Name: Meme Kanseri için Preklinik Modeller Olarak Meme Tümörlerinin Ortopedik Transplantasyonu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-05-18T14:45:00.000+00:00
Duration: 7 min 45 s
Description: Öğrenin, meme kanseri araştırmalarında meme yağ dokusuna tümör fragmentlerinin ortotopik transplantasyonunu. Bu minimal invaziv teknik, ilaç yanıtlarını ve direnç mekanizmalarını incelemek için üstün bir hasta kaynaklı ksenograft modeli sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu çalışma Ulusal Sağlık Enstitüleri (R37CA228304 ve R01HL146642'den Xi Chen'e, CA148761'den Jeffrey M. Rosen'a), ABD Savunma Bakanlığı (W81XWH-19-1-0524'ten Xi Chen'e, W81XWH-19-1-0035'ten Xiangdong Lv'ye), Amerikan Kanser Derneği'ne (RSG-18-181-01-TBE'den Xi Chen'e) ve Teksas Kanser Önleme ve Araştırma Enstitüsü'ne (RR150009 CPRIT Bilim Adamı Baylor College of Medicine'daki Hasta Kaynaklı Xenograft ve Advanced In Vivo Models Core (RP170691 CPRIT Core Facility Award ve NCI-CA125123 P30 Cancer Center Support Grant'ten finansman).

Hayvanları kullanan tüm protokoller Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından incelenmiş ve onaylanmıştır. Yaklaşık 1−2 mm3 büyüklüğündeki tümör parçaları, Baylor Tıp Fakültesi'ndeki Hasta Türevli Xenograft ve advanced In Vivo Models Core'dan elde edilen uygun şekilde dondurulmuş stoktandır.
1. Kriyoprezer korunmuş meme tümörü parçalarının transplantasyon için hazırlanması
<ol><li>Tümör parçaları ile cryovial sıvı azottan 37 °C su banyosuna aktarın.</li>
	<li>Çözülme sırasında ara sıra hafif bir fiske ile cryovial'ı ajite edin.</li>
	<li>Doku çözüldükten sonra, cryovial'ı su banyosundan alın ve hafif bir ters çevirme ile karıştırın.</li>
	<li>Cryovial'ın dışını kurulayın ve% 70 etanol ile püskürtün. Biyogüvenlik başlığına aktarın.</li>
	<li>Çözülen tümör dokularını 10 mL soğuk Dulbecco'nun modifiye Eagle ortamı (DMEM) ile dolu 15 mL konik bir tüpe aktarın. Tüpü ters çevirerek iyice karıştırın. Doku parçalarının tüpün dibine yerleşmesine izin verin.</li>
	<li>Süpernatantı aspire edin ve 10 mL soğuk DMEM'de yeniden depolanın. Tüpü ters çevirerek iyice karıştırın. Doku parçalarının tüpün dibine yerleşmesine izin verin.</li>
	<li>Süpernatantı aspire edin ve 10 mL soğuk DMEM'de yeniden depolanın. Tüpü buza yerleştirin. NOT: Doku nakil için hazırdır.</li>
</ol>2. Transplantasyon için taze meme tümörünün toplanması ve hazırlanması
<ol><li>Meme tümörü taşıyan fareyi ötenazi edin. NOT: PDX konağı SCID/Bej, NSG veya NRG dişi fareler olabilirken, mevcut çalışmada 3−5 haftalık dişi Balb/c fareleri kullanılmaktadır.</li>
	<li>Ötenaziye tabi farenin tümör bölgesini% 70 etanol ile püskürtün. NOT: Kriyostoraj veya ekim için tümör parçalarının kirlenmesine neden olabilecek tümör örneği ile saçlardan kaçınmaya çalışın.</li>
	<li>Tümörü çevreleyen cildi çimdiklemek ve kaldırmak için tırtıklı tokmaklarla, kısa bir kesi yapmak için makas kullanın.</li>
	<li>Tüm tümörü konak fareden ayırmak için tümörü makasla deriden ayırın. Tümörün dış yüzeyinden kalan fare yağ yastığı dokusunu kesin. Tümörü 5 mL soğuk DMEM ile dolu 15 mL konik bir tüpe yerleştirin. NOT: Daha büyük tümörlerin nekrotik çekirdek içermesi muhtemel olduğundan, tümörleri maksimum 1 cm çapında kullanın.</li>
	<li>Biyogüvenlik başlığında, parçalanmış tümörü kurumasını önlemek için yeterli DMEM içeren steril 10 cm Petri kabına aktarın.</li>
	<li>Aseptik koşullarda neşter veya bıçak ile tümörü 1 mm3 parçaya bölün. NOT: Neşter veya bıçak, kullanımdan önce biyogüvenlik başlığındaki UV altında en az 20 dakika maruz kalmalıdır.</li>
	<li>Tümör parçalarını soğuk DMEM ile dolu 15 mL konik bir tüpe aktarın. Tüpü buza yerleştirin. NOT: Doku nakil için hazırdır. Adım 2.4'ten parçalanan tümör parçaları olabilir, 1) protein ve RNA / DNA ekstraksiyonu için sıvı nitrojende donmuş snap, 2) hematoksilin ve eozin (H&E) ve immünofizokimya (IHC) analizi için% 4 paraformaldehit (PFA) veya% 10 nötr tamponlu formalin (NBF) ile sabitlenmiş veya 3) 1.25 mL donma ortamında (%10 dimetil sülfit [DMSO], %40 DMEM ve %50 fetal sığır serumu [FBS]), bir gecede -80 °C'lik bir dondurucuda yavaş dondurma ve daha sonra uzun süreli depolama için sıvı nitrojene aktarılarak.</li>
</ol>3. Hayvanı ameliyata hazırlayın
<ol><li>Hayvan ağrısı yönetimi için, subkutan olarak buprenorfin sürekli salınımını ameliyattan 60 dakika önce 1 mg / kg dozda enjekte edin veya 72 saat analjezik kapsama alanı için kurumun kılavuzunu izleyin.</li>
	<li>Cerrahi süiti aseptik ameliyatlar için kurumsal yönergelere göre ayarlayın.</li>
	<li>4 haftalık bir dişiyi izofluran anestezi makinesinin indüksiyon odasında ~11.25 mL/s oranında uyuşturun. Fareyi prosedür alanına, küçük bir yüz maskesiyle anestezi alacağı steril (silikon kauçuk) ameliyat tahtasına aktarın. Fareyi sırtına koyun ve bacakları doğal konumlarında bantleyin. NOT: PDX için SCID/Bej, NSG veya NRG, GEMM nakil modelleri için balb/c kullanılır.</li>
	<li>Kuruluğu önlemek için gözlere oftalmik merhem uygulayın.</li>
	<li>Uygun sedasyon seviyesini parmakla kıstırarak onaylayın. NOT: Hayvanın hiçbir yanıtı/hareketi, hayvanın yeterince uyuşturuldığını ve ameliyata hazır olduğunu gösterir.</li>
	<li>Fareyi alt karın bölgesinde, özellikle ameliyatın yapılacağı dördüncü meme ucunun etrafındaki bölgede tıraş edin.</li>
	<li>Dairesel bir hareket kullanarak ve ameliyat bölgesinin merkezinden başlayarak, povidone-iyot cerrahi scrub ile dış kenarlara doğru çalışın, ardından% 70 izopropil etanol pedi ile povidone-iyot çıkarılması. İki kez daha tekrarlayın.</li>
</ol>4. Tümör parçalarının dördüncü (kasık) meme yağ yastığına nakli
<ol><li>Kesi bölgesi dışında hayvanın vücudunu örtmek için steril bir cerrahi örtü kullanın. NOT: Kesiyi yapmadan önce uygun sedasyon seviyesini parmakla kıstırarak onaylayın.</li>
	<li>Tırtıklı asaların kullanılması cildi 4 numaralı meme ucuna sıkıştırır ve kaldırır.</li>
	<li>Künt tarafı aşağıdayken, #4 meme ucundan başa doğru kısa (yaklaşık 1 cm), parazitik kesi yapmak için makas kullanın.</li>
	<li>Pamuk uçlu bir aplikatör kullanarak, cildi kesiğin medial tarafındaki peritondan ayırın.</li>
	<li>Kesiğin yan tarafını tutarken, aynı bezi kullanarak 4 numaralı meme yağ yastığını deriden hafifçe soyun.</li>
	<li>Yağ yastığı ayrıldıktan sonra, cildi hayvanın vücuduna yakın 27 G'lık bir iğne ile sabitlayın.</li>
	<li>Endojen fare meme epitelinin yağ yastığını temizlemek deneysel olarak gerekliyse aşağıdaki adımları uygulayın.<ol>
<li>Tırtıklı tokaları kullanarak, yağ yastığını vücuttan yavaşça uzatın ve bezdeki ana damarların kesişim noktalarının altında bulunan kasık lenf düğümünü bulun (tokaların bezi tutacağı yere yakın).</li>
		<li>Damarları dikkatlice lenf düğümüne medial ve üçgen bir alan oluşturan dördüncü ve beşinci yağ pedlerine katılan yağlara dağlayın. NOT: Bu adım için oksijen kaynağını geçici olarak kapatın.</li>
		<li>Mikro diseksiyon makası kullanarak, yağ yastığının lenf düğümünü içeren bölümü çıkarılana kadar her koterize damarı teker teker kesin (her kesimden sonra kanama olmamasını sağlamak için).</li>
		<li>"Temizlenmiş" yağ pedi dokusunu atın.</li>
	</ol></li>
	<li>Dördüncü meme yağ yastığını künt ayırma askıları kullanarak tutun. Diğer taraftan, açılı ince tokmakların kapalı ucunu kalan kabın üzerindeki yağ yastığının ortasına ve periton duvarına yakın bir şekilde yerleştirin. Küçük bir cep yapmak için yavaşça tostiki açın. Açılı ince asaları yağ yastığından çıkarın.</li>
	<li>Açılı ince kümes uçlarını kullanarak, bir parça tümör parçası alın ve cebe yerleştirin.</li>
	<li>Tümör parçasını yağ yastığı cebine bırakmak içinps uçlarını yavaşça açın.</li>
	<li>Açılı ince kanatları dikkatlice çekin. NOT: Tümör parçasının, tostu çekerken meme yağ yastığının cebinde kaldığını doğrulamak için cebe bakın. Deneyler veya bankacılık için fazla tümör dokusu gerektiğinde tümörler her iki kontralateral yağ pedine de yerleştirildiğinde. Kontrasepteral tümörler arasındaki bilinen etkileşimler nedeniyle çift taraflı nakilli hayvanlar tedavi çalışmaları için önerilmez. Alternatif olarak, implantasyon işlemi için bir trokar cihazı kullanılabilir.</li>
	<li>Kesi tabanından başlayarak, pençe ve tırtıklı toparlama kullanarak her iki taraftaki cildi toplayın. İki tarafı bir araya getirin ve cildi yara klipsi uygulamasına hazırlamak için hafifçe kaldırın. Kesiğin kenarlarını pençe forsepsleri ile sıkıştırın ve üstte sürekli bir yüzey oluşturmak için kenarları birleştirin.</li>
	<li>İki tarafı tırtıklı tokalarla bir arada tutarak, kesiğin ortasına bir yara klipsi yerleştirmek için yara klipsi aplikatörunu kullanın. Gerekirse, kapalı ve güvenli tutmak için kesi uçlarına doku yapıştırıcısı uygulayın.</li>
	<li>Hayvanı ısınan bir yüzeyde bulunan temiz bir kafese yerleştirin. Postürjik dönemde kanama, dehiscence belirtileri ve ağrı nedir izleyin. Hayvan birkaç dakika içinde ayağa kalkmalı ve hareket etmelidir.</li>
	<li>Ameliyattan sonra en az 3 gün boyunca kesi bölgesine ve hayvanların genel sağlığına çok dikkat edin. Ağrı yönetimi için kurumsal yönergeleri izleyin.</li>
	<li>Bir sonraki nakile devam etmeden önce cerrahi aletleri cam boncuk sterilizatörde 10 sn temizler. Kullanmadan önce aletlerin soğumasını bekleyin.</li>
	<li>Tüm fareler nakledilene kadar 4.1−4.15 adımlarını tekrarlayın. NOT: Su veya yavaş salınım peletleri ile sağlanabilen ER+ tümörler için östrojen takviyesi gereklidir59.</li>
</ol>5. İlaç tedavisine yanıt olarak tümör büyümesinin izlenmesi
NOT: Yerleşik nakledilebilir PDX'lerin ve p53-null tümörlerin palpable tümörlerinin, intrinsik tümör büyüme oranlarına bağlı olarak ameliyat sonrası gelişmesi 2 hafta ile 8 hafta arasında sürer.
<ol><li>Haftada iki kez kaliper kullanarak tümörleri iki boyutta ölçün. Formülü kullanarak birimi hesaplayın: Tümör hacmi (mm3)= W2 x L/2 burada W genişlik ve L tümörün uzunluğudur.</li>
	<li>Tümör hacmi 150−300 mm3'eulaştığında ilaç tedavisine başlayın. NOT: İlaçların özelliğine bağlı olarak, ilaçların teslimi için oral gavage veya intraperitoneal enjeksiyon kullanılabilir.</li>
	<li>Tümör örneklerini toplayın ve çeşitli amaçlar için IHC boyama60,protein ve RNA/DNA izolasyonu ve immün fenotipleme61 gerçekleştirin. Kan toplayın ve immün fenotipleme gerçekleştirin veya farmakokinetik / farmakodinamik çalışmalar için kullanın.</li>
</ol>

MTL, StemMed, Ltd.'de sınırlı bir ortağın kurucusu ve genel ortağı stemmed holdings'in kurucusu ve yöneticisidir. MTL, Tvardi Therapeutics, Inc.'in kurucusu ve özkaynak sahibidir ve StemMed, Ltd.'nin telafi edilmiş bir çalışanıdır.

Hayvanlar arasında tümör büyümesindeki varyasyonları azaltmak için, tümör dokusunun transplantasyon için 1 mm3 parçaya kesilmesi kritik öneme sahiptir. Yumuşak doku büyüyen modellerle çalışmak daha zordur ve tümör parçalarının biraz daha büyük kesilmesi gerekir (1−2 mm3). Dokuyu meme yağ yastığı cebine yerleştirirken, birden fazla küçük tümöre veya garip şekilli tümörlere neden olacağından, dokuyu birden fazla parçaya bölmemeye dikkat edin.
Ek olarak, ilaç tedavisi çalışm...

Meme kanseri ölümlerinin çoğu konvansiyonel tedavilere dirençli tekrarlayan hastalığa atfedilebilir1,2. Meme kanserlerinin tümörler arası ve tümör içi heterojenliği tedavi direncine katkıda bulunur. Ayrıca, tümör heterojenliği doğru prognoza engel olabilir ve hastalık yönetimine meydan okuyabilir3,4. Yanıtın tahmine dayalı biyobelirteçlerinin tanımlanması, meme kanseri olan hastaların klinik sonuçlarını önemli ölçüde iyileştirecektir. Meme kanseri türlerinin çoğu immünoterapiye tepkisiz olması muhtemel immünolojik olarak 'soğuk' tümörler olsa da, immün kontrol noktası inhibitörleri klinik çalışmalarda umut vaat etmişlerdir2,5. Örneğin, faz III denemesi, hastalıksız sağkalımda (DFS) iyileşme olduğunu ve atezolizumab'ın (PD-L1'e karşı monoklonal antikor) nab-paclitaxel ile birlikte% ≥1 PD-L1 boyama6olan tümörlerde tek başına nab-paclitaxel ile karşılaştırıldığında genel bir sağkalım yararı sağlayabileceğini göstermiştir. Meme tümörlerini immünoterapiye duyarlı hale getiren tedavilerin geliştirilmesi tedavi rejimlerinde devrim yapacaktır.
İnsan meme kanseri heterojenliğini ve ilaç yanıtını sadık bir şekilde nükseden preklinik modeller, tümör biyolojisini incelemek ve hedefe yönelik tedavi için potansiyel biyobelirteçleri tanımlamak için kritik öneme sahiptir. Ölümsüzleştirilmiş hücre hatları meme kanseri araştırmaları için yaygın olarak kullanılmaktadır, çünkü bu hücre çizgilerinin büyümesi kolaydır ve moleküler mekanizmaları incelemek için genetik olarak modifiye edilir. Bununla birlikte, uzun süreli hücre kültürü in vitrosundan kaynaklanan seçici basınç nedeniyle, zamanla genetik sürüklenme meydana gelebilir ve meme kanseri hücre çizgileri primer meme tümörlerindeki sapmalardan farklı hücre hattına özgü genomik değişiklikler taşıyabilir7,8,9.
Hasta türevi ksinograft (PDX) tümör parçaları insan hastalığının heterojenliğini yeniden yakalayabilir ve histolojik ve immünohistokimyasal olarak 10 ,11 , 12,13,14,15,16, 17,18,19,20 , 21,22 ,23,24,25,26,27,28,29. Daha da önemlisi, PDX modelleri histoloji, transkriptom, proteom ve genomik analiz 10 , 11 , 12 ,13,14,15,16,17,18,19,20,21,22ile kanıtlanan birden fazla transplantasyonda fenotipik olarak stabildir. ,23,24,25,26,27,28,29. PDX modelleri klinik olarak gözlenenlerle karşılaştırılabilir tedavi yanıtları gösterir10,11,12,13,14,15,16,17,18,19,20,21,22,23,24, 25,26,27,28,29. Östrojen reseptörü pozitif (ER+), progesteron reseptör pozitif (PR+), epidermal büyüme faktörü 2 pozitif (ERBB2+, HER2+) ve üçlü negatif meme kanseri (TNBC) PDX modelleri oluşturulmuş dır ve endokrin, kemoterapi ve hedefe yönelik tedavileri test etmek için mükemmel bir platform sağlar. Bununla birlikte, şu anda PDX modellerinin ana uyarılarından biri, farede işlevsel bir bağışıklık sisteminin olmamasıdır.
Trp53 homozygous null, cMyc, Wnt1, PyMT veya Her2 overexpression modelleri gibi genetik olarak tasarlanmış fare modelleri (GEMM), bozulmamış bir bağışıklık sistemi bağlamında spontan tümör başlatma, ilerleme ve metastaz çalışmasına izin verir. Bununla birlikte, tümör gecikmesi uzundur, bu da birden fazla kolla preklinik denemelerin yapılmasını zorlaştırır30,31. Bununla birlikte, GEMM, insan tümörlerini yakından rekapitula eden yeterli sayıda tümör oluşturmak için singeneik konaklara nakledilebilir32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42,43,44,45, 46,47,48,49,50,51,52,53,54,55. Örneğin, bir p53-null BALB / c faresinden meme epitel, singeneik vahşi tip alıcı farelerin temizlenmiş yağ pedlerine nakledilerek birincil tümörler oluşturulmuştur, bu da singeneik konaklara daha fazla nakledilebilir56,57. P53-null tümörler insan tümörlerinin farklı alt tiplerini yeniden nükset etti.
PDX modelleri ve nakledilebilir GEMM kombinasyonu, meme tümörü biyolojisi, ilaç yanıtı ve anti-tümör bağışıklığını araştırmak için değerli preklinik araçlar sağlar. Mevcut protokolde, PDX ve GEMM tümör parçalarının fare meme yağ yastığına ortotopik nakli yöntemi açıklanmıştır. Bu modeller seri pasajlar için uygundur ve genellikle kararlı bir fenotip tutar. Zaman içinde pasajlarda genetik sürüklenme veya heterojenlik kaybını azaltmak için, biyolojik veya morfolojik değişikliklerin zaman içinde gözlenmesi durumunda sonraki transplantasyon için her pasajda birden fazla doku parçası kriyoprezerserved edilir29,58.

<table><tbody><tr><td>1 mg/mL Buprenorfin-SR</td><td>ZooPharm (BCM veterinerleri aracılığıyla)</td><td></td><td>Steril</td></tr><tr><td>26G şırınga</td><td>BD</td><td>148232E</td><td>Steril</td></tr><tr><td>Betadine Ovma</td><td>Fisher</td><td>19-027132</td><td></td></tr><tr><td>Pamuklu Çubuklar</td><td>VWR Uluslararası Laboratuvarı</td><td>89031-272</td><td>Steril</td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Fisher</td><td>MT 10-013-CM</td><td>Steril</td></tr><tr><td>Elektrikli tıraş makinesi</td><td>Oster</td><td>78005-050</td><td></td></tr><tr><td>Cam boncuk sterilizatörü (Germinator)</td><td>Roboz Surgical Store</td><td>DS-401</td><td></td></tr><tr><td>Yağlayıcı oftalmik merhem</td><td>Akorn Hayvan Sağlığı</td><td>17478-062-35</td><td></td></tr><tr><td>Mikro Diseksiyon Forsepsleri; Tırtıklı, Köşeli (normal forseps)</td><td>Roboz Cerrahi Mağaza</td><td>RS-5139</td><td>Steril Mikro</td></tr><tr><td>Diseksiyon Yaylı Makas (yağ pedi kesici)</td><td>Roboz Cerrahi Mağaza</td><td>RS-5658BT</td><td>Steril</td></tr><tr><td>Mikro Forseps (doku yerleştirme forseps)</td><td>Roboz Cerrahi Mağaza</td><td>RS-5069</td><td>Steril</td></tr><tr><td>Petri Kabı</td><td>Fisher</td><td>08-757- 100D</td><td>Steril</td></tr><tr><td>Steril örtü</td><td>Sai İnfüzyon Teknolojisi</td><td>PSS-SD1</td><td>Steril</td></tr><tr><td>Cerrahi makas</td><td>Roboz Cerrahi Mağaza</td><td>RS-5960</td><td>Steril</td></tr><tr><td>Doku Forseps (pençe forseps)</td><td>Roboz Cerrahi Mağaza</td><td>RS-5158</td><td>Steril</td></tr><tr><td>Yara klipsi uygulayıcı</td><td>BD Autoclip Yara</td> Sistemi <td>01-804</td><td>Steril</td></tr><tr><td>Yara klipsi çıkarıcı</td><td>BD Autoclip Yara Sistemi</td><td>01-804-15</td><td>Steril</td></tr><tr><td>Yara klipsleri</td><td>BD Autoclip Yara Sistemi</td><td>01-804-5</td><td>Steril</td></tr></tbody></table>

meme kanseri için preklinik modeller olarak meme tümörlerinin ortopedik transplantasyonu

Orthotopic Transplantation of Breast Tumors as Preclinical Models for Breast Cancer

Tümör heterojenliğini ve terapötik yanıtı sadık bir şekilde nükseden preklinik modeller transilyapi meme kanseri araştırmaları için kritik öneme sahiptir. Ölümsüzleştirilmiş hücre hatlarının büyümesi kolaydır ve moleküler mekanizmaları incelemek için genetik olarak modifiye edilir, ancak hücre kültüründen gelen seçici basınç genellikle zaman içinde genetik ve epigenetik değişikliklere yol açar. Hasta kaynaklı ksinograft (PDX) modelleri, insan meme tümörlerinin heterojenliğini ve ilaç yanıtını sadık bir şekilde yeniden özetler. PDX modelleri, meme tümörü biyolojisinin araştırılmasını ve ilaç yanıtını kolaylaştıran ortotopik transplantasyon sonrası nispeten kısa bir gecikme süresi sergiler. Genetik olarak tasarlanmış nakledilebilir fare modelleri meme tümörü bağışıklığının incelenmesini sağlar. Mevcut protokol, meme tümörü parçalarını meme yağ pedi içine ortotopik olarak nakletme yöntemini ve ardından ilaç tedavilerini açıklar. Bu preklinik modeller meme tümörü biyolojisi, ilaç yanıtı, biyobelirteç keşfi ve ilaç direnci mekanizmalarını araştırmak için değerli yaklaşımlar sağlar.

Şekil 1'de ortopedik transplantasyonun ekipmanı (Şekil 1A) ve anahtar prosedürleri (Şekil 1B) göstermektedir. Şekil 2'de nakledilen PDX tümörünün (MC1) karakterizasyonu gösterilmiştir. MC1 modelinin tümör parçaları(1 mm 3),SCID/Bej farelerin 4 numaralı yağ yastığına nakledildi. Bir ay sonra, ortalama tümör büyüklüğü yaklaşık 3...

Hasta kaynaklı ksinograft (PDX) modelleri ve nakledilebilir genetik olarak tasarlanmış fare modelleri insan hastalığına sadık kalınarak rekapitulate edilir ve temel ve çevirisel meme kanseri araştırmaları için tercih edilen modellerdir. Burada, tümör biyolojisini incelemek ve ilaç yanıtını değerlendirmek için meme tümörü parçalarını meme yağ yastığına ortotopik olarak nakleden bir yöntem açıklanmaktadır.

Meme Kanseri için Preklinik Modeller Olarak Meme Tümörlerinin Ortopedik Transplantasyonu

Preclinical models that faithfully recapitulate tumor heterogeneity and therapeutic response are critical for translational breast cancer research. ...

Bu protokol, meme tümörü fragmanlarının meme yağ yastıkçığına ortotopik transplantasyonunu tanımlar ve tümör biyolojisini, ilaç yanıtlarını ve ilaç direnç mekanizmasını araştırmak için değerli yaklaşımlar sağlar. Bu teknik minimal invazivdir ve tümör dokularının meme yağ yastığı içine uygun şekilde yerleştirilmesini, ölçüm başına sayma için erişilebilirliği ve hayvan hareketliliğinin korunmasını sağlar. Bu teknik, klinik öncesi bir araştırma formatında aynı anda birden fazla aday kanser tedavisinin değerlendirilmesi için tek bir hastanın greft içi türününden düzinelerce hayvanın transplantasyonuna izin verir.Bu yöntem, hasta türevleri intergraf modelleri oluşturmak için deri altı doku implantasyonundan daha üstündür ve ortotopik implantların mümkün olmadığı durumlarda da kullanılabilir. En zor olanı, yağ yastıkçığının vücut duvarından soyulması için uygun miktarda basınç uygulanması ve doku cebinin yapılmasıdır. Yağ yastıkçığının soyulmasının ve doku parçasının çatlamış anatomik yerleşiminin görselleştirilmesi, prosedürün başarılı bir şekilde gerçekleştirilmesini sağlamanıza yardımcı olacaktır.Transplantasyon için dondurularak saklanmış meme tümörü dokusu parçalarını çözmek. İlk ol

orthotopic-transplantation-breast-tumors-as-preclinical-models-for

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kanser Araştırmaları

Video, bir fare modelinde meme kanseri ortotopik aşılama tekniğini göstermektedir. Bu teknik, deri altı veya cerrahi olmayan enjeksiyona kıyasla tümör boyutu ve şeklinde daha az değişkenlik ile yüksek bir tümör oluşumu oranı üretir.

Ortotopik Enjeksiyon: Dokuya Özgü Kanser Hücrelerinin Yetişkin Bir Fareye İmplante Edilmesi

Kanser tümörü çevreleyen dokunun hem de yerel pro- ve anti-inflamatuar aracılar tarafından etkilenir kompleks bir hastalıktır. Bu nedenle, daha çok deri altı modellere göre ortotrop enjeksiyon modelleri, bir şekilde daha iyi taklit eden insan patoloji kanser ilerlemesinin incelemek için yararlı olabilir.

Farelerin Meme Fat Pad içine Meme Kanseri Hücreleri Ortotopik Enjeksiyon Tümör Büyüme Eğitim için.

Ortotopik meme kanseri primer tümör modeli ve primer tümörün cerrahi olarak çıkarılması açıklanan spontan metastaz oluşturmak için fare ömrünü uzatmak için. tümör büyümesi ve ilerlemesi izlenir ve lusiferaz floresan görüntüleme ile ölçülür.

Spontan Meme Kanseri metastaz Ortotopik Fare Modeli

Prostat kanseri, Amerika Birleşik Devletleri'nde kansere bağlı ölümlerin en sık ikinci nedenidir. Ortotopik bir kanser modeli, prostat kanserinin biyolojisini anlamak ve terapötik rejimlerin etkinliğini değerlendirmek için yararlı bir yaklaşım sağlar. Bu protokol, ortotopik bir prostat kanseri fare modeli oluşturmak için gerekli ayrıntılı adımları açıklar.

İnsan Prostat Kanseri klinik öncesi Ortotopik murin modeli

Biz bir fare orthotopic meme kanseri modeli ve radikal mastektomi modeli insan meme kanseri ilerleme taklit etmek için tümör yükünü ölçmek için bioluminescence teknolojisi ile tanıtmak.

Fare Orthotopic metastatik meme kanseri Model oluşturma ve fare radikal mastektomi gerçekleştirme

Burada, biz meme kanseri hücrelerinin basit, daha az invaziv ve ele kolay bir şekilde meme yağ yastığı içine implant için bir protokol mevcut ve bu fare orthotopic meme kanseri model uygun meme yağ yastığı yapısına sahip çeşitli yönlerini incelemek için kullanılabilir kanser.

Fareler meme yağ yastığı içine meme kanser hücrelerinin Orthotopic enjeksiyon

Bu çalışma, yeşil floresan protein ve biyolüminesans sinyallerinin yanı sıra kantitatif moleküler algılama tekniğinin entegrasyonu ile tümör yüklemesini doğru bir şekilde değerlendirmek için gelişmiş bir protokol hazırlaştır.

Ortotopik Meme Kanseri Modeli Kullanarak Üçlü Negatif Meme Kanseri Eğitimi

Kemik metastazı modellerinde metastaz düzgün bir şekilde veya %100 insidansla gelişmez. Doğrudan intraosseöz tümör hücresi enjeksiyonu akciğerin embolizasyonu ile sonuçlanabilir. Primer kemik tümörlerini ve kemik metastazlarını, kemik içine solid tümör grefti implantasyonu kullanılarak modelleyen, tekrarlanabilir engraftman ve büyümeye yol açan tekniğimizi sunuyoruz.

Primer Kemik Tümörleri ve Kemik Metastazlarının Solid Tümör Grefti İmplantasyonu ile Modellenmesi

Bu protokol, ortopik osteosarkom ve pulmoner metastaz lezyonlarını taşıyan fare modelleri oluşturmak için intratibia osteosarkom hücre enjeksiyonunu tanımlamaktadır.

Ortotopik Osteosarkom ve Akciğer Metastazı Fare Modelleri Oluşturmak için İntratibiyal Osteosarkom Hücre Enjeksiyonu

El yazması, ortotopik olarak enjekte edilen meme tümörlerinden spontan akciğer metastazının kurulması ve uzunlamasına büyüme izlemesi için metastatik kaskadının tüm aşamalarında müdahaleye uygun bir metodolojiyi açıklamaktadır.

In vivo (İn canlı) Ortotopik Olarak Enjekte Edilen Meme Tümörü Hücrelerinin Spontan Akciğer Metastazını Ölçmek için Görüntüleme

Bu protokol, farelerde meme kanseri hastasından türetilen ksenogreftlerin ortotopik implantasyonu için etkili, cerrahi olmayan bir yöntemi tanımlar. Teknik, enzimatik tümör ayrışmasını ve ardından meme yağ yastıkçıklarına doğrudan enjeksiyonu içerir ve yüksek verimli implantasyonu mümkün kılar. Kapsamlı doğrulama, çeşitli meme kanseri alt tiplerinde titiz çalışmaları kolaylaştırarak model aslına uygunluğunu sağlar.

Meme kanseri hasta kaynaklı ksenogreftlerin yüksek verimli dissosiyasyonu ve ortotopik implantasyonu

Öğrenin, meme kanseri araştırmalarında meme yağ dokusuna tümör fragmentlerinin ortotopik transplantasyonunu. Bu minimal invaziv teknik, ilaç yanıtlarını ve direnç mekanizmalarını incelemek için üstün bir hasta kaynaklı ksenograft modeli sunar.

Meme Kanseri için Preklinik Modeller Olarak Meme Tümörlerinin Ortopedik Transplantasyonu

Daha fazla video keşfet