Name: Biyoaktif Küçük Moleküllerin, Peptidlerin Doğal Kaynaklardan ve Proteinlerden Preparatif İzoelektrik Odaklama (IEF) Yöntemi ile Mikroplardan Ayrılması (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-06-14T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 57 s
Description: Keşfedin, sıvı faz izoelektrik odaklama (IEF) yöntemiyle doğal kaynaklardan biyoaktif küçük moleküllerin ve peptidlerin ayrılması. Bu protokol, terapötik uygulamalar için biyoaktif bileşiklerin izolasyonunda araştırmacılara güvenilir bir yöntem sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Biz Biyoloji Bölümü ve Johnson Kanser Araştırma Merkezi BRIEF ve IRA ödülleri için, sırasıyla GV için finansman kaynakları için müteşekkiriz. Ayrıca RV için K-INBRE doktora sonrası ödül teşekkür ederiz. Bu çalışma kısmen P20 GM103418 hibe numarası altında Ulusal Sağlık Enstitüleri Genel Tıp Bilimleri Enstitüsü'nden Kurumsal Gelişim Ödülü (IDeA) tarafından desteklenmiştir. İçerik sadece yazarların sorumluluğundadır ve Ulusal Genel Tıp Bilimleri Enstitüsü'nün veya Ulusal Sağlık Enstitüleri'nin resmi görüşlerini temsil etmek zorunda değildir. Biz yararlı yorumlar için anonim yorumcular teşekkür ederiz.

1. Standart sıvı fazlı IEF ünitesinin kurulumu ve ön çalıştırımı
<ol><li>Sıvı fazlı IEF elektrotlarını (ano-kırmızı düğme ve katot-siyah düğme) kullanım kılavuzuna göre kendi değişim membranları ile birleştirin (bkz. Malzeme Tablosu). Yeni membranlar kullanıldığında anyon değişim membranlarını 0,1 M NaOH ve 0,1 M H3PO4 ile katyon değişim membranlarını en az 16 saat e-posta ile dengeleyin.<ol>
<li>Membranları elektrolitlerde (0,1 M NaOH veya 0,1 M H3PO4)çalışır ve kurumasını bekleyin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>İyon değişimi contalarında üç dikdörtgen deliği hizalayarak elektrotun iç ve dış kısmını birleştirin. Membranların kurumasını önlemek için elektrotları ilgili elektrolitlerle (~25-30 mL) doldurun.<ol>
<li>Elektrot içinde basınç oluşturup sızıntıya neden olabilecek fazlalık (elektrot odasıhacminin 1/3'ünden fazla) elektrolit eklemeyin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Numune toplama bağlantı noktalarını, alet montaj parçalarıyla birlikte gelen sızdırmazlık bandıyla kapatın (bkz. Malzeme Tablosu). Örnek toplama bağlantı noktaları tarafı, iki dikey metal hizalama pimi ile tanımlanabilir. Alternatif olarak, bağlantı noktalarını kapatmak için standart sızdırmazlık bandı kullanın.</li>
	<li>Seramik soğutma parmağı üzerinde odaklama odası montajının tüm parçalarını sırayla (anot elektrodu, naylon membran çekirdeği, odaklama odası ve katot elektrodu) birleştirin.</li>
	<li>50 mL şırınga kullanarak odaklama odasını önceden soğutulmuş distile suyla (standart IEF hücresi için toplam 60 mL hacim) doldurun.</li>
	<li>Sıvı fazlı IEF cihazını 4 ºC'de sirkülasyonlu bir soğutma suyuna bağlayın ve üniteyi 15 W ve 3.000 V'da 3-5 dk veya gerilim dengeleyene kadar önceden çalıştırın. NOT: Genellikle, bir dakika içinde, gerilim maksimum ayar değerlerine ulaşacaktır. Distile su ile prerunning odaklama odası ve naylon membran çekirdek artık iyonları kaldırmak için yardımcı olur.</li>
	<li>Güç kaynağını kapatın ve fraksiyon toplayıcısını kullanarak hücreden suyu çıkarın. Toplama bağlantı noktalarını sızdırmazlık bandıyla yeniden kapatın. NOT: Şimdi cihaz adım 2.4 kullanıma hazırdır.</li>
</ol>2. Gymnema sylvestre ekstresinden küçük molekül ve peptidlerin ayrılması ve saflaştırılması
<ol><li>Bitki ekstresinin 0,6 g'ını ölçün ve distile suda (60 mL) 5 dakika boyunca bir rulo tüpe karıştırılarak çözün. NOT: Çözünür ve tuzsuz herhangi bir biyolojik numune bu IEF cihazı kullanılarak ayırma ve arıtma için kullanılabilir. 10 mM'ye kadar tamponlama tuz konsantrasyonu olan numuneler hafif çözünürlükte kullanılabilir. Biz triterpenoid bileşiklerin saponin aile ilgileniyoruz, jimnastik asitleri, G. sylvestre bitki kendi benzersiz antifungal özellikleri için16.</li>
	<li>Çözünmez parçacıkları kaldırmak için 5 dk için 10.000 x g çözünür bitki ekstresi santrifüj.</li>
	<li>Supernatant'ı (~60 mL) 80 mL'lik bir santrifüj tüpüne aktarın ve 0,6 mL amperat (pH 3-10) ile %1(v/v) ile karıştırın.</li>
	<li>Sıvı fazlı IEF ünitesini hazırlamak için 1.1 – 1.7 adımlarını izleyin. Oda şimdi numuneyi yüklemeye hazır.</li>
	<li>1-1/2 inç 19 G künt uç iğnesi (aletle birlikte gelir) ile 50 mL şırınga kullanın ve hazırlanan numuneyi numune toplama bağlantı noktalarından hücreye ampholyte (toplam 60 mL) yükleyin.</li>
	<li>Odakhücreyi standdan çıkararak ve kabarcıkları çıkarmak için elektrot odasına dokunarak örnek hücreden hava kabarcıklarını çıkarın. Hava kabarcıklarının varlığı gerilim ve akım dalgalanmalarına neden olur ve koşmayı etkiler.</li>
	<li>Üniteyi su soğutucuya (4 °C) bağlayın ve sabit 15 W'lık güç kaynağıyla fraksiyona başlayın.</li>
	<li>Cihazı 3 saat veya voltaj sabit bir değere ulaşana kadar çalıştırın. NOT: Numune netlenmeye başladığında, gerilim sabit bir değere ulaşıncaya kadar kademeli olarak tırmanmaya başlar.</li>
	<li>Koşudan sonra, IEF ünitesinde hasat düğmesine basarak vakum pompasına bağlı hasat kutusundaki kesirleri (20 plastik tüp, 12 mm x 75 mm, 5-6 mL hacim içeren) toplamaya hazırolun.</li>
	<li>20 toplama pimlerini, bantla mühürlenmiş odak hücrenin 20 toplama bağlantı noktalarıyla hizalayın.</li>
	<li>Toplama pimlerini sızdırmazlık bandına itin ve vakum pompasını aynı anda Açın (Bkz. Şekil 2B, 2C & 2D). NOT: Her odadan yaklaşık 3 mL kesir her defası tüplere toplanır. Kesirler sonraki downstream uygulamaları için kullanılabilir (Peptit niceleme için SDS-PAGE, TLC ve küçük moleküller için biyoassay).</li>
</ol>3. Proteinlerin C. albicanlardan ayrılması ve saflaştırılması
<ol><li>Maya-peptone-dekstroz (YPD) suyu16 30 °C'de bir gecede sallayarak (200 rpm) C. albicans tek koloni büyümek.</li>
	<li>Mayan hücreleri santrifüj (5 dk için 10.000 x g) toplayın.</li>
	<li>% 1 (v/v) beta-mercaptoetanol (β-ME) (kültür hacminin 1/10'u) içeren amonyum karbonat (1.89 g/L) tampondaki C. albicans maya hücrelerini askıya alın ve 5 °C15'te1 saat silindir tüpünde döndürün.</li>
	<li>Maya hücrelerini santrifüj (5 dk için 10.000 x g) çıkarın ve protein ekstresini 0,45 μm'lik bir filtreden filtreleyin. NOT: C. albicans sitosol, membran veya hücre duvarından alınan protein örnekleri IEF fraksiyonu için hazırlanabilir ve kullanılabilir. Benzer şekilde, bakteri veya diğer biyolojik örneklerden (hayvan dokusu ekstresi) proteinler uygun yöntemlerle(örneğin,diyaliz veya tuzsuzsütunlar kullanılarak) herhangi bir tuz çıkarıldıktan sonra kullanılabilir.</li>
	<li>4 °C'de 15 saat boyunca bir diyaliz tüpünde (3.500 MWCO) protein ekstresini 15 saat boyunca diyaliz tüpünde diyalize alın. Standart17olarak gama globulin kullanarak Bradford boya bağlama yöntemi ile protein konsantrasyonu tahmin .</li>
	<li>Fraksiyonu için %1 (v/v) amper (pH 5-8) içeren 60 mL suda toplam proteinin 500 mg'ını kullanın. NOT: Geniş menzilli bir ampholyte (pH 3-10) C. albicans bazı non-glucan bağlı hücre duvarı proteinleri zenginleştirmek olmadığından, dar aralıklı (pH 5-8) ampholyte kullanın. Örnek protein konsantrasyonu 2 mg/mL'den fazla ise %2'ye varan bir amper konsantrasyonu kullanılabilir; bu odaklama sırasında protein toplama en aza indirir. Örnekleri, amperleri ve suyu her zaman buzüzerinde bekletin.</li>
	<li>IEF ünitesini hazırlamak için 1.1- 1.7 adımlarını tekrarlayın ve protein çözeltisini 3.6 adımdan iEF hücresine yüklemek için kullanın.</li>
	<li>Sabit bir 15 W odaklanarak 4 saat sonra, hasat protein fraksiyonları (1-20) yukarıda açıklandığı gibi (adım 2.9-2.11) ve protein örnekleri azaltarak ve kaynatıldıktan sonra% 12.5 SDS-PAGE analiz18.</li>
	<li>SDS-PAGE jelini Coomassie mavi boya (%0.01) ile boyanarak çözünmüş proteinleri lekeleyin bir rocker üzerinde oda sıcaklığında 2-3 saat için çözelti. Jel destain ve jel görüntüleyici kullanarak jel görüntü kaydedin. NOT: Coomassie mavi boya (%0.01) %40 metanol ve %10 asetik asit içeren bir destaining çözeltisi içinde 0.01 g Coomassie mavisi tozu karıştırılarak hazırlanabilir.</li>
</ol>4. Bitki özü Gymnema sylvestre saflaştırılmış küçük moleküllerin biyoaktivite
<ol><li>Adım 3.1 gibi maya hücrelerinde C. albicans grow.</li>
	<li>Hücre süspansiyon hazırlamak için, C. albicans maya hücreleri (1/1000 seyreltme) yeni bir RPMI hücre kültürü orta 50 mM glikoz ile takviye içine bir gecede kültür seyreltmek. NOT: C. albicans hyphal indükleme koşulları altında (RPMI 37 °C) altında maya büyüme hyphae dönüştürür. Jimnastikasit küçük moleküllerhypha indükleyici koşullar altında hyphae içine maya hücrelerinin dönüşümü inhibe gösterilmiştir16. Sıvı faz-IEF ayrılmış G. sylvestre ekstresinin bu biyoaktif molekülleri içerip içermediğini belirlemeyi amaçladık.</li>
	<li>Hazırlanan hücre süspansiyonundan, 96 kuyulu plakanın her kuyuya 90°L ekleyin.</li>
	<li>Her fraksiyondan (Sıvı faz IEF'den elde edilen G. sylvestre ekstresinin 1-20 kesirleri, Şekil 4),yukarıdaki hücre süspansiyonunun 90 μL'si ile kuyulara 10°L ekleyin (adım 4.2). Tayini triplicate olarak gerçekleştirin.</li>
	<li>Ampholyte içeren 10 μL su ekleyin (%1) 90 μL C. albicans maya hücre süspansiyon u negatif kontrol olarak ayrı kuyulara. NOT: Amperatlar biyoaktivite potansiyeline sahiptir ve bu nedenle herhangi bir biyoassay yaparken bir amfide kontrol dahil etmek esastır19.</li>
	<li>96 kuyulu plakayı 37 °C'de 12 saat kuluçkaya yatırın ve C. albicans mayadan hypha'ya inhibisyonu mikroskop16altında gözlemleyin. Ayrıca, maya-hypha dönüşüm inhibisyonu yüzdesini belirlemek.</li>
</ol>

<ol><li>Jankowska, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimized+procedure+of+extraction%2C+purification+and+proteomic+analysis+of+nuclear+proteins+from+mouse+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Optimized procedure of extraction, purification and proteomic analysis of nuclear proteins from mouse brain.</a> Journal of Neuroscience Methods. 261, 1-9 (2016).</li>
<li>Pergande, M. R., Cologna, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isoelectric+Point+Separations+of+Peptides+and+Proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Proteomes%22%5BJournal%5D)">Isoelectric Point Separations of Peptides and Proteins.</a> Proteomes. 5 (1), (2017).</li>
<li>Stoyanov, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IEF-based+multidimensional+applications+in+proteomics%3A+toward+higher+resolution%5BTitle%5D)+AND+%22Electrophoresis%22%5BJournal%5D)">IEF-based multidimensional applications in proteomics: toward higher resolution.</a> Electrophoresis. 33 (22), 3281-3290 (2012).</li>
<li>Vesterberg, O. A. Y. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aVesterberg%2C+OAY+%22Method+of+Isoelectric+Fractionation%22">Method of Isoelectric Fractionation</a>. , US3485736A (1964).</li>
<li>Vesterberg, O., Svensson, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isoelectric+fractionation%2C+analysis%2C+and+characterization+of+ampholytes+in+natural+pH+gradients.+IV.+Further+studies+on+the+resolving+power+in+connection+with+separation+of+myoglobins%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Chemica+Scandinavica%22%5BJournal%5D)">Isoelectric fractionation, analysis, and characterization of ampholytes in natural pH gradients. IV. Further studies on the resolving power in connection with separation of myoglobins.</a> Acta Chemica Scandinavica. 20 (3), 820-834 (1966).</li>
<li>Righetti, P. G. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRighetti%2C+PG+%22Isoelectric+Focusing%3A+Theory%2C+Methodology+and+Applications%22">Isoelectric Focusing: Theory, Methodology and Applications</a>. , Elsevier Science. 1(1983).</li>
<li>Vesterberg, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthesis+and+Isoelectric+Fractionation+of+Carrier+Ampholytes%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Chemica+Scandinavica%22%5BJournal%5D)">Synthesis and Isoelectric Fractionation of Carrier Ampholytes.</a> Acta Chemica Scandinavica. 23, 2653-2666 (1969).</li>
<li>Bier, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recycling+isoelectric+focusing+and+isotachophoresis%5BTitle%5D)+AND+%22Electrophoresis%22%5BJournal%5D)">Recycling isoelectric focusing and isotachophoresis.</a> Electrophoresis. 19 (7), 1057-1063 (1998).</li>
<li>Bier, M., Palusinski, O. A., Mosher, R. A., Saville, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrophoresis%3A+mathematical+modeling+and+computer+simulation%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Electrophoresis: mathematical modeling and computer simulation.</a> Science. 219 (4590), 1281-1287 (1983).</li>
<li>Ayala, A., Parrado, J., Machado, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+Rotofor+preparative+isoelectrofocusing+cell+in+protein+purification+procedure%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+Biochemistry+and+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Use of Rotofor preparative isoelectrofocusing cell in protein purification procedure.</a> Applied Biochemistry and Biotechnology. 69 (1), 11-16 (1998).</li>
<li>Wagner, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+dipeptidyl+peptidase+IV+%28DP+4%29+isoforms+from+porcine+kidney+by+preparative+isoelectric+focusing+to+improve+crystallization%5BTitle%5D)+AND+%22Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Isolation of dipeptidyl peptidase IV (DP 4) isoforms from porcine kidney by preparative isoelectric focusing to improve crystallization.</a> Biological Chemistry. 392 (7), 665-677 (2011).</li>
<li>Hosken, B. D., Li, C., Mullappally, B., Co, C., Zhang, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+Characterization+of+Monoclonal+Antibody+Charge+Variants+by+Free+Flow+Isoelectric+Focusing%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Isolation and Characterization of Monoclonal Antibody Charge Variants by Free Flow Isoelectric Focusing.</a> Analytical Chemistry. 88 (11), 5662-5669 (2016).</li>
<li>Yu, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Francisella+tularensis+T-cell+antigen+identification+using+humanized+HLA-DR4+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Vaccine+Immunology%22%5BJournal%5D)">Francisella tularensis T-cell antigen identification using humanized HLA-DR4 transgenic mice.</a> Clinical Vaccine Immunology. 17 (2), 215-222 (2010).</li>
<li>Riyong, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Size+and+charge+antigens+of+Dirofilaria+immitis+adult+worm+for+IgG-ELISA+diagnosis+of+bancroftian+filariasis%5BTitle%5D)+AND+%22Southeast+Asian+Journal+of+Tropical+Medicine+and+Public+Health%22%5BJournal%5D)">Size and charge antigens of Dirofilaria immitis adult worm for IgG-ELISA diagnosis of bancroftian filariasis.</a> Southeast Asian Journal of Tropical Medicine and Public Health. 41 (2), 285-297 (2010).</li>
<li>Vediyappan, G., Bikandi, J., Braley, R., Chaffin, W. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+surface+proteins+of+Candida+albicans%3A+preparation+of+extracts+and+improved+detection+of+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Electrophoresis%22%5BJournal%5D)">Cell surface proteins of Candida albicans: preparation of extracts and improved detection of proteins.</a> Electrophoresis. 21 (5), 956-961 (2000).</li>
<li>Vediyappan, G., Dumontet, V., Pelissier, F., d'Enfert, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gymnemic+acids+inhibit+hyphal+growth+and+virulence+in+Candida+albicans%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Gymnemic acids inhibit hyphal growth and virulence in Candida albicans.</a> PLoS One. 8 (9), 74189(2013).</li>
<li>Bradford, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rapid+and+sensitive+method+for+the+quantitation+of+microgram+quantities+of+protein+utilizing+the+principle+of+protein-dye+binding%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding.</a> Analytical Biochemistry. 72, 248-254 (1976).</li>
<li>Laemmli, U. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cleavage+of+structural+proteins+during+the+assembly+of+the+head+of+bacteriophage+T4%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4.</a> Nature. 227 (5259), 680-685 (1970).</li>
<li>Riazi, S., Dover, S., Turovskiy, Y., Chikindas, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Commercial+ampholytes+used+for+isoelectric+focusing+may+interfere+with+bioactivity+based+purification+of+antimicrobial+peptides%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Microbiological+Methods%22%5BJournal%5D)">Commercial ampholytes used for isoelectric focusing may interfere with bioactivity based purification of antimicrobial peptides.</a> Journal of Microbiological Methods. 71 (1), 87-89 (2007).</li>
<li>Kamei, K., Takano, R., Miyasaka, A., Imoto, T., Hara, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amino-Acid-Sequence+of+Sweet-Taste-Suppressing+Peptide+%28Gurmarin%29+from+the+Leaves+of+Gymnema-Sylvestre%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Amino-Acid-Sequence of Sweet-Taste-Suppressing Peptide (Gurmarin) from the Leaves of Gymnema-Sylvestre.</a> Journal of Biochemistry. 111 (1), 109-112 (1992).</li>
<li>Craik, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemistry.+Seamless+proteins+tie+up+their+loose+ends%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Chemistry. Seamless proteins tie up their loose ends.</a> Science. 311 (5767), 1563-1564 (2006).</li>
<li>Craik, D. J., Daly, N. L., Bond, T., Waine, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plant+cyclotides%3A+A+unique+family+of+cyclic+and+knotted+proteins+that+defines+the+cyclic+cystine+knot+structural+motif%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Plant cyclotides: A unique family of cyclic and knotted proteins that defines the cyclic cystine knot structural motif.</a> Journal of Molecular Biology. 294 (5), 1327-1336 (1999).</li>
<li>Stoecklin, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemistry+and+physiological+properties+of+gymnemic+acid%2C+the+antisaccharine+principle+of+the+leaves+of+Gymnema+sylvestre%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Agricultural+and+Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Chemistry and physiological properties of gymnemic acid, the antisaccharine principle of the leaves of Gymnema sylvestre.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 17 (4), 704-708 (1969).</li>
<li>Liu, H. M., Kiuchi, F., Tsuda, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+structure+elucidation+of+gymnemic+acids%2C+antisweet+principles+of+Gymnema+sylvestre%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+%26+Pharmaceutical+Bulletin+%28Tokyo%29%22%5BJournal%5D)">Isolation and structure elucidation of gymnemic acids, antisweet principles of Gymnema sylvestre.</a> Chemical & Pharmaceutical Bulletin (Tokyo). 40 (6), 1366-1375 (1992).</li>
<li>Veerapandian, R., Vediyappan, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gymnemic+Acids+Inhibit+Adhesive+Nanofibrillar+Mediated+Streptococcus+gordonii-Candida+albicans+Mono-Species+and+Dual-Species+Biofilms%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Gymnemic Acids Inhibit Adhesive Nanofibrillar Mediated Streptococcus gordonii-Candida albicans Mono-Species and Dual-Species Biofilms.</a> Frontiers in Microbiology. 10, 2328(2019).</li>
<li>Chaffin, W. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Candida+albicans+cell+wall+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiology+and+Molecular+Biology+Reviews%22%5BJournal%5D)">Candida albicans cell wall proteins.</a> Microbiology and Molecular Biology Reviews. 72 (3), 495-544 (2008).</li>
</ol>

Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarları beyan etmek istiyorum.

Doğal ürün kaynaklarından (örneğin, bitkiler) gelen küçük moleküller, kimyasal yapı olarak oldukça çeşitli karmaşık ikincil metabolitleri içerir. Onlar bitki savunma mekanizmaları dahil olduğuna inanılmaktadır. Buna ek olarak, polipeptidler de bitki dokularında mevcuttur22. Bu doğal ürün küçük moleküller ilaç keşif ve geliştirme için test moleküllerinin zengin kaynaklarıdır. Ancak, izolasyon ve arınma için gerekli zor ve sıkıcı yöntemler terapötik uygulamalar için kullanımını sınırlar. Bu raporda ...

Biyomoleküllerin karmaşık biyolojik numunelerden arındırışı biyolojik deneylerde önemli ve çoğu zaman zor bir adımdır1. İzoelektrik odaklama (IEF), taşıyıcı amperatların yüklerine göre seyahat ettikleri ve bir elektrik alanında pH gradyanı nın oluşturuldukları karmaşık biyomoleküllerin yüksek çözünürlüklü ayrımı için uygundur3. IEF için ilk ticari taşıyıcı ampholyte Olof Vesterberg tarafından 1964 yılında geliştirilen ve patentli4,5. Taşıyıcı amperatlar alifatik oligo-amino oligo-karboksilik asit molekülleri değişen uzunluk ve dallanma6. Daha sonra, Vesterberg ve diğerleribiyomolekülleriayıran genişletilmiş kullanım için taşıyıcı ampholytes geliştirilmiş 6,7.
Biyomolekülleri ayırma yöntemleri arasında agarose ve poliakrilamid jel elektroforezi, iki boyutlu jel elektroforezi (2-DE), izoelektrik odaklama, kapiller elektroforez, izotachophorez ve diğer kromatografik teknikler (örn. TLC, FPLC, HPLC)2sayılabilir. "Rotofor" adı verilen bir enstrümanda gerçekleştirilen sıvı fazI IEF, Milan Bier8tarafından icat edilmiştir. Bu enstrümanın konseptine ve tasarımına öncülük etmiş ve elektroforetik göç teorisine büyük katkıda bulunmuştur. Ekibi ayrıca bilgisayar simülasyonları için elektroforetik ayırma sürecinin matematiksel bir model geliştirdi9.
Sıvı fazlı IEF aparatı, 20 gözenekli bölmeye bölünmüş bir naylon çekirdek ve sirkülasyon suyu soğutma seramik çubuktan oluşan yatay olarak dönen silindirik bir hücredir. Gözenekli bölmeler, moleküllerin elektrotlar arasındaki sulu fazdan geçmesine izin verir ve fraksiyonlarda vakum altında saflaştırılmış numunelerin toplanmasına izin verir. Bu arıtma sistemi,[lt;4 saat içinde belirli bir molekülün 1000 kata kadar saflaştırılmasını sağlayabilir. Bu aletin değerli bir özelliği, karmaşık bir karışımdan arınma için ilk adım olarak veya saflık10elde etmek için son bir adım olarak uygulanabilir olmasıdır. Eğer ilgi molekülü bir proteinise, bir diğer avantajı da ayrılma sırasında doğal konformasyonunun korunmasıdır.
Sıvı fazı IEF kullanımı proteinler, enzimler ve antikor saflaştırma6,10,11,,12,13,14için yaygın olarak bildirilmiştir. Burada tıbbi bitki Gymnema sylvestreküçük molekül ve peptidler ayıran ve arındırıcı için bu yaklaşımın kullanımını açıklar. Bu protokol, araştırmacıların düşük maliyetle aşağı akım uygulamaları için bir bitki özü aktif küçük molekülleri konsantre ve arındırmak yardımcı olacaktır. Buna ek olarak, bu IEF tabanlı sistemde Candida albicans mantar15 karmaşık bir protein ekstresinden proteinlerin zenginleştirme ikinci bir örnek olarak göstermektedir.

<table><tbody><tr><td>0.45 ve mikro; m şırınga filtresi</td><td>Fisher scientfic</td><td>09-720-004</td><td></td></tr><tr><td>2-Merkaptoetanol</td><td>Sigma</td><td>M3148</td><td></td></tr><tr><td>Amonyum karbonat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>207861-500</td><td></td></tr><tr><td>Bio-Lyte 3/10 Amfolit</td><td>Bio-Rad</td><td>163-1113</td><td></td></tr><tr><td>Bio-Lyte 5/8 Amfolit</td><td>Bio-Rad</td><td>163-1192</td><td></td></tr><tr><td>Kompakt düşük sıcaklık termostatı</td><td>Lauda - Brinkmann</td><td>RM 6T Su</td><td>soğutmasını 4 oC'ye ayarlayın ve Rotofor soğutma çekirdeğinden geçtiğinde 0 oC'de bile çalıştırılabilir, sirkülasyon suyu sıcaklığı voltaja bağlı olarak yaklaşık 5 veya daha fazla olacaktır.</td></tr><tr><td>Coomassie Brilliant Blue R</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B7920</td><td></td></tr><tr><td>Diyaliz tüpü (3.500 MWCO)</td><td>Spectrum Spectra/Por</td><td>132112T</td><td></td></tr><tr><td>Gymnema bitki yaprağı özü tozu (%>25 Gymnemic asitler)</td><td>Suan Farma, NJ USA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kuluçka</td><td>Laboratuvarı arkadaşı</td><td>SI 300R</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop</td><td>Leica</td><td>DM 6B</td><td></td></tr><tr><td>Mini protean elektroforez</td><td>Bio-Rad</td><td></td><td></td></tr><tr><td>pH metre</td><td>Mettler Toledo</td><td>S20</td><td>Rotofor (sıvı faz IEF) fraksiyonlarının pH'ını belirlemek için kullanışlıdır</td></tr><tr><td>Rotofor</td><td>Bio-Rad</td><td>170-2972</td><td>http://www.bio-rad.com/webroot/web/pdf/lsr/literature/M1702950E.pdf (Ünitenin montajı için Rotofor Kullanım kılavuzu)</td></tr><tr><td>RPMI-1640 Orta HyClone</td><td></td><td>DH30255.01</td><td></td></tr><tr><td>Sızdırmazlık bandı</td><td>Bio-Rad</td><td>170-2960</td><td>Scotch bant da kullanılabilir.</td></tr><tr><td>Sorvall legend mikro 17 santrifüj</td><td>Thermo scientific</td><td>75002432</td><td></td></tr><tr><td>TPP doku kültürü plakası -96 kuyu düz tabanlı</td><td>TPP</td><td>TP92696</td><td></td></tr></tbody></table>

biyoaktif küçük moleküllerin, peptidlerin doğal kaynaklardan ve proteinlerden preparatif İzoelektrik odaklama (ief) yöntemi ile mikroplardan ayrılması

Separation of Bioactive Small Molecules, Peptides from Natural Sources and Proteins from Microbes by Preparative Isoelectric Focusing (IEF) Method

Bitkilerden ve mikroplardan elde edilen doğal ürünler zengin bir biyoaktif molekül kaynağıdır. Kullanımlarından önce, karmaşık ekstrelerden aktif moleküller downstream uygulamaları için saflaştırılmalıdır. Bu amaç için çeşitli kromatografik yöntemler mevcuttur ancak tüm laboratuvarlar yüksek performanslı yöntemler göze alamaz ve karmaşık biyolojik örneklerden izolasyon zor olabilir. Burada, preparatif sıvı fazizoelektrik odaklamanın (IEF) molekülleri, küçük moleküller ve peptidler de dahil olmak üzere karmaşık bitki özlerinden, izoelektrik noktalarına (pI) göre ayırabildiğimizi gösteriyoruz. Bu yöntemi karmaşık biyolojik numune fraksiyonu ve karakterizasyonu için kullandık. Kavramın bir kanıtı olarak, biz bir Gymnema sylvestre bitki ekstresi fraksiyone, terpenoid saponin küçük moleküller ve bir peptit bir aile izole. Ayrıca candida albicans mantarını model sistem olarak kullanarak etkili mikrobiyal protein ayrıştırma larını gösterdik.

Gymnema sylvestre bitki ekstresinden küçük molekül ve peptidlerin ayrılması ve saflaştırılması Preparatif sıvı fazI IEF yöntemini kullanarak, tıbbi bitki özleri ve hücre yüzey proteinleri bir insan patojenik mantar, C. albicans. Bu kesirasyon protokollerinin şeması Şekil 1'degösterilmiştir.
Sıvı fazLı IEF'den elde edilen G. sylvestre ekstresinin 20 fraksiyonundan, koyu renkli moleküllerin (terpenoid saponinler) anodu ...

Amaç, sıvı fazlı izoelektrik odaklama (IEF) yöntemini çalıştırarak biyoaktif küçük molekülleri, kompleks bitki özünden peptitleri ve patojen mikroplardan proteinleri fraksiyonetmek ve izole etmektir. Ayrıca ayrılan moleküller tespit edildi ve biyoaktiviteleri doğrulandı.

Biyoaktif Küçük Moleküllerin, Peptidlerin Doğal Kaynaklardan ve Proteinlerden Preparatif İzoelektrik Odaklama (IEF) Yöntemi ile Mikroplardan Ayrılması

Natural products derived from plants and microbes are a rich source of bioactive molecules. Prior to their use, the active molecules from complex extracts ...

Protokolümüz, aktif moleküllerin bir bitki ekstresinden ayrılması ve saflaştırılması ile ilgili yeni bulguları açıklamaktadır. Bilim adamları terapötik kullanıcılar için doğal ürün kaynaklarından küçük moleküller ve peptidler izole etmek için bu yöntemleri kullanabilirsiniz. Alet bileşenlerive bunların montaj yöntemleri hakkında bilgi edinin.Ayrılacak numunenin önerilen yönergeler tarafından hazırlandığından emin olmak önemlidir. Bu yöntem, enstrümanın birden çok montaj işlemi içerir. Ve görsel gösteri kullanıcıların takip etmek ve başarıyla araştırma için bunları uygulamak için yardımcı olacaktır.Sıvı fazı biraraya getirdikten sonra, kullanım kılavuzunda açıklandığı gibi IEF ünitesi, anyon değişim membranlarını 0,1 molar sodyum hidroksit ve katyon değişim membranlarını 0,1 molar fosforik asit ile dengeler. Kauçuk contaları üç büyük dikdörtgen deliğin kauçuk tarafından engellenmemiş olarak kalması için hizala. Bu elektroforez sırasında membran üzerinden elektrot ve örnek bölmeleri arasında iyonalışverişi yardımcı olacaktır.İyon değişimi contalarında üç dikdörtgen delik hizalayarak elektrotun iç ve dış kısmını birleştirin. Daha sonra membranlarının kurumasını önlemek için elektrotları kendi elektrolitleriyle doldurun. Daha sonra, sızdırmaz bir montaj sağlamak için plastik vida tutucusıkın.Numune toplama panolarını sızdırmazlık bandıyla kapatın. Daha sonra aşağıdaki sırayla seramik soğutma parmağı üzerinde odaklama odası parçaları monte: anot elektrot, naylon membran çekirdek, odaklama odası ve katot elektrot. 50 mililitrelik şırınga kullanarak, odaklama odasını önceden soğutulmuş distile suyla doldurun.Standart bir IEF hücresi için 60 mililitre su ekleyin. IEF ünitesini dört santigrat derecede sirkülasyon soğutma suyuna bağlayın. Voltaj dengelenir kadar 15 watt ve 3000 volt, yaklaşık 3-5 dakika birim çalıştırın.Sonra güç kaynağını kapatın. Kesir toplayıcısını kullanarak, hücreden suyu çıkarın. Toplama panolarını sızdırmazlık bandıyla yeniden mühürleyin.60 mililitre distile suya Gymnema sylvestre bitki ekstresi 0,6 gram ekleyin. Beş dakika boyunca bir rulo tüp içinde karıştırarak bitki ekstresi çözün. Çözünmez parçacıkları çıkarmak için, bu çözeltiyi 10.000 kez G'de beş dakika santrifüj edin.Supernatant'ı 150 mililitrelik cam kabına aktarın ve hacim olarak %1'lik bir çözüm oluşturmak için yaklaşık 0,6 mililitre lik bir çözelti ekleyin. 1,5 inç 19 gauge blunt uç iğnesi ile 50 mililitrelik şırınga kullanarak, bu çözümü örnek toplama panoları aracılığıyla IEF hücresine yükleyin. Sonra standdan hücre kaldırmak ve elektrot odası dokunun, yerinden ve herhangi bir kabarcıklar kaldırmak için.Üniteyi soğutma suyuna bağlayın. Sabit güç kaynağı ile 15 Watt fraksiyonu başlar. IEF ünitesini gerilim yaklaşık üç saat olan sabit bir değere ulaşana kadar çalıştırın.Hasat düğmesine bastıktan sonra kesir toplayıcı pimlerini toplama panolarıile hizala. Gymnema sylvestre fraksiyonları toplamaya başlamak için sızdırmazlık bandı ile pimleri itin. C.albicans ve maya pepitone dekstroz suyu tek bir koloni gece boyunca 30 derece santigrat sallayarak büyümek.Kültürü bir santrifüj tüpüne aktarın ve maya hücrelerini santrifüj le 10,000 kez G'de beş dakika toplayın. Supernatant çıkardıktan sonra, tampon maya hücreleri askıya almak ve beş santigrat derece bir saat için bir silindir tüpü süspansiyon döndürmek. Maya hücrelerini çıkarmak için süspansiyonu 10,000 kez G'de beş dakika santrifüj edin.Daha sonra protein ekstresini 0,45 mikrometrelik bir filtreden süzün. Protein ekstresini diyaliz tüpüne aktarın ve 4 santigrat derecede 15 saat boyunca suya karşı diyalize alın. Protein konsantrasyonu tahmin ettikten sonra, toplam protein 500 miligram içeren protein ekstresi bir hacim toplamak.Hacmine göre% 1 amper içeren su 60 mililitre protein 500 miligram seyreltin. Bir şırınga kullanarak, seyreltilmiş protein ekstresini IEF hücresine yükleyin ve üniteyi sabit 15 Watt'ta dört saat çalıştırın. Bu cihaz yüksek voltajlı elektrik kaynağı kullandığından, kullanıcı canlı elektrotlarla doğrudan temastan kaçınmak için her türlü önlemi almalıdır.Fraksiyon toplayıcı, her biri 12 milimetreye 75 milimetre lik 20 plastik tüp içerir. Ve vakum pompasına bağlı. Düğmeye hasat basarak kesirleri toplamak için hazırlayın.Daha sonra kesir toplayıcısındaki 20 toplama iğnesini 20 toplama panosuyla hizalayın, böylece mühürlü odaklama hücresi. Toplama pimlerini sızdırmazlık bandına itin ve aynı anda vakum pompasını açın. Her tüp yaklaşık üç mililitre bir protein fraksiyonu toplayacak.Protein fraksiyonlarını azaltıp kaynattma sonra % 12.5 SDS sayfa jeli ile analiz edin. Coomassie Mavi boya ile jel leke ve oda sıcaklığında bir rocker üzerine yerleştirin. 2-3 saat sonra jelde lekeyi bozun.Sonra jel görüntüleyici kullanarak jel görüntü kaydedin. 50 milimolar glikoz ile desteklenen RPMI hücre kültürü orta 1:1000 oranında C.albicans bir gecede kültür seyrelterek bir maya hücre süspansiyon hazırlayın. 96 kuyu plakasının her kuyuya 90 mikrolitre hücre süspansiyonu ekleyin.Daha sonra, kuyuları ayırmak için her G.sylvestre fraksiyonundan 10 mikrolitre ekleyin. Negatif kontrol olarak, ayrı kuyulara %1 amper atmis 10 mikrolitre su ekleyin. 96 kuyu plakasını 12 saat boyunca 37 derecede kuluçkaya yattıktan sonra, plakayı mikroskop altında gözlemleyin.Filamentöz büyüme eksikliği C.albicans maya-hypha dönüşüm inhibisyonu gösterir. G.sylvestre ekstresinin yirmi fraksiyonu sıvı faz IEF ile elde edildi. Koyu renkli moleküller, jimnastik asitler, göç ve ünitenin anod ucunda zenginleştirilmiş.Katot ucunda yarı saydam açık sarı fraksiyonlar gözlendi. Her G.sylvestre kırılmasından elde edilen aliquotlar SDS sayfası ile azaltıldı, kaynatıldı ve çözüldü. Bir Coomassie Mavi leke kesirler 16 ile 19 arasında zenginleştirilmiş, yaklaşık beş kilodaltonfarklı bir polipeptid bandı gösterdi.Birinci kesirdeki Gymnemic asitler idiler ve sonraki birkaç fraksiyon proteinamı olmadığı için tespit edilmedi. Ancak, bu moleküller TLC ile ayrılabilir ve UV ışığı altında tespit edilebilir. Fraksiyon 10 bu küçük moleküllerin tespit edilebilir bir miktar organik küçük moleküllerin çoğu kesirler bir ile üç zenginleştirilmiş olduğunu düşündürmektedir içermekti.Tüm 20 G.sylvestre fraksiyonları maya-to-hypha dönüşüm ve C.albicans hyphal büyüme inhibisyonu için kabul edildi. En büyük inhibisyon 10 ve üzeri kesirlerde gözlendi ve çok az inhibitör gözlendi. C.albicans hücre yüzey proteinleri sıvı faz IEF kullanılarak fraksiyone edildi.Ve 18 kesirden aliquots SDS sayfası tarafından analiz edildi. Zenginleştirilmiş proteinler çeşitli kesirlerde görülebilir. Başlangıç, küçük moleküller non-ambulatuar olduğuna inanılıyor çünkü izoelektrik odaklama ile ayrılmış olamazdı.Çalışmalarımız en az haftada bir ambulatuar olduklarını ve bu yöntemin diğer küçük moleküller için daha fazla araştırılabildiği gösterilmiştir.

separation-bioactive-small-molecules-peptides-from-natural-sources

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Kütle spektrometrisi (antipersonel mayınları) ile kombinasyon halinde etiketli proteinlerin saflaştırılması Affinity protein etkileşimi ağların sistematik eşleme için ve biyolojik süreçlerin mekanistik temeli araştırmak için güçlü bir yöntem. Burada, bakteri için geliştirilmiş optimize edilmiş sıralı peptid afinite (SPA) antipersonel mayınları prosedürü...

Protein Kompleksi belirlenmesi<em&gt; Escherichia coli</em&gt; Tandem Kütle Spektrometresi ile Kombine Sıralı Peptid Affinity Arıtma kullanarak

Bu videoda, sıvı faz izoelektrik odaklama kullanarak karmaşık molekülleri bitki özlerinden ayırmak için kullanılan bir teknik açıklanmaktadır. Bu teknik, karmaşık biyomoleküllerin doğal hallerinde saflaştırılmasına yardımcı olur ve bu da çeşitli sonraki uygulamalar için kullanılabilir.

Sıvı Faz İzoelektrik Odaklama: Biyoaktif Molekülleri Ham Gymnema sylvestre Ekstraktından Ayırmak İçin Bir Elektroforez Tekniği

Endojen peptidler insan beyin-omurilik sıvısı (bos) kitle spektrometrik analizi için bir yöntem sunulur. Moleküler ağırlık kesme filtrasyon, Kromatografik ön ayırma, kitle spektrometrik analizi ve peptid kimlik stratejileri sonraki bir arada istihdam ederek, yaklaşık on göre bilinen CSF peptidome genişletmek olası Önceki çalışmalar için.

İnsan serebrospinal sıvı Endopeptidomic analiz için numune hazırlama

Kapiller isoelectric odaklanarak proteinler ve onların izoformlarının son derece küçük biyolojik örneklerinden detaylı karakterizasyonu etkinleştirme bir antikor tabanlı, vericiyi, yüksek üretilen iş, tekniğidir. Aşağıda bir protokol olarak algılanmasını ve miktar belirli proteinlerin ve onların izoformlarının otomatik ve robotized bir şekilde açıklanmıştır.

Proteinler ve onların izoformlarının kapiller Isoelectric odaklanarak yöntemi tarafından son derece hassas ve nicel tespiti

Detaylı bir protokol ayırma, kimlik ve kapiller bölge Elektroforez-electrospray iyonlaşma-tandem kütle spektrometresi (CZE-ESI-MS/MS) kullanarak protein örnekleri proteoforms karakterizasyonu için tanımlanır. Protokol proteoforms basit protein örneklerinde yüksek çözünürlüklü karakterizasyonu ve proteoforms karmaşık Proteom örneklerinde büyük ölçekli tanımlaması için kullanılabilir.

Büyük ölçekli tepeden proteomik kılcal bölge Elektroforez Tandem kütle spektrometresi kullanılarak

Burada, aşağıdakiler hakkında ayrıntılı bilgi içeren optimize edilmiş bir filtre sindirim protokolü sunuyoruz: protein sindirimi, peptit saflaştırma ve veri bağımsız edinme analizi. Bu strateji, eksprese edilen prostat salgıları-idrar örneklerinin analizine uygulanır ve üriner proteomların yüksek proteom kapsama alanına ve düşük eksik değer etiketsiz profillemesine izin verir.

FASP Sindirimi ve Veriden Bağımsız Analiz yoluyla EPS-İdrarın Proteomik Profili

Bu protokol, diferansiyel ultrasantrifüjleme ile makrofajlardan küçük hücre dışı vezikülleri izole etmek ve kütle spektrometrisi ile tanımlamak için peptidomu çıkarmak için bir prosedürü açıklar.

Kemik İliği Kaynaklı Makrofajlardan Küçük Hücre Dışı Veziküllerin Peptitlerinin Tanımlanması

Mevcut protokol, fonksiyonelleştirilmiş manyetik boncuklar kullanılarak idrar hücre dışı veziküllerin etkili izolasyonu için ayrıntılı açıklamalar sağlar. Ayrıca, western blotlama, proteomik ve fosfoproteomik dahil olmak üzere sonraki analizleri kapsar.

Proteomik ve Fosfoproteomik Analizler için Biyoakışkanlardan Hücre Dışı Veziküllerin Kimyasal Afiniteye Dayalı İzolasyonu

Bu protokol, Mycobacterium tuberculosis'in salgılanan proteinlerinin kültürlenmesini, toplanmasını ve konsantrasyonunu açıklar. Kültür filtrat proteinleri (CFP'ler) ölçülür, izoelektrik odaklama ile 20 fraksiyona ayrılır ve ayrıca bir hazırlayıcı SDS-PAGE ve bir elektroelüsyon sistemi kullanılarak 30 fraksiyona çözülür.

Mycobacterium tuberculosis'ten Kültür Filtrat Proteinlerinin (CFP'ler) Ayrılması ve Fraksiyonlanması

Bu protokol, çözünmeyen hücre duvarı ve zar proteinlerini, izoelektrik noktaya dayalı hazırlayıcı izoelektrik odaklama (IEF) kullanarak basit fraksiyonlara (1-5 protein) ayırır ve ardından moleküler ağırlığa göre ayırır. Elde edilen fraksiyonlar, daha fazla saflaştırma olmaksızın doğrudan immünolojik ve proteomik analiz için kullanılabilir.

Hücre Duvarı ve Hücre Zarı Proteinlerinin Aşağı Akış Protein Analizi için Mycobacterium tuberculosis'ten Ayrılması ve Fraksiyonlanması

Keşfedin, sıvı faz izoelektrik odaklama (IEF) yöntemiyle doğal kaynaklardan biyoaktif küçük moleküllerin ve peptidlerin ayrılması. Bu protokol, terapötik uygulamalar için biyoaktif bileşiklerin izolasyonunda araştırmacılara güvenilir bir yöntem sunar.

Biyoaktif Küçük Moleküllerin, Peptidlerin Doğal Kaynaklardan ve Proteinlerden Preparatif İzoelektrik Odaklama (IEF) Yöntemi ile Mikroplardan Ayrılması (Video) | JoVE Journal

Biyoaktif Küçük Moleküllerin, Peptidlerin Doğal Kaynaklardan ve Proteinlerden Preparatif İzoelektrik Odaklama (IEF) Yöntemi ile Mikroplardan Ayrılması

Daha fazla video keşfet