Name: Evcilleştirilmiş Domuz Beyninin Ekstraksiyonu ve Diseksiyonu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-04-25T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 16 s
Description: Öğrenin evcilleştirilmiş domuz beyninin ekstraksiyon ve diseksiyon protokolünü. Bu yöntem, insan beynine benzer yapısıyla nöroanatomi araştırmalarında hassas beyin bölgesi analizi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar, Tarım, Tüketici ve Çevre Bilimleri Bilgi Teknolojisi ve İletişim Hizmetleri Koleji'nden Jim Knoblauch ve Martin-Booth Hodges'ı ses ve video çekme, kaydetme ve düzenleme konusundaki uzmanlıklarından dolayı tanımak istiyor.

Hayvan konularını içeren prosedürler Urbana-Champaign'deki Illinois Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmıştır.
NOT: Ötanaziden önce, domuz telazol bir kombinasyonu ile intramüsküler enjeksiyon ile uyuşturuldu:ketamin:ksilazin (50.0 kiremittamin HCl artı 50.0 mg zolazepam HCl reconstitu 2,50 mL ketamin HCl (100 g/L) ve 2,50 mL ksilazin (100 g/L) ile uygulanır ve 0,06 mg/kg BW'de uygulanır. Uyuşturulduktan sonra domuz, sodyum pentobarbital intradiyak uygulama yoluyla ötenaziye tabi tedavüle edildi (1 mL/5 kg BW'de uygulanan 390 mg/mL). Beyin diseksiyonu için, dokunun istenen analitik prosedürüne göre ötanazi yönteminin seçilmesi önerilir. Ötenazi yöntemi beyne mümkün olduğunca az zarar vermelidir.
1. Domuz beyninin çıkarılması
<ol><li>İnsancıl ötanaziyi takiben, birinci ve ikinci omur (sırasıyla atlas ve eksen) arasında boynun ensesinin üzerinde keserek domuzun kafasını koparın.</li>
	<li>Başı, sivri uçları içerecek şekilde modifiye edilmiş hareketsiz bir tezgah mengenesine sabitleyin. Devam etmeden önce başın tamamen hareketsiz olduğundan emin olun.<ol>
<li>Neşter kullanarak, kafatasının orta çizgisi boyunca başın arka kısmına kadar devam eden bir sagittal kesim yapın.</li>
		<li>Başın arka tarafında ikinci bir (enine) kesim yapın.</li>
		<li>Burun arka ucunda ve gözlerle aynı hizada üçüncü (enine) bir kesim yapın. Kafatasına kolay erişim sağlamak için cildi kafatasından mümkün olduğunca uzağa kesin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Bir kemik testeresi kullanarak, gözlerden kafatası eğriliğinin tepelerine kadar uzanan, orta çizgiye iki ön-arka kesik yanal yapın. Testereyi orta çizgiye doğru büzün ve kafatasına nüfuz edecek kadar derin kesin.<ol>
<li>Yukarıdaki işlemi dik kenarlarda tekrarlayın, kafatasında dikdörtgen bir "pencere" oluşturun.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Bir et kancası kullanarak, kafatasının dikdörtgen bölümünü kurut. Kancayı bölümün köşelerinden birine yerleştirerek başlayın ve kafatası parçasını gevşetmek için yukarı doğru basınç uygulayın. Yanlışlıkla beyin dokusuna nüfuz etmesini önlemek için et kancasını sadece kafatası seviyesine yerleştirmeye özen edin.</li>
	<li>Beyinde herhangi bir meningeal tabaka kalırsa, beyni kesmeden katmanları nazikçe çıkarmak için önps ve künt makas (veya alternatif olarak bir neşter) kullanın.</li>
	<li>Kafatasının arka kısmını açığa çıkaran, başın arka kısmındaki kas ve yağı kesmek için bir neşter kullanın.<ol>
<li>Kafatasının arka kısmı boyunca iki enine kesik yap. Beyin dokusunu kesmemeye dikkat edin.</li>
		<li>Burun üzerine sıkı bir el koyarak başı sabitleyin ve kafatasının arka kısmını çekmek için geriye doğru bir basınç uygulayarak beyincikleri açığa çıkarın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Başı tezgah mengenesinden çıkarın ve cerrahi bir paspasın üzerine yerleştirin.</li>
	<li>Beyni çıkarmak için neşterin kör ucu gibi uzun ince bir alet kullanın. Başı ters çevirin ve beynin yüzeyine zarar vermeden beyni kafatası boşluğundan çıkarmak için hafif bir kepçe hareketi kullanın. NOT: Beyni çıkarmak için kraniyal sinirleri kesmek gerekecektir. Bunu nazikçe yapın ve beyni zorla çıkarmaya çalışmayın. Beyin, kafatasından ve omurgadan düzgün ve tamamen ayrıldığında kendi kendine düşecektir.</li>
</ol>2. Domuz beyninin diseksiyonu
NOT: Diseksiyon işlemleri sırasında görsel bir gösterim olarak beyin atlası veya lif diseksiyon kılavuzu14 kullanılması yararlı olabilir. Diseksiyonlu doku örneklerinin, her numunenin çıkarılmasından sonra projeye özgü ihtiyaçlara göre düzgün bir şekilde depolandığından emin olun (aşağıda daha ayrıntılı olarak açıklanmıştır). Ayrıca, bu videonun amaçları doğrultusunda, gösterilen tüm beyin bölgelerinin sağ yarımküreden parçalandığını, ancak bunun deneysel hedeflere dayanarak laboratuvar başına farklılık gösterebileceğini lütfen unutmayın.
<ol><li>Beyin sapı (ağırlıklı olarak medulla) çıkarmak için, beyincik için bir koronal kesim kaudal yapın.</li>
	<li>Beyinciği çıkarmak için kortekse bir koronal kesim posterior yapın. Bu örnekten beyinciklerin istenen bölgelerini (örneğin vermis, flokülus vb.) izole edin. Bu örneğe beyin sapının herhangi bir bölümünü dahil etmeyin.</li>
	<li>Uzunlamasına yarık boyunca orta sagittal bir kesik yaparak beynin iki yarımküresini ayırın. Kortekste hasar görmesini önlemek için bu kesimi sürekli bir hareket olarak yapın.</li>
	<li>Orta beyinleri çıkarmak için, istenen miktarda dokuyu sadece ventral olarak üstün ve alt kollikulilere ayırın.</li>
	<li>Hipokampusu çıkarmak için, bir neşterin kör ucını korpus callosumunun arka kısmına yerleştirin ve hipokampusu, korpusun callosumunun arka kısmından başlayan bir "J" hareketi kullanarak hafifçe yuvarlayın; tüm hipokampal boynuz 'fasulye şeklindedir'.</li>
	<li>Striatum (kaudat çekirdeği öncelikle gösterilmiştir) korpus callosum'un hemen altında gri ve beyaz madde çizgili bir bölgedir ve hipokampusa ön bölgedir. Neşteri bevel ve bu bölgeyi çıkarın, çıkarıldıktan sonra çizgili doku ortaya çıkarın.</li>
	<li>Medial prefrontal korteksi çıkarmak için, dokuyu frontal girustan korpus callosum'a kadar parçalara ayrıştırarak o bölümün en medial kısmını çıkarın. Medial prefrontal korteksin çıkarılmasından sonra sağ korteks kalmalıdır.</li>
	<li>Talamusu gidermek için, beynin ortasagittal yüzeyinin merkezindeki ampul benzeri yapıyı ve orta beyine rostral'ı çıkarın. Talamus küresel bir şekle sahiptir ve çevredeki dokudan biraz daha koyu görünecektir.</li>
</ol>3. Diseksiyon sonrası
<ol><li>Diseksiyonun tamamlanmasından sonra, doku örneklerini sonraki analizler için uygun şekilde koruyun. Bu adımın atlanması, 20 dakika gibi kısa bir sürede önemli ölçüde otoliz ve bozulmaya neden olacaktır.</li>
	<li>Yapısal analizler yapılacaksa, diseksiyon anında her beyin bölgesini olduğu gibi bırakın veya korumadan önce homojen bir doku örneği oluşturmak için dokuları kıyın. Beyin dokuları için yaygın örnek koruma yöntemleri kriyoprezervasyon ve çapraz bağlama ajanları kullanılarak kimyasal fiksasyoniçerir 15.</li>
	<li>Standart laboratuvar tahlilleri (örneğin, gen veya protein ekspresyot) için, uygun ve uygun maliyetli koruma yöntemleri sağlamak için -80 °C'de uzun süreli depolamadan önce genetik materyali stabilize eden sıvı azot veya çözeltilere dalın.</li>
	<li>Doku yapısını korumak bir öncelikse, doku diseksiyonu öncesinde hayvanın veya ilgi organının perfüzyonu olmadan veya perfüzyonu olmadan, geleneksel fiksasyon yöntemleriyle (örneğin, proteinleri çapraz bağlamak için aldehit bazlı fiksatifler kullanarak) beyin dokularını koruyun.</li>
</ol>

<ol><li>Hughes, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Swine+in+cardiovascular+research%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animal+Science%22%5BJournal%5D)">Swine in cardiovascular research.</a> Laboratory Animal Science. 36 (4), 348-350 (1986).</li>
<li>Yen, J. Anatomy of the Digestive System and Nutritional Physiology. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aYen%2C+J+%22Biology+of+the+Domestic+Pig%22">Biology of the Domestic Pig</a>. , 31-63 (2001).</li>
<li>Pond, W. G. Of Pigs and People. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPond%2C+WG+%22Swine+Nutrition%22">Swine Nutrition</a>. , 3-24 (2001).</li>
<li>Odle, J., Lin, X., Jacobi, S. K., Kim, S. W., Stahl, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Suckling+Piglet+as+an+Agrimedical+Model+for+the+Study+of+Pediatric+Nutrition+and+Metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Animal+Biosciences%22%5BJournal%5D)">The Suckling Piglet as an Agrimedical Model for the Study of Pediatric Nutrition and Metabolism.</a> Annual Review of Animal Biosciences. 2 (1), 419-444 (2014).</li>
<li>Larsen, M. O., Rolin, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+the+G%C3%B6ttingen+minipig+as+a+model+of+diabetes%2C+with+special+focus+on+type+1+diabetes+research%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+Journal%22%5BJournal%5D)">Use of the Göttingen minipig as a model of diabetes, with special focus on type 1 diabetes research.</a> ILAR Journal. 45 (3), 303-313 (2004).</li>
<li>Lehmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+minipig+in+general+toxicology%5BTitle%5D)+AND+%22Scandinavian+Journal+of+Laboratory+Animal+Science%22%5BJournal%5D)">The minipig in general toxicology.</a> Scandinavian Journal of Laboratory Animal Science. 25, 59-62 (1998).</li>
<li>Richer, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sacrococcygeal+and+transsacral+epidural+anesthesia+in+the+laboratory+pig%5BTitle%5D)+AND+%22Surgical+Radiologic+Anatomy%22%5BJournal%5D)">Sacrococcygeal and transsacral epidural anesthesia in the laboratory pig.</a> Surgical Radiologic Anatomy. 20, 431-435 (1998).</li>
<li>Lind, N. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+pigs+in+neuroscience%3A+Modeling+brain+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+and+Biobehavioral+Reviews%22%5BJournal%5D)">The use of pigs in neuroscience: Modeling brain disorders.</a> Neuroscience and Biobehavioral Reviews. 31 (5), 728-751 (2007).</li>
<li>Sauleau, P., Lapouble, E., Val-Laillet, D., Malbert, C. -H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pig+model+in+brain+imaging+and+neurosurgery%5BTitle%5D)+AND+%22Animal%22%5BJournal%5D)">The pig model in brain imaging and neurosurgery.</a> Animal. 3 (8), 1138-1151 (2009).</li>
<li>Dobbing, J., Sands, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+aspects+of+the+brain+growth+spurt%5BTitle%5D)+AND+%22Early+Human+Development%22%5BJournal%5D)">Comparative aspects of the brain growth spurt.</a> Early Human Development. 311, 79-83 (1979).</li>
<li>Aurich, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microsurgical+training+model+with+nonliving+swine+head.+Alternative+for+neurosurgical+education%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Cirurgica+Brasileira%22%5BJournal%5D)">Microsurgical training model with nonliving swine head. Alternative for neurosurgical education.</a> Acta Cirurgica Brasileira. 29 (6), 405-409 (2014).</li>
<li>Bassi, T., Rohrs, E., Fernandez, K., Ornowska, M., Reynolds, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+brain+excision%3A+An+easier+method+to+harvest+the+pig%27s+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Interdisciplinary+Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Direct brain excision: An easier method to harvest the pig's brain.</a> Interdisciplinary Neurosurgery. 14, 37-38 (2018).</li>
<li>Bjarkam, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exposure+of+the+pig+CNS+for+histological+analysis%3A+A+manual+for+decapitation%2C+skull+opening%2C+and+brain+removal%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Exposure of the pig CNS for histological analysis: A manual for decapitation, skull opening, and brain removal.</a> Journal of Visualized Experiments. 122, e55511(2017).</li>
<li>Pascalau, R., Szabo, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibre+dissection+and+sectional+study+of+the+major+porcine+cerebral+white+matter+tracts%5BTitle%5D)+AND+%22Anatomia%2C+Histologia%2C+Embryologia%22%5BJournal%5D)">Fibre dissection and sectional study of the major porcine cerebral white matter tracts.</a> Anatomia, Histologia, Embryologia. 46, 378-390 (2017).</li>
<li>McFadden, W. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perfusion+fixation+in+brain+banking%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathologica+Communications%22%5BJournal%5D)">Perfusion fixation in brain banking: a systematic review.</a> Acta Neuropathologica Communications. 7, 146(2019).</li>
<li>Félix, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stereotaxic+atlas+of+the+pig+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research+Bulletin%22%5BJournal%5D)">Stereotaxic atlas of the pig brain.</a> Brain Research Bulletin. 49, 1(1999).</li>
</ol>

Yazarlar rakip finansal çıkarları olmadığını beyan ederler.

Burada açıklanan teknikler yaklaşık 4 haftalık domuzlar için tasarlanmıştır. Özellikle sonraki biyokimyasal tahliller göz önüne alındığında, beyin dokusu yapısının bütünlüğünün korunmasını sağlamak için domuz insanca ötenaziye uğradıktan hemen sonra bu adımların gerçekleştirilmesi kritik öneme sahiptir. Teknikleri ilk öğrenirken atlas veya fiber16 diseksiyon kılavuzları kullanmak faydalıdır. Deneycinin veri toplama için örnekler alamadan önce birkaç beyin ekstraksiyonu ve diseksiyonu uygulaması ön...

Domuz iyi belgelenmiş ve kardiyovasküler sistemler araştırma için çevrilebilir bir hayvan modeli olarak kabul edilmiştir1, gastrointestinal sistemler2, beslenme3,4, diyabet5, toksikoloji6ve cerrahi teknikler7. Domuzun sinirbilimde kullanımı artmaya başlıyor, çünkü PubMed "domuz beyin hayvanı modeli" anahtar kelimelerini arıyor, 1996-2005'ten önceki 10 yıllık dönem8'dendört kat daha fazla sonuç ve şu anda daha fazla sonuç elde ediyor. Domuz modelinin popülaritesinin genişlemesinin birincil nedeni, insanlarla karşılaştırıldığında beynin büyümesi, yapısı ve işlevindeki benzerlikleridir. İnsan beynine kıyasla, domuz beyni benzer jinek paternleme, damarlanma ve gri ve beyaz maddenin dağılımını sergiler9. Ayrıca, domuz beyni nörogörüntleme prosedürlerinde, potansiyel kaydı çağrıştıran ve nöroşirurji tekniklerinin oluşturulmasında kullanılmıştır8,9. Bununla birlikte, diğer hayvan modellerinin aksine, domuz ve insan, doğum öncesi veya sonrası büyüme fışkırtmasının aksine perinatal beyin büyümesini teşvik ediyor. Doğumda, insan ve domuz beyni yetişkin beyin ağırlığının yaklaşık yüzde 27 ve 25'ini tartar, yetişkin beyin ağırlığının yüzde 12'sini ağırlığındaki sıçan beynine ve yetişkin ağırlığının yüzde 76'sına sahip rhesus maymun beynine kıyasla10.
Domuzun nörobilim için bir hayvan modeli olarak yavaşça benimsenmesinin bir nedeni, birçok araştırmacının bu bağlamda hayvana aşina olmasıdır. Araştırmacılar, alandaki potansiyel kullanımlarının farkında olmayabilir veya böyle bir modeli kullanmak için gereken uygun teknikleri bilmiyor olabilirler. Domuzun biyomedikal ve preklinik bir model olarak kullanılması dikkat ve sinirbilimde kullanım kazandığından, çalışmalar arasında verilerin doğru bir şekilde karşılaştırılmasını sağlamak için standartlaştırılmış doku çıkarma prosedürleri oluşturmak gerekir. Domuz beynini içeren diseksiyon ve cerrahi teknikler başka bir yerde yayınlanmış olmasına rağmen11,12,13, özellikle biyokimyasal tahlillerde kullanılmak üzere domuz beyin dokusunu toplamak için basit ve standartlaştırılmış protokollere ihtiyaç vardır. Bu nedenle, bu videonun amacı, araştırmacıların standartlaştırılmış bir beyin çıkarma ve diseksiyon gerçekleştirmelerine izin vermek için gerekli bilgileri sağlamaktır. Bu video, korteksi ve beyin sapını sağlam tutarken domuz beynini çıkarmak ve daha sonra birkaç kilit beyin bölgesini incelemek için yöntemleri gözden geçirmek için uygun bir tekniği göstermektedir.

<table><tbody><tr><td>#22 #4 Kolları için Neşter Bıçakları</td><td>Ted Pella, inc.</td><td>549-4S-22</td><td></td></tr><tr><td>11 1/2" Satterlee Kemik Testere</td><td>Leica Biosystems</td><td>38DI13425</td><td></td></tr><tr><td>5 1/2" Keski Uçlu Kafatası Kırıcı (Et Kancası)</td><td>Leica Biosystems</td><td>38DI37636</td><td></td></tr><tr><td>5 inç Ağır Hizmet Atölyesi Tezgah Mengenesi</td><td></td><td>Midilli 29050</td><td></td></tr><tr><td>Kasap Bıçağı 25cm</td><td>Victorinox</td><td>5.7403.25</td><td>Kullanmadan önce keskinleştirin</td></tr><tr><td>CM40 Hafif Hizmet Damlası Dövme C Kelepçeleri</td><td>Bessey</td><td>00655BC3120</td><td></td></tr><tr><td>Elmas Bileme Bıçağı Şekillendirici</td><td>Şef ' s Choice</td><td>436-3</td><td></td></tr><tr><td>Shandon Paslanmaz Çelik Neşter Bıçak Sapı #4</td><td>ThermoScientific</td><td>5334</td><td></td></tr><tr><td>Doku Forseps</td><td>Henry Schein</td><td>101-5132</td><td></td></tr><tr><td>Vinil Diseksiyon pedi</td><td>Carolina</td><td>629006</td><td></td></tr></tbody></table>

evcilleştirilmiş domuz beyninin ekstraksiyonu ve diseksiyonu

Extraction and Dissection of the Domesticated Pig Brain

Domuzun klinik öncesi ve çevrilebilir bir hayvan modeli olarak kullanılması, kardiyovasküler sistemleri, gastrointestinal sistemleri ve beslenmeyi araştıran araştırma alanları tarafından iyi belgelenmiş ve kabul edilmiştir ve domuz giderek nörobilimde büyük bir hayvan modeli olarak kullanılmaktadır. Ayrıca, domuz, insanlarda meydana gelenlere benzer beyin büyüme ve gelişme kalıplarını sergilediği için nörogelişim üzerinde çalışmak için kabul edilen bir modeldir. Nörobilimde daha az yaygın bir hayvan modeli olarak, domuzlar üzerindeki cerrahi ve diseksiyon prosedürleri araştırmacılar arasında tanıdık veya iyi uygulanamayabilir. Bu nedenle, tutarlı ekstraksiyon ve diseksiyon yöntemlerini detaylandıran standartlaştırılmış bir görsel protokol domuzla çalışan araştırmacılar için değerli olabilir. Aşağıdaki video, korteks ve beyin sapı sağlam tutarken domuz beynini çıkarma tekniğini sergiler ve beyin sapı, beyincik, orta beyin, hipokampus, striatum, talamus ve medial prefrontal korteks dahil olmak üzere yaygın olarak araştırılan birkaç beyin bölgesini inceleme yöntemlerini gözden geçirir. Bu videonun amacı, araştırmacılara dört haftalık domuz üzerinde sürekli olarak beyin çıkarma ve diseksiyon yapmak için gerekli araçları ve bilgileri sağlamaktır.

Bu bölümde, 4 haftalık bir domuz beyninin doğru çıkarılması ve diseksiyonu sonrasında elde edilen sonuçların örnekleri açıklanmaktadır. Şekil 1, diseksiyon sırasında kılavuz olarak kullanılmak üzere her beyin bölgesinin şeklini özetlemektedir. Beyin sapının bir kısmı beyincik çıkarıldıktan sonra kafatasında kalabilir (Şekil 1B). Bu, beyincik istenen bölgeyi izole ederken çıkarılabilir. Tablo 1, parçalanmış beyin bölgelerinin her biri için ortala...

Bu protokol, domuz beyninin bütünüyle çıkarılması ve sinirbilimde yaygın olarak çalışılan birkaç beyin bölgesinin diseksiyonu tekniğini detaylandırıyor.

Evcilleştirilmiş Domuz Beyninin Ekstraksiyonu ve Diseksiyonu

Use of the pig as a preclinical and translatable animal model has been well-documented and accepted by research fields investigating cardiovascular ...

Aşağıdaki video, domuz beyninin çıkarılması ve diseksiyonunun bir gösterimidir. İşlemden önce veya işlem sırasında bir atlasa veya fiber diseksiyon kılavuzuna başvurmak yararlı olabilir. Atlas ve eksen arasında tek bir temiz kesime izin vereceğinden, büyük bir kasap bıçağı kafa kesme için en iyisidir.Yeni bir konu ile başlamadan önce bıçağın keskin olduğundan emin olun. Kafatasını çıkarmak için bir et kancası kullanılır. Beyni kafatasından çıkarmak için neşter sapı gibi uzun ince bir araç kullanılır.Kafatasını keserken başı sabitlemek için vidalı veya çıkıntılı bir mengene gereklidir. Hayvan, belirlenen protokollere göre insanca ötenazi yapıldıktan sonra aşağıdaki gibi devam eder. Boynun ensesinin hemen üstünde, omuzlar arasında ve başın üstünde kesin.Domuzu emniyete alın ve kafa kesme sırasında yılları yoldan çekin. Cildi kafatasından ayırmak için kesiler yapmak için neşter kullanın. Kafatasının ortasında başın arka kısmına kadar devam eden bir ilk kesik yapın.İkinci enine kesim başın arka tarafında olmalıdır. Üçüncü kesik de bu burun arka kısmından başlayacak ve kafatasına kolay erişim sağlamak için gözlerle satır içi olacaktır. Orta çizgiye kadar arka kesimler için ön cepheye yapmak için bir kemik testeresi kullanın.Testere ile kesim için alanı hafifçe işaretleyerek başlayın ve ardından kafatasından daha az dirençle karşılaşıncaya kadar testereye başlayın. Kafatasının en ince kısmını kestiğinizi garanti edeceğinden, keserken testereyi orta çizgiye doğru hafifçe eğimli bir şekilde eğimli. Kesik kulağa çok yakınsa kafatasını çıkarmak zor olacaktır.Ancak kesik orta çizgiye çok yakınsa, açıklık beyni çıkarmak için çok küçük olacaktır. Dikdörtgen bir pencere oluşturmak için bu işlemi dik kenarlarda tekrarlayın. Pencerenin her köşesinin tamamen kesildiğinden emin olun, böylece kafatasının bir kısmı aşağıdaki beyni ortaya çıkarmak için çıkarılabilir.Daha sonra, dikdörtgen kafatası bölümünü konumuzdan çıkarmak için bir et kancası veya kavisli bir alet kullanın. Kancayı köşelerden birine yerleştirerek ve kafatası kapağını patlatmak için basınç uygulayarak başlayın. Bazı durumlarda, menenjitler beyinde kalacaktır.Ve bu dikkatli bir şekilde meydana gelirse, beyni kesmeden menenjitleri çıkarmak için tokmaklar ve künt makas veya alternatif olarak bir neşter kullanın. Referans olarak beyin, meningeal tabakalar çıkarılmadan önce ve sonra aşağıdaki gibi görünmelidir. Beyincik maruziyetine hazırlanmak için başın arka kısmındaki kas ve yağı kesin.Beyinciliği ortaya çıkarmak için kafatasının arka kısmı boyunca iki enine kesik yapın. Bu kesimleri yaparken açıkta kalan beyni kesmemeye dikkat edin. Kesikler yapıldıktan sonra bir elin buruna, bir elin de kafatasına yerleştirin ve kafatasının arka kısmını başın geri kalanından uzaklaştırmak için geriye doğru basınç uygulayın.Burada vurgulandığı gibi, beyincik kalan menenjeal katmanların arkasına sıkışmıştır. Beyni kafatasından dikkatlice ayırmak için neşter sapı gibi kör bir aletin ucını kullanın, bu süreçte beyne zarar vermemek için dikkatli olun. Beyni kafatasından çıkarmaya yardımcı olmak için başı hafifçe ters çevirin ve kraniyal sinirleri kesmek ve beyni çıkarmak için hafif bir kepçe hareketi kullanın.Bu işlem, beyin ve kraniyal boşluk arasındaki kalan tüm bağlantıları ortadan kaldırmak için sabır ve pratik gerektirir. Domuzun kafasını ters çevirmek bu işlem sırasında yardımcı olabilir. Beyni serbest etmek için künt aletle süpürme hareketlerini kullanmaya devam edin.Burada vurgulandığı gibi, beyincik ve beyin sapı kafatası boşluğuna sıkışmış olarak çıkarılması zor olabilir. Beyincik ve medulla veya beyin sapı çıkarırken dikkatli olun. Beyin kafatasından tamamen koptuğunda kendi kendine düşmelidir.Kafatası boşluğu beynin çıkarılmasından sonra gösterildiği gibi görünmelidir. Beyin bölgesi diseksiyonu için hazırlık olarak, önceden etiketlenmiş kapların organize ve yakın mesafede olduğundan emin olun. Örnek koruma yöntemleri arasında sıvı nitrojendeki çıtçıt dondurma numuneleri veya bunları koruyucu bir çözeltiye batırmak saydır.Kranial boşluktan çıkarıldıktan sonra tüm beyin aşağıdaki gibi görünmelidir. Medulla veya beyin sapı çıkarmak için, beyincik için bir koronal kesilmiş kaudal yapın. Beyinciği çıkarmak için kortekse bir koronal kesim posterior yapın.Yarımküreleri ayırmak için, hasarı önlemek için sürekli bir hareket kullanarak boyuna yarık boyunca orta ölçekli bir kesim yapın. Bu videonun amaçları doğrultusunda sadece sağ yarımküreden diseksiyonlar göstereceğiz. Orta beyni çıkarmak için beynin arka kısmındaki iki şişlik olan üst ve alt kollikuliyi arayın.İstenilen miktarda beyin dokusunu sadece ventral olarak bu bölgelere çıkarın. Hipokampusu çıkarmak için neşter kolunu korpus callosum'un arka kısmına yerleştirin ve hipokampusu hafifçe yuvarlayın. Tüm hipokampus boynuzu fasulye şeklinde olacaktır.Hipokampus, arka korpus callosumundan başlayarak parmağınızı bir j hareketiyle kepçelerken kolayca yuvarlanmalıdır. Striatum veya kaudat çekirdeğini çıkarmak için korpus callosumunun ön kısmını temizleyin. Kaudat çekirdeği, gri ve beyaz renkli ve corpus callosum'un hemen altında bulunan çizgili veya çizgili bölgedir.Neşter sapı açılı ile ağırlıklı olarak kaudat çekirdeğini içeren bu bölgeyi çıkarın. Bu dokuyu çıkardıktan sonra beyin bölgesinin bulunduğu çizgili bir desen görebilmelisiniz. Medial prefrontal korteks diseksiyonlu dokuyu frontal girustan corpus callosum'a çıkarmak için o bölümün en medial kısmını alır.Medial prefrontal korteksin çıkarılmasından sonra sağ korteks kalmalıdır. Talamusu çıkarmak için, orta ölçekli yüzeyin merkezindeki yapı gibi ampulü çıkarın. Talamus belirgin bir küresel şekle sahiptir ve çevredeki dokudan biraz daha koyu görünecektir.Diseksiyon doku örnekleri tamamlandıktan sonra belirli deneysel sonuçlara göre uygun şekilde korunmalıdır. Burada, genç domuzlarla çalışırken beklenen göreceli boyut ve şekil de dahil olmak üzere parçalanmış beyin bölgeleri gösterilmiştir. Bu tekniklere hakim olduktan sonra, tüm beyin çıkarma ve diseksiyon prosedürü denek başına 15 dakikadan az sürecek ve tutarlı sonuçlar üretecektir.

extraction-and-dissection-of-the-domesticated-pig-brain

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Biz TSSB hastalarının karakteristik nöroendokrin fonksiyonlarda kalıcı değişikliklere ve gecikmiş uzun vadeli, abartılı bir korku tepkisi, ortaya travma sonrası stres bozukluğu (TSSB) bir sıçan modelinde tarif. Hayvan modeli ve burada tarif edilen yöntemler, fakat mekanistik çevresel beyaz kan hücrelerindeki biyolojik olan hastalarda ölçülemez beyin çekirdeklerinde biyo, kutu arasında ilişki için yararlıdır.

TSSB, Nöral Hematolojik ve Davranış Bağlantılı Revealing için Hayvan Modelinde Biyobelirteçler

Bu video, bir sıçan yavrusunun beyninden organotipik hipokampal dilim kültürleri hazırlamak için bir yöntem göstermektedir. Hipokampal dilimlerde hücre canlılığını ve büyümesini teşvik etmek için gerekli olan hipokampusun diseksiyonu, dilimleme ve kültür koşullarında yer alan adımları ana hatlarıyla belirtir ve sonuçta organotipik dilim kültürleri oluşturur.

Bir Sıçan Yavrusunun Hipokampusundan Organotipik Dilim Kültürlerinin Hazırlanması

Bu video, nörosfer oluşum sürecini ve bunların hipokampal dokudan genişlemesini göstermektedir. Doğum sonrası fareden gelen nöral kök ve progenitör hücreler girus dokusunu dente eder ve birincil nöroküreler oluşturur, bunlar daha sonra ikincil nöroküreler oluşturmak üzere yeniden tohumlanır.

Hipokampal Dokudan Nörosferlerin Oluşumu ve Genişlemesi

Anesteziye bağlı gelişme nörotoksisitesi (AIDN) araştırmaları, insanlar için geniş ölçüde uygulanmayan kemirgenler üzerine yoğunlaşmıştır. İnsan olmayan primat modelleri daha alakalı, ancak maliyet önleyici ve deney için kullanımı zor. Domuz yavrusu aksine, anestezik nörotoksisite çalışması için klinik açıdan önemli, pratik bir hayvan modeli idealdir.

Anesteziye Bağlı Gelişimsel Nörotoksisite (AIDN) Çalışması İçin Bir Piglet Modelinin Kullanımı: Bir Translasyonel Sinirbilimi Yaklaşımı

Bu kağıt ve öğretim videonun amacı ortaya çıkarmak ve daha sonraki makroskopik ve histolojik analiz için uygun bozulmamış bir halde, domuz beyin ve hipofiz bezi otopsi nasıl kaldırılacağı tanımlamaktır.

Histolojik Analiz Domuz MSS Pozlama: Decapitation, Kafatası Açılış İçin El Kitabı ve Beyin Kaldırma

Bu makalede, düzleştirilmiş teğet bölümleri memeli cortices elde etmek ve histochemical kullanarak kortikal modülleri ve immunohistokimyasal yöntemleri görselleştirmek için detaylı bir metodoloji.

Görselleştirme düzleştirilmiş memeli Cortices'deki kortikal modülleri

Fare beyninin çıkarılması ve taze beyin dokusundan ayrı bölgelerin diseksiyonu için uygulamalı, adım adım, hızlı bir protokol sunuyoruz. Moleküler analiz için beyin bölgelerinin elde edilmesi birçok sinirbilim laboratuvarında rutin hale gelmiştir. Bu beyin bölgeleri, sistem seviyesi analizi için yüksek kaliteli transkriptomik veriler elde etmek için hemen dondurulur.

Fare Beyninin İşlevsel ve Anatomik Olarak Farklı Bölgelere Mikrodiseksiyonu

Bu makale, domuzların sarnıç magnasında doğrudan canül implantasyonu için adım adım bir protokol sunun.<br...

Domuzların Sarnıç Magnasında Doğrudan Kanın İmplantasyonu

Burada, bir minipig modelinde yumuşak subdural elektrot dizilerinin uzun süreli performans ve güvenlik değerlendirmesi için cerrahi yöntem ve araçları, postoperatif manyetik rezonans görüntülemeyi, işitsel korteksin elektrofizyolojisini, implantın elektrokimyasal özelliklerini ve postmortem immünokimyayı açıklayan bir yöntem sunuyoruz.

Minipiglerde Subdural Yumuşak Elektrokortikografi (ECoG) Dizisi İmplantasyonu ve Uzun Süreli Kortikal Kayıt

Bu protokol, 3 aylık bir Danimarka Landrace domuzu üzerinde yüksek hızlı bir pnömatik matkap kullanılarak bir kraniektomi yapılmasını açıklar. Erişim frontal kemikten yapılır ve ventral dura mater ve altta yatan serebral hemisferleri ortaya çıkarır. Bu prosedür, domuz beyninin büyük bir bölümüne erişim sağlar.

Yüksek Hızlı Pnömatik Matkap Kraniektomi ile Domuz Beynine Erişim

Yenidoğan domuz yavrularına uygulanmak üzere genişletilebilir beyin matrisleri inşa etmenin yenilikçi bir yöntemi, koronal veya sagital dilimleri kesmek üzere tanımlanmıştır. Bu bütçe dostu yaklaşım, agaroz jel beyin kalıplama şablonlarıyla oyulmuş akrilik plakalar kullanır, birden fazla türe uygulanır ve beyin büyümesini karşılamak için genişlemeye olanak tanır.

Gelişim Evrelerinde Özelleştirilebilir Genişletilebilir Bir Beyin Matrisi Üretimi

Öğrenin evcilleştirilmiş domuz beyninin ekstraksiyon ve diseksiyon protokolünü. Bu yöntem, insan beynine benzer yapısıyla nöroanatomi araştırmalarında hassas beyin bölgesi analizi sağlar.

Evcilleştirilmiş Domuz Beyninin Ekstraksiyonu ve Diseksiyonu

Daha fazla video keşfet