Name: Hedeflenen İlaç Teslimatı için Doxorubicin Yüklü Aptamer-PEI-g-PEG Modifiye Altın Nanopartiküllerinin Sentezi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-06-23T13:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 9 s
Description: Öğrenin, doxorubicin yüklü AS1411-g-PEI-g-PEG modifiye altın nanopartiküllerinin sentezini. Bu yöntem, kanser hücrelerine hedefli ilaç teslimatı sağlayarak toksisiteyi azaltır ve tedavi etkinliğini artırır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu araştırma Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (31700840) tarafından finanse edildi; Henan Eyaleti'nin Temel Bilimsel Araştırma Projesi (18B430013, 18A150049). Bu araştırma, XYNU'nun Genç Bilginleri için Nanhu Bursiyerleri Programı tarafından desteklendi. Yazarlar, XYNU'daki Yaşam Bilimleri Koleji'nden lisans öğrencisi Zebo Qu'ya yardımcı çalışmaları için teşekkür ediyor. Yazarlar, ekipmanlarının kullanımı için XYNU Analiz ve Test Merkezi'ni kabul etmek isterler.

DİkKAT: Tüm kimyasalları kullanmadan önce ilgili tüm malzeme güvenliği veri sayfalarına (MSDS) başvurduğunuzdan emin olun. Koalyolimer ve nanopartiküllerin hazırlanmasında kullanılan kimyasalların birçoğu akut olarak toksiktir. Nanopartiküllerin de potansiyel tehlikeleri vardır. Eldivenler, laboratuvar önlüğü, davlumbazlar, tam boy pantolonlar ve yakın kullanımlı ayakkabılar da dahil olmak üzere tüm uygun güvenlik uygulamalarını ve kişisel koruyucu ekipmanları kullandığınızdan emin olun.
1. Çift karboksil polietilen glikol sentezi (CT-PEG)33
<ol><li>100 mL yuvarlak alt şişeye 1,46 g (14,6 mmol) süksinik anhidrit (SA) ve 4-dimetilamipikopyridin (DMAP) 209 mg (1,71 mmol) ekleyin.</li>
	<li>1.1. adımda kullanılan mataraya 15 mL susuz tetrahidrofuran (THF) ekleyin ve bir cam durdurucu takın. Matarayı 0 °C'de 30 dakika tutun.</li>
	<li>Yeni bir şişeye 4,28 g (4,28 mmol) polietilen glikol (PEG) ve 1,8 mL (12,8 mmol) trietilen (TEA) ekleyin.</li>
	<li>1.3. adımda kullanılan mataraya 15 mL susuz THF ekleyin ve bir cam durdurucu takın. Çözeltiyi, azot atmosferi altında bir şırınna kullanarak 1.2 adımında kullanılan şişeye yavaşça aktarın.</li>
	<li>Çözeltiyi 0 °C'de 2 saat karıştırın, ardından reaksiyona oda sıcaklığında (RT) gece boyunca devam edin.</li>
	<li>Döner evaporatör (40 °C, 0,1 MPa) kullanarak reaksiyon çözeltisini konsantre edin ve THF çözücüyü çıkarın.</li>
	<li>RT'de, reaksiyon çözeltisini 1.325 g/mL dikloromethanenin (DCM) 15 mL'sinde 1.6 adımından çözün, ardından çökeltme ürününü (polietilen glikol diacid) elde etmek için 15 mL soğuk dietil eter (Et2O) ekleyin. Çözücüyü filtre kağıdı ile çıkarın. NOT: Yağış adımı 3x tekrarlanabilir.</li>
	<li>Çökelticileri RT'de vakum altında 48 saat kurutun.</li>
</ol>2. PEI-g-PEG koalolimer sentezi
<ol><li>1.8 ve 5 mL dimetil sülfit (DMSO) adımından bir şişeye 305.47 mg CT-PEG ekleyin ve CT-PEG'in DMSO'da tamamen çözüldüğünden emin olmak için RT'de karıştırın.</li>
	<li>49,46 mg 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilkarbodiimid hidroklorür (EDC) 5 mL DMSO çözün, sonra 2.1 adımda kullanılan şişeye çözelti ekleyin ve RT'de 30 dakika karıştırın.</li>
	<li>29,69 mg N-hidroksisuçinid (NHS) 5 mL DMSO'da çözün ve çözeltiyi adım 2.1'de kullanılan şişeye ekleyin. RT'de 3 saat karıştırmaya devam edin.</li>
	<li>28,6 μL polietileniminin (PEI) 10 mL DMSO'da çözün ve çözeltiyi adım 2,1'de kullanılan şişeye damla yönünde ekleyin. En az 3 gün karıştırın.</li>
	<li>Reaksiyona giren çözeltiyi adım 2.4'ten diyaliz torbasına (1.000 moleküler ağırlık kesme [MWCO]) aktarın. Diyaliz torbasını kadran olarak 500 mL ultra saf su ile 1 L beher içine yerleştirin. Ultra saf suyu 3 gün boyunca her 12 saat değiştirin.</li>
	<li>2.5. adımdaki çözeltiyi başka bir diyaliz torbasına (10.000 MWCO) aktarın. Diyaliz torbasını kadran olarak 500 mL ultra saf su ile 1 L beher içine yerleştirin. Ultra saf suyu 3 gün boyunca her 12 saat değiştirin.</li>
	<li>Çözeltiyi 2.6.</li>
</ol>3. PEI-g-PEG@AuNPs Sentezi
<ol><li>5 mg hazırlanmış PEI-g-PEG'i (adım 2.7) 5 mL ultra saf suda yeni bir şişede çözün ve bir cam durdurucuya takın.</li>
	<li>Mataraya 100 mL 0,3 mM HAuCl4 çözeltisi ekleyin ve çözümü RT'de 3 saat karıştırın. NOT: Çözeltinin rengi hemen sarıdan turuncuya değişmelidir.</li>
	<li>Şişeye 1 mL 1 mg/mL NaBH4 çözeltisi ekleyin ve rt'de çözeltiyi 3 saat karıştırın. NOT: Reaksiyon çözeltisi anında bordoya dönmelidir.</li>
	<li>PEI-g-PEG@AuNPs çözeltisini elde etmek için 2.5 adımında açıklandığı gibi 3 gün boyunca bir diyaliz torbası (1.000 MWCO) kullanarak reaksiyon ürününü dialyze edin.</li>
</ol>4. DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs sentezi
<ol><li>Yeni bir şişeye 1 mL 2,2 mg/mL DOX çözeltisi ve 20 mL PEI-g-PEG@AuNPs çözeltisi ekleyin ve cam bir durdurucuya takın.</li>
	<li>1 mL ultra saf suda 0.727 mg EDC çözün ve EDC çözeltisini adım 4.1'de kullanılan şişeye ekleyin.</li>
	<li>0.437 mg NHS'yi 1 mL ultra saf suda çözün. NHS çözeltisini şişeye ekleyin ve RT'de 1 saat karıştırın.</li>
	<li>DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs çözümünü elde etmek için 2.5.</li>
</ol>5. AS1411-g-DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs sentezi
<ol><li>Yeni bir şişeye 20 mL DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs çözeltisi ve 4OD AS1411 (OD = optik yoğunluk; 1OD ≈ 33 μg) ekleyin.</li>
	<li>28,76 mg EDC'yi 1 mL ultra saf suda çözün ve 5.1 adımında kullanılan şişeye EDC çözeltisini ekleyin.</li>
	<li>17,27 mg NHS'yi 1 mL ultra saf suda çözün. 5.1. adımda kullanılan mataraya NHS solüsyonünü ekleyin ve RT'de reaksiyonun 1 saat karıştırın.</li>
	<li>AS1411-g-DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs elde etmek için 2.5.</li>
</ol>6. Örnek karakterizasyon
<ol><li>CT-PEG polimerini (adım 1.8) ve PEI-g-PEG koalolymerini (adım 2.7) sırasıyla nükleer manyetik rezonans (NMR) tüplerinde kloroform-d olarak çözün. Kimyasal yapıyı doğrulamak için 14,09 T süper iletken mıknatıs ve 5,0 mm 600 MHz geniş bant Z-gradyan yüksek çözünürlüklü prob ile donatılmış 600 MHz NMR spektrometre kullanarak numuneleri analiz edin34.</li>
	<li>AuNP'leri, DOX'u ve AS1411'i dağıtıp ultra saf suda sırasıyla PEI-g-PEG@AuNPs (adım 3.4), DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs (adım 4.4) ve AS1411-g-DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs (adım 5.4) hazırlayın. Ardından, cuvettes aktarın ve bir UV-vis spektrofotometre kullanarak ultraviyole görünür (UV-vis) spektrumu kaydedin.</li>
	<li>Alüminyum folyoya çift taraflı bir yapıştırıcı (~2 mm x 2 mm) takın ve numune çözeltisini (PEI-g-PEG@AuNPs, DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs ve AS1411-g-DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs) tüm bant üzerine eşit şekilde batırın. X-ışını fotoelektron spektroskopisi analizörü kullanarak numuneleri analiz edin.</li>
	<li>ULTRA SAF SUDA PEI-g-PEG@AuNPs, DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs ve AS1411-g-DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs çözeltilerini sırasıyla dağıtin. Ardından, cuvettes aktarın ve dinamik ışık saçılım kullanarak boyut dağılımını değerlendirin.</li>
	<li>PEI-g-PEG@AuNPs, DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs ve AS1411-g-DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs çözeltilerini ultra saf suya dağıtın (her numune için 5 mL ultra saf su başına bir damla numune). 2 saat boyunca sonicate. Bakır ızgarayı numune çözeltilerine batırın ve kızılötesi lambanın altında kurutun. İletim elektron mikroskobu kullanarak morfolojiyi karakterize edin.</li>
	<li>20 kDa MWCO diyaliz kasetine 1 mg AS1411-g-DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs enjekte edin, ardından % 5 sığır serum albümini (BSA) ile 80 mL fosfat tamponlu salin (PBS) yerleştirin. 37 °C'de karıştırın.</li>
	<li>Önceden belirlenmiş zaman noktalarında, 100 μL aliquots toplayın ve taze PBS ile değiştirin. Aliquotların DOX floresan yoğunluğunu ölçmek için bir UV-vis spektrofotometre kullanın.</li>
</ol>7. AS1411-g-DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs nanopartiküllerinin CCK-8 tahlilleri
<ol><li>Dulbecco'nun modifiye Eagle's medium'unda (DMEM) %10 fetal sığır serumu, 100 U/mL penisilin ve 100 μg/mL streptomisin ile desteklenmiş A549 hücrelerini %95 hava ve %5 CO2 ile 37 °C'de nemlendirilmiş bir atmosfer altında büyütün. Kültür ortamını her 2 günde bir değiştirin. Hazırlanan AS1411-g-DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs nanopartiküllerinin sitotoksisitesini nicel olarak değerlendirmek için hücre çoğalması ve sitotoksiklik tahlilleri için 5.</li>
	<li>Her kuyuya 1 mL hücre ortamı içeren 100 μL nanopartikül çözeltisi ekleyin. 24 saat ve 48 saat kültleme yaptıktan sonra, kültür medyasını hücre kültürü plakalarından çıkarın, ardından her kuyuya hemen 300 μL taze kültür ortamı ve 30 μL hücre sayım kiti-8 (CCK-8) kiti çözümleri ekleyin. 37 °C'de bir CO 2 inkübatörde4 saat kuluçkaya yatırın.</li>
	<li>200 μL reaksiyon çözümlerini adım 7.2'den 96 kuyu plakasına aktarın. Mikro plaka okuyucu ile 570 nm'de her kuyunun optik yoğunluğunu (OD) okuyun.</li>
	<li>Mikroskop altında 24 saat ve 48 saat hücre morfolojisini gözlemleyin.</li>
</ol>

<ol><li>Abad, J. M., Bravo, I., Pariente, F., Lorenzo, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-tasking+base+ligand%3A+a+new+concept+of+AuNPs+synthesis%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+and+Bioanalytical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Multi-tasking base ligand: a new concept of AuNPs synthesis.</a> Analytical and Bioanalytical Chemistry. 408 (9), 2329-2338 (2016).</li>
<li>Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+statistics%2C+2019%5BTitle%5D)+AND+%22CA-A+Cancer+Journal+for+Clinicians%22%5BJournal%5D)">Cancer statistics, 2019.</a> CA-A Cancer Journal for Clinicians. 69 (1), 7-34 (2019).</li>
<li>Jang, B., Kwon, H., Katila, P., Lee, S. J., Lee, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dual+delivery+of+biological+therapeutics+for+multimodal+and+synergistic+cancer+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Drug+Delivery+Reviews%22%5BJournal%5D)">Dual delivery of biological therapeutics for multimodal and synergistic cancer therapies.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 98, 113-133 (2016).</li>
<li>Gansler, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sixty+years+of+CA%3A+a+cancer+journal+for+clinicians%5BTitle%5D)+AND+%22CA-A+Cancer+Journal+for+Clinicians%22%5BJournal%5D)">Sixty years of CA: a cancer journal for clinicians.</a> CA-A Cancer Journal for Clinicians. 60 (6), 345-350 (2010).</li>
<li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+Mechanism+for+Selective+Cytotoxicity+towards+Cancer+Cells+of+Diselenide-Containing+Paclitaxel+Nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Biological+Sciences%22%5BJournal%5D)">Molecular Mechanism for Selective Cytotoxicity towards Cancer Cells of Diselenide-Containing Paclitaxel Nanoparticles.</a> International Journal of Biological Sciences. 15 (8), 1755-1770 (2019).</li>
<li>Zhao, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Precise+ratiometric+loading+of+PTX+and+DOX+based+on+redox-sensitive+mixed+micelles+for+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Colloids+Surfaces+B%3A+Biointerfaces%22%5BJournal%5D)">Precise ratiometric loading of PTX and DOX based on redox-sensitive mixed micelles for cancer therapy.</a> Colloids Surfaces B: Biointerfaces. 155, 51-60 (2017).</li>
<li>Blum, R. H., Carter, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adriamycin.+A+new+anticancer+drug+with+significant+clinical+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Internal+Medicine%22%5BJournal%5D)">Adriamycin. A new anticancer drug with significant clinical activity.</a> Annals of Internal Medicine. 80 (2), 249-259 (1974).</li>
<li>de Lima, R. D. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-level+laser+therapy+alleviates+the+deleterious+effect+of+doxorubicin+on+rat+adipose+tissue-derived+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Photochemistry+Photobiology+B%22%5BJournal%5D)">Low-level laser therapy alleviates the deleterious effect of doxorubicin on rat adipose tissue-derived mesenchymal stem cells.</a> Journal of Photochemistry Photobiology B. 196, 111512(2019).</li>
<li>Markowska, A., Kaysiewicz, J., Markowska, J., Huczynski, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Doxycycline%2C+salinomycin%2C+monensin+and+ivermectin+repositioned+as+cancer+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Bioorganic+%26+Medicinal+Chemistry+Letters%22%5BJournal%5D)">Doxycycline, salinomycin, monensin and ivermectin repositioned as cancer drugs.</a> Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters. 29 (13), 1549-1554 (2019).</li>
<li>Songbo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxidative+stress+injury+in+doxorubicin-induced+cardiotoxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicology+Letters%22%5BJournal%5D)">Oxidative stress injury in doxorubicin-induced cardiotoxicity.</a> Toxicology Letters. 307, 41-48 (2019).</li>
<li>Ewer, M. S., Ewer, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiotoxicity+of+anticancer+treatments%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Cardiotoxicity of anticancer treatments.</a> Nature Reviews Cardiology. 12 (9), 547-558 (2015).</li>
<li>Gabizon, A., Shmeeda, H., Barenholz, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacokinetics+of+pegylated+liposomal+Doxorubicin%3A+review+of+animal+and+human+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Pharmacokinetics%22%5BJournal%5D)">Pharmacokinetics of pegylated liposomal Doxorubicin: review of animal and human studies.</a> Clinical Pharmacokinetics. 42 (5), 419-436 (2003).</li>
<li>Xu, X., Ho, W., Zhang, X., Bertrand, N., Farokhzad, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+nanomedicine%3A+from+targeted+delivery+to+combination+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Cancer nanomedicine: from targeted delivery to combination therapy.</a> Trends in Molecular Medicine. 21 (4), 223-232 (2015).</li>
<li>Feng, S., Nie, L., Zou, P., Suo, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+drug+and+polymer+molecular+weight+on+drug+release+from+PLGA-mPEG+microspheres%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Polymer+Science%22%5BJournal%5D)">Effects of drug and polymer molecular weight on drug release from PLGA-mPEG microspheres.</a> Journal of Applied Polymer Science. 132 (6), 41431(2015).</li>
<li>Chen, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Injectable+Temperature-sensitive+Hydrogel+with+VEGF+Loaded+Microspheres+for+Vascularization+and+Bone+Regeneration+of+Femoral+Head+Necrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Materials+Letters%22%5BJournal%5D)">Injectable Temperature-sensitive Hydrogel with VEGF Loaded Microspheres for Vascularization and Bone Regeneration of Femoral Head Necrosis.</a> Materials Letters. 229, 138-141 (2018).</li>
<li>Abadeer, N. S., Murphy, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+Progress+in+Cancer+Thermal+Therapy+Using+Gold+Nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Physical+Chemistry+C%22%5BJournal%5D)">Recent Progress in Cancer Thermal Therapy Using Gold Nanoparticles.</a> The Journal of Physical Chemistry C. 120 (9), 4691-4716 (2016).</li>
<li>Riley, R. S., Day, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gold+nanoparticle-mediated+photothermal+therapy%3A+applications+and+opportunities+for+multimodal+cancer+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22WIREs+Nanomedicine+and+Nanobiotechnology%22%5BJournal%5D)">Gold nanoparticle-mediated photothermal therapy: applications and opportunities for multimodal cancer treatment.</a> WIREs Nanomedicine and Nanobiotechnology. 9 (4), 1449(2017).</li>
<li>Fratoddi, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+Hydrophilic+Gold+Nanoparticles+as+Carrier+for+Anticancer+Copper%28I%29+Complexes%3A+Loading+and+Release+Studies+for+Biomedical+Applications%5BTitle%5D)+AND+%22Nanomaterials+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Highly Hydrophilic Gold Nanoparticles as Carrier for Anticancer Copper(I) Complexes: Loading and Release Studies for Biomedical Applications.</a> Nanomaterials (Basel). 9 (5), 772(2019).</li>
<li>Lee, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug-loaded+gold+plasmonic+nanoparticles+for+treatment+of+multidrug+resistance+in+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Drug-loaded gold plasmonic nanoparticles for treatment of multidrug resistance in cancer.</a> Biomaterials. 35 (7), 2272-2282 (2014).</li>
<li>Dreaden, E. C., Alkilany, A. M., Huang, X., Murphy, C. J., El-Sayed, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+golden+age%3A+gold+nanoparticles+for+biomedicine%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Society+Reviews%22%5BJournal%5D)">The golden age: gold nanoparticles for biomedicine.</a> Chemical Society Reviews. 41 (7), 2740-2779 (2012).</li>
<li>Wei, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anticancer+drug+nanomicelles+formed+by+self-assembling+amphiphilic+dendrimer+to+combat+cancer+drug+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Anticancer drug nanomicelles formed by self-assembling amphiphilic dendrimer to combat cancer drug resistance.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (10), 2978-2983 (2015).</li>
<li>Galluzzi, L., Buque, A., Kepp, O., Zitvogel, L., Kroemer, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunological+Effects+of+Conventional+Chemotherapy+and+Targeted+Anticancer+Agents%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Immunological Effects of Conventional Chemotherapy and Targeted Anticancer Agents.</a> Cancer Cell. 28 (6), 690-714 (2015).</li>
<li>Muddineti, O. S., Ghosh, B., Biswas, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+trends+in+using+polymer+coated+gold+nanoparticles+for+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Pharmaceutics%22%5BJournal%5D)">Current trends in using polymer coated gold nanoparticles for cancer therapy.</a> International Journal of Pharmaceutics. 484 (1-2), 252-267 (2015).</li>
<li>Hu, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methyl+Orange+removal+by+a+novel+PEI-AuNPs-hemin+nanocomposite%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Environmental+Sciences%22%5BJournal%5D)">Methyl Orange removal by a novel PEI-AuNPs-hemin nanocomposite.</a> Journal of Environmental Sciences. 53, 278-283 (2017).</li>
<li>Gu, F. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+nanoparticles+for+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nano+Today%22%5BJournal%5D)">Targeted nanoparticles for cancer therapy.</a> Nano Today. 2 (3), 14-21 (2007).</li>
<li>Srinivasarao, M., Galliford, C. V., Low, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Principles+in+the+design+of+ligand-targeted+cancer+therapeutics+and+imaging+agents%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Drug+Discovery%22%5BJournal%5D)">Principles in the design of ligand-targeted cancer therapeutics and imaging agents.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 14 (3), 203-219 (2015).</li>
<li>Liu, Z., Shi, Y., Chen, Z., Duan, L., Wang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+progress+towards+the+use+of+aptamers+in+targeted+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Science+Bulletin+%28Chinese+Version%29%22%5BJournal%5D)">Current progress towards the use of aptamers in targeted cancer therapy.</a> Chinese Science Bulletin (Chinese Version). 59 (14), 1267(2014).</li>
<li>Ghosh, P., Han, G., De, M., Kim, C. K., Rotello, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gold+nanoparticles+in+delivery+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Drug+Delivery+Reviews%22%5BJournal%5D)">Gold nanoparticles in delivery applications.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 60 (11), 1307-1315 (2008).</li>
<li>Vandghanooni, S., Eskandani, M., Barar, J., Omidi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antisense+LNA-loaded+nanoparticles+of+star-shaped+glucose-core+PCL-PEG+copolymer+for+enhanced+inhibition+of+oncomiR-214+and+nucleolin-mediated+therapy+of+cisplatin-resistant+ovarian+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Pharmaceutics%22%5BJournal%5D)">Antisense LNA-loaded nanoparticles of star-shaped glucose-core PCL-PEG copolymer for enhanced inhibition of oncomiR-214 and nucleolin-mediated therapy of cisplatin-resistant ovarian cancer cells.</a> International Journal of Pharmaceutics. 573, 118729(2020).</li>
<li>Andghanooni, S., Eskandani, M., Barar, J., Omidi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AS1411+aptamer-decorated+cisplatin-loaded+poly%28lactic-co-glycolic+acid%29+nanoparticles+for+targeted+therapy+of+miR-21-inhibited+ovarian+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">AS1411 aptamer-decorated cisplatin-loaded poly(lactic-co-glycolic acid) nanoparticles for targeted therapy of miR-21-inhibited ovarian cancer cells.</a> Nanomedicine. 13 (21), 2729-2758 (2018).</li>
<li>Palmieri, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+anti-nucleolin+recombinant+immunoagent+for+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Human anti-nucleolin recombinant immunoagent for cancer therapy.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (30), 9418-9423 (2015).</li>
<li>Pichiorri, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+NCL+targeting+affects+breast+cancer+aggressiveness+through+miRNA+regulation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">In vivo NCL targeting affects breast cancer aggressiveness through miRNA regulation.</a> Journal of Experimental Medicine. 210 (5), 951-968 (2013).</li>
<li>Hou, S., McCauley, L. K., Ma, P. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthesis+and+erosion+properties+of+PEG-containing+polyanhydrides%5BTitle%5D)+AND+%22Macromolecular+Bioscience%22%5BJournal%5D)">Synthesis and erosion properties of PEG-containing polyanhydrides.</a> Macromolecular Bioscience. 7 (5), 620-628 (2007).</li>
<li>Nie, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Injectable+Vaginal+Hydrogels+as+a+Multi-Drug+Carrier+for+Contraception%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+Sciences%22%5BJournal%5D)">Injectable Vaginal Hydrogels as a Multi-Drug Carrier for Contraception.</a> Applied Sciences. 9 (8), 1638(2019).</li>
<li>Zou, P., Suo, J., Nie, L., Feng, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temperature-responsive+biodegradable+star-shaped+block+copolymers+for+vaginal+gels%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Materials+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Temperature-responsive biodegradable star-shaped block copolymers for vaginal gels.</a> Journal of Materials Chemistry. 22 (13), 6316-6326 (2012).</li>
<li>Etrych, T., Šubr, V., Laga, R., Říhová, B., Ulbrich, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polymer+conjugates+of+doxorubicin+bound+through+an+amide+and+hydrazone+bond%3A+Impact+of+the+carrier+structure+onto+synergistic+action+in+the+treatment+of+solid+tumours%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Pharmaceutical+Sciences%22%5BJournal%5D)">Polymer conjugates of doxorubicin bound through an amide and hydrazone bond: Impact of the carrier structure onto synergistic action in the treatment of solid tumours.</a> European Journal of Pharmaceutical Sciences. 58, 1-12 (2014).</li>
<li>Safari, F., Tamaddon, A. M., Zarghami, N., Abolmali, S., Akbarzadeh, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polyelectrolyte+complexes+of+hTERT+siRNA+and+polyethyleneimine%3A+Effect+of+degree+of+PEG+grafting+on+biological+and+cellular+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Artificial+Cells%2C+Nanomedicine%2C+and+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Polyelectrolyte complexes of hTERT siRNA and polyethyleneimine: Effect of degree of PEG grafting on biological and cellular activity.</a> Artificial Cells, Nanomedicine, and Biotechnology. 44 (6), 1561-1568 (2016).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

1H NMR spektrumu (Şekil 2) CT-PEG koalolimer ve PEI-g-PEG koalolimerinin başarılı sentezini doğrular. PEG ve PEI'nin moleküler ağırlıkları sırasıyla 1.000 ve 1.200'dir. Ek olarak, EDC/NHS katalitik sistemi, PEI-g-PEG koalolymer'ı amid reaksiyonları yoluyla sentezlemek için kullanılmıştır. PEI-g-PEG koalizatör sentezlemek için PEG ve PEI'nin moleküler ağırlıkları değiştiyse, reaksiyon süresinin ve katalitik sistemin yeniden değerlendirilmesi gerektiği belirtilmelidir. Ayrıca, AuNP'...

Dünya çapında en büyük halk sağlığı sorunu olan kanser, düşük kür oranı, yüksek nüks oranı ve yüksek ölüm oranı1,2. Mevcut konvansiyonel kanser karşıtı yöntemler cerrahi, kemoterapi ve radyoterapi3, kemoterapinin klinikteki kanser hastaları için birincil tedavi olduğu4. Klinik olarak kullanılan antikanser ilaçlar esas olarak paclitaxel (PTX)5 ve doxorubicin (DOX)6,7içerir. Bir antineoplastik ilaç olan DOX, kanser sitotoksisitesi ve kanser hücre çoğalmasının inhibisyonu avantajları nedeniyle klinik kemoterapide yaygın olarak uygulanmıştır8,9. Bununla birlikte, DOX kardiyotoksiteye neden olur10,11ve DOX'un kısa yarı ömrü klinikte uygulanmasını kısıtlar12. Bu nedenle, DOX'i yüklemek ve kontrollü bir şekilde hedeflenen bir alana serbest bırakmak için bozulabilir ilaç taşıyıcılarına ihtiyaç vardır.
Nanopartiküller hedefli ilaç dağıtım sistemlerinde yaygın olarak kullanılmaktadır ve kanser tedavisinde çeşitli avantajlara sahiptir (yani, büyük yüzey-hacim oranı, küçük boyut, çeşitli ilaçları kapsülleme yeteneği ve ayarlanabilir yüzey kimyası vb.) 13,14,15. Özellikle, altın nanopartiküller (AuNP'ler) fototermal kanser tedavisi16,17gibi biyolojik ve biyomedikal uygulamalarda yaygın olarak kullanılmaktadır. AuNP'lerin facile sentezi ve genel yüzey fonksiyonelleştirme gibi benzersiz özellikleri, kanser tedavisinin klinik alanında mükemmel beklentilere sahiptir18. Ayrıca, AuNP'ler ilaç dağıtım stratejilerini tanımlamak, tümörleri teşhis etmek ve birçok çalışmada direnci yenmek için kullanılmıştır19,20.
Buna rağmen, AuNP'lerin, hedefleme ve erişilebilirlik özellikleri gibi gelişmiş geçirgenlik ve tutma (EPR) yoluyla tümör lezyonlarında yüksek lokal salınım yoluyla ilaç direncinin üstesinden gelmek için daha fazla uyarlanması gerekir. Polimer fonksiyonelleştirilmiş AuNP'ler, hidrofobik antikanser ilaçlarının iyileştirilmiş su çözünürlüğü ve uzun sirkülasyon süresi21,22gibi benzersiz avantajlar sergilemiştir. AuNP kaplamaları için polietilen glikol (PEG), polietilenimin (PEI), hyaluronik asit, heparin ve ksantan sakızı gibi çeşitli biyouyumlu polimerler kullanılmıştır. Daha sonra AuNP'lerin stabilitesi ve yükü iyileştirildi23. Özellikle, PEI, birincil, ikincil ve üçüncül aminlerin24'ünbirçok tekrarlayan biriminden oluşan yüksek dallı bir polimerdir. PEI mükemmel çözünürlüğe, düşük viskoziteye ve AuNP'lerde kaplama için uygun olan yüksek derecede işlevselliğe sahiptir.
Öte yandan, anti-kanser ilaçlarının doğrudan kanser hücrelerine daha iyi yükleme verimliliği ve primer ve ileri metastatik tümörlerin tedavisi için daha düşük toksisite ile teslim edilmesi gerekir25. Hedeflenen ligandlar anti-kanser ilaç hedefli doğum sistemleri için büyük bir potansiyele sahiptir26. Hedef molekül bağlama için seçiciliği, özgüllüğü hedefleyen kanser önleyici ilaçlar ve hastalıklı dokularda ilaç zenginleştirmeyi arttırır27. Daha fazla ligand antikorlar, polipeptitler ve küçük moleküller içerir. Diğer ligandlara kıyasla, nükleik asit aptamerleri in vitro olarak sentezlenebilir ve değiştirilmesi kolaydır. AS1411, özellikle kanser hücreleri 28,29,30üzerinde aşırı ifade edilmiş bir hedef nükleer protein reseptörüne bağlanmak için kararlı bir dimerik G-tetramer yapısı oluşturan değiştirilmemişbir 26bp fosfodiester oligonükleotiddir. AS1411 birçok kanser hücresinin çoğalmasını engeller, ancak sağlıklı hücrelerin büyümesini etkilemez31,32. Sonuç olarak, AS1411 ideal bir hedefli ilaç dağıtım sistemi imal etmek için kullanılmıştır.
Bu çalışmada, bir PEI-g-PEG koalolymer amid reaksiyonu ile sentezlenir, daha sonra PEI-g-PEG koalolymer kaplı altın nanopartiküller (PEI-g-PEG@AuNPs) imal edilir. Ayrıca, DOX ve AS1411, Şekil 1'degösterildiği gibi, hazırlanan PEI-g-PEG@AuNPs ardışık olarak bağlanır. Bu ayrıntılı protokol, araştırmacıların DOX ve AS1411 yüklü yeni PEI-g-PEG@AuNPs üretimiyle ilgili ortak tuzakların çoğundan kaçınmalarına yardımcı olmak için tasarlanmıştır.

<table><tbody><tr><td>4-Dimetilaminopiridin</td><td>Macklin</td><td>D807273</td><td></td></tr><tr><td>A549 hücresi</td><td></td><td>ATCC CCL-185TM</td><td></td></tr><tr><td>AS1411</td><td>BBI Yaşam Bilimleri Şirketi</td><td></td><td>5'-d (TTTGGTGGTGGTGGTTGTGTGGTGGGG) FL-AS1411 (florofor etiketli AS1411)</td></tr> <tr><td>Susuz Tetrahidrofuran (THF)</td> <td>SinoPharm Chemical Reagent Co., Ltd</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hücre sayma kiti-8 ( CCK-8)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>96992-500TESTLER-F</td><td></td></tr><tr><td>Diklorometan</td><td>Geleneksel Çin tıbbı</td><td>80047318</td><td></td></tr><tr><td>Dietil eter (Et2O)</td><td>SinoPharm Chemical Reagent Co., Ltd</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dimetil sülfoksit</td><td>Macklin</td><td>D806645</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco'nun modifiye edilmiş Eagle's medium (DMEM)</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Doksorubisin hidroklorür</td><td>Rhawn R017518</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Eter mutlak</td><td>Geleneksel Çin tıbbı</td><td>80059618</td><td></td></tr><tr><td>Alanı Emisyon İletim Elektron Mikroskobu</td><td>FEI Şirketi</td><td>Tecnai G2 F 20</td><td></td></tr><tr><td>Altın (III) klorür trihidrat</td><td>Rhawn</td><td>R016035</td><td></td></tr><tr><td>Lazer Parçacık Boyutlu Enstrüman</td><td>Malvern Instruments Ltd</td><td>ZetasizerNanoZS / Masterszer3000E</td><td></td></tr><tr><td>Mikroplaka Okuyucu</td><td>Moleküler Cihazlar</td><td>SpectraMax 190</td><td></td></tr><tr><td>N- (3-Dimetilaminopropil) -N'-etilkarbodiimid hidroklorür</td><td>Macklin</td><td>N808856</td><td></td></tr><tr><td>N-Hidroksisüksinimid</td><td>Macklin</td><td>H6231</td><td></td></tr><tr><td>NMR yazılımı</td><td>Delta 5.2.1</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Nükleer Manyetik Rezonans Spektrometresi</td><td>JEOL</td><td>JNM-ECZ600R/S3</td><td></td></tr><tr><td>Menşei 8.5</td><td>OriginLab</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Penisilin</td><td>Sigma Aldrich</td><td>V900929-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Fosfat tamponlu salin</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P4417-100TAB</td><td></td></tr><tr><td>Poli (etilen glikol)</td> <td>Sigma Aldrich</td><td>81188</td><td>BioUltra, ortalama Mn ~ 1000</td></tr><tr><td>Poli (etilenim) çözeltisi</td><td>Sigma Aldrich</td><td>482595</td><td>ortalama Mn ~ 1200, ağırlıkça %50 H2O</td></tr><tr><td>Sodyum borhidrür, toz</td><td>Acros</td><td>C18930</td><td></td></tr><tr><td>Streptomisin</td><td>Sigma Aldrich</td><td>85886-10ML</td><td></td></tr><tr><td>Süksinik anhidrit</td><td>Geleneksel Çin tıbbı</td><td>30171826</td><td></td></tr><tr><td>Tetrahidrofuran</td><td>Geleneksel Çin tıbbı</td><td>40058161</td><td></td></tr><tr><td>Trietilamin</td><td>Geleneksel Çin tıbbı</td><td>80134318</td><td></td></tr><tr><td>UV/VIS/NIR Spektrometresi</td><td>Lambda950</td><td>Lambda950</td><td></td></tr><tr><td>X-ışını Fotoelektron Spektrometresi</td><td>Termo&ensp; Balıkçı&ensp; Bilimsel</td><td>K-ALPHA 0.5EV</td><td></td></tr></tbody></table>

hedeflenen İlaç teslimatı için doxorubicin yüklü aptamer-pei-g-peg modifiye altın nanopartiküllerinin sentezi

Synthesis of Aptamer-PEI-g-PEG Modified Gold Nanoparticles Loaded with Doxorubicin for Targeted Drug Delivery

Sağlıklı hücrelerde ilaç direnci ve toksisite nedeniyle klinik kanser tedavisinde doksofobisin (DOX) kullanımı sınırlanmıştır. Bu protokol, polietilen glikol (PEI-g-PEG) koaloksimer fonksiyonelleştirilmiş altın nanopartiküller (AuNP'ler) ile aşılanmış poli (etileninimin) yüklü aptamer (AS1411) ve DOX ile amid reaksiyonları yoluyla tasarlanmasını açıklar. AS1411 özellikle kanser hücrelerindeki hedefli nükleolin reseptörleri ile bağlanır, böylece DOX sağlıklı hücreler yerine kanser hücrelerini hedefler. İlk olarak, PEG karboksilatlanır, daha sonra 1H NMR analizi ile onaylanan bir PEI-g-PEG koalizör elde etmek için dallı PEI'ye aşılanır. Daha sonra, PEI-g-PEG koalizör kaplı altın nanopartiküller (PEI-g-PEG@AuNPs) sentezlenir ve DOX ve AS1411, reaksiyonlar arasında yavaş yavaş AuNP'lere bağlanır. Hazırlanan AS1411-g-DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs çapı ~39,9 nm dir ve nanopartiküllerin su ve hücre ortamında stabil olduğunu gösteren -29,3 mV zeta potansiyeline sahiptir. Hücre sitotoksikliği tahlilleri, yeni tasarlanan DOX yüklü AuNP'lerin kanser hücrelerini (A549) öldürebildiğini göstermektedir. Bu sentez, PEI-g-PEG koalizörlerinin, aptamerlerinin ve DOX'un, sıralı amid reaksiyonları ile elde edilen AuNP'ler üzerindeki hassas düzenini göstermektedir. Bu tür aptamer-PEI-g-PEG fonksiyonelleştirilmiş AuNP'ler kanser tedavisinde hedefe yönelik ilaç teslimatı için umut verici bir platform sağlar.

1 CT-PEG polimer ve PEI-g-PEG koalolimerlerinin başarılı sentezini doğrulamak için H NMR spektroskopisi kullanılmıştır (Şekil 2). Şekil 2a, δ 'daki metilen proton sinyalinin = 3.61 ppm'de ve δ ' de karboksil proton sinyalinin = 2.57 ppm'de CT-PEG polimerlerinin başarılı sentezini doğruladığını göstermektedir. Şekil 2b, PEG'in δ =2.6 ppm'deki metilen proton sinyalinin ve δ 'daki PEI prot...

Bu protokolde, doxorubicin yüklü AS1411-g-PEI-g-PEG modifiye altın nanopartiküller üç aşamalı reaksiyonlar yoluyla sentezlenir. Daha sonra doksofobikin yüklenir ve kanser tedavisi için hedef kanser hücrelerine teslim edilir.

Hedeflenen İlaç Teslimatı için Doxorubicin Yüklü Aptamer-PEI-g-PEG Modifiye Altın Nanopartiküllerinin Sentezi

Due to drug resistance and toxicity in healthy cells, use of doxorubicin (DOX) has been limited in clinical cancer therapy. This protocol describes the ...

İlaç direnci ve toksisitesi nedeniyle klinikte doksorubisin kullanımı sınırlıdır. Bu protokol, bu terapötik ajanın salınımını sürdürmek için parçalanabilir bir taşıyıcı sağlar. Bu yöntemin avantajı, sentezlenen taşıyıcının ilacı doğrudan kanser hücrelerine vermek için kullanılabilmesi ve sadece kanser hücrelerinde hücre ölümüne neden olmasıdır.CT-PEG sentezi için önce 100 mililitrelik yuvarlak tabanlı bir şişeye 1.46 gram süksinik anhidrit ve 209 miligram 4-dimetilaminopiridin ekleyin. Daha sonra, şişeye 15 mililitre susuz tetrahidrofuran ekleyin ve reaksiyonu sıfır santigrat derecede 30 dakika inkübe etmeden önce şişeye bir cam tıpa yerleştirin. İnkübasyon sırasında, yeni bir şişeye 4.208 gram PEG, 1.8 mililitre trietilamin ve 15 mililitre susuz tetrahidrofuran ekleyin ve şişeyi bir cam tıpa ile kapatın.İnkübasyonun sonunda, ikinci çözeltiyi yavaşça birinci şişeye aktarmak için nitrojen atmosferi altında bir şırınga kullanın. Reaksiyona gece boyunca oda sıcaklığında devam etmeden önce yeni çözeltiyi sıfır santigrat derecede iki saat karıştırın. Ertesi sabah, reaksiyon çözeltisini konsantre etmek ve tetrahidrofuran çözücüyü çıkarmak için 40 santigrat derece ve 0.1 megapaskal'da bir döner buharlaştırıcı kullanın.Bir saat sonra, PEG diasit çökeltme ürününü elde etmek için 15 mililitre soğuk dietil eter eklemeden önce, reaksiyon çözeltisini oda sıcaklığında mililitre diklorometan başına 15 mililitre 1.325 gram içinde çözün. Daha sonra çözücüyü filtre kağıdı ile çıkarın ve çökeltiyi oda sıcaklığında 48 saat boyunca vakum altında kurutun. PEI-g-PEG kopolimer sentezi için, yeni bir şişeye 305.47 miligram CT-PEG çökeltisi ve beş mililitre DMSO ekleyin ve CT-PEG tamamen çözünene kadar reaksiyonu oda sıcaklığında karıştırın.Daha sonra, 49.46 miligram EDC'yi beş mililitre DMSO'da çözün ve çözeltiyi şişeye ekleyin. 29.69 miligram N-Hidroksisüksinimit ve beş mililitre DMSO'yu çözmeden ve elde edilen çözeltiyi şişeye eklemeden önce reaksiyonu oda sıcaklığında 30 dakika karıştırın. Reaksiyonu oda sıcaklığında üç saat boyunca karıştırmaya devam edin.İnkübasyonun sonuna doğru, 28.6 mikrolitre PEI'yi 10 mililitre DMSO'ya çözün ve çözeltiyi şişeye damla damla ekleyin. Reaksiyonu oda sıcaklığında en az üç gün karıştırın. İnkübasyonun sonunda, reaksiyona giren çözeltiyi 1000 moleküler ağırlıklı bir kesme ile bir diyaliz torbasına aktarın ve torbayı diyalizat olarak 500 mililitre ultra saf su içeren bir litrelik bir behere yerleştirin.Diyalizin sonunda, çözeltiyi 10.000 moleküler ağırlıklı bir diyaliz torbasına aktarın ve torbayı diyalizat olarak 500 mililitre ultra saf su içeren bir litrelik bir behere yerleştirin. İkinci diyalizin sonunda, çözeltiyi konsantre etmek için 40 santigrat derece ve 0.1 megapaskal'da bir döner buharlaştırıcı kullanın ve PEI-g-PEG tozunu elde etmek için numuneyi dondurarak kurutun. Altın nanopartiküllerin PEI-g-PEG ürünü ile kaplanması için, hazırlanan PEI-g-PEG'in beş miligramını yeni bir şişede beş mililitre ultra saf suda çözün ve şişeyi bir cam tıpa ile yerleştirin.Şişeye 100 mililitre 0.3 milimolar aurik klorür çözeltisi ekleyin ve çözeltiyi oda sıcaklığında üç saat karıştırın. Renkler hemen açık sarıdan koyu sarıya değişmelidir. Kuluçka işleminin sonunda, şişeye mililitre sodyum borhidrür çözeltisi başına bir mililitre bir miligram ekleyin.Renk hemen koyu sarıdan altın sarısına değişmeli ve çözeltiyi oda sıcaklığında üç saat daha karıştırmalıdır. Daha sonra reaksiyon ürününü, PEI-g-PEG kaplı altın nanopartikül çözeltisini elde etmek için gösterildiği gibi üç gün boyunca 1000 moleküler ağırlıklı bir kesme diyaliz torbası ile diyalize edin. Doksorubisin'in PEI-g-PEG kaplı altın nanopartiküllere aşılanması için.Yeni bir şişeye mililitre doksorubisin çözeltisi başına bir mililitre 2.2 miligram ve 20 mililitre PEI-g-PEG kaplı altın nanopartikül çözeltisi ekleyin ve şişeyi bir cam tıpa ile yerleştirin. Daha sonra, 0.727 miligram EDC'yi bir mililitre ultra saf suda çözün ve EDC çözeltisini şişeye ekleyin. 0.437 miligram N-Hidroksisüksinimidi bir mililitre ultra saf suda çözün ve N-Hidroksisüksinimit çözeltisini oda sıcaklığında karıştırarak bir saatlik bir inkübasyon için şişeye ekleyin.İnkübasyonun sonunda, reaksiyon ürününü, doksorubisin g-PEI-g-PEG kaplı altın nanopartikül çözeltisini elde etmek için gösterildiği gibi üç gün boyunca 1000 moleküler ağırlıklı bir kesme diyaliz torbasında diyalize edin. AS1411 aptamerinin DOX-g-PEI-g-PEG'e aşılanması için. AS1411'in yaklaşık dört optik yoğunluk konsantrasyonuna 20 mililitre doksorubisin DOX-g-PEI-g-PEG kaplı altın nanopartikül çözeltisi ekleyin.28.76 miligram EDC'yi bir mililitre ultra saf suda çözün ve EDC çözeltisini şişeye ekleyin. 17.27 miligram N-Hidroksisüksinimidi bir mililitre ultra saf suda çözün ve N-Hidroksisüksinimit çözeltisini oda sıcaklığında karıştırarak bir saatlik bir inkübasyon için şişeye ekleyin. Daha sonra reaksiyon ürününü, AS1411-g-Doksorubisin-g-PEI-g-PEG kaplı altın nanopartikülleri elde etmek için gösterildiği gibi üç gün boyunca 1000 moleküler ağırlıklı bir kesme diyaliz torbasında diyalize edin.Proton NMR spektroskopisi, CT-PEG polimeri ve PIE-g-PEG kopolimerlerinin başarılı sentezini doğrulamak için kullanılabilir. Ultraviyole spektroskopisi, hazırlanan kopolimerin altın nanopartiküller üzerine başarılı bir şekilde işlevselleştirilmesini ve kademeli olarak yüklenmesini belirlemek için yapılabilir. X-ışını foto elektron spektroskopisi, kopolimerin altın nanopartiküller üzerindeki kimyasal bağını araştırmak için kullanılabilir.Hazırlanan nanopartiküllerin boyut dağılımını belirlemek için dinamik ışık saçılımı yapılabilir. Bu analizde, transmisyon elektron mikroskobu, düzgün bir morfolojiye sahip kümelenmemiş nanoparçacıkları ortaya çıkardı. Hücre canlılığı analizi, zaman içinde ve artan nanopartikül konsantrasyonlarına yanıt olarak A549 hücre sayılarında bir azalma olduğunu ortaya koydu.Bununla birlikte, serbest doksorubisin grubuyla karşılaştırıldığında, hücre sayıları artmıştır, bu da toksisitenin azaldığını gösterir. Ayrıca, doksorubisin salım profilinin analizi, işlevselleştirilmiş nanopartiküllerden doksorubisin sürekli salınımının A549 hücrelerinde bir azalmaya neden olduğunu ortaya koymaktadır. İşlemin uygulanmasında PEI-g-PEG kopolimer preparasyonu ve AS1411 aşılama adımları başarı için önemlidir.Aynı ilaç taşıyıcı, ilaçların aşılanmasından önce AS1411'in aşılanmasıyla elde edilebilir, ancak ilaç yükleme etkinliği azalacaktır.

synthesis-aptamer-pei-g-peg-modified-gold-nanoparticles-loaded-with

Research

JoVE Journal

Chemistry

Kimya

B Tipi jelatin tabanlı mühendislik nanovectors sistemi (gens), pankreas kanseri tedavisi sistemik gen teslimat ve transfeksiyon için geliştirilmiştir. Epidermal büyüme faktörü reseptörü (EGFR) nanparticles yüzey üzerinde belirli peptid değişiklik, EGFR reseptör hedef olabilir ve plazmid gibi yüksek intrasellüler glutatyon konsantrasyonları olarak azaltılması, çevre altında serbest.

İnsan Pankreas Kanseri Hücrelerinde Epidermal Büyüme Faktörü kullanarak Gen Teslimat ve Transfeksiyon Jelatin Tabanlı Engineered Nanovectors Reseptör-hedefli

Bu makalede, tümör hedefli nanoparçacık, Herdox optik görüntüleme analizi için prosedürler. Özellikle, hedef ve tümör penetrasyon değerlendirilmesi tümör tespit için çoklu görüntüleme cihazı ayrıntılı kullanımı burada açıklanmıştır.

Hedefli Viral Protein analizi HER2 + tümörler için teslim Nanopartiküller

Polymalic asit bazlı bir nano ilacın bir örnek kanser için de geçerlidir kişiye tıp rasyonel tasarım karşı sunulmuştur. Bu, bir çıplak fare Her2-pozitif insan meme kanseri tedavisi için bir nano ilacın sentezini tarif eder.

Çoklu Tümör Belirteçleri Hedefleme için Polymalic Asit bazlı Nano Biopolymers: Kişiselleştirilmiş Tıp için Bir Fırsat?

Burada, biz güçlü bir manyetik an ve güçlü yakın kızılötesi (NIR) absorbanslı manyeto-plasmonik nanopartiküllerin sentezi için bir protokol açıklar. Protokol moleküler özgü hedeflenmesini gerektiren çeşitli biyomedikal uygulamalar için Fc kısmının yoluyla nanopartiküllere antikor konjugasyonu içerir.

Immunotargeted sentezi Magneto-plasmonik nanoklastırlar

Kanserin fotoakustik görüntülemesi için altın nanoçubuklar içeren hücresel araçların hazırlanmasını gösteriyor ve fizibilitesini ele alıyoruz.

Altın nanorods İçeren Hücresel Araçların Hazırlama ve foto akustik Analizi

Lipofilik doksorubisin ön-ilacın hazırlanması ve tanımlanması için bir protokol, 1,2-distearoil, sn -glisero-3-phosphoethanolamine- N yüklü - [amino (polietilen glikol) -2000] (DSPE-PEG) miseller anlatılmıştır.

Lipofilik Doksorubisin Pro-ilaç misellerin Hazırlanması ve Karakterizasyonu

Bir sıvı kristal nanopartikül (LCNP) nanocarrier canlı hücrelerin plazma zarına bir hidrofobik yük sürekli verilme için uygun bir araç olarak kullanılarak.

Sıvı Kristal Nanopartikül Carrier bir Hidrofobik Kargo Encapsulated, hedeflenen Plazma Zarı Teslimat

Bu iletişim kuralı bir verimli ve kullanışlı analitik süreci örnek ekstraksiyon ve birden fazla uyuşturucu, doksorubisin (DOX), mitomycin C (MMC) ve doxorubicinol (DOXol), biyolojik bir kardiyo-toksik DOX metaboliti eşzamanlı belirlenmesi açıklar Preklinik meme tümör modeli örnekleri nanopartikül formülasyonları sinerjik ilaç kombinasyonu ile tedavi.

Örnek çıkarma ve eşzamanlı Kromatografik Nefelometri doksorubisin ve ilaç kombinasyonu dağıtımında nano tanecikleri tümörü taşıyan fareler takip Mitomycin C

Poli etilen glikol kaplama yüzeyine tarafından functionalized Biyouyumlu 10 nm altın nano tanecikleri, sentezleme yöntemi açıklanmaktadır. Bu parçacıklar kullanılan vitro olabilir ve tedavi için Nano hücresel ve hücre dışı alanlarda teslim etmek için in vivo geleneksel nanopartikül boyutları ile erişim için zor.

Endotel hedefleme için Functionalized 10-nm polimer kaplı altın parçacıkları ve ilaç dağıtım sentezi

Daha önce bir sentetik peptid, akut akciğer iskemi reperfüzyon bağlı yaralanma azaltılmış protein kinaz C-delta inhibitörü intravenöz sunmak için bir altın nanopartikül peptid melez kullandık. İşte detaylı iletişim kuralı uyuşturucu formülasyon göstermektedir. Hücre içi diğer peptidler benzer şekilde formüle edilebilir.

Protein kinaz C-delta inhibitör peptid formülasyonu altın nano tanecikleri kullanarak

Öğrenin, doxorubicin yüklü AS1411-g-PEI-g-PEG modifiye altın nanopartiküllerinin sentezini. Bu yöntem, kanser hücrelerine hedefli ilaç teslimatı sağlayarak toksisiteyi azaltır ve tedavi etkinliğini artırır.

Hedeflenen İlaç Teslimatı için Doxorubicin Yüklü Aptamer-PEI-g-PEG Modifiye Altın Nanopartiküllerinin Sentezi

Daha fazla video keşfet