Name: İnsan Meme Kanseri Kök Hücrelerinin Hücre ve Doku Örneklerinden İzolasyonu ve Fonksiyonel Değerlendirmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-10-02T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 3 s
Description: Öğrenin, insan meme kanseri kök hücrelerini hücre ve doku örneklerinden yüksek saflıkta izole etme yöntemini. Bu teknik, tümör biyolojisi ve hedefe yönelik tedavi stratejileri geliştirmek için kullanılabilir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Laboratuvar üyelerimize yararlı tartışmaları ve destekleri için teşekkür ederiz. Meme kanseri kök hücreleri ve tümör mikro ortamı üzerine yaptığımız araştırmalar, Kanada Kanser Araştırma Derneği Araştırma Enstitüsü ve ABD Ordusu Savunma Bakanlığı Meme Kanseri Programı'ndan (Hibe # BC160912) gelen hibelerle finanse edilmektedir. V.B., Batı Doktora Sonrası Bursu (Western University) tarafından desteklenmektedir ve hem A.L.A. hem de V.B. Kanada Meme Kanseri Derneği tarafından desteklenmektedir. C.L., Kanada Hükümeti'nden Vanier Canada Yüksek Lisans Bursu ile desteklenmektedir.

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyleri yoktur.

Meme kanseri metastazı ve tedaviye direnç tüm dünyada kadınlarda mortalitenin önemli nedeni haline gelmiştir. Meme kanseri kök hücrelerinin (BCSC) bir alt popülasyonunun varlığı, metastaz 26,43,44,45,46 ve tedavi direncinin21,47,48 artmasına katkıda bulunur. Bu neden...

İnsan meme kanseri kök hücrelerinin (BCSC'ler) hücresel ve moleküler mekanizmalarını anlamak, meme kanseri tedavisinde karşılaşılan zorlukları ele almak için çok önemlidir. BCSC kavramının ortaya çıkışı, CD44 + CD24 / düşük meme kanseri hücrelerinin küçük bir popülasyonunun farelerde heterojen tümörler üretebildiği 1,2 bulunduğu21. yüzyılın başlarına kadar uzanmaktadır. Daha sonra, aldehit dehidrogenazın (ALDH yüksek) enzimatik aktivitesiyüksek olan insan meme kanseri hücrelerinin de benzer kök hücre benzeri özellikler gösterdiği gözlenmiştir3. Bu BCSC'ler, kendini yenileme ve farklılaşma yeteneğine sahip küçük bir hücre popülasyonunu temsil eder ve toplu tümörlerin heterojen doğasına katkıda bulunur 1,2,3. Biriken kanıtlar, evrimsel olarak korunmuş sinyal yollarındaki değişikliklerin BCSC'nin hayatta kalmasını ve bakımını sağladığını göstermektedir 4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14 . Ek olarak, hücre dışsal mikro ortamının farklı BCSC fonksiyonlarının dikte edilmesinde çok önemli bir rol oynadığı gösterilmiştir15,16,17. Bu moleküler yollar ve BCSC fonksiyonunu düzenleyen dış faktörler meme kanseri nüksetmesine, metastaza18 ve tedavilere direnç gelişimine katkıda bulunur 19,20,21, tedavi sonrası BCSC'lerin kalıntı varlığı meme kanseri hastalarının genel sağkalımında büyük bir zorluk oluşturmaktadır22,23 . Bu nedenle, bu faktörlerin klinik öncesi değerlendirilmesi, meme kanseri hastalarında daha iyi tedavi sonuçları elde etmek ve genel sağkalımı iyileştirmek için yararlı olabilecek BCSC hedefleme tedavilerinin belirlenmesinde çok önemlidir.
 BCSC'leri 24,25,26,27,28,29 karakterize etmek için çeşitli in vitro insan meme kanseri hücre hattı modelleri ve in vivo insan ksenograft modelleri kullanılmıştır. Hücre hatlarının her ardışık geçişten sonra sürekli olarak yeniden doldurulma yeteneği, bunları omik tabanlı ve farmakogenomik çalışmalar yapmak için ideal bir model sistemi haline getirir. Bununla birlikte, hücre hatları genellikle hasta örneklerinde gözlenen heterojenliği özetlemekte başarısız olur. Bu nedenle, hücre hattı verilerini hasta kaynaklı örneklerle tamamlamak önemlidir. BCSC'lerin en saf haliyle izolasyonu, BCSC'lerin ayrıntılı karakterizasyonunu sağlamak için önemlidir. Bu saflığın elde edilmesi, BCSC'lere özgü fenotipik belirteçlerin seçimine bağlıdır. Şu anda, ALDHyüksekCD44 + CD24- hücre fenotipi, maksimum saflık için floresan aktive hücre sıralama (FACS) kullanarak insan BCSC'lerini toplu meme kanseri hücre popülasyonlarından ayırt etmek ve izole etmek için en yaygın olarak kullanılmaktadır1, 3,26. Ayrıca, izole BCSC'lerin kendini yenileme, proliferasyon ve farklılaşma gibi özellikleri in vitro ve in vivo teknikler kullanılarak değerlendirilebilir.
Örneğin, in vitro koloni oluşturma testleri, farklı tedavi koşullarının varlığında tek bir hücrenin 50 veya daha fazla hücreden oluşan bir koloni oluşturmak için kendini yenileme yeteneğini değerlendirmek için kullanılabilir30. Mamosfer testleri, ankrajdan bağımsız koşullar altında meme kanseri hücrelerinin kendini yenileme potansiyelini değerlendirmek için de kullanılabilir. Bu tahlil, tek hücrelerin serumsuz yapışkan olmayan kültür koşullarındaki her ardışık geçişte küreler (BCSC'lerin ve BCSC'lerin karışımı) olarak üretme ve büyüme yeteneğini ölçer31. Ek olarak, in vivo mikro çevreyi yakından özetleyen ve potansiyel BCSC hedefli tedavilerin aktivitesinin araştırılmasına izin veren hücre-hücre ve hücre-matris etkileşimleri de dahil olmak üzere BCSC fonksiyonunu değerlendirmek için 3 Boyutlu (3D) kültür modelleri kullanılabilir32. İn vitro modellerin çeşitli uygulamalarına rağmen, in vivo koşulların karmaşıklığını sadece in vitro tahlilleri kullanarak modellemek zordur. Bu zorluk, BCSC davranışını in vivo olarak değerlendirmek için fare ksenograft modellerinin kullanılmasıyla aşılabilir. Özellikle, bu tür modeller meme kanseri metastazı33'ü değerlendirmek, hastalık progresyonu sırasında mikroçevre ile etkileşimleri araştırmak 34, in vivo görüntüleme35 ve antitümör ajanların hastaya özgü toksisitesini ve etkinliğini tahmin etmek için ideal bir sistem olarak hizmet eder34.
Bu protokol, insan ALDHyüksekCD44 + CD24- BCSC'lerinin heterojen meme kanseri hücrelerinin toplu popülasyonlarından maksimum saflıkta izolasyonu için ayrıntılı bir açıklama sağlar. Ayrıca, üç in vitro tekniğin (koloni oluşturma testi, mamosfer testi ve 3D kültür modeli) ve BCSC'lerin farklı fonksiyonlarını değerlendirmek için kullanılabilecek bir in vivo tümör ksenograft testinin ayrıntılı bir tanımını sunuyoruz. Bu yöntemler, BCSC biyolojisini anlamak ve / veya yeni BCSC hedefleme tedavilerini araştırmak amacıyla BCSC'leri insan meme kanseri hücre hatlarından veya birincil hasta kaynaklı meme kanseri hücrelerinden ve tümör dokusundan izole etmek ve karakterize etmek isteyen araştırmacılar tarafından kullanılmak üzere uygun olacaktır.

<table><tbody><tr><td>7-Aminoaktinomisin D (7AAD)</td> <td>BD</td><td>51-68981E</td><td>önerildi: 0.25 &mikro; g/1x106 hücreleri</td></tr><tr><td>Aseton</td><td>Fisher</td><td>A18-1</td><td></td></tr><tr><td>Aldehit dehidrojenaz (ALDH) substratı</td><td>Kök Hücre Teknolojileri</td><td>1700</td><td>ALDEFLOUR Tahlil kitinin bir parçası olarak ticari olarak satılır; ALDH substrat hazırlığı için üreticinin talimatlarına uyun</td></tr><tr><td>Bodrum membran özütü (BME)</td><td>Corning</td><td>354234</td><td>Matrigel</td></tr> <tr><td>ticari adı altında satılmaktadırHücre kültürü plakaları: 6 kuyulu</td><td>Corning</td><td>877218</td><td></td></tr><tr><td>Hücre kültürü plakaları: 60mm</td><td>Corning</td><td>353002</td><td></td></tr><tr><td>Hücre kültürü plakaları: 96 oyuklu ultra düşük bağlantı</td><td>Corning</td><td>3474</td><td></td></tr><tr><td>Hücre süzgeci: 40 mikron</td><td>BD</td><td>352340</td><td></td></tr><tr><td>Kollajen Kök Hücre Teknolojileri</td><td></td><td>7001</td><td>PBS'de 3 mg / mL kollajenin 1:30 seyreltmesini hazırlayın</td></tr><tr><td>Kollajenaz</td><td>Sigma</td><td>11088807001</td><td>1x</td></tr><tr><td>Konik tüpler: 50 mL</td><td>Fisher scientific</td><td>05-539-7</td><td></td></tr><tr><td>Kristal viyole</td><td>Sigma</td><td>C6158</td><td>Boyama için suda% 0.05 kristal viyole çözeltisi kullanın</td></tr><tr><td>Dispase</td><td>Kök Hücre Teknolojileri</td><td>7913</td><td>5U/mL</td></tr><tr><td>DMEM:F12</td><td>Gibco</td><td>11330-032</td><td>1x, L-glutamin ve 15 mM HEPES ile</td></tr><tr><td>DNAse</td><td>Sigma</td><td>D5052</td><td>0.1 mg / mL nihai konsantrasyon</td></tr><tr><td>FBS</td><td>Avantor Seradigm Lifescience</td><td>97068-085</td><td><güçlü>&nbsp; < / güçlü ></td></tr> <tr><td>Akış tüpleri: 5ml</td><td>BD</td><td>352063</td><td>Polipropilen yuvarlak tabanlı tüpler</td></tr><tr><td>Metanol</td><td>Fisher</td><td>84124</td><td></td></tr><tr><td>fare anti-İnsan CD24 antikoru</td><td>BD</td><td>561646</td><td>R-fikoeritrin ve Siyanin boya konjuge Klon: ML5</td></tr><tr><td>fare anti-İnsan CD44 antikoru</td><td>BD</td><td>555479</td><td>R-fikoeritrin konjuge, Klon: G44-26</td></tr><tr><td>N, N-dietilaminobenzaldehit (DEAB)</td><td>Kök Hücre Teknolojileri</td><td>1700</td><td>ALDEFLOUR Test kitinin bir parçası olarak ticari olarak satılır; üreticinin talimatlarına uyun DEAB hazırlığı</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Wisent Inc</td><td>311-425-CL</td><td>1x, Kalsiyum ve magnezyum olmadan</td></tr><tr><td>Tripsin-EDTA</td><td>Gibco</td><td>25200-056</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td><güçlü>Mamosfer Ortamı Kompozisyon</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>B27</td><td>Gibco</td><td>17504-44</td><td>1x</td></tr><tr><td>bFGF</td><td>Sigma</td><td>F2006</td><td>10 ng/mL</td></tr><tr><td>BSA</td><td>Bioshop</td><td>ALB003</td><td>%04</td></tr> <tr><td>DMEM:F12</td><td>Gibco</td><td>11330-032</td><td>1x, L-glutamin ve 15 mM HEPES</td></tr><tr><td>EGF</td><td>Sigma</td><td>E9644</td><td>20 ng/mL</td></tr><tr><td>İnsülin</td><td>Sigma ile</td><td>16634</td><td>5 ve mikro; g/mL</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td><güçlü>3D Organoid Medya Bileşimi</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>A8301</td><td>Tocris</td><td>2939</td><td>500 nM</td></tr><tr><td>B27</td><td>Gibco</td><td>17504-44</td><td>1x</td></tr><tr><td>DMEM:F12</td><td>Gibco</td><td>11330-032</td><td>1x, L-glutamin ve 15 mM HEPES</td></tr><tr><td>EGF</td><td>Sigma</td><td>E9644</td><td>5 ng/mL</td></tr> ile<tr><td>FGF10</td><td>Peprotech</td><td>100-26</td><td>20 ng/mL</td></tr><tr><td>FGF7</td><td>Peprotech</td><td>100-19</td><td>5 ng/mL</td></tr><tr><td>GlutaMax</td><td>Invitrogen</td><td>35050-061</td><td>1x</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Gibco</td><td>15630-080</td><td>10 mM</td></tr><tr><td>N-asetilsistein</td><td>Sigma</td><td>A9165</td><td>1.25 mM</td></tr><tr><td>Neuregulin ve beta; 1</td><td>Peprotech</td><td>100-03</td><td>5 nM</td></tr><tr><td>Nikotinamid</td><td>Sigma</td><td>N0636</td><td>5 mM</td></tr><tr><td>Noggin</td><td>Peprotech</td><td>120-10C</td><td>100 ng/mL</td></tr><tr><td>R-spondin3</td><td>R& D</td><td>3500</td><td>250 ng/mL</td></tr><tr><td>SB202190</td><td>Sigma</td><td>S7067</td><td>500 nM</td></tr><tr><td>Y-27632</td><td>Tocris</td><td>1254</td><td>5 & mikro; M</td></tr></tbody></table>

İnsan meme kanseri kök hücrelerinin hücre ve doku Örneklerinden İzolasyonu ve fonksiyonel değerlendirmesi

Isolation and Functional Assessment of Human Breast Cancer Stem Cells from Cell and Tissue Samples

Meme kanseri kök hücreleri (BCSC'ler), kalıtsal veya edinilmiş kök hücre benzeri özelliklere sahip kanser hücreleridir. Düşük sıklıklarına rağmen meme kanserinin başlamasına, nüksetmesine, metastaza ve tedavi direncine önemli katkılarda bulunurlar. Meme kanseri tedavisinde yeni terapötik hedefler belirlemek için meme kanseri kök hücrelerinin biyolojisini anlamak zorunludur. Meme kanseri kök hücreleri, CD44, CD24 gibi benzersiz hücre yüzey belirteçlerinin ekspresyonuna ve aldehit dehidrojenazın (ALDH) enzimatik aktivitesine dayanarak izole edilir ve karakterize edilir. Bu ALDHyüksekCD44 + CD24- hücreleri BCSC popülasyonunu oluşturur ve aşağı akış fonksiyonel çalışmaları için floresan ile aktive edilmiş hücre sıralama (FACS) ile izole edilebilir. Bilimsel soruya bağlı olarak, BCSC'lerin fonksiyonel özelliklerini değerlendirmek için farklı in vitro ve in vivo yöntemler kullanılabilir. Burada, insan BCSC'lerinin hem meme kanseri hücrelerinin heterojen popülasyonlarından hem de meme kanseri hastalarından elde edilen primer tümör dokusundan izole edilmesi için ayrıntılı bir deneysel protokol sunuyoruz. Ek olarak, BCSC fonksiyonunu değerlendirmek için kullanılabilecek koloni oluşturma testleri, mamosfer testleri, 3D kültür modelleri ve tümör ksenogreft testleri dahil olmak üzere aşağı akış in vitro ve in vivo fonksiyonel tahlillerini vurguluyoruz.

Tanımlanan protokol, insan BCSC'lerinin heterojen bir meme kanseri hücresi popülasyonundan, hücre hatlarından veya ayrışmış tümör dokusundan izole edilmesine izin verir. Herhangi bir hücre hattı veya doku örneği için, BCSC'leri maksimum saflıkta izole etmek için tek tip bir tek hücreli süspansiyon oluşturmak çok önemlidir, çünkü BCSC olmayan popülasyonları kirletmek, özellikle de çalışmanın amacı BCSC'leri hedef alan terapötik ajanların etkinliğini değerlendirmekse, değişken hücresel yanıtlara neden olabilir. sıkı bir sı...

Bu deneysel protokol, BCSC'lerin meme kanseri hücre ve doku örneklerinden izolasyonunun yanı sıra BCSC fenotipini ve fonksiyonunu değerlendirmek için kullanılabilecek in vitro ve in vivo testleri tanımlamaktadır.

İnsan Meme Kanseri Kök Hücrelerinin Hücre ve Doku Örneklerinden İzolasyonu ve Fonksiyonel Değerlendirmesi

Breast cancer stem cells (BCSCs) are cancer cells with inherited or acquired stem cell-like characteristics. Despite their low frequency, they are major ...

Bu teknik, araştırmacıların hem in vitro hem de in vivo fonksiyonel karakterizasyon testlerinin performansı için meme kanseri kök hücrelerini maksimum saflık ve canlılıkta izole etmelerine olanak tanıyacaktır. İzole edilmiş meme kanseri kök hücreleri, tümörjeniteye ve metastazı kontrol eden moleküler olayların aydınlatılmasına yardımcı olmak ve bu hücreleri hedeflemek için terapötik stratejiler tasarlamak için de kullanılabilir. İlgilenilen hücre ve doku tiplerine özgü küçük modifikasyonlar ile bu yöntem diğer sistemlere de uygulanabilir.Bir hücre kültüründen tek bir hücre süspansiyonu oluşturmak için,% 80 birleşik meme kanseri hücre kültürünü PBS ile yıkayın ve hücreleri oda sıcaklığında beş dakika boyunca uygun bir hücre ayrışma çözeltisi ile muamele edin. Hücreler ayrıldıktan sonra, hücre ayrışma çözeltisini nötralize etmek için beş mililitre kültür ortamı ekleyin ve hücreleri santrifüjleme için 50 mililitrelik konik bir tüpe aktarın. Saymak için peleti beş mililitre PBS'de yeniden süspanse edin.Saydıktan sonra, hücreleri tekrar santrifüjleyin, ardından hücreleri mililitre ALDH substrat tamponu başına 10 ila altı hücre bir kez yeniden süspanse edin. Bir doku örneğinden tek bir hücre süspansiyonu oluşturmak için, tümör dokusunu yaklaşık bir milimetre büyüklüğünde parçalara ayırmak için çapraz teknikte cerrahi bıçaklar kullanın. Parçaları 10 mililitre ayrışma tamponu içeren 50 mililitrelik konik bir tüpe yerleştirin.Bir çalkalayıcıda 37 santigrat derecede 40 dakikalık bir inkübasyon için tüpü parafilm ile kapatın ve sindirilmiş doku parçalarını santrifüjleme ile çökeltin. Peleti beş mililitrelik bir pipet kullanarak beş mililitre tripsin içinde yeniden süspanse edin ve dokuyu 37 derecelik bir su banyosunda beş dakika inkübe edin. İnkübasyonun sonunda, tek hücreleri serbest bırakmak için dokuyu birkaç kez kuvvetlice pipetleyin ve tüpteki toplam hacmi 25 mililitreye getirmek için yeterli DMEM / F-12 ortamı ekleyin.Hücreleri santrifüjleme ile toplayın, peleti bir mililitre Displace DNAse içinde yeniden süspanse edin ve 37 santigrat derece su banyosunda beş dakika inkübe edin. Kuluçka sonunda, PBS ile toplam hacmi 10 mililitreye getirin. Hücreleri pipetleyerek karıştırın ve 40 mikronluk bir hücre süzgecinden 50 mililitrelik bir tüpe geçirin.Santrifüjlemeden sonra, hücreleri saymak için beş mililitre taze PBS'de yeniden süspanse edin. Bir koloni oluşturma testi yapmak için, sıralamadan sonra, hücreleri tam ortamda yeniden süspanse edin ve tüp başına iki mililitre ortam içeren üç tüpün her birine uygun sayıda meme kanseri kök hücresi ekleyin, bir kez 10 ila ikinci, iki kez 10 saniyeye veya ikinci hücrelere beş kez 10 olarak etiketlenir. Hücre süspansiyonunu iyice karıştırmak için beş kez yukarı ve aşağı pipetleyin ve hücreleri altı oyuklu bir plakanın ayrı oyuklarına yerleştirin.Düzgün hücre dağılımları elde etmek için plakayı hafifçe döndürün ve plakayı koloniler görünene kadar hücre kültürü inkübatörüne yerleştirin. İnkübasyonun sonunda, hücreleri oyuk başına bir mililitre PBS ile yıkayın ve hücreleri 30 saniye boyunca oyuk başına 500 mikrolitre% 0.05 kristal viyole çözeltisi ile boyayın. İnkübasyonun sonunda, fazla boyayı çıkarmak için kuyucukları kuyu başına iki mililitre su ile iki kez yıkayın ve dört veya 10 kat büyütmede ışık mikroskobu ile oyuk başına toplam koloni sayısını sayın ve kaydedin.Bir mamosfer tahlili yapmak için, sıralamadan sonra, hücreleri tam mamosfer ortamında yeniden süspanse edin ve 96 kuyulu ultra düşük bağlantılı hücre kültürü plakasında oyuk başına santimetre kare alan başına ikinci hücrelerin 10'unun beş katı bir oturma yoğunluğunda plakalayın. Işık mikroskobu ile oyuk başına mamosfer sayısını saymadan önce, plakayı beş ila 10 gün boyunca hücre kültürü inkübatörüne yerleştirin. Bir 3D kültür modeli oluşturmak için, kabarcıksız 96 oyuklu bir plakanın her bir oyuğuna dikkatlice 50 mikrolitre bazal membran özü ekleyin ve çözeltinin polimerize olmasını sağlamak için plakayı bir saat boyunca 37 santigrat dereceye yerleştirin.Jel tabakasının kurumasını önlemek için 10 dakika sonra 100 mikrolitre PBS ekleyin. İnkübasyonun sonunda, sıralanmış hücreleri 200 mikrolitre 3D kültür ortamı konsantrasyonu başına beş ila 50 kez 10 ila üçüncü hücreye askıya alın ve 96 oyuklu plakanın her bir oyuğundaki PBS'yi 200 mikrolitre ortam içeren hücrelerle değiştirin. Daha sonra, kültürleri organoid oluşumu açısından değerlendirmeden önce plakayı 10 ila 14 gün boyunca hücre kültürü inkübatörüne yerleştirin.Gelişmiş ALDH enzimatik aktivitesi sergileyen insan meme kanseri hücreleri, yüksek CD44 seviyelerini ve düşük ila negatif CD24 ekspresyon seviyelerini eksprese eder ve meme kanseri kök hücreleri olarak sınıflandırılabilir. Toplu popülasyon içindeki meme kanseri kök hücrelerinin oranı, hücre dizileri veya hastalar arasında değişebilir ve genellikle hastalık evresine bağlıdır, daha agresif meme kanseri tipik olarak meme kanseri kök hücrelerinin daha yüksek bir oranını gösterir. Tek bir meme kanseri hücresinin kendi kendini yenileme ve 50 hücreden oluşan koloniler oluşturma yeteneği, koloni oluşturma testleri ile değerlendirilebilir.Meme kanseri kök hücrelerinin ankrajdan bağımsız deneysel koşullar altında kendi kendini yenileme yeteneği, mamosfer testleri ile değerlendirilebilir. Meme kanseri hücrelerinin ve bazal membran ekstraktının kültürlenmesi, meme kanseri kök hücrelerinin in vivo koşullarda özetlenen 3D yapılar oluşturmasına izin verir. Ek olarak, in vivo fare ksenogreft modelleri, meme kanseri kök hücrelerinin meme kanseri olmayan kök hücrelere veya toplu hücre popülasyonlarına kıyasla büyüme, kendini yenileme, farklılaşma ve/veya tümör başlatma yeteneğindeki farklılıkları anlamak için kullanılabilir.Bu prosedürü takiben, izole edilen meme kanseri kök hücreleri transkriptomik, kinomik ve metabolomik çalışmalarda kullanılabilir. Bu yöntem, araştırmacılara meme kanseri kök hücrelerinin tümör başlangıcı, metastazı, nüksü ve tedavi direncindeki rolünü keşfetme fırsatı sunar.

isolation-functional-assessment-human-breast-cancer-stem-cells-from

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kanser Araştırmaları

Kanser kök hücreleri (CSCS) malignitelerin çok sayıda tespit edilmiştir. Bu protokolde, aldehit dehidrogenaz aktivitesi ve CD44 ve CD24 ifade kullanan bir insan pankreas adenokarsinomu xenografts CSCS yalıtmak için akım sitometri yöntemi açıklar. Bu canlı hücreler, sonra fonksiyonel ve analitik çalışmalar kullanılabilir.

İnsan Pankreas Kanseri Xenografts Kök Hücre İzolasyonu

Beyin tümörü başlatan hücreler (BTICs), heterojen bir tümör sahip kök hücre özellikleri içinde nadir hücrelerinin tanımlanması insan beyin tümörü patogenezinde sağlayan yeni anlayışlar içine. Biz BTICs için zenginleştirmek özgü kültür koşullarının rafine var ve biz rutin daha bu popülasyonların zenginleştirmek için flow sitometri kullanın. Tek hücre RT-PCR ile kendini yenileme analizleri ve transkript analiz sonra bu izole hücreler üzerinde de yapılabilir.

Sıralama Kök Hücre Tahliller ve Akış Primer Beyin Tümörü Doku İşleme

Doğrudan insan dokularından kanser kök hücreler (rulmanları) izolasyonu biyolojik karakterizasyonu için bir koşuldur. Ayrıca zor sorun giderme adımları konusunda ipuçları sağlarken Bu makale, insan dokularından prostat CSCS izolasyonu için bir yöntem anlatılmaktadır.

İnsan Prostat Kanseri Örneklerinden Kanser Kök Hücreleri İzolasyon

İn vitro küre testleri, kanser kök hücrelerini tanımlamak için yaygın olarak kullanılır. Burada tek ve çok hücreli küre tahlillerini karşılaştırıyoruz. Daha zahmetli tek hücre bazlı tahliller veya metilselüloz takviyesi daha doğru sonuçlar verirken, sıvı ortamda gerçekleştirilen çok hücreli bazlı tahliller hücre yoğunluğundan büyük ölçüde etkilenebilir.

Çoklu ve tek hücre bazlı küreler tahliller kullanılarak, insan yumurtalık karsinoma hücrelerinde Kök Hücre Özelliklerinin Değerlendirilmesi

Yüzen mamosfer tahlilleri, süspansiyon koşullarında hayatta kalan ve farelere implante edildiğinde gelişmiş tümör oluşumu gösteren kök benzeri meme kanseri hücrelerinin alt kümesini araştırabilir.  Bu protokol, kök ile ilişkili transkripsiyonel manzaranın analizini kolaylaştırırken, in vivo tümörijenez için bir vekil olan küre oluşturma yeteneğinin uygun bir in vitro ölçümünü sağlar.

İnsan Göğüs Kanseri dokuları ve hücre hatlarından gelen Mammosphere Oluşumu Testi

Kemik sarkomlarda kanser kök hücrelerinin varlığı (rulmanları) son zamanlarda onların patogenezi ile bağlantılı olmuştur. Bu makalede, yapışmayan koşullarda büyümeye CSCS yeteneğini kullanılarak geleneksel osteosarkoma (OS) insan biyopsilerinden elde edilen birincil hücre kültürlerinden CSCS izole sunulmuştur.

Kanser kurulması İnsan Konvansiyonel Osteosarkom Hücre Kültürleri Kök

Kanser kök benzeri hücrelerin tümör nüksü ve tedavilere dirençteki rolünü anlamak son on yılda büyük ilgi gören bir konu haline gelmiştir. Bu makale, baş ve boyun skuamöz karsinom hücre hatlarından (HNSCC) kanser kök benzeri hücrelerin alt popülasyonunun izolasyonunu ve karakterizasyonunu açıklamaktadır.

Bir Baş-Boyun Skuamöz Hücre Karsinomu subpopülasyonu olması Kök Hücre Özellikleri İzolasyonu ve Karakterizasyonu

Bu prosedür, bir aspirin-fumarat prodürününün anti-NFκB ve anti-kanser kök hücre aktivitesini nasıl sentezlediğimizi ve karakterize ettiğimizi gösterecektir.

NFKB Aktivite ve Meme Kanseri Kök Hücreler önler Sentezi ve bir Aspirin-fumarat ön-ilacının Karakterizasyonu

Bu metodolojinin amacı, kanser hücre hatlarındaki kanser kök hücrelerini (CSC) ve primer insan tümör örneklerini küre oluşturma protokolü ile sağlam bir şekilde, fonksiyonel tahliller ve akış sitometrisi ve Batı ile henotypik karakterizasyon kullanarak tanımlamaktır. Leke.

Jinekolojik ve Meme Kanseri Tümörlerinden Kanser Kök Hücre Kürelerinin Alınması

İnsan primer prostat epitel hücreleri kullanarak, kök benzeri hücrelerin küresel tabanlı etiket tutma testi ile fonksiyonel karakterizasyonu için yeni bir biyomarker-free yöntemi ni rapor ediyoruz. BrdU, CFSE veya Far Red 2D hücre etiketlemesi için adım adım bir protokol tanımlanır; üç boyutlu küresel oluşum; immünositokimya ile etiket tutucu kök benzeri hücre tanımlama; ve FACS tarafından izolasyon.

3 Boyutlu Spheroid Kültürlerden Kök Benzeri Hücrelerin İzolasyon

Bu protokol, tümör olmayan meme epitel hücrelerinde Apoptoz İnhibörü 5 (Api5) tarafından indüklenen kanser kök noktasını incelemek için mamosfer oluşum testinin oluşturulma yöntemini açıklar. Birincil nesil mamutsferlerden toplanan lizatlar, kök hücre benzeri özelliklerin indüksiyonunu değerlendirmek amacıyla farklı kök belirteçleri için analiz edilir.

Mamokür Testi, tümör olmayan meme epitel hücre hatlarında Api5 kaynaklı kök konumunu ortaya koydu

Öğrenin, insan meme kanseri kök hücrelerini hücre ve doku örneklerinden yüksek saflıkta izole etme yöntemini. Bu teknik, tümör biyolojisi ve hedefe yönelik tedavi stratejileri geliştirmek için kullanılabilir.

İnsan Meme Kanseri Kök Hücrelerinin Hücre ve Doku Örneklerinden İzolasyonu ve Fonksiyonel Değerlendirmesi

Daha fazla video keşfet