Meme Kanseri için Preklinik Modeller Olarak Meme Tümörlerinin Ortopedik Transplantasyonu

Bu protokol, meme tümörü fragmanlarının meme yağ yastıkçığına ortotopik transplantasyonunu tanımlar ve tümör biyolojisini, ilaç yanıtlarını ve ilaç direnç mekanizmasını araştırmak için değerli yaklaşımlar sağlar. Bu teknik minimal invazivdir ve tümör dokularının meme yağ yastığı içine uygun şekilde yerleştirilmesini, ölçüm başına sayma için erişilebilirliği ve hayvan hareketliliğinin korunmasını sağlar. Bu teknik, klinik öncesi bir araştırma formatında aynı anda birden fazla aday kanser tedavisinin değerlendirilmesi için tek bir hastanın greft içi türününden düzinelerce hayvanın transplantasyonuna izin verir.

Bu yöntem, hasta türevleri intergraf modelleri oluşturmak için deri altı doku implantasyonundan daha üstündür ve ortotopik implantların mümkün olmadığı durumlarda da kullanılabilir. En zor olanı, yağ yastıkçığının vücut duvarından soyulması için uygun miktarda basınç uygulanması ve doku cebinin yapılmasıdır. Yağ yastıkçığının soyulmasının ve doku parçasının çatlamış anatomik yerleşiminin görselleştirilmesi, prosedürün başarılı bir şekilde gerçekleştirilmesini sağlamanıza yardımcı olacaktır.

Transplantasyon için dondurularak saklanmış meme tümörü dokusu parçalarını çözmek. İlk olarak, ilgilenilen tümör parçalarını içeren sıvı Nitrojen deposundan bir kriyo şişesini 37 santigrat derece su banyosunda, ara sıra hafifçe hafifçe vurarak çözün. Parçalar çözüldüğünde, parçaları hafifçe ters çevirerek karıştırın ve şişenin dışını kurutun.

Şişeye% 70 etanol püskürtün ve bir şişe güvenlik başlığına yerleştirin. Kriyo flakon içeriğini 15 mililitrelik konik bir tüpe aktarın. Sonra 10 mililitre soğuk DMEM ekleyin ve karıştırmak için tüpü ters çevirin.

Parçaların çökelmesine izin verin ve bir süpernatanı iki kez 10 mililitrelik alikot ile değiştirin, bu yüzden taze soğuk DMEM. Ardından tüpü buzun üzerine yerleştirin. Bir meme tümör dokusu örneği toplamak için, tümör taşıyan farenin tümör bölgesine% 70 etanol püskürtün ve tümörü çevreleyen cildi sıkıştırmak ve kaldırmak için tırtıklı forseps kullanın.

Küçük bir kesi yapmak için makas kullanın ve saç kontaminasyonunu önlemek için tümörü ciltten ayırın. Tümörün dış yüzeyinden kalan fare yağ pedi dokusunu kesin ve tümörü beş mililitre soğuk DMEM içeren 15 mililitrelik konik bir tüpe yerleştirin. Bir biyo-güvenlik başlığında, diseke edilen tümörü, kurumayı önlemek için yeterli DMEM içeren steril 10 santimetrelik bir Petri kabına aktarın ve tümörü aseptik koşullar altında bir küp milimetre parçalarına kesmek için UV ile sterilize edilmiş bir bıçak kullanın.

Daha sonra tümör parçalarını buz üzerinde soğuk DMEM içeren 15 mililitrelik bir tüpe aktarın. Pedal refleksine yanıt verilmediğini doğruladıktan sonra, anestezi uygulanmış alıcı farenin gözlerine merhem sürün ve dördüncü hafıza bezinin etrafındaki karnı tıraş edin. Daha sonra, maruz kalan cildi dairesel bir hareket kullanarak ve ameliyat bölgesinin merkezinden başlayarak dış kenarlara doğru dışa doğru hareket ederken, povidon-iyot cerrahi fırçalama ile üç kez dezenfekte edin, ardından %70 izopropil alkol pedi ile fırçalayın.

Tümör dokusu parçalarının dördüncü kasık meme yağ yastığına nakli için, hayvanı steril bir fenestre cerrahi örtü ile örtün ve dördüncü meme ucunda cildi sıkıştırmak ve kaldırmak için tırtıklı forseps kullanın. Uçların künt tarafı aşağı bakacak şekilde, dört numaralı meme başından başa doğru yaklaşık bir santimetre parasagital kesi yapmak için makas kullanın. Kesiğin medial tarafında cildi peritondan ayırmak için pamuklu uçlu bir aplikatör kullanın ve dört numaralı hafızalı yağ pedini ciltten nazikçe soyun.

Cildi hayvanın vücuduna yakın sabitlemek için steril bir 27 gauge iğne kullanın ve yağ pedini vücuttan nazikçe uzatmak için tırtıklı forseps kullanın. Kasık lenf düğümünü, bezin ana damarlarının kesişme noktasında bulun ve lenf noduna medial damarları ve dördüncü ve beşinci yağ yastıkçıklarına bitişik yağları dikkatlice koterize edin. Mikro diseksiyon makası kullanarak, yağ yastığının lenf nodunu içeren bölümü çıkarılana kadar dağlanmış her damarı birer birer kesin ve yağ yastığını kavramak için künt forseps kullanın.

Diğer elinizi ve kavisli bir hareketi kullanarak, bir çift açılı ince forsepsin yakın ucunu, peritenoneum duvarına yakın kalan damarın üzerindeki yağ yastığının ortasına yerleştirin. Uçları geri çekin ve uçları orijinal deliğe yeniden yerleştirin, deliği küçük bir cebe germek için forsepsleri açın. Forsepsleri delikten çıkarın ve cebe bir parça tümör parçası yerleştirmek için kullanın.

Tümör parçasını yağ yastığı cebine bırakmak için uçları yavaşça açın ve forsepsleri dikkatlice geri çekin. Parçanın yağ yastığı cebine bırakıldığını doğruladıktan sonra, insizyonun tabanından başlayarak, insizyonun her iki tarafını tırtıklı forseps ile toplayın ve cildi hafifçe kaldırın. Kesiğin kenarlarını pençe forseps ile açın ve üstte sürekli bir yüzey oluşturmak için kenarları birbirine sıkıştırın.

İki tarafı tırtıklı forsepslerle tutarak, insizyonun ortasına bir klips yerleştirmek için bir yara klipsi aplikatörü kullanın ve hayvanı tam yaslanana kadar izleme ile ısınma yüzeyine temiz bir kafese yerleştirin. Tipik olarak, hasta kaynaklı ksenogreft veya genetik olarak tasarlanmış fare modeli tümörler, transplantasyondan yaklaşık iki ila sekiz hafta sonra palpe edilebilir. H&E boyama, tümör patolojisini analiz etmek için yapılabilirken, immünohistokimya, ilgilenilen belirli bir hücre soyları veya hücre canlılığı ve fonksiyonel durumu için belirteçleri izlemek için kullanılabilir.

Tümör parçasının cebe güvenli bir şekilde yerleştirildiğinden emin olmak önemlidir, böylece deri altı boşluğunda düşmez ve büyümez. Tümörler büyüdükten sonra, tümör yanıtlarını değerlendirmek için ilaç tedavisi uygulanabilir. Kanser hücrelerinin metastatik potansiyelini belirlemek için tümörler de çıkarılabilir.

Bu temel teknik 1950'lerden beri kullanılmaktadır. Modifikasyonumuz, kanser çalışmalarında daha büyük ölçekli gelişimsel biyoloji yürütmek için daha verimli ve daha az invaziv bir yol sağlar.