantları, özellikle Δ32 deletiyonları, dünyanın geri kalanına göre İskandinav ve Baltık yerli nüfuslarında daha yaygın olduğu için bu bölgemizde özellikle doğrudur14,15. Bu nedenle protokolümüz, transplantasyon öncesi CCR5 varyantları için donör hematopoetik kök hücrelerin taranması için kolay, yüksek iş akışı testini içermektedir.
İntravajinal maruziyet için biz verici seçti / kurucusu R5 virüsü RHPA4259, intravajinal enfekte oldu enfeksiyonun erken bir aşamasında bir kadından izole16. Fareleri, farelerin çoğunda başarılı bir iletim sağlamak için yeterli olan viral bir doza maruz bıraktık, ama %100 iletim hızının altındaydı. Böyle bir dozun seçilmesi, bir ilaç adayının antiviral etkilerinin HIV önleme deneylerinde korunan hayvanlara ve tedavi çalışmaları için viral yükün azalmasına yol açabileceği şekilde iletim hızında yeterli bir dinamik aralık sağlar.

<table><tbody><tr><td>Mavi ped</td><td>VWR</td><td>56616-031</td><td>Kullanmadan önce sterilize edilmelidir</td></tr><tr><td>Sığır serum albümini (BSA)</td><td>Sigma</td><td>A8022</td><td></td></tr><tr><td>CD19 (klon sj25c1) PE-Cy7</td><td>BD Bioscience</td><td>557835</td><td></td></tr><tr><td>CD3 (klon OKT3) FITC</td><td>Biolegend</td><td>317306</td><td></td></tr><tr><td>CD3 (klon SK7) BUV395</td><td>BD Bioscience</td><td>564001</td><td></td></tr><tr><td>CD34 (klon AC136) FITC</td><td>Miltenyi</td><td>130-113-740</td><td></td></tr><tr><td>CD4 (klon SK3) BUV 496</td><td>BD Bioscience</td><td>564652/51</td><td></td></tr><tr><td>CD45 (klon 2D1) APC</td><td>Biolegend</td><td>368511/12</td><td></td></tr><tr><td>CD8 (klon RPA-T8) BV421</td><td>BD Bioscience</td><td>562428</td><td></td></tr><tr><td>problar için ddPCR Supermix (dUTP yok)</td><td>Bio-Rad</td><td>1863025</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Merck</td><td>10,02,95,21,000</td><td></td></tr><tr><td>DNAse</td><td>Sigma</td><td>D4263</td><td>Süspansiyon tamponu</td></tr><tr><td>dNTP karışımı</td> için <td>Yaşam Teknolojileri</td><td>R0192</td><td></td></tr><tr><td>Dulbeccos fosfat tamponlu salin (PBS)</td><td>Biowest</td><td>L0615-500</td><td></td></tr><tr><td>EasySep İnsan Kordon Kanı CD34 Pozitif Seçim Kiti II</td><td>Kök Hücre</td><td>17896</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>İnvitrojen</td><td>15575-038</td><td></td></tr><tr><td>FACS Lizing çözeltisi 10X</td><td>BD</td><td>349202</td><td>FACS tüplerini kullanmadan hemen önce dH20'de 1:10 oranında seyreltin</td></tr><tr><td>(Falcon 5 mL yuvarlak-botton)</td><td>Falcon</td><td>352052</td><td></td></tr><tr><td>Fc Reseptör bloke edici solüsyon (Human Trustain FcX)</td><td>Biolegend</td><td>422302</td><td></td></tr><tr><td>Fetal sığır serumu</td><td>Sigma</td><td>F8192-500</td><td></td></tr><tr><td>Ficoll-Paque PLUS</td><td>GE Healthcare</td><td>17144002</td><td></td></tr><tr><td>Flowjo v.10</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Gazlı bez</td><td>Mesoft</td><td>157300</td><td>Kullanmadan önce sterilize edilmelidir</td></tr><tr><td>Isıtma lambası</td><td></td><td></td><td>Özel yapım</td></tr><tr><td>Hemasitometre (B&uuml; rker-T&uuml; rk)</td><td>VWR</td><td>DOWC1597418</td><td></td></tr><tr><td>İzofluran gazı</td><td>Orion Pharma</td><td>9658</td><td></td></tr><tr><td>LSR Fortessa X20 akış sitometresi</td><td>BD</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mikrosantrifüj tüpleri, PCR-PT onaylı</td><td>Sarstedt</td><td>72692405</td><td></td></tr><tr><td>Fare cART gıda</td><td>ssniff Spezialdi&auml; ten GmbH</td><td>Özel yapım ürün</td><td></td></tr><tr><td>Fare tutucu</td><td></td><td>Özel yapım ürün</td><td></td></tr><tr><td>İğne, Microlance 3, 30G &frac12; "</td><td>BD</td><td>304000</td><td></td></tr><tr><td>NOG fareleri BAŞINI SALLAR. Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Sug/JicTac</td><td>Taconic</td><td>NOG-F</td><td></td></tr><tr><td>Nükleaz içermeyen su</td><td>VWR kimyasalları</td><td>436912C</td><td></td></tr><tr><td>Nucleospin 96 Virüs DNA ve RNA izolasyon kiti</td><td>Macherey-Nagel</td><td>740691</td><td></td></tr><tr><td>PCR onaylı mikrosantrifüj tüpleri</td><td>Sarstedt</td><td>72.692.405</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin-Streptomisin çözeltisi 100X</td><td>Biowest</td><td>L0022-100</td><td></td></tr><tr><td>Phusion Hot Start II DNA polimeraz</td><td>Life Technologies</td><td>F549S Pipet uçları</td><td></td></tr><tr><td>, steril, ART 20P Bariyer</td><td>ThermoScientific</td><td>2149P</td><td></td></tr><tr><td>Proteinaz K</td><td>NEB</td><td>100005398</td><td></td></tr><tr><td>QuantaSoft yazılımı</td><td>Bio-Rad</td><td></td><td></td></tr><tr><td>QX100 Damlacık Jeneratörü</td><td>Bio-Rad</td><td>1886-3008</td><td></td></tr><tr><td>QX100 Damlacık Okuyucu</td><td>Bio-Rad</td><td>186-3003</td><td></td></tr><tr><td>RBC lizis çözeltisi</td><td>Biolegend</td><td>420301</td><td></td></tr><tr><td>RNaz içermeyen DNAse boyutu F + reaksiyon tamponu</td><td>Macherey-Nagel</td><td>740963</td><td></td></tr><tr><td>RNAseOUT Rekombinant Ribonükleaz inhibitörü</td><td>ThermoScientific</td><td>10777-019</td><td></td></tr><tr><td>RPMI</td><td>Biowest</td><td>L0501-500</td><td>H20</td></tr><tr><td>Softject 1 mL şırınga</td> içinde çözün<td>Henke Sass Wolf</td><td>5010-200V0</td><td></td></tr><tr><td>Üst Simge III Ters Transkriptaz</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>18080044</td><td></td></tr><tr><td>Thermoshaker</td><td></td><td>VWR 89370-910</td><td></td></tr><tr><td>Tripan mavisi</td><td>Sigma</td><td>T8154</td><td></td></tr><tr><td>Ultra saf 0.5 EDTA, pH 8.0</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>15575-020</td><td></td></tr><tr><td>Virkon S (virüs dezenfektanı)</td><td>Dupont</td><td>7511</td><td></td></tr></tbody></table> Sayılı Kanun Hükmünde Kararname

intravajinal hiv maruziyeti ve hiv enfeksiyonu tedavisi için İnsanize nog fareler

Humanized NOG Mice for Intravaginal HIV Exposure and Treatment of HIV Infection

Humanized fareler insan immün yetmezlik virüsü (HIV) virolojisi incelemek ve antiviral ilaçları test etmek için sofistike bir platform sağlar. Bu protokol yetişkin NOG farelerde bir insan bağışıklık sisteminin kurulması nı açıklar. Burada, göbek kordon kanı nın izolasyonundan elde edilen insan CD34+ hücrelerinin ve farelere intravenöz naklinden, modelin HIV enfeksiyonu yoluyla manipülasyonuna, kombinasyon antiretroviral tedaviye kadar tüm pratik adımları açıklıyoruz ( cART) ve kan örneklemesi. Yaklaşık 75.000 hCD34+ hücre farelere intravenöz olarak enjekte edilir ve insan kimerizmi düzeyi, ayrıca insanlaşma olarak da bilinir, periferik kanda akış sitometrisi tarafından aylarca uzunlamasına olarak tahmin edilmektedir. Toplam 75.000 hCD34+ hücre periferik kanda %20-50 insan CD45+ hücresi verir. Fareler HIV ile intravajinal enfeksiyona duyarlı dır ve kan analiz için haftada bir kez ve uzun süre ler için ayda iki kez örneklenebilir. Bu protokol, damlacık dijital PCR (ddPCR) kullanarak plazma viral yük nicelik için bir test açıklar. Farelerin diyette standart bir cART rejimi ile nasıl etkili bir şekilde tedavi edilebildiğini gösteriyoruz. Düzenli fare chow şeklinde cART teslim deneysel modelin önemli bir arıtma olduğunu. Bu model hem sistemik hem de topikal ön pozlama profilaksisi bileşiklerinin klinik öncesi analizinde ve yeni tedavilerin ve HIV kür stratejilerinin test edilmesinde kullanılabilir.

Kök hücre saflık analizi için gating stratejisi Şekil 1'degösterilmiştir. Şekil 1A-C saflaştırılmış CD34+ popülasyonunu ve Şekil 1D-F...

Biz nesil ve insanlaşmış ve insan immün yetmezlik virüs enfekte NOG fare modeli kök hücre nakli, intravajinal insan immün yetmezlik virüsü maruz kalma ve damlacık dijital PCR RNA dayalı değerlendirilmesi için bir protokol geliştirdik Miktar.

Intravajinal HIV Maruziyeti ve HIV Enfeksiyonu Tedavisi için İnsanize NOG Fareler

Humanized mice provide a sophisticated platform to study human immunodeficiency virus (HIV) virology and to test antiviral drugs. This protocol describes ...

Bu insancıl fare modeli nin oluşturulması klinik öncesi HIV araştırma çalışmalarına yardımcı olabilir. Örneğin, hem farklı viral suşları ve yeni HIV müdahaleleri değerlendirilebilir. Bu protokoller kök hücre donörü CCR5 varyant durumunu değerlendirmek ve insanlaşmış farelere HIV bulaştırmak ve fare plazmaviral yüklerini ölçmek için kullanılabilir.RNA niceleme protokolü, plazma örneklerinde saptanabilen herhangi bir viral RNA dizisini ölçmek için kolayca uyarlanabilir. CCR5 delta 32 varyantları için kordon kanı örneklerinin genetik taraması için, 200 mikromolar dNTP karışımı içeren 11,25 mikrolitre PCR karışımı, yüksek sadakatli DNA polimeraz mikrolitre başına 0,01 birim ve tabloda ayrıntılı olarak ileri ve ters astarlar ile 1.25 mikrolitre peletli olmayan akış inkübat. Çekirdeğiz su ile hacmi her PCR reaksiyonu için yaklaşık 12,5 mikrolitreye ayarlayın ve tabloda belirtildiği gibi PCR bisiklet programı ile genomik parçaları yükseltin.Reaksiyonun sonunda, PCR ürünlerini %2 agarose jel üzerinde ayırın. Yabani tip alellerden ve delta 32 alelden pcr ürünleri sırasıyla 196 baz çifti ve 164 baz çiftinin PCR parçalarını verimleyerek bantları jel elektroforez ile kolayca ayırt edilebilir hale getirir. Intravajinal HIV maruziyeti için, farenin bulunacağı çalışma alanının merkezine odaklanmış bir ısıtma lambası yerleştirin ve kaputun içine uygun bir pipet içine steril 20 mikrolitrelik pipet uçları yerleştirin.Virüs le temas etmiş herhangi bir malzeme ve sıvıhemen aktivasyonu için kaputiçine sıvı dezenfektan ile bir konteyner yerleştirin. Anestezili fareyi, kapağın arkasına bakan farenin kuyruğuyla lambanın altındaki supine pozisyonunda steril mavi bir pedin üzerine yerleştirin ve faredeki pedal refleksine yanıt eksikliğini onaylayın. Kuyruğun dibinde hayvan kavramak.Fareyi kuyruk tabanından yavaşça kaldırarak, hayvanı baş aşağı dik pozisyonda destekleyin. Rektumun boşaltımına neden olmak ve vajina üzerindeki baskıyı hafifletmek için anüse doğru hafifçe okşayarak genital bölgeyi uyarmak için steril bir boru ucu kullanın. Vajinal açıklığı ortaya çıkarmak için fare kuyruğunu dikkatlice parmakların üzerinde sarın, vulva doğal olarak açılır.Yeni bir pipet ucu kullanarak, vajinal açılış düzeyinde ucu yerleştirin ve atravmatik vajina içine virüsün 20 mikrolitre serbest, yerçekimi vajina içine viral süspansiyon çekmek için izin. Tüm virüs teslim edildiğinde, virüsün yerçekimine bağlı sızıntısını önlemek için fareyi bu pozisyonda beş dakika tutun. Daha sonra fareyi dikkatlice supine pozisyonundaki ev kafesine geri döndürün ve tam iyileşme yenekadar izleyin.Çözülmüş fare plazma örneklerinden RNA'yı izole etmek için, üreticinin talimatlarına göre bir virüs RNA izolasyon kiti kullanın. Sütuna bağlanan örneği ekleyin ve plazma numunesindeki tüm DNA'nın çıkarılmasını sağlamak için sütun üzerine bir DNase tedavi adımı ekleyin. Daha sonra RNA örneklerini en az bir saat boyunca 80 derecede saklayın.CDNA sentezlemek için, rdna bozulmasını önlemek için cDNA reaksiyonu içinde bir RNase inhibitörü0.5 mikrolitre de dahil olmak üzere standart protokollere göre ters transkriptaz kullanın, sonra tabloda ayrıntılı olarak cDNA sentezi yapmak ve en az bir saat için 80 santigrat derece cDNA örnekleri saklamak. DdPCR için numune hazırlamak için, polimeraz ve dNTPs içeren 11 mikrolitre ddPCR prob reaksiyon karışımını, tabloda belirtildiği gibi, küçük oluk bağlama probundan 250 nanomolar ve ileri ve geri astarların her birinin 900 nanomolar'ı ile karıştırın. Her cDNA örneğinden üç mikrolitre ekleyin ve toplam PCR hacimlerini çekirdeksiz suyla 22 mikrolitreye ayarlayın.PCR karışımlarını emülsifiye etmek için üreticinin protokolüne göre bir damlacık jeneratör probları için damlacık üretimi yağı kullanın. Ardından, tabloda belirtildiği gibi PCR programını çalıştırın. Doğrulanmış HIV enfeksiyonu sonrası cART tedavisi için, fareleri tabloda belirtildiği gibi standart bir cART rejimi içeren harici bir satıcı tarafından hazırlanan peletlerle besleyin.Kolayca sıradan fare chow ayırt etmek ve standart kahverengi renk te cART olmadan bir kontrol chow diyet kullanmak için kırmızı renkli cART diyet kullanın. Tedavinin başlatılması için, fareleri eski kafesten yeni kafese aktarmadan önce cART içeren chow diyetini steril kafeslere yerleştirin. Daha sonra farelerin ağırlıklarını izleyin ve farelerin değişime uyum sağladığından emin olmak için her gün cART içeren chow tüketimini kontrol edin.Burada, kök hücre saflığının analizi için akış sitometri sitometri sitometri sitasyon stratejisi, izole CD34 pozitif kök hücrelerin saflığı genellikle % 85 ila%95 arasında değişen ve %1'den az T hücre kontaminasyonu ile betimlenmiştir. PCR analizi saflaştırılmış donör kök hücrelerin CCR5 varyant durumunu göstermektedir, CCR5 delta 32 heterozigot donörler kolayca tanımlanabilir hale. 19 donörden oluşan bir grupta mutant genotip sıklığı İskandinav popülasyonlarının daha büyük epidemiyolojik çalışmaları ile uyum içinde yaklaşık% 15.8 idi.Alıcı fareleriçine 7.5 kez 10 10 adoptive transferi üç ila beş ay sonra, alıcı hayvan periferik kan örneklerinden elde edilen beyaz kan hücrelerinin% 20-50 insan CD45 pozitif hücreler ve fareler insan B ve T hücreleri gelişmiş olacak. Farelerin%64'ü gösterildiği gibi vajinal maruziyet sonrasında HIV ile enfekte olur. Standart cART içeren 40 günlük bir diyete geçtikten dört hafta sonra, HIV pozitif farelerdeki viral yükler algılama sınırının altına düşer.Diyetin kesilmesinden sonra virüs rebound, klinik verileri yansıtan. Daha da önemlisi, cART fareler iyi diyet değişikliği tolere. Bu hayvanların bağışıklık eksikliği ve bu nedenle çevreye karşı savunmasız olduğunu hatırlamak çok önemlidir.Aseptik tekniklere bağlı kalmak genel hayvan sağlığını ve protokol başarısını artıracaktır. HIV enfeksiyonu için insanlaşmış fare kohortunun kurulmasından sonra, protokol dokularda viral RNA nicelleştirme veya farklı viral suşlarda yeni müdahalelerin test edilmesi için uyarlanabilir. HIV enfeksiyonu çalışmaları için insanlaşmış farelerin esnekliği ve erişilebilirliği HIV virolojisi, immünoloji ve tedavi araştırmalarında kritik ilerlemeyi sağlamıştır.Bulaşıcı HIV içeren protokolleri denemeden önce, yerel çalışma ortamı yetkililerinden onay aldığından ve onaylı dekontaminasyon prosedürlerine uyduktan emin olun.

humanized-nog-mice-for-intravaginal-hiv-exposure-treatment-hiv

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Bu video, insan immün yetmezlik virüsü-1 (HIV-1) ile enfekte insanlaştırılmış fare modelinde oral kombine antiretroviral tedavinin (oral cART) etkinliğini değerlendirmek için bir testi göstermektedir. Nükleozid ters transkriptaz inhibitörleri ve integraz iplikçik transfer inhibitörleri dahil olmak üzere HIV-1'i hedef alan ilaçların bir kombinasyonu, bir besin takviyesi ve antibiyotiklerle birlikte uygulanır. Bu karışımın HIV-1 ile enfekte olmuş insanlaştırılmış fareler tarafından tüketilmesinin...

İnsanlaştırılmış Bir Fare Modelinde HIV-1 Enfeksiyonunu Tedavi Etmek için Oral Kombinasyonel Antiretroviral Tedavi

Video, insan immün yetmezlik virüsüne (HIV) karşı kök hücre tabanlı tasarlanmış bağışıklığa sahip insanlaştırılmış bir fare modeli oluşturma tekniğini göstermektedir. İnsan fetal timus dokusu ve tasarlanmış hematopoietik kök hücreler (HSC'ler), bağışıklığı ciddi şekilde baskılanmış bir farenin böbrek kapsülüne implante edilir. HIV'e karşı kimerik antijen reseptörlerini (CAR'lar) eksprese eden HSC'ler, timus dokusu ile birlikte lokalizasyonlarını destekleyen jelatinimsi bir protein karışımı...

HIV'e Karşı Tasarlanmış Bağışıklığa Sahip İnsanlaştırılmış Bir Fare Modeli Oluşturma

Bu protokol, HIV enfeksiyonuna karşı kök hücre tabanlı tasarlanmış bağışıklığa sahip insanlaştırılmış bir kemik iliği/karaciğer/timus fare modeli oluşturma yöntemlerini açıklar.

Insanlaşmış Fare Modelinde HIV enfeksiyonuna karşı kök hücre Tabanlı Engineered Bağışıklık

Bu iletişim kuralı radyasyon şartına yenidoğan NSG fareler içine insan hematopoetik kök hücre intrahepatic enjeksiyon yoluyla insanlaşmış fareler (hu-NSG) kurmak için bir yöntem sağlar. Hu-NSG fare duyarlı HIV enfeksiyonu ve kombinatorik antiretroviral tedavi (sepet) ve HIV çoğaltma ve gecikme süresi incelemeler için uygun bir patofizyolojik model olarak hizmet vermektedir.

İnsanlaşmış NOD/SCID/IL2rγnull (hu-NSG) fare modeli HIV çoğaltma ve gecikme süresi çalışmaları için

Bu protokol, hem insan bağışıklık sistemi hem de karaciğer hücreleri ile insanlaşmış fareler kurmak için güvenilir bir yöntem sağlar. İnsan hepatositlerinin intrasplenik enjeksiyonu ve CD34+ hematopoetik kök hücrelerin insplektik enjeksiyonu ile elde edilen çift immünoeksik fareler insan immün yetmezlik virüsü-1 enfeksiyonuna yatkındır ve gözlendiği gibi karaciğer hasarına recapitulate HIV bulaşmış hastalar.

HIV ile ilişkili Karaciğer Patogenezi için Çift İnsanize TK-NOG Fare Modelinin Oluşturulması

Burada insanlaşmış farelerde HIV enfeksiyonu dinamikleri incelenmesi için üç deneysel yaklaşımlar açıklanmıştır. İlk ivedi kronik enfeksiyon olaylarının incelenmesine izin vererken, ikincisi primer enfeksiyon veya viral reaktivasyon sonrası akut olayların incelenmesine izin verir.

Humanized Immunoficient Mouse Modellerinde Kronik, Akut ve Yeniden Aktive HIV Enfeksiyonu

Bu protokol, insanlaştırılmış farelerde HIV-1 RNA replikasyonunu başarılı bir şekilde baskılayan oral kombinasyonel antiretroviral ilaçlar vermek için yeni bir yöntemi açıklamaktadır.

HIV-1 Enfekte İnsanlaştırılmış Farelerde Oral Kombinasyonel Antiretroviral Tedavi

Bu protokol, EcoHIV enfeksiyonunun Tmem119-EGFP fareleri ile kombinasyonunun, HIV ile ilişkili nörobilişsel bozuklukların kemirgen modellerinde mikroglial değişiklikleri ve viral rezervuarları araştırmak için nasıl değerli bir biyolojik sistem sunduğunu açıklar.

Mikroglia ile Manipüle Edilmiş Transgenik Farelerde EcoHIV ile Enfekte Hücrelerin Tanımlanması

Bu görüntülenmiştir deney canlı konfokal görüntüleme deneyleri için HIV floresan moleküler klon kullanan için bir rehber.

HIV ve Live Konfokal Mikroskop Floresan Klonlar kullanılarak HIV görselleştirme Hücre-hücre Transferi

HIV tropizm viral zarf V3 bölge anlaşılmaktadır. V3 PCR, iç içe geçmiş RT-PCR, sıralı kullanarak üç nüsha olarak amplifiye ve biyoinformatik yazılımı kullanılarak yorumlanır. Örnekleri dizisi G2P puanları düşük olan 1 veya daha fazla (ler) ile non-R5 virüsü olarak sınıflandırılır.

HIV-1 tropizm genotipik Çıkarım kullanarak Nüfus tabanlı Sıralama V3

Öğrenin, insanize NOG farelerde intravajinal HIV maruziyeti ve tedavi protokollerini. Kök hücre nakli, viral yük kantitatifikasyonu ve CCR5 varyant taraması yöntemleriyle klinik öncesi HIV araştırmaları için değerli bir model sunar.

Intravajinal HIV Maruziyeti ve HIV Enfeksiyonu Tedavisi için İnsanize NOG Fareler

Daha fazla video keşfet