Name: Floresan Etiketli Sarkom Proteinleri kullanılarak Pluripotent Kök Hücre Türevli Kardiyomiyositlerin Sarkomer Kısaltılması. (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-03-03T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 37 s
Description: Öğrenin, floresan etiketli sarkom proteinleri kullanarak pluripotent kök hücre türevli kardiyomiyositlerde sarkomer kısaltılmasını değerlendirmeyi. Bu yöntem kardiyomiyopati araştırmalarında sarkomer fonksiyonunu görselleştirmeyi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Jichi Tıp Üniversitesi Rejeneratif Tıp Bölümü'ndeki tüm laboratuvar üyelerini yararlı tartışma ve teknik yardım için kabul etmek istiyoruz. Bu çalışma Japonya Tıbbi Araştırma ve Geliştirme Ajansı'nın (AMED) hibeleri ile desteklenmiştir; JP18bm0704012 ve JP20bm0804018), Japonya Bilimi Destekleme Derneği (JSPS; JP19KK0219) ve Japon Dolaşım Topluluğu (Temel Araştırma Hibesi) H.U.

<ol><li>Mensah, G. A., Roth, G. A., Fuster, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Global+Burden+of+Cardiovascular+Diseases+and+Risk+Factors%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+College+of+Cardiology%22%5BJournal%5D)">The Global Burden of Cardiovascular Diseases and Risk Factors.</a> Journal of the American College of Cardiology. 74 (20), 2529-2532 (2019).</li>
<li>Wexler, R. K., Elton, T., Pleister, A., Feldman, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiomyopathy%3A+an+overview%5BTitle%5D)+AND+%22American+Family+Physician%22%5BJournal%5D)">Cardiomyopathy: an overview.</a> American Family Physician. 79 (9), 778-784 (2009).</li>
<li>Parrotta, E. I., Lucchino, V., Scaramuzzino, L., Scalise, S., Cuda, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+Cardiac+Disease+Mechanisms+Using+Induced+Pluripotent+Stem+Cell-Derived+Cardiomyocytes%3A+Progress%2C+Promises+and+Challenges%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Modeling Cardiac Disease Mechanisms Using Induced Pluripotent Stem Cell-Derived Cardiomyocytes: Progress, Promises and Challenges.</a> International Journal of Molecular Sciences. , 30(2020).</li>
<li>Carvajal-Vergara, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-specific+induced+pluripotent+stem-cell-derived+models+of+LEOPARD+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Patient-specific induced pluripotent stem-cell-derived models of LEOPARD syndrome.</a> Nature. 465 (7299), 808-812 (2010).</li>
<li>Lan, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Abnormal+calcium+handling+properties+underlie+familial+hypertrophic+cardiomyopathy+pathology+in+patient-specific+induced+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Abnormal calcium handling properties underlie familial hypertrophic cardiomyopathy pathology in patient-specific induced pluripotent stem cells.</a> Cell Stem Cell. 12 (1), 101-113 (2013).</li>
<li>Kim, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studying+arrhythmogenic+right+ventricular+dysplasia+with+patient-specific+iPSCs%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Studying arrhythmogenic right ventricular dysplasia with patient-specific iPSCs.</a> Nature. 494 (7435), 105-110 (2013).</li>
<li>Gramlich, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antisense-mediated+exon+skipping%3A+a+therapeutic+strategy+for+titin-based+dilated+cardiomyopathy%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Antisense-mediated exon skipping: a therapeutic strategy for titin-based dilated cardiomyopathy.</a> EMBO Molecular Medicine. 7 (5), 562-576 (2015).</li>
<li>Wang, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+the+mitochondrial+cardiomyopathy+of+Barth+syndrome+with+induced+pluripotent+stem+cell+and+heart-on-chip+technologies%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Modeling the mitochondrial cardiomyopathy of Barth syndrome with induced pluripotent stem cell and heart-on-chip technologies.</a> Nature Medicine. 20 (6), 616-623 (2014).</li>
<li>Li, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+Dysfunctions+Contribute+to+Hypertrophic+Cardiomyopathy+in+Patient+iPSC-Derived+Cardiomyocytes+with+MT-RNR2+Mutation%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial Dysfunctions Contribute to Hypertrophic Cardiomyopathy in Patient iPSC-Derived Cardiomyocytes with MT-RNR2 Mutation.</a> Stem Cell Reports. 10 (3), 808-821 (2018).</li>
<li>Cho, G. -S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neonatal+Transplantation+Confers+Maturation+of+PSC-Derived+Cardiomyocytes+Conducive+to+Modeling+Cardiomyopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Neonatal Transplantation Confers Maturation of PSC-Derived Cardiomyocytes Conducive to Modeling Cardiomyopathy.</a> Cell Reports. 18 (2), 571-582 (2017).</li>
<li>Yang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tri-iodo-l-thyronine+promotes+the+maturation+of+human+cardiomyocytes-derived+from+induced+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Molecular+and+Cellular+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Tri-iodo-l-thyronine promotes the maturation of human cardiomyocytes-derived from induced pluripotent stem cells.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 72, 296-304 (2014).</li>
<li>Ribeiro, A. J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-Imaging+Method+to+Assay+the+Contractile+Mechanical+Output+of+Micropatterned+Human+iPSC-Derived+Cardiac+Myocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Multi-Imaging Method to Assay the Contractile Mechanical Output of Micropatterned Human iPSC-Derived Cardiac Myocytes.</a> Circulation Research. 120 (10), 1572-1583 (2017).</li>
<li>Sewanan, L. R., Campbell, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modelling+sarcomeric+cardiomyopathies+with+human+cardiomyocytes+derived+from+induced+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Modelling sarcomeric cardiomyopathies with human cardiomyocytes derived from induced pluripotent stem cells.</a> The Journal of Physiology. 598 (14), 2909-2922 (2020).</li>
<li>Kopljar, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+drug-induced+effects+on+contractile+motion+properties+and+cardiac+biomarkers+in+human+induced+pluripotent+stem+cell-derived+cardiomyocytes%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Chronic drug-induced effects on contractile motion properties and cardiac biomarkers in human induced pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes.</a> British Journal of Pharmacology. 174 (21), 3766-3779 (2017).</li>
<li>Riedl, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lifeact%3A+a+versatile+marker+to+visualize+F-actin%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">Lifeact: a versatile marker to visualize F-actin.</a> Nature Methods. 5 (7), 605-607 (2008).</li>
<li>Ribeiro, A. J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contractility+of+single+cardiomyocytes+differentiated+from+pluripotent+stem+cells+depends+on+physiological+shape+and+substrate+stiffness%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Contractility of single cardiomyocytes differentiated from pluripotent stem cells depends on physiological shape and substrate stiffness.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 112 (41), 12705-12710 (2015).</li>
<li>Roberts, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescent+Gene+Tagging+of+Transcriptionally+Silent+Genes+in+hiPSCs%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Fluorescent Gene Tagging of Transcriptionally Silent Genes in hiPSCs.</a> Stem Cell Reports. 12 (5), 1145-1158 (2019).</li>
<li>Chanthra, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Novel+Fluorescent+Reporter+System+Identifies+Laminin-511%2F521+as+Potent+Regulators+of+Cardiomyocyte+Maturation%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">A Novel Fluorescent Reporter System Identifies Laminin-511/521 as Potent Regulators of Cardiomyocyte Maturation.</a> Scientific Reports. 10 (1), 4249(2020).</li>
<li>Ribeiro, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+cardiomyocyte+show+of+force%3A+A+fluorescent+alpha-actinin+reporter+line+sheds+light+on+human+cardiomyocyte+contractility+versus+substrate+stiffness%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Molecular+and+Cellular+Cardiology%22%5BJournal%5D)">A cardiomyocyte show of force: A fluorescent alpha-actinin reporter line sheds light on human cardiomyocyte contractility versus substrate stiffness.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 141, 54-64 (2020).</li>
<li>Yamanaka, S., Zahanich, I., Wersto, R. P., Boheler, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+Proliferation+of+Monolayer+Cultures+of+Embryonic+Stem+%28ES%29+Cell-Derived+Cardiomyocytes+Following+Acute+Loss+of+Retinoblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Enhanced Proliferation of Monolayer Cultures of Embryonic Stem (ES) Cell-Derived Cardiomyocytes Following Acute Loss of Retinoblastoma.</a> PLoS ONE. 3 (12), 3896(2008).</li>
<li>Miyazaki, T., Isobe, T., Nakatsuji, N., Suemori, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+Adhesion+Culture+of+Human+Pluripotent+Stem+Cells+Using+Laminin+Fragments+in+an+Uncoated+Manner%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Efficient Adhesion Culture of Human Pluripotent Stem Cells Using Laminin Fragments in an Uncoated Manner.</a> Scientific Reports. 7 (1), 41165(2017).</li>
<li>Prasad, K. -M. R., Xu, Y., Yang, Z., Acton, S. T., French, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Robust+cardiomyocyte-specific+gene+expression+following+systemic+injection+of+AAV%3A+in+vivo+gene+delivery+follows+a+Poisson+distribution%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Therapy%22%5BJournal%5D)">Robust cardiomyocyte-specific gene expression following systemic injection of AAV: in vivo gene delivery follows a Poisson distribution.</a> Gene Therapy. 18 (1), 43-52 (2011).</li>
<li>Arakawa, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+evolution+by+hypermutation+and+selection+in+the+B+cell+line+DT40%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Research%22%5BJournal%5D)">Protein evolution by hypermutation and selection in the B cell line DT40.</a> Nucleic Acids Research. 36 (1), e1(2007).</li>
<li>Konno, A., Hirai, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+whole+brain+transduction+by+systemic+infusion+of+minimally+purified+AAV-PHP.eB%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Efficient whole brain transduction by systemic infusion of minimally purified AAV-PHP.eB.</a> Journal of Neuroscience Methods. 346, 108914(2020).</li>
<li>Anzai, T., et al. Generation of Efficient Knock-in Mouse and Human Pluripotent Stem Cells Using CRISPR-Cas9. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAnzai%2C+T+%22Methods+of+Molecular+Biology%22">Methods of Molecular Biology</a>. Yoshida, Y., et al. , (2020).</li>
<li>Ahmed, R. E., Anzai, T., Chanthra, N., Uosaki, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Brief+Review+of+Current+Maturation+Methods+for+Human+Induced+Pluripotent+Stem+Cells-Derived+Cardiomyocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Cell+and+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">A Brief Review of Current Maturation Methods for Human Induced Pluripotent Stem Cells-Derived Cardiomyocytes.</a> Frontiers in Cell and Developmental Biology. 8, 178(2020).</li>
<li>Moretti, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-specific+induced+pluripotent+stem-cell+models+for+long-QT+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Patient-specific induced pluripotent stem-cell models for long-QT syndrome.</a> The New England Journal of Medicine. 363 (15), 1397-1409 (2010).</li>
<li>Flores, L. R., Keeling, M. C., Zhang, X., Sliogeryte, K., Gavara, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lifeact-GFP+alters+F-actin+organization%2C+cellular+morphology+and+biophysical+behaviour%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Lifeact-GFP alters F-actin organization, cellular morphology and biophysical behaviour.</a> Scientific Reports. 9 (1), 3241(2019).</li>
<li>Sparrow, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+Myofilament-Localized+Calcium+Dynamics+in+Adult+Cardiomyocytes+and+the+Effect+of+Hypertrophic+Cardiomyopathy+Mutations%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Measurement of Myofilament-Localized Calcium Dynamics in Adult Cardiomyocytes and the Effect of Hypertrophic Cardiomyopathy Mutations.</a> Circulation Research. 124 (8), 1228-1239 (2019).</li>
</ol>

H.U. bu makaleyle ilgili bir patent başvurusunda bulundu.

PSC-CM'ler, kalp hastalıklarını modellemek ve ilaçların etkilerini test etmek için bir in vitro platform olarak kullanılma potansiyeline sahiptir. Bununla birlikte, PSC-CMs işlevlerini değerlendirmek için önce doğru, birleşik bir yöntem oluşturulmalıdır. Fonksiyonel testlerin çoğu PSC-CM'ler ile çalışır, örneğin elektrofizyoloji, kalsiyum geçici ve metabolizma26ve ilk hasta kaynaklı PSC-CM çalışmalarından biri long-QT sendromuhakkındaydı 27. Bununla birlikte, bir k...

Kardiyovasküler hastalıklar dünya çapında mortalitenin önde gelen nedenidir1 ve kardiyomiyopati kardiyak ilişkili ölümlerin üçüncü nedenini temsil eder2. Kardiyomiyopati, kalp kaslarını etkileyen toplu bir hastalık grubudur. İndüklenen pluripotent stem (iPS) hücrelerinin son gelişmeleri ve iPS hücrelerinin kardiyomiyositlere (PSC-CM) yönelik yönlendirilmiş farklılaşması, kardiyomiyopatinin in vitro modeli olarak hasta genomlu kardiyomiyositlerin incelenmesine kapı açmıştır. Bu hücreler kardiyak hastalıkların patofizyolojisini anlamak, moleküler mekanizmalarını ortaya çıkarmak ve farklı terapötik adayları test etmek için kullanılabilir3. Bu nedenle, hasta kaynaklı iPS hücreleri üretilmiştir (örneğin, hipertrofik kardiyomiyopati [HCM]4,5,aritmojenik sağ ventrikül kardiyomiyopatisi [ARVC]6, genişlemiş kardiyomiyopati [DCM]7ve mitokondriyal ilişkili kardiyomiyopatiler8,9). Kardiyomiyopatinin özelliklerinden biri sarkomların işlev bozukluğu ve bozulması olduğundan, sarkom fonksiyonunu düzgün bir şekilde ölçen geçerli bir araca ihtiyaç vardır.
Sarkom kısaltma, sarkom fonksiyonunu ve hayvan modellerinden ve insanlardan elde edilen yetişkin kardiyomiyositlerin sözleşmeliğini değerlendirmek için en yaygın kullanılan tekniktir. Sarkom kısaltması yapmak için faz kontrastı altında görülebilen iyi gelişmiş sarkomlar gereklidir. Bununla birlikte, PSC-CM'ler in vitro ekran az gelişmiş ve dağınık sarkomları kültüre eder ve bu nedenle, sarkom kısaltmasını düzgün bir şekilde ölçmek için kullanılamaz10. PSC-CM'lerin sözleşmelerinin sözleşmeye uygun şekilde değerlendirilmesindeki bu zorluk, kardiyak fonksiyonları in vitroolarak değerlendirmek için bir platform olarak kullanımlarını engeller. PSC-CM'lerin sözleşmelliğini dolaylı olarak değerlendirmek için atomik kuvvet mikroskopisi, mikro-post dizileri, çekiş kuvveti mikroskopisi ve empedans ölçümleri, bu hücrelerin uyguladıkları hareketin çevreleri üzerindeki etkilerini ölçmek için kullanılmıştır11,12,13. Gerçek hücresel hareketin daha sofistike ve daha az invaziv video-mikroskopi kayıtları (örneğin, SONY'den SI8000) sözleşmelerini alternatif olarak değerlendirmek için kullanılabilir, ancak bu yöntem doğrudan sarkom hareketini ölçmez veya üretimi zorlar kinetik14.
PSC-CM'lerde sarkomer hareketini doğrudan ölçmek için sarkom proteinine floresan etiketleme gibi yeni yaklaşımlar ortaya çıkıyor. Örneğin, Lifeact sarkom hareketi15,16ölçmek için filamentli aktinin (F-actin) etiketlemek için kullanılır. Genetiği değiştirilmiş iPS hücreleri, sarkom proteinlerini (örneğin, α-actinin [ACTN2] ve Myomesin-2 [MYOM2]) floresan protein17 , 18,19ile etiketlemek için başka bir seçenektir.
Bu yazıda Myom2-TagRFP (fare embriyonik sapı [ES] hücreleri) ve ACTN2-mCherry (insan iPS hücreleri) kullanılarak sarkom kısaltmasını ölçmek için zaman atlamalı görüntülemenin nasıl gerçekleştirildiğini açıklıyoruz. Ayrıca desenli bir kültürün sarkom hizalamasını kolaylaştırdığını gösteriyoruz. Ek olarak, hasta kaynaklı iPS hücrelerine yaygın olarak uygulanabilen adeno ilişkili virüsler (AAV' ler) kullanarak sarkom etiketlemesinin alternatif bir yöntemini açıklıyoruz.

<table><tbody><tr><td>1-Tiyogliserol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M6145-25</td><td></td></tr><tr><td>2-Merkaptoetanol (55mM)</td> <td>Thermo Fisher Scientific</td><td>21985-023</td><td></td></tr><tr><td>2-metakriloiloksietil fosforilkolin (MPC) polimeri,</td> <td>NOF Corp.</td><td>LIPIDURE-CM5206</td><td></td></tr><tr><td>2-Propanol</td><td>Fujifilm wako</td><td>166-04836</td><td></td></tr><tr><td>35 mm görüntüleme kabı, polimer lamel ile (&mikro;-Çanak 35 mm, yüksek)</td><td>ibidi</td><td>81156</td><td></td></tr><tr><td>AAVproR Helper Free System (AAV6) (vektörler; pHelper, pRC6, pAAV-CMV-Vector)</td><td>Takara</td><td>6651</td><td></td></tr><tr><td>ACTN2-mCherry (AR12, AR21) hiPSC'ler</td><td>NA</td><td></td><td>610B1 hiPSC hattında ACTN2'nin durdurma kodonunun etrafına TNNT2 lokusunun 3' UTR'sine ve mCherry'ye IRES-puromisine dirençli kaset yerleştirdik, başka bir yerde açıklanan bir yöntemi izleyerek (Anzai, Yöntemler Mol Biol, baskıda)</td></tr><tr><td>B-27 Takviyesi (50X), serumsuz</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>17504-044</td><td></td></tr><tr><td>B-27 Takviyesi, eksi insülin</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A18956-01</td><td></td></tr><tr><td>B27 takviyesi (50X), eksi A Vitamini</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>12587-010</td><td></td></tr><tr><td>Benzonaz (25 U/&mikro; L)</td> <td>Merck Millipore</td><td>70746</td><td></td></tr><tr><td>Blasticidin S Hidroklorür</td><td>Fujifilm wako</td><td>029-18701</td><td></td></tr><tr><td>BMP-4, İnsan, Rekombinant,</td> <td>R & D Sistemleri A.Ş.</td><td>314-BP-010</td><td></td></tr><tr><td>Sığır Serumu Albümini</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A4503-100g</td><td></td></tr><tr><td>C59, Wnt Antagonisti (WntC59)</td> <td>abcam</td><td>ab142216</td><td></td></tr><tr><td>CAD çizim yazılımı,</td> <td>Robert McNeel and Associates, WA, ABD</td><td>Rhinoceros 6.0</td><td></td></tr><tr><td>Santrifüj ultrafiltrasyon ünitesi (100k MWCO), Vivaspin-20</td><td>Sartorius</td><td>VS2042</td><td></td></tr><tr><td>CHIR99021</td><td>Cayman</td><td>13122</td><td></td></tr><tr><td>Krom aşındırıcı</td><td>Nihon Kagaku Sangyo Co., Ltd., Japonya</td><td>N14B</td><td></td></tr><tr><td>Krom maskesi, AZP1350</td><td>Clean Surface Technology Co., Japan</td><td>CBL2506Bu-AZP</td><td></td></tr><tr><td>Dr. GenTLE Yağış Taşıyıcı (20mg/mL Glikojen, 3 M Sodyum Asetat (pH 5.2))Takara</td><td></td> <td>9094</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco' ile kaplanmıştır. s Modifiye Kartal' s Orta (DMEM) - yüksek glikoz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D6429-500</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco' s Modifiye Kartal' s Orta (DMEM) - sodyum piruvat içermeyen yüksek glikoz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D5796</td><td></td></tr><tr><td>Etanol (99.5)</td><td>Fujifilm wako</td><td>057-00456</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Sığır Serumu</td><td>Moregate</td><td>59301104</td><td></td></tr><tr><td>FGF-10, İnsan, Rekombinant, R</td><td>& D Sistemleri A.Ş.</td><td>345-FG-025</td><td></td></tr><tr><td>Fibroblast Büyüme Faktörü (bazik), insan, rekombinant</td><td>Fujifilm wako</td><td>060-04543</td><td></td></tr><tr><td>Domuz derisi tozundan elde edilen jelatin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G1890-100g</td><td></td></tr><tr><td>Glasgow Minimum Temel Orta (GMEM)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G5154-500</td><td></td></tr><tr><td>CAM ALT kültür plakaları</td><td>MatTek</td><td>P24G-1.5-13-F/H</td><td></td></tr><tr><td>Jambon ve Öğr. s F-12</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11765-062</td><td></td></tr><tr><td>Iscove'un Modifiye Dulbecco'nun Ortamı (IMDM)</td> <td>Thermo Fisher Scientific</td><td>12440-061</td><td></td></tr><tr><td>L-alanin-L-glutamin (GlutaMAX Takviyesi, 200mM)</td> <td>Thermo Fisher Scientific</td><td>35050-061</td><td></td></tr><tr><td>L (+) - Askorbik Asit Sodyum Tuzu</td><td>Fujifilm wako</td><td>196-01252</td><td></td></tr><tr><td>Laminin-511 E8 parçası ( LN511-E8, iMatrix-511)</td><td>Nippi</td><td>892012</td><td></td></tr><tr><td>Maske hizalayıcı</td><td>Union Optical Co., Ltd., Japonya</td><td>PEM-800</td><td></td></tr><tr><td>Maskesiz litografi aracı</td><td>NanoSystem Solutions, Inc., Japonya</td><td>D-Light DL-1000</td><td></td></tr><tr><td>MEM Esansiyel Olmayan Amino Asit Çözeltisi (100X)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11140-050</td><td></td></tr><tr><td>Millex-HV Şırınga Filtre Ünitesi, 0.45 &; m, PVDF (0.45-&mikro; m filtresi)</td><td>Merck Millipore</td><td>SLHVR33RS</td><td></td></tr><tr><td>Myom2-RFP (SMM18)</td><td>NA</td><td></td><td>Önceki makalemizde geliştirilmiştir (Chanthra, Sci Rep, 2020)</td></tr><tr><td>N-2 Takviyesi (100X)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>17502-048</td><td></td></tr><tr><td>ORCA-Flash4.0 V3 dijital CMOS kamera</td><td>Hamamatsu</td><td>C13440-20CU</td><td></td></tr><tr><td>PD0325901</td><td>Stemgent</td><td>04-0006-10</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin-Streptomisin (10.000 U/mL)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Petri kabı</td><td>Sansei medical co. Ltd</td><td>01-004</td><td></td></tr><tr><td>Fenol / Kloroform / İzoamil alkol (25: 24: 1)</td> <td>Nippon Gene</td><td>311-90151</td><td></td></tr><tr><td>Polidimetilsiloksan (PDMS) elastomer</td><td>Dow Corning Corp., MI, ABD</td><td>SILPOT 184</td><td></td></tr><tr><td>polietilenimin MAX (MW. 40.000)</td> <td>Polibilim</td><td>24765-1</td><td></td></tr><tr><td>Pozitif fotorezist geliştiricisi</td><td>Tokyo Ohka Kogyo Co. , Ltd., Japonya</td><td>NMD-3</td><td></td></tr><tr><td>PowerUp SYBR Green Master Mix</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A25742</td><td></td></tr><tr><td>Proteinaz K</td><td>Takara</td><td>9034</td><td></td></tr><tr><td>Puromisin Dihidroklorür</td><td>Fujifilm wako</td><td>166-23153</td><td></td></tr><tr><td>Rekombinant İnsan / Fare / Sıçan Aktivin Bir Protein R</td><td>& D Sistemleri A.Ş.</td><td>338-AC-050</td><td></td></tr><tr><td>Rekombinant tripsin benzeri proteaz (rTripsin; TrypLE ekspres)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>12604-039</td><td></td></tr><tr><td>RPMI1640 Orta</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11875-119</td><td></td></tr><tr><td>Silikon gofret</td><td>Matsuzaki Seisakusyo Co., Ltd., Japonya</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum Piruvat (100 mM)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11360-070</td><td></td></tr><tr><td>Spin-coater</td><td>Mikasa Co., Ltd., Japonya</td><td>MS-A100</td><td></td></tr><tr><td>Eğirme konfokal mikroskopi</td><td>Oxford Instruments</td><td>Andor Dragonfly İplik Disk Sistemi</td><td></td></tr><tr><td>StemSure LIF, Fare, rekombinant, Çözelti (10^6U)</td><td>Fujifilm wako</td><td>195-16053</td><td></td></tr><tr><td>SU-8 3010</td><td>Kayaku Advanced Materials, Inc., MA, ABD</td><td>SU-8 3010</td><td></td></tr><tr><td>SU-8 geliştirici</td><td>Kayaku Advanced Materials, Inc., MA, ABD</td><td>SU-8 geliştirici</td><td></td></tr><tr><td>Tris-EDTA</td><td>Nippon Gen</td><td>314-90021</td><td></td></tr><tr><td>Vasküler Endotelyal Büyüme Faktörü-A165 (VEGF), İnsan, rekombinant</td><td>Fujifilm wako</td><td>226-01781</td><td></td></tr></tbody></table>

floresan etiketli sarkom proteinleri kullanılarak pluripotent kök hücre türevli kardiyomiyositlerin sarkomer kısaltılması.

Sarcomere Shortening of Pluripotent Stem Cell-Derived Cardiomyocytes using Fluorescent-Tagged Sarcomere Proteins.

Pluripotent kök hücre türevli kardiyomiyositler (PSC-CM) hem embriyonik hem de indüklenmiş pluripotent kök (ES/iPS) hücrelerinden üretilebilir. Bu hücreler kardiyak hastalık modellemesi için umut verici kaynaklar sağlar. Kardiyomiyopatiler için sarkom kısaltma, yetişkin kardiyomiyositlerle hastalık fenotiplerini incelemek için kullanılan standart fizyolojik değerlendirmelerden biridir. Bununla birlikte, mevcut yöntemler PSC-CM'lerin sözleşmelliğini değerlendirmek için uygun değildir, çünkü bu hücreler faz kontrastlı mikroskopi altında görünmeyen az gelişmiş sarkomlara sahiptir. Bu sorunu gidermek ve PSC-CM'ler ile sarkom kısaltması yapmak için floresan etiketli sarkomere proteinleri ve floresan canlı görüntüleme kullanılmıştır. İnce Z hatları ve bir M-hattı sırasıyla her iki uçta ve bir sarkomun merkezinde yer almaktadır. Z-line proteinler — α-Actinin (ACTN2), Teletonin (TCAP) ve aksin ilişkili LIM proteini (PDLIM3) — ve bir M-line protein — Myomesin-2 (Myom2) — floresan proteinlerle etiketlendi. Bu etiketli proteinler endojen alellerden knock-in olarak veya adeno ilişkili virüslerden (AAV' ler) ifade edilebilir. Burada fare ve insan pluripotent kök hücrelerini kardiyomiyositlere ayırt etme, AAV üretme, canlı görüntüleme yapma ve analiz etme yöntemlerini tanıtıyoruz. Ayrıca, floresan etiketli proteinlerle sarkom kısaltmasının analizini kolaylaştıran PSC-CM'lerin desenli kültürü için polidimetilsiloksan (PDMS) pulları üretme yöntemlerini de açıklıyoruz. Sarkom kısaltmasını değerlendirmek için, dayak hücrelerinin hızlandırılmış görüntüleri elektriksel uyarım (0,5-1 Hz) altında yüksek kare hızında (saniyede 50-100 kare) kaydedildi. Hücre kasılması boyunca sarkom uzunluğunu analiz etmek için, kaydedilen zaman atlamalı görüntüler ImageJ / Fiji için bir eklenti olan SarcOptiM'e tabi tutuldu. Stratejimiz, PSC-CM'lerdeki kardiyak hastalık fenotiplerini araştırmak için basit bir platform sağlar.

Darbeli PSC-CMs muhabir hatları kullanılarak sarkom kısaltması ölçülüyor. Sarkom kısaltmayı ölçmek için sarkom etiketli PSC-CM'ler kullanıldı. Hatlar myom2-RFP ve ACTN2-mCherry'yi endojen lociden ifade eder. TagRFP Myom2'yeeklendi , M-hattına lokalize olan M-proteinleri kodlarken, mCherry ACTN2'ye,Z-line18,25'eyerelleştiren α-Actinin kodlamasına girildi. Şekil 1 ve 2 ve F...

Bu yöntem, floresan etiketli sarkomere proteinleri ile pluripotent kök hücre türevi kardiyomiyositler kullanarak sarkomere kısaltmasını incelemek için kullanılabilir.

Floresan Etiketli Sarkom Proteinleri kullanılarak Pluripotent Kök Hücre Türevli Kardiyomiyositlerin Sarkomer Kısaltılması.

Pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes (PSC-CMs) can be produced from both embryonic and induced pluripotent stem (ES/iPS) cells. These cells ...

Pluripotent kök hücre türevi kardiyomiyositlerde sarkomer fonksiyonunu az gelişmiş ve dağınık sarkomerleri nedeniyle değerlendirmek zordur. Floresan etiketli sarkom proteinlerini kullanarak artık sarkom kısaltmaya erişebiliriz. Sarkomları görselleştirebilir ve kök hücreden türetilmiş kardiyomiyositler ve floresan etiketli sarkomere proteinleri kullanarak in vitro işlevlerini değerlendirebiliriz.AAV tabanlı transdüksiyon kullanarak, yöntemi herhangi bir hasta kaynaklı indüklenmiş pluripotent kök hücreye genişletebiliriz. Bu yöntem kardiyomiyopati tedavisinin gelişimine genişletilebilir, çünkü hastalığa bağlı sarkom disfonksiyon in vitro'yu doğrudan değerlendirmek için kullanılabilir. Bu yöntem pediatrik kardiyoloji çalışması da dahil olmak üzere kardiyoloji alanında yararlıdır.Bununla birlikte, miyopati gibi iskelet kas disfonksiyonu çalışmasına da uygulanabilir. Diferansiyon indüksiyonunun eksi dört gününde, PBS'de 37 santigrat derecede 30 dakikalık bir inkübasyon ve% 5 karbondioksit için seyreltilmiş santimetrekare başına 0,5 mikrogram laminin-511 E8 ile altı kuyulu bir plakayı kaplar. Kuluçkanın sonuna yaklaşırken, insan kaynaklı pluripotent kök hücreleri rekombinant tripsin ile 37 santigrat derecede üç dakika boyunca tedavi edin.Hücreler ayrıldığında, hücreleri sayım için% 10 FBS ile desteklenmiş ortama hasat edin ve hücreleri santrifüjlemeden sonra laminin-511 E8 ve ROCK inhibitörü ile desteklenmiş iki mililitre AK02N ortamı başına 1,25 çarpı 10'da beşinci hücrelere yeniden biriktirin. Daha sonra, altı kuyu plakasının her kuyusundan kaplama çözeltisini epire edin ve her kuyuya iki mililitre hücre tohumlayın. Plakayı hücre kültürü inkübatörüne döndürün.Dört gün sonra, hücreler% 80 izdiah eder. Farklılaşmayı teşvik etmek için kuyu başına GSK-3 inhibitörü ile desteklenmiş insülin ortamı olmadan her kuyudaki süpernatantı iki mililitre RPMI artı B27 ile değiştirin. İki günlük farklılaşmadan sonra, iyi başına kirpi inhibitörü ile desteklenmiş insülin ortamı olmadan ortamı iki mililitre RPMI artı B27 ile hafifçe değiştirin.Hücreler %100 konfluense ulaşmalıydı. Farklılaşmanın dördüncü gününde, süpernatantları kuyu başına insülin olmadan iki mililitre RPMI artı B27 ile hafifçe değiştirin. Hücreler yüksek yoğunlukta kalmalı ve bazıları yüzmeye başlamış olabilir.Farkların yedinci ve dokuzuncu gününde, her kuyudaki süpernatantı iki mililitre RPMI artı B27 ile seçici pluripotent kök hücre türevli kardiyomiyosit kültürü için püromisitin ile desteklenmiş insülin ile değiştirin. Bu noktada kültürler içinde dayak hücreleri gözlemlenmelidir. Desenli pluripotent kök hücre türevli kardiyomiyosit kültürünü ayarlamak için, önce özel yapım PDMS damgasının yüzeyindeki tozları temizlemek için ondalık bant kullanın ve damgayı kısaca% 70 etanol içine batırın.Etanol'ü damga yüzeyinden çıkarmak için bir hava tozlayıcı kullanın ve yüzeyi% 0,5 MPC polimer ve etanolden beş ila 10 mikrolitre ile muamele edin. Polimer tamamen kuruduğunda, damgayı 35 milimetrelik bir görüntüleme kabındaki polimer kapak kapağına yerleştirin ve damgaya bir ağırlık yerleştirin. 10 dakika sonra, desenin kapak kılıfına aktarıldığını onaylamak için hafif bir mikroskop kullanın ve kabı ve örtü kapağı pbs ile iki kez yıkayın.İkinci yıkamadan sonra, kapak sapını oda sıcaklığında iki ila dört saatlik bir inkübasyon için% 0,1 jelatin ile seyreltilmiş santimetrekare laminin-511 E8 santimetrekare başına 0,5 ila bir mikrogramla kaplayın. Farklılaşmanın 10. gününde, hücreleri PBS ile iki kez yıkayın, ardından 37 santigrat derecede üç ila beş dakika boyunca kuyu başına bir mililitre rekombinant tripsin ile tedavi edin. Saydıktan sonra, hücreleri 2,5 ila beş çarpı 10'da RPMI artı B27 mililitresi başına beşinci hücrelere puromycin konsantrasyonu ile desteklenmiş insülin ile yeniden depolayın ve 37 santigrat derecede bir gecede inkübasyon için bir mililitre hücreyi tabağa tohumlayın.Ertesi sabah, süpernatantı taze RPMI artı B27 ile puromycin ile desteklenmiş insülinle değiştirin ve hücreleri hücre kültürü inkübatörüne geri döndürün, görüntüleme için 21 ila 28 gün arasında haftada iki ila üç kez ortayı yenileyin. PCCSM kültürlerinde sarkom kısaltmasının hızlandırılmış görüntülemesi için, floresan konfokal mikroskobun 100 kat objektif lensine yağ uygulayın ve ilgili yazılımda canlı görüntüleme koşullarını seçin. İyi temsili veriler elde etmek için en yüksek kare hızını seçin, deklanşörü açılacak şekilde ayarlayın ve zaman atlamalı görüntüleme sırasında görüntüler arasında en kısa aralıkları elde etmek için alım alanının bir mahsulüne dörte dört binning uygulayın.Hücrelerin dayak oranı düşükse, hücreleri elektrik alanı stimülasyonu ile uyandırın ve görüntüleme sırasında görüntülenen alanın odakta kalmasına dikkat ederek zaman atlamalı kaydı başlatın. Görüntüleme süresinin sonunda, zaman atlamalı görüntüleri uygun bir klasöre kaydedin. Zaman atlamalı görüntüleri analiz etmek için ImageJ'e bir dizi zaman atlamalı görüntü açın ve sarkom deseni net bir şekilde gözlemleninceye kadar görüntülerin parlaklığını ve kontrastını ayarlayın.Diğer Araçlar menüsünde SarcOptiM'i seçin ve programı kalibre etmek için yönergeleri kullanmak için Control Shift P'ye ve araç çubuğundaki bir mikron düğmesine basın. Daha sonra sarkom kısaltmasını ölçmek için kullanılacak sarkanın bölgesi boyunca bir çizgi çizin ve sarkom kısaltma analizine başlamak için Tek Hücreli AVI'yi tıklayın. Sarkom etiketli, desenli pluripotent kök hücre türevi kardiyomiyositlerin zaman atlamalı görüntülemesi, farklı zaman noktalarında sarkom kısaltmasını ölçmek için kullanılabilir.Tipik olarak desenli pluripotent kök hücre türevi kardiyomiyosit kültürlerinde gözlenen sarkom disorganizasyonunun üstesinden gelmek için, desenli olmayan bir alanda kültürlenen hücrelere kıyasla uzun bir hücre şeklini ve daha düzenli bir sarkom desenini destekleyen çizgili bir desende desenli pluripotent kök hücre türevi kardiyomiyositleri kültüre etmek için belirli PDMS pulları kullanılabilir. Desenli kültürler ayrıca daha iyi bir hücre kasılmasını teşvik eder ve desen olmayan kültürlü hücrelere kıyasla pürüzsüz bir sarkom uzunluğu profili sağlar. AAV-transdüklenmiş desen pluripotent kök hücre türevli kardiyomiyositler, transdüksiyon sonrası üç gün kadar erken bir zamanda desenli pluripotent kök hücre türevi kardiyomiyositler boyunca sarkolerik GFP sinyallerini ifade eder ve sarkode kasılma profillerini ölçmek için de kullanılabilir.Ayrıca, transdüksiyon sırasında blastisidin dirençli genin eklenmesi, desenli pluripotent kök hücre türevi kardiyomiyosit seçimini% 90'ın üzerinde bir saflığa kolaylaştırmak için de kullanılabilir Daha kolay ve daha kaliteli bir görüntü analizini kolaylaştırmak için, doğrusal olarak hareket eden sarkomlara sahip bir alanın tanımlanması ve en yüksek kare hızında görüntü elde edilmesi esastır. Bu yöntemi kullanarak, hastalığa özgü, hasta kaynaklı iPS hücrelerinden elde edilen laboratuvar kardiyomiyositinde sarkom disfonksiyonunu incelemek için sarkom proteinlerinde olgunlaşmanın rolünü değerlendirebiliriz.

sarcomere-shortening-pluripotent-stem-cell-derived-cardiomyocytes

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Yetişkin, kardiyak miyositler hayvan kalpleri izole edilebilir ve birkaç gün kültüre temel hücrelerdir. Bu kültür süre içinde adenoviral gen transferi, genetik olarak kodlanmış biyosensörler (GEBs) ya da floresan füzyon proteinleri ifade etmek için kullanılır. Her iki yaklaşım konfokal mikroskobi ile hücresel soruşturma izin verir.

Konfokal Görüntüleme İzolasyon ve Yetişkin kardiyak miyositler Genetik Manipülasyon

Pluripotent kök hücreler, embriyonik veya uyarılmış pluripotent kök (iPS) hücreleri ya, kardiyomiyositler dahil olmak üzere insan farklılaşmış hücrelerin, değerli bir kaynak oluşturmaktadır. Burada, bir embriyoid organları tabanlı protokol ile fonksiyonel insan kardiyomiyositlerin elde etmek için bunları nasıl kullanacağınızı gösteren, iPS hücrelerin kalp indüksiyon üzerinde durulacak.

İnsan kardiyomiyositleri Üretimi: Besleyici-ücretsiz İnsan Bağlı Pluripotent Kök Hücre A Farklılaşma Protokolü

Makale verimli seçici referans belirteçlerinin analizi nüfusun homojenliği ve kimliğini değerlendirmek için flow sitometri ile takip Wnt yolu, modüle göre kardiyomiyositlere insan pluripotent kök hücreleri ayırt etmek için ayrıntılı yöntem anlatılmaktadır.

Sitometrisi ile Yüksek Verim kardiyomiyositlerde İnsan pluripotent kök hücrelerin Farklılaşma ve Karakterizasyonu

Konjenital kalp kusurlarına yol açan mutasyonlar, gelişim sırasında kardiyak yapının in vivo araştırılmasından yararlanır, ancak fare embriyonik kalbindeki yüksek çözünürlüklü yapısal çalışmalar teknik olarak zordur. Burada, gelişmekte olan fare kalbindeki kardiyomiyosite özgü yapıları değerlendirmek için sağlam bir immünofloresan ve görüntü analizi yöntemi sunuyoruz.

Embriyonik Fare Heart Immunofluorescence kullanarak kardiyomiyosit Geliştirme Analizi

Kardiyomiyositlerde hücre bölünmesini hücre döngüsü varyasyonlarından ayırt etmek için, iki transgenik fare hattı kullanarak protokoller sunuyoruz: kardiyomiyosit çekirdeklerinin kesin olarak tanımlanması için Myh6-H2B-mCh transgenik fareler ve hücre bölünmesini hücre döngüsü varyasyonlarından ayırt etmek için CAG-eGFP-anilin fareleri.

Doğum sonrası kardiyomiyositlerde Hücre Döngüsü Varyasyonları görselleştirme ve Çekirdeklenme Belirlenmesi

Bu el yazması, Gata4, Hand2, Mef2c ve Tbx5'in retrovirüs aracılı bir iletimini kullanarak çeşitli yeniden programlanmış kardiyak alt tiplerin oluşturulması ve ölçülmesi için adım adım bir protokolü açıklar.

Fare embriyonik fibroblastlar transkripsiyon faktör aracılı yeniden programlanması sonra kardiyomiyosit alt tiplerini değerlendirilmesi

Hücre içi kalsiyum geri dönüşüm cardiomyocytes sistolik ve diyastolik fonksiyon yönetmelikte kritik bir rol oynamaktadır. Burada, sarcoplasmic retikulum Ca2 + rezerv ve diyastolik kalsiyum kaldırma cardiomyocytes işlevinde bir kalsiyum görüntüleme sistemi tarafından değerlendirmek için bir protokol açıklayın.

Sarcoplasmic retikulum kalsiyum koruma ve hücre içi diyastolik kalsiyum kaldırma izole Ventriküler Cardiomyocytes olarak değerlendirilmesi

Burada özellikle ventriküler benzeri indüklenmiş pluripotent kök hücre kaynaklı cardiomyocytes içinde optik görüntü Aksiyon potansiyelleri, bir yöntem mevcut. Bu yöntem bir voltaj duyarlı floresan protein organizatörü tahrik ifade üzerinde dayanır.

Pluripotent kök hücre kaynaklı ventriküler Cardiomyocytes alt türü özel optik Aksiyon potansiyeli kayıtları insan indüklenen

Uygun bir sarcomere ağının oluşumu iPSC kaynaklı kardiyomiyositlerin olgunlaşması için önemlidir. Kök hücre kaynaklı kardiyomiyositlerin yapısal olgunlaşmasının kantitatif değerlendirmesini sağlayan, kardiyak gelişimi teşvik eden kültür koşullarını iyileştirmek için süper çözünürlük temelli bir yaklaşım savuruyoruz.

Tek Moleküllü Lokalizasyon Mikroskobu Kullanılarak İnsan iPSC Kaynaklı Kardiyomiyositlerde α-Aktinin Ağının Analizi

Burada, yüksek hızlı modüler fotometri sistemi kullanarak indüklenmiş pluripotent kök hücre türetilmiş kardiyomiyositlerden kaynaklanan eylem potansiyellerinin optik edinimi ve karakterizasyonu açıklanmaktadır.

İnsan kaynaklı Pluripotent Kök Hücre Türevli Kardiyomiyositlerde Tek Hücreli Optik Eylem Potansiyeli Ölçümü

Burada, optik tabanlı bir platform kullanarak insan kaynaklı pluripotent kök hücre kaynaklı kardiyomiyositlerde kontraktilite ve kalsiyum ölçümleri yapmak için yerleşik bir yöntem açıklanmaktadır. Bu platform, araştırmacıların mutasyonların etkisini ve çeşitli uyaranlara verilen tepkiyi hızlı ve tekrarlanabilir bir şekilde incelemelerini sağlar.

İnsan kaynaklı pluripotent kök hücre kaynaklı kardiyomiyositlerde kalsiyum ve kontraktilite parametrelerinin gerçek zamanlı ölçümleri

Öğrenin, floresan etiketli sarkom proteinleri kullanarak pluripotent kök hücre türevli kardiyomiyositlerde sarkomer kısaltılmasını değerlendirmeyi. Bu yöntem kardiyomiyopati araştırmalarında sarkomer fonksiyonunu görselleştirmeyi sağlar.

Floresan Etiketli Sarkom Proteinleri kullanılarak Pluripotent Kök Hücre Türevli Kardiyomiyositlerin Sarkomer Kısaltılması.

Daha fazla video keşfet