Name: İnflamatuar Meme Kanseri Hücrelerinin Kuyruk-Ven Enjeksiyonu ile Beyin Metastazının Modellenmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-02-04T15:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 2 s
Description: Öğrenin, inflamatuar meme kanseri hücreleriyle fare modellerinde kuyruk veni enjeksiyonu kullanarak beyin metastazı oluşturma yöntemini. Bu teknik, metastaz kolonizasyon adımlarını daha iyi taklit eder.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Makalenin bilimsel düzenlemesi için MD Anderson'ın Radyasyon Onkolojisi Bölümü'nden Christine F. Wogan'a ve hematoksilen ve eozin boyama konusunda yardım için MD Anderson'ın Cerrahi Histoloji Çekirdeği Bölümü'nden Carol M. Johnston'a teşekkür ederiz. MD Anderson'daki Veterinerlik ve Cerrahi Merkezine hayvan çalışmalarına verdikleri destek için müteşekkiriz. Bu çalışma aşağıdaki hibelerle desteklenmiştir: Susan G. Komen Kariyer Katalizörü Araştırma hibesi (BGD'ye CCR16377813), Amerikan Kanser Derneği Araştırma Bursu hibesi (RSG-19-126-01'den BGD'ye) ve Teksas Eyaleti Nadir ve Agresif Meme Kanseri Araştırma Programı. Ayrıca, Ulusal Kanser Enstitüsü, Ulusal Sağlık Enstitüleri'nden Teksas Üniversitesi MD Anderson Kanser Merkezi'ne CA016672 Kanser Merkezi Destek (Çekirdek) Hibe P30 tarafından kısmen desteklenmektedir.

Burada açıklanan yöntem, MD Anderson Kanser Merkezi'nin Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmıştır ve Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı için Ulusal Sağlık Enstitüleri Kılavuzları ile uyumludur. Şematik iş akışı, tüm adımlarla birlikte Şekil 1'de sunulmuştur.
1. Hücre hazırlığı
NOT: Dr. Woodward'ın laboratuvarında24'te üretilen MDA-IBC3 (ER-/PR-/HER2+) hücre hattı, bir lusiferaz-yeşil floresan proteini (Luc-GFP) plazmidi ile stabil bir şekilde transdüksiyona tabi tutuldu.
<ol><li>%10 fetal sığır serumu (FBS), 1 μg/mL hidrokortizon, 5 μg/mL insülin ve %1 antibiyotik-antimitotik ile takviye edilmiş Ham'ın F-12 ortamındaki kültür transdüksiyonlu hücreler.</li>
	<li>MDA-IBC3-Luc-GFP hücrelerini 37 ° C'de ve% 5 CO2 birleşene kadar bir T-75 şişesinde plakalayın. Hücreler geçiş için yeterince birleşene kadar her 3 günde bir ortamı değiştirin.</li>
	<li>Ortamı çıkararak, her şişeyi 10 mL 1x Dulbecco'nun (yani kalsiyum ve magnezyum içermeyen) fosfat tamponlu salin (DPBS) ile yıkayarak ve 2 mL %0.25 tripsin-etilendiamintetraasetik asit (EDTA) ekleyerek hücreleri hasat edin. Hücreler ayrılana kadar 37 ° C'de 3-5 dakika inkübe edin.</li>
	<li>Hücreleri toplamak ve tüm içeriği 15 mL'lik bir santrifüj tüpüne (ihtiyaç duyulan toplam hücre sayısına bağlı olarak 50 mL santrifüj tüpüne optimize edilmiş) aktarmak için şişeye 5 mL tam ortam ekleyin. Pelet hücrelerine 5 dakika boyunca 290 x g'da santrifüjleyin. NOT: Komple besiyeri, %10 fetal sığır serumu (FBS), 1 μg/mL hidrokortizon, 5 μg/mL insülin ve %1 antibiyotik-antimitotik ile desteklenmiş Ham'ın F-12 besiyeridir.</li>
	<li>Süpernatanı atın. Ardından hücreleri 10 mL 1x DPBS ile yıkayın. Hücreleri peletlemek için 5 dakika boyunca 290 x g'da santrifüjleyin ve süpernatanı dikkatlice atın. Hücreleri 1 mL taze 1x DPBS ile tekrar süspanse edin ve yukarı ve aşağı pipetleyerek iyice karıştırın.</li>
	<li>Tek hücreli süspansiyonlar yapmak için, hücreleri 40 μm steril hücre süzgeçlerinden süzün.</li>
	<li>Otomatik hücre sayacı kullanarak hücre yoğunluğunu hesaplayın. NOT: Sayımdaki hataları azaltmak için, farklı hücre seyreltmeleri oluşturun ve bunları ayrı ayrı sayın ve hücrelerin konsantrasyonunu (hücre sayısı/mL) belirlemek için ortalama değeri hesaplayın.<ol><li>1:5 seyreltme numunesi yapmak için 2 μL hücre süspansiyonu + 8 μL 1x DPBS toplayın.</li>
		<li>1:10 seyreltme numunesi yapmak için 1 μL hücre süspansiyonu + 9 μL 1x DPBS toplayın.</li>
		<li>10 μL% 0.4 tripan mavisi lekesi ekleyin. Numune karışımını birkaç kez yukarı ve aşağı pipetleyerek iyice karıştırın.</li>
		<li>Numunenin 10 μL'sini sayım odası slaytlarının yarım ay şeklindeki numune yükleme alanına nazikçe pipetleyin. İçeride kabarcık olmadığından emin olun; Saymadan önce hücrelerin hazneye yerleşmesi için 30 saniye bekleyin.</li>
	</ol></li>
	<li>Hücreleri 1x DPBS ile 100 μL başına 5 x 105 veya 1 x 106 hücre yoğunluğuna seyreltin. Kuyruk damarı enjeksiyonu için hücre süspansiyonunu 1.7 mL mikrosantrifüj tüplerine aktarın. Canlılığı korumak için hücreleri enjeksiyona kadar buzun üzerine yerleştirin.</li>
</ol>2. Kuyruk damar enjeksiyonu
<ol><li>4 ila 6 haftalık dişi timik SCID / Bej fareler kullanın.</li>
	<li>100 μL hücre süspansiyonu çekmek için 30 G'lik bir şırınga hazırlayın. Tüm hava kabarcıklarını çıkarın.</li>
	<li>Kuyruk damarı enjeksiyonunu kolaylaştırmak ve enjeksiyon işlemi sırasında hareketten kaynaklanan yaralanmaları önlemek için fareyi bir kemirgen tutucuya (yaklaşık 1 inç çapında) yerleştirin.</li>
	<li>Farenin kuyruğunu 3-4 kez nazikçe silmek için alkollü pamuklu pedler (%70 etanolden yapılmış) kullanın ve kuyruk damarını daha net görünür hale getirmek için 5-10 saniye basılı tutun.</li>
	<li>Şırıngayı farenin kuyruğuna 15-30° açıyla yerleştirin. Hücre süspansiyonunu yavaşça kuyruk damarına doğru itin.</li>
	<li>Şırıngayı nazikçe çıkarın ve herhangi bir kanamayı durdurmaya yardımcı olmak için kuyruğu birkaç saniye tutmak için pamuklu pedi kullanın.</li>
	<li>Fareleri kafeslerine geri koyun ve herhangi bir yan etki oluşmadığından emin olmak için enjeksiyondan 2-4 saat sonra kontrol edin.</li>
</ol>3. Beyin metastaz yükünün değerlendirilmesi
<ol><li>Seyreltilmiş D-lusiferin çözeltisi hazırlayın. NOT: Stok konsantrasyonu 47.6 mM (15.15 mg/mL) ve kullanım konsantrasyonu 1.515 mg/mL'dir.<ol><li>D-lusiferin şişesine 5 mL 1x DPBS ekleyin.</li>
		<li>İki adet 50 mL'lik konik tüpün her birine 2,5 mL çözelti yerleştirin.</li>
		<li>Durulamak için tekrar D-lusiferin şişesine 5 mL 1x DPBS daha ekleyin. Her 50 mL'lik konik tüpe 2,5 mL koyun.</li>
		<li>Şişeye 5 mL daha 1x DPBS koyun ve tekrar durulayın. Durulama işlemini iki kez tekrarlayın.</li>
		<li>Her 50 mL'lik tüpe toplam 66 mL'ye (tüp başına yaklaşık 33 mL) 1x DPBS ekleyin. Her tüpte yaklaşık 33 mL çözelti bulunmalıdır.</li>
		<li>Tüpleri iyice karıştırın ve ardından her ikisini de steril bir filtreleme ünitesinde (150 mL PES filtresi 0,45 μm) birleştirin.</li>
		<li>Çözeltiyi süzün ve ardından filtrelenmiş çözeltiyi steril kehribar 1.7 mL mikrotüplere ayırın.</li>
	</ol></li>
	<li>Lusiferaz görüntüleme ile beyin metastazlarını tespit etmek.<ol><li>D-lusiferini buz üzerinde tutarak çözün ve farelere enjeksiyondan önce girdap yapın.</li>
		<li>Enjeksiyon alanını alkollü pamuklu pedlerle temizleyin ve her kafes için bir şırınga olmak üzere 0.5 mL'lik bir insülin şırıngası kullanarak intraperitoneal olarak fare başına 100 μL D-lusiferin enjekte edin.</li>
		<li>10 dakika sonra, küçük hayvan indüksiyon odasına bağlı veteriner buharlaştırıcıyı kullanarak fareleri izofluran (% 2 O 2 -%2.5 izofluran) ile 5 dakika boyunca uyuşturun.</li>
		<li>In vivo görüntüleme sistemini açın. İlk kafesteki fareler anestezi altındayken, D-lusiferin'i bir sonraki kafesteki farelere enjekte edin.</li>
		<li>Fareleri in vivo görüntüleme sistemi makinesine koyun ve ventral ve dorsal görüntüler elde edin. 2 dakikalık bir pozlama süresi seçin ve alan görünümünde E seçeneğini (tüm vücut) seçin. Al'a basın. Ardından, görüntüyü kaydedin (Şekil 2). NOT: Görüntü lüminesans doygunluğu gösteriyorsa, pozlama süresini azaltın.</li>
	</ol></li>
	<li>GFP görüntüleme ile beyin metastazlarını tespit etmek.<ol><li>Beyin dokusu hazırlığı.<ol><li>Hücrelerin enjeksiyonundan yaklaşık 8-10 hafta sonra veya fareler beyin metastaz yükü nedeniyle can çekiştiğinde, IACUC tarafından onaylanan protokollere uygun olarak, bir izofluran doz aşımını soluyarak fareleri ötenazi yapın ve ardından servikal çıkık yapın.</li>
			<li>İzofluran ile ötenaziden ve ardından servikal çıkıktan sonra, farelere% 70 etanol çözeltisi püskürtün ve kürkü baş bölgesinden ve kulaklardan makasla çıkarın. Daha sonra, boynun servikal bölgesinde bir kesim yapın (farenin başını kesmemeye dikkat edin). Kafatasını kesin ve dışarı çekin. Sonra, beyni dikkatlice çıkarın.</li>
			<li>Toplanan beyinleri doku kasetlerine yerleştirin.</li>
			<li>Kasetleri soğuk 1x DPBS'li bir kaba aktarın. NOT: Beyin örnekleri 1x DPBS'de 1 saatten fazla tutulmamalıdır. Aynı anda birkaç beyin örneği toplanacaksa, bir seferde sadece birkaç fareye ötenazi yapın (tur başına 10).</li>
		</ol></li>
		<li>Steremikroskobik görüntüleme.<ol><li>Tüm beyni 100 cm'lik bir doku kabı kapağına aktarın.</li>
			<li>Şekil 3A'da (kırmızı kare) gösterildiği gibi tüm beynin görselleştirilmesine izin vermek için stereomikroskobu ve UV ışığını 3x lens ile 0.5x konumunda açın.</li>
			<li> Basın Canlı view (Şekil 3A, yeşil kare).</li>
			<li>Beyin ventral pozisyondayken görüşe odaklanın.</li>
			<li>Yazılımda GFP'yi (hücreler GFP etiketliyse) veya TXRED'i (hücreler RFP etiketliyse) (Şekil 3A, sarı kare) seçin, mikroskopta uygun filtreyi seçin ve bir resim çekin. NOT: SOLA ışık kaynağı ayarını yaklaşık %30'da tutun; GFP çok parlaksa, uygun sinyal gözlemlenene kadar azaltın.</li>
			<li>Numuneyi hareket ettirmeden parlak ışığı açın ve BF'yi seçin (Şekil 3A, sarı kare). Bir fotoğraf çekin.</li>
			<li>Beyin sırt pozisyonundayken önceki adımları tekrarlayın. NOT: Büyüklüğüne bağlı olarak, aynı GFP pozitif beyin metastazı lezyonu hem ventral hem de dorsal pozisyonlarda ortaya çıkabilir. Böyle bir durumda, aynı lezyonun tekrarlanmasından kaçının. Görüntüleri bir TIFF uzantısıyla kaydedin (tüm bilgileri resim dosyasında tutar).</li>
			<li>Görüntüleri bir TIFF uzantısıyla kaydedin (tüm bilgileri resim dosyasında tutar).</li>
			<li>Tüm örnekler için adımları tekrarlayın.</li>
			<li>TIFF görüntülerini JPEG'e dönüştürün, böylece dosyalar ilişkili yazılımın yüklü olmadığı herhangi bir bilgisayarla açılabilir (Dosya | İthalat/İhracat | dosyaları dönüştürün).</li>
			<li>Floresan görüntüyü parlak alan görüntüsüyle birleştirmek için her iki görüntüyü de açın ve Dosya | Kanalları birleştirin. GFP için yeşil ve BF için parlak alan olmak üzere uygun bileşenleri seçin ve Tamam'a basın. Birleştirilen görüntüyü kaydedin.</li>
			<li>Beyin tümörü alanını ölçmek için floresan görüntüyü kullanın. Ölçü Seç | Manuel Ölçüm | Alanı. Otomatik seçimi seçin (Şekil 3B, yeşil kare) ve oku GFP-pozitif alanına getirin ve otomatik olarak bir seçim oluşturmak için tıklayın. Seçimi onaylamak için tekrar tıklayın, ardından tüm ölçümler gösterilecektir (Şekil 3B, kırmızı kare). Birden fazla GFP pozitif alan varsa, prosedürü tekrarlayın.</li>
		</ol></li>
		<li>Beyin görüntüleri elde edildikten sonra, %10 nötral tamponlu formalin kullanarak rutin doku fiksasyon protokollerine geçin.<ol><li>Beyinler sabitlendikten sonra, seçilen belirteçleri tespit etmek için beyin metastazı ve immünohistokimyasal boyamanın varlığını doğrulamak için standart histolojik kesitlemeye ve ardından hematoksilen ve eozin boyamaya devam edin. NOT: İmmünositokimya, bilinen belirteçlerin immünohistokimyasal boyanması için standart protokole sahip UT MD Anderson Kanser Merkezi'ndeki Patoloji Çekirdek Laboratuvarı'nda gerçekleştirildi.</li>
		</ol></li>
	</ol></li>
</ol>

<ol><li>Achrol, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+metastases%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Disease+Primers%22%5BJournal%5D)">Brain metastases.</a> Nature Reviews Disease Primers. 5 (1), 5(2019).</li>
<li>Nayak, L., Lee, E. Q., Wen, P. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+of+brain+metastases%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Oncology+Report%22%5BJournal%5D)">Epidemiology of brain metastases.</a> Current Oncology Report. 14 (1), 48-54 (2012).</li>
<li>Lowery, F. J., Yu, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+metastasis%3A+Unique+challenges+and+open+opportunities%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimica+et+Biophysica+Acta+Review+Cancer%22%5BJournal%5D)">Brain metastasis: Unique challenges and open opportunities.</a> Biochimica et Biophysica Acta Review Cancer. 1867 (1), 49-57 (2017).</li>
<li>Brufsky, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Central+nervous+system+metastases+in+patients+with+HER2-positive+metastatic+breast+cancer%3A+incidence%2C+treatment%2C+and+survival+in+patients+from+registHER%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Central nervous system metastases in patients with HER2-positive metastatic breast cancer: incidence, treatment, and survival in patients from registHER.</a> Clinical Cancer Research. 17 (14), 4834-4843 (2011).</li>
<li>Valiente, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+evolving+landscape+of+brain+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Cancer%22%5BJournal%5D)">The evolving landscape of brain metastasis.</a> Trends in Cancer. 4 (3), 176-196 (2018).</li>
<li>Bos, P. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genes+that+mediate+breast+cancer+metastasis+to+the+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Genes that mediate breast cancer metastasis to the brain.</a> Nature. 459 (7249), 1005-1009 (2009).</li>
<li>Woditschka, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DNA+double-strand+break+repair+genes+and+oxidative+damage+in+brain+metastasis+of+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+National+Cancer+Institute%22%5BJournal%5D)">DNA double-strand break repair genes and oxidative damage in brain metastasis of breast cancer.</a> Journal of the National Cancer Institute. 106 (7), (2014).</li>
<li>Palmieri, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vorinostat+inhibits+brain+metastatic+colonization+in+a+model+of+triple-negative+breast+cancer+and+induces+DNA+double-strand+breaks%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Vorinostat inhibits brain metastatic colonization in a model of triple-negative breast cancer and induces DNA double-strand breaks.</a> Clinical Cancer Research. 15 (19), 6148-6157 (2009).</li>
<li>Kim, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Astrocytes+upregulate+survival+genes+in+tumor+cells+and+induce+protection+from+chemotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Neoplasia%22%5BJournal%5D)">Astrocytes upregulate survival genes in tumor cells and induce protection from chemotherapy.</a> Neoplasia. 13 (3), 286-298 (2011).</li>
<li>Zhang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SRC+family+kinases+as+novel+therapeutic+targets+to+treat+breast+cancer+brain+metastases%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">SRC family kinases as novel therapeutic targets to treat breast cancer brain metastases.</a> Cancer Research. 73 (18), 5764-5774 (2013).</li>
<li>Valiente, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serpins+promote+cancer+cell+survival+and+vascular+co-option+in+brain+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Serpins promote cancer cell survival and vascular co-option in brain metastasis.</a> Cell. 156 (5), 1002-1016 (2014).</li>
<li>Gril, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+lapatinib+on+the+outgrowth+of+metastatic+breast+cancer+cells+to+the+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+National+Cancer+Institute%22%5BJournal%5D)">Effect of lapatinib on the outgrowth of metastatic breast cancer cells to the brain.</a> Journal of the National Cancer Institute. 100 (15), 1092-1103 (2008).</li>
<li>Gril, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pazopanib+reveals+a+role+for+tumor+cell+B-Raf+in+the+prevention+of+HER2%2B+breast+cancer+brain+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Pazopanib reveals a role for tumor cell B-Raf in the prevention of HER2+ breast cancer brain metastasis.</a> Clinical Cancer Research. 17 (1), 142-153 (2011).</li>
<li>Palmieri, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Profound+prevention+of+experimental+brain+metastases+of+breast+cancer+by+temozolomide+in+an+MGMT-dependent+manner%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Profound prevention of experimental brain metastases of breast cancer by temozolomide in an MGMT-dependent manner.</a> Clinical Cancer Research. 20 (10), 2727-2739 (2014).</li>
<li>Priego, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((STAT3+labels+a+subpopulation+of+reactive+astrocytes+required+for+brain+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">STAT3 labels a subpopulation of reactive astrocytes required for brain metastasis.</a> Nature Medicine. 24 (7), 1024-1035 (2018).</li>
<li>Debeb, B. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((miR-141-mediated+regulation+of+brain+metastasis+from+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+National+Cancer+Institute%22%5BJournal%5D)">miR-141-mediated regulation of brain metastasis from breast cancer.</a> Journal of the National Cancer Institute. 108 (8), (2016).</li>
<li>Chang, S., Parker, S. L., Pham, T., Buzdar, A. U., Hursting, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammatory+breast+carcinoma+incidence+and+survival%3A+the+surveillance%2C+epidemiology%2C+and+end+results+program+of+the+National+Cancer+Institute%2C+1975-1992%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer%22%5BJournal%5D)">Inflammatory breast carcinoma incidence and survival: the surveillance, epidemiology, and end results program of the National Cancer Institute, 1975-1992.</a> Cancer. 82 (12), 2366-2372 (1998).</li>
<li>Hance, K. W., Anderson, W. F., Devesa, S. S., Young, H. A., Levine, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trends+in+inflammatory+breast+carcinoma+incidence+and+survival%3A+the+surveillance%2C+epidemiology%2C+and+end+results+program+at+the+National+Cancer+Institute%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+National+Cancer+Institute%22%5BJournal%5D)">Trends in inflammatory breast carcinoma incidence and survival: the surveillance, epidemiology, and end results program at the National Cancer Institute.</a> Journal of National Cancer Institute. 97 (13), 966-975 (2005).</li>
<li>Dirix, L. Y., Van Dam, P., Prove, A., Vermeulen, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammatory+breast+cancer%3A+Current+understanding%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Oncology%22%5BJournal%5D)">Inflammatory breast cancer: Current understanding.</a> Current Opinion in Oncology. 18 (6), 563-571 (2006).</li>
<li>Wang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pattern+of+distant+metastases+in+inflammatory+breast+cancer+-+A+large-cohort+retrospective+study%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cancer%22%5BJournal%5D)">Pattern of distant metastases in inflammatory breast cancer - A large-cohort retrospective study.</a> Journal of Cancer. 11 (2), 292-300 (2020).</li>
<li>Uemura, M. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+CNS+metastases+and+survival+in+patients+with+inflammatory+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer%22%5BJournal%5D)">Development of CNS metastases and survival in patients with inflammatory breast cancer.</a> Cancer. 124 (11), 2299-2305 (2018).</li>
<li>Smith, D. L., Debeb, B. G., Thames, H. D., Woodward, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Computational+modeling+of+micrometastatic+breast+cancer+radiation+dose+response%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Radiation+Oncology%2C+Biology%2C+Physics%22%5BJournal%5D)">Computational modeling of micrometastatic breast cancer radiation dose response.</a> International Journal of Radiation Oncology, Biology, Physics. 96 (1), 179-187 (2016).</li>
<li>Fukumura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-omic+molecular+profiling+reveals+potentially+targetable+abnormalities+shared+across+multiple+histologies+of+brain+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">Multi-omic molecular profiling reveals potentially targetable abnormalities shared across multiple histologies of brain metastasis.</a> Acta Neuropathol. , (2021).</li>
<li>Klopp, A. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cells+promote+mammosphere+formation+and+decrease+E-cadherin+in+normal+and+malignant+breast+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cells promote mammosphere formation and decrease E-cadherin in normal and malignant breast cells.</a> PLoS One. 5 (8), 12180(2010).</li>
<li>Villodre, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Abstract+P3-01-10%3A+Ndrg1-egfr+axis+in+inflammatory+breast+cancer+tumorigenesis+and+brain+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Abstract P3-01-10: Ndrg1-egfr axis in inflammatory breast cancer tumorigenesis and brain metastasis.</a> Cancer Research. 80 (4), 10(2020).</li>
</ol>

Yazarlar herhangi bir çıkar çatışması beyan etmezler.

Protokol birkaç kritik adım içerir. Canlılığı korumak için hücreler 1 saatten fazla buz üzerinde tutulmamalıdır. Enjeksiyondan önce farelerin kuyruklarını silmek için alkollü pamuklu pedler kullanılmalı, kuyruk derisine zarar vermemek için çok sert veya çok sık silmemeye özen gösterilmelidir. Farelerin kan damarı embolisinden ölmesini önlemek için hücre süspansiyonunda hava kabarcığı bulunmadığından emin olun. Kuyruklardaki kan damarının delinmesini önlemek için enjeksiyon açısını 45 ° veya daha düşük tutun ve tüm hücrel...

Beyin metastazı, sistemik malignitelerin sık görülen ve ölümcül bir komplikasyonudur. Beyin metastazlarının çoğu, toplu olarak vakaların% 67-80'ini oluşturan akciğer, meme veya cildin primer tümörlerinden kaynaklanır 1,2. Beyin metastazı insidansı tahminleri 100.000 ila 240.000 vaka arasında değişmektedir ve bu sayılar metastatik kanserden ölen hastalar için otopsi nadir olduğu için hafife alınabilir3. Beyin metastazı olan hastalar, beyin metastazı olmayan hastalara göre daha kötü prognoza ve daha düşük genel sağkalıma sahiptir4. Beyin metastazları için mevcut tedavi seçenekleri büyük ölçüde palyatiftir ve çoğu hasta için sağkalım sonuçlarını iyileştirmede başarısızolur 5. Bu nedenle, beyin metastazı bir zorluk olmaya devam etmektedir ve daha etkili tedaviler geliştirmek için beyin metastazı ilerleme mekanizmalarını daha iyi anlama ihtiyacı devam etmektedir.
Deneysel modellerin kullanımı, meme kanserinin beyne metastatik ilerlemesinin spesifik mekanizmaları hakkında önemli bilgiler sağlamış ve çeşitli terapötik yaklaşımların etkinliğinin değerlendirilmesine izin vermiştir 6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16 . Bununla birlikte, çok az sayıda model beyin metastazı gelişiminin inceliklerini doğru ve tam olarak özetleyebilir. Ortotopik, kuyruk damarı, intrakardiyak, intrakarotis arteriyel ve intraserebral enjeksiyonlar dahil olmak üzere farklı uygulama yollarıyla kanser hücrelerinin farelere aşılanması yoluyla birkaç deneysel in vivo model oluşturulmuştur. Her tekniğin avantajları ve dezavantajları vardır, başka bir yerde gözden geçirildiği gibi3. Bununla birlikte, bu fare modellerinin hiçbiri beyin metastazının klinik ilerlemesini tam olarak kopyalayamaz.
Beyin metastazları, primer meme kanserinin nadir fakat agresif bir varyantı olan inflamatuar meme kanseri (IBC) hastalarında özellikle yaygındır. IBC, meme kanseri vakalarının %1 ila %4'ünü oluşturur, ancak Amerika Birleşik Devletleri'nde meme kanserine bağlı ölümlerin orantısız bir şekilde %10'undan sorumludur17,18. IBC'nin hızla metastaz yaptığı bilinmektedir; Gerçekten de, IBC hastalarının üçte birinde tanı anında uzak metastaz vardır19,20. Beyin metastazı spesifik olarak, IBC'li hastalarda beyin metastazı insidansı, IBC olmayan hastalara göre daha yüksektir21. Son zamanlarda, fare ksenogreftlerinde IBC özelliklerini özetleyen ER-/PR-/HER2+ IBC'li bir hastanın malign plevral efüzyon sıvısından türetilen MDA-IBC3 hücre hattının, kuyruk damarı ile enjekte edildiğinde farelerde akciğer metastazlarından ziyade beyin metastazı geliştirme eğiliminin arttığını gösterdik, bu da bu hücre hattını beyin metastazının gelişimini incelemek için iyi bir model haline getirdi16.
Burada, MDA-IBC3 hücrelerinin kuyruk-ven enjeksiyonu ile beyin metastazı oluşturma ve stereofloresan mikroskopi ve lusiferaz görüntüleme ile metastatik yükü değerlendirme prosedürleri açıklanmaktadır. Bu yöntem, meme kanseri metastazının beyne anahtar aracılarını keşfetmek ve terapötik müdahalelerin etkinliğini test etmek için kullanılmıştır 16,22,23. Bu tekniğin dezavantajı, beyin metastatik sürecindeki tüm adımları özetlememesidir. Bununla birlikte, başlıca avantajları arasında sağlamlık ve tekrarlanabilirlik, intravazasyonun ilgili metastaz biyolojisinin katılımı, akciğerleri geçme ve beyne ekstravazasyon ve teknik açıdan göreceli basitliği sayılabilir.

<table><tbody><tr><td><güçlü > Hücre Kültürü< / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>1000 ve mikro; L pipet ucu filtreli</td><td>Genesee Scientific</td><td>23430</td><td></td></tr><tr><td>10 mL Serolojik Pipetler</td><td>Genesee Scientific</td><td>12-112</td><td></td></tr><tr><td>Antibiyotik-antimikotik&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15240062</td><td>%1</td></tr> <tr><td>Santrifüj tüpleri 15 mL dökme</td><td>Genesee Scientific</td><td>28103&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Corning&nbsp; 500 mL Jambon F-12 Orta [+] L-glutamin</td><td>GIBICO Inc. ABD</td><td>MT10080CV</td><td></td></tr><tr><td>Kontes II Otomatik Hücre Sayacı (Invitrogen)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>AMQAX1000</td><td></td></tr><tr><td>1x DPBS</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>21-031-CV</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf centufuge 5810R</td><td>Eppendorf&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fetal sığır serumu (FBS)</td><td>GIBICO Inc. ABD</td><td>16000044</td><td>10</td></tr><tr><td>%Fisherbrand &nbsp; Steril Hücre Süzgeçleri (40 &mu; m)</td> <td>Thermo Fisher Scientific</td><td>22-363-547</td><td></td></tr><tr><td>Hidrokortizon</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H0888</td><td>1 & mikro; g/mL</td></tr><tr><td>İnsülin&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Bilimsel</td><td>12585014</td><td>5 & g/mL</td></tr><tr><td>canlandırıcı&nbsp; Kontes Hücre Sayma Odası Slaytları</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>C10228&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>MDA-IBC3 hücre hatları</td><td>MD Anderson Kanser Merkezi</td><td></td><td>Dr. Woodward'ın laboratuvarı tarafından üretilmiştir24</td></tr><tr><td>Luciferase&ndash; yeşil floresan proteini (Luc&ndash; GFP), plazmid</td>, <td>Sistem Biyobilimleri</td><td>, BLIV713PA-1</td><td></td></tr><tr><td>mikrotüpler, berrak steril, 1.7 mL,</td><td>Genesee Scientific</td><td>24282S,</td><td></td></tr><tr><td>Olympus 10 & L Reach Bariyer Ucu, Düşük Bağlamalı, Raflı, Steril</td><td>Genesee Scientific</td><td>23-401C&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>TC ile İşlem Görmüş Şişeler (T75), 250 mL, Vent</td><td>Genesee Scientific</td><td>25-209</td><td></td></tr><tr><td>Tripan Mavi Leke (% 0.4), Kontes Otomatik Hücre Sayacı</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>T10282</td><td></td></tr><tr><td>Tripsin-EDTA (% 0.25), fenol kırmızısı</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>25200114</td><td></td></tr><tr><td><güçlü>Kuyruk damarı enjeksiyonu< / güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CB-17/IcrHsd-Prkdc scid Lyst bg-J - SCID/Bej</td><td>Envigo</td><td>SCID/bej fareler</td><td></td></tr><tr><td>BD Ultra İnce İğneli BD İnsülin Şırıngası 0.5mL 30Gx1/2" (12.7mm)</td><td>BD</td><td>328466</td><td></td></tr><tr><td>Plas Labs &nbsp; Broome Tarzı Kemirgen Sınırlayıcılar</td><td>Plas Labs 551BSRR</td><td>01-288-32A</td><td>Thermo Fisher Scientific</td></tr><tr><td>Volu SolSupplier Çeşitlilik Ortağından Sipariş: Etanol %95 SDA (190 Kanıt)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>50420872</td><td>%70 kullanılmış</td></tr><tr><td><güçlü>Görüntüleme</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>BD&nbsp; Düşük Doz&nbsp; U-100 İnsülin Şırıngaları</td><td>BD</td><td>329461</td><td></td></tr><tr><td>Tek Kullanımlık PES Filtre Üniteleri 0.45 & </td><td>D-luciferin D-Luciferin</td><td>Biosynth</td> L8220-1g'yi sterilize etmek için m <td>Fisherbrand</td> FB12566501 filtre sistemi</tr><tr><td></td><td></td><td></td><td>stok konsantrasyonu = 47,6 mM (15,15 mg/mL); kullanım konsantrasyonu = 1.515 mg / mL</td></tr><tr><td>1.7 mL mikrotüp kehribar</td><td>Genesee Scientific</td><td>24-282AM</td><td></td></tr><tr><td>İzofluran</td><td>Patterson Veteriner</td><td>NDC-14043-704-06</td><td>Anestezik buharlaştırıcıda kullanım için sıvı anestezik</td></tr><tr><td>IVIS 200&nbsp;</td>Lusiferaz görüntüleme için <td>PerkinElmer</td><td></td><td>makinesi, aynı anda 5 fareye kadar görüntüleme, anestezi makinesi ile</td></tr><tr><td>Kapaklı Plastik Kaplar&nbsp;</td><td>Fisherbrand</td><td>02-544-127</td><td></td></tr><tr><td>Doku Kasetleri</td><td>Thermo Scientific</td><td>1000957</td><td></td></tr><tr><td>Webcol Alkol Hazırlığı&nbsp;</td><td>Covidien</td><td>6818</td><td></td></tr><tr><td><güçlü>Stereomikroskop Görüntüleme</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Stereomikroskop AZ100&nbsp;</td><td>Nikon</td><td>model AZ-STGE</td><td>yazılımı NIS-ELEMENT</td></tr><tr><td>Formalin %10</td> <td>Fisher Chemical</td><td>SF100-4</td><td></td></tr><tr><td>TC ile işlenmiş bulaşıklar 100x20 mm</td><td>Genesee Scientific</td><td>25202</td><td></td></tr></tbody></table>

İnflamatuar meme kanseri hücrelerinin kuyruk-ven enjeksiyonu ile beyin metastazının modellenmesi

Modeling Brain Metastasis Via Tail-Vein Injection of Inflammatory Breast Cancer Cells

Beyne metastatik yayılım, birçok kanser türünün yaygın ve yıkıcı bir tezahürüdür. Sadece Amerika Birleşik Devletleri'nde her yıl yaklaşık 200.000 hastaya beyin metastazı teşhisi konmaktadır. Primer meme kanseri ve sistemik maligniteleri olan hastalar için sağkalım sonuçlarının iyileştirilmesinde önemli ilerleme kaydedilmiştir; Bununla birlikte, klinik beyin metastazı olan hastalar için kasvetli prognoz, bu ölümcül hastalığa karşı yeni terapötik ajanlar ve stratejiler geliştirmeye acil ihtiyaç olduğunu vurgulamaktadır. Uygun deneysel modellerin olmaması, beyin metastazı biyolojisi ve tedavisi konusundaki anlayışımızın ilerlemesini engelleyen en büyük engellerden biri olmuştur. Burada, nadir ve agresif bir meme kanseri formu olan inflamatuar meme kanserinden (IBC) türetilen endojen olarak HER2 ile amplifiye edilmiş bir hücre hattının kuyruk veni enjeksiyonu yoluyla üretilen bir ksenogreft fare beyin metastazı modelini açıklıyoruz. Hücreler, beyin metastazını izlemek için ateşböceği lusiferaz ve yeşil floresan proteini ile etiketlendi ve biyolüminesans görüntüleme, floresan stereomikroskopi ve histolojik değerlendirme ile metastatik yükü ölçtü. Fareler sağlam ve tutarlı bir şekilde beyin metastazları geliştirir, bu da metastatik süreçteki anahtar aracıların araştırılmasına ve yeni tedavi stratejilerinin klinik öncesi testlerinin geliştirilmesine olanak tanır.

Etiketli hücrelerin klinik öncesi fare modellerinde beyin metastazının izlenmesini ve görselleştirilmesini kolaylaştırdığı gerekçesiyle, biyolüminesans görüntüleme ve floresan stereomikroskopi kullanarak beyin metastazlarını izlemek ve metastatik yükü ölçmek için MDA-IBC3 hücrelerini Luc ve GFP ile etiketledik. Etiketli MDA-IBC3 hücrelerinin bağışıklığı baskılanmış SCID/Bej farelerin kuyruk damarlarına enjeksiyonu, yüksek oranda beyin metastazı gelişen farelerle sonuçlandı (yani, f,7 ila 0)16,23,25.</su...

Endojen olarak HER2 ile amplifiye edilmiş inflamatuar meme kanseri hücre hattının kuyruk damarı enjeksiyonu yoluyla üretilen meme kanseri beyin metastazının bir ksenogreft fare modelini tanımladık.

İnflamatuar Meme Kanseri Hücrelerinin Kuyruk-Ven Enjeksiyonu ile Beyin Metastazının Modellenmesi

Metastatic spread to the brain is a common and devastating manifestation of many types of cancer. In the United States alone, about 200,000 patients are ...

İnflamatuar meme kanseri veya IBC'li hastalardan elde edilen hücre dizilerini kullanarak fare modellerinde beyin metastazı oluşturmak için kuyruk damarı yöntemini kullandık. Fare modellerinde beyin metastazı oluşumu tipik olarak intrakardiyak veya intrakarotis arteriyel enjeksiyonları içerir. Bununla birlikte, kuyruk damarı yöntemi, beyin metastazı kolonizasyon adımlarını daha iyi taklit ettiği ve gerçekleştirilmesi nispeten basit olduğu için bu tekniklere göre avantaj sunar.Her ikisi de laboratuvarımda eğitmen olan doktorlar Xiaoding Hu ve Emilly Villodre prosedürü gösterecek. Tümör hücresi enjeksiyonundan sekiz ila 10 hafta sonra GFP görüntüleme ile beyin metastazlarını tespit etmek için, fareyi% 70 etanol ile dezenfekte edin ve kürkü baş ve kulaklardan çıkarın. Boynun servikal bölgesini kesin.Beynin alınmasına izin vermek için kafatasını çıkarın ve çıkarın. Beyni bir doku kasetine yerleştirin ve kaseti bir saatten fazla olmamak üzere soğuk DPBS kabına yerleştirin. Stereo mikroskopi ile görüntüleme için, beyni UV ışığı ile donatılmış bir stereo mikroskop altında 100 santimetrelik bir doku kabı kapağına aktarın ve tüm beynin görselleştirilmesine izin vermek için 0.5x objektifi seçin.Canlı görüntüye basın ve beyin ventral pozisyondayken görüntüye odaklanın. Hücrelerdeki floresan işaretleyici için yazılımda ve mikroskopta uygun filtreyi seçin ve bir resim çekin. Örneği hareket ettirmeden parlak alan görüntülemeye geçin ve parlak alan filtresini seçin.Bir fotoğraf çekin. Daha sonra beyni daha önce gösterildiği gibi sırt pozisyonunda görüntüleyin. Tüm beyin görüntülerini analiz etmek için, önce görüntü dosyalarını TIFF'den JPEG'e dönüştürün, böylece ilgili yazılıma sahip olmayan herhangi bir bilgisayarla açılabilirler.Ardından, bir çift parlak alan ve floresan görüntü açın ve kanalları dosyala ve birleştir'i seçin. Uygun bileşenleri seçin, Tamam'ı tıklatın ve birleştirilmiş görüntüyü kaydedin. Floresan görüntüdeki beyin tümörü alanını ölçmek için otomatik seçimi seçin.Oku GFP konum alanına taşıyın ve otomatik olarak bir seçim oluşturmak için tıklayın. Ardından seçimi onaylamak için tekrar tıklayın. Tüm ölçümler gösterilecektir.Birden fazla GFP pozitif alanı gözlemlenebiliyorsa, ölçümü sonraki alanla tekrarlayın. Beyin metastatik lezyonları, lusiferaz görüntüleme ve stereo floresan mikroskobu ile enjeksiyondan sekiz hafta sonra tespit edilebilir. Görüntülemeden sonra, beyin metastazlarının bölümleri, beyin metastazı lezyonlarının varlığını doğrulamak için hematoksilen ve eozin boyaması ve ilgilenilen spesifik protein belirteçlerini saptamak için immünohistokimyasal boyama için formalin ile sabitlenebilir ve işlenebilir.Bu protokolü denerken, hücreleri bir saatten fazla buz üzerinde tutmayarak hücre canlılığını korumak ve emboli oluşumunu ve fare ölümünü önlemek için hücre süspansiyonunda hava kabarcıklarını önlemek önemlidir. Kuyruk veni enjeksiyonunu takiben, lusiferaz görüntüleme ile beyin metastazı büyümelerini ve ilerlemesini izliyoruz. Ötenazi sonrası stereo floresan mikroskopi ve histoloji metastaz lezyonlarını doğruladı.

modeling-brain-metastasis-via-tail-vein-injection-inflammatory-breast

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kanser Araştırmaları

Bu videoda, bir fare modeline kuyruk damarı enjeksiyonu kullanılarak etiketli kanser hücrelerinin enjekte edilmesi tekniği açıklanmaktadır. Gerçek zamanlı in vivo canlı hayvan görüntülemeyi kullanarak meme kanseri, metastaz oluşumunu ve büyümesini daha fazla izliyoruz.

Kuyruk Damarı Enjeksiyonu: Bir Fare Modelinde Metastatik Çalışmalar için Kanser Hücrelerini Uygulamak İçin Bir Yöntem

Kaynak: Lim, M.,  et al. Kanser hücrelerinin iç karotis arter enjeksiyonu ile beyin metastazının modellenmesi. J. Vis. Uzm.  (2022)Bu videoda, anestezi uygulanmış bir fare, beyne hedeflenen iletimi kolaylaştırmak için kanser hücrelerinin ortak karotis artere (CCA) enjekte edildiği cerrahi bir prosedürden geçiyor. Prosedür, enjekte edilen hücreleri iç karotis artere (ICA) yönlendirmek için karotis arterlerin hassas bir şekilde dikilmesini ve manipüle edilmesini içerir ve zamanla beyinde tümör...

Kanser Hücrelerinin İnternal Karotis Arter Enjeksiyonu ile Beyin Tümörü Metastazının Modellenmesi

Bir meme kanseri beyin metastazı fare modeli MDA-MB231/Br-GFP hücreleri ultrason görüntüleme kılavuzluğunda intrakardiyak enjeksiyonu ile kurulmuştur. Multifokal intrakranial metastaz gelişimi, yüksek çözünürlüklü 9.4 T MR kullanılarak uzunlamasına izlenir olmuştur.

Boyuna MRG Ardından Meme Kanseri Beyin Metastaz bir Fare Modeli geliştirmek için ultrason görüntüleme eşliğinde intrakardiyak enjeksiyon

Bu el yazması, deneysel kemik metastazları oluşturmak için kanser hücrelerini özellikle kemikler de dahil olmak üzere arka bacak dokularına iletmek için bir teknik olan intra-iliak arter (IIA) enjeksiyonunun ayrıntılı prosedürünü sağlar. Başlangıçta meme tümörü modelleri ile oluşturulmuş olsa da, bu protokol diğer kanser türlerine de kolayca genişletilebilir.

Mikroskopik Kemik Metastazı Verimli ve Seçici Modelleme için intra-iliak arter Enjeksiyon

Metastazı, kanserin virülansında derin bir rol oynar ve ölümlerin tahminen %90'ını oluşturur.  Farelerde metastatik melanom modeli için terapötik ajanların bu klinik fenomene karşı etkinliğini belirlemek için yararlı olan bir protokol sunuyoruz.

Singenik Fare Melanom Hücreleri Enjeksiyon Akciğerler Onların Metastatik Potansiyeli belirleme

Meme tümör hücrelerinin portal ven enjeksiyonu yoluyla murin karaciğerine iletilmesi için cerrahi bir prosedür geliştirilmiştir. Bu model, tümör hücresi ekstravazasyonu, tohumlama, sağkalım ve karaciğerde metastatik büyüme dahil olmak üzere tamamen immün yetkin bir konakta karaciğer metastazının geç aşamalarının araştırılmasına izin verir.

Bir Portal Ven Enjeksiyon Modeli Karaciğer Metastazı Meme Kanseri Eğitim için

Burada, biz meme kanseri hücrelerinin basit, daha az invaziv ve ele kolay bir şekilde meme yağ yastığı içine implant için bir protokol mevcut ve bu fare orthotopic meme kanseri model uygun meme yağ yastığı yapısına sahip çeşitli yönlerini incelemek için kullanılabilir kanser.

Fareler meme yağ yastığı içine meme kanser hücrelerinin Orthotopic enjeksiyon

Açıklanan yaklaşım, akciğerlerdeki metastaz sayısı ve boyutunun ölçülmesine ek olarak meme kanseri metastazı oluşumunun ve büyümesinin gerçek zamanlı olarak izlenmesine olanak sağlamak için deneysel kuyruk ven metastazı tahlillerini in vivo canlı hayvan görüntülemeile birleştirir.

Kuyruk Ven Metastaz Tahlilleri ve Gerçek Zamanlı Vivo Görüntüleme Kombine Kullanımı Meme Kanseri Metastatik Kolonizasyon ve Yük Akciğerlerde Quantify için

Kanser hücrelerinin intravenöz enjeksiyonu genellikle metastaz araştırmalarında kullanılır, ancak metastatik tümör yükünü analiz etmek zor olabilir. Burada, metastazın kuyruk damarı enjeksiyon modelini gösteriyoruz ve ortaya çıkan metastatik akciğer tümörü yükünü analiz etmek için yeni bir yaklaşım içeriyoruz.

Tümör Hücrelerinin Lateral Kuyruk-Damar Enjeksiyonu Sonrasında Akciğer Metastazının Patolojik Analizi

İntrakraniyal beyin metastazı modellemesi, tümör boyutunun izlenememe ve tedaviye tam ve zamanında yanıt verilememesi ile karmaşıktır. Sunulan metodoloji çiftler manyetik rezonans görüntüleme analizi ile intrakranial tümör enjeksiyonu, kombine edildiğinde, hassas ve tutarlı enjeksiyonlar, gelişmiş hayvan izleme ve doğru tümör hacmi ölçümleri yetiştirir.

İntrakraniyal Enjeksiyon ve Manyetik Rezonans Görüntüleme Ile Beyin Metastazlarının Modellenmesi

Beyin metastazı kanser hastalarında ciddi morbidite ve mortalite nedenidir. Çoğu beyin metastazı fare modeli, mortalite ve terapötik müdahale sonuçlarının kafa karıştırıcı analizini karıştıran sistemik metastazlar ile karmaşıktır. Burada, minimal sistemik tümörlerle tutarlı intrakraniyal tümörler üreten kanser hücrelerinin internal karotis enjeksiyonu için bir protokol sunulmaktadır.

Kanser Hücrelerinin İç Karotis Arter Enjeksiyonu ile Beyin Metastazının Modellenmesi

Öğrenin, inflamatuar meme kanseri hücreleriyle fare modellerinde kuyruk veni enjeksiyonu kullanarak beyin metastazı oluşturma yöntemini. Bu teknik, metastaz kolonizasyon adımlarını daha iyi taklit eder.

İnflamatuar Meme Kanseri Hücrelerinin Kuyruk-Ven Enjeksiyonu ile Beyin Metastazının Modellenmesi

Daha fazla video keşfet