Name: Geçici Bilateral Ortak Karotid Arter Tıkanması sonucu İndüklenen İskemik Retina Yaralanmasının Murine Modeli (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-11-12T15:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 20 s
Description: Öğrenin geçici bilateral ortak karotid arter tıkanması ile farede retinal iskemi modeli oluşturmayı. Bu yöntem iskemik retinopatilerin patofizyolojisini araştırmak ve ilaç taraması yapmak için kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, Eğitim, Kültür, Spor, Bilim ve Teknoloji Bakanlığı'ndan (MEXT) Grant-in-Aid for Scientific Research (KAKENHI) (Toshihide Kurihara'ya 18K09424 ve Yukihiro Miwa'ya 20K18393) tarafından desteklendi.

Burada açıklanan tüm yöntemler Keio Üniversitesi Tıp Fakültesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmıştır.
1. Cerrahi aletlerin ve hayvanların hazırlanması
<ol><li>Cerrahi aletleri otoklavlayın ve% 70 etil alkolde saklayın. Her yeni cerrahi işlemden önce cerrahi aletleri %70 etil alkol kullanarak dikkatlice temizleyin.</li>
	<li>Ameliyattan önce, ameliyat sırasında ve sonrasında steril koşulları korumak için erkek BALB/cAJc1 farelerini (6 haftalık, 26-28 kg) belirli patojensiz (SPF) bir odada hazırlayın.</li>
</ol>2. Geçici bilateral ortak karotis arter tıkanma (tBCCAO)
<ol><li>Daha önceaçıklandığıgibi "MMB" olarak adlandırılan midazolam (40 μg/100 μL), medetomidin (7,5 μg/100 μL) ve butorphanol tartrate (50 μg/100 μL) kombinasyonu ile intraperitoneal enjeksiyon yoluyla bir fareyi anestezi altınaalın. Fare tamamen uyuşturulana kadar farenin gözlerini çarpmamasını önlemek için farenin arka kaplamalarını tutun.<ol>
<li>Tam anesteziyi kontrol etmek için yaygın olarak kullanılan yöntem olan yanıt alıncaya kadar fare baş parmağına sıkıştırarak anestezinin derinliğini yargılayın10. NOT: Farelerin uykuya dalmasına genellikle 5 dakikadan az bir süre gerekir. Genel anestezi için uygun tarifler kurumlar tarafından farklı olabilir.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Anestezi altında gözlerde kuruluğu önlemek için gözlere % 0.1 saflaştırılmış sodyum hyaluronat göz damlası çözeltisi uygulayın.</li>
	<li>Fareyi arkasına yerleştirin ve yapışkan bantlar kullanarak farenin pençelerini sabitleyin.</li>
	<li>Ameliyattan önce %70 etil alkol kullanarak farenin boyun bölgesini dezenfekte edin. NOT: Kürkün ek kupürü, sonraki cilt iltihabına neden olabileceğinden yapılmamıştır11,12.</li>
	<li>Boynun sagittal kesisini bir bıçakla gerçekleştirin (Şekil 1). NOT: Boyun, sternum ve trakea arasındaki orta hatta kesi yapılması gerekir.</li>
	<li>Her iki tükürük bezini de iki forseps kullanarak dikkatlice ayırın ve alttaki CCA'ları görselleştirmek için harekete geçirin.</li>
	<li>Doğru CCA'yı ilgili vagal sinirlerden ve eşlik eden damarlardan yapılarına zarar vermeden dikkatlice izole edin ve CCA'nın altına iki adet 6-0 ipek dikiş yerleştirin. Kan akışını engellemek için iki bağı sıkıca bağlayın (Şekil 1). NOT: İşlem sırasında küçük damarlar zarar görmüş olabilir. Kanama görülürse, CDA'ları net bir şekilde görselleştirmek için silme gereklidir.</li>
	<li>Sol CCA'yı ilgili vagal sinirlerden ve eşlik eden damarlardan yapılarına zarar vermeden dikkatlice bulun ve sol CCA'yı bir kelepçe ile 2 saniye boyunca tıkayın (Şekil 1). NOT: Bir yeri sıkıştırmak için sol CCA'nın altına 6-0 ipek dikiş iğnesi yerleştirilmesi gerekir.</li>
	<li>Sol CCA'nın yeniden açılmasından sonra, boynun dikiş yaraları 6-0 ipek dikiş ile ve bakteriyel enfeksiyonu inhibe etmek için boyuna bir dab antibiyotik (50 μL) uygulayın. NOT: Sol CCA'nın yeniden açılması sırasında arteriyel duvara zarar vermemek için bir kelepçeyi yavaşça çıkarın.</li>
	<li>Farenin derin anesteziden hızlı bir şekilde kurtulmasına yardımcı olmak için fareye intraperitoneal olarak 0,75 mg/kg atipamezole hidroklorür enjekte edin. Fareyi önceden ısıtılmış pedlere sahip bir fare kafesine geri döndürün. NOT: Fare sternal recumbency korumak için yeterli bilinci kazanana kadar farenin başıboş kalmasına izin vermeyin.</li>
	<li>Fare uyandığında ağrının yönetimi için fareye 0,4 mg / kg butorphanol tartrate enjekte edin. NOT: Protokol burada duraklatılabilir. Başarılı tBCCAO için ilk ipucu olarak, farenin göz kapağı sarkması gözlenebilir (Şekil 2).</li>
	<li>Ötenazi için, farelere 3x MMB karışımı enjekte edin ve deneyler için kurban edin.</li>
</ol>3. Genel gözlemler (sağkalım oranları ve göz kapağı sarkması)
<ol><li>Ameliyattan sonra, 0 (ameliyattan sonra), 1, 3 ve 7.</li>
	<li>Göz kapağı sarkması 4 puanlık bir derecelendirme ölçeği ile değerlendirin: 1 = sarkma yok, 2 = hafif sarkıklık (~%50), 3 = şiddetli sarkıklık (%50'nin üzerinde) ve 4 = göz akıntısı ile şiddetli sarkıklık.</li>
</ol>4. Retina kanı perfüzyonu
<ol><li>Fare retina damarlarında kan perfüzyonunun gözlemlenmesi için yaygın olarak kullanılan farenin sol ventrikülüne 200 μL FITC-dektran (25 mg/mL) enjekte edin13,14.</li>
	<li>Dolaşımdan 2 dakika sonra, gözleri enükle edin ve 1 saat boyunca% 4 paraformaldehitte sabitleyin. Retinalar, daha önce15olarak tanımlandığı gibi dikkatlice elde edildi ve düz monte edildi ve floresan mikroskobu ile incelendi.</li>
	<li>Retina bütün montajlarının fotoğraflarını 4x büyütmede çekin ve daha önce açıklanan bir birleştirme çözümleyicisi kullanarak tek bir tanede birleştirin16.</li>
	<li>NIH Fiji/ImageJ yazılımındaki bir gemi analiz aracıyla perfüzyon alanlarını ölçün.</li>
</ol>5. Batı lekesi
<ol><li>TBCCAO'dan 3 ve 6 saat sonra, farelerin gözlerini elde edin ve retinaları izole etmek için hemen soğuk PBS içeren bir Petri kabına aktarın.</li>
	<li>Retinaların izolasyonundan sonra, daha önce açıklandığı gibi batı şişkinliği gerçekleştirin9.</li>
	<li>Hipoksi-indükleyici faktör-1α (HIF-1α; genel bir hipoksi belirteci) ve β-Actin (iç yükleme kontrolü) için bir gecede antikorlarla kuluçkaya yatırın ve ardından HRP konjuge sekonder antikorların inkübasyonu. Sinyalleri chemiluminescence ile görselleştirin.</li>
</ol>6. Nicel PCR (qPCR)
<ol><li>tBCCAO'dan 6, 12 ve 24 saat sonra, daha önce açıklandığı gibi qPCR için elde edilen retinaları işleyin17.</li>
	<li>QPCR'ı gerçek zamanlı PCR sistemi ile gerçekleştirin. Kullanılan astarlar Tablo 1'de listelenmiştir. ΔΔCT yöntemi ile farklı transkript seviyeleri arasındaki kat değişimlerini hesaplayın.</li>
</ol>7. İmmünohistokimya (IHC)
<ol><li>TBCCAO'dan 3 gün sonra farelerin gözlerini elde edin ve parafin içine gömün.</li>
	<li>Göz bölümlerini elde etmek için parafin gömülü gözleri bir mikrotom ile kesin.</li>
	<li>Daha önce açıklandığı gibi 5 μm kalınlığındaki göz bölümlerini renksizleştirin ve lekelendirin13.</li>
	<li>Glial fibril asidik protein (GFAP; retinadaki astrositler ve Müller hücreler için güvenilir bir belirteç) için bir antikor ile kuluçkaya yatır ve ardından Alexa Fluor 555 konjuge sekonder antikor inkübasyonu.</li>
	<li>Retinadaki çekirdeği boyamak için DAPI (4′, 6-diamidino-2-fenylindole) kullanın. Sinyalleri floresan mikroskopla görselleştirin.</li>
	<li>Morfoloji puanlamasını daha önce açıklandığı gibi 4 puanlık bir derecelendirme ölçeğiyle değerlendirin13,18: 0 = sinyal yok, 1 = ganglion hücre katmanında (GCL) birkaç pozitif glial son ayak, 2 = GCL'den dış nükleer katmana (ONL) ulaşan birkaç etiketli süreç ve GCL'den ONL'ye ulaşan en etiketli süreçler.</li>
</ol>8. Elektroretinografi (ERG)
<ol><li>tBCCAO'dan 3 ve 7 gün sonra, daha önce açıklandığı gibi bir Ganzfeld kubbesi, satın alma sistemi ve LED uyarıcılar kullanarak ERG gerçekleştirin9.</li>
	<li>Bir gecede karanlık adaptasyonu takiben, fareleri loş kırmızı ışık altında MMB kombinasyonu ile uyuşturun.</li>
	<li>Gözbebeklerini genişletmek için %0,5 tropikamid ve %0,5 fenilefrin gibi karışık bir çözelti kullanın.</li>
	<li>Aktif elektrotları kontakt lense yerleştirin ve referans elektrotları ağız içine yerleştirin.</li>
	<li>Her hayvanın her iki gözünden ERG yanıtları alın.</li>
	<li>Çeşitli uyaranlarla karanlık adaptasyon altında scotopik yanıtları kaydedin.</li>
	<li>Bir dalganın genliklerini taban çizgisine ve en düşük dalga noktasına kadar ölçün.</li>
	<li>B dalgasının genliklerini bir dalganın en düşük noktasından b dalgasının zirvesine kadar ölçün.</li>
	<li>İşlem sırasında ısı pedlerini kullanarak tüm fareleri sıcak tutun.</li>
</ol>9. Optik tutarlılık tomografisi (OCT)
<ol><li>tBCCAO'dan 2 hafta sonra, daha önce bildirildiği gibi SD-OCT sistemini kullanarak OCTgerçekleştirin8,9.</li>
	<li>Ölçüm için, fareleri% 0.5 tropikamid ve% 0.5 fenilefrin karışımı ile midriasis'e ve MMB karışımı ile genel anesteziye tabi edin.</li>
	<li>Ekvatoral en-face tarama dilimlerinden B tarama görüntüleri elde edin.</li>
	<li>Retinaları optik sinir kafasından 0.2, 0.4 ve 0.6 mm'de inceleyin.</li>
	<li>Retina sinir lifi tabakasından (NFL) dış sınırlayıcı zara (ELM) kadar retina kalınlığını ölçün ve ölçülen değerlerin ortalamasını tek bir farenin retina kalınlığı olarak düşünün.</li>
	<li>Sonuçları örümcek diyagramları olarak çizin.</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Çalışmada, tBCCAO'nun basit dikişler ve bir kelepçe kullanarak retina iskemisini ve eşlik eden retina disfonksiyonu indükleyebileceğini gösterdik. Ayrıca, retina iskemisinin bir fare modelinin geliştirilmesi için mevcut protokolümüzü gösterdik retina iskemisinin geliştirilmesi için önceki protokollere kıyasla daha kolay ve hızlıdır retinal iskemik yaralanma modelleri2,3,7.
Anatomik olarak, sol ve sağ ...

Retina görme fonksiyonu için nörosensör bir dokudur. Görme fonksiyonu için önemli miktarda oksijen gerektiğinden, retina vücuttaki en yüksek oksijen talep eden dokulardan biri olarak bilinir1. Oksijen kan damarlarından iletilirken retina damar hastalıklarına karşı hassastır. Diyabetik retinopati ve retinal kan damarı (damarlar veya arterler) tıkanıklığı gibi çeşitli damar hastalıkları retina iskemisine neden olabilir. Retina iskemisinin patolojik mekanizmalarını araştırmak için retina iskemisinin tekrarlanabilir ve klinik olarak ilgili deneysel modelleri gerekli kabul edilir. Orta serebral arter tıkanıklığı (MCAO) intralüminal filament takılarak deneysel serebral iskemi2,3in vivo kemirgen modellerinin geliştirilmesi için en genel olarak kullanılan yöntemdir. Oftalmik arterin (OpA) MCA'ya yakınlığı nedeniyle, MCAO modelleri retina iskemisinin patofizyolojisini anlamak için aynı anda da kullanılır4,5,6. Retina iskemisi ile birlikte serebral iskemiyi teşvik etmek için, uzun filamentler tipik olarak ortak karotis arterin (CCA) veya dış karotid arterin (ECA) kesisi yoluyla yerleştirilir. Bu yöntemlerin yapılması zordur, ameliyatı tamamlamak için uzun bir süre gerektirir (bir fare için 60 dakikadan fazla) ve ameliyattan sonraki sonuçlarda yüksek farklılıklara yol açar7. Bu endişeleri iyileştirmek için daha iyi bir model geliştirmek önemli olmaya devam ediyor.
Bu çalışmada, farelerde retina iskemisini indük etmek için iğneler ve bir kelepçe ile kısa geçici bilateral CCA tıkanıklığı (tBCCAO) kullandık ve retinadaki iskemik yaralanmaların tipik sonuçlarını analiz ettik. Bu videoda, tBCCAO prosedürünün bir gösterisini vereceğiz.

<table><tbody><tr><td>Anti-anestezi için</td> <td>Atipamezol hidroklorür</td><td>Zenoaq</td><td>Antisedan</td></tr><tr><td>Uygulamalı Biyosistemler 7500 Hızlı</td> Uygulanan <td>Biyosistemler-qPCR</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Butorphanol tartrate</td> için <td>Meiji Seika Pharma</td><td>Vetorphale</td><td>Anestezi</td></tr><tr><td>için BZ-II Analizörü</td><td>KEYENCE-Görüntü</td><td></td> <td>birleştirme için</td></tr><tr><td>BALB/cAJc1</td><td>CLEA-Mouse</td><td></td><td> suş</td></tr> <tr><td>ve beta; -Aktin (8H10D10) Fare mAb</td><td>CST</td><td>3700</td><td>Batı lekesi</td></tr><tr><td>için Kelepçe Forcep</td><td>World Hassas Aletler</td><td>WPI 500451</td><td>Ameliyat için</td></tr><tr><td>Dumont forseps #5</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>11251-10</td><td>Ameliyat için</td></tr><tr><td>DAPI çözümü</td><td>Dojindo</td><td>340-07971</td><td>IHC</td></tr><tr><td>Envisu SD-OCT sistemi</td><td>için Leica</td><td>R4310</td><td>OCT için</td></tr><tr><td>Retinal kan perfüzyonu için</td> <td>FITC-dextran</td><td>Merk</td><td>FD2000S</td></tr><tr><td>Floresan mikroskobu</td><td>KEYENCE</td><td>BZ-9000</td><td>Floresan tespiti için</td></tr><tr><td>Gatifloksasin hidrat</td><td>Senju İlaç</td><td>Gachifuro</td><td>Anti-bakteriyel enfeksiyon için</td></tr><tr><td>GFAP Monoklonal Antikor (2.2B10) IHC</td><td></td><td></td> Isıtma yastığı Marukan için Thermo <td>13-0300</td></tr><tr><td></td><td></td><td>RH-200</td><td>Ameliyat için</td></tr><tr><td>HIF-1 & alfa; (D1S7W) XP Tavşan mAb</td><td>CST</td><td>36169</td><td>Western blot için</td></tr><tr><td>ImageQuant LAS 4000 mini</td><td>GE Healthcare-Kemilüminesans</td><td></td> <td>için</td></tr><tr><td>Midazolam</td><td>Sandoz KK</td><td>SANDOZ</td><td>Anestezi için</td></tr><tr><td>Mikrotom Dokusu-Tek TEC 6</td><td>Sakura-Anestezi</td><td></td><td></td></tr> İğnesi <tr><td>için</td><td>Medetomidin</td><td>Orion Corporation</td><td>Domitor</td></tr> kesiti için <tr><td> tutucu</td><td>Handaya</td><td>HS-2307</td><td>Ameliyat için</td></tr><tr><td>PuREC</td><td>MAYO</td><td></td> <td>Corporation-ERG</td></tr><tr><td>Makas</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>için 91460-11</td><td>Ameliyat için</td></tr><tr><td>Sodyum hyaluronat</td><td>Santen İlaç</td><td>Hyalein</td><td>Göz yağlama için</td></tr><tr><td>Tropicamid / Penilefrin hidroklorür</td><td>Santen İlaç</td><td>Mydrin-P</td><td>Midriyazis için</td></tr><tr><td>Ameliyat için</td> <td>6-0 ipek sütür</td><td>Natsume</td><td>E12-60N2</td></tr></tbody></table>

geçici bilateral ortak karotid arter tıkanması sonucu İndüklenen İskemik retina yaralanmasının murine modeli

A Murine Model of Ischemic Retinal Injury Induced by Transient Bilateral Common Carotid Artery Occlusion

Diyabetik retinopati, retinal damarların veya arterlerin tıkanması ve oküler iskemik sendrom gibi çeşitli damar hastalıkları retina iskemisine yol açabilir. Retina iskemisinin patolojik mekanizmalarını araştırmak için ilgili deneysel modellerin geliştirilmesi gerekir. Anatomik olarak, ana retina kan sağlayan bir damar oftalmik arterdir (OpA) ve OpA yaygın karotis arterin (CCA) iç karotis arterinden kaynaklanır. Bu nedenle, CCA'nın bozulması etkili bir şekilde retina iskemisi neden olabilir. Burada, sağ CCA'yı 6-0 ipek dikişlerle bağlamak ve sol CCA'yı bir kelepçe ile 2 saniye boyunca geçici olarak tıkamak için geçici bilateral ortak karotis arter tıkanıklığı (tBCCAO) ile retina iskemisinin bir fare modelini kurduk ve tBCCAO'nun retina disfonksiyonuna yol açan akut retina iskemisine neden olabileceğini gösterdik. Mevcut yöntem, sadece cerrahi iğneler ve bir kelepçe kullanarak cerrahi aletlere olan güveni azaltır, genellikle orta serebral arter tıkanıklığının fare modellerinde görülen beklenmedik hayvan ölümünü en aza indirmek için tıkanma süresini kısaltır ve yaygın retina iskemik bulgularının tekrarlanabilirliğini korur. Model, farelerde iskemik retinopatilerin patofizyolojisini araştırmak için kullanılabilir ve in vivo ilaç taraması için daha fazla kullanılabilir.

FITC-dektranın 2 dakika boyunca sistemik dolaşımından sonra, sham ile çalışan farelerde ve tBCCAO tarafından işletilen farelerde sol ve sağ retinaların retinal vaskülatları incelendi (Ek Şekil 1). FITC-dektran, sham tarafından işletilen farelerde hem retinalarda hem de tBCCAO tarafından işletilen farelerde sol retinada tamamen görünürken, tBCCAO tarafından işletilen farelerde sağ retinada kısmen tespit edilebilirdi.
TBCCAO'dan sonra göz kapağı sarkması incelendi (<strong class...

Burada, basit dikişler ve bir kelepçe kullanarak geçici bilateral ortak karotis arter tıkanma ile retina iskemisinin bir fare modelini tarif ediyoruz. Bu model, kardiyovasküler anormalliklerin neden olduğu retina iskemisinin patolojik mekanizmalarını anlamak için yararlı olabilir.

Geçici Bilateral Ortak Karotid Arter Tıkanması sonucu İndüklenen İskemik Retina Yaralanmasının Murine Modeli

Diverse vascular diseases such as diabetic retinopathy, occlusion of retinal veins or arteries and ocular ischemic syndrome can lead to retinal ischemia. ...

Bu protokol ile oluşturulan fare modeli, iskemik retinopatilerin patofizyolojisini araştırmak ve in vivo ilaç taraması için kullanılabilir. Mevcut yöntem, çeşitli cerrahi aletlere olan bağımlılığı azaltabilir ve retina iskemisini indüklemek için ameliyat süresini kısaltabilir. Diyabetik retinopati, retinal ven veya arterlerin tıkanması ve oküler iskemik sendrom gibi vasküler hastalıkların patogenezi anlaşılabilir.Prosedürü göstermek, laboratuvarımdan doktora öğrencimiz Deokho Lee olacak. Yukihiro Miwa, DVM, PhD ve laboratuvarımdan yardımcı doçent prosedürü göstermeye yardımcı olacak. Cerrahi işlem öncesinde tüm cerrahi aletleri otoklavlayın ve %70 etil alkol içinde saklayın.Ameliyat öncesinde, sırasında ve sonrasında steril koşulları korumak için erkek BALB/c farelerini patojen içermeyen belirli bir odada hazırlayın. Anestezi altında kuruluğu önlemek için hayvanın gözlerine bir damla% 0.1 saflaştırılmış sodyum hyaluronat göz damlası çözeltisi uygulayın. Fareyi sırtına yerleştirin ve yapışkan bant kullanarak pençelerini sabitleyin.Ameliyattan önce boyun bölgesini %70 etil alkol kullanarak dezenfekte edin. Bir bıçak kullanarak boyunda sagital bir kesi yapın. Tükürük bezlerini iki forseps kullanarak dikkatlice ayırın ve altta yatan CCA'yı görselleştirmek için bir kenara koyun.Sağ CCA'yı ilgili vagal sinirlerden ve eşlik eden damarlardan izole edin ve CCA'nın altına iki adet 6-0 ipek sütür yerleştirin. Kan akışını engellemek için iki ucunu sıkıca bağlayın. CCA'nın net bir şekilde görülebilmesi için işlem sırasında hasarlı küçük damarlardan sızan kanı silin.Eşlik eden damarlara zarar vermeden sol CCA'yı bulun ve klempleme için bir yeri işaretlemek için altına 6-O sütür iğnesi yerleştirin, iki saniye boyunca kapatın. Arteriyel duvara zarar vermemek için kelepçeyi yumuşak bir şekilde çıkarın ve sol CCA'yı yeniden açın. Yeniden açıldıktan sonra boyundaki yaraları ipek bir dikişle dikin.Bittiğinde, bakteriyel enfeksiyonu engellemek için boynuna bir miktar antibiyotik uygulayın. Fareye, derin anesteziden hızlı bir şekilde iyileşmesine yardımcı olmak için intraperitoneal olarak kilogram başına 0.75 miligram atipamezol hidroklorür enjekte edin, ardından fareyi önceden ısıtılmış pedlerle bir kafese geri koyun. Fare uyandığında, ağrı yönetimi için kilogram başına 0.4 miligram butorphanol tartrat enjekte edin.Göz kapağı düşüklüğü tBCCAO sonrası incelendi. Sağ gözde hafif ve şiddetli göz kapağı düşüklüğü görülürken, sol gözde bir fare dışında sarkıklık yoktu. HIF-1 alfa ve beta-aktin için immünoblotlar ve kantitatif analizler, HIF-1 alfa'nın tBCCAO'dan üç ve altı saat sonra sağ retinada stabilize olduğunu gösterdi.Retinal reaktif gliozis tBCCAO'dan üç gün sonra incelendi. Sağ retinada GFAP etiketlemesi için morfoloji skorlarının ortalaması, sahte olarak ameliyat edilen farelerde hem retina hem de tBCCAO ile çalıştırılan farelerde sol retina arasında en yüksekti. Sağ gözdeki b-dalgasının amplitüdleri, karanlığa uyarlanmış ERG'de gösterildiği gibi, tBCCAO'dan üç ve yedi gün sonra azalmıştır.Kantitatif analizlerde ise sağ gözde a dalgası genliğinde herhangi bir değişiklik olmaksızın b dalgası genliğinde azalma görüldü. Sham ve tBCCAO ile ameliyat edilen retinalardaki temsili OKT görüntüleri ve kantitatif analizler, sağ retinada retina kalınlığında bir artış olduğunu ve sol retinada değişiklik olmadığını gösterdi. Bu protokolü denerken, doğru CCA'nın net bir şekilde kapatılması gerektiğini hatırlamak önemlidir.Ve sonra sol CCA'nın sıkı bir şekilde kapatılması gerekiyor. Bu yöntemle, hipertansiyon veya hipoglisemi, insan göz hastalıklarının taklit durumlarını taklit etmek için uygulanabilir. Bu model, yaygın retina iskemisinin sonuçlarını ve retina iskemi mekanizmalarını göstermektedir.

a-murine-model-ischemic-retinal-injury-induced-transient-bilateral

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Farelerde intraluminal orta serebral oklüzyon modeli sunuldu. Serebral infarkt ölçüde bir nörolojik skoru ve cresyl violet boyama, TTC alternatif boyama, paralel birçok ilgi belirteçleri test etmek büyük avantajı sunarak değerlendirilir.

Intraluminar MCAO Mouse Model: kresil Violet Boyama tarafından Serebral İnfarktı Değerlendirilmesi

Bu video, iskemik inmeyi modellemek için yaşlı sıçanlarda ortak karotis arter veya CCA ligasyonu ile kalıcı distal orta serebral arter oklüzyonu veya MCAO gerçekleştirme prosedürünü göstermektedir. Bu, beyne giden kan akışını engelleyerek nöronal ölüme yol açar ve inme mekanizmalarını ve potansiyel tedavileri incelemek için bir model oluşturur.

Bir sıçan modelinde orta serebral ve ortak karotis arter tıkanıklığı yoluyla iskemiyi indüklemek

Serebral perfüzyon izleme iskemik inme modelleri doğruluğunu geliştirmek için gösterilmiştir. Teknik zorluklar sıklıkla serebrovasküler araştırma için bu önemli aracının kullanımını sınırlamak. Bu videoda, optimize edilmiş bir sistem sıçanlarda intraluminal orta serebral arter oklüzyonu sırasında tek veya çoklu-site hemodinamik izleme elde etmek gösterilmiştir.

Intraluminar Orta Serebral Arter Tıkanıklığı ve Sıçan Strok Model Serebral Perfüzyon İzleme için Optimize Sistemi

Inme sonrası beyin miyeloid hücreler karakterizasyonu optik parçalama yöntemi kullanılarak stereolojinin tarafından gerçekleştirilen, ya da beynin bir akım sitometri ile süspansiyonları lökosit olabilir. Her ikisi de iskemik beyin bulundu ana miyeloid hücre alt doğru fenotipik ayrımı gerçekleştirmek için yararlı teknikler vardır.

Geçici veya kalıcı Serebral İskemi Modelinde lökosit alt popülasyonlarının Stereolojik ve Sitometrisi Karakterizasyonu

Silikon kaplı bir sütür kullanılarak orta serebral arterin tıkanmasıyla inen bir fare inme modelini tarif ediyoruz. Protokol, kalıcı oklüzyon veya geçici bir iskemiyi indüklemek için uygulanabilir ve ardından reperfüzyon uygulanabilir.

Enfarktüs Bölgesi Orta Arter Tıkanıklığı Tekniği ve Görselleştirme kullanma Fare İskemik İnme ve İskemi-reperfüzyon indüksiyon

Intraluminal filaman tıkanıklığı orta serebral arter deneysel kontur rodents en sık kullanılan vivo içinde modeldir. Ortak karotid arter onarım izin vermek için başka bir cerrahi yaklaşım burada, reperfüzyon ortak karotid arter ve orta serebral arter bölge tam bir reperfüzyon veren gerçekleştirilir.

Orta serebral arter tıkanıklığı ortak karotid arter onarım ile reperfüzyon farelerde izin

Serebral iskemi-reperfüzyon bir fare modeli kontur Patofizyoloji araştırmak için kuruldu. Klemple sağ orta serebral arter ve şu ortak Karotid arter ligate ve kan akımı iskemi 10-40 dakika sonra geri yükleme.

Serebral iskemi-reperfüzyon iki damar tıkanıklığı fare modeli

Mevcut protokol, serebral damarların anatomik yapısını hasara neden olmadan koruyan bir orta serebral arter oklüzyonu/reperfüzyonu sıçan modelini tanımlar.

Serebral damarların anatomik yapısına zarar vermeden orta serebral arter tıkanıklığı/reperfüzyonunun bir sıçan modeli

Bu protokol, ortak karotis arter yoluyla orta serebral arter oklüzyonu reperfüzyonu için hazırlık sürecini tanımlar.

Orta Serebral Arter Oklüzyonu Reperfüzyonu için Modifiye Bir Model Hazırlığı

Asimetrik bilateral ortak karotis arter stenozunun iğne yöntemi, vasküler kognitif bozukluk ve demans için bir fare modeli oluşturmak için önerilmiştir. Daha önce kurulmuş modellere kıyasla daha uzun vadeli sonuçlarla sonuçlanır ve canlı MRG ile uyumludur. Prosedürü gösteren görsel temsil, ameliyatta ustalaşmak için rehberlik sağlar.

İğne Kılavuzluğunda Asimetrik Bilateral Ortak Karotis Arter Darlığına Dayalı Vasküler Kognitif Bozukluk ve Demans için Bir Fare Modeli

Bu çalışmanın amacı, motor ve mekansal hafıza eksikliklerinin deneysel çalışmalarında uygulanmak üzere sıçanlarda kalıcı, seçici orta beyin arter tıkanması uygulanan kraniektomi uygulanacak tekrarlanabilir bir yöntem oluşturmaktır.

Sıçanlarda Orta Beyin Arterinin Seçici ve Kalıcı Tıkanması: Motor ve Mekansal Hafıza Eksikliklerini İnceleme Deneysel Yaklaşımı

Öğrenin geçici bilateral ortak karotid arter tıkanması ile farede retinal iskemi modeli oluşturmayı. Bu yöntem iskemik retinopatilerin patofizyolojisini araştırmak ve ilaç taraması yapmak için kullanılır.

Geçici Bilateral Ortak Karotid Arter Tıkanması sonucu İndüklenen İskemik Retina Yaralanmasının Murine Modeli

Daha fazla video keşfet