Name: Tüm Vücut Soluma Sistemi Kullanan Farelerde Sigara Dumanına Maruz Kalma (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-10-22T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 7 s
Description: Keşfedin, farelerde sigara dumanına maruz kalma yöntemini kullanarak akciğer amfizemi ve kemik iliği immün hücre gelişimi üzerindeki patofizyolojik etkileri nasıl araştırılır. Bu düşük maliyetli sistem, kronik solunum hastalıklarını çalışmak için güvenilir bir yöntem sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

AR, XH ve PE, NIH hibesi R01HL140398 ve Gilson Longenbaugh Vakfı hibesi ile desteklendi. DEMM ve KK, NIH hibeleri R01HL136333 ve R01HL134880 (KYK) ve Helis Tıbbi Araştırma Vakfı'ndan hibe ile desteklendi. DEMM ayrıca Howard Hughes Tıp Enstitüsü (HHMI) Gilliam İleri Çalışma Bursu tarafından da desteklenmektedir. PE ayrıca Hassas Çevre Sağlığı Bilimleri NIEHS T32 ES027801 Burs Programı eğitimi ile de desteklenmektedir. JC ve MF, Epigenetik ve Moleküler Karsinogenez Bölümü'nden Tütün Araştırma Fonları ve MD Anderson'daki Epigenetik Merkezi (MF'ye Akademik Ödül) tarafından desteklenmektedir. FK ve YZ, NIH hibeleri R01 ES029442-01 ve R01 AI135803-01 ve VA Merit grant CX000104 tarafından desteklenmektedir. Bu proje, Baylor College of Medicine'daki Sitometri ve Hücre Sıralama Çekirdeği tarafından CPRIT Çekirdek Tesis Destek Ödülü (CPRIT-RP180672), NIH (CA125123 ve RR024574) ve Joel M. Sederstrom'un yardımıyla desteklendi.

Deneylerde yer alan tüm hayvanlar ve bu tekniğin geliştirilmesi, Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylanan hayvan kullanım protokolümüz ve Laboratuvar Hayvan Bakımını Değerlendirme ve Akreditasyon Derneği (AAALAC) tarafından akredite edilmiş Baylor College of Medicine ve MD Anderson kurumları altında olmuştur.
1. Cihazın yapımı
<ol><li>Hava kompresörünün valf sistemi ile montajı.
	<ol>
<li>Debimetreleri (Y çubuğu ve 2 güç kalkışlı iki adet 15 L/dk) 1/8 inç dişli erkek adaptör meme ucu bağlantısı kullanarak minyatür basınç regülatörüne bağlayın. Diş sızdırmazlık bandının tüm dişli uçlarda kullandığınızdan emin olun.</li>
		<li>Monte edilmiş basınç regülatörünü akış cihazı ile tıbbi hava kompresörü cihazına aşağıdakileri kullanarak bağlayın: kompresör hava çıkışındaki 1/8 inç altıgen meme ucu, 1/8 inç dişli bağlantı bağlantısı ve basınç regülatörüne bağlanan 1/8 inç dişli erkek adaptör meme ucu bağlantısı.</li>
		<li>Oksijen döner dikenli konektörü her (4) akış cihazına takın.</li>
		<li>Hava kompresörünün üst hava çıkışına bir erkek adaptör takın (kısmen tıbbi hava kompresörü cihazına dahildir).</li>
	</ol></li>
	<li>Pozlama odalarının montajı (4 birim yapın)
	<ol>
<li>3/4 inç klorlu polivinil klorür (CPVC) borusunu sekiz 4 inç segmente kesin.</li>
		<li>Her segmenti bir adet 3/4 inç 90° dirsek CPVC bağlantısına yerleştirin ve dirseğin montaj tarafını 3/4 inç çapında bir CPVC erkek adaptörüne takın. Her biri bir CPVC dirsek bağlantısına ve bir CPVC erkek adaptörüne bağlı sekiz CPVC segmenti olmalıdır.</li>
		<li>Kapaklı 8,5 L hava geçirmez kabın (11,25 x 7,75 x 6 inç) birbirine en uzak karşı taraflarında iki delik (1 1/4 inç çapında) delin (bkz. Şekil 1 pozlama odası). Deliklerin konumlandırılması yukarıdan aşağıya ve soldan sağa ortalanacaktır.</li>
		<li>Daha önce monte edilmiş CPVC erkek adaptörünün dişli kenarlarını kaplardaki her deliğe yerleştirin.</li>
		<li>Kabın içinden, diğer tarafa 3/4 inç CPVC kapağı (Oda dumanı girişi) ve bir tarafa 3/4 inç CPVC Damla sulama dişi adaptörü takın (Oda dumanı çıkışı).</li>
		<li>Oda dumanı çıkışının CPVC kapağının üstünde quincunx (duş başlığı) deseninde beş 3 mm delik açın. Bu, sigara dumanının odaya daha yüksek hızda girmesini sağlayacak ve odanın içine her yöne eşit şekilde yayılmasını sağlayacaktır.</li>
	</ol></li>
	<li>Sigara odalarının montajı (4 murine maruz kalma ünitesine kadar yapar)
	<ol>
<li>Tek delikli bir kauçuk durdurucu (üretici boyutu 8,5) alın ve daha geniş tarafa 1/4 inç dikenli Y konektörü ve dar tarafa düz dikenli bağlantı parçası (8 mm açıklık) takın. Sigara, sigara işlemi sırasında (sigara kaidesi) buraya yerleştirilecektir.</li>
		<li>12 inç uzunluğundaki tıbbi sınıf vinil borunun bir ucunun lastik durdurucuya bağlı Y konektöründeki dikenli konektörlerden birine, diğer ucunun bir ucunun 1/4 inçlik bir bağlantı parçasına bağlanması ve bu bağlantı parçasının karşı tarafını tek delikli kauçuk durdurucuya (üretici boyutu 1) takması.</li>
		<li>Başka bir kauçuk durdurucuda (üretici boyutu 8.5), durdurucunun geniş tarafına bir adet 1/4 inç düz boru konektörü yerleştirin ve bağlantı elemanının dış ucunu 7 ft tıbbi sınıf bir vinil boruya bağlayın.</li>
		<li>Daha önce 1.3.1–1.3.3 adımlarında monte edilen iki kauçuk durdurucu yapıyı bir laboratuvar cam tahliye tüpünden 8 inç x 1.75 inç cam silindire bağlayın.</li>
	</ol></li>
	<li>Valf kontrol sistemi
	<ol>
<li>Sistem, sigara dumanının ve temiz havanın solunması (kabarması) simüle eden solenoid valflerin ritmik bir şekilde açılması ve kapatılması ile kontrol edilir. Solenoid vanaları kontrol eden sistem ticari olarak tasarlanmıştır (bkz. Malzeme Tablosu).</li>
	</ol></li>
	<li>Tüm bileşenleri bir araya getirme (bkz. Şekil 1)
	<ol>
<li>1 inç bağlantı elemanları kullanarak valf kontrol sisteminin kenarlarına dört solenoid valf monte edin.</li>
		<li>Solenoid vanaları üreticinin talimatlarına uyarak valf kontrol sistemine bağlayın.</li>
		<li>Solenoid vanadaki egzoz ("EXH") bağlantısına 10-32 (M) dişli düz bir konektör ve aynı solenoid vananın "IN" ve "OUT" bağlantılarına dişli bir bağlantı noktası adaptörü takın.</li>
		<li>Kompresöre takılan debimetreyi 7 ft tıbbi sınıf vinil boru kullanarak "OUT" bağlantısından solenoid vanaya bağlayın.</li>
		<li>1.3.3 adımda kauçuk durdurucu ile monte edilen 7 ft vinil tüpü bağlayın. solenoid vana üzerindeki "IN" konektöründe.</li>
		<li>Sigara odasının küçük kauçuk durdurucuyu oda dumanı girişine yerleştirin.</li>
		<li>Solenoid vanayı, adım 1.3.1'de monte edilen sigara kaideslerindeki dikenli Y konektörünün ikinci bağlantısına bağlayın.</li>
	</ol></li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61793/61793fig01.jpg"> Şekil 1: CS'ye maruz kalmak için WBIS'imizin bağlantılarının şeması. Bu şekil, tüm bileşenlerin bir çalışma aparatı oluşturmak için nasıl birleştirildiğini gösterir. Şekil, makinenin çalışabileceği dördünün sadece bir adet monte edilmiş sigara içme odasını göstermektedir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61793/61793fig01large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
2. Sigara dumanına maruz kalma
DİkKAT: Sigara dumanına ikinci ve üçüncü el maruz kalmaktan kaçının. Sigara ve maruz kalma odaları Sınıf II Tip B2 Laminar Akış Biyolojik Güvenlik Kabinleri içinde kullanılmalıdır. Dumana maruz kalma deneyleri (örneğin, maskeler, eldivenler, saç ağı, gece elbisesi) yaparken uygun KKD giyilmelidir.
<ol><li>
Basınç ve hava akışını ayarlama
	<ol>
<li>Tüm bileşenler Şekil 1'degösterildiği gibi monte edildikten sonra, hava kompresörünü açın ve güvenlik alarmının kendi kendine kapanmasını bekleyin.</li>
		<li>Düğmeyi basınç regülatörü üzerine çevirerek hava kompresörünün basıncını 40-50 psi'ye ayarlayın.</li>
		<li>Debimetreyi kullanarak hava kompresöründen gelen hava akışını 5 L olarak ayarlayın.</li>
		<li>Valf kontrol cihazını açın.</li>
		<li>Zamanlayıcının ilk basamağındaki UP tuşunu basılı tutarken SET/LOCK tuşuna basarak valf denetleyicisindeki dijital zamanlayıcıyı PULSE-C (ekranda "Pu-c" olarak gösterilir) çalışma moduna ayarlayın. Ardından, Pu-c moduna ulaşılana kadar UP tuşuna basın. Görüntülenen çalışma modunu (örneğin, Pu-C) çalışma modu olarak ayarlamak için RESET tuşuna basın.</li>
		<li>Zamanlayıcı 1'i değiştirmek için SET/LOCK tuşlarına basın (ekranda "T1" olarak gösterilir).</li>
		<li>T1'i 20 sn olarak ayarlamak için AYU VEYA AYI tuşlarına basın.</li>
		<li>Zamanlayıcı 2'yi değiştirmek için SET/LOCK tuşlarına basın (ekranda "T2" olarak gösterilir).</li>
		<li>T2'yi 3 sn olarak ayarlamak için AYU VEYA AYI tuşlarına basın. NOT: 2.1.5 ile 2.1.9 arasında olan adımlar belirli bir zamanlayıcı ile kullanılmak üzere özel olarak tasarlanmıştır (bkz. Malzeme Tablosu). Bu ürünün diğer kullanımları hakkında daha fazla bilgi için ilgili kullanım kılavuzuna bakın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Sigara dumanı tedavisi NOT: Bu sistem aynı anda 1-4 murine maruz kalma odasının kullanılmasına izin verir.<ol>
<li>Hava kompresörünü açın ve güvenlik alarmının kendi kendine kapanmasını bekleyin.</li>
		<li>Valf kontrol cihazını açın.</li>
		<li>5 fareyi 8,5 L hacimli hava geçirmez çıkarılabilir kapaklı dört pozlama odasının her birine aktarın.</li>
		<li>Laminer akış biyolojik güvenlik kabininin içinde, bir sigarayı aydınlatın ve sigarayı sigara odasının içine yerleştirin. Kentucky 3RF4 araştırma sigaralarına (9.5 mg/ cig katran ve 0.73 mg / cig nikotin) kıyasla 15 mg / cig katran ve 1.1 mg / cig nikotin8 içeren ticari olarak mevcut sigaralarıkullanın.</li>
		<li>Vana kontrol ünitesindeki şu anda kullanılmakta olan haznelere karşılık gelen vanaları AÇIK olarak değiştirin. Maruz kalma 2 faza ayrılır: (T1) temiz hava 20 s boyunca maruz kalma odasına pompalanır ve (T2) hava akışı sigaranın yanmasına neden olur ve sigara odasından duman 3 s için maruz kalma odasına pompalanır. Sigaranın filtreye ulaşana kadar tamamen yanmasına izin verin.<ol>
<li>~4 dakikalık bir süre boyunca ortalama ~10 puf/sigara gerçekleştirecek şekilde zamanlayıcı ayarlarını yapın. Zamanlayıcı ve sistemin, araştırmacıların araştırma ihtiyaçlarına göre CS dosing rejimini geliştirmek veya düşürmek için kolayca özelleştirilebilir olduğunu unutmayın.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Sigara filtresini çıkarın ve alevi söndürmek ve kokuyu nemlendirmek için sigara izmaritini su ile cam bir kabın içine yerleştirerek atın.</li>
		<li>Sigara odasının tekrar kapalı ve sigarasız olduğundan emin olun. Makinenin 10 dakika boyunca temiz hava pompalamasına izin verin. CS'ye maruz kalan omurgalı hayvanların sürekli izlenmesi son derece önemlidir. Bu maruz kalma rejimi, maruz kalma odası başına 9 haftalık 5 dişi fare için optimize edilmiştir.</li>
		<li>Oda başına günde toplam 4 sigara için 2.3.4 ile 2.3.7 arasında üç kez adımları yineleyin. Bu prosedür, araştırmacının deneyleri için ihtiyaç duyduğu sürece haftada 5 gün tekrarlanır.</li>
		<li>Fareleri maruz kalma odalarından ilgili kafeslerine geri çıkarın.</li>
		<li>Valf kontrol cihazını ve hava kompresörunu kapatın.</li>
		<li>Maruziyeti ve sigara odalarını çıkarın ve katran kalıntılarını gidermek için su ve sabunla yıkayın.</li>
		<li>Tekrar kullanmadan önce odaları tamamen kurutun.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Current Cigarette Smoking Among Adults in the United States. Center for Disease Control and Prevention. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.cdc.gov/tobacco/data_statistics/fact_sheets/adult_data/cig_smoking/index.htm">https://www.cdc.gov/tobacco/data_statistics/fact_sheets/adult_data/cig_smoking/index.htm</a> (2018).</li>
<li>Salvi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tobacco+smoking+and+evironmental+risk+factors+for+chronic+obstructive+pulmonary+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Clinics+in+Chest+Medicine%22%5BJournal%5D)">Tobacco smoking and evironmental risk factors for chronic obstructive pulmonary disease.</a> Clinics in Chest Medicine. 35, 17-27 (2014).</li>
<li>Sunyer, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Longitudinal+relation+between+smoking+and+white+blood+cells%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Epidemiology%22%5BJournal%5D)">Longitudinal relation between smoking and white blood cells.</a> American Journal of Epidemiology. 144, 734-741 (1996).</li>
<li>Freedman, D. S., Flanders, D., Barboriak, J. J., Malarcher, A. M., Gates, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cigarette+smoking+and+leukocyte+subpopulations+in+men%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Epidemiology%22%5BJournal%5D)">Cigarette smoking and leukocyte subpopulations in men.</a> Annals of Epidemiology. 6, 299-306 (1996).</li>
<li>Chronic Obstructive Pulmonary Disease (COPD). Center for Disease Control and Prevention. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.cdc.gov/copd/basics-about.html">https://www.cdc.gov/copd/basics-about.html</a> (2019).</li>
<li>Genovese, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clonal+hematopoiesis+and+blood-cancer+risk+inferred+from+blood+DNA+sequence%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Clonal hematopoiesis and blood-cancer risk inferred from blood DNA sequence.</a> New England Journal of Medicine. , (2014).</li>
<li>Steensma, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+implications+of+clonal+hematopoiesis%5BTitle%5D)+AND+%22Mayo+Clinic+Proceedings%22%5BJournal%5D)">Clinical implications of clonal hematopoiesis.</a> Mayo Clinic Proceedings. 93, 1122-1130 (2018).</li>
<li>Tobacco. Federal Trade Comission. , Available at: . Accessed: 4th (2020).</li>
<li>3R4F Cigarettes. University of Kentucky - College of Agriculture Food and Environment. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://ctrp.uky.edu/products/gallery/Reference Cigarettes/detail/936">https://ctrp.uky.edu/products/gallery/Reference Cigarettes/detail/936</a> (2020).</li>
<li>Shan, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cigarette+smoke+induction+of+osteopontin+%28SPP1%29+mediates+T+H+17+inflammation+in+human+and+experimental+emphysema%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Cigarette smoke induction of osteopontin (SPP1) mediates T H 17 inflammation in human and experimental emphysema.</a> Science Translational Medicine. 4, 1-10 (2012).</li>
<li>Yuan, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+C3a+receptor+is+required+in+cigarette+smoke-mediated+emphysema%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Mucosal+Immunology%22%5BJournal%5D)">Activation of C3a receptor is required in cigarette smoke-mediated emphysema.</a> Nature Mucosal Immunology. 8, 874-885 (2014).</li>
<li>Yuan, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cigarette+smoke+-+induced+reduction+of+C1q+promotes+emphysema%5BTitle%5D)+AND+%22JCI+Insight%22%5BJournal%5D)">Cigarette smoke - induced reduction of C1q promotes emphysema.</a> JCI Insight. 4, 1-17 (2019).</li>
<li>Shan, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Agonistic+induction+of+PPAR+g+reverses+cigarette+smoke+-+induced+emphysema+Find+the+latest+version%3A+Agonistic+induction+of+PPAR+%CE%B3+reverses+cigarette+smoke+-+induced+emphysema%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Agonistic induction of PPAR g reverses cigarette smoke - induced emphysema Find the latest version: Agonistic induction of PPAR γ reverses cigarette smoke - induced emphysema.</a> Journal of Clinical Investigation. 124, 1371-1381 (2014).</li>
<li>Hong, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+role+of+gd+T+cells+in+cigarette+smoke+and+influenza+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Mucosal+Immunology%22%5BJournal%5D)">Protective role of gd T cells in cigarette smoke and influenza infection.</a> Nature Mucosal Immunology. 11, 834-908 (2018).</li>
<li>Kim, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cigarette+smoke+induces+intestinal+inflammation+via+a+Th17+cell-neutrophil+axis%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Cigarette smoke induces intestinal inflammation via a Th17 cell-neutrophil axis.</a> Frontiers in Immunology. 10, 1-11 (2019).</li>
<li>Lu, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+microRNA+miR-22+inhibits+the+histone+deacetylase+HDAC4+to+promote+T+H+17+cell+-+dependent+emphysema%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Immunology%22%5BJournal%5D)">The microRNA miR-22 inhibits the histone deacetylase HDAC4 to promote T H 17 cell - dependent emphysema.</a> Nature Immunology. 16, 1185-1194 (2015).</li>
<li>Hendrix, A. Y., Kheradmand, F. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHendrix%2C+AY+%22The+Role+of+Matrix+Metalloproteinases+in+Development%2C+Repair%2C+and+Destruction+of+the+Lungs.+Progress+in+Molecular+Biology+and+Translational+Science%22">The Role of Matrix Metalloproteinases in Development, Repair, and Destruction of the Lungs. Progress in Molecular Biology and Translational Science</a>. 148, Elsevier Inc. (2017).</li>
<li>Siggins, R. W., Hossain, F., Rehman, T., Melvan, J. N., Welsh, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cigarette+smoke+alters+the+hematopoietic+stem+cell+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Med+Sci%22%5BJournal%5D)">Cigarette smoke alters the hematopoietic stem cell niche.</a> Med Sci. 2, 37-50 (2014).</li>
<li>Kheradmand, F., You, R., Gu, B. H., Corry, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cigarette+smoke+and+DNA+cleavage+promote+lung+inflammation+and+emphysema%5BTitle%5D)+AND+%22Transactions+of+the+American+Clinical+and+Climatological+Association%22%5BJournal%5D)">Cigarette smoke and DNA cleavage promote lung inflammation and emphysema.</a> Transactions of the American Clinical and Climatological Association. 128, 222-233 (2017).</li>
<li>Ha, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Menthol+attenuates+respiratory+irritation+and+elevates+blood+cotinine+in+cigarette+smoke+exposed+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Menthol attenuates respiratory irritation and elevates blood cotinine in cigarette smoke exposed mice.</a> PLoS ONE. , 1-16 (2015).</li>
<li>Moreno-Gonzalez, I., Estrada, L. D., Sanchez-Mejias, E., Soto, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Smoking+exacerbates+amyloid+pathology+in+a+mouse+model+of+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Smoking exacerbates amyloid pathology in a mouse model of Alzheimer's disease.</a> Nature Communications. 4, 1-10 (2013).</li>
<li>Madison, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electronic+cigarettes+disrupt+lung+lipid+homeostasis+and+innate+immunity+independent+of+nicotine%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Electronic cigarettes disrupt lung lipid homeostasis and innate immunity independent of nicotine.</a> Journal of Clinical Investigation. 129, 4290-4304 (2019).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Burada, farelerin WBIS'i için CS'ye bir aparat yapımı için gerekli bilgileri sağlıyoruz. Sistemin kurulumundan sonra, araştırmacıların sistemi hayvanlarda teslim edilen nikotin veya cotinine dozuna göre kalibre etmesi kritik öneme sahiptir. Cihaz, sigara puf hacmini, puf frekansını, birleşik dumana maruz kalma süresini ve hayvanların her sigara arasında aldığı dinlenme aralıklarını ayarlamak için kullanılabilecek bir zamanlayıcı ve basınç ölçer içerir. Ayrıca, günlük olarak uygulanan gerçek sigara sayısı katran ve nikoti...

Sigara, son 50-60 yılda sigara içen yetişkinlerin sayısındaki istikrarlı düşüşe rağmen ABD'de önlenebilir hastalıkların en önemli nedenlerinden biri olmaya devam etmektedir1. Sigara içmenin, amfizem ve kronik bronşit içeren bir grup hastalık olan kronik obstrüktif akciğer hastalığı (KOAH) dahil olmak üzere akciğerlerin ve kanın birden fazla hastalığıyla bağlantılı olduğu yaygın olarak bilinmektedir2,3,4. Hastalık Kontrol Merkezi'ne (CDC) göre, 2014 yılında KOAH, 15 milyondan fazla Amerikalının bu hastalıktan muzdarip olduğu ABD'de üçüncü önde gelen ölüm nedeni oldu5.
CS ayrıca son zamanlarda klonal hematopoez (CH)6,7, tek bir hematopoetik kök hücrenin orantısız bir şekilde bir kişinin periferik kanının büyük bir yüzdesini ürettiği bir durum geliştirme riski ile ilişkilendirilmiştir. Bu bulgu sigara içme ve kemik iliği fonksiyonu arasında potansiyel bir bağlantı olduğunu göstermektedir. CS'nin yaygın ve son derece önemli sağlık etkileri göz önüne alındığında ve hastalıkların murine modellerinin biyomedikal araştırmalarda ilerlemenin temel taşı olduğu göz önüne alındığında, farelerde CS modellemek için verimli ve uygun fiyatlı sistemler geliştirmek yararlıdır.
Burada, CS'nin akciğer amfizem ve kemik iliği homeostazı üzerindeki in vivo etkilerini tedavi etmek ve incelemek için uygun fiyatlı bir sistem oluşturmak için adım adım bir kılavuz sunuyoruz. Bu ekipmanın montajı, kullanıcının özel bilgiye sahip olmasını gerektirmez ve bu nedenle DIY montajına izin verir.

<table><tbody><tr><td>1 inç bağlantı elemanı</td><td>Lowes</td><td>756990</td><td></td></tr><tr><td>1/4 inç Dikenli Y konektörü</td><td>VWR</td><td>89093-282</td><td></td></tr><tr><td>1/4 inç düz boru konektörü</td><td>VWR</td><td>62866-378</td><td></td></tr><tr><td>1/8 altıgen nipel</td><td>Lowes</td><td>877221</td><td></td></tr><tr><td>1/8 dişli kaplin bağlantısında</td><td>Lowes</td><td>877208</td><td></td></tr><tr><td>1/8 dişli erkek adaptör nipel bağlantısı</td><td>Lowes</td><td>877243</td><td></td></tr><tr><td>10/32 (M) dişli düz konektör</td><td>Bimba</td><td>EB60</td><td></td></tr><tr><td>3/4 90 derecelik dirsek CPVC bağlantı parçası</td><td>Lowes</td><td>22643</td><td></td></tr><tr><td>3/4 klorlu polivinil klorür (CPVC) boruda</td><td>Lowes</td><td>23814</td><td></td></tr><tr><td>3/4 CPVC kapağında</td><td>Lowes</td><td>23773</td><td></td></tr><tr><td>3/4 inç CPVC Damla sulama dişi adaptörü</td><td>Lowes</td><td>194629</td><td></td></tr><tr><td>3/4 inç çapında CPVC erkek adaptör</td><td>Lowes</td><td>23766</td><td></td></tr><tr><td>8,5 L hava geçirmez kapaklı kap (11,25 inç x 7,75 inç x 6 inç)</td><td>Komax</td><td>N/A</td><td>"Komax Biokips Büyük Ekmek Kutusu | (280 oz) Büyük Saklama Kabı "</td></tr><tr><td>Cam drenaj borusu (1.75 inç çap x 8 uzunluk)</td><td>KIMAX</td><td>6500</td><td></td></tr><tr><td>Isonic Solenoid Valfler</td><td>Bimba</td><td>V2A02-AW1</td><td></td></tr><tr><td>Marlboro Red 100'ler</td><td>Marlboro</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Oksijen döner dikenli konektör</td><td>Global Tıbbi Çözümler</td><td>RES002</td><td></td></tr><tr><td>Panasonic Zamanlayıcı LT4H-W</td><td>Panasonic</td><td>LT4HW</td><td>Öğe, Shepherd Controls & tarafından valf kontrol cihazına yerleştirildi. İştirakler</td></tr><tr><td>Basınç regülatörü</td><td>Müttefik Elektronik ve Otomasyon</td><td>70600552</td><td>Ayrıca "Norgren R07-100-RGKA" olarak listelenmiştir</td></tr> <tr><td>Kauçuk tıpa # 1 (tek delikli)</td><td>VWR</td><td>59581-163</td><td></td></tr><tr><td>Kauçuk tıpa # 8.5 (tek delikli)</td><td>VWR</td><td>59581-389</td><td></td></tr><tr><td>Scireq inExpose sistemi</td><td>Scireq ve Emka Technologies</td><td>N/A</td><td>Bizimkilerle karşılaştırma için kullanılan ticari sistem DIY WBIS</td></tr><tr><td>Düz dikenli bağlantı (8mm açıklık)</td> <td>VWR</td><td>10028-872</td><td></td></tr><tr><td>İplik Mastik bant</td><td>Lowes</td><td>1184243</td><td></td></tr><tr><td>Dişli bağlantı noktası adaptörü</td><td>Bimba</td><td>P1SA1</td><td></td></tr><tr><td>Zamanlayıcı Aridyne 2000 Tıbbi Hava Kompresörü</td><td>MFI Tıbbi</td><td>AHC-TE20</td><td></td></tr><tr><td>Zamanlayıcı akış ölçer</td><td>Müttefik Sağlık Ürünleri</td><td>15006-03YP2</td><td>"Püriten Hava Ölçer" olarak da listelenen</td></tr> <tr><td>Valf Kontrol sistemi</td><td>Shepherd Controls and Associates</td><td>N/A</td><td>Company, bu model için valf kontrol sistemini özel olarak tasarladı.</td></tr><tr><td>Vinil borular</td><td>Vitality Medical</td><td>RES3007</td><td></td></tr></tbody></table>

tüm vücut soluma sistemi kullanan farelerde sigara dumanına maruz kalma

Cigarette Smoke Exposure in Mice using a Whole-Body Inhalation System

AMERIKA Birleşik Devletleri'ndeki yetişkinlerin yaklaşık% 14'ünün 2018'de sigara içtiği bildirildi. Sigara dumanının (CS) akciğerler ve kardiyovasküler hastalıklar üzerindeki etkileri yaygın olarak incelenmiştir, ancak CS'nin kan ve kemik iliği gibi diğer doku ve organlardaki etkisi eksik tanımlanmıştır. Kemirgenlerdeki CS'nin etkilerini incelemek için uygun sistemi bulmak yasaklayıcı derecede pahalı olabilir ve ticari olarak mevcut sistemlerin satın alınmasını gerektirebilir. Böylece, farelerde CS'nin patolojik etkilerini incelemek için uygun fiyatlı, güvenilir ve çok yönlü bir sistem inşa etmek için yola çıktık. Bu tüm vücut soluma maruz kalma sistemi (WBIS) kurulumu, CS ve temiz havaya alternatif maruz kalarak sigaraların nefes almasını ve şişirilmesini taklit eder. Burada, bu kendin yap (KENDIN YAP) sisteminin 4 aylık sigara dumanına maruz kalmadan sonra farelerde hava yolu iltihabına ve akciğer amfizemine neden olduğunu gösteriyoruz. Bu aparat kullanılarak kemik iliğinde CS'nin tüm vücut solumasının (WBI) hematopoetik kök ve progenitör hücreler (HSPC) üzerindeki etkileri de gösterilmiştir.

CS maruziyetinin ana özelliklerinden biri, akciğerdeki hava keseciklerinin (alveoller) hasar ve yıkımı ile karakterize olan amfizemdir. Bu nedenle, ilk deneyler DIY sisteminin CS'ye tekrarlanan tüm vücut maruziyeti üzerine dişi farelerin akciğerlerinde amfizem değişikliklere neden olma yeteneğine odaklandı. CS dosing rejimi, fareleri CS ile tedavi etmek ve amfizem 10 , 11 ,12 ,13 , 14</sup...

Bu protokol, sigara dumanının (CS) patofizyolojik etkilerinin, şirket içinde inşa edilmiş bir tüm vücut soluma (WBI) maruz kalma sistemi (WBIS) ile incelenmesini göstermektedir. Bu sistem, akciğer amfizem ve hematopoez üzerindeki CS aracılı etkilerin araştırılması için kontrollü tekrarlanabilir koşullar altında hayvanları CS'ye maruz bırakabilir.

Tüm Vücut Soluma Sistemi Kullanan Farelerde Sigara Dumanına Maruz Kalma

Close to 14% of adults in the United States were reported to smoke cigarettes in 2018. The effects of cigarette smoke (CS) on lungs and cardiovascular ...

Bu teknik, sigara dumanının kronik hava yolu iltihabı ve amfizemdeki fizyolojik etkilerinin yanı sıra farelerde kemik iliği bağışıklık hücresi gelişimini incelemek için kullanılabilir. Bu ekipmanın düşük maliyeti ve basit yapım prosedürü, onu dünya çapında birçok laboratuvar için erişilebilir kılar. Tüm vücut inhalasyon maruz kalma sisteminin tüm bileşenlerini monte ettikten sonra, hava kompresörünü açın ve güvenlik alarmının kendi kendine kapanmasını bekleyin.Basınç regülatörü üzerindeki düğmeyi çevirerek hava kompresörünün basıncını 40 ila 50 PSI arasında ayarlayın. Akış ölçeri kullanarak hava kompresöründen gelen hava akışını beş litreye ayarlayın. Ardından valf kontrolörünü açın.Zamanlayıcının ilk basamağındaki yukarı tuşunu basılı tutarken ayar kilidi tuşuna basarak valf kontrol cihazındaki dijital zamanlayıcıyı darbe C çalışma moduna ayarlayın. Ardından PU-C moduna ulaşılana kadar yukarı tuşuna basın. Görüntülenen çalışma modunu çalışma modu olarak ayarlamak için sıfırlama tuşuna basın.Ekranda T1 olarak gösterilen zamanlayıcıyı değiştirmek için kilidi ayarla'ya basın, ardından 20 saniyeye ayarlamak için yukarı veya aşağı tuşlarına basın. Zamanlayıcıyı iki veya T2'yi üç saniyeye ayarlamak için bu işlemi tekrarlayın. Hava kompresörünü açın ve güvenlik alarmının kendi kendine kapanmasını bekleyin.Ardından valf kontrolörünü açın. Hava geçirmez çıkarılabilir kapakları olan dört adet 8,5 litrelik pozlama odasının her birine beş fare aktarın. Maruz kalma odalarını Sınıf II tip B2 laminer akışlı biyolojik güvenlik kabininin içine yerleştirin.Biyolojik güvenlik kabininin içinde bir sigara yakın ve sigara haznesine yerleştirin. Valf kontrol cihazındaki, şu anda kullanımda olan odalara karşılık gelen valfleri açın. Temiz hava 20 saniye boyunca maruz kalma odasına pompalanarak sigaranın yanmasına neden olacak ve duman üç saniye boyunca maruz kalma odasına pompalanacaktır.Sigaranın filtreye ulaşana kadar tamamen yanmasına izin verin. Dört dakikalık bir süre boyunca sigara başına ortalama 10 nefes almak için zamanlayıcı ayarlarını yapın. Sigara filtresini çıkarın ve alevi söndürmek ve kokuyu azaltmak için sigara izmaritini su dolu bir cam kabın içine koyarak atın.Sigara haznesini kapatın ve makinenin 10 dakika boyunca temiz hava pompalamasına izin verin. Sigara dumanına maruz kalmayı günde oda başına toplam dört sigara için tekrarlayın. Bitirdiğinizde, fareleri maruz kalma odalarından çıkarın ve karşılık gelen kafeslerine geri koyun.Valf kontrolörünü ve hava kompresörünü kapatın. Pozlama ve sigara haznelerini çıkarın ve katran kalıntılarını gidermek için su ve sabunla yıkayın. Tekrar kullanmadan önce haznelerin tamamen kurumasını bekleyin.Fareler, dört ay boyunca haftada beş gün, her sigara arasında 10 dakikalık dumansız aralıklarla günde dört ticari sigaranın dumanına maruz bırakıldı. Hematoksilen ve Eozin lekeli akciğer histolojisi, sigara dumanına maruz kalan farelerde alveollerin yıkımını gösterdi. Akciğer bölümlerinin kör histomorfometrik analizi, sigara dumanına maruz kalan farelerde ortalama doğrusal kesişimin hava kontrollerine kıyasla önemli ölçüde daha yüksek olduğunu doğruladı.Beklendiği gibi, tüm vücudun sigara dumanına maruz kalması vücut ağırlığında bir azalmaya neden olur. Maruz kalan fareler ayrıca, bağışıklık hücrelerinin hava yolu infiltrasyonunun yanı sıra doku hasarından sorumlu olan matris metalloproteinazlar 9 ve 12 gen ekspresyonunun indüksiyonunu gösterdi. Bir nikotin metaboliti olan kotinin, dört ay sigara dumanına maruz kalan farelerin serumunda önemli ölçüde yükselmiştir, ancak havaya maruz kalan farelerde tespit edilememiştir.Maruziyetten sonra, kemik iliği popülasyonları akış sitometrisi kullanılarak analiz edildi. Dört aylık sigara dumanı maruziyetinden sonra hematopoietik kök ve progenitör popülasyonlarda önemli bir artış tespit edildi. Ticari olarak temin edilebilen bir sistem kullanılarak farelerin sigara dumanına tüm vücut maruziyeti de HSPC popülasyonlarında bir değişiklik göstermiştir.Fare odalarına hava veya sigara dumanı ileten tüm aletlerin engelsiz olduğundan ve hava akışını bozabilecek bükülmelerden arınmış olduğundan emin olmak önemlidir. Ayrıca, farelerin sigara dumanına maruz kalma sırasında her zaman izlenmesi gerekir. Prosedür ayrıca sigara dumanının kalp ve gastrointestinal sistem gibi diğer organ sistemleri üzerindeki fizyolojik etkilerini incelemek için de kullanılabilir.Birkaç değişiklikle, bu makine aynı zamanda farelerin elektronik sigaralara tüm vücut soluma maruziyeti için de uyarlanabilir. Bu, araştırmacıların bir murin hayvan modelinde vaping ile ilişkili potansiyel tehlikeleri incelemesine izin verebilir.

cigarette-smoke-exposure-in-mice-using-a-whole-body-inhalation-system

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Pulmoner farelerin solunum yolu epitel hücreleri izole ve farklılaşmış bir solunum yolu epitel bir model olarak hava-sıvı arayüzü kültüre olabilir. Bu çevresel toksin moleküler yanıtların incelemek üzere bir protokol, tecrit, kültür ve bu hücreler ana sigara dumanına maruz için tarif edilir.

Hava Sıvı Arabirimi Fare Solunum Epitel Hücreleri ve Deneysel sigara dumanına maruz kalma izolasyonu

Bir bütün vücut nanoparçacık aerosol inhalasyon maruz tesisi (TiO nano boyutlu titanyum dioksit için inşa...

Tüm-Vücut Nanopartikül Aerosol Solunum Etkilenmeler

Bu protokolün amacı, KOAH'ın bir fare modelinde kronik akciğer patolojilerini ölçmek için otomatik yöntemler sağlamaktır. Protokol, fareleri sigara dumanına (CS) maruz bırakmayı, pulmoner fonksiyonu ölçmeyi, akciğerleri şişirmeyi ve farelerde amfizem ve küçük hava yolu yeniden şekillenmesini ölçmek için morfometri yöntemlerinin kullanılmasını içerir.

Sigara Duman maruz kalan Fare Akciğer Amfizem ve Küçük Havayolu Yaptırma otomatik ölçüm

Bu protokolün amacı, insan organotipik 3D bronşiyal ve burun dokusu modellerini hava-sıvı arayüzünde ana akım sigara dumanına (CS) maruz bırakmaktır. CS'nin dokular üzerindeki etkisi daha sonra bir sitokrom P450 aktivite testi, bir kirpik atma ölçümü ve bir sistem biyolojisi yaklaşımı kullanılarak araştırılmaktadır.

Tüm Sigara Dumanına Organotipik 3D Bronşiyal ve Burun Doku Kültürü Modelleri Tekrarlanan Pozlama Etki Değerlendirmesi

Bu protokol, kemirgenleri elektronik sigara buharı (E-buhar) ve sigara dumanına maruz bırakmaya yönelik bir yöntemi açıklamaktadır. Maruz kalma odaları, anestezi odalarını, kemirgenlere E-buhar veya sigara dumanı veren otomatik bir pompalama sistemi ile modifiye ederek yapılır. Bu sistem birçok deneysel son noktayı barındıracak şekilde kolaylıkla değiştirilebilir.

Bir Elektronik Romanda Elektronik Sigara Buharı ve Sigara Dumanının Etkilerinin Karşılaştırılması<emIn vivo</em&gt; Pozlama Sistemi

Bu çalışmada art arda fareler için ozon yüksek konsantrasyonda açarak yeni bir kronik obstrüktif akciğer hastalığı (KOAH) hayvan modeli başarılı nesil açıklar.

Kronik obstrüktif akciğer hastalığı manken tekrarlanan ozon maruz farelerde nesil

Elektronik Sigara (e-cig) kullanıcılar dünya çapında artıyor. Az, ancak, inhale e-cig aerosoller tarafından indüklenen sağlık etkileri hakkında bilinir. Bu makalede, bir e-cig aerosol üretimi tekniği hayvan Etkilenmeler ve sonraki toksikolojik çalışmalar için uygun. Böyle protokolleri deneysel olarak tekrarlanabilir ve standart e-cig pozlama sistemleri kurmak için gereklidir.

Elektronik Sigara Aerosol üçüncü nesil makine-Vaping aygıt tarafından nesil: toksikolojik çalışmalar uygulamaya

Burada sunulan amfizem bir fare modeli akciğer örneklerinin histolojik değerlendirilmesi için istikrarlı bir durum oluşturur akciğer fiksasyonu için yararlı bir protokoldür. Bu modelin ana avantajı akciğer çökmesi veya deflasyon olmadan aynı sabit basınç ile birçok akciğer düzeltebilirsiniz.

Farelerde AmfizemIn Değerlendirilmesi İçin Sabit Basınç Altında Akciğer Fiksasyonu

Bu çalışma, deneysel silikoz farelerinde nikotinin pulmoner fibrozun ilerlemesi üzerindeki sinerjik etkisini incelemek için bir fare modelini açıklamaktadır. Çift pozlamalı fare modeli, nikotin ve silikaya aynı anda maruz kaldıktan sonra akciğerdeki patolojik ilerlemeyi simüle eder. Açıklanan yöntemler basittir ve yüksek oranda tekrarlanabilir.

Akciğer Epitelyal-Mezenkimal Geçişini Desteklemek için Silikaya Maruz Kalan Bir Fare Modelinde Nikotin Kullanılması

Esrar damıtılmış vape kartuşları, yüksek konsantrasyonlarda kannabinoid içeren ekstraktları aerosol haline getiren, pille çalışan cihazlardır. Bu ürünler için yerleşik preklinik modellerin olmaması, fizyolojik etkilerinin incelenmesinde zorluklar yaratmaktadır. Bu boşluğu gidermek için, buharlaştırılmış kenevir distilatları için standartlaştırılmış bir klinik öncesi inhalasyon murin modeli geliştirilmiştir.

Buharlaştırılmış Kenevir Distilatlarını Test Etmek için Klinik Öncesi İnhalasyon Modelinin Geliştirilmesi

Keşfedin, farelerde sigara dumanına maruz kalma yöntemini kullanarak akciğer amfizemi ve kemik iliği immün hücre gelişimi üzerindeki patofizyolojik etkileri nasıl araştırılır. Bu düşük maliyetli sistem, kronik solunum hastalıklarını çalışmak için güvenilir bir yöntem sunar.

Tüm Vücut Soluma Sistemi Kullanan Farelerde Sigara Dumanına Maruz Kalma

Daha fazla video keşfet