Name: Tümör Hücrelerinin Lateral Kuyruk-Damar Enjeksiyonu Sonrasında Akciğer Metastazının Patolojik Analizi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-05-20T14:45:00.000+00:00
Duration: 8 min 54 s
Description: Öğrenin, farelerde lateral kuyruk damarı enjeksiyonu sonrası akciğer metastazlarını dijital görüntü analizi ile nicelendirmeyi. Bu yöntem, metastatik tümör yükünü doğru ve tekrarlanabilir şekilde ölçer.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Temsili veriler Ulusal Kanser Enstitüsü (K22CA218549 ila S.T.S) aracılığıyla finanse edildi. Burada bildirilen kapsamlı analiz yönteminin geliştirilmesindeki yardımlarına ek olarak, histoloji ve immünofizyotimya hizmetleri için Ohio Eyalet Üniversitesi Kapsamlı Kanser Merkezi Karşılaştırmalı Patoloji ve Fare Fenotipleme Paylaşılan Kaynağına (Direktör – Krista La Perle, DVM, PhD) ve algoritma geliştirme ve analiz için Patoloji Görüntüleme Çekirdeğine teşekkür ederiz.

Hayvan kullanımı, OSU Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) onaylı protokol 2007A0120-R4 (PI: Dr. Gina Sizemore) kapsamında Üniversite Laboratuvar Hayvan Kaynakları (ULAR) yönetmeliklerini takip etti.
1. Meme kanseri hücrelerinin kuyruk damarı enjeksiyonu
<ol><li>Enjeksiyon için hücrelerin ve şırıncının hazırlanması<ol>
<li>Kullanılacak fare sayısına ve hücre konsantrasyonuna göre uygun sayıda hücreyi plakalar. NOT: Enjekte edilen hücre sayısı ve metastazların geliştirilmesi için zaman, kullanılan hücre hattına bağlı olacaktır ve optimize edilmesi gerekecektir. Bu gösteride NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ (NSG) farelerine intravenöz olarak 1 x 106 MDA-MB-231 hücresi enjekte edilir ve en geç 24 gün sonra makroskopik akciğer lezyonları gözlenir. MVT1 murine meme tümörü hücre hattı17 için, 3 x 106 hücre, 14 gün boyunca gözlenen çok sayıda akciğer metastazı ile bağışıklık yetkin FVB / N farelerine enjekte edilir22,23.</li>
		<li>Medyayı epire edin ve hücre plakalarını 1x PBS ile durulayın. Hücreleri minimum hacimde deneyin, uygun ortam hacmini ekleyin ve hematostatometre veya tercih edilen başka bir yöntem kullanarak hücreleri sayın. Uygun hücre sayılarını belirlemek için trypan mavisi (%0.4) veya diğer canlı/ölü hücre boyaları kullanılabilir.</li>
		<li>5 dakika boyunca 180 x g'da dönerek pelet hücreleri.</li>
		<li>Fare başına 100 μL'lik bir hacim enjekte olacak şekilde steril 1x PBS'de uygun sayıda hücreyi yeniden kullanın. Canlılığı korumak için hücre süspansiyonlarını buzda tutun.</li>
		<li>Enjeksiyondan önce, topaklanmaması için hücreleri 200 μL veya 1 mL pipetle iyice yeniden biriktirin. 28 G insülin şırındında 100 μL çizin (bkz. Malzeme Tablosu).</li>
		<li>Şırıngayı dikey tutarak, şırıngaya dokunarak ve pistonu yavaşça ayarlayarak hava kabarcıklarını ortadan kaldırın. Hava kabarcıklarının damara enjekte edilmesi ölümcül olabilecek bir hava/gaz embolisi neden olabilir.</li>
	</ol></li>
	<li>Yanal kuyruk damarı enjeksiyonu NOT: Deneysel meme kanseri metastaz tahlilleri için 6 haftalık dişi farelere enjeksiyonlar >.<ol>
<li>Fareyi kuyruğundan dolayı idare edin ve hayvanı uygun boyutta oluklu bir tüp / kısıtlama cihazına kaydırın (kullanılan kısıtlama cihazı için Malzeme Tablosuna bakın).</li>
		<li>Kısıtlama cihazının fiş kısmını takın ve fareyi yan tarafına yanal kuyruk damarının görüntülenmesi kolay olacak şekilde yerleştirin. Farenin cinsel organa uygun bir ventral arteri, bir dorsal damarı ve iki lateral kaudal damarı vardır.</li>
		<li>Farenin kuyruğunun yüzeyini aseptik bir mendille temizleyin. İşaret parmağı ve başparmak arasındaki kuyruğu baskın olmayan elle kavrayın ve hafif gerginlik uygulayın.</li>
		<li>Kuyruğun distal kısmından başlayarak, iğneyi göbek ucu ile damara paralel yerleştirin.</li>
		<li>İzin verilirse, iğneyi dikkatlice yeniden yakalayın ve 20-30 ° açıya bükün. Tek elle yaklaşım veya iğne recapping cihazı şiddetle tavsiye edilir. NOT: Damarın çökmesine neden olabileceğinden aspirasyon yapmak gerekli değildir. Bununla birlikte, ilk yerleştirildiğinde küçük bir kan parlaması görülebilir. İğne, uygun yerleşimle damara sorunsuz bir şekilde ilerleyecektir.</li>
		<li>Tüm hacmi yavaşça damara dağıtın. Piston itildiğinde direnç olmamalıdır.</li>
		<li>Herhangi bir direnç hissederse, şırınga iğnesini derhal çıkarın. Gerekirse, kuyruğun proksimal ucuna doğru hareket eden veya karşıt yan damar olan iğneyi (ideal olarak en fazla 3 deneme) yeniden yerleştirin.</li>
		<li>Enjeksiyondan sonra küçük bir kan hacmi muhtemelen yerinden çıkacaktır. Steril gazlı bezle hafif basınç uygulayın ve aseptik mendille silin.</li>
		<li>Şırınnayı derhal uygun keskinlik kabına atın.</li>
		<li>Fareyi temiz, havalandırılmış bir kafese geri döndürün ve sıkıntı belirtileri alıp almadığını izleyin.</li>
		<li>Metastaz oluşumu (zahmetli solunum, kambur duruş, kilo kaybı) ve genel sıkıntı belirtileri için fareleri 2-3x / haftalık izleyin. Metastaz geliştirme süresi hücre çizgisine ve fare zorlanmasına bağlı olacaktır.</li>
		<li>Bir in vivo canlı hayvan görüntüleme cihazı kullanıyorsanız, hücrelerin başarılı enjeksiyonu onaylamak ve zaman "sıfır" veri elde etmek için kuyruk damarı enjeksiyonundan hemen sonra görüntü fareleri (in vivo biyolüminesans görüntüleme ile ilgili belirli ayrıntılar burada yer almaz, ancak Yang ve ark.24 tarafından açıklanmaktadır).</li>
	</ol></li>
</ol>2. Akciğer dokusu fiksasyonu ve metastatik akciğer tümörü yükünün analizi
<ol><li>Histopatoloji için akciğerlerin yapısal formatını korumak için akciğer dokusu enflasyonu<ol>
<li>Onaylanan ötanazi prosedürleri (örneğin oda hacminin / dk'nın% 30 - 70'inde karbondioksit) takip edildikten sonra, fare karkasını pimli bir diseksiyon tahtasına sabitleyin. Diseksiyon sırasında farenin kürklerini yoldan uzak tutmak için sprey veya% 70 etanol uygulayın. NOT: Karbondioksit boğulması, özellikle daha yavaş akış hızlarında beklenen bir arka plan lezyonu olarak pulmoner kanamaya neden olabilir.</li>
		<li>Toraksı orta çizgi kesiği ile açın, kesiği periton boyunca kranially/kaudally uzatın ve ksifoid işlemini kavrayarak diyaframı kesin.</li>
		<li>Bıçakları köreltmemek için ayrı bir makas seti kullanarak, göğüs kafesinin her iki tarafındaki kaburgaları kesin ve akciğerlerin genişlemesi için yer bırakarak göğüs kafesini dikkatlice çıkarın.</li>
		<li>Submandibuler tükürük bezlerini ve infrahidoid kasları çıkararak trakeayı izole edin. Pimlerin nefes borusunun her iki tarafına yerleştirilmesi, iğne takılması sırasında istenmeyen hareketleri önleyebilir.</li>
		<li>26 G şırındı % 10 nötr tamponlu formalin 2-3 mL ile doldurun ve nefes borusuna yerleştirin.</li>
		<li>Yavaşça formalin enjekte edin ve akciğerlerin genişlemesini izleyin (genellikle ~1,5 mL formalin gerektirir).</li>
		<li>Formalin akciğerlerden sızmaya başladığında (aşırı enflasyondan kaçının), trakeayı bir çift ön ayakla kıstırın, şırınga iğnesini çıkarın ve tüm solunum cihazını çıkarın. Doku ek kırpması sabitleme sonrası yapılabileceğinden akciğerleri, kalbi vb. doğrudan formalin içine yerleştirin.</li>
		<li>Standart yöntemler kullanılarak tam işleme, gömme, doku kesiti ve hematoksilin ve eozin (H&E) boyama.</li>
	</ol></li>
	<li>Metastatik akciğer tümörü yükünün analizi<ol>
<li>H&E lekeli akciğer bölümlerini 40x büyütmede yüksek çözünürlüklü, slayt tarayıcıda tarayın (Şekil 3).</li>
		<li>Akciğer metastazlarının ölçülmesi için görüntüleri görüntü analiz yazılımına (örneğin Visiopharm Görüntü Analizi) içe aktarın. NOT: Yeni kullanıcıların görüntü analizi yazılımını kullanmak için yerinde veya çevrimiçi eğitim almalarını öneririz. Ticari web sayfası üzerinden çok sayıda web semineri de mevcuttur.</li>
		<li>Yazılımın uygulama kitaplığından Visiopharm 10118 H&E Lung Metastaz Uygulamasını seçin. NOT: Bu uygulamanın amacı, H&E lekeli slaytlarda akciğer metastazını etiketlemek ve ölçmektir. 10118 H&E Akciğer Metastazı Uygulamasının bir parçası olarak, ilk görüntü işleme adımı Doku Algılama Uygulaması ile akciğer dokusunu segmentlere ayırır. İkinci görüntü işleme adımı, akciğer dokusu içindeki metastazları tanımlayan Metastaz Algılama Uygulamasını kullanır. Metastazlar, metastaz olarak tanımlanamayacak kadar yanlış şekillendirilmiş, çok kırmızı veya çok seyrek olan bölgelerle birlikte şekil yoluyla tanımlanır.</li>
		<li>Şekil ve seyrekliği tanımlayan parametreleri temsili görüntülere en uygun şekilde ayarlayın. Tümör metastazlarının ve normal akciğer dokusunun parçalı bölgeleri her doku tipi için farklı renk etiketleri kullanılarak görüntülenebilir. NOT: Uygulamanın metastazları normal akciğer dokusundan doğru bir şekilde ayıramaması durumunda, Visiopharm Karar Ormanı programını kullanan özel bir uygulamanın deneyler için yapıldığı gibi yazılması gerekebilir (bkz. Şekil 2 ve Şekil 3). Özel bir algoritma yazmak için ayrıntılar aşağıdadır. Aksi takdirde, 2.2.9 adımına geçin.</li>
		<li>İstenilen bir görüntüde birden fazla Sınıf [yani akciğer dokusu (neoplastik olmayan), metastazlar, kırmızı kan hücreleri, epitel ve/veya beyaz alan] eğitilerek çalışan Karar Ormanı programını açın. Şekil 2'de tümör metastazları mavi, normal doku yeşil ve bronşiyoler epitel sarıdır. Ayrıca, kırmızı kan hücreleri kırmızı ve hava boşlukları pembedir.</li>
		<li>Her Sınıfı bir görüntü için uygun şekilde eğitmek için sorulan evet veya hayır soruları serisini izleyin. Algoritmanın doğruluğu evet/hayır sorularının sayısını belirleyecektir. Analiz için, özel algoritma / uygulama 50 'ye (aralık 0-100) ayarlanmış doğrulukla yazılmıştır.</li>
		<li>Algoritmanın/Uygulamanın doğruluğunu artırmak için keskinleştirmek, bulanıklaştırmak, şekle göre sıralamak vb. Özellikler, belirli renkleri veya yoğunlukları ortaya çıkarmak için Sınıfın görüntüyü görme şeklini değiştirir. NOT: Özel algoritma için 8500 μm2 ve üzeri ölçülerindeki metastazlar metastaz olarak etiketlenir ve ölçülür. Bu, boyut farkı ve algılamak için çok küçük metastazları hesaplar. Normal doku nicelemesinde küçük yanlış şekilli alanlar ve 8500 μm2'nin altındaki küçük metastatik alanlar yer aldı.</li>
		<li>Değiştirilen ayarları uygulamadan veya özel algoritmadan kaydedin ve ardından algoritmayı/uygulamayı H&E lekeli dokuların tamamına veya serisine uygulayın.</li>
		<li>Son olarak, Tablo 1'de listelenenleri içeren tüm çıktı değişkenlerini dışa aktar. Mikronlardaki alan kare (μm2) her doku tipi için ölçülebilir ve yüzdeler numune toplam net doku alanından (yani toplam doku eksi hava alanından) elde edilir.</li>
		<li>Özel bir algoritma oluştururken, doğru ölçümler sağlamak ve doku tipleri arasında ayrım yapmak için Amerikan Veteriner Patologlar Koleji tarafından onaylanmış bir veteriner patolog kuruluna danışarak doku işaretlemelerini gözden geçirin.</li>
	</ol></li>
</ol>

<ol><li>Chambers, A. F., Groom, A. C., MacDonald, I. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissemination+and+growth+of+cancer+cells+in+metastatic+sites%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews%3A+Cancer%22%5BJournal%5D)">Dissemination and growth of cancer cells in metastatic sites.</a> Nature Reviews: Cancer. 2 (8), 563-572 (2002).</li>
<li>Steeg, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews%3A+Cancer%22%5BJournal%5D)">Targeting metastasis.</a> Nature Reviews: Cancer. 16 (4), 201-218 (2016).</li>
<li>Gupta, G. P., Massague, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+metastasis%3A+building+a+framework%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Cancer metastasis: building a framework.</a> Cell. 127 (4), 679-695 (2006).</li>
<li>Steeg, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+metastasis%3A+mechanistic+insights+and+clinical+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Tumor metastasis: mechanistic insights and clinical challenges.</a> Nature Medicine. 12 (8), 895-904 (2006).</li>
<li>Chaffer, C. L., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+perspective+on+cancer+cell+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">A perspective on cancer cell metastasis.</a> Science. 331 (6024), 1559-1564 (2011).</li>
<li>Eckhardt, B. L., Francis, P. A., Parker, B. S., Anderson, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strategies+for+the+discovery+and+development+of+therapies+for+metastatic+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Drug+Discovery%22%5BJournal%5D)">Strategies for the discovery and development of therapies for metastatic breast cancer.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 11 (6), 479-497 (2012).</li>
<li>Gomez-Cuadrado, L., Tracey, N., Ma, R., Qian, B., Brunton, V. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+metastasis%3A+progress+and+prospects%5BTitle%5D)+AND+%22Disease+Models+%26+Mechanisms%22%5BJournal%5D)">Mouse models of metastasis: progress and prospects.</a> Disease Models & Mechanisms. 10 (9), 1061-1074 (2017).</li>
<li>Fantozzi, A., Christofori, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+breast+cancer+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Breast+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Mouse models of breast cancer metastasis.</a> Breast Cancer Research. 8 (4), 212(2006).</li>
<li>Schoenenberger, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+c-myc+gene+expression+in+mammary+glands+of+transgenic+mice+induces+mammary+tumours+with+constitutive+milk+protein+gene+transcription%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+Journal%22%5BJournal%5D)">Targeted c-myc gene expression in mammary glands of transgenic mice induces mammary tumours with constitutive milk protein gene transcription.</a> EMBO Journal. 7 (1), 169-175 (1988).</li>
<li>Nusse, R., Varmus, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Many+tumors+induced+by+the+mouse+mammary+tumor+virus+contain+a+provirus+integrated+in+the+same+region+of+the+host+genome%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Many tumors induced by the mouse mammary tumor virus contain a provirus integrated in the same region of the host genome.</a> Cell. 31 (1), 99-109 (1982).</li>
<li>Muller, W. J., Sinn, E., Pattengale, P. K., Wallace, R., Leder, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-step+induction+of+mammary+adenocarcinoma+in+transgenic+mice+bearing+the+activated+c-neu+oncogene%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Single-step induction of mammary adenocarcinoma in transgenic mice bearing the activated c-neu oncogene.</a> Cell. 54 (1), 105-115 (1988).</li>
<li>Lin, E. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progression+to+malignancy+in+the+polyoma+middle+T+oncoprotein+mouse+breast+cancer+model+provides+a+reliable+model+for+human+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Progression to malignancy in the polyoma middle T oncoprotein mouse breast cancer model provides a reliable model for human diseases.</a> American Journal of Pathology. 163 (5), 2113-2126 (2003).</li>
<li>Green, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+C3%281%29%2FSV40+T-antigen+transgenic+mouse+model+of+mammary+cancer%3A+ductal+epithelial+cell+targeting+with+multistage+progression+to+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">The C3(1)/SV40 T-antigen transgenic mouse model of mammary cancer: ductal epithelial cell targeting with multistage progression to carcinoma.</a> Oncogene. 19 (1), 1020-1027 (2000).</li>
<li>Iorns, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+mouse+model+for+the+study+of+human+breast+cancer+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">A new mouse model for the study of human breast cancer metastasis.</a> PloS One. 7 (10), 47995(2012).</li>
<li>Kim, I. S., Baek, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+for+breast+cancer+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+and+Biophysical+Research+Communications%22%5BJournal%5D)">Mouse models for breast cancer metastasis.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 394 (3), 443-447 (2010).</li>
<li>Mariotto, A. B., Etzioni, R., Hurlbert, M., Penberthy, L., Mayer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estimation+of+the+Number+of+Women+Living+with+Metastatic+Breast+Cancer+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Epidemiology%2C+Biomarkers+and+Prevention%22%5BJournal%5D)">Estimation of the Number of Women Living with Metastatic Breast Cancer in the United States.</a> Cancer Epidemiology, Biomarkers and Prevention. 26 (6), 809-815 (2017).</li>
<li>Xiao, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Risk+factors+and+survival+outcomes+in+patients+with+breast+cancer+and+lung+metastasis%3A+a+population-based+study%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Medicine%22%5BJournal%5D)">Risk factors and survival outcomes in patients with breast cancer and lung metastasis: a population-based study.</a> Cancer Medicine. 7 (3), 922-930 (2018).</li>
<li>Smid, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subtypes+of+breast+cancer+show+preferential+site+of+relapse%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Subtypes of breast cancer show preferential site of relapse.</a> Cancer Research. 68 (9), 3108-3114 (2008).</li>
<li>Kennecke, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metastatic+behavior+of+breast+cancer+subtypes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Metastatic behavior of breast cancer subtypes.</a> Journal of Clinical Oncology. 28 (20), 3271-3277 (2010).</li>
<li>Soni, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Breast+cancer+subtypes+predispose+the+site+of+distant+metastases%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Clinical+Pathology%22%5BJournal%5D)">Breast cancer subtypes predispose the site of distant metastases.</a> American Journal of Clinical Pathology. 143 (4), 471-478 (2015).</li>
<li>Leone, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prognostic+impact+of+metastatic+pattern+in+stage+IV+breast+cancer+at+initial+diagnosis%5BTitle%5D)+AND+%22Breast+Cancer+Research+and+Treatment%22%5BJournal%5D)">Prognostic impact of metastatic pattern in stage IV breast cancer at initial diagnosis.</a> Breast Cancer Research and Treatment. 161 (3), 537-548 (2017).</li>
<li>Pei, X. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Explant-cell+culture+of+primary+mammary+tumors+from+MMTV-c-Myc+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vitro+Cellular+and+Developmental+Biology%3A+Animal%22%5BJournal%5D)">Explant-cell culture of primary mammary tumors from MMTV-c-Myc transgenic mice.</a> In Vitro Cellular and Developmental Biology: Animal. 40 (1-2), 14-21 (2004).</li>
<li>Mathsyaraja, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CSF1-ETS2-induced+microRNA+in+myeloid+cells+promote+metastatic+tumor+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">CSF1-ETS2-induced microRNA in myeloid cells promote metastatic tumor growth.</a> Oncogene. 34 (28), 3651-3661 (2015).</li>
<li>Yang, S., Zhang, J. J., Huang, X. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+for+tumor+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Mouse models for tumor metastasis.</a> Methods in Molecular Biology. 928, 221-228 (2012).</li>
<li>La Perle, K. M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+Pathologists%3A+Ultimate+Control+Freaks+Seeking+Validation%5BTitle%5D)+AND+%22Veterinary+Pathology%22%5BJournal%5D)">Comparative Pathologists: Ultimate Control Freaks Seeking Validation.</a> Veterinary Pathology. 56 (1), 19-23 (2019).</li>
<li>Blomberg, O. S., Spagnuolo, L., de Visser, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+regulation+of+metastasis%3A+mechanistic+insights+and+therapeutic+opportunities%5BTitle%5D)+AND+%22Disease+Models+%26+Mechanisms%22%5BJournal%5D)">Immune regulation of metastasis: mechanistic insights and therapeutic opportunities.</a> Disease Models & Mechanisms. 11 (10), (2018).</li>
<li>Gonzalez, H., Hagerling, C., Werb, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Roles+of+the+immune+system+in+cancer%3A+from+tumor+initiation+to+metastatic+progression%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+and+Development%22%5BJournal%5D)">Roles of the immune system in cancer: from tumor initiation to metastatic progression.</a> Genes and Development. 32 (19-20), 1267-1284 (2018).</li>
<li>Borowsky, A. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Syngeneic+mouse+mammary+carcinoma+cell+lines%3A+two+closely+related+cell+lines+with+divergent+metastatic+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+and+Experimental+Metastasis%22%5BJournal%5D)">Syngeneic mouse mammary carcinoma cell lines: two closely related cell lines with divergent metastatic behavior.</a> Clinical and Experimental Metastasis. 22 (1), 47-59 (2005).</li>
<li>Yang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunocompetent+mouse+allograft+models+for+development+of+therapies+to+target+breast+cancer+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Immunocompetent mouse allograft models for development of therapies to target breast cancer metastasis.</a> Oncotarget. 8 (19), 30621-30643 (2017).</li>
<li>Resch, M., Neels, T., Tichy, A., Palme, R., Rulicke, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+assessment+of+tail-vein+injection+in+mice+using+a+modified+anaesthesia+induction+chamber+versus+a+common+restrainer+without+anaesthesia%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animals%22%5BJournal%5D)">Impact assessment of tail-vein injection in mice using a modified anaesthesia induction chamber versus a common restrainer without anaesthesia.</a> Laboratory Animals. 53 (2), 190-201 (2019).</li>
<li>Rashid, O. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Is+tail+vein+injection+a+relevant+breast+cancer+lung+metastasis+model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Thoracic+Disease%22%5BJournal%5D)">Is tail vein injection a relevant breast cancer lung metastasis model.</a> Journal of Thoracic Disease. 5 (4), 385-392 (2013).</li>
<li>Goodale, D., Phay, C., Postenka, C. O., Keeney, M., Allan, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+tumor+cell+dissemination+patterns+in+preclinical+models+of+cancer+metastasis+using+flow+cytometry+and+laser+scanning+cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+Part+A%22%5BJournal%5D)">Characterization of tumor cell dissemination patterns in preclinical models of cancer metastasis using flow cytometry and laser scanning cytometry.</a> Cytometry Part A. 75 (4), 344-355 (2009).</li>
<li>Goddard, E. T., Fischer, J., Schedin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Portal+Vein+Injection+Model+to+Study+Liver+Metastasis+of+Breast+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">A Portal Vein Injection Model to Study Liver Metastasis of Breast Cancer.</a> Journal of Visualized Experiments. (118), (2016).</li>
<li>Wright, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+models+of+breast+cancer+bone+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22BoneKEy+Reports%22%5BJournal%5D)">Murine models of breast cancer bone metastasis.</a> BoneKEy Reports. 5, 804(2016).</li>
<li>Simmons, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+Models+of+Bone+Metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Veterinary+Pathology%22%5BJournal%5D)">Animal Models of Bone Metastasis.</a> Veterinary Pathology. 52 (5), 827-841 (2015).</li>
<li>Liu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+orthotopic+mouse+models+of+patient-derived+breast+cancer+brain+metastases+by+a+modified+intracarotid+injection+method%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Improving orthotopic mouse models of patient-derived breast cancer brain metastases by a modified intracarotid injection method.</a> Scientific Reports. 9 (1), 622(2019).</li>
<li>Kodack, D. P., Askoxylakis, V., Ferraro, G. B., Fukumura, D., Jain, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emerging+strategies+for+treating+brain+metastases+from+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Emerging strategies for treating brain metastases from breast cancer.</a> Cancer Cell. 27 (2), 163-175 (2015).</li>
<li>Brown, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Practical+Stereology+Applications+for+the+Pathologist%5BTitle%5D)+AND+%22Veterinary+Pathology%22%5BJournal%5D)">Practical Stereology Applications for the Pathologist.</a> Veterinary Pathology. 54 (3), 358-368 (2017).</li>
<li>Aeffner, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Digital+Microscopy%2C+Image+Analysis%2C+and+Virtual+Slide+Repository%5BTitle%5D)+AND+%22Institute+for+Laboratory+Animal+Research+Journal%22%5BJournal%5D)">Digital Microscopy, Image Analysis, and Virtual Slide Repository.</a> Institute for Laboratory Animal Research Journal. 59 (1), 66-79 (2018).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Araştırmacılar metastaz için deneysel bir model olarak tümör hücrelerinin intravenöz enjeksiyonlarını kullanmaya devam ettikçe, ortaya çıkan metastatik tümör yükünü analiz etmek için standart uygulamalar eksiktir. Bazı durumlarda, belirli hücre hatlarının manipülasyonu ve/veya kimyasal bileşiklerin kullanımı üzerine metastatik tümör yükünde önemli farklılıklar makroskopik olarak gözlenebilir. Bununla birlikte, diğer durumlarda, metastatik tohumlama ve büyümedeki ince farklılıklar, kapsamlı patolojik analizler yapılmadan ...

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/61270/pathological-analysis-lung-metastasis-following-lateral-tail-vein">Pathological Analysis of Lung Metastasis Following Lateral Tail-Vein Injection of Tumor Cells</a>. The author list was updated.
The author list was updated from:
Katie A. Thies1,&#160;Sue E. Knoblaugh2, and Steven T. Sizemore1 
1Department of Radiation Oncology, Arthur G. James Comprehensive Cancer Center and Richard L. Solove Research Institute, The Ohio State University Medical Center 
2Department of Veterinary Biosciences, Comparative Pathology and Digital Imaging Shared Resource, The Ohio State University
to:
Katie A. Thies1, Sarah Steck1, Sue E. Knoblaugh2, and Steven T. Sizemore1 
1Department of Radiation Oncology, Arthur G. James Comprehensive Cancer Center and Richard L. Solove Research Institute, The Ohio State University Medical Center 
2Department of Veterinary Biosciences, Comparative Pathology and Digital Imaging Shared Resource, The Ohio State University

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/61270/pathological-analysis-lung-metastasis-following-lateral-tail-vein">Pathological Analysis of Lung Metastasis Following Lateral Tail-Vein Injection of Tumor Cells</a>. The author list was updated.

Erratum: Pathological Analysis of Lung Metastasis Following Lateral Tail-Vein Injection of Tumor Cells

Son derece karmaşık ve verimsiz bir süreç olmasına rağmen1, metastaz kanser hastalarının morbidite ve mortalitesine önemli bir katkıda bulunur2. Aslında, kansere bağlı ölümlerin çoğu hastalığın metastatik yayılmasına atfedilir3,4. Tümör hücrelerinin başarılı bir şekilde metastaz yapabilmesi için birincil bölgeden kopmaları, bitişik stroma yoluyla istila etmeleri, kan dolaşımına veya lenfatiklere intravazyona girmeleri, ikincil bir bölgenin kılcal yatağına gitmeleri, ikincil dokuya yayılmaları ve çoğalmaları veya metastatik lezyonlar oluşturmak için büyümeleri gerekir5. Fare modellerinin kullanımı, metastatik tohumlama ve büyümeden sorumlu moleküler mekanizmaların anlaşılmasını ilerletmek için kritik öneme sahiptir6,7. Burada, hem genetiği değiştirilmiş fare modellerinin hem de transplantasyon yöntemlerinin sıklıkla kullanıldığı meme kanseri metastazına odaklanıyoruz - her biri kendi avantajları ve sınırlamaları var.
Genetik olarak tasarlanmış meme tümörü modelleri, meme epitelinde transjenlerin ekspresyonini sağlamak için MMTV-LTR (fare meme tümörü virüsü uzun terminal tekrarı) ve WAP (Peynir Altı Suyu Asidik Protein) dahil olmak üzere meme bezine özgü promotörlerden yararlanır8. Polioma orta T antijeni (PyMT), ErbB2/Neu, c-Myc, Wnt-1 ve simian virüs 40 (SV40) dahil olmak üzere onkogenler bu şekilde ifade edilmiştir9,10,11,12,13 ve bu genetik modeller primer tümör başlangıç ve ilerlemesini incelemek için yararlı olmakla birlikte, çok azı uzak organlara kolayca metastaz yapmaktadır. Ayrıca, bu genetik fare modelleri genellikle spontan veya deneysel metastaz modellerine göre daha fazla zaman ve maliyet yasaklayıcıdır. Genetik olarak tasarlanmış meme tümörü modellerinin çoğunun metastaz çalışması için sınırlandırılması göz önüne alındığında, transplantasyon teknikleri bu karmaşık süreci incelemek için cazip yöntemler haline gelmiştir. Buna ortotopik, kuyruk damarı, intrakardiyak ve uygun hücre hatlarının intrakraniyal enjeksiyonu dahildir.
Meme yağı pedine ortotopik enjeksiyondan sonra birkaç meme kanseri hücre hattı kolayca metastaz yapsa da14,15, metastatik tümör yükünün tutarlılığı ve tekrarlanabilirliği zor olabilir ve bu tür çalışmaların süresi birkaç ay sırasına göre olabilir. Akciğer metastazını değerlendirmek için, özellikle kuyruk damarına intravenöz enjeksiyon genellikle birkaç hafta içinde meydana gelen metastatik yayılma ile daha tekrarlanabilir ve zaman etkili bir yöntemdir. Ancak intravenöz enjeksiyon modeli metastatik kaskadın ilk adımlarını atlatığından, bu çalışmaların sonuçlarının yorumlanmasının dikkatli olunmalıdır. Bu gösteride, meme tümörü hücrelerinin kuyruk damarı enjeksiyonunun yanı sıra doğru ve kapsamlı bir analiz yöntemi gösteriyoruz.
Araştırma topluluğu meme kanseri metastazının karmaşık sürecini anlamada önemli ilerleme kaydetmiş olsa da, şu anda 150.000'den fazla kadının metastatik meme kanserine sahip olduğu tahmin edilmektedir16. Evre IV meme kanseri olanların % > 36'sı akciğer metastazı17; bununla birlikte, metastazların bölgeye özgü deseni ve insidansı moleküler alt tipe göre değişebilir18,19,20,21. Meme kanseri ile ilişkili akciğer metastazları olan hastalar, bu hastalık için etkili tedaviler ve yeni biyobelirteçler belirleme ihtiyacını vurgulayan sadece 21 aylık ortanca bir sağkalıma sahiptir17. Tümör hücrelerinin intravenöz enjeksiyonu da dahil olmak üzere deneysel metastaz modellerinin kullanımı, bu önemli klinik zorluk hakkındaki bilgimizi ilerletmeye devam edecektir. Bu protokolde açıklanan dijital görüntüleme patolojisi ve metastatik akciğer tümörü yük analizi yöntemi ile birleştirildiğinde kuyruk damar enjeksiyonları meme kanseri metastaz araştırmaları için değerli bir araçtır.

<table><tbody><tr><td>alkol hazırlama pedleri</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-363-750</td><td><güçlü>enjeksiyondan önce kuyruğu temizlemek için</güçlü></td></tr><tr><td>diseksiyon makası</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-951-5</td><td><güçlü>fare diseksiyonu ve akciğer dokusu şişirmesi için</güçlü></td></tr><tr><td>L-Glutamin, 4.5g/L Glikoz ve Sodyum Pirüvat ile DMEM</td><td>Fisher Scientific</td><td>MT10013CV</td><td>MDA-MB-231 ve MVT1 hücre hatları için hücre kültürü ortam tabanı</td></tr><tr><td>Dulbecco'nun Fosfat Tamponlu Tuz Çözeltisi 1x</td><td>Fisher Scientific</td><td>MT21030CV</td><td>enjeksiyon etanol için tümör hücrelerini yeniden süspanse etmek için kullanılır</td></tr><tr><td>(% 70 çözelti)</td><td></td><td>Diseksiyon sırasında farenin kürkünü en aza indirmek için kullanılan</td>OSU<td></td>; Dikkatli kullanın - yanıcı</tr><tr><td>Evan'ın mavi boyası</td><td>Millipore Sigma</td><td>E2129</td><td>kuyruk-ven enjeksiyon yöntemi ile uygulama için steril PBS'de% 1'de kullanılır; Dikkatli kullanın - tehlikeli reaktif</td></tr><tr><td>Fetal Sığır Serumu</td><td>Millipore Sigma</td><td>F4135</td><td>hücre kültürü ortamı katkı maddesi; DMEM forsepslerinde %10 oranında kullanılır</td></tr><tr><td>Diseksiyon ve akciğer dokusu şişirme için</td><td></td><td>Fisher Scientific</td><td>10-270</td></tr><tr><td>FVB/NJ fareleri</td><td>Jackson Laboratuvarı</td><td>001800</td><td>MVT1 hücreleri için sinjeneik fare suşu</td></tr><tr><td>hematitometre (Bright-Line)</td> <td>Millipore Sigma</td><td>Z359629</td> hücre <td>sayımı elde etmek için hücre kültüründe kullanım için</td></tr><tr><td>insülin şırıngası (28 G)</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-829-1B</td>, <td>kuyruk-damar enjeksiyonları için (BD 329424)</td></tr><tr><td>MDA-MB-231 hücreleri</td>, <td>ATCC</td><td></td><td>insan meme kanseri hücre hattı</td></tr>, <tr><td>MVT1 hücreleri</td><td></td><td></td>, <td>fare meme tümör hücreleri</td></tr>, <tr><td>iğneler (26 G)</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-826-15</td>, <td>farenin şişirmek için kullanılır akciğerler</td></tr><tr><td>nötr tamponlu formalin (% 10)</td><td>Fisher Scientific</td><td>245685</td><td>doku fiksatifi olarak ve akciğer dokusunu şişirmek için kullanılır; Dikkatli kullanın - tehlikeli reaktif</td></tr><tr><td>NOD. Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ (NSG) fareleri</td><td>Jackson Laboratuvarı</td><td>005557</td><td>OSUCCC Hedef Doğrulama tarafından sürdürülmektedir Paylaşılan Kaynak</td></tr><tr><td>Penisilin Streptomisin 100x</td><td>ThermoFisher</td><td>15140163</td><td>hücre kültürü ortamı katkı maddesi</td></tr><tr><td>steril gazlı bez</td> Kanama <td>olursa farenin kuyruğuna basınç uygulamak için</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9379092</td></tr><tr><td>şırınga (5 mL)</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-955-458</td><td>fare akciğer dokusu</td></tr><tr><td>kuyruk-damar tutucuyu</td> şişirmek için kullanılır <td>Braintree Scientific, Inc.</td><td>Kuyruk damarı enjeksiyonları için fareyi dizginlemek için kullanılan</td> <td>TV-150 STD</td></tr><tr><td>Tripan mavisi (% 0.4)</td> <td>ThermoFisher</td><td>15250061</td><td>canlılığı değerlendirmek için hücre kültüründe kullanılır</td></tr><tr><td>Tripsin-EDTA %0.25</td> <td>ThermoFisher</td><td>25200-114</td>, <td>tümör hücrelerini plakadan ayırmak için hücre kültüründe kullanılır</td></tr></tbody></table>

tümör hücrelerinin lateral kuyruk-damar enjeksiyonu sonrasında akciğer metastazının patolojik analizi

Pathological Analysis of Lung Metastasis Following Lateral Tail-Vein Injection of Tumor Cells

Çoğu kanser hastası için morbidite ve mortalitenin birincil nedeni olan metastazın farelerde preklinik olarak model alınması zor olabilir. Birkaç spontan metastaz modeli mevcuttur. Bu nedenle, uygun hücre hatlarının kuyruk damarı enjeksiyonu içeren deneysel metastaz modeli metastaz araştırmalarının bir dayanağıdır. Kanser hücreleri lateral kuyruk damarına enjekte edildiğinde akciğer tercih ettikleri kolonizasyon bölgesidir. Bu tekniğin potansiyel bir sınırlaması metastatik akciğer tümörü yükünün doğru ölçülmesidir. Bazı araştırmacılar önceden tanımlanmış boyuttaki makrometazları sayarken ve/veya dokunun kesitini takiben mikrometazlar içerirken, diğerleri normal doku alanına göre metastatik lezyonların alanını belirler. Metastatik yük yüksek olduğunda bu niceleme yöntemlerinin her ikisi de son derece zor olabilir. Burada, akciğer metastazının intravenöz enjeksiyon modelini ve ardından görüntü analiz yazılımı kullanarak metastatik tümör yükünü ölçmek için gelişmiş bir yöntem gösteriyoruz. Bu işlem, kapsamlı bir analiz sağlamak için ortalama metastaz boyutu, toplam metastaz sayısı ve toplam metastaz alanı dahil olmak üzere birden fazla uç nokta parametresinin araştırılmasına olanak tanır. Ayrıca, bu yöntem doğruluğu sağlamak için Amerikan Veteriner Patologlar Koleji (SEK) tarafından onaylanmış bir veteriner patolog kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

Kuyruk damarı enjeksiyonu için etiketsiz hücreler kullanıyorsanız, makrometazlar gözlemlenebiliyorsa (1) nekropsi zamanına kadar veya (2) mikroskobik metastazlar varsa histolojik analizi takiben akciğer kolonizasyonunu doğrulamak zor olabilir. Geniş metastatik akciğer tümörü yükü ile fareler nefes almaya çalışacaktır. Herhangi bir tümör çalışmasında olduğu gibi, fareler çalışma süresi boyunca dikkatle izlenmelidir. Etiketli hücrelerin kullanımı, başarılı kuyruk damarı enjeksiyonu onaylamanın kolay bir yoludur; bu nedenle...

Kanser hücrelerinin intravenöz enjeksiyonu genellikle metastaz araştırmalarında kullanılır, ancak metastatik tümör yükünü analiz etmek zor olabilir. Burada, metastazın kuyruk damarı enjeksiyon modelini gösteriyoruz ve ortaya çıkan metastatik akciğer tümörü yükünü analiz etmek için yeni bir yaklaşım içeriyoruz.

Tümör Hücrelerinin Lateral Kuyruk-Damar Enjeksiyonu Sonrasında Akciğer Metastazının Patolojik Analizi

Metastasis, the primary cause of morbidity and mortality for most cancer patients, can be challenging to model preclinically in mice. Few spontaneous ...

Şu anda kuyruk ven enjeksiyonuna bağlı metastatik akciğer tümörü yüklerini analiz etmek için altın standart yoktur. Akciğer metastazlarını yüksek verimli bir şekilde doğru ve tekrarlanabilir bir şekilde ölçmek için dijital görüntü analizinden yararlandık. Bu yöntem zaman ve maliyet etkindir.Ve dijital görüntü analizi ile birleştiğinde, ortaya çıkan akciğer metastatik tümör yükünün son derece doğru ve kapsamlı bir analizine izin verir. İnsan meme kanseri hücrelerini enjeksiyona hazırlamak için, önce kullanılacak fare sayısına ve hücre konsantrasyonuna bağlı olarak uygun sayıda hücreyi uygun bir hücre kültürü ortamına yerleştirin. Hücreler% 80 ila 90'lık bir birleşmeye ulaştığında, plakaları PBS ile yıkayın ve standart protokollere göre hücreleri minimum miktarda tripsin içinde ayırın.Hücreler ayrıldığında, hücreleri saymak için taze kültür ortamında tekrar askıya alın ve hücreleri santrifüjleme ile toplayın. Daha sonra, hücreleri buz üzerinde fare başına 100 mikrolitre PBS'de uygun konsantrasyonda yeniden süspanse edin. Enjeksiyondan hemen önce, topaklanmayı önlemek için hücreleri buz üzerinde iyice yeniden askıya alın ve 100 mikrolitre hücreyi 28 gauge insülin şırıngasına yükleyin.Şırıngayı dikey tutarak, kabarcıkları gidermek için pistonu yavaşça ayarlarken mile hafifçe vurun. İzin verilirse, iğneyi dikkatlice yeniden kapatın ve iğne ucunu 20 ila 30 derecelik bir açıyla bükün. Altı haftadan daha eski bir dişi fareyi plastik bir fare tutucuda tutun ve fareyi, yanal kuyruk damarı kolayca görülebilecek şekilde yan yatırın.Ventral arteri genital organ, bir dorsal ven ve iki lateral caudle ven ile aynı hizada bulun ve kuyruk yüzeyini temizlemek için aseptik bir mendil kullanın. Kuyruğu baskın olmayan elin işaret parmağı ile başparmağı arasında kavrayarak hafif bir gerginlik uygulayın ve kuyruğun distal kısmından başlayarak iğneyi eğim tarafı yukarı bakacak şekilde damara paralel olarak yerleştirin. Hücrelerin tüm hacmini yavaşça damara iletin.Enjeksiyondan sonra küçük bir hacimde kan muhtemelen yer değiştirecektir. Enjeksiyon bölgesine steril bir gazlı bezle hafif bir baskı uygulayın. Ardından şırıngayı uygun bir keskin alet kabına atın ve fareyi izlemeli temiz, havalandırılan bir kafese yerleştirin.Kuyruk damarı enjeksiyonundan en fazla bir saat sonra, başarılı bir hücre enjeksiyonunu doğrulamak ve sıfır zaman verilerini elde etmek için canlı hayvan in vivo görüntüleme gerçekleştirin. Histopatoloji için akciğerlerin yapısal formatını korumak için, fareyi bir diseksiyon tahtasına sabitleyin ve kürkü% 70 etanol ile ıslatın. Toraksı orta hat kesisi ile açın, insizyonu periton boyunca kraniyal ve kaudal olarak uzatın ve diyaframın çıkarılmasına izin vermek için ksifoid sürecini kavrayın.İkinci bir makas kullanarak, göğüs kemiğinin her iki yanındaki kaburgaları kesin ve akciğerlerin genişlemesi için yer bırakmak için göğüs kafesini dikkatlice çıkarın. Trakeayı izole etmek için, submandibular tükürük bezlerini ve infrahyoid kas sistemini çıkarın ve iğne yerleştirme sırasında istenmeyen hareketi önlemek için trakeanın her iki tarafına pimler yerleştirin. 26 gauge iğne ile donatılmış, iki ila üç mililitre% 10 nötr tamponlu Formelin ile donatılmış üç mililitrelik bir şırınga yükleyin ve iğneyi trakeaya yerleştirin.Akciğerlerin genişlemesini izlerken Formelin'i yavaşça enjekte edin. Formelin akciğerlerden sızmaya başladığında, trakeayı sıkıştırmak için forseps kullanın ve iğneyi çıkarın. Daha sonra tüm solunum cihazını ayırın ve organları doğrudan bir taze Formelin kabına yerleştirin.Metastatik akciğer tümörü yükünün analizi için, H&E lekeli akciğer dokusu kesitlerini 40 kat büyütmede yüksek çözünürlüklü bir slayt tarayıcıda tarayın ve görüntüleri uygun bir görüntü analiz yazılım programına aktarın. Şekli ve seyrekliği tanımlayan parametreleri görüntülere en iyi şekilde uyacak şekilde ayarlayın. Tümör metastazlarının ve normal akciğer dokusunun segmentli alanlarını görüntülemek için, her doku tipi için farklı renkli etiketler kullanarak, Karar Ormanı programını açın ve her sınıfı bir görüntü için uygun şekilde eğitmek üzere istenen evet veya hayır soru serisini izleyin.Her sınıfın özelliklerini ayarlamak için, algoritmanın doğruluğunu artırmak üzere keskinleştirmek, bulanıklaştırmak veya şekle göre sıralamak için filtreler uygulayın. Bu analizde, tümör metastazları mavi renkte görünür. Normal doku yeşildir ve bronşiolar epitel sarıdır.Kırmızı kan hücreleri kırmızı renkte görülebilir ve hava boşlukları pembe renkte görünür. Tüm özellikler ayarlandığında, değiştirilen ayarları kaydedin ve algoritmayı tüm sete veya H&E lekeli doku serisine uygulayın. Ardından, her doku tipi için mikron kare cinsinden alanın nicelleştirilmesine izin vermek ve numunenin toplam net doku alanından yüzdelerin hesaplanmasına izin vermek için tüm çıktı değişkenlerini dışa aktarın.Lusiferaz etiketli insan epitelyal meme kanseri hücrelerinin kuyruk damarı enjeksiyonundan iki saatten daha kısa bir süre sonra torasik boşlukta bir biyolüminesans sinyalinin varlığı, doğru bir enjeksiyonun teyidi olarak kabul edilebilir. Bu deneyde, torasik bölgedeki foton sayıları zamanla arttı ve enjeksiyondan sonraki 24. günde güçlü bir biyolüminesans sinyali hala mevcuttu. Nekropsi sırasında, bu farelerde birçok makroskopik akciğer lezyonu gözlendi.Görüntü analiz yazılımı ve gösterildiği gibi özel bir algoritma kullanılarak, tüm akciğer dokusu farklı doku özelliklerine göre bölümlere ayrılabilir. Yazılım, akciğer dokusunu bu şekilde bölümlere ayırarak çeşitli parametreleri ölçebilir. Burada, insan epitelyal meme kanseri hücreleri enjekte edilen farelerden alınan akciğer dokusu üzerinde yapılan bir analizden elde edilen ham veriler ve ardından metastatik kolonizasyonu bloke etmek için tasarlanmış bir ilaçla tedavi gösterilmektedir.Bu görüntülerin gösterdiği gibi, toplam akciğer nodülü sayısı farklı olmadığından, bu tedavi grupları arasındaki metastatik tümör yükündeki bir fark kolayca gözden kaçmış olabilir. Bununla birlikte, tüm parametrelerin kapsamlı bir analizi, net akciğer metastaz alanı yüzdesinde önemli bir fark olduğunu gösterdi ve metastatik akciğer tümör yükü analizine kapsamlı bir yaklaşıma duyulan ihtiyacın altını çizdi Hava kabarcıkları olmadan uygun bir hücre yeniden süspansiyonu, pulmoner embolilerin önlenmesi için kritik öneme sahiptir ve başarılı bir akciğer şişirme, doğru bir görüntü analizi için doku yapısı bütünlüğünün korunmasına yardımcı olur. Akciğer dokusunun immün boyaması, akciğer lezyonlarında veya akciğer mikro ortamında ilgilenilen hücrelerin veya proteinlerin varlığını belirlemek için yapılabilir.

pathological-analysis-lung-metastasis-following-lateral-tail-vein

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kanser Araştırmaları

Bu makale, insan kanser hücre hatları metastatik potansiyelini belirlemek için kullanılan deneysel bir metastaz testinin prosedürleri açıklamaktadır.

Deneysel metastaz Testi

Bu videoda, bir fare modeline kuyruk damarı enjeksiyonu kullanılarak etiketli kanser hücrelerinin enjekte edilmesi tekniği açıklanmaktadır. Gerçek zamanlı in vivo canlı hayvan görüntülemeyi kullanarak meme kanseri, metastaz oluşumunu ve büyümesini daha fazla izliyoruz.

Kuyruk Damarı Enjeksiyonu: Bir Fare Modelinde Metastatik Çalışmalar için Kanser Hücrelerini Uygulamak İçin Bir Yöntem

Bu videoda, fare modelinde melanom hücreleri kuyruk damarından intravenöz olarak enjekte edilmektedir. Melanom hücreleri dolaşım sistemi boyunca daha fazla hareket eder, uzak mikro çevreye adapte olur ve akciğerler gibi organlarda metastaza neden olur.

Deneysel Metastatik Melanom Fare Modeli: Akciğerlerdeki Melanom Hücrelerinin Metastatik Potansiyelini İncelemek İçin Bir Platform

Bu el yazması tümör hücresi birikimi Akciğerlerde tümör metastazı, bir hayvan modeli ölçmek için bir yöntem açıklanır.

Akciğer tümör hücre işe alım tahlil

Metastazı, kanserin virülansında derin bir rol oynar ve ölümlerin tahminen %90'ını oluşturur.  Farelerde metastatik melanom modeli için terapötik ajanların bu klinik fenomene karşı etkinliğini belirlemek için yararlı olan bir protokol sunuyoruz.

Singenik Fare Melanom Hücreleri Enjeksiyon Akciğerler Onların Metastatik Potansiyeli belirleme

Meme tümör hücrelerinin portal ven enjeksiyonu yoluyla murin karaciğerine iletilmesi için cerrahi bir prosedür geliştirilmiştir. Bu model, tümör hücresi ekstravazasyonu, tohumlama, sağkalım ve karaciğerde metastatik büyüme dahil olmak üzere tamamen immün yetkin bir konakta karaciğer metastazının geç aşamalarının araştırılmasına izin verir.

Bir Portal Ven Enjeksiyon Modeli Karaciğer Metastazı Meme Kanseri Eğitim için

Bu makalede, pulmoner metastaz tahlil (PuMA) Protokolü'nün ayrıntılı bir açıklama sağlamak için hedeftir. Bu model araştırmacılar metastatik osteosarkom (OS) hücre büyümesini widefield floresan veya confocal mikroskop lazer tarama kullanarak akciğer dokusunda çalışmaya izin verir.

Metastatik akciğer kolonizasyon pulmoner metastaz tahlil kullanarak osteosarkom içinde eğitim pratik düşünceler

Bir hayvan modeli tümör hücreleri (CTCs) kanseri metastaz sırasında akciğer kolonizasyon teşvik dolaşan rolü deşifre için gereklidir. Burada kurduk ve başarıyla gerçekleştirilen bir vivo içinde tahlil özel olarak test etmek için gereksinimin akciğer kolonizasyon için CTCs polimer fibronektin (polyFN) Meclisi.

Tümör hücre görselleştirme akciğer dokusu içinde dolaşan bir akciğer kolonizasyon tahlil kurulması

Açıklanan yaklaşım, akciğerlerdeki metastaz sayısı ve boyutunun ölçülmesine ek olarak meme kanseri metastazı oluşumunun ve büyümesinin gerçek zamanlı olarak izlenmesine olanak sağlamak için deneysel kuyruk ven metastazı tahlillerini in vivo canlı hayvan görüntülemeile birleştirir.

Kuyruk Ven Metastaz Tahlilleri ve Gerçek Zamanlı Vivo Görüntüleme Kombine Kullanımı Meme Kanseri Metastatik Kolonizasyon ve Yük Akciğerlerde Quantify için

Endojen olarak HER2 ile amplifiye edilmiş inflamatuar meme kanseri hücre hattının kuyruk damarı enjeksiyonu yoluyla üretilen meme kanseri beyin metastazının bir ksenogreft fare modelini tanımladık.

İnflamatuar Meme Kanseri Hücrelerinin Kuyruk-Ven Enjeksiyonu ile Beyin Metastazının Modellenmesi

El yazması, ortotopik olarak enjekte edilen meme tümörlerinden spontan akciğer metastazının kurulması ve uzunlamasına büyüme izlemesi için metastatik kaskadının tüm aşamalarında müdahaleye uygun bir metodolojiyi açıklamaktadır.

In vivo (İn canlı) Ortotopik Olarak Enjekte Edilen Meme Tümörü Hücrelerinin Spontan Akciğer Metastazını Ölçmek için Görüntüleme

Öğrenin, farelerde lateral kuyruk damarı enjeksiyonu sonrası akciğer metastazlarını dijital görüntü analizi ile nicelendirmeyi. Bu yöntem, metastatik tümör yükünü doğru ve tekrarlanabilir şekilde ölçer.

Tümör Hücrelerinin Lateral Kuyruk-Damar Enjeksiyonu Sonrasında Akciğer Metastazının Patolojik Analizi

Daha fazla video keşfet