Name: Akut Chorioamnionitisin Yenidoğan Bağırsak Gelişimi Üzerindeki Etkilerini İncelemek için Anne İltihaba Fetal MaruzIyetin Bir Murine Modeli (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-06-24T13:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 50 s
Description: Keşfedin, anne iltihabına fetal maruziyetin yenidoğan bağırsak gelişimi üzerindeki etkilerini incelemek için LPS ile indüklenen murine FEMI modelini. Bu yöntem nekrotize enterokolit mekanizmalarını anlamaya yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma kısmen Ulusal Sağlık Enstitüleri (DK097335 & T32AI007260) ve Iowa Stead Üniversitesi Aile Pediatri Bölümü aracılığıyla desteklendi.

Tüm hayvan prosedürleri Iowa Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (Protokol #8041401) tarafından onaylandı. Tüm hayvanlar, Iowa Üniversitesi'nde Laboratuvar Hayvan Bakımı Değerlendirme ve Akreditasyon Derneği (AALAC) onaylı bir vivariumda barındırıldı. Tüm fareler vahşi tip Suş C57Bl / 6J'ydi.
1. Hamile farelerde FEMI'nin kurulması
<ol><li>LPS hazırlığı<ol>
<li>Escherichia coli O55:B5'ten türetilen LPS kullanın (stok konsantrasyonu 2 mg/mL).</li>
		<li>LPS stok konsantrasyonunu 1:100 steril salin ile seyreltin ve 20 μg/mL çalışma konsantrasyonu elde edin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Maternal LPS enjeksiyonu<ol>
<li>Gebelik günü e15'te hamile barajları enjekte edin. Bu zaman noktası, murine gebelik yoluyla yaklaşık% 75'tir ve bu modeli, chorioamnionitis'e bağlı erken doğumların çoğunluğunun gerçekleştiği insan gebeliklerinin erken üçüncü üç aylık dönemine gelişimsel olarak benzer hale getirir.</li>
		<li>Uygun LPS dosing belirlemek için enjeksiyondan hemen önce hamile fareleri tartın.</li>
		<li>Aşağıdaki formülü kullanarak çalışma konsantrasyonunun dozunu hesaplayın: toplam 100 μg / kg LPS dozu için 5 μL x gram vücut ağırlığı (gbw). Hayvanları kontrol için, enjeksiyon için eşdeğer bir normal salin hacmi kullanın.</li>
		<li>Vortex LPS çözeltisi, her enjeksiyondan önce 15 saniye boyunca üç kez yüksekte.</li>
		<li>LPS hacmini 1 mL şırınna çekin.</li>
		<li>Hamile fareyi scruffing tekniği ile zapt edin. Dorsal reumbency pozisyonunda tutun ve enjeksiyonu gerçekleştirin.<ol>
<li>30\u201240° açıyla karnın sağ alt çeyreğini (mesane ve karın damarlarını önlemek için) üzerine 30 ölçer 8 mm iğne eğimi yerleştirin. İğnenin yaklaşık 1/4 ila 1/2 uzunluğunu yerleştirin.</li>
			<li>Enjekte etmeden önce negatif basınç sağlamak için şırınna pistonu geri çekin. Negatif basınç varsa enjeksiyona devam edin.</li>
			<li>Enjeksiyondan sonra, fareleri yaklaşık 30 dakika izleyin ve daha sonra hamileliğin geri kalanı için kafeslere geri dönün.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. Yavruların teslimi ve bakımı ve bağırsak hasadı
<ol><li>E20'de vajinal doğum yoluyla normal olarak yavrular teslim edin. NOT: Bu model Şekil 1'de görülebilen ve aşağıdaki sonuçlarda tartışılan beklenen bir doza bağımlı fetal kayıp oranına sahiptir.</li>
	<li>Yavruların annelerle kalmasına ve reklam libitum beslemeleri almasına izin verin.</li>
	<li>Hasat gününde, tipik olarak doğum sonrası 14 (P14), Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi protokollerine uygun olarak servikal çıkık yoluyla yavrulara ötenazi.</li>
	<li>Makas ve forseps kullanarak, karnın orta çizgisine, deri ve peritondan, karnın tüm uzunluğu boyunca dikey bir kesi yapın. İnce bağırsağı mideden makasla sökmeğe çıkarın ve asalarla mezteri çıkarın.</li>
	<li>İnce bağırsağın distal 1/3'ü (insan ileumunun kesit temsilcisi), proksimal ince bağırsağı, cecum'ı ve kolonu atarak izole edin ve saklayın.</li>
	<li>İleum kısmını makas kullanarak ikiye bölün.</li>
	<li>Proksimal yarısını daha sonra RNA nicelemesi için bir RNA stabilizasyon çözeltisine yerleştirin.</li>
	<li>Distal yarısını slayt hazırlığı için% 10 nötr tamponlu formalin içine yerleştirin.</li>
</ol>3. Bağırsak yaralanması puanlaması
<ol><li>Bölüm parafin gömülü doku 5 μm kalınlığında dilimler halinde ve cam slaytlar üzerine monte. NOT: Örnekleri parafin gömme, bölümleme ve slaytlara montaj için bir histoloji çekirdeğine gönderiyoruz.</li>
	<li>Slaytları standart prosedürlere göre ayrıştırın.</li>
	<li>Standart prosedürlere göre hematoksilin ve eozin ile leke bölümleri.</li>
	<li>Daha önce açıklandığı gibi bağırsak yaralanması için 3 puan ölçeğinde puan bölümleri42,43.<ol>
<li>Hafif mikroskopi kullanarak, villus bütünlüğünü ve bodrum zarından ayırmayı değerlendiren 3 puanlık bir ölçekte iki ayrı kör araştırmacı tarafından genelleştirilmiş bağırsak yaralanmasını değerlendirin43 (Ek Şekil 1). Bağırsak hasarı en iyi 20x büyütme ve sayısal diyafram 0.50'de değerlendirilir.</li>
		<li>Normal mukozayı tanımlamak için 0 puanı atayın.</li>
		<li>Subepithelial Gruenhagen'in uzayının gelişimini, vakuolizasyon veya villi'nin lamina propria veya uçları ile sınırlı olan subepithelial kaldırmayı kapsayan hafif yaralanmayı tanımlayan 1 puan atayın.</li>
		<li>Villi, villi distorsiyon veya mukozal ülserasyon ve lamina proprianın parçalanmasından daha büyük epitel kaldırma ve vakuolizasyon ile belirtilen ciddi yaralanmayı tanımlamak için 2 puan atayın.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. Paneth ve kadeh hücrelerinin nicelleştirilmesi
<ol><li>Deparaffinizasyonun ardından, aşağıdaki adımlara göre daha önce açıklandığı gibi hem kadeh hem de Paneth hücrelerini belirtmek için Alcian Blue/Periodic Acid Schiff lekesi ile Adım2.8'den doku bölümlerinin leke slaytları. NOT: Alcian Blue/Periodic Acid Schiff lekesi Paneth veya goblet hücrelerine özgü olmasa da, deneyimlerimize göre, kör deneyimli araştırmacılar hücresel hedefli antikorlara kıyasla bu lekeyi kullanarak eşdeğer hücresel nicelemelere sahiptir, önemli ölçüde daha az arka plan lekesi46.</li>
	<li>Deparaffinize, leke ve susuz slaytlar aşağıdaki gibi.<ol>
<li>İki kez 10 dakika boyunca ksilen olarak bastırın. DİkKAT: Duman kaputunda ksilen kullanılmalıdır.</li>
		<li>%100 EtOH ile durulayın.</li>
		<li>3 dakika boyunca % 100 EtOH'da, daha sonra 3 dakika boyunca% 90 EtOH'da, ardından 3 dakika boyunca% 70 EtOH'da ve son olarak 3 dakika boyunca% 50 EtOH'da slaytları batırın.</li>
		<li>Akan musluk suyunun altında 5 dakika yıkayın. DİkKAT: Doku örneğinin kaybını önlemek için bölümü akan sudan uzağa doğru yönlendirin.</li>
		<li>Alcian mavi leke solüsyonlarını standart bir kahve filtresi ile filtreleyin.</li>
		<li>Alcian mavi lekesinde 15 dakika leke slaytları ve ardından 2 dakika boyunca akan musluk suyu altında yıkayın.</li>
		<li>200 mL çift damıtılmış suda 1 mg periyodik asit seyreltin. Bu çözeltide 5 dakika boyunca slaytları batırın. Daha sonra akan musluk suyunun altında 1 dakika yıkayın.</li>
		<li>Schiff'in reaktifiyle 10 dakika lekele. Akan musluk suyunun altında 5 dakika yıkayın.</li>
		<li>Slaytları hematoksilin ile 1 dakika lekeleyin ve ardından 2 dakika boyunca akan musluk suyunun altında yıkayın.</li>
		<li>Onları asit alkolüne batırın (1 mL hidroklorik asit 99 mL%70 EtOH karıştırılır) 1 dakika boyunca.</li>
		<li>Scott'ın musluk suyuna (musluk suyunda% 0.1 NaHCO3 konsantrasyonu) 1 dakika batırın ve ardından 1 dakika boyunca akan musluk suyunun altında yıkayın.</li>
		<li>Slaytları susuz kalsın.<ol>
<li>Her slaydı %70 EtOH'da 10 kez daldırın, sonra %90 EtOH'da 10 kez ve %100 EtOH'da 10 kez daldırın.</li>
			<li>10 dakika boyunca % 100 EtOH'da batır, ardından her biri 3 dakika boyunca taze ksilende iki kez batır.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Numunenin üzerine bir damla montaj ortamı yerleştirin ve üzerine bir kapak parçası yerleştirin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Kadeh hücre sayımı<ol>
<li>Hafif mikroskopi kullanarak kadeh hücrelerini sayın (Tamamlayıcı Şekil 2). Bağırsak dokusunun her bir parçası için, kadeh hücrelerinin sayısını ve 500 epitel hücresini sayın ve 100 epitel hücresi başına bir oran olarak goblet hücre oranını ifade edin. Kadeh hücreleri en iyi 20x büyütme ve sayısal diyafram 0.5'te sayılır.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Paneth hücre sayımı<ol>
<li>Işık mikroskopisi kullanarak Paneth hücrelerini sayın (Tamamlayıcı Şekil 2). Bağırsak dokusunun her parçası için, bağırsak mahzeni başına Paneth hücrelerinin bir oranı olarak ifade edin. Her bağırsak dokusu parçası başına 100 bağırsak mahzeni sayın. Paneth hücreleri en iyi 20x-60x büyütme ve sayısal diyafram 0.50-1.30 olarak sayılır.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Chorioamnionitis terimin% 2\u20124'ünü ve 25\u201230% preterm teslimatlarının%8,9'unuetkiler. Bununla birlikte, koryoamniyonulün etkisi, fetüs ve yenidoğan 10 , 11 , 12 , 13,14,15,16üzerinde önemli etkileri olduğu gösterildiği için doğumu uzun süre uzatabilir.</s...

Koryonik zarlar memeli hamileliğinde ayrılmaz bir rol oynar. Birden fazla işleve hizmet eden korozyon ve amnion içerirler. Fetüsü çevreler ve korurlar, anne ve fetal bölmeler arasında parakrin sinyali kolaylaştırırlar1ve koryonik membranlar içinde parturition1'inbaşlatılmasında rol alabilen yerel geri bildirim döngüleri oluştururlar. Zarların mevcut anlaşılması, amniyonun yapısal bariyer fonksiyonu sağladığını ve koronun öncelikle gelişmekte olan fetüsü anne bağışıklık sisteminden korumak için immünolojik bir tampon sağladığını gösterir2. Bu zarların iltihabı chorioamnionitis olarak bilinir. Tarihsel olarak, klinik koryoamniyozit tanısı anne ateşinin varlığı artı bir veya daha fazla fetal veya maternal klinik bulgu3,4 .4.'densonra konur. Bununla birlikte, bu tanım klinik olarak yararlı olsa da, hassasiyet eksikliği chorioamnionitis araştırmasını zorlaştırdı. 2015 yılında, tanıyı açıklığa kavuşturmak amacıyla, Eunice Kennedy Shriver Ulusal Çocuk Sağlığı ve İnsan Gelişimi Enstitüsü tarafından yapılan bir uzman paneli çalıştayı, koryoamniyonuti rahim içi inflamasyon veya enfeksiyon veya her ikisi (üçlü I)3olarak tanımladı. Bu açıklama önemlidir, çünkü mikrobiyal indüklenen enfeksiyon uterus / amniyotik iltihabın önemli bir nedeni olmakla birlikte, steril rahim / amniyotik inflamasyondan daha az görülür5,6,7. Genel olarak, chorioamnionitis, dönem teslimatlarının% 2\u20124'ünde ve 25 \u201230% preterm teslimatlarında görüldüğü gibi önemli bir halk sağlığı sorunu olmaya devam etmektedir8,9.
Koliyoamniyonut fetüs ve yenidoğan üzerinde önemli etkilere sahip olabilir. Literatürde chorioamnionitis'in prematürite morbiditelerinin çoğunun artan riski ile ilişkili olduğu iyi belgelenmiştir, bronkopulmoner displazi10, serebral beyaz madde yaralanması11, intraventriküler kanama12, prematürite retinopatisi13ve hem şüpheli hem de doğrulanmış erken başlangıçlı yenidoğan sepsis14,15. Olgunlaşmamış bağırsak sisteminin yaralanma ve onarım mekanizmalarıyla ilgilendiğimiz için, chorioamnionitis'in daha sonra nekrotizan enterokolit (NEC) gelişimi ile de ilişkili olduğunu belirtmek önemlidir15,16. NEC, preterm bebeklerin iltihaplanmaya ve sonraki bağırsak nekrozuna disregüle edilmiş konakçı yanıtı ile sonuçlanan yıkıcı bir gastrointestinal hastalığıdır17. Her yıl, NEC Amerika Birleşik Devletleri'nde 4000'den fazla bebeği etkiler ve bu bebeklerin üçte birine kadarı hastalıktan ölür18. NEC patogenez muhtemelen bağırsak olgunlaşmamışlığı, olgunlaşmamış bağışıklık sisteminin düzensizliği, bağırsak iltihabı ve bakteriyel translokasyon19'un bir kombinasyonunu içerir . Daha da önemlisi, NEC'in başlangıcı genellikle doğumdan haftalar sonra ve koryoamniyozite potansiyel maruziyet meydana gelir, bu da chorioamnionitis ile NEC'in sonraki gelişimi arasındaki mekanistik bağlantıyı belirsiz hale getirir20. Chorioamnionitis'in NEC patofizyolojisine katkıda bulunabileceği potansiyel bir mekanizma, maternal bağışıklık sisteminin yukarı doğrullaştırılması ve daha sonra normal fetal gelişimsel kalıpları bozabilecek güçlü bir fetal inflamatuar yanıt üretmesidir21,22,23.
Korneaların ve koyunların birden fazla memeli modeli kemirgenlerde ve koyunlarda bulunur24,25,26,27,28,29,30,31,32. Bununla birlikte, koliamnionit kaynaklı fetal inflamasyondan (FEMI) sonra ilk yenidoğan döneminin ötesinde bağırsak sisteminin gelişimi ile ilgili çok az veri bulunmaktadır. FEMI ile olgunlaşmamış bağırsak sisteminin yaralanmasının daha sonra gelişmesi arasındaki ilişkiyi araştırmak için lipopolisakkarit (LPS) kaynaklı FEMI modelini uyarladık. Lipopolisakkaritler gram negatif bakteriler üzerindeki hücre dışı yüzeyin önemli bir bileşenidir ve insanlar da dahil olmak üzere birden fazla ökaryotik türün doğuştan gelen bağışıklık sisteminin güçlü bir uyarıcısıdır33. Maternal LPS enjeksiyonu, canlı bakterilerin şaşırtıcı etkileri olmadan steril bir enflamatuar kaskad ile sonuçlanır ve preterm doğum34indüksiyonu için iyi kurulmuş bir modeldir Akut chorioamnionitis ve cenin enflamatuar yanıt sendromu (FIRS) modeli, koryoamniyonit24,35. Ayrıca bir koyun modeli 36 ve bir murine model37 , 38 ,39,40hem serebral beyaz hem de gri madde yaralanmasına neden olduğu gösterilmiştir. Bununla birlikte, bildiğimiz kadarıyla, bu chorioamnionitis ve FEMI modelini gastrointestinal sistemin gelişimi üzerindeki etkilerini araştırmak ve ayrıca chorioamnionitis ile daha sonra NEC41,42gelişimi arasındaki olası bir mekanistik bağlantıyı araştırmak için ilk kullananlarız.

<table><tbody><tr><td>% 10 nötr tamponlu formalin</td><td>Sigma</td><td>HT501128</td><td></td></tr><tr><td>Alcian mavi lekesi</td><td>Yeni gelen tedarik</td><td>1003A</td><td></td></tr><tr><td>C57Bl6 / J fareler</td><td>Jackson Laboratuvarları</td><td>664</td><td></td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Decon laboratuvarları</td><td>2701</td><td></td></tr><tr><td>HCl</td><td>Sigma</td><td>H1758</td><td></td></tr><tr><td>Hematoksilen lekesi</td><td>Leica</td><td>381562</td><td></td></tr><tr><td>LPS</td><td>Sigma</td><td>L2880</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>Sigma</td><td>S6014</td><td></td></tr><tr><td>Nikon Eclipse Ni-U Mikroskobu</td><td>Nikon</td><td>2CE-MQVJ-1</td><td></td></tr><tr><td>Periyodik Asit</td><td>ACROS</td><td>H5106</td><td>CAS # 10450-59-9</td></tr><tr><td>RNAlater</td><td>Thermofisher</td><td>Am7021</td><td></td></tr><tr><td>Schiff'in reaktifi</td><td>Sigma</td><td>S5133</td><td></td></tr><tr><td>Secor Imager 2400</td><td>Meso Scale Discovery (MSD)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>V-Plex Deneyi</td><td>Meso Scale Discovery (MSD)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Xylene</td><td>Sigma</td><td>534056</td><td></td></tr></tbody></table>

akut chorioamnionitis'in yenidoğan bağırsak gelişimi Üzerindeki etkilerini İncelemek için anne İltihaba fetal maruziyetin bir murine modeli

A Murine Model of Fetal Exposure to Maternal Inflammation to Study the Effects of Acute Chorioamnionitis on Newborn Intestinal Development

Chorioamnionitis, preterm doğumun yaygın bir çökelticisidir ve nekrotizan enterokolit (NEC) de dahil olmak üzere prematürite morbiditelerinin çoğu ile ilişkilidir. Ancak, bu iki koşul arasında mekanistik bir bağlantı henüz keşfedilmemiştir. Lipopolisakkarit (LPS) kaynaklı fetal inflamasyon ve anne iltihabı (FEMI) içeren bir koryoamniyozit modelini benimsedik. Bu FEMI modeli, birçok klinik chorioamnionitis vakasında da bulunan steril bir maternal, plasental ve fetal enflamatuar kaskadı indükler. Canlı bakterileri kullanan ve koliyoamniyotitle sonuçlanan artan bir enfeksiyonun patofizyolojisini daha doğru bir şekilde taklit eden modeller mevcut olsa da, bu yöntemler olgunlaşmamış bağırsak sisteminin ve ilişkili gelişen mikrobiyomun gelişimi üzerinde dolaylı etkilere neden olabilir. Bu protokolü kullanarak, LPS kaynaklı FEMI'nin gebelik kaybı ve erken doğumda doza bağlı bir artışın yanı sıra yavrularda normal bağırsak gelişiminin bozulmasına neden olduğunu gösterdik. Ayrıca, FEMI'nin yavrularda bağırsak yaralanmasını ve serum sitokinleri önemli ölçüde artırdığını, aynı zamanda her ikisi de bağırsak iltihabına karşı doğuştan gelen ilk bağışıklık hattını sağlayan kadeh ve Paneth hücrelerini azaltdığını gösterdik. LPS kaynaklı FEMI'nin benzer bir modeli, chorioamnionitis ile merkezi sinir sisteminin sonraki anormallikleri arasındaki ilişkiyi modellemek için kullanılmış olsa da, bu protokol, chorioamnionitis ve NEC arasında potansiyel bir bağlantı olarak koryoamniyozit ve daha sonra bağırsak gelişimindeki pertürbasyonlar arasında mekanistik bir bağlantı kurmaya çalışan ilk protokoldür.

Embriyonik 15. günde FEMI'ye maruz kalmak, doza bağlı gebelik kaybına ve doz bağımlı preterm işgücü oranına yol açar (Şekil 1)42. Deneyler için, fetüsleri önemli bir inflamatuar hakarete maruz tutarken gebelik kaybını ve prematüritesini (hem prematürite hem de intrauterin fetal ölüm arasında% 50 kayıp) en aza indirmek için 100 μg / kg LPS dozunu kullanmayı seçtik.
Bu yaklaşımı kullanarak, FEMI'nin yavruların sonraki yaralanması üzerindeki e...

FEMI'nin yavruların bağırsak sisteminin gelişimi üzerindeki etkilerini incelemek için canlı organizmaların komplikasyonları olmadan anne iltihabına (FEMI) fetal maruziyeti simüle etmek için bir chorioamnionitis modeli geliştirdik. Bu, chorioamnionitis'i takiben bağırsak hasarı gelişimi için mekanistik nedenlerin incelenmesine izin verir.

Akut Chorioamnionitis'in Yenidoğan Bağırsak Gelişimi Üzerindeki Etkilerini İncelemek için Anne İltihaba Fetal MaruzIyetin Bir Murine Modeli

Chorioamnionitis is a common precipitant of preterm birth and is associated with many of the morbidities of prematurity, including necrotizing ...

Bu FEMI protokolü, maternal inflamasyona fetal maruziyeti takiben yenidoğanlar üzerindeki uzun vadeli etkilerin araştırılmasını mümkün kılar. Bu özellikle nekrotizan enterokolit veya NEC gelişimi için geçerlidir. Bu teknik, koryoamniyonitte sıklıkla görülen steril iltihabı taklit eder ve canlı bakteri eksikliği, gelişmekte olan bağırsak sistemi ve mikrobiyom üzerinde kafa karıştırıcı etkilere sahip olabilir.Bu protokolün en önemli adımı, FEMI'yi indüklemek için LPS enjeksiyonudur. Uygun bir LPS dozunun kullanılması ve enjeksiyonun gravid farede intraperitoneal travmaya neden olmaması kritik derecede önemlidir. Mililitre başına 20 mikrogramlık bir çalışma konsantrasyonu için LPS stoğunu bir ila 100 oranında steril tuzlu su ile seyrelterek başlayın.Gebelik günü E15'te hamile barajları enjekte edin. Kontrol hayvanları için eşdeğer hacimde normal salin kullanarak uygun LPS dozunu belirlemek için enjeksiyondan hemen önce fareleri tartın. LPS çözeltisini yüksekte 15 saniye boyunca üç kez girdaplayın.Sonra bir mililitrelik bir şırıngaya çekin. Hamile fareyi dizginlemek için tırmalama tekniğini kullanın ve sırt yaslanma pozisyonunda tutun. 30 gauge, sekiz milimetrelik bir iğne eğiminin yaklaşık dörtte biri ila yarısını, karnın sağ alt kadranını 30 ila 40 derecelik bir açıyla kaplayacak şekilde yerleştirin.Negatif basıncı sağlamak için şırınga pistonunu geri çekin. Ardından negatif basınç varsa enjeksiyonla devam edin. Fareleri yaklaşık 30 dakika izleyin ve ardından hamileliğin geri kalanında onları kafeslere geri koyun.Yavruları E20'de vajinal doğum yoluyla doğurun ve ad libitum beslemeleri alarak annelerle birlikte kalmalarına izin verin. Bağırsakları doğum sonrası 14. günde hasat edin. Karnın tüm uzunluğu boyunca karnın orta hattından, deri ve peritondan dikey bir kesi yapmak için makas ve forseps kullanın.İnce bağırsağı mideden çekuma kadar kesin ve mezenteri çıkarın. İnce bağırsağın distal üçte birini izole edin, proksimal ince bağırsağı, çekumu ve kolonu atın. İleum kısmını makas kullanarak ikiye bölün.Daha sonra proksimal yarısını RNA kantitasyonu için bir RNA stabilizasyon solüsyonuna ve distal yarısını slayt hazırlama için %10 nötr tamponlu formaline yerleştirin. Parafine gömülü dokuyu beş mikrometre kalınlığında dilimler halinde bölümlere ayırın ve bunları cam slaytlara monte edin. Slaytları deparafinize edin, ardından bölümleri standart prosedürlere göre hematoksilen ve eozin ile boyayın.Genelleştirilmiş bağırsak yaralanmasını üç noktalı bir ölçekte iki ayrı kör araştırmacı tarafından değerlendirmek için ışık mikroskobu kullanın, villus bütünlüğünü ve bazal membrandan ayrılmayı değerlendirin. Normal mukozayı tanımlamak için sıfır puan atayın. Subepitelyal Gruenhagen boşluğunun gelişimini, vakuolizasyonu veya lamina propria veya villus uçlarıyla sınırlı subepitelyal kaldırmayı içeren hafif yaralanmayı tanımlamak için bir puan atayın.Villusun yarısından daha büyük epitel kaldırma ve vakuolizasyon, villus distorsiyonu veya mukozal ülserasyon ve lamina propria'nın parçalanması ile gösterilen ciddi yaralanmayı tanımlamak için iki puan atayın. 10 dakika boyunca iki kez ksilen içine daldırın. Sonra onları% 100 etanol ile durulayın.Slaytları üç dakika boyunca %100 etanol, %90 etanol, %70 etanol ve %50 etanole batırın. Daha sonra slaytları beş dakika boyunca akan su altında yıkayın ve doku örneği kaybını önlemek için bölüme sudan uzak bir yere bakacak şekilde yıkayın. Alcian mavisi leke solüsyonunu standart bir kahve filtresiyle filtreleyin ve slaytları 15 dakika boyunca lekelemek için kullanın.Sonra iki dakika boyunca akan musluk suyu altında yıkayın. Bir miligram periyodik asidi 200 mililitre çift damıtılmış su ile seyreltin ve slaytları bu çözeltiye beş dakika batırın. Akan su altında bir dakikalık bir yıkamadan sonra, slaytları Schiff reaktifi ile 10 dakika lekeleyin ve beş dakika boyunca tekrar yıkayın.Daha sonra, bir dakika boyunca hematoksilen ile boyayın ve iki dakika boyunca suyla yıkayın. Onları bir dakika asitli alkole, ardından bir dakika Scott'ın musluk suyuna batırın, ardından bir dakika akan musluk suyu altında yıkayın. Slaytları kurutmak için, her slaytı 10 kez %70 etanol, %90 etanol ve ardından %100 etanole batırın.Slaytları 10 dakika boyunca %100 etanole batırın, ardından her seferinde üç dakika boyunca iki kez taze ksilene batırın. Numunenin üzerine bir damla montaj ortamı ve üstüne bir lamel yerleştirin. Mikroskop altında kadeh hücrelerini sayın.Her bir bağırsak dokusu parçası için, goblet hücrelerinin ve 500 epitel hücresinin sayısını sayın. Daha sonra kadeh hücrelerini 100 epitel hücresi başına bir oran olarak ifade edin. Paneth hücrelerini sayın.Her bir bağırsak dokusu parçası için, her bir bağırsak dokusu parçası için 100 bağırsak kripti sayarak, bağırsak kripti başına Paneth hücrelerinin oranını kaydedin. Embriyonik 15. günde maternal iltihaba veya FEMI'ye fetal maruziyet, doza bağlı gebelik kaybına ve doza bağlı erken doğum oranına yol açar. FEMI, doğumda ve yaşamın sekiz haftasında önemli bir bağırsak hasarına neden olur.Bu yaralanma, hayvanlara herhangi bir ek uyaranın yokluğunda meydana gelir, bu da FEMI'nin tek başına yenidoğan murin bağırsak sisteminin normal homeostazını bozduğunu düşündürür. İnce bağırsak sisteminin distal üçte birlik kısmında müsin üreten goblet hücrelerinin ve antimikrobiyal peptit üreten Paneth hücrelerinin sayısı ölçüldü. FEMI'nin, FEMI'siz hayvanlara kıyasla, her iki hücre tipinin kaybına neden olarak bağırsak epitelinin normal bileşimini bozduğu bulundu.FEMI'nin yenidoğan inflamatuar yanıtı üzerindeki etkilerini araştırmak için, FEMI'li ve FEMI'siz yavruların serumundan interlökin-1 beta, interlökin-10, KCGRO ve interlökin-6 dahil olmak üzere çeşitli serum inflamatuar belirteçleri ölçüldü. FEMI, P0'daki tüm sitokinler için inflamatuar kaskadı önemli ölçüde arttırdı. Daha sonraki yaşlardaki inflamatuar kaskad, zaman noktası ve sitokine bağlı olarak farklılık gösterdi. İlginç bir şekilde, FEMI ve sahte gruplarda P7 ila P28'de benzer IL6 seviyeleri vardı.Bununla birlikte, ikincil müdahale olmamasına rağmen, FEMI grubunda P56'da anlamlı olarak daha yüksek seviyeler vardı. Farklı LPS stokları farklı potansiyellere sahip olabileceğinden, ilk LPS doz eğrisi gerçekleştirmek çok önemlidir. Yenidoğan sonuçlarımızın FEMI'yi indüklemek için kullanılan LPS dozuna bağlı olduğunu bulduk.

a-murine-model-fetal-exposure-to-maternal-inflammation-to-study

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Burada bir prosedür, Escherichia coli K1 kültürleri ile neonatal sıçanda sistemik enfeksiyon kurulması için tarif edilmiştir. Bu non-invazif prosedür da koroid pleksusa de mide-bağırsak yolunun kolonizasyonu, sistemik dolaşıma patojenin translokasyonu ve merkezi sinir sisteminin istilası izin verir.

Neuropathogenic olmayan İnvaziv Modeli Escherichia coli Yenidoğan Sıçan Enfeksiyon

Burada, sinjeneik CD4 + CD45RByüksek T hücrelerinin T ve B hücresi eksikliği olan alıcılara evlat edinici transferi yoluyla farelerde kolon iltihabını indüklemek için bir protokol sunuyoruz. Klinik ve histopatolojik özellikleri insan inflamatuar barsak hastalıklarını taklit eder. Bu yöntem, kolon iltihabının başlaması ve hastalığın ilerlemesinin incelenmesine izin verir.

Efektör CD4 Evlatlık transferi ile Kemirgen Bağırsak Enflamasyon indüksiyonu<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt; Yüksek</sup&gt; Bağışık yetmezliği olan farelere içine T Hücreleri

Prematüre ensefalopatisi, erken doğumdan kaynaklanan yaralanma ile ilişkili merkezi sinir sistemi anormalliklerini kapsar. Bu rapor, koryoamniyoniti taklit eden in utero geçici sistemik hipoksi-iskemi ve intra-amniyotik lipopolisakkarit uygulamasının (LPS) klinik olarak anlamlı bir sıçan modelini ve enfeksiyöz uyaranların ve plasental underperfüzyonun CNS gelişimi üzerindeki ilişkili etkisini açıklamaktadır.

Prematüre Modelleme Ensefalopati Sıçanlarda İçi amniyotik Lipopolisakkarid ile Prenatal Hipoksi-iskemi kullanma

Bu çalışmada yenidoğan fareler için Probiyotikler gavaging kesin miktarda işlem ayrıntıları. Deneysel ayarı içerecek şekilde optimize edildi ama dozaj, yönetim yöntemleri ve bakterilerin bağırsak quantification probiyotik sınırlı değildir.

Probiyotik çalışmalar yenidoğan farelerde sonda ile besleme kullanarak

Neonatal farelerin biyolüminesans E. coli O1:K1:H7 ile enfeksiyonu, önemli pulmoner inflamasyon ve akciğer patolojisi ile septik enfeksiyona neden olur. Burada, sistemik bakteriyel yüklerin numaralandırılmasına paralel olarak uzunlamasına intravital görüntüleme, inflamatuar profilleme ve akciğer histopatolojisi ile birlikte neonatal sepsisin modellenmesi ve incelenmesi için yapılan prosedürleri açıklıyoruz.

Gram-Negatif Bakteriyel Sepsisin Yenidoğan Görüntüleme Modeli

Nekrotizan enterokolit (NEC), prematüre bebeklerde, özellikle çok düşük doğum ağırlıklı bebeklerde, yüksek mortalite ve belirsiz patogenez ile sıklıkla ortaya çıkan en şiddetli gastrointestinal (GI) hastalıktır. NEC'in nedeni inflamatuar immün düzenleyici sistem anormallikleri ile ilgili olabilir. Bir NEC hayvan modeli, NEC hastalığı bağışıklık araştırmaları için vazgeçilmez bir araçtır. NEC hayvan modelleri genellikle C57BL /6J yenidoğan fareleri kullanır; BALB/c yenidoğan fareleri nadiren...

Nekrotizan Enterokolit'in Yenidoğan BALB/c Fare Modeli

Bu protokol, hastalık patogenezine yönelik mekanik çalışmalar için kullanılabilen bir in vitro nekrotizan enterokolit (NEC) modelini açıklar. İnsan yenidoğan bağırsağından, endotel hücrelerinden ve şiddetli NEC'li bir yenidoğanın bağırsak mikrobiyomundan türetilen bağırsak enteroidleri ile tohumlanmış bir mikroakışkan çipe sahiptir.

İnsan Yenidoğan Bağırsak Enteroidlerini ve Disbiyotik Mikrobiyomu İçeren Nekrotizan Enterokolitin Mikroakışkan Modeli

Erken doğum (37 haftadan &lt; doğum), optimal olmayan önleme ve tedavi seçenekleriyle acil bir küresel sağlık sorunudur. Artan vajinal bakteriyel enfeksiyon kaynaklı erken doğumun bir fare modelini sunuyoruz ve ortaya çıkan yenidoğan morbidite ve mortalitesinin nasıl analiz edileceğini özetliyoruz.

Farelerde Yükselen Vajinal Enfeksiyon, Erken Doğum ve Yenidoğan Morbiditesinin Modellenmesi

Bu protokol, nekrotizan enterokolitin (NEC) yenidoğan fare modelini ve ardından yenidoğan murin ince bağırsağından lamina propria bağışıklık hücrelerinin izolasyonunu özetlemektedir.

İmmün Hücre Profili Oluşturma için Nekrotizan Enterokolit ve Lamina Propria İzolasyonunun Yenidoğan Fare Modeli

Makale, erken gebeliksel iltihabın nörogelişim üzerindeki etkilerini incelemek için kapsamlı bir protokol sunar; bu model, güvenilirlik ve tekrarlanabilirliği sağlamak için temel metrikleri içerir.

Nörogelişim üzerindeki prenatal iltihabı değerlendirmek için erken gebeliksel anne immün aktivasyon fare modelinin oluşturulması

Keşfedin, anne iltihabına fetal maruziyetin yenidoğan bağırsak gelişimi üzerindeki etkilerini incelemek için LPS ile indüklenen murine FEMI modelini. Bu yöntem nekrotize enterokolit mekanizmalarını anlamaya yardımcı olur.

Akut Chorioamnionitisin Yenidoğan Bağırsak Gelişimi Üzerindeki Etkilerini İncelemek için Anne İltihaba Fetal MaruzIyetin Bir Murine Modeli (Video) | JoVE Journal

Akut Chorioamnionitis'in Yenidoğan Bağırsak Gelişimi Üzerindeki Etkilerini İncelemek için Anne İltihaba Fetal MaruzIyetin Bir Murine Modeli

Daha fazla video keşfet