Name: Tam Tohum Lu Reişin Elde Edilmesinde Basit Bir Kuru Kesit Yöntemi ve Uygulamaları (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-01-23T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 10 s
Description: Öğrenin, LR White reçine gömülü tam mısır tanelerinde hücre, nişasta granülleri ve protein cisimciklerinin morfolojisini incelemek için basit bir kuru kesit yöntemi. Bu teknik, tohum kalitesi ve gelişim biyolojisi araştırmalarında nicel analiz sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Finansman Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (32071927), Yangzhou Üniversitesi Yetenek Projesi ve Jiangsu Yüksek Öğretim Kurumlarının Öncelikli Akademik Program Geliştirme tarafından sağlanmıştır.

1. Rezorin gömülü tohumunun hazırlanması (Şekil 1)
<ol><li>10 mL'de altı mısır olgun çekirdeğini %2,5 fosfat tamponlu glutaraldehit (0,1 M, pH7,2) 4 °C'de 48 saat boyunca sabitler. Araştırmacılar araştırma amaçlarına ve doku tiplerine göre diğer fiksatif karışımları, fiksatif konsantrasyonları ve fiksasyon koşullarını seçebilirler.</li>
	<li>Çekirdekleri çıkarVe keskin bir çift taraflı bıçak kullanarak 2-3 mm kalınlığında uzunlamasına veya transversyel dilimleyin ve 10 mL 2,5% fosfat-tamponlu glutdehit (0.1 M, pH 7.2) tekrar 48 saat için düzeltin.</li>
	<li>Numuneleri her seferinde 30 dakika boyunca 0,1 M fosfat tamponu (pH 7,2) ile üç kez yıkayın.</li>
	<li>Etanol sulu çözelti (10 mL) artan sınıflarda numuneleri %30'dan %50'ye, %70'ten %90'a ve 30 dakika boyunca üç kez dehydrate.</li>
	<li>Etanol ile seyreltilmiş LR White rezorin çözeltisinin 10 mL artırıcı kalitelerinde numunelere sızın ve her seferinde 12 saat boyunca 4 °C'de %75 ve %100 iki kez 12 saat.</li>
	<li>Gömmeden önce kaideleri numuneler için hazırlayın. 2 mL santrifüj tüpüne 0,25 mL %100 LR Beyaz reçine ekleyin ve 60 °C'de 48 saat polimerize edin.</li>
	<li>Art arda saf LR Beyaz reçine (0,5 mL) ve bir kaide ile santrifüj tüpü içine sızmış örnek ekleyin. Örnekleri anatomik iğne ile düzleştirin ve 60 °C'de bir fırında 48 saat polimerize edin.</li>
</ol>2. Tam tohum büyüklüğünde kesit hazırlamak için kuru kesitler (Şekil 1)
<ol><li>Santrifüj tüpünden gömülü çekirdekleri alın ve keskin bir bıçak kullanarak numunenin etrafındaki fazla reçineyi kesin.</li>
	<li>Resenin bloğunu ultramikrotom (EM UC7) numune tutucusuna kelepçele ve numunenin yüzeyinde ve numunenin etrafında ki gereksiz rezoriyi bir bıçakla kırpın.</li>
	<li>Tam bir bölüm oluşturulana kadar numunenin yüzeyini cam bir bıçakla ince ince parlata.</li>
	<li>Kesmeden önce bıçak kenarının yaklaşık 2 mm üzerine küçük bir bakır kanca koyun ve numuneyi 2 μm'lik bir keserek kesin. Kancanın rolü, bölümün yukarı doğru kıvrılmasını önlemektir.</li>
	<li>Bölüm uzun olduğunda onu desteklemek için bölümün altına kancayı koyun.</li>
	<li>Önceden işlenmemiş bir kaydıra 100°L su ekleyin ve tamamlanmış ve kırılmamış bölümü cımbızla suya dikkatlice aktarın.</li>
	<li>Buruşuk bölümü yumuşatmak için numuneyi bir gecede 50 °C'de düzleme masasında ısıtın ve kurutun.<ol>
<li>Bölüm parçalanırsa veya yırtılırsa, numunenin her reçine infiltrasyonu için süreyi 12 saatten 24 saat veya 48 saate kadar uzatın.</li>
		<li>Bölüm, bıçağa paralel bazı çizgilere sahipse, numune bloğunu sıkıca kenetleyin. Bölümde bıçak için dikey bazı çizgiler varsa, yeni bir bıçak kullanın.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. Bölümün boyanma ve gözlemi
NOT: Hücrelerin, nişasta granüllerinin ve protein gövdelerinin doku yapısını ve morfolojisini gözlemlemek için, araştırmanın amacına göre kesitleri belirli lekelerle lekeler. Burada, hücre duvarlarını, nişasta granüllerini ve protein cisimlerini lekelemek için floresan parlatıcı 28, iyot çözeltisi ve Coomassie parlak mavi R250 kullanıyoruz.
<ol><li>Hücrelerin morfolojisini gözlemlemek için, 40 mL'lik floresan parlatıcı 28 sulu çözeltideki 40 mL'lik floresan parlatıcı 28 sulu çözeltiyi 45 °C'de 10 dakika boyunca akan suyla durulayın ve 5 dakika boyunca akan suyla durulayın. CCD kamera ile donatılmış bir floresan mikroskobu altındaki bölümü gözlemleyin ve fotoğrafladı.</li>
	<li>Nişasta granüllerinin morfolojisini gözlemlemek için, 1 dk boyunca %25 (v/v) gliserolde %40 07 (w/v) I2 ve %0,14 (w/v) KI ile kesiti boylayın ve iyot solüsyonu içeren numuneyi coverslip ile kapatın. Örneği CCD kamera ile donatılmış bir ışık mikroskobu altında görüntüleyin ve fotoğrafla.</li>
	<li>Protein cisimlerinin morfolojisini gözlemlemek için, 45 °C'de 10 dakika boyunca 70 mL kompakt cam boyama kavanozunda %10 (v/v) asetik asit ile bölümü 40 mL'lik bir asit le batırın ve 40 mL'lik coomassie parlak mavi R250%25 (v/v) izopropanol ve %10 (v/v) asetik asit le 15 dk 45 C5'te boyandın. Lekeli bölümleri 5 dk akan su ile yıkayın ve kurutun. CcD kamera ile donatılmış bir ışık mikroskobu altında bölümü gözlemleyin ve fotoğrafla.</li>
</ol>4. Morfoloji parametrelerinin nicel analizi
<ol><li>Zhao ve ark.9 prosedürlerini takip eden morfoloji analiz yazılımı (Image-Pro Plus 6.0 yazılımı) kullanarak, tohumun farklı bölgelerindeki hücrelerin, nişasta granüllerinin ve protein gövdelerinin alanı, uzun/kısa ekseni ve yuvarlaklığı için fotoğraflanan görüntüleri işleme ve nicel olarak analiz edin.</li>
</ol>

<ol><li>Cai, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterogeneous+structure+and+spatial+distribution+in+endosperm+of+high-amylose+rice+starch+granules+with+different+morphologies%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Agricultural+and+Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Heterogeneous structure and spatial distribution in endosperm of high-amylose rice starch granules with different morphologies.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 62 (41), 10143-10152 (2014).</li>
<li>He, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+defective+effect+of+starch+branching+enzyme+IIb+from+weak+to+strong+induces+the+formation+of+biphasic+starch+granules+in+amylose-extender+maize+endosperm%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">The defective effect of starch branching enzyme IIb from weak to strong induces the formation of biphasic starch granules in amylose-extender maize endosperm.</a> Plant Molecular Biology. 103 (3), 355-371 (2020).</li>
<li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gradually+decreasing+starch+branching+enzyme+expression+is+responsible+for+the+formation+of+heterogeneous+starch+granules%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Physiol%22%5BJournal%5D)">Gradually decreasing starch branching enzyme expression is responsible for the formation of heterogeneous starch granules.</a> Plant Physiol. 176 (1), 582-595 (2018).</li>
<li>Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dek35+encodes+a+PPR+protein+that+affects+cis-splicing+of+mitochondrial+nad4+intron+1+and+seed+development+in+maize%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Plant%22%5BJournal%5D)">Dek35 encodes a PPR protein that affects cis-splicing of mitochondrial nad4 intron 1 and seed development in maize.</a> Molecular Plant. 10 (3), 427-441 (2017).</li>
<li>Hu, Z. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Seed+structure+characteristics+to+form+ultrahigh+oil+content+in+rapeseed%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Seed structure characteristics to form ultrahigh oil content in rapeseed.</a> PLoS One. 8 (4), 62099(2013).</li>
<li>Huang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maize+VKS1+regulates+mitosis+and+cytokinesis+during+early+endosperm+development%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Cell%22%5BJournal%5D)">Maize VKS1 regulates mitosis and cytokinesis during early endosperm development.</a> Plant Cell. 31 (6), 1238-1256 (2019).</li>
<li>Xu, A., Wei, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comprehensive+comparison+and+applications+of+different+sections+in+investigating+the+microstructure+and+histochemistry+of+cereal+kernels%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Methods%22%5BJournal%5D)">Comprehensive comparison and applications of different sections in investigating the microstructure and histochemistry of cereal kernels.</a> Plant Methods. 16, 8(2020).</li>
<li>Zhao, L., Pan, T., Cai, C., Wang, J., Wei, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+whole+sections+of+mature+cereal+seeds+to+visualize+the+morphology+of+endosperm+cell+and+starch+and+the+distribution+of+storage+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cereal+Science%22%5BJournal%5D)">Application of whole sections of mature cereal seeds to visualize the morphology of endosperm cell and starch and the distribution of storage protein.</a> Journal of Cereal Science. 71, 19-27 (2016).</li>
<li>Zhao, L., Cai, C., Wei, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+image+processing+method+for+investigating+the+morphology+of+cereal+endosperm+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biotech+%26+Histochemistry%22%5BJournal%5D)">An image processing method for investigating the morphology of cereal endosperm cells.</a> Biotech & Histochemistry. 95 (4), 249-261 (2020).</li>
<li>Borisjuk, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Seed+architecture+shapes+embryo+metabolism+in+oilseed+rape%5BTitle%5D)+AND+%22The+Plant+Cell%22%5BJournal%5D)">Seed architecture shapes embryo metabolism in oilseed rape.</a> The Plant Cell. 25 (5), 1625-1640 (2013).</li>
<li>Lott, J. N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+bodies+in+seeds%5BTitle%5D)+AND+%22Nordic+Journal+of+Botany%22%5BJournal%5D)">Protein bodies in seeds.</a> Nordic Journal of Botany. 1, 421-432 (1981).</li>
<li>Jing, Y. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+endosperm+cells+and+starch+granules+in+common+wheat%5BTitle%5D)+AND+%22Cereal+Research+Communications%22%5BJournal%5D)">Development of endosperm cells and starch granules in common wheat.</a> Cereal Research Communications. 42 (3), 514-524 (2014).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Tohumlar gıda, yem ve endüstriyel hammadde için en önemli yenilenebilir kaynak, ve nişasta ve protein gibi depolama malzemeleri açısından zengindir. Hücrelerin morfolojisi ve miktarı ile depolama malzemelerinin içeriği ve konfigürasyonu tohumların ağırlığını ve kalitesini etkiler7,12. Stereoloji ve görüntü analizi teknolojisi bir doku bölgesindeki hücrelerin boyutunu ve miktarını ölçebilse de, pek çok laboratuvarda eksiktir. Parafin ve rezorin bölümleri iki boyut...

Bitki tohumları nişasta ve protein gibi depolama malzemeleri içerir ve insanlar için enerji ve beslenme sağlar. Hücre ve depolama malzemelerinin şekli, boyutu ve miktarı tohumun ağırlığını ve kalitesini belirler. Tohum farklı bölgelerde hücreleri ve depolama malzemeleri önemli ölçüde farklı morfolojileri var, özellikle nişasta dallanma enzimIIbinhibisyonu ile bazı yüksek amylose tahıl bitkileriiçin,2,3. Bu nedenle, tohumun farklı bölgelerindeki hücrelerin ve depolama malzemelerinin morfolojilerinin araştırılması çok önemlidir.
Parafin kesiti tüm tohum büyüklüğündeki bölümü hazırlamak için iyi bir yöntemdir ve tohumun dokuyapısını ve tohum4,5,6farklı bölgelerde depolama malzemesi birikimini sergileyebilir. Ancak, parafin kesitleri genellikle düşük çözünürlükte 6-8 μm kalınlığa sahiptir; bu nedenle hücre ve depolama malzemelerinin morfolojisini net bir şekilde gözlemlemek ve nicel olarak analiz etmek çok zordur. Rezorin kesitleri genellikle 1-2 μm kalınlığında ve yüksek çözünürlüğe sahiptir ve hücre ve depolama malzemelerinin morfolojisini gözlemlemek ve analiz etmek için çok uygundur7. Ancak, rutin rezorin kesit yöntemi, özellikle büyük hacimli ve yüksek nişasta içeriği ne olursa olsun tohumlar için tüm tohum büyüklüğündeki bölümü hazırlamakta güçlük çekmiştir; bu nedenle, tohumun farklı bölgelerindeki hücrelerin ve depolama malzemelerinin morfolojisini gözlemlemenin ve analiz etmenin bir yolu yoktur. LR Beyaz reçin bir akrilik reçine ve düşük viskozite ve güçlü geçirgenlik sergiler, tohumların reçine bölümünü n hazırlanmasında iyi uygulamalara yol açan, özellikle büyük hacimli ve yüksek nişasta içeriği ile tahıl olgun çekirdekleri için. Buna ek olarak, LR Beyaz reçine gömülü örnek açıkça ışık veya floresan mikroskop altında hücrelerin ve depolama malzemelerinin morfolojisi sergilemek için birçok kimyasal boyalar ile kolayca lekeli olabilir7. Bir önceki yazımızda, LR White reçine gömülü olgun tahıl çekirdeklerinin tohum büyüklüğündeki bölümlerini hazırlamak için kuru bir kesit yöntemi bildirmiştik. Yöntem aynı zamanda gelişmekte olan, çimlenmiş ve pişmiş tahıl çekirdeği8tam tohum büyüklüğünde bölüm hazırlayabilirsiniz. Elde edilen tam tohum büyüklüğündeki bölüm mikromorfoloji gözlem ve analizinde, özellikle tohum8,9'unfarklı bölgelerindeki hücre ve depolama malzemelerinin morfoloji farklılıklarının net bir şekilde görüntülenmesi ve nicel olarak analiz edilebilmiştir.
Bu teknik, ışığın mikroskobu kullanılarak tohumun farklı bölgelerindeki doku ların mikro yapısını ve hücrelerin, nişasta granüllerinin ve protein gövdelerinin şekil ve büyüklüğünü gözlemlemek isteyen araştırmacılar için uygundur. Özellikle hücreler, nişasta granülleri ve protein cisimleri sergilemek için boyanmış tam tohum büyüklüğündeki bölümlerin görüntüleri, tohumun farklı bölgelerindeki hücrelerin, nişasta granüllerinin ve protein gövdelerinin morfoloji parametrelerini nicel olarak ölçmek için morfoloji analiz yazılımı ile analiz edilebilir. Teknik uygulanabilirliği ve tam tohum büyüklüğündeki kesit uygulamalarını göstermek amacıyla, bu çalışmada mısır ve yağlı tohum tecavüzünün olgun tohumlarını ve gelişen, çimlenmiş ve pişmiş pirinç çekirdeklerini araştırdık. Protokol dört işlem içerir. Burada, büyük hacimli ve yüksek nişasta içeriği nedeniyle tohum büyüklüğündeki bölümlerin hazırlanmasında en zor olan olgun mısır çekirdeğini, süreçleri adım adım sergilemek için örnek olarak kullanıyoruz.

<table><tbody><tr><td>Asetik asit</td><td>Sangon Biotech (Şangay) Co., Ltd.</td><td></td><td></td>A501931</tr><tr><td>Kompakt cam boyama kavanozu (5 Yerli)</td> <td>Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.</td><td></td><td></td>E678013</tr><tr><td>Coomassie parlak mavi R-250</td><td>Sangon Biotech (Şangay) Co., Ltd.</td><td></td><td></td>A100472</tr><tr><td>Lamel</td><td>Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.</td><td></td><td></td>F518211</tr><tr><td>Çift taraflı bıçak</td><td>Gillette Shanghai Co., Ltd.</td><td>74-S</td><td></td></tr><tr><td>Etanol mutlak</td><td>Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.</td><td></td><td></td>A500737</tr><tr><td>Düzleştirme masası</td><td>Leica</td><td>HI1220</td><td></td></tr><tr><td>Floresan mikroskobu</td><td>Olympus</td><td>BX60</td><td></td></tr><tr><td>Floresan parlatıcı 28</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>910090</td><td></td></tr><tr><td>Cam şeritler</td><td>Leica</td><td>840031</td><td></td></tr><tr><td>Glutaraldehit suda% 50 çözelti</td><td>Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.</td><td></td><td></td>A600875</tr><tr><td>Gliserol</td><td>Sangon Biyoteknoloji (Şangay) Co., Ltd.</td><td></td><td></td>A600232</tr><tr><td>İyot</td><td>Sangon Biyoteknoloji (Şangay) Co., Ltd.</td><td></td><td></td>A500538</tr><tr><td>İzopropanol</td><td>Sangon Biyoteknoloji (Şangay) Co., Ltd.</td><td></td><td></td>A507048</tr><tr><td>Işık mikroskobu</td><td>Olympus</td><td>BX53</td><td></td></tr><tr><td>LR Beyaz reçine</td><td>Agar Bilimsel</td><td>AGR1281A</td><td></td></tr><tr><td>Fırını Şangay</td><td>Jing Hong Laboratuvar Instrument Co., Ltd.</td><td>9023A</td><td></td></tr><tr><td>Potasyum iyodür</td><td>Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.</td><td></td><td></td>A100512</tr><tr><td>Slayt</td><td>Sangon Biyoteknoloji (Şangay) Co., Ltd.</td><td></td><td></td>F518101</tr><tr><td>Cımbız</td><td>Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.</td><td></td><td></td>F519022</tr><tr><td>Sodyum fosfat dibazik dodekahidrat</td><td>Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.</td><td></td><td></td>A607793</tr><tr><td>Sodyum fosfat monobazik dihidrat</td><td>Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.</td><td></td><td></td>A502805</tr><tr><td>Ultramikrotom</td><td>Leica</td><td>EM UC7</td><td></td></tr></tbody></table>

tam tohum lu reişin elde edilmesinde basit bir kuru kesit yöntemi ve uygulamaları

A Simple Dry Sectioning Method for Obtaining Whole-Seed-Sized Resin Section and Its Applications

Tohumun morfolojisi, büyüklüğü ve miktarı, nişasta granülleri ve tohumdaki protein kütleleri tohumun ağırlığını ve kalitesini belirler. Onlar tohum farklı bölgeler arasında önemli ölçüde farklıdır. Hücrelerin, nişasta granüllerinin ve protein gövdelerinin morfolojilerini net bir şekilde görebilmek ve morfoloji parametrelerini nicel olarak doğru analiz edebilmek için tohum büyüklüğünde ki tüm bölüme ihtiyaç vardır. Tohum büyüklüğündeki parafin bölümü tohumlardaki depolama malzemelerinin birikimini araştırabilse de, kalın bölümün düşük çözünürlüğü nedeniyle hücrelerin ve depolama malzemelerinin morfoloji parametrelerini nicel olarak analiz etmek çok zordur. İnce rezorin bölümü yüksek çözünürlüğe sahiptir, ancak rutin rezorin kesit yöntemi büyük hacimli ve yüksek nişasta içeriği ile olgun tohumların tam tohum büyüklüğünde bölümünü hazırlamak için uygun değildir. Bu çalışmada, tohum büyüklüğündeki reişin hazırlanması için basit bir kuru kesit yöntemi sayılmiyoruz. Bu teknik, lr beyaz reçine gömülü, olgun, çimlenmiş ve pişmiş tohumlar, yüksek nişasta içeriği ile büyük tohumlar için bile, çapraz ve uzunlamasına tam tohum ölçekli bölümleri hazırlayabilir. Tüm tohum büyüklüğündeki bölüm floresan parlatıcı 28, iyot ve Coomassie parlak mavi R250 ile özellikle hücrelerin morfolojisi sergilemek için, nişasta granülleri, ve protein organları açıkça, sırasıyla. Elde edilen görüntü, tohumun farklı bölgelerindeki hücrelerin, nişasta granüllerinin ve protein gövdelerinin morfoloji parametrelerini göstermek için nicel olarak analiz edilebilir.

Tam tohum büyüklüğünde bir kesit elde etmek için basit kuru kesit yöntemi LR-beyaz rezorna gömülü tohumun tam tohum büyüklüğünde bir bölümünü hazırlamak için basit bir kuru kesit yöntemi oluşturduk (Şekil 1). Bu yöntem transversal ve boylamsal tam tohum büyüklüğünde 2 μm kalınlığında kesitler hazırlayabilir(Şekil 2-5, EkŞekil 1-4). Örneğin, yağlı tohum tecavüz olgun tohum transversally ve longitu...

Bu teknik, tohumun farklı bölgelerindeki hücrelerin, nişasta granüllerinin ve protein gövdelerinin gözlem ve analizi için tam tohum büyüklüğünde reçine bölümünün hızlı ve basit hazırlanmasına olanak sağlar.

Tam Tohum Lu Reişin Elde Edilmesinde Basit Bir Kuru Kesit Yöntemi ve Uygulamaları

The morphology, size and quantity of cells, starch granules&#160;and protein bodies in seed determine the weight and quality of seed. They are ...

Morfoloji bilimi ve hücrelerin kalitesi, nişasta granülleri ve çekirdekteki protein kütleleri tohumun ağırlığını ve kalitesini belirler. Bu çalışmada, LR White reçine gömülü bütün bir çekirdeğin basit bir popülasyonu olarak sunmakta ve bütün çekirdeklerin basit bir kuru emme yöntemini oluşturmaktadır. Biz iki önemli nedenden dolayı gömülü orta olarak LR Beyaz reçine seçin.İlk olarak, düşük viskozite ve güçlü geçirgenlik, tohumbu güçlü bölümleri hazırlanmasında iyi uygulamalara yol açan, özellikle büyük hacimli ve yüksek nişasta içeriği ile tahıl olgun çekirdekleri için. İkinci olarak, LR Beyaz reçine gömülü örnek floresan mikroskop ile ışık altında örneklerin morfolojisini açıkça sergilemek için birçok kimyasal boya ile kolayca boyanabilir. Hazırlanan kesitler, tüm çekirdeğin ortaya çıkmasında hücreleri, nişasta granüllerini ve protein gövdelerini açıkça sergilemek için özel olarak lekelenebilir ve morfoloji parametreleri de nicel olarak analiz edilebilir.Yöntem çalışmalar içerir. Burada, süreçleri adım adım sergilemek için daha büyük hacimli ve yüksek nişasta içeriğine sahip olgun mısır çekirdeklerini örnek olarak kullanıyoruz. Başlamak için çekirdekleri basit bir şişeye bağlar.Yaklaşık 10 milimetre ekleyin 2.5% fosfat-tamponlu glutaraldehit. bir daha pH 7.2 ve 4 derece santigrat 48 saat boyunca her ikisini de düzeltmek için yerleştirin. Daha sonra bu çekirdekleri çıkarıp 2-3 milimetre kalınlığında uzunlamasına veya transversyel olarak dilimleyin.Keskin bir çift taraflı bıçağa ihtiyacın var. Ve onları 48 saat daha tamir edin. Daha sonra, yaklaşık 10 milimetre ile üç kez numuneleri yıkayın, böylece 0.1 M fosfat tampon, pH 7.2 30 dakika her zaman.Örnekleri adım adım nemlendirmek için, önce %30 etanol sulu çözeltinin yaklaşık 10 milimetrelik kısmını ıslatın ve 10 milimetre ye, yani %50%70%90'ı bir kez ve %100 üç kez ıslatın. Bir numuneye adım adım sızmak için, 10 milimetrelik LR White reşin çözeltisi ile %25%50%75 oranında etanol ile seyreltilmiş ve her seferinde 12 saat boyunca dört derece santigratta %100 iki kez alın. Gömmeden önce, kaideleri numuneler için hazırlamamız gerekir.İki milimetre centrifuge tüp içine saf LR Beyaz reçine 250 mikrolitre ekleyin ve 48 saat boyunca altı derece santigrat polimerize. Daha sonra, art arda saf LR Beyaz reçine 500 mikrolitre ekleyin ve bir kaide ile santrifüj tüpü içine örnek sızma. Anatomik iğne ile örnekleri düzleştirme sonra, 48 saat boyunca bir fırında altı derece santigrat resin koyun.Santrifüj tüpünden gömülü çekirdekleri alın ve keskin bir bıçak kullanarak bir numunenin etrafındaki fazla reçineyi kesin. Rekarn bloğunu mikro ton numune tutucuya yerleştirin ve gereksiz rezorini numunenin yüzeyine ve bıçağın etrafına yerleştirin. Tam bir bölüm oluşturulana kadar numunenin yüzeyini cam bir bıçakla daha da parlata.Şimdi iki mikron kalınlığında bu şaşırtıcı bölümü hazırlamak için zamanı. Dilimlemeden önce, bir bölümün kıvrılmasını önlemek için bıçağın kenarının yaklaşık iki milimetre üzerine küçük bir bakır koyun. Bölüm uzarken, onu desteklemek için bölümün altına bir spoke koyun.Daha sonra, çıkıntısız slayt üzerinde su 100 mikrolitre ekleyin ve dikkatle tedavi ile suya tam ve kırılmamış bölümü aktarın. Isı ve 50 derece santigrat derecede buruşuk bölümü düzeltmek için kuru. Son olarak, iki önemli ipucu dikkat gerekir.İlk olarak, bölüm parçalanırsa veya yırtılırsa, numunenin her reçine sızması için süreyi uzatın. İkinci olarak, bölüm bıçağa paralel bazı çizgiler varsa, örnek bloğu sıkıca kenetleyin. Bölümde bıçak için dikey bazı çizgiler varsa, yeni bir bıçak kullanın.Hücrelerin morfolojisini gözlemlemek için, nişasta granülleri ve protein cisimleri, biz floresan parlatıcı 28, iyot çözeltisi ve Coomassie parlak mavi R250 sırasıyla kesitleri leke olabilir. Diğer özel lekeler için, teklif araştırma temel. Burada örnek olarak nişasta granülleri lekelemek için iyot solüsyonu kullanıyoruz.Bölümü batırmak için 40 mikrolitre iyot çözeltisi ekleyin. Ve bir dakika kavanozda saklayın. Ve sonra bir kapak kol ile örnek kapağı.Ve etrafındaki fazla ajan çözeltisini lekeleyin. Bir CCTV kamera ile donatılmış ışıklı bir mikroskop altında hemen gözlemlemek ve fotoğraf. Morfoloji analiz yazılımı kullanarak farklı bölgelerdeki hücrelerin, nişasta granüllerinin ve protein gövdelerinin yuvarlaklığı, alan, uzun veya kısa erişim ve yuvarlaklığı için fotoğraflanan görüntüleri işleyebilir ve nicel olarak analiz edebiliriz.LR White reçine tüm çekirdek büyüklüğündeki bölümleri korumak için basit bir kuru kesit yöntemi oluşturduk. Yöntem iki mikron ile tüm çekirdeğin enine ve uzunlamasına kesitleri hazırlayabilirsiniz. veya örnekler, yağlı tohum tecavüz olgun bütün tohum enine ve uzunlamasına kesitli olabilir.Daha büyük hacimli olgun bir bütün çekirdek mısır bölümleri de başarıyla hazırlanabilir. Buna ek olarak, gelişmekte olan çekirdek, pişmiş çekirdek ve çimlenmiş çekirdek de yöntemi kullanılarak araştırılabilir. Tüm çekirdeklerin hazırlanan bölümleri aşağıdaki uygulamalara sahiptir.İlk olarak, tohumdoku yapısını gözlemlemek için tüm çekirdek bölümleri kullanılabilir. Örneğin, safranin lekeli yağlı tohum tecavüzü tüm embriyo bölümleri açıkça bir radikal, hiper rahat, iç ve dış tüm çekirdek bölümleri gözlemlemek ve hücrelerin morfolojisi analiz etmek için kullanılabilir gösterebilir. Örneğin, yağlı tohum tecavüz tüm embriyo transversal bölümleri floresan parlatıcı ile boyanmış 28, ve hücre yağları özellikle boyanmış.Tüm embriyoherhangi bir bölgede hücrelerin mikro-morfolojisi yüksek büyütme görüntülenebilir. Parankimal hücrelerin morfoloji parametreleri, morfoloji analiz yazılımı kullanılarak kantitatif olarak analiz edilebilir ve embriyonun çeşitli bölgelerinde bazı farklılıklar göstermektedir. Floresan parlatıcı 28 ile boyanmış tüm çekirdek transversal kesitler de hücrelerin morfolojisi olarak sergilenebilir, ve hücrelerin morfoloji parametreleri endosperm çeşitli bölgelerde farklıdır.tüm çekirdeğin bölümleri nişasta granüllerinin morfolojisini sergilemek için iyot çözeltisi ile boyanabilir, örneğin, iyotla boyanmış mısır çekirdeklerinin transversal ve uzunlamasına bölümleri nişasta granüllerinin morfolojisini açıkça sergileyebilir. Çeşitli bölgelerde nişasta granülleri, endosperm hücrelerinde önemli ölçüde farklı morfoloji, boyut ve miktar gösterir. Nişasta granüllerinin morfolojik parametrelerinin kantitatif analizi, endosperm için farklı bölgelerde önemli ölçüde farklı olduklarını göstermektedir.Bu kesitler protein kütlelerinin morfolojisini gözlemlemek ve analiz etmek için kullanılabilir. Örneğin, nişasta proteini Coomassie parlak mavi R250 kullanılarak mavi lekeli. Yağlı tohum tecavüz tüm embriyo nişasta proteininin mekansal dağılımı düşük büyütme görülebilir, ve mikro yapı yüksek büyütme açıkça sergilenebilir.Buna ek olarak, seçilen bölgelerdeprotein cisimlerinin sayı hata indeksi ve morfoloji parametreleri de nicel olarak analiz edilebilir. Bu teknik, tüm çekirdeklerin reçine bölümlerinin gelişmekte olan ve olgun tohumlardan ilk ve basit hazırlanmasını sağlar. Tüm çekirdeğin doku yapısında kesitsel uygulamalar ve daha sonra hücrelerin morfolojisi araştırın, nişasta granülleri, ve bütün bir çekirdeğin farklı bölgelerinde protein organları.Elde edilen görüntüler, hücrelerin, nişasta granüllerinin ve protein gövdelerinin morfoloji parametrelerini göstermek ve bunları tüm çekirdeğin farklı bölgelerinde karşılaştırmak için nicel olarak analiz edilebilir.

a-simple-dry-sectioning-method-for-obtaining-whole-seed-sized-resin

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu protokol, taramalı elektron mikroskobu, reçine gömülü beyin dokusu, odaklanmış iyon demeti üç boyutlu olarak hazırlanmış ve yansıması nasıl açıklamaktadır.

Odaklı İyon Işın Freze ve Beyin Dokusu Taramalı Elektron Mikroskobu

Burada, büyüme yapılarının genel değerlendirmesi için ahşap örneklerin nasıl örnekleneceğini özetleyen bir protokol sunuyoruz. İyi çoğaltılmış ve yüksek oranda çözülmüş ahşap anatomik ve dendroekolojik veri seti oluşturmak için gerekli makro ve mikroskobik hazırlama ve görselleştirme teknikleri açıklanır.

Modern Ağaç halkası Araştırma A Teknik Perspektif - Dendroekolojik ve Ahşap Anatomik Zorluklar Üstesinden Nasıl

Kristalin selüloz, bitki hücre duvarının önemli bir bileşenidir. Bununla birlikte, hücresel bir çözünürlükte nicelleştirilmesi teknik olarak zordur.  Burada, uzay-zamansal bir çözünürlükte hücre duvarı bileşimi hakkında bilgi elde etmek için polarize ışık teknolojisinin ve kök kesitlerinin kullanımını rapor ediyoruz.

Kristalin Selüloz Birikimin Yüksek Çözünürlüklü Niceleme<em&gt; Arabidopsis</em&gt; Kökler Doku spesifik Hücre Duvarı Değişiklikler Monitör

Bu protokol, inatçı bitki dokuları için yararlı olan basit bir Hibrit-Kesim doku kesitleme yöntemini tanımlar. Kaliteli doku kesitleri, anatomik çalışmalara ve in situ hibridizasyon (ISH) dahil olmak üzere diğer biyolojik çalışmalara olanak tanır.

Hibrid-Cut: Dirençli Bir Bitki Doku Örnekleri Bir Geliştirilmiş Kesit Yöntemi

Burada, kolay ve düşük maliyetli sağlar ve zaman tasarrufu sağlayan bir protokol kimyasal transmisyon elektron mikroskobu için immünohistokimya ön gömme uyumlu uzun süreli koruma sağlayan, akrolein sabitleyici ile primat beyin dokusunun düzeltmek için.

İmmünohistokimya ve elektron mikroskobu Ön gömme için İnsan Olmayan Primat Beyin Dokusu Hazırlanması

Bu çalışmada bir mikroorganizma transmisyon elektron mikroskobu içinde pahalı aletler olmadan seri ultrathin bölümleri elde etmek için güvenilir ve kolay yordamları sunar.

Transmisyon elektron mikroskobu mikroorganizmaların seri Ultrathin bölümler elde etmek için bir yöntem

Burada, parafin kesit geliştirmek için bir protokol mevcut. Bu yöntem kesme ve geleneksel yöntemle gerekli aktarım işlemi önlemek için basit bir termostatik odası kullanarak yüzen birleştirir. Sonuç olarak, verimliliği ve bozulmamış parafin bölüm sayısı büyük ölçüde düzeldi.

Kesme ve kesit için doku parafin gömülü için yüzen yöntemi

Bu protokol, taramalı elektron mikroskopisi kullanılarak endosperm ve nişaste granül morfolojisinin analizi için tahıl tohumlarının enine bölümlerinin (örneğin pirinç) hazırlanmasına izin verir.

Olgun Pirincin Enine Kesiti (Oryza sativa L.) Hareketsizleştirme Desteği Olarak Pipet İpuçlarını Kullanarak Elektron Mikroskopi Görüntülemesini Taramak için Çekirdekler

Bu protokol, mikoheterotrofik bitki örneklerinin toplanması, sabitlenmesi ve sürdürülmesi için ayrıntılı prosedürler sağlamayı, mikorizal mantarlarla çimlenmiş bitki dokularında ve tohumlarda mantar kolonizasyonunu incelemek için tarama ve iletim elektron mikroskobu, ışık, konfokal ve floresan mikroskobu gibi farklı mikroskopi tekniklerini uygulamayı amaçlamaktadır.

Mikoheterotrofik Bitki Dokularında Mantar Kolonizasyonunu Yorumlamak ve Tohumların Simbiyotik Çimlenmesi için Mikroskopi Teknikleri

C3 veC4 yaprak kesitleri arasındaki anatomik farklılıkların değerlendirilmesi, fotosentez verimliliğinin anlaşılmasına yardımcı olur. Bu makale, Triticum aestivum ve Zea mays mahsul türleri için hazırlıktaki uyarılarla birlikte serbest el ve yarı ince yaprak kesitlerinin hazırlanması ve incelenmesini açıklamaktadır.

Triticum aestivum ve Zea mayslarında C3 ve C4 için Yapısal Özelliklerin Değerlendirilmesi Serbest El ve Yarı İnce Kesitler Kullanılarak Fotosentetik Farklılaşma

Öğrenin, LR White reçine gömülü tam mısır tanelerinde hücre, nişasta granülleri ve protein cisimciklerinin morfolojisini incelemek için basit bir kuru kesit yöntemi. Bu teknik, tohum kalitesi ve gelişim biyolojisi araştırmalarında nicel analiz sağlar.

Tam Tohum Lu Reişin Elde Edilmesinde Basit Bir Kuru Kesit Yöntemi ve Uygulamaları

Daha fazla video keşfet